JPH02117686A

JPH02117686A - クコ由来細胞賦活作用剤

Info

Publication number: JPH02117686A
Application number: JP63271818A
Authority: JP
Inventors: Yoshitaka Ando; 安藤　義隆; Yutaka Ando; 裕安藤; Yukinaga Nishibe; 西部　幸修; Norihisa Kawai; 徳久河合
Original assignee: Ichimaru Pharcos Co Ltd
Current assignee: Ichimaru Pharcos Co Ltd
Priority date: 1988-10-26
Filing date: 1988-10-26
Publication date: 1990-05-02
Anticipated expiration: 2009-11-02
Also published as: JPH0686388B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［発明の目的」本発明は、新規な細胞賦活物質（因子）の開発に関する
。そして、具体的には、ナス科植物（Ｓｏｌａｎａｃｅ
ａｅｌのクコ（Ｌｙｃｉｕｍｃｈｉｎｅｎｓｅ　　Ｍｉ
ｌｌｅｒ）から抽出された水溶性物質の、細胞生着率と
コロニー形成率促進作用を有することを特徴とする。細
胞賦活物質に関する。

「産業上の利用分野」　　　　− 本発明による細胞賦活物質は、例えば、組織培「従来の
技術」クコは、古くから医薬品あるいは１食品分野に用いられ
、解熱作用、滋養強壮剤として知られており、クコの根
部（地骨皮）のエタノール抽出エキスに解熱作用を認め
ている（高木数次部ら・和漢切物学　ｐ１１５．南山堂
（１１１９８２年）。

しかし、その有効成分については、今だ確定されていな
い。

「発明が解決しようとする課題」本発明者らの課題は、各種植物中から、細胞賦活能を有
する物質（因子）の新規な開発にある。

本発明者らは、この目的のために、そのスクリニングを
続ける過程で、クコから抽出物を得て、これに強い細胞
賦活作用を有することを見い出すに至った。

さらに、これをもとに、その細胞賦活物質の特定のため
に鋭意研究を続けてきたが２その結果、以下に開示する
ごとく、理化学的データー及び生物学的デークーをもっ
て、本発明を成功（完成）するに至った。

【発明の構成１本発明は、ナス科植物のクコ中にａ在する。水溶性物質
であって、その主成分は１分子量が１５００付近にあり
、ペーパークロマトグラムによるＲｆ値が、０．６４〜
０．６８にあるものをもって特定され、さらに、水及び
６０％エタノールに可溶、８０％エタノール以上では難
溶、且つ無水エタノール、ｎ−ブタノール、酢酸エチル
、クロロホルム、石油エーテル、エーテルに不溶であり
、又、モーリッシエ反応、ニンヒドリン反応が陽性であ
ることをもって特定される。

「課題を解決するための手段」［Ａ］製造法（抽出のための手段）本発明による細胞賦活物質は、ナス科植物のクコ（生薬
名：地骨皮、拘紀子、拘紀葉を用いても良い）を出発原
料となし、抽出、精製することによって製造出来るが、
その際の出発原料は組織培養法によって得られたクコを
用いることも出来る。製造ン去は、次のごとくである。

クコ（乾燥物）　１部に対して、５〜ＩＯ部の水を加λ
て、４℃にて１時々撹拌しながら数日間浸γ青を行う、
漫を前後、ろ過してろｒ夜をとり、このろ液を減圧下に
おいて、１０分の１〜２０分のｌになるまで濃縮を行い
、ａｌａ液に対してエタノールの濃度が５０％になるよ
うに添加後、遠心分離し、その上清液を分取する。次に
、この上清液に対してエタノールの濃度が８０％になる
ようにｃ６加し、遠心分Ｍ機にかけて沈殿物を分取して
、クコ由来細胞賦活物質を得る。

「実施例１」クコ（乾燥物）　１部に対して、５〜１０部の水を加え
て、４℃にて１時り撹拌しながら３日間浸漬を行う、浸
漬後、ろ過してろ液をとり、ろ液を減圧下において、１
０分の１〜２０分の１になるまでａｔｉ；ａを行い、こ
の濃縮液に対してエタノールの濃度が５０％になるよう
に添加した後、遠心分離し、その上清液を分取する１次
に、この上清液に対してエタノールの濃度が８０％にな
るように添加し、遠心分離し、沈殿物を分取する。

この沈殿物を水で溶解した後、セファデックスＧ−２５
メデイウムを充填したカラム（２５ｘ６０ｃｍ）によっ
て、ゲル濾過を行い、Ｋａｖ（ｄで０．３〜０゜６に流
出する　フラクションを得る　　　（第　１　図　）。

さらに、これを凍結乾燥して、本発明による細胞賦活物
質を得る。上記方法によって得られた。

その収攬は、約５ｇである。

［Ｂ］理化学的特性に関するデータ（ａ１分子量測定結果本発明による細胞賦活物質の分子量は、以下の試験法を
もって推定するとき、１５００前後であることがＩＩＩ
ｆ認された　（第２図）。

（測定法の概要）ポリエチレングリコール１０００及び４０００を標準品
として、セファデックスＧ−２５フアイン（ファルマシ
ア社製）で分画して１分子型を推定する。

（ｂ）ペーパークロマトグラムによる測定結果展開温媒
として、エタノール・水温液（１：　１１　を使用した
場合、クロマトグラム上のＲｒｌａは。

０．６４〜０．６８にあることが確認された。

尚、ｎ−ブタノールに溶解したニンヒドリンを噴霧し、
１００℃に加熱すると、紫色に呈色する。

又、展開溶媒を変えて、エタノール・水混液１４：１１
　を使用した場合は、原点１ごとどまり、Ｒｆ値は確認
されなかった。

（ｃ）溶媒に対する溶解性試験結果水及び６０％エタノール水溶液には易溶であるが、８０
％以上のエタノール水溶液では！を溶である。又、無水
エタノール、ｎ−ブタノール、酢酸エチル、クロロホル
ム、石油エーテル、エーテルには不溶である。

（ｄ）その他の反応試験結果 ■モーリッシュ反応二本に溶解した液に、１５％ａ５％
ミーナフトールし、硫酸を加える時２赤紫色を呈する。

■ニンヒドリン反応：水に溶解した液に、ニンヒドリン
試液を加え、水浴中で３分間加熱する時紫色を呈する。

［Ｃ１発明の効果（１）細胞生着率の促進作用モルモットの初代綿維芽細胞、さらにマウスの切代腹腔
マクロファージは、無血清のＭＥＭ中では、１ｇＮ器に
生着せず死滅する。

これに対して１本物質は、無血清の培地において、細胞
の生着性（率）を促進し、死滅することを防止すること
が確認出来る。

したがって２本物質を添加することにより、細胞が生着
し、１週間以上生年することがわかった。

（２）コロニー形成からみた促進作用モルモットの初代培！ｌ線維芽細胞を用いて、コロニー
形成能（率）を求めてみると形成が良好である。

この促進作用は、線維芽細胞に限らず、上皮細胞等にお
いても、同様に確認された。

第１表（次表〕は、１０〜１０００個のモルモットの？
Ｄ代培養線維芽細胞を、直径８．０ｃｍのベトリ皿（培
養液：ＭＥＭ＋５％ＦＢＳ　＜牛胎児血清〉）に播種し
、２週間後のコロニー数を測定した成績結果である。

［第１表」コロニー形成（率）促進作用測定に当って　
岬串物質を用いて作成した、分子量とＫａｖ値による検
ｆｆｉ綿である。

第２図中、Ａはポリエチレングリコール１０００（平均
分子１ｉ１１０００）、Ｂはポリエチレングツコール４
０００　（平均分子量３０００）。

以上１本発明によるクコから得られた水溶性物質は、細
胞賦活作用に優れた効果を有するものである。

よって１例えば、組織培りにおける利用、あるいは医薬
品、化粧品等においては、潰瘍部あるいは外傷部の再生
治疹の促進剤、あるいは細胞賦活剤として用いることが
可能である。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明による細胞賦活物質（９３ｉａ法欄中
の工程で得られたフラクション、セファデックスＧ−２
５フフインによる分画）による溶出図である。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）ナス科植物のクコから抽出された水溶性物質であり、次
の（ａ）〜（ｂ）、又は（ｃ）〜（ｄ）で特定される、
クコ由来細胞賦活物質。（ａ）分子量が１５００付近にある。（ｂ）ペーパークロマトグラム［東洋ろ紙Ｎｏ．５０、
展開溶媒：水・エタノール混液（１：１）］上のＲｆ値
が、０．６４〜０．６８にある。（ｃ）水及び６０％エタノールに可溶である。又、８０％エタノール以上では難溶であり、且つ無水エタノール、ｎ−ブタノール、酢酸エチル、クロロ
ホルム、石油エーテル、エーテルには不溶である。（ｄ）モーリッシュ反応及びニンヒドリン反応が陽性で
ある。