JPH02117617A - アテローム性動脈硬化症の抑制または軽減用２６―ヒドロキシコレステロール製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、アテローム性動脈硬化症の抑制または軽減用
２６−とドロキシコレステロール製剤に関するものであ
る。

身体組織におけるコレステロールの蓄積は多くの病気に
おける主要原因であると考えられている。

特に、アテローム性動脈硬化症は、組織中への脂肪物質
の沈着量および／まＩζは生成量の増加によりもたらさ
れる動脈壁部の異常な硬化Ｊ３よび肥厚を特徴とし、そ
の主成分は一般にコレスプロールである。

コレステロールは通常の血漿成分であり、実で１上全て
の細胞膜に６存在する。細胞増殖するには、細胞がより
多聞のコレステロールを生産づるか、或いは血漿プール
からコレステロールを取入れな（）ればならない。細胞
は、血漿からコレステロールを誘引しかつこれと結合す
る受容体を有し、コレステロールを細胞の内部に送るこ
とができる。

今日、コレステロール代謝に関係する病気を治療する際
に考慮・寸べさ重要な事項は、（１）」レスチロール生
成速度および■血管やその伯の組織へのイの沈着量を左
右づる諸因子であるとｆｔじられている。これら２つの
事項のうちで、発病は主として組織中沈着温に関係があ
り、次いで病状自体が成る程度生成速度および血漿中存
在Ｍとも関連性をもつようになる。

したがって、本発明は体内コレステロールの合成、分布
および組織内濃度を調整することに関する。さらに詳細
には、本発明は身体組織中の異常に高いコレステロール
蓄積を減少させることに関する。前記したように、身体
組織中の異常に高いコレステロール蓄積は、通常の身体
代謝に必要とされる最よりも一層多回のコレステロール
を細胞が生産する結果であると考えられ、および／また
は代謝機能のため必要とされる量よりも一層多役の血漿
コレステロールが組織中に沈着する結果であると考えら
れる。

今回、２６−ヒドＯキシコレステロールは１Ｊ９）１度
においてさえ脈管平滑筋細胞増殖抑制作用を有すること
が判明した。また、人間或いはその他闘乳動物における
アテローム性動脈硬化症の治療剤として有用であること
が突き止められた。

さらに、今回、体内血漿中の２６−ヒドａキシコレステ
ロールのレベルが組織中のコレステロール蓄積量に関係
することも見出された。より詳細にいえば、血清中２６
−ヒドロキシコレステロールの濃度低下は、組織中のコ
レステロール蓄積を伴うものである。したがって、本発
明の目的は、体内のコレステロールレベル、特に組織コ
レステロールのレベルを、２６−ヒドロキシコレステロ
ールの監視すなわちモニタリングおよび／または投与に
より調整する方法を提供することである。

本発明の他の目的は、血管内部にコレステロールが蓄積
した人に投与することによって、新たなコレステロール
の蓄積を抑制でき、すなわち蓄積速度を低下させること
ができるような化合物を提供することである。

本発明のさらに他の目的は、体内におけるコレステロー
ルの合成速度を低下させる化合物を提供することである
。

さらに本発明の他の目的は、組織コレステロールの蓄積
が起り易い体質かどうかを各個人毎に予測する手段を提
供することである。

本発明のより特定的な目的は、アテローム性動脈硬化症
が起り易い体質かどうかを各個人毎に予測する手段を提
供することである。

本発明の他の目的は、組織中におけるコレステロールの
異常レベルでの蓄積が将来起り易い傾向がある人に、そ
の傾向をなくするかまたは少なくとも著しく低下させる
方法を提供することである。

本発明のその他の目的は、以下の詳細な説明から当業者
には明らかになるであろう。

したがって、本発明は、組織コレステロールの蓄積を減
少させる独特の手段の使用を包含する方法を提供するも
のであって、しかしてこの方法は、組織コレステロール
の蓄積量が異常に高い人に、組織コレステロール蓄積速
度を低下させることができる量の２６−ヒドロキコレス
テロールを投与することを特徴とするものである。

また本発明は、組織コレステロール蓄積が起り易い体質
かどうかを個人毎に診断する方法をも提供するものであ
って、この診断方法６は、各個人の２６−ヒドロキシコ
レステロールの血清中レベル値を測定し、このレベル値
を標準血清レベル値と比較することを特徴とするもので
ある。

さらにまた本発明は、体内の、コレステロール合成量（
合成速度）を減少させるのに充分な供与量で２６−ヒド
ロキシコレステロールを人に投与することをも包含する
ものである。

さらにまた本発明は、通常許容され得る蓄積量を越えた
多量のコレステロールの組織中蓄積を予防しまたは有意
に減少させる方法にも関する。この方法は患者の２６−
ヒドロキシコレステロールの血清中レベルを監視しく測
定し）、このレベルを２６−ヒドロキシコレステロール
の血清中レベルの正常範囲と比較し、そして患者のレベ
ルが正常範囲より低い場合または正常範囲の下限値（す
なわち下方２０％の範囲内の値）に近い場合には２６−
ヒドロキシコレステロールの血清中レベルを正常範囲内
まで（または正常範囲内のより高い値まで）増大させる
のに充分な投与量で２６−ヒドロキシコレステロールを
患者に投与することを特徴とするものである。本発明の
好適具体例においては、必要とする監視（測定）および
投与を、できるだけ永年にわたって長期間定期的に行な
う。

また本発明は、平滑筋細胞増殖抑制方法をも提供するも
のである。

さらにまた本発明は、本発明の方法に使用するのに充分
な量の２６−ヒドロキシコレステロールまたはその誘導
体もしくは同族体を含有する医薬製剤にもＩ’！Ｉする
。

本発明の好適具体例においては、２６−ヒドロキシコレ
ステロールは経口もしくは静脈内に投与される。

本出願人の知る限り、２６−ヒドロキシコレステロール
（コレスト−５−エン−３８２６−ジオール）が通常新
生児誕生後の生物体液中に存在することを始めて見出し
たのは木発明省であった［Ｊａｖｉｔｔ　ｅｔ　ａｌ、
［２６−ヒドロキシコレステロールの同定および血清中
のＴａＪ　、Ｊ、Ｂ１０１．ＣｈＯｍ第２５６巻、第１
２６４４頁（１９８１）参照］。

２６−ヒドロキシコレステロールは血清中に′Ｎ離状態
で或いはエステル化物の形で存在し、すなわち、たとえ
ばオレイン酸のような天然脂肪酸と形成されるエステル
のアルコール部分として存在する。理論的には、脂肪酸
２モル当りに１モルの２６−ヒドロキシコレステロール
が結合しうる。血清２６−ヒドロキシコレステロールの
約１７３は通常非エステル型の物質として存在する。今
日まで測定された２６−ヒドロキシコレステロールの正
常血清中全濃度（遊離ステロール型およびエステル型の
ものとして）は血清１００ｄ当り約４．３〜２５．６．
ｑである。広範囲の多数の人につき検討したならば、こ
の正常範囲は上記範囲を少なくとも２０％越える範囲で
あろうと予想される。したがって、血清中の２６−ヒド
ロキシコレステロールの吊の正常範囲は１００ｉ当り約
３〜３１埒であろう。

上記文献［Ｊａｖｉｔｔ　ａｔ　ａｌ、　Ｊ、　Ｒｉｏ
ｔ、　Ｃｈｅｍ第２５６巻、第１２６４４頁（１９８１
）　］に記載されているように、生物体液中の２６−ヒ
ドロキシコレステロールの濃度は、既知量のデユーテロ
化同族体を標準物質として使用してＧＬＣ−ＭＳ分析法
により測定することができる。２６−ヒドロキシコレス
テロール分析に関し、より迅速かつより容易な定性およ
びＴ１分析法を、たとえば酵素基質、放射能１ヘレーサ
ーなどの使用により標準免疫体分析技術を利用して開発
しうろことが予想される。

他の研究者による従来の研究は、人の生体内の粥師中に
存在する２６−ヒドロ１シコレステロールが酵素由来の
ものであることを示している［ＶａｎＬｉｅｒ　ｅｔ　
ａｔ、　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　　第６巻、第３２
６９頁（１９６７）および八ｒｉｎｇｅｒ　ｅｔ　ａｔ
、　ＢｉｏｃｈｉｍＢｌｏｐｈｙｓ、　　八ｃｔａ、　
、　　第　６６５巻、第１３頁（１９８１）　　］　。

本発明はこれに一致するが、勿論本発明より以前には、
人の全生涯にわたり正常血清中に２６−ヒドロ４−シコ
レステ・ロールが存在することは知られていなかった。

たとえば２５−ヒドロキシコレステロールのような成る
種の酸素化ステロールは、試験管内におけるコレステロ
ール合成を抑制することが知られていた。また、生体内
におけるコレステロール合成の律速酵素はヒドロキシメ
チルグルタル酸Ｃ０Ａ−レダクターゼ（以下、「Ｈ）Ｉ
Ｇ−ＣｏへレダクターゼＪと言う）であって、この酵素
はヒドロキシメチルグルタル酸からのメバロン酸の生成
を、触媒として促進するものであることも知られている
。

さらに、コレステロール合成反応の調節は、ＩＩＨＧ−
ＣｏＡレダクターゼの活性下においてＭＦｊ化ステロー
ルによる媒介を通じて行ないうると考えられている［Ｋ
ａｎｄｌＪｔＳＣｈ　ｅｔ　、’Ｉ１．５ｃｉｅｎｃｅ
、第２０１１ｊ、第　４９８頁（１９７８）　］。

ＩＩＨＧ−Ｇｏ＾レダクターピ活性に及ぼす２６−ヒド
ロキシコレステロールの影響の度合が、Ｃｈａｎｇ　ｅ
ｔａｔ、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃ’ｎｅｍ、第２５６巻
、第６３０４頁（１９８１）の方法を用いて測定された
。

チャイニーズハムスター卵巣細胞、Ｃ圓−に１細胞（野
性型とも言う）をアメリカン・タイプ・力ルチセー・コ
レクションから入手して、ファルコンフラスコ中で１０
％生胎児血清を含有するＩｌａｍ’５Ｆ−１２１３地上
にて増殖させた。細胞を保存用フラスコ培養物から取り
出してぺ１−リＩＩＩＩ（６０ｍｍ＞に接種した。各ベ
トリ卯はそれぞれ０．０３ｘ　１０６個の細胞を３んで
いた。ベトリ圓に接種してから約２１日後に、これらを
燐酸緩衝塩溶液（ＰＢＳ）にて洗浄し、次いで脱脂賀さ
れた牛胎児血清１０％を含有するＦｉ２Ｊ８地において
４８時間増殖させ、その間培地を１回取り換えた。これ
に続き、新！Ｙな培地（脱脂質牛血清を含む）または０
．１４％のＤＨ３Ｏのみもしくは２６−ヒトロキシコレ
ステ［］−ルを含有する新鮮な培地を加え、細胞を種ノ
Ｚの時間にわたって培養した。本発明にお１ノるＤ）Ｉ
ＳＯの最終濃度はＣｈａｎσのものより低く（０，１４
％対０．３％）　、０８３０を含有しない培地との５旧
聞ｉ８養にお（プるＩＩＨＧ−ＣｏΔレダクタービ活性
の比較は同一もしくは僅かに高い（顕著でない）値を与
えた。これらの条件下において、０．２５μＨｌｌｉ１
度の２６−ヒドロキシコレステロールを使用しかつ５時
間Ｐｉ行することにより５０％以上の抑制が確認された
。対照試ｒ１との平均値の差異は高度に有意的な値であ
り、かつまた個々の対照フラスコの測定値はいずれも２
Ｇ−ヒドロキシコレステロールを含有する個々のフラス
コの讃１１定値とは重複しない。１０倍以上（２５μＨ
）の濃度の２５−ヒドロキシコレステロールを用いて、
Ｃｈａｎｇは５時間で８０％の抑制を報告している。

下記第１表は、１日で行なったこの実験の平均結果を示
している。

第　　１　　表 ヂトイニーズハムスター卵巣細胞培養 ＨＨＧ−ＣＯ＾レダクタ− ぜ活性 ”　（ｎＨｏ１／ｍｉｎ、／ｑ 蛋白質） 抑１１１１％ ０１４％Ｄ）！Ｓｏ　（対照） ０．０４８ ネ１分当り蛋白質１１１！ｇ当りのナノモル数実験を他
の場合につき反（りして、同様な結果を得た。

ｔｌＨＧ−ＣｏＡレダクターゼ活性は、Ｐｉｔｏｔ　ｅ
ｔ　ａｔＪ、　ＬｉＤｉｄ　Ｒｅｓ、第１２巻、第５１
２頁（１９７１）の二重標識技術および５ｈａｐｉｒｏ
　ｅｔ　ａｌ　　八ｎａ１．　Ｂｉｏｃｈｃｍ第３１巻
、第３８３頁（１９６９）の薄層分離技術を用いて測定
した。実買上、破壊細胞から得た液体を、必要なコファ
クターをすべて含有する培地に加え、１０分間予備培養
した後Ｃ”　−１１８Ｇ　−ＣｏＡレダクターゼにュー
イングランド・ヌクレア社）を零次数反応速度とするの
に充分な濃度で加える。通常、最終濃度が８７μＨとな
りかつ総数が９０．０ＯＯｄｕ＋どなるように比活性を
調整する。振とうしながら３７℃で６０分間培養した後
、Ｈ３−メバロネートを加えそして酸性化（Ｈｅ）によ
り培養を停止させるが、この酸性化はラクトン化反応を
も生ぜしめる。

メバロラクトンを薄層クロマトグラフィーによって分離
してＣ１４／Ｉ＋３比を決定し、これから０１４の総量
を算出ｊノ（回収１１３につき補正）そしてローリ−法
により細胞質蛋白質■当りの１直として記録する。

Ｋａｎｄｕｔｓｃｈ　ｅｔ　ａｔ、　５ｃｉｅｎｃｅ、
第２０１巻、第４９８頁＜　１９７８）には、酸素化コ
レステロールが試験管内においてＴＪＡＮ芽細胞および
リンパ細胞の増殖に対し抑制作用を有することも記載さ
れており、これは恐ら＜　ＩＩＨＧ−ＣｏＡレグクター
ゼ（すなわちコレステロール生合成における律速酵素）
の作用を抑制することにより生ずる。これは、コレステ
ロールが細胞ｊ、！’Ｊ　ｍにとって必須であるという
考えと一致する。試験管内において兎動脈平滑筋細胞（
ＲＡＳＨＣ）の増殖に対する抑制効宋につぎ２６−ヒド
ロキシコレステロールを試験するため、１Ｇ＃培丹ウエ
ル中に低密度で接種したＲＡＳＨＣを２０％の牛胎児血
清（Ｆｅ２）および０．０１％エタノール中にて前記化
合物で処理した。化合物の添加＋Ｕ　２日目および５日
目に、細胞の写真を顕彰した。６日目に培地を加え、古
い培地を捨てた後薬剤処理を反復した。

７日目に、５反復ウェルからの細胞を、適切にセットさ
れたコルター計数器によって計数した。

下記第２表は、１１１９／ｌｄの濃度の２６−ヒドロキ
シコレステロールが増殖を５０％抑制したことを示して
いる。

第２表 「［回申） ２６−ヒドロキシ　７３．９七〇、０２　　４５．６χ
Ｐ＜０．００１コレステロール、 １埒／ｍｅ 発明明石により、脳健黄色腫症（ｃｅｒｅｂｒｏ−ｔＱ
ｎｄｉｎｏｕＳ　ＸａｎｔｈＯｍａｔＯ３ｉＳ　Ｘ略詔
ｒＣＴＸＪ）を右づる患者はその血清中に、存在覆るに
してし僅かの２６−ヒドロキシコレステロールしか含有
しないことが見出された。ＣＴＸは正常のコレスプロー
ル血清レベルを特徴とするが、組織中において貸常に高
いコレステロール蓄積を伴なうｂのである。

アテローム性動脈硬化症はしばしばＣＴＸと関係がある
。ＣＴ　Ｘ　！Ｊ！にのミトコンドリアにはＣ２７ステ
ロイド２６−ヒドロキシラーゼが存在しないが、このこ
とは恐ら（ＣＴＸ患占においてはコレステロールから２
６−ヒドロキシコレステロールへの酸化反応が起らない
ことを証明する証拠となるであろう。

しかしながら、２Ｇ−とドロキシコレステロールの欠如
は、ＣＴＸ患者にＪ３けるコレスプロール沈着量の増加
に百１＆関係すると思われる。２６−ヒドロキシコレス
テロールは血清と粗織との間のコレステロールの分配に
影響を与えるものであると思われろ。

血清２６−ヒドロキシコレステロールはアイソトープ・
グイリュージョン・マス・スペクトロメトリーにより定
Ｇできる。既知ＦＡ　（５Ｎ　）のデューテレート化さ
れた２６−ヒドロキシコレステロールを生物試料（すな
わち血漿または血清２．５ｄ）に加える。この試料に其
後に慣用処理操作を行い、すなわち蛋白質除去、および
有機溶媒を使用するコレステロール、２６−ヒドロキシ
コレステロールおよび他のステロールの抽出操作を行う
。次いで孔隙径の調節されたガラスカラムおよびグリコ
フェーズＧ（Ｇｌｙｃｏｐｈａｓｅ　Ｇ）を用いてフラ
クショネーションを行って２６−ヒドロキシコレステロ
ールを単離する。当該溶出液をトリメチルシリルエーテ
ルとしてＧＬＣ−Ｈ３装置に注入する。この装置は同時
的イオンモニタリングプログラムを使用して操作し、天
然に豊富に存在する種類の２６−ヒドロキシコレステロ
ールと前記のデューテレート化秤との比の値を定量的に
測定する。天然豊富存在種とデューテレート化種とから
なる混合比が既知の混合物を用いてグラフ上に標準曲線
を画いておく。

この比が未知の前記試料のデータを前記標準曲線と比較
し、そして既知量の前記試料に添加されたデューテレー
ト化種の添加間を考慮に入れて計算することにより、前
記の天然２６−ヒドロキシコレステロールの正確な量が
算出できる。

第　　３　　表 ［正　常］　　　１　　　　　　　１２．５２　　　　
　　　　　　　１３．０ ３５．８ ４　　　　　　　　　　　４．３ ５７．７ ５　　　　　　　　　　　１２．０ ［ＣＴＸ］　　　　　１　　　　　　　　　　　　ｏ、
。

２０．６ ３　　　　　　　　　　　０．４５ 第３表に示されているように、正常な人における血清中
２６−ヒドロキシコレステロール濃度は４．３−１３．
０７ｇ／１００ｄであり、３人のＣＴＸ患者における血
清中の２６−ヒドロキシコレステロール濃度はＯ−０，
６埒／１００−であった。かように、この方法は、ＣＴ
Ｘの検知（診断）のために有用な方法であり、また、他
のステロール障害および胆汁酸代謝障害の検知のために
も多分有用な方法であると思われる。

２６−とドロキシコレステロールはクリプトゲニンから
製造することができる［Ｗａｃｈｔｅｌ　ｅｔ　ａＪ、
　Ｂｉｏｌ、　ＣｈｅＩｌ、第２４３巻、第５２０７頁
（１９６８）および５ｃｈｅｅｒ　ｅｔ　ａｌ、　Ａｌ
１１．　ＣｈｅＩｌ、　Ｓｏｃ、第７８巻、第４７３３
頁（１９５６）参照］。クリプトゲニンは、公知方法を
用いてベス（Ｂｅｔｈ）の根および幾種かのメキシコφ
ジオショレア（Ｄｉｏｓｃｈｏｒｅａ）から得られる。

また、クリプトゲニンは、カルホルニア州、バロアルト
在のシンテックス・コーポレーション社からも入手でき
る。

２６−ヒドロキシコレステロールは、一般に約５■／Ｋ
ｙ〜２５η／Ｋｇの範囲内の母にて１日１〜３回投与さ
れる。

約１〜約９０重間％の２６−ヒドロキシコレステロール
を含有する医薬組成物は、液体もしくは固体組成物とし
て、或いはたとえば静脈注射のような注射液として投与
することができ、この場合慣用の医薬用キャリヤが使用
される。

好適な医薬製剤の例には錠剤、カプセル、経口液および
非経口注射液があげられる。２６−とドロキシコレステ
ロールは固体であるから、たとえば乳糖のような慣用の
希釈剤、賦形剤などを慣用のカプセルおよび錠剤の製造
法において使用して錠剤およびカプセル組成物を製造し
て、これを使用することができる。非経口注射液も使用
できるが、これは脂質可溶性物質と共に慣用溶剤を用い
て製造することができる。或いは当該ステロールの塩、
ただし水性溶媒中に可溶な塩を調製することもできる。

患者の２６−ヒトロキシコレステロールレベルの監視を
行う場合には、上記した定量アイソトープ・ダイリュー
ション・マス・スペクトロメトリー法を用いることがで
きる。上記したように、より日常型の簡単なイノムアッ
セイ法の開発も期待される。

本発明は種々ｉ様変化しうろことが、当業者には明らか
であろう。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）アテローム性動脈硬化症の症状を抑制または軽減
   するに充分な治療学的有効量にて存在する２６−ヒドロ
   キシコレステロールを活性成分として含有することを特
   徴とする、アテローム性動脈硬化症の症状抑制または軽
   減用医薬製剤。