JPH02122264A - 蛋白を試験するための試験具及び試験方法 - Google Patents
蛋白を試験するための試験具及び試験方法Info
- Publication number
- JPH02122264A JPH02122264A JP1246631A JP24663189A JPH02122264A JP H02122264 A JPH02122264 A JP H02122264A JP 1246631 A JP1246631 A JP 1246631A JP 24663189 A JP24663189 A JP 24663189A JP H02122264 A JPH02122264 A JP H02122264A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- color
- indicator
- test
- dye
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 368
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 368
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims abstract description 357
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 97
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 218
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 56
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 25
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 23
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 claims abstract description 20
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 125
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 101
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N Ethyl urethane Chemical compound CCOC(N)=O JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 100
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 100
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 66
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 66
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 claims description 51
- -1 urethane compound Chemical class 0.000 claims description 37
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 21
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 18
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 11
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 6
- 108700004676 Bence Jones Proteins 0.000 claims description 5
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 claims description 5
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 claims description 2
- 239000012466 permeate Substances 0.000 claims description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 claims 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims 1
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 claims 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 abstract description 101
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 35
- 238000004040 coloring Methods 0.000 abstract description 7
- 239000003086 colorant Substances 0.000 abstract description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 341
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 149
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 90
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 41
- STZCRXQWRGQSJD-GEEYTBSJSA-M methyl orange Chemical compound [Na+].C1=CC(N(C)C)=CC=C1\N=N\C1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 STZCRXQWRGQSJD-GEEYTBSJSA-M 0.000 description 41
- 229940012189 methyl orange Drugs 0.000 description 39
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 30
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 26
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 19
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 14
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 14
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 14
- QPMIVFWZGPTDPN-UHFFFAOYSA-N Tetrabromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C(C(Br)=C(Br)C(Br)=C2Br)=C2S(=O)(=O)O1 QPMIVFWZGPTDPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 13
- 239000007793 ph indicator Substances 0.000 description 13
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 13
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 12
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000004044 response Effects 0.000 description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 9
- 238000003370 dye binding method Methods 0.000 description 9
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 9
- 238000011161 development Methods 0.000 description 8
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 8
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 8
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 7
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 7
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 7
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 7
- 201000001474 proteinuria Diseases 0.000 description 7
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 6
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 6
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 6
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 6
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 6
- 150000003673 urethanes Chemical class 0.000 description 6
- OYCLSQDXZMROJK-UHFFFAOYSA-N 2-bromo-4-[3-(3-bromo-4-hydroxyphenyl)-1,1-dioxo-2,1$l^{6}-benzoxathiol-3-yl]phenol Chemical compound C1=C(Br)C(O)=CC=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 OYCLSQDXZMROJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- RXNYILISXGUYFG-UHFFFAOYSA-N 4-[3-(4-hydroxy-3,5-diiodophenyl)-1,1-dioxo-2,1$l^{6}-benzoxathiol-3-yl]-2,6-diiodophenol Chemical compound C1=C(I)C(O)=C(I)C=C1C1(C=2C=C(I)C(O)=C(I)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 RXNYILISXGUYFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 5
- MDGFKZKMIQQRPU-UHFFFAOYSA-N 2-bromo-4-[3-(3-bromo-5-chloro-4-hydroxyphenyl)-1,1-dioxo-2,1$l^{6}-benzoxathiol-3-yl]-6-chlorophenol Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Cl)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Cl)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 MDGFKZKMIQQRPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 4
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N adipic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC(O)=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L barium sulfate Chemical compound [Ba+2].[O-]S([O-])(=O)=O TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 4
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 4
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 4
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 4
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 4
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 4
- 239000004814 polyurethane Substances 0.000 description 4
- 238000012113 quantitative test Methods 0.000 description 4
- 229930187593 rose bengal Natural products 0.000 description 4
- AZJPTIGZZTZIDR-UHFFFAOYSA-L rose bengal Chemical compound [K+].[K+].[O-]C(=O)C1=C(Cl)C(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C1C1=C2C=C(I)C(=O)C(I)=C2OC2=C(I)C([O-])=C(I)C=C21 AZJPTIGZZTZIDR-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 229940081623 rose bengal Drugs 0.000 description 4
- STRXNPAVPKGJQR-UHFFFAOYSA-N rose bengal A Natural products O1C(=O)C(C(=CC=C2Cl)Cl)=C2C21C1=CC(I)=C(O)C(I)=C1OC1=C(I)C(O)=C(I)C=C21 STRXNPAVPKGJQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 4
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 4
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011358 absorbing material Substances 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 3
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 3
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 3
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 3
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 3
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 3
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 3
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- FRPHFZCDPYBUAU-UHFFFAOYSA-N Bromocresolgreen Chemical compound CC1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C(=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 FRPHFZCDPYBUAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N Zinc monoxide Chemical compound [Zn]=O XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 239000002696 acid base indicator Substances 0.000 description 2
- 239000001361 adipic acid Substances 0.000 description 2
- 235000011037 adipic acid Nutrition 0.000 description 2
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 2
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- QVQLCTNNEUAWMS-UHFFFAOYSA-N barium oxide Chemical compound [Ba]=O QVQLCTNNEUAWMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 2
- WERYXYBDKMZEQL-UHFFFAOYSA-N butane-1,4-diol Chemical compound OCCCCO WERYXYBDKMZEQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 2
- 238000009535 clinical urine test Methods 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- GVGUFUZHNYFZLC-UHFFFAOYSA-N dodecyl benzenesulfonate;sodium Chemical compound [Na].CCCCCCCCCCCCOS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 GVGUFUZHNYFZLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- SQFXATUXPUCFFO-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-[(3,5-dibromo-4-hydroxyphenyl)-(3,5-dibromo-4-oxocyclohexa-2,5-dien-1-ylidene)methyl]benzoate Chemical compound CCOC(=O)C1=CC=CC=C1C(C=1C=C(Br)C(O)=C(Br)C=1)=C1C=C(Br)C(=O)C(Br)=C1 SQFXATUXPUCFFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XJRPTMORGOIMMI-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-amino-4-(trifluoromethyl)-1,3-thiazole-5-carboxylate Chemical compound CCOC(=O)C=1SC(N)=NC=1C(F)(F)F XJRPTMORGOIMMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001434 glomerular Effects 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 2
- 238000000643 oven drying Methods 0.000 description 2
- XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-N phthalic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C(O)=O XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000002331 protein detection Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 229940080264 sodium dodecylbenzenesulfonate Drugs 0.000 description 2
- UBXAKNTVXQMEAG-UHFFFAOYSA-L strontium sulfate Chemical compound [Sr+2].[O-]S([O-])(=O)=O UBXAKNTVXQMEAG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 2
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 2
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 2
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 2
- ZZHIDJWUJRKHGX-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(chloromethyl)benzene Chemical compound ClCC1=CC=C(CCl)C=C1 ZZHIDJWUJRKHGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RULKYXXCCZZKDZ-UHFFFAOYSA-N 2,3,4,5-tetrachlorophenol Chemical compound OC1=CC(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C1Cl RULKYXXCCZZKDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VADKRMSMGWJZCF-UHFFFAOYSA-N 2-bromophenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1Br VADKRMSMGWJZCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RZQXOGQSPBYUKH-UHFFFAOYSA-N 3-[[1,3-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)propan-2-yl]azaniumyl]-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound OCC(CO)(CO)NCC(O)CS(O)(=O)=O RZQXOGQSPBYUKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MCSXGCZMEPXKIW-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-4-[(4-methyl-2-nitrophenyl)diazenyl]-N-(3-nitrophenyl)naphthalene-2-carboxamide Chemical compound Cc1ccc(N=Nc2c(O)c(cc3ccccc23)C(=O)Nc2cccc(c2)[N+]([O-])=O)c(c1)[N+]([O-])=O MCSXGCZMEPXKIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UPMLOUAZCHDJJD-UHFFFAOYSA-N 4,4'-Diphenylmethane Diisocyanate Chemical compound C1=CC(N=C=O)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UPMLOUAZCHDJJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 101710150365 Albumin-1 Proteins 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 108700016232 Arg(2)-Sar(4)- dermorphin (1-4) Proteins 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N D-thyroxine Chemical compound IC1=CC(C[C@@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 208000026019 Fanconi renotubular syndrome Diseases 0.000 description 1
- 201000006328 Fanconi syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000012841 Gamma-heavy chain disease Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 208000005531 Immunoglobulin Light-chain Amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L Malonate Chemical compound [O-]C(=O)CC([O-])=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229920001730 Moisture cure polyurethane Polymers 0.000 description 1
- 229920000715 Mucilage Polymers 0.000 description 1
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000008425 Protein deficiency Diseases 0.000 description 1
- 101100173636 Rattus norvegicus Fhl2 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000026980 Renal tubular disease Diseases 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000534944 Thia Species 0.000 description 1
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000033559 Waldenström macroglobulinemia Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 125000005210 alkyl ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000008051 alkyl sulfates Chemical class 0.000 description 1
- 229940045714 alkyl sulfonate alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 150000008052 alkyl sulfonates Chemical class 0.000 description 1
- GSWGDDYIUCWADU-UHFFFAOYSA-N aluminum magnesium oxygen(2-) Chemical compound [O--].[Mg++].[Al+3] GSWGDDYIUCWADU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000010 aprotic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229910052788 barium Inorganic materials 0.000 description 1
- DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N barium atom Chemical compound [Ba] DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000981 basic dye Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- BRPQOXSCLDDYGP-UHFFFAOYSA-N calcium oxide Chemical compound [O-2].[Ca+2] BRPQOXSCLDDYGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000292 calcium oxide Substances 0.000 description 1
- ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N calcium oxide Inorganic materials [Ca]=O ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000007705 chemical test Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000004205 dimethyl polysiloxane Substances 0.000 description 1
- 235000013870 dimethyl polysiloxane Nutrition 0.000 description 1
- 229960000878 docusate sodium Drugs 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000001667 episodic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M ethanesulfonate Chemical compound CCS([O-])(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 208000025750 heavy chain disease Diseases 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 1
- IQPQWNKOIGAROB-UHFFFAOYSA-N isocyanate group Chemical group [N-]=C=O IQPQWNKOIGAROB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002513 isocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 229940001447 lactate Drugs 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 201000000564 macroglobulinemia Diseases 0.000 description 1
- 239000000395 magnesium oxide Substances 0.000 description 1
- CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N magnesium oxide Inorganic materials [Mg]=O CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YVRGRDDGRSFXCH-UHFFFAOYSA-N magnesium;dioxido(oxo)titanium Chemical compound [Mg+2].[O-][Ti]([O-])=O YVRGRDDGRSFXCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AXZKOIWUVFPNLO-UHFFFAOYSA-N magnesium;oxygen(2-) Chemical compound [O-2].[Mg+2] AXZKOIWUVFPNLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000250 methylamino group Chemical group [H]N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004745 nonwoven fabric Substances 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000001181 organosilyl group Chemical group [SiH3]* 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 239000008017 pharmaceutical colorant Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000010399 physical interaction Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000007084 physiological dysfunction Effects 0.000 description 1
- 239000004014 plasticizer Substances 0.000 description 1
- 229920000435 poly(dimethylsiloxane) Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920006254 polymer film Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 208000022256 primary systemic amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 230000006916 protein interaction Effects 0.000 description 1
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000009103 reabsorption Effects 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 208000014318 renal tubule disease Diseases 0.000 description 1
- MOODSJOROWROTO-UHFFFAOYSA-N salicylsulfuric acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1OS(O)(=O)=O MOODSJOROWROTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000004911 serous fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- APSBXTVYXVQYAB-UHFFFAOYSA-M sodium docusate Chemical compound [Na+].CCCCC(CC)COC(=O)CC(S([O-])(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC APSBXTVYXVQYAB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 1
- 150000003456 sulfonamides Chemical class 0.000 description 1
- 150000003871 sulfonates Chemical class 0.000 description 1
- 229940071103 sulfosalicylate Drugs 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- KKEYFWRCBNTPAC-UHFFFAOYSA-L terephthalate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC=C(C([O-])=O)C=C1 KKEYFWRCBNTPAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- LZPBKINTWROMEA-UHFFFAOYSA-N tetracene-5,12-dione Chemical compound C1=CC=C2C=C3C(=O)C4=CC=CC=C4C(=O)C3=CC2=C1 LZPBKINTWROMEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001169 thermoplastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004416 thermosoftening plastic Substances 0.000 description 1
- 229940034208 thyroxine Drugs 0.000 description 1
- XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N thyroxine-binding globulin Natural products IC1=CC(CC([NH3+])C([O-])=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- DVKJHBMWWAPEIU-UHFFFAOYSA-N toluene 2,4-diisocyanate Chemical compound CC1=CC=C(N=C=O)C=C1N=C=O DVKJHBMWWAPEIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940066528 trichloroacetate Drugs 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002759 woven fabric Substances 0.000 description 1
- 239000011787 zinc oxide Substances 0.000 description 1
- 239000004711 α-olefin Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
- G01N33/6827—Total protein determination, e.g. albumin in urine
- G01N33/6839—Total protein determination, e.g. albumin in urine involving dyes, e.g. Coomassie blue, bromcresol green
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
- G01N33/521—Single-layer analytical elements
- G01N33/523—Single-layer analytical elements the element being adapted for a specific analyte
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
- G01N33/6857—Antibody fragments
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
Ａ四■分厨
本発明は、蛋白質の有無及び濃度について試験試料を試
験する装置及び方法に関する。特に本発明は、反応体組
成物として二指示試薬を有する装置を使用することによ
り、尿などの液体を蛋白について試験するための新規で
改良された方法及び装置に関する。二指示試薬組成物は
、該二指示試薬組成物が蛋白含有試験試料と接触すると
、検出可能及び／または測定可能な反応が起きるように
、キャリヤーマトリックスに組み込まれている。二指示
試薬組成物により色の分解度が改良され蛋白質に対する
感度が増大し、その結果、液体試験試料の蛋白含有量を
、視覚によるか、あるいは機器を用いるかのいずれかに
より、より正確に検出及び／または測定できるようにな
る。さらに本発明は、試験試料中のベンス・ジョーンズ
蛋白のような低分子蛋白の有無及び／または濃度を乾式
の試験細片検定手法により測定する方法における、重合
ウレタン含有組成物の蛋白透過性の細片、膜または層か
ら成るキャリヤーマトリックスに組み込んだ二指示試薬
の使用に関する。
験する装置及び方法に関する。特に本発明は、反応体組
成物として二指示試薬を有する装置を使用することによ
り、尿などの液体を蛋白について試験するための新規で
改良された方法及び装置に関する。二指示試薬組成物は
、該二指示試薬組成物が蛋白含有試験試料と接触すると
、検出可能及び／または測定可能な反応が起きるように
、キャリヤーマトリックスに組み込まれている。二指示
試薬組成物により色の分解度が改良され蛋白質に対する
感度が増大し、その結果、液体試験試料の蛋白含有量を
、視覚によるか、あるいは機器を用いるかのいずれかに
より、より正確に検出及び／または測定できるようにな
る。さらに本発明は、試験試料中のベンス・ジョーンズ
蛋白のような低分子蛋白の有無及び／または濃度を乾式
の試験細片検定手法により測定する方法における、重合
ウレタン含有組成物の蛋白透過性の細片、膜または層か
ら成るキャリヤーマトリックスに組み込んだ二指示試薬
の使用に関する。
−日の１′−び （−術
アルブミンは、もっとも豊富な血しょう蛋白であり、一
般的には乳類の血しょう中の総蛋白の半分をわずかに越
える部分を構成している。人体中では、アルブミンは、
血液と組織間の水分バランスを調整し、そして、ビリル
ビン、脂肪酸、コルデシル及びチロキシンなど様々な化
合物、ならびに、スルホンアミド及びバルビッール酸誘
導体などほとんど水溶性を持たない薬剤の運搬分子とし
て機能する重要な役割を有する。アルブミンの欠乏は、
はとんど水溶性を有しない物質の体内での運搬を制限し
、この障害は、しよう液の異常蓄積、すなわち水腫によ
り個体内で示される。したがって、個体が血清アルブミ
ンの欠乏を有するかどうかを決定することが臨床上重要
である。
般的には乳類の血しょう中の総蛋白の半分をわずかに越
える部分を構成している。人体中では、アルブミンは、
血液と組織間の水分バランスを調整し、そして、ビリル
ビン、脂肪酸、コルデシル及びチロキシンなど様々な化
合物、ならびに、スルホンアミド及びバルビッール酸誘
導体などほとんど水溶性を持たない薬剤の運搬分子とし
て機能する重要な役割を有する。アルブミンの欠乏は、
はとんど水溶性を有しない物質の体内での運搬を制限し
、この障害は、しよう液の異常蓄積、すなわち水腫によ
り個体内で示される。したがって、個体が血清アルブミ
ンの欠乏を有するかどうかを決定することが臨床上重要
である。
同様に、個体が過剰な量の蛋白を排泄しているかどうか
を決定することも、臨床上重要である。
を決定することも、臨床上重要である。
正常に機能している腎臓は、本質的に二段階の工程で尿
を生成する。血液は、腎臓の糸球体、ずなオつち球状の
箇所を通過する。糸球体の毛細管壁は、水及び血しよう
の低分子量成分に対して高度に透過性である。アルブミ
ン及びその他の高分子蛋白はこの毛細管壁を通過するこ
とができず、本質的に尿から濾過して除かれるため、こ
れにより蛋白が人体によって利用できるようになる。低
分子成分を含有する液体は、低分子蛋白などの尿成分の
再吸収、尿のその他の成分の分泌及び尿の濃縮が行なわ
れる腎臓の細管、すなわち管状の箇所を通過する。その
結果、糸球体と細管の合わさった工程を通じての尿中の
蛋白の濃縮は、存在するとしても最低限のはずである。
を生成する。血液は、腎臓の糸球体、ずなオつち球状の
箇所を通過する。糸球体の毛細管壁は、水及び血しよう
の低分子量成分に対して高度に透過性である。アルブミ
ン及びその他の高分子蛋白はこの毛細管壁を通過するこ
とができず、本質的に尿から濾過して除かれるため、こ
れにより蛋白が人体によって利用できるようになる。低
分子成分を含有する液体は、低分子蛋白などの尿成分の
再吸収、尿のその他の成分の分泌及び尿の濃縮が行なわ
れる腎臓の細管、すなわち管状の箇所を通過する。その
結果、糸球体と細管の合わさった工程を通じての尿中の
蛋白の濃縮は、存在するとしても最低限のはずである。
したがって、異常に高い量の尿中のアルブミン及び／ま
たは低分子蛋白を検出し、これを生理学的機能障害に関
連づけなければならない。
たは低分子蛋白を検出し、これを生理学的機能障害に関
連づけなければならない。
個体の尿中にある比較的高濃度のアルブミンは、通常、
疾病状態を示している。例えば、尿中の蛋白の羽均的な
正常濃度は、約２ ｍｇ／ｄＬから８ ｍｇ／ｄＬの間
で変動し、このとき総尿蛋白のおよそ３分の１が血清ア
ルブミンである。しかし、疾病状態の大多数においては
、尿蛋白の値は相当増加し、排泄された蛋白質の約６０
％〜９０％をアルブミンが占めるほどになる。尿中の蛋
白量が異常に増加した状態は、蛋白尿として知られ、腎
疾患の最も示唆的な兆候の一つであり、その他様々な非
腎臓関連の疾病を表わしている場合もある。
疾病状態を示している。例えば、尿中の蛋白の羽均的な
正常濃度は、約２ ｍｇ／ｄＬから８ ｍｇ／ｄＬの間
で変動し、このとき総尿蛋白のおよそ３分の１が血清ア
ルブミンである。しかし、疾病状態の大多数においては
、尿蛋白の値は相当増加し、排泄された蛋白質の約６０
％〜９０％をアルブミンが占めるほどになる。尿中の蛋
白量が異常に増加した状態は、蛋白尿として知られ、腎
疾患の最も示唆的な兆候の一つであり、その他様々な非
腎臓関連の疾病を表わしている場合もある。
したがって、個体がアルブミンを欠乏しているか否かを
決定し、そして／または、個体が過剰な量の蛋白を排泄
しているか否かを決定するため、さらに、治療の経過を
観察してその効能を測定するために、簡単で正確で廉価
な蛋白検出試験法が開発されてきた。さらに、尿及び血
清中の蛋白の検出及び／または測定用に開発されたいく
つかの試験方法の中で、色素結合法に基づいた方法が、
自動化するのが容易で、再現性があり正確な結果を提供
するという理由から、特に有用であることが分かってい
る。
決定し、そして／または、個体が過剰な量の蛋白を排泄
しているか否かを決定するため、さらに、治療の経過を
観察してその効能を測定するために、簡単で正確で廉価
な蛋白検出試験法が開発されてきた。さらに、尿及び血
清中の蛋白の検出及び／または測定用に開発されたいく
つかの試験方法の中で、色素結合法に基づいた方法が、
自動化するのが容易で、再現性があり正確な結果を提供
するという理由から、特に有用であることが分かってい
る。
一般的に、色素結合法は、アルブミンなどの蛋白と相互
作用することができ、蛋白と相互作用を起こすと、ｐＨ
に変化かなりれば、変色することができるｐＨ指示薬色
素を利用する。ｐＨ指示薬色素が蛋白と相互作用する、
または蛋白に結合すると、視覚的に判断することができ
る指示色素のｐＫａ（酸解離定数）が変更され、色素は
変色を起こし、いわゆる「蛋白誤差」現象を発生ずる。
作用することができ、蛋白と相互作用を起こすと、ｐＨ
に変化かなりれば、変色することができるｐＨ指示薬色
素を利用する。ｐＨ指示薬色素が蛋白と相互作用する、
または蛋白に結合すると、視覚的に判断することができ
る指示色素のｐＫａ（酸解離定数）が変更され、色素は
変色を起こし、いわゆる「蛋白誤差」現象を発生ずる。
色素結合法を用いる方法においては、ｐＨの相当な変動
によるｐＨ指示薬色素の変色を防ぐために、適当な緩衝
剤がｐＨ指示薬色素を一定のｐＨに維持する。ｐＨ指示
薬色素は、蛋白と相互作用を起こすと、「蛋白誤差」現
象によりｐＨの変化が原因で発生ずる変色に等しい遷移
を起こす。蛋白の乾式試験で使用され、蛋白と相互作用
する、または蛋白に結合し、「蛋白誤差」による変色を
呈示することができるｐＨ指示薬色素の例には、テトラ
ブロモフェノールブルー及びテトラクロロフェノール３
．４．５６−テＩ・ラブロモースルホフタレインがある
。
によるｐＨ指示薬色素の変色を防ぐために、適当な緩衝
剤がｐＨ指示薬色素を一定のｐＨに維持する。ｐＨ指示
薬色素は、蛋白と相互作用を起こすと、「蛋白誤差」現
象によりｐＨの変化が原因で発生ずる変色に等しい遷移
を起こす。蛋白の乾式試験で使用され、蛋白と相互作用
する、または蛋白に結合し、「蛋白誤差」による変色を
呈示することができるｐＨ指示薬色素の例には、テトラ
ブロモフェノールブルー及びテトラクロロフェノール３
．４．５６−テＩ・ラブロモースルホフタレインがある
。
ｐｏ指示薬色素は蛋白試験において幅広く使用されてき
たが、指示薬色素を利用する蛋白試験方法には、いくつ
かの問題点及び不利な点がなお存在する。例えば、ｐＨ
指示薬色素に基づいた方法は、約１５ｍｇ／ｄＬ以下の
蛋白を検出することも、約１５ｍｇ／ｄＬ以下の濃度間
を定量的に識別することもできない。さらに、試験試料
中の蛋白総合有量の測定について簡易な半定量試験及び
複離な定量試験がそれぞれいくつか利用できるが、これ
らの試験方法の大部分は、簡易測色試薬試験細片は記す
べき例外としても、蛋白の定量を行なうために蛋白の沈
殿を必要とする。
たが、指示薬色素を利用する蛋白試験方法には、いくつ
かの問題点及び不利な点がなお存在する。例えば、ｐＨ
指示薬色素に基づいた方法は、約１５ｍｇ／ｄＬ以下の
蛋白を検出することも、約１５ｍｇ／ｄＬ以下の濃度間
を定量的に識別することもできない。さらに、試験試料
中の蛋白総合有量の測定について簡易な半定量試験及び
複離な定量試験がそれぞれいくつか利用できるが、これ
らの試験方法の大部分は、簡易測色試薬試験細片は記す
べき例外としても、蛋白の定量を行なうために蛋白の沈
殿を必要とする。
潤色試薬試験細片は、蛋白が特定の酸塩基指示薬と相互
作用し、ｐＨに変化がなければ、指示薬を変色させる前
述した蛋白の能力を利用する。例えば、指示薬であるテ
１へラブロモフェノールブルが約３のｐＨを一定に維持
するように緩衝される場合、指示薬は、蛋白を含まない
溶液を黄色く変色させる。しかし、蛋白を含む溶液につ
いては、蛋白の存在のために、緩衝された色素が溶液を
、溶液中の蛋白の濃度に依存して、緑または青のいずれ
かに変色させる。
作用し、ｐＨに変化がなければ、指示薬を変色させる前
述した蛋白の能力を利用する。例えば、指示薬であるテ
１へラブロモフェノールブルが約３のｐＨを一定に維持
するように緩衝される場合、指示薬は、蛋白を含まない
溶液を黄色く変色させる。しかし、蛋白を含む溶液につ
いては、蛋白の存在のために、緩衝された色素が溶液を
、溶液中の蛋白の濃度に依存して、緑または青のいずれ
かに変色させる。
蛋白試験で使用される測色試験細片には、緩衝されたｐ
Ｈ指示薬色素、例えばテ！・ラブロモフェノールブルー
な含浸させたキャリヤーマトリックスの小型で方形のパ
ッドから成る単一の試験領域を有するものがある。その
他の測色試験細片としては、−ト述のとおり蛋白試験用
に一つの試験領域を有し、さらにその他の尿成分の試験
を同時に行えるようい（つか追加の試験領域を同細片上
に有する複式測定試薬細片がある。双方の形式の測色試
験細片の場合、尿中の蛋白の試験は、単に測色試験細片
をよく混合し遠心分離していない尿に浸し、試験細片の
試験領域で得られる色を潤色試験細片の瓶に貼付した基
準色チャートと比較して、実施される。
Ｈ指示薬色素、例えばテ！・ラブロモフェノールブルー
な含浸させたキャリヤーマトリックスの小型で方形のパ
ッドから成る単一の試験領域を有するものがある。その
他の測色試験細片としては、−ト述のとおり蛋白試験用
に一つの試験領域を有し、さらにその他の尿成分の試験
を同時に行えるようい（つか追加の試験領域を同細片上
に有する複式測定試薬細片がある。双方の形式の測色試
験細片の場合、尿中の蛋白の試験は、単に測色試験細片
をよく混合し遠心分離していない尿に浸し、試験細片の
試験領域で得られる色を潤色試験細片の瓶に貼付した基
準色チャートと比較して、実施される。
ｐＨ３に緩衝化したテトラブロモフェノールブルーを指
示薬色素として利用する試験細片の場合、蛋白の半定量
試験を実施すると、結果は゛陰性゛°、゛微量°°また
は゛「プラス」１゛′〜°°「プラス」４“°として報
告される。°゛陰性パの読取り値、すなわち黄色は、指
示薬色素の変色がないことから示されるように、尿が蛋
白を含まないことを示す。°゛微量°°の読取り値は、
約５ ｍｇ／ｄＬ〜２０ｍｇ／ｄＬの尿中蛋白を示す。
示薬色素として利用する試験細片の場合、蛋白の半定量
試験を実施すると、結果は゛陰性゛°、゛微量°°また
は゛「プラス」１゛′〜°°「プラス」４“°として報
告される。°゛陰性パの読取り値、すなわち黄色は、指
示薬色素の変色がないことから示されるように、尿が蛋
白を含まないことを示す。°゛微量°°の読取り値は、
約５ ｍｇ／ｄＬ〜２０ｍｇ／ｄＬの尿中蛋白を示す。
゛「プラス」１°゛から°°「プラス」４°°の読取り
値は、緑色から濃暗青色へと漸増的に色が推移すること
によって示され、それぞれ３０．１００ 、３００及び
２０００ｍｇ／ｄＬ以上の尿蛋白濃度にほぼ相当し、数
値につれて悪化する蛋白尿の指標として信頼できるもの
である。
値は、緑色から濃暗青色へと漸増的に色が推移すること
によって示され、それぞれ３０．１００ 、３００及び
２０００ｍｇ／ｄＬ以上の尿蛋白濃度にほぼ相当し、数
値につれて悪化する蛋白尿の指標として信頼できるもの
である。
前述の方法によると、尿試料中の蛋白含有量がＯｍｇ／
ｄＬから約３０ｍｇ／ｄＬの範囲にあると容易に目で測
定できる。しかし、現在市販されている試験細片による
色の識別方法では、Ｏｍｇ／ｄＬから約１５ｍｇ／ｄＬ
の尿中蛋白含有量を正確に測定するには不十分である。
ｄＬから約３０ｍｇ／ｄＬの範囲にあると容易に目で測
定できる。しかし、現在市販されている試験細片による
色の識別方法では、Ｏｍｇ／ｄＬから約１５ｍｇ／ｄＬ
の尿中蛋白含有量を正確に測定するには不十分である。
低濃度の蛋白を検出し、その濃度を識別することができ
ないということは、健康な人間の尿蛋白値が約１０ｍｇ
／ｄＬから２０ｍｇ／ｄＬの範囲内にあることから、臨
床上重大である。したがって、個体の尿蛋白含有量をよ
り正確に認識することが、約３０ｍｇ／ｄＬ未漢の数値
で蛋白含有量を単に推定するよりも、臨床上重要である
かもしれな当然ながら、尿試料の蛋白含有量は、半定量
蛋白沈殿法または定量２４時間蛋白沈殿法により、より
正確に測定できる。しかし、これらの試験は時間がかか
り過ぎ、比較的費用も大きい。さらに、沈殿試験は訓練
された担当員により実験室内で実施されねばならず、し
たがって、患者が尿蛋白含有量を即座に測定し、特定の
治療の成否を観察するために家庭で行なうには利用でき
ない。
ないということは、健康な人間の尿蛋白値が約１０ｍｇ
／ｄＬから２０ｍｇ／ｄＬの範囲内にあることから、臨
床上重大である。したがって、個体の尿蛋白含有量をよ
り正確に認識することが、約３０ｍｇ／ｄＬ未漢の数値
で蛋白含有量を単に推定するよりも、臨床上重要である
かもしれな当然ながら、尿試料の蛋白含有量は、半定量
蛋白沈殿法または定量２４時間蛋白沈殿法により、より
正確に測定できる。しかし、これらの試験は時間がかか
り過ぎ、比較的費用も大きい。さらに、沈殿試験は訓練
された担当員により実験室内で実施されねばならず、し
たがって、患者が尿蛋白含有量を即座に測定し、特定の
治療の成否を観察するために家庭で行なうには利用でき
ない。
したがって、蛋白値をＯｍｇ／ｄＬ 〜約１０ｍｇ／ｄ
Ｌ、約１０ｍｇ／ｄＬ 〜２０ｍｇ／ｄＬ 、約２０ｍ
ｇ／ｄＬ 〜３０ｍｇ／ｄＬ、及びそれ以上的１００ｍ
ｇ／ｄＬ〜３００ｍｇ／ｄＬの間の範囲で視覚的に識別
することか可能である蛋白含有量について尿を試験する
ための簡易かつ正確で、信頼性が高い方法を有すること
は極めて有利であろう。含浸／読取り試験細片など便用
が容易な形態で尿蛋白濃度を測定するこのような正確な
方法を提供することで、尿試験は、試験結果が出るまで
日も待つことなく診断が行なえ、治療がただちに開始さ
れるべく、実験担当員の手で実施され即座の試験結果を
出すことができる。さらに、試験細片による方法は、低
値の尿中蛋白そして／または患者が受けている治療の成
否を正確に観察するために患者自身が家庭で実施するこ
ともできる。
Ｌ、約１０ｍｇ／ｄＬ 〜２０ｍｇ／ｄＬ 、約２０ｍ
ｇ／ｄＬ 〜３０ｍｇ／ｄＬ、及びそれ以上的１００ｍ
ｇ／ｄＬ〜３００ｍｇ／ｄＬの間の範囲で視覚的に識別
することか可能である蛋白含有量について尿を試験する
ための簡易かつ正確で、信頼性が高い方法を有すること
は極めて有利であろう。含浸／読取り試験細片など便用
が容易な形態で尿蛋白濃度を測定するこのような正確な
方法を提供することで、尿試験は、試験結果が出るまで
日も待つことなく診断が行なえ、治療がただちに開始さ
れるべく、実験担当員の手で実施され即座の試験結果を
出すことができる。さらに、試験細片による方法は、低
値の尿中蛋白そして／または患者が受けている治療の成
否を正確に観察するために患者自身が家庭で実施するこ
ともできる。
以下、より詳細に説明するとおり、本発明の方法により
、二指示試薬組成物を含有する試験細片を利用すること
によって、迅速かつ正確で信頼性が高い尿の蛋白試験が
可能になる。二指示試薬組成物は目視による色の分解度
、したがって試験の感度を改善し、それにより、尿蛋白
濃度を約３０ｍｇ／ｄＬまたはそれ以下の値で正確に測
定することができる。さらに、本発明の方法は、試験試
料中の低分子蛋白、例えばベンズ・ジョーンズ蛋白の有
無及び／または濃度を測定するのに用いることもできる
。先行技術による試験法はすべて、時間がかかり過ぎ比
較的費用が太き（、患者が尿中の低分子蛋白を検出する
ため家庭で使用するには適さない免疫電気泳動法または
加熱試験法を用いている。
、二指示試薬組成物を含有する試験細片を利用すること
によって、迅速かつ正確で信頼性が高い尿の蛋白試験が
可能になる。二指示試薬組成物は目視による色の分解度
、したがって試験の感度を改善し、それにより、尿蛋白
濃度を約３０ｍｇ／ｄＬまたはそれ以下の値で正確に測
定することができる。さらに、本発明の方法は、試験試
料中の低分子蛋白、例えばベンズ・ジョーンズ蛋白の有
無及び／または濃度を測定するのに用いることもできる
。先行技術による試験法はすべて、時間がかかり過ぎ比
較的費用が太き（、患者が尿中の低分子蛋白を検出する
ため家庭で使用するには適さない免疫電気泳動法または
加熱試験法を用いている。
ベンズ・ジョーンズ蛋白は、約２０．０００の低分子量
を有し腎臓の糸球体フィルターを透過できるほど小さな
尿中蛋白の一部に属する。しかし、ベンズ・ジョーンズ
蛋白は通常、腎臓の管状部で再吸収される。したがって
、ベンズ・ジョーンズ蛋白の濃度は、健康な人間の尿に
おいては無視できる程度である。そのため、尿中に有意
量のベンズ・ジョーンズ蛋白が存在する場合は、通常臨
床的に重大である。総体的に、尿中の低分子蛋白の検出
及び測定は、ある種の疾病の特徴が、高アルブミン値レ
ベルが特徴である慢性蛋白尿というよりも、特定の低分
子蛋白（グロブリン）の排泄であることから、重要であ
る。
を有し腎臓の糸球体フィルターを透過できるほど小さな
尿中蛋白の一部に属する。しかし、ベンズ・ジョーンズ
蛋白は通常、腎臓の管状部で再吸収される。したがって
、ベンズ・ジョーンズ蛋白の濃度は、健康な人間の尿に
おいては無視できる程度である。そのため、尿中に有意
量のベンズ・ジョーンズ蛋白が存在する場合は、通常臨
床的に重大である。総体的に、尿中の低分子蛋白の検出
及び測定は、ある種の疾病の特徴が、高アルブミン値レ
ベルが特徴である慢性蛋白尿というよりも、特定の低分
子蛋白（グロブリン）の排泄であることから、重要であ
る。
例えば、ベンズ・ジョーンズ蛋白は高分子骨髄腫血しょ
うグロブリンの一部を表わし、したがって、骨髄腫また
は白血病患者の半数以上の尿中で増量して見られる。ベ
ンズ・ジョーンズ蛋白尿もまた、多くのマクログロブリ
ン血症及び原発性全身性アミロイド−シス患者の尿中で
見られる。さらに、ベンズ・ジョーンズ蛋白に類似した
特定のグロブリンの排泄の増加がフランクリン病におい
て発生ずる。そして、腎尿細管障害、例えばファンコニ
症候群の患者は、尿中に排泄されるグロブリンの量にお
いて相当な増加を示す。したがって、研究者たちは、市
販の試験細片において用いる色素結合法が低分子蛋白、
例えばベンズ・ジョーンズ蛋白に対して鈍感であること
がら、低分子蛋白用の簡易試験法を探究してきた。驚く
べきことであり、また思い掛Ｇづないことであるが、本
発明の方法は、ベンズ・ジョーンズ蛋白などの低分子蛋
白の濃度を、適当なサイズの気孔を有する重合ウレタン
含何のフィルム、層または膜に組み込んだ二指示試薬組
成物を用いて、検出及び測定する技術を促供する。
うグロブリンの一部を表わし、したがって、骨髄腫また
は白血病患者の半数以上の尿中で増量して見られる。ベ
ンズ・ジョーンズ蛋白尿もまた、多くのマクログロブリ
ン血症及び原発性全身性アミロイド−シス患者の尿中で
見られる。さらに、ベンズ・ジョーンズ蛋白に類似した
特定のグロブリンの排泄の増加がフランクリン病におい
て発生ずる。そして、腎尿細管障害、例えばファンコニ
症候群の患者は、尿中に排泄されるグロブリンの量にお
いて相当な増加を示す。したがって、研究者たちは、市
販の試験細片において用いる色素結合法が低分子蛋白、
例えばベンズ・ジョーンズ蛋白に対して鈍感であること
がら、低分子蛋白用の簡易試験法を探究してきた。驚く
べきことであり、また思い掛Ｇづないことであるが、本
発明の方法は、ベンズ・ジョーンズ蛋白などの低分子蛋
白の濃度を、適当なサイズの気孔を有する重合ウレタン
含何のフィルム、層または膜に組み込んだ二指示試薬組
成物を用いて、検出及び測定する技術を促供する。
ベンズ・ジョーンズ蛋白は、約４５℃〜６０°Ｃの間の
温度に加熱すると凝集し、その後さらに試験試料の沸点
にまで加熱すると再溶解するという点で、その他すべて
の尿蛋白とは異なる。ベンズ・ジョーンズ蛋白のこの特
異な性質は、該蛋白についてのすべての定性及び半定量
測定の基準であった。市販の試験細片において使用する
色素結合法は、健康な個体の尿中にあるより高分子量の
蛋白、例えばアルブミンのはるかに高い相対濃度がベン
ズ・ジョーンズ蛋白の存在の障害となり、それを遮蔽す
る効果を有する理由から、該蛋白に対しては感受性がな
いことが分かっている。そのうえ、ベンズ・ジョーンズ
蛋白からアルブミンを分離させることは不都合で費用か
かかり、乾式試験細片を使用する前に該蛋白からアルブ
ミンを分離させる利点が無になる。
温度に加熱すると凝集し、その後さらに試験試料の沸点
にまで加熱すると再溶解するという点で、その他すべて
の尿蛋白とは異なる。ベンズ・ジョーンズ蛋白のこの特
異な性質は、該蛋白についてのすべての定性及び半定量
測定の基準であった。市販の試験細片において使用する
色素結合法は、健康な個体の尿中にあるより高分子量の
蛋白、例えばアルブミンのはるかに高い相対濃度がベン
ズ・ジョーンズ蛋白の存在の障害となり、それを遮蔽す
る効果を有する理由から、該蛋白に対しては感受性がな
いことが分かっている。そのうえ、ベンズ・ジョーンズ
蛋白からアルブミンを分離させることは不都合で費用か
かかり、乾式試験細片を使用する前に該蛋白からアルブ
ミンを分離させる利点が無になる。
このため、乾式試験細片は、尿中のベンズ・ジョーンズ
蛋白の有無及び濃度についての試験には、目下のところ
利用できない。しかし、本発明の高感度な二指示試薬組
成物を十分に微小なサイズの気孔を有するキャリヤーマ
トリックスに組み込むことで、尿試料中に含有されてい
るアルブミンがキャリヤーマトリックスに浸透し、二指
示試薬組成物と相互作用して変色を起こさせることがな
くなる。しかし、ギヤリヤーマトリックスは、ベンズ・
ジョーンズ蛋白が該マトリックスに浸透し、二指示試薬
組成物と相互作用して変色させるに十分なだけの気孔の
サイズを有する。
蛋白の有無及び濃度についての試験には、目下のところ
利用できない。しかし、本発明の高感度な二指示試薬組
成物を十分に微小なサイズの気孔を有するキャリヤーマ
トリックスに組み込むことで、尿試料中に含有されてい
るアルブミンがキャリヤーマトリックスに浸透し、二指
示試薬組成物と相互作用して変色を起こさせることがな
くなる。しかし、ギヤリヤーマトリックスは、ベンズ・
ジョーンズ蛋白が該マトリックスに浸透し、二指示試薬
組成物と相互作用して変色させるに十分なだけの気孔の
サイズを有する。
異常に高いアルブミン値または低分子蛋白の存在のいず
れかの結果である蛋白尿は、臨床上及び病理学上の障害
の正確な性質ならびに特定の疾病の程度に依存する。蛋
白尿は、断続的または継続的に現れ、−時的で断続的な
蛋白尿は、腎臓障害よりむしろ、通常は生理的または機
能的状態により発生する。したがって、尿及びその伯蛋
白についての試験試料の正確で完全な分析は、実験室及
び家庭での使用の双方について利用できなければならな
い。このような試験は、正しい診断が下され、正しい治
療が実施、観察そして維持されるべく、対象の蛋白、つ
まりアルブミン及び／またはベンズ・ジョーンズ蛋白の
検出及び測定が可能でなければならない。さらに、アル
ブミンのような高分子蛋白及びベンズ・ジョーンズ蛋白
のような低分子蛋白の双方についての蛋白試験方法が、
尿またはその他の試験試料中の蛋白の容易で廉価な定性
及び／または半定量測定のために浸漬／読取りの形態で
利用できるなら、好都合といえるだろそのうえ、尿また
はその他の試験試料中の蛋白を試験するいかなる方法も
、競合する化学的または物理的相互作用、例えばｐＨ変
化または蛋白以外の試験試料の成分との優先的相互作用
の結果としてでな（、蛋白との相互作用の結果として変
色を受ける組成物を利用することにより、正確で信頼で
き再現性のある結果を出さなければならない。
れかの結果である蛋白尿は、臨床上及び病理学上の障害
の正確な性質ならびに特定の疾病の程度に依存する。蛋
白尿は、断続的または継続的に現れ、−時的で断続的な
蛋白尿は、腎臓障害よりむしろ、通常は生理的または機
能的状態により発生する。したがって、尿及びその伯蛋
白についての試験試料の正確で完全な分析は、実験室及
び家庭での使用の双方について利用できなければならな
い。このような試験は、正しい診断が下され、正しい治
療が実施、観察そして維持されるべく、対象の蛋白、つ
まりアルブミン及び／またはベンズ・ジョーンズ蛋白の
検出及び測定が可能でなければならない。さらに、アル
ブミンのような高分子蛋白及びベンズ・ジョーンズ蛋白
のような低分子蛋白の双方についての蛋白試験方法が、
尿またはその他の試験試料中の蛋白の容易で廉価な定性
及び／または半定量測定のために浸漬／読取りの形態で
利用できるなら、好都合といえるだろそのうえ、尿また
はその他の試験試料中の蛋白を試験するいかなる方法も
、競合する化学的または物理的相互作用、例えばｐＨ変
化または蛋白以外の試験試料の成分との優先的相互作用
の結果としてでな（、蛋白との相互作用の結果として変
色を受ける組成物を利用することにより、正確で信頼で
き再現性のある結果を出さなければならない。
さらに、蛋白試験方法が、尿またはその他の試験試料中
の蛋白の即座で低廉そして正確な測定のために湿式試験
及び乾式試薬細片の両方に適するなら、好都合といえる
だろう。またそのうえに、蛋白試験において利用される
方法及び組成物は、複式試験パッド細片上にある他の試
験試薬パッドに有害に作用したり、またはそれに対して
障害となってはならない。
の蛋白の即座で低廉そして正確な測定のために湿式試験
及び乾式試薬細片の両方に適するなら、好都合といえる
だろう。またそのうえに、蛋白試験において利用される
方法及び組成物は、複式試験パッド細片上にある他の試
験試薬パッドに有害に作用したり、またはそれに対して
障害となってはならない。
本発明以前には、試験の色分鮮度を改善し比較的低い蛋
白濃度値での試験の感度を増大する二指示試薬組成物を
特徴とし、それにより約３０ｍｇ／ｄＬ及びそれ以下の
蛋白濃度について正確で信頼できる蛋白試験を実施する
ことができる、尿及びその他の試験試料を蛋白について
試験する公知の方法は存在しない。さらに、Ｃ−の色素
、例えばデトラブロモフェノールブルーまたはテトラク
ロロフェノール−３，４，５，６−チトラブロモスルホ
ンフタレインを用いる乾式化学試験細片は、何年かにわ
たって広範囲に使用されてきたが、比較的低い蛋白濃度
値での視覚による色分鮮度を改善し、したがって感度を
増大するために二色素を組み込んだ乾式試験細片はこれ
までに存在していない。そのうえ、本発明の方法までは
、乾式試験細片による手法は、主として、総蛋白濃度、
すなわちアルブミンに対しては利用することはできた。
白濃度値での試験の感度を増大する二指示試薬組成物を
特徴とし、それにより約３０ｍｇ／ｄＬ及びそれ以下の
蛋白濃度について正確で信頼できる蛋白試験を実施する
ことができる、尿及びその他の試験試料を蛋白について
試験する公知の方法は存在しない。さらに、Ｃ−の色素
、例えばデトラブロモフェノールブルーまたはテトラク
ロロフェノール−３，４，５，６−チトラブロモスルホ
ンフタレインを用いる乾式化学試験細片は、何年かにわ
たって広範囲に使用されてきたが、比較的低い蛋白濃度
値での視覚による色分鮮度を改善し、したがって感度を
増大するために二色素を組み込んだ乾式試験細片はこれ
までに存在していない。そのうえ、本発明の方法までは
、乾式試験細片による手法は、主として、総蛋白濃度、
すなわちアルブミンに対しては利用することはできた。
しかし、驚くべきことであり、思い掛けないことには、
本発明の方法により、ベンズ・ジョーンズ蛋白などの低
分子蛋白についての尿及びその他の試験試料の乾式試験
細片試験が可能である。
本発明の方法により、ベンズ・ジョーンズ蛋白などの低
分子蛋白についての尿及びその他の試験試料の乾式試験
細片試験が可能である。
先行技術は、蛋白について尿を試験するｐ ｔ＋指示薬
色素方法において用いられる湿式及び乾式化学に関して
の数多くの言及を含む。例えば、Ｋｅｓｔｏｎの米国特
許節３，４８５，５８７号は、一定ｐＨ値における蛋白
の試験で使用される基本的な色素結合法を開示している
。Ｋｅｓｔｏｎは、色素の変色を観察することでアルブ
ミンの有無及び／または濃度を測定するために、色素の
ｐＫａ （酸解離定数）よりわずかに低い一定ｐ＋（
値に維持した単一の指示薬色素を用いることを述べてい
る。
色素方法において用いられる湿式及び乾式化学に関して
の数多くの言及を含む。例えば、Ｋｅｓｔｏｎの米国特
許節３，４８５，５８７号は、一定ｐＨ値における蛋白
の試験で使用される基本的な色素結合法を開示している
。Ｋｅｓｔｏｎは、色素の変色を観察することでアルブ
ミンの有無及び／または濃度を測定するために、色素の
ｐＫａ （酸解離定数）よりわずかに低い一定ｐ＋（
値に維持した単一の指示薬色素を用いることを述べてい
る。
先行技術そして現在市販で入手できる試験細片と対照的
に、本発明の方法は、指示薬色素の組み合わせを用いる
ことにより、尿中蛋白の検出及び測定における感度を増
大し、それにより約３０ｍｇ／ｄＬ及びそれ以下の正確
な蛋白値測定を可能にする。思い掛けなく、そして驚く
べきことに、本発明の方法により、低い値のベンズ・ジ
ョーンズ蛋白の簡易で本質的に即座の検出及び測定が可
能である。これは、尿試料中の比較的高濃度のアルブミ
ンによる干渉が原因でこれまでのところ不可能であった
方法である。したがって、本発明の方法によると、適当
な気孔サイズを有するキャリヤーマトリックスに組み込
んだ二指示試薬組成物を利用することにより、低分子蛋
白を含む蛋白についての尿及びその他の試験試料の転相
試薬細片試験及び湿式試験において、新規で思い掛けな
い結果が達成される。
に、本発明の方法は、指示薬色素の組み合わせを用いる
ことにより、尿中蛋白の検出及び測定における感度を増
大し、それにより約３０ｍｇ／ｄＬ及びそれ以下の正確
な蛋白値測定を可能にする。思い掛けなく、そして驚く
べきことに、本発明の方法により、低い値のベンズ・ジ
ョーンズ蛋白の簡易で本質的に即座の検出及び測定が可
能である。これは、尿試料中の比較的高濃度のアルブミ
ンによる干渉が原因でこれまでのところ不可能であった
方法である。したがって、本発明の方法によると、適当
な気孔サイズを有するキャリヤーマトリックスに組み込
んだ二指示試薬組成物を利用することにより、低分子蛋
白を含む蛋白についての尿及びその他の試験試料の転相
試薬細片試験及び湿式試験において、新規で思い掛けな
い結果が達成される。
及胛■患ヌ
要約すると、本発明は、新規で改良された試験装置、そ
の試験装置の製法及び試験試料中の成分の有無及び／ま
たは濃度の測定方法に関する。本装置は、試験試料の成
分と相互作用して検出可能な応答をなすことが可能な反
応体組成物を組み込んだキャリヤーマトリックスを特徴
とする。家庭での使用の場合、反応体組成物は視覚的に
検出可能な応答をなす。実験室での使用の場合は、反応
体組成物は、視覚及び機器により検出可能な応答をなす
。本発明の装置のキャリヤーマトリックスは、濾紙のよ
うな吸水性の多孔性材質または重合性ウレタン含有材質
の新規で改良された非吸水性で蛋白透過性の細片、層ま
たは膜から成る。反応体組成物は、マトリックスが完全
に硬化する前またはその後で、重合性キャリヤーマトリ
ックスに均質に組み込むことが可能で、キャリヤーマド
ノックスはその後、キャリヤーマトリックスが完全に硬
化した後に、所定の成分に対してのキャリャーマ！・リ
ックスの透過性を維持しながらも、反応体組成物をキャ
リャーマ！・リックス全体に亘って所定の濃度において
均一に保持する。
の試験装置の製法及び試験試料中の成分の有無及び／ま
たは濃度の測定方法に関する。本装置は、試験試料の成
分と相互作用して検出可能な応答をなすことが可能な反
応体組成物を組み込んだキャリヤーマトリックスを特徴
とする。家庭での使用の場合、反応体組成物は視覚的に
検出可能な応答をなす。実験室での使用の場合は、反応
体組成物は、視覚及び機器により検出可能な応答をなす
。本発明の装置のキャリヤーマトリックスは、濾紙のよ
うな吸水性の多孔性材質または重合性ウレタン含有材質
の新規で改良された非吸水性で蛋白透過性の細片、層ま
たは膜から成る。反応体組成物は、マトリックスが完全
に硬化する前またはその後で、重合性キャリヤーマトリ
ックスに均質に組み込むことが可能で、キャリヤーマド
ノックスはその後、キャリヤーマトリックスが完全に硬
化した後に、所定の成分に対してのキャリャーマ！・リ
ックスの透過性を維持しながらも、反応体組成物をキャ
リャーマ！・リックス全体に亘って所定の濃度において
均一に保持する。
より詳細には、本発明は、新規で改良された二指示試薬
組成物を用いることにより、尿またはその他の試験試料
を蛋白について試験する方法に関する。はぼ同じｐＨ範
囲で変色作用を受けることが可能な指示薬色素の組み合
わせを用いることにより、色の分解度が改良され、低蛋
白濃度の範囲での感度が増大されることが実証された。
組成物を用いることにより、尿またはその他の試験試料
を蛋白について試験する方法に関する。はぼ同じｐＨ範
囲で変色作用を受けることが可能な指示薬色素の組み合
わせを用いることにより、色の分解度が改良され、低蛋
白濃度の範囲での感度が増大されることが実証された。
本発明の重要な特徴によると、尿及びその他の試験試料
中のＯｍｇ／ｄＬから約２０００ｍｇ／ｄＬ 、特にＯ
ｍｇ／ｄＬから約３０ｍｇ／ｄＬの間の蛋白値の定性及
び／または半定量測定が達成される。本発明の二指示試
薬組成物を臨床試験方法において利用すると、色素の組
み合わせにより改良された色の分解度が、低蛋白濃度に
対するこの方法の感度を増大することから、尿またはそ
の他の試験試料中のアルブミンなどの蛋白の定性及び／
または半定量濃度をより正確に測定することが可能であ
る。そのうえ、驚くべきことであり、また思い掛けない
ことであるが、ボッウレタンが基材の新規で改良された
キャリヤマトリックスから成る試験装置に組み込まれた
指示試薬組成物により、尿またはその他の試験試料中の
低分子蛋白、例えばベンズ・ジョーンズ蛋白の検出及び
測定が可能である。
中のＯｍｇ／ｄＬから約２０００ｍｇ／ｄＬ 、特にＯ
ｍｇ／ｄＬから約３０ｍｇ／ｄＬの間の蛋白値の定性及
び／または半定量測定が達成される。本発明の二指示試
薬組成物を臨床試験方法において利用すると、色素の組
み合わせにより改良された色の分解度が、低蛋白濃度に
対するこの方法の感度を増大することから、尿またはそ
の他の試験試料中のアルブミンなどの蛋白の定性及び／
または半定量濃度をより正確に測定することが可能であ
る。そのうえ、驚くべきことであり、また思い掛けない
ことであるが、ボッウレタンが基材の新規で改良された
キャリヤマトリックスから成る試験装置に組み込まれた
指示試薬組成物により、尿またはその他の試験試料中の
低分子蛋白、例えばベンズ・ジョーンズ蛋白の検出及び
測定が可能である。
したがって、液体中の化合物の相対濃度を測定するため
の新規で改良された方法及び試験装置を提供することは
、本発明の一目的である。
の新規で改良された方法及び試験装置を提供することは
、本発明の一目的である。
本発明のもう一つの目的は、蛋白について尿またはその
他の試験試料を試験する簡易で信頼性が高く正確で再現
性のある方法を提供することである。
他の試験試料を試験する簡易で信頼性が高く正確で再現
性のある方法を提供することである。
本発明のその他の目的は、試験液体中の蛋白と相互作用
を起こして、該試験液体中の蛋白濃度を示す試験装置の
視覚的な変化、例えば変色を起こす新規で改良された蛋
白相互作用性の試験装置を提供することである。
を起こして、該試験液体中の蛋白濃度を示す試験装置の
視覚的な変化、例えば変色を起こす新規で改良された蛋
白相互作用性の試験装置を提供することである。
本発明のその他の目的は、アルブミンまたは低分子蛋白
、例えばベンズ・ジョーンズ蛋白について尿またはその
他の試験試料を試験する方法を提供することである。
、例えばベンズ・ジョーンズ蛋白について尿またはその
他の試験試料を試験する方法を提供することである。
本発明のその他の目的は、目視による色の分解度を改良
し、低濃度の蛋白に対する感度を増大する、尿またはそ
の他の試験試料を試験する方法を提供することである。
し、低濃度の蛋白に対する感度を増大する、尿またはそ
の他の試験試料を試験する方法を提供することである。
さらに、本発明のその他の目的は、約１５＋ｎｇ／ｄｌ
−未満の蛋白濃度を感知し、Ｏｍｇ／ｄＬから約２００
０ｍｇ／ｄＬ 、特にＯｍｇ／ｄＬから約３０ｍｇ／ｄ
ｌ−の間の蛋白値を半定量的に識別する、尿またはその
他の液体試験試料を試験する方法を提供することである
。
−未満の蛋白濃度を感知し、Ｏｍｇ／ｄＬから約２００
０ｍｇ／ｄＬ 、特にＯｍｇ／ｄＬから約３０ｍｇ／ｄ
ｌ−の間の蛋白値を半定量的に識別する、尿またはその
他の液体試験試料を試験する方法を提供することである
。
本発明のその他の目的は、二指示試薬組成物を用いる尿
またはその他の試験液を試験する方法を提供することで
ある。
またはその他の試験液を試験する方法を提供することで
ある。
本発明のその他の目的は、組成物の指示薬成分の変色ｐ
Ｈよりわずかに低いｐＨ範囲で緩衝化されると蛋白と相
互作用し検出可能で測定可能な変色を受け、試験試料中
の蛋白の有無及び濃度を確認することが可能な二指示試
薬組成物を用いることにより、尿またはその他の試験液
を試験する方法を提供することである。
Ｈよりわずかに低いｐＨ範囲で緩衝化されると蛋白と相
互作用し検出可能で測定可能な変色を受け、試験試料中
の蛋白の有無及び濃度を確認することが可能な二指示試
薬組成物を用いることにより、尿またはその他の試験液
を試験する方法を提供することである。
本発明のその他の目的は、適宜に緩衝化されると蛋白と
相互作用し視覚及び／または機器により識別可能な変色
を受け、Ｏｍｇ／ｄＬから約２０ＱＯｍｇ／ｄＬ 、特
にＯｍｇ／ｄＬから約３０ｍｇ／ｄＬＯ値の尿またはそ
の他の液体試料中の蛋白濃度を半定量的に測定すること
が可能な二指示試薬組成物を提供することである。
相互作用し視覚及び／または機器により識別可能な変色
を受け、Ｏｍｇ／ｄＬから約２０ＱＯｍｇ／ｄＬ 、特
にＯｍｇ／ｄＬから約３０ｍｇ／ｄＬＯ値の尿またはそ
の他の液体試料中の蛋白濃度を半定量的に測定すること
が可能な二指示試薬組成物を提供することである。
本発明のその他の目的は、低分子蛋白の有無及び濃度に
ついて尿またはその他の試験試料を試験する方法を提供
することである。
ついて尿またはその他の試験試料を試験する方法を提供
することである。
さらに、本発明のその他の目的は、二指示試薬組成物を
用いることにより、ベンズ・ジョーンズ蛋白などの低分
子蛋白について液体試料を試験する方法を提供すること
である。
用いることにより、ベンズ・ジョーンズ蛋白などの低分
子蛋白について液体試料を試験する方法を提供すること
である。
本発明のその他の目的は、ベンズ・ジョーンズ蛋白など
の低分子蛋白は透過できるが、アルブミンなどのより高
分子の蛋白は透過することができない程度の多孔度を有
するキャリヤーマトリックスから成る乾式検出装置に二
指示試薬組成物を組み込むことにより、ベンズ・ジョー
ンズ蛋白について試験を行なう方法を提供することであ
る。
の低分子蛋白は透過できるが、アルブミンなどのより高
分子の蛋白は透過することができない程度の多孔度を有
するキャリヤーマトリックスから成る乾式検出装置に二
指示試薬組成物を組み込むことにより、ベンズ・ジョー
ンズ蛋白について試験を行なう方法を提供することであ
る。
本発明のその他の目的は、適当な多孔度のキャリヤーマ
トリックスに組み込まれた二指示試薬組′成物から成る
低分子蛋白の検出装置の製法を提供することである。
トリックスに組み込まれた二指示試薬組′成物から成る
低分子蛋白の検出装置の製法を提供することである。
本発明のその他の目的は、新規で改良された試験装置、
及び製造の間に、試験試料中の化合物と相互作用するこ
とが可能な反応体組成物を中に組み込んだキャリヤーマ
トリックスを含み、該キャリヤーマトリックスが重合性
ウレタン含有組成物から成る該試験装置の製法を提供す
ることである。
及び製造の間に、試験試料中の化合物と相互作用するこ
とが可能な反応体組成物を中に組み込んだキャリヤーマ
トリックスを含み、該キャリヤーマトリックスが重合性
ウレタン含有組成物から成る該試験装置の製法を提供す
ることである。
本発明のその他の目的は、硬化前には二指示薬反応体組
成物と比較的均質に混在することが可能で、硬化後は低
分子蛋白に対して透過性である重舎外ウレタン含有組成
物を含むキャリヤーマドノックスから成る試薬細片を提
供することである。
成物と比較的均質に混在することが可能で、硬化後は低
分子蛋白に対して透過性である重舎外ウレタン含有組成
物を含むキャリヤーマドノックスから成る試薬細片を提
供することである。
本発明のその他の目的は、化合物が、ポリマを基材とし
たキャリヤーマトリックスを透過することができ、製造
中にキャリヤーマトリックスが完全に硬化する前及びキ
ャリヤーマトリックスが完全に硬化した後で、該キャリ
ヤーマトリックスに組み込まれた二指示試薬組成物と反
応することができる、新規で改良された試験装置及び液
体中の該化合物の存在を感知するための該試験装置の製
法を提供することである。
たキャリヤーマトリックスを透過することができ、製造
中にキャリヤーマトリックスが完全に硬化する前及びキ
ャリヤーマトリックスが完全に硬化した後で、該キャリ
ヤーマトリックスに組み込まれた二指示試薬組成物と反
応することができる、新規で改良された試験装置及び液
体中の該化合物の存在を感知するための該試験装置の製
法を提供することである。
さらに、本発明のさらなる目的は、蛋白応答において新
規で思い掛けない精度を有する試験細片を得るために、
製造の間またはその後に一指示試薬組成物をキャリヤー
マトリックスに組み込むことが可能な新規で改良された
乾式試験細片を提供することである。
規で思い掛けない精度を有する試験細片を得るために、
製造の間またはその後に一指示試薬組成物をキャリヤー
マトリックスに組み込むことが可能な新規で改良された
乾式試験細片を提供することである。
本発明のその他の目的は、試験媒質中の所定の蛋白成分
と相互作用することができ、試験媒質の所定の蛋白成分
に対して透過性である硬化ポリマーの層、フィルムまた
は膜から成るキャリヤマトリックスに組み込まれた二指
示試薬組成物を有する新規で改良された試薬試験細片を
提供することである。
と相互作用することができ、試験媒質の所定の蛋白成分
に対して透過性である硬化ポリマーの層、フィルムまた
は膜から成るキャリヤマトリックスに組み込まれた二指
示試薬組成物を有する新規で改良された試薬試験細片を
提供することである。
本発明のその伯の目的は、低分子蛋白をも含めた蛋白の
定量分析のための新規で改良された試験装置を提供する
ことである。
定量分析のための新規で改良された試験装置を提供する
ことである。
上記及びその伯の目的ならびに本発明の利点及び新規な
特徴は、試薬試験細片における変色の色分鮮度の改良及
び蛋白に対する感度の増大、さらにはより正確な半定量
測定の実現を説明する添付の図面で例示した本発明の好
ましい実施態様についての以下の詳細な説明により明ら
かになるであろう。
特徴は、試薬試験細片における変色の色分鮮度の改良及
び蛋白に対する感度の増大、さらにはより正確な半定量
測定の実現を説明する添付の図面で例示した本発明の好
ましい実施態様についての以下の詳細な説明により明ら
かになるであろう。
光用ぶり日計り駁朋
本発明の方法によると、尿またはその他の試験試料中の
アルブミン及び／または低分子蛋白などの蛋白について
の定性及び／または半定量試験は、二指示試薬組成物を
用いることにより達成される。適当な指示薬色素の組み
合わせを用いることにより、雫−の指示薬色素を用いる
試験について目視による色の分解度が改良され、低濃度
値の蛋白に対する試験の感度が増大する。本発明の方法
によりもたらされる色の分解度の改良及び低蛋白質値に
対する感度の増大は、尿試験において特に有用である。
アルブミン及び／または低分子蛋白などの蛋白について
の定性及び／または半定量試験は、二指示試薬組成物を
用いることにより達成される。適当な指示薬色素の組み
合わせを用いることにより、雫−の指示薬色素を用いる
試験について目視による色の分解度が改良され、低濃度
値の蛋白に対する試験の感度が増大する。本発明の方法
によりもたらされる色の分解度の改良及び低蛋白質値に
対する感度の増大は、尿試験において特に有用である。
現在ある市販の方法によっては、Ｏｍｇ／ｄＬから約３
０ｍｇ／ｄＬ 、特にＯｍｇ／ｄＬから約１５ｍｇ／ｄ
Ｌの範囲の蛋白値を識別することができない。低い蛋白
濃度値を識別することは、約１０ｍｇ／ｄＬから２０ｍ
ｇ／ｄＬの範囲が健康な個体の定常な尿蛋白値として使
用されているため、この技術分野において臨床上重要で
ある。したがって、Ｏｍｇ／ｄＬから約１０ｍｇ／ｄＬ
までの尿蛋白値は、生理的不均衡をもたらす潜在的蛋白
欠乏を示しているかもしれず、約２０ｍｇ／ｄＬを超え
る尿蛋白値は、疾病状態を示唆する蛋白の過剰排泄を示
しているかもしれない。比較的高い範囲、例えば約１０
０ ｍｇ／ｄＬから２０００ｍｇ／ｄＬの尿蛋白濃度に
関しても、本発明の方法によると、色の分解度が改良さ
れ、尿蛋白濃度に対する感度が増大される。もっとも、
この濃度範囲においては、このような高い蛋白値は、よ
り本格的な診断の必要がある明らかに異常な生理的状態
を示唆しているため、臨床上の利点はそれほど重要では
ない。
０ｍｇ／ｄＬ 、特にＯｍｇ／ｄＬから約１５ｍｇ／ｄ
Ｌの範囲の蛋白値を識別することができない。低い蛋白
濃度値を識別することは、約１０ｍｇ／ｄＬから２０ｍ
ｇ／ｄＬの範囲が健康な個体の定常な尿蛋白値として使
用されているため、この技術分野において臨床上重要で
ある。したがって、Ｏｍｇ／ｄＬから約１０ｍｇ／ｄＬ
までの尿蛋白値は、生理的不均衡をもたらす潜在的蛋白
欠乏を示しているかもしれず、約２０ｍｇ／ｄＬを超え
る尿蛋白値は、疾病状態を示唆する蛋白の過剰排泄を示
しているかもしれない。比較的高い範囲、例えば約１０
０ ｍｇ／ｄＬから２０００ｍｇ／ｄＬの尿蛋白濃度に
関しても、本発明の方法によると、色の分解度が改良さ
れ、尿蛋白濃度に対する感度が増大される。もっとも、
この濃度範囲においては、このような高い蛋白値は、よ
り本格的な診断の必要がある明らかに異常な生理的状態
を示唆しているため、臨床上の利点はそれほど重要では
ない。
さらに、尿試験に関しては、低分子蛋白、例えばベンズ
・ジョーンズ蛋白の低い値での存在は、白血病または骨
髄腫などの特定の疾病状態を示唆している。したがって
、本発明の装置及び方法のもう一つの重要な特徴として
、二指示試薬組成物の使用によりもたらされる色の分解
度の改良、及びその結果である尿中の低い値の蛋白に対
する感度の増大は、尿中に存在する低分子蛋白の濃度を
検出及び測定する技術を提供する。したがって、本発明
の詳細な説明においてこの後でより詳細に述べられると
おり、アルブミンなどの高分子蛋白による干渉を除（こ
とにより、尿中の蛋白総合有量または尿中の低分子蛋白
の含有量のいずれかについて試験を実施するために、−
っの方法及び装置が利用できる。
・ジョーンズ蛋白の低い値での存在は、白血病または骨
髄腫などの特定の疾病状態を示唆している。したがって
、本発明の装置及び方法のもう一つの重要な特徴として
、二指示試薬組成物の使用によりもたらされる色の分解
度の改良、及びその結果である尿中の低い値の蛋白に対
する感度の増大は、尿中に存在する低分子蛋白の濃度を
検出及び測定する技術を提供する。したがって、本発明
の詳細な説明においてこの後でより詳細に述べられると
おり、アルブミンなどの高分子蛋白による干渉を除（こ
とにより、尿中の蛋白総合有量または尿中の低分子蛋白
の含有量のいずれかについて試験を実施するために、−
っの方法及び装置が利用できる。
さらに、尿を試験することに加えて、本発明の方法及び
装置はまた、血しょう及び血清中のアルブミンの有無及
び半定量的濃度、そしてより一般的には、その他多くの
アルブミン含有液体のアルブミン含有量を測定するため
に使用することもできる。本発明の他の重要な特徴によ
ると、本発明の方法及び組成物は、尿またはその他の液
体試験試料中の蛋白の有無及び／または濃度を測定する
ために、水性液体相式試験及び、本発明の利点を充分に
生かせるよう、乾式試験パッド試験の両方において用い
ることができる。
装置はまた、血しょう及び血清中のアルブミンの有無及
び半定量的濃度、そしてより一般的には、その他多くの
アルブミン含有液体のアルブミン含有量を測定するため
に使用することもできる。本発明の他の重要な特徴によ
ると、本発明の方法及び組成物は、尿またはその他の液
体試験試料中の蛋白の有無及び／または濃度を測定する
ために、水性液体相式試験及び、本発明の利点を充分に
生かせるよう、乾式試験パッド試験の両方において用い
ることができる。
驚くべきことであり、また思い掛けないことであるが、
一定のｐＨ値に維持されると、それぞれが蛋白と相互作
用して検出可能で測定可能な変色を受ける能力を有する
二つの適当な指示薬色素を組み合わせ、試験試料中の蛋
白の有無及び／または濃度を測定する色素結合法におい
て使用する場合、色の分解度が改良され、低蛋白濃度に
対する感度が増大されることが分かった。二指示試薬組
成物を用いる色素結合法は、蛋白に関してのより正確で
信頼性のある臨床Ｆ意義ある半定量試験を提供する。現
在のところ、液体相式試験及び市販されている乾式試験
細片試験は、単一の色素のみ、例えばテトラブロモフェ
ノールブルーまたはテトラクロロフェノール−３，４，
５，６−チトラブロモスルホンフタレインのみを、試験
試料中の蛋白の有無及び／または半定量濃度を測定する
ための指示薬色素として用いている。
一定のｐＨ値に維持されると、それぞれが蛋白と相互作
用して検出可能で測定可能な変色を受ける能力を有する
二つの適当な指示薬色素を組み合わせ、試験試料中の蛋
白の有無及び／または濃度を測定する色素結合法におい
て使用する場合、色の分解度が改良され、低蛋白濃度に
対する感度が増大されることが分かった。二指示試薬組
成物を用いる色素結合法は、蛋白に関してのより正確で
信頼性のある臨床Ｆ意義ある半定量試験を提供する。現
在のところ、液体相式試験及び市販されている乾式試験
細片試験は、単一の色素のみ、例えばテトラブロモフェ
ノールブルーまたはテトラクロロフェノール−３，４，
５，６−チトラブロモスルホンフタレインのみを、試験
試料中の蛋白の有無及び／または半定量濃度を測定する
ための指示薬色素として用いている。
蛋白の試験において現在使用されている色素は蛋白と相
互作用し、適切で一定のｐＨに維持されている場合に、
蛋白誤差現象が原因で変色を受ける。蛋白誤差現象は、
Ｋｅｓｌ；ｏｎの米国特許第３．４８５，５８７号にお
いて詳細に記載されている。このＫｅｓｔｏｎの特許で
は、様々な色素、正しいｐＨ範聞及び蛋白誤差現象を観
察するために必要な緩衝剤が開示されている。Ｋｅｓｔ
ｏｎの特許は、基本的には、尿中の総蛋白含有量の試験
に用いられる今Ｉヨの乾式試験細片を記載している。こ
の総蛋白試験細片は、皆通、５またはそれ以下の強酸性
ｐＨで通常に変色を受ける指示薬色素、及び該指示薬色
素のｐＨをその色素にとっての変色ｐ１はりわずかに低
く維持する緩衝剤を含んでいる。指示薬色素を充分に緩
衝化することで、試験試料との接触により発生ずるｐＨ
変化が原因ではなく蛋白との相互作用が原因で色素が変
色することが本質的に保証される。
互作用し、適切で一定のｐＨに維持されている場合に、
蛋白誤差現象が原因で変色を受ける。蛋白誤差現象は、
Ｋｅｓｌ；ｏｎの米国特許第３．４８５，５８７号にお
いて詳細に記載されている。このＫｅｓｔｏｎの特許で
は、様々な色素、正しいｐＨ範聞及び蛋白誤差現象を観
察するために必要な緩衝剤が開示されている。Ｋｅｓｔ
ｏｎの特許は、基本的には、尿中の総蛋白含有量の試験
に用いられる今Ｉヨの乾式試験細片を記載している。こ
の総蛋白試験細片は、皆通、５またはそれ以下の強酸性
ｐＨで通常に変色を受ける指示薬色素、及び該指示薬色
素のｐＨをその色素にとっての変色ｐ１はりわずかに低
く維持する緩衝剤を含んでいる。指示薬色素を充分に緩
衝化することで、試験試料との接触により発生ずるｐＨ
変化が原因ではなく蛋白との相互作用が原因で色素が変
色することが本質的に保証される。
本発明の重要な特徴によると、適当なｐＨ値に適切に緩
衝化された指示薬色素の一組を賢明に選択することで、
液体試料中の総蛋白含有量のより正確で信頼性のある試
験が提供される。そのうえ、驚くべきことであり、また
思い掛けないことであるが、重合性ウレタン含有のフィ
ルム、層または膜から成るキャリヤーマトリックスを含
む乾式試験スティックに二指示試薬組成物を組み込むこ
とにより、試験試料中から低分子蛋白を選択的に検出及
び測定することが可能である。さらに、低分子蛋白の検
出及び測定が、主要成分であって、競合、干渉している
高分子蛋白、例えばアルブミンを試験試料から分離する
ことな〈実施できる。したがって、時間がかかり過ぎ、
費用の大きな追加の操作段階が回避される。そのうえ、
家庭または実験室内で実施可能で、低分子蛋白について
の本質的に即座の試験結果を出す迅速かつ正確で再現性
があり信頼できる試験方法が達成される。
衝化された指示薬色素の一組を賢明に選択することで、
液体試料中の総蛋白含有量のより正確で信頼性のある試
験が提供される。そのうえ、驚くべきことであり、また
思い掛けないことであるが、重合性ウレタン含有のフィ
ルム、層または膜から成るキャリヤーマトリックスを含
む乾式試験スティックに二指示試薬組成物を組み込むこ
とにより、試験試料中から低分子蛋白を選択的に検出及
び測定することが可能である。さらに、低分子蛋白の検
出及び測定が、主要成分であって、競合、干渉している
高分子蛋白、例えばアルブミンを試験試料から分離する
ことな〈実施できる。したがって、時間がかかり過ぎ、
費用の大きな追加の操作段階が回避される。そのうえ、
家庭または実験室内で実施可能で、低分子蛋白について
の本質的に即座の試験結果を出す迅速かつ正確で再現性
があり信頼できる試験方法が達成される。
本発明によりもたらされる利点を得るためには、二指示
試薬組成物が指示薬色素を適当な組み合わせで含んでい
ることが必須である。単一の指示薬色素を用いる先行技
術の試験及び現在商業的に利用可能な測定法とは対照的
に、それぞれが本質的に同一の変色ｐＨ範囲を有し、い
ずれも同一の変色を受けない二つの指示薬色素を組み込
むことによって、蛋白との相互作用で生じる視覚及び機
器による色の分解度及び識別が改良される。したがって
、蛋白試験の感度、特に比較的低い蛋白濃度における感
度が増大する。
試薬組成物が指示薬色素を適当な組み合わせで含んでい
ることが必須である。単一の指示薬色素を用いる先行技
術の試験及び現在商業的に利用可能な測定法とは対照的
に、それぞれが本質的に同一の変色ｐＨ範囲を有し、い
ずれも同一の変色を受けない二つの指示薬色素を組み込
むことによって、蛋白との相互作用で生じる視覚及び機
器による色の分解度及び識別が改良される。したがって
、蛋白試験の感度、特に比較的低い蛋白濃度における感
度が増大する。
本発明の方法は、先に述べた「蛋白誤差」現象を利用す
る。しかし、二つの指示薬色素を二指示試薬組成物に組
み込むと、調整したｐ Ｈでの試験試料中の利用できる
蛋白を求めて二つの指示薬色素間の競合的相互作用の原
理が誘発される。先に述ベたように、ｐＨ指示薬色素が
蛋白と相互作用すると、色素の目に見えるｐＫａが変更
され、いわゆる「蛋白誤差」を起こしながら変色が起き
る。しかし、それぞれがほぼ同一の変色ｐＨ範囲を有す
る二つの指示薬色素を用いると、二つの変色が同時に観
察される。二指水薬色素の相対量を、各色素が蛋白と相
互作用する能力に関連して、かつ実際の変色及び各色素
の変色の強さとに関連して、調整することにより、より
際ｆｆっな発色が可能になり、蛋白と相互反応した際の
色の分解度及び識別が改良され、したがって試験の感度
も増大される。
る。しかし、二つの指示薬色素を二指示試薬組成物に組
み込むと、調整したｐ Ｈでの試験試料中の利用できる
蛋白を求めて二つの指示薬色素間の競合的相互作用の原
理が誘発される。先に述ベたように、ｐＨ指示薬色素が
蛋白と相互作用すると、色素の目に見えるｐＫａが変更
され、いわゆる「蛋白誤差」を起こしながら変色が起き
る。しかし、それぞれがほぼ同一の変色ｐＨ範囲を有す
る二つの指示薬色素を用いると、二つの変色が同時に観
察される。二指水薬色素の相対量を、各色素が蛋白と相
互作用する能力に関連して、かつ実際の変色及び各色素
の変色の強さとに関連して、調整することにより、より
際ｆｆっな発色が可能になり、蛋白と相互反応した際の
色の分解度及び識別が改良され、したがって試験の感度
も増大される。
一般に、基本的必要条件が満たされれば、いがなる二つ
のｐＨ指示薬色素をも本発明の方法に利用することがで
きる。先ず、各色素が、蛋白と相互作用し、その相互作
用に反応して検出及び測定可能な変色を受けることがで
きることが最も重要である。二指示試薬組成物に利用さ
れる指示薬色素は、試験試料中の非蛋白成分とのいがな
る競合する化学的または物理的相互作用に対抗して、蛋
白と優先的に反応しなければならない。非蛋白成分との
感知できる程度のいかなる競合的相互作用も、試験試料
中の蛋白の有無及び量に関しての誤った試験結果に至る
可能性がある。例えば、指示薬色素を適切に緩衝化する
と、試験試料が緩衝剤の効果を越えるほどアルカリ性で
あるとき以外のすべての場合に、ｐＨ変化が原因で変色
が発生する可能性を払拭する。
のｐＨ指示薬色素をも本発明の方法に利用することがで
きる。先ず、各色素が、蛋白と相互作用し、その相互作
用に反応して検出及び測定可能な変色を受けることがで
きることが最も重要である。二指示試薬組成物に利用さ
れる指示薬色素は、試験試料中の非蛋白成分とのいがな
る競合する化学的または物理的相互作用に対抗して、蛋
白と優先的に反応しなければならない。非蛋白成分との
感知できる程度のいかなる競合的相互作用も、試験試料
中の蛋白の有無及び量に関しての誤った試験結果に至る
可能性がある。例えば、指示薬色素を適切に緩衝化する
と、試験試料が緩衝剤の効果を越えるほどアルカリ性で
あるとき以外のすべての場合に、ｐＨ変化が原因で変色
が発生する可能性を払拭する。
さらに、各色素が、蛋白と相互作用するための比較的類
似した親和力を有することが重要である。一方の色素が
もう一方の色素の約１０倍から１５倍以上の対蛋白の親
和力を有する場合、一方の色素と蛋白との優先的相互作
用が試料中の蛋白濃度と正確に相関しない変色を発生さ
せることから、誤った試験結果が得られる可能性がある
ことが発見されている。もう一方の色素が蛋白と効果的
に相互作用することができないと、第一の色素のみが蛋
白相互作用に応答して変色を受けることがら、高過ぎて
誤りであるか、または低過ぎて誤りである結果に至るこ
とかあり、この変色は、第二の色素と試験試料中に存在
する蛋白との相互作用に応答して発生ずる第二の変色に
よって平衡化及び修正されることはない。
似した親和力を有することが重要である。一方の色素が
もう一方の色素の約１０倍から１５倍以上の対蛋白の親
和力を有する場合、一方の色素と蛋白との優先的相互作
用が試料中の蛋白濃度と正確に相関しない変色を発生さ
せることから、誤った試験結果が得られる可能性がある
ことが発見されている。もう一方の色素が蛋白と効果的
に相互作用することができないと、第一の色素のみが蛋
白相互作用に応答して変色を受けることがら、高過ぎて
誤りであるか、または低過ぎて誤りである結果に至るこ
とかあり、この変色は、第二の色素と試験試料中に存在
する蛋白との相互作用に応答して発生ずる第二の変色に
よって平衡化及び修正されることはない。
第二に、二指示試薬組成物に用いられる各指示薬色素は
、はぼ同じｐＨ範囲で変色を受けなければならない。通
常は、二つの色素間で約（１，５ｐＨ単位までの変色ｐ
Ｈ範囲の差異は許容できる。しかし、本発明の利点を最
大に利用するには、二つの色素間の変色ｐＨ範囲の差異
は、約０．２〜０．３ｐＨ単位に制限することが好まし
い。色素結合法では変色はｐＨ変化が原因ではなく蛋白
との相互作用が原因で発生することを保証するため指示
薬色素が一定のｐＨ１通常は色素の変色ｐＨ範囲のわず
かに下に維持されることから、同等またはほぼ同等な変
色ｐＨ範囲が要求される。本発明の方法によると、各色
素は、その最大限の変色が示され、したがって色の分解
度を相当に改良し、試験感度を大幅に増大すべく、色素
が変色するｐＨ範囲よりわずかに低いｐＨ値に緩衝化さ
れる。したがって、二指示試薬組成物全体についての変
色を最大限にするために、二指示薬色素は、はぼ同等の
ｐＨ範囲で変色を受けなければならない。
、はぼ同じｐＨ範囲で変色を受けなければならない。通
常は、二つの色素間で約（１，５ｐＨ単位までの変色ｐ
Ｈ範囲の差異は許容できる。しかし、本発明の利点を最
大に利用するには、二つの色素間の変色ｐＨ範囲の差異
は、約０．２〜０．３ｐＨ単位に制限することが好まし
い。色素結合法では変色はｐＨ変化が原因ではなく蛋白
との相互作用が原因で発生することを保証するため指示
薬色素が一定のｐＨ１通常は色素の変色ｐＨ範囲のわず
かに下に維持されることから、同等またはほぼ同等な変
色ｐＨ範囲が要求される。本発明の方法によると、各色
素は、その最大限の変色が示され、したがって色の分解
度を相当に改良し、試験感度を大幅に増大すべく、色素
が変色するｐＨ範囲よりわずかに低いｐＨ値に緩衝化さ
れる。したがって、二指示試薬組成物全体についての変
色を最大限にするために、二指示薬色素は、はぼ同等の
ｐＨ範囲で変色を受けなければならない。
最後に、二指示試薬組成物において用いられる色素は、
相互に干渉し合わない変色を受けなければならない。例
えば、各色素が、比較的弱い色彩からより強烈な色彩へ
と変色を受ける場合、色の分解度の改良及び試験感度の
増大による利点は無効または最小限になることがある。
相互に干渉し合わない変色を受けなければならない。例
えば、各色素が、比較的弱い色彩からより強烈な色彩へ
と変色を受ける場合、色の分解度の改良及び試験感度の
増大による利点は無効または最小限になることがある。
同様に、本発明により提供される利点はまた、第一の色
素が第二の色素本来の色に変色し、第二の色素が第一の
色素本来の色に変色する状況においても、最小限になる
かまたは無効になる。例えば、一定ｐＨにおいて、蛋白
との相互作用に先立ち、第一の色素が赤色で、第二の色
素が無色であるとし：試験試料中の蛋白との相互作用に
より、第一の色素が赤から無色への変色を受け、第二の
色素が無色から赤への変色を受ける場合、色の分解度及
び試験感度の改良による利点は、その試験が視覚的また
は機器によって観察されているにかかわらず、減少する
かまたは無効になる。したがって、本発明の利点を最大
限に利用するには、二指示試薬組成物において用いられ
る色素は、第一の色素が比較的強烈な色彩からより弱い
色彩に変色し、第二の色素が第一の色素のより弱い色彩
とは異なる比較的弱い色彩から、第一の色素の比較的強
烈な色彩とは異なるより強烈な色彩に変色するごとく組
み合わせて選択される。
素が第二の色素本来の色に変色し、第二の色素が第一の
色素本来の色に変色する状況においても、最小限になる
かまたは無効になる。例えば、一定ｐＨにおいて、蛋白
との相互作用に先立ち、第一の色素が赤色で、第二の色
素が無色であるとし：試験試料中の蛋白との相互作用に
より、第一の色素が赤から無色への変色を受け、第二の
色素が無色から赤への変色を受ける場合、色の分解度及
び試験感度の改良による利点は、その試験が視覚的また
は機器によって観察されているにかかわらず、減少する
かまたは無効になる。したがって、本発明の利点を最大
限に利用するには、二指示試薬組成物において用いられ
る色素は、第一の色素が比較的強烈な色彩からより弱い
色彩に変色し、第二の色素が第一の色素のより弱い色彩
とは異なる比較的弱い色彩から、第一の色素の比較的強
烈な色彩とは異なるより強烈な色彩に変色するごとく組
み合わせて選択される。
二指示試薬組成物の画色素が、蛋白と相互作用してほぼ
同等のｐＨ範囲で充分かつ対照の著しい変色を受ける能
力を有するなら、いがなるｐＨ指示薬色素も本発明の方
法において使用することが可能であることが分かってい
る。いくつかの化学的及び物理的パラメータ、例えば蛋
白と相互作用する能力、変色の強さ及び色素間の化学的
互換性に依存して、二指示試薬組成物中の第一の指示薬
色素と試薬組成物の第二の指示薬色素との割合は、はぼ
５：ｌから１：５、優先的には、はぼ３：１から１：３
の範囲であることができる。二指示試薬組成物中の第一
の指示薬色素と第二の指示薬色素との正確な割合は、最
大の視覚的色分鮮度及び最犬の感度を有する蛋白試験を
行なうべく、試験キットを設計する当業者によって決定
されることができる。本発明の一指示試薬組成物におい
て用いられる指示薬色素は、その分野の当業者には周知
である方法で調製することができる。そのうえ、本発明
の方法において利用できるいくつかの指示薬色素は、現
在市販されている周知の酸塩基指示薬色素である。
同等のｐＨ範囲で充分かつ対照の著しい変色を受ける能
力を有するなら、いがなるｐＨ指示薬色素も本発明の方
法において使用することが可能であることが分かってい
る。いくつかの化学的及び物理的パラメータ、例えば蛋
白と相互作用する能力、変色の強さ及び色素間の化学的
互換性に依存して、二指示試薬組成物中の第一の指示薬
色素と試薬組成物の第二の指示薬色素との割合は、はぼ
５：ｌから１：５、優先的には、はぼ３：１から１：３
の範囲であることができる。二指示試薬組成物中の第一
の指示薬色素と第二の指示薬色素との正確な割合は、最
大の視覚的色分鮮度及び最犬の感度を有する蛋白試験を
行なうべく、試験キットを設計する当業者によって決定
されることができる。本発明の一指示試薬組成物におい
て用いられる指示薬色素は、その分野の当業者には周知
である方法で調製することができる。そのうえ、本発明
の方法において利用できるいくつかの指示薬色素は、現
在市販されている周知の酸塩基指示薬色素である。
上述したとおりの指示薬色素の組み合わせが、尿または
その伯の液体試験試料中の蛋白の有無及び／または半定
量濃度を測定する改良方法において指示試薬組成物とし
て利用される。本発明の指示試薬組成物は、蛋白と相互
作用した結果、「蛋白誤差」現象により視覚及び／また
は機器により識別可能かつ測定可能な変色を起こすこと
が示されている。しかし、色素の組み合わせに加え、本
発明の二指示試薬組成物は、試験試料中の蛋白の有無及
び／または半定量濃度を正確に測定ずべ（、色素がｐＨ
変化の結果として変色するのではなく、蛋白との接触及
び相互作用の結果とじて変色するよう、充分な量の緩衝
剤を必要とすることがありうる。
その伯の液体試験試料中の蛋白の有無及び／または半定
量濃度を測定する改良方法において指示試薬組成物とし
て利用される。本発明の指示試薬組成物は、蛋白と相互
作用した結果、「蛋白誤差」現象により視覚及び／また
は機器により識別可能かつ測定可能な変色を起こすこと
が示されている。しかし、色素の組み合わせに加え、本
発明の二指示試薬組成物は、試験試料中の蛋白の有無及
び／または半定量濃度を正確に測定ずべ（、色素がｐＨ
変化の結果として変色するのではなく、蛋白との接触及
び相互作用の結果とじて変色するよう、充分な量の緩衝
剤を必要とすることがありうる。
さらに、様々な種類の公知の緩衝剤のいずれをも、本発
明の二指示試薬組成物に使用することができることが証
明されている。緩衝剤の機能は、蛋白の存在が原因の指
示薬における所望の変色を起こさせ、蛋白含有試験試料
のｐＨ変化による変色を本質的に除去すべく、試薬組成
物をほぼ一定のｐＨに維持することである。その結果、
二指示試薬組成物に組み込まれる緩衝剤の量は、試験試
料の性質に依存する。緩衝剤の量は、通常、約ｉｏｏミ
ノモル（ｍＭ）から約５００ミリモルの範囲であるが、
特定の場合には、この範囲より上または下にすることが
できる。使用される緩衝剤の性質は、二指示試薬組成物
に組み込まれた指示薬に依存し、それに応じて変化する
。しかし、最高の結果を得るためには、試薬組成物のｐ
Ｈは、一般に、試薬組成物の二指水薬色素が変色を受け
るｐＨ範囲よりほんのわずか低いｐＨ値に維持されるべ
きであることが分かっている。試薬組成物の特定の指示
薬色素について適当な緩衝ｐＨ値を決定し、二指示試薬
組成物において使用することができる特定の緩衝剤を決
定する方法は、Ｋｅｓｔｏｎの米国特許箱３．４８５５
８７号に記載されている。
明の二指示試薬組成物に使用することができることが証
明されている。緩衝剤の機能は、蛋白の存在が原因の指
示薬における所望の変色を起こさせ、蛋白含有試験試料
のｐＨ変化による変色を本質的に除去すべく、試薬組成
物をほぼ一定のｐＨに維持することである。その結果、
二指示試薬組成物に組み込まれる緩衝剤の量は、試験試
料の性質に依存する。緩衝剤の量は、通常、約ｉｏｏミ
ノモル（ｍＭ）から約５００ミリモルの範囲であるが、
特定の場合には、この範囲より上または下にすることが
できる。使用される緩衝剤の性質は、二指示試薬組成物
に組み込まれた指示薬に依存し、それに応じて変化する
。しかし、最高の結果を得るためには、試薬組成物のｐ
Ｈは、一般に、試薬組成物の二指水薬色素が変色を受け
るｐＨ範囲よりほんのわずか低いｐＨ値に維持されるべ
きであることが分かっている。試薬組成物の特定の指示
薬色素について適当な緩衝ｐＨ値を決定し、二指示試薬
組成物において使用することができる特定の緩衝剤を決
定する方法は、Ｋｅｓｔｏｎの米国特許箱３．４８５５
８７号に記載されている。
木工指示試薬組成物においては、緩衝剤の使用が好まし
いが、緩衝剤はすべての場合に必須であるとは限らない
。例えば、特別な場合には、試験試料が二指示試薬組成
物と接触する前に、尿またはその他の試験試料に緩衝剤
を添加することが望ましいかもしれない。また、試験試
料は、組成物を一定のｐＨに維持するために適切な種類
の緩衝剤を適切な量ですでに含有していてもよく、ある
いは、二指水薬色素組成物は、ｐＨ変化に対して無反応
であるかもしれない。そのような場合には、二指水薬色
素は、二指示試薬組成物における唯一の活性成分である
ことができる。しかし、指示薬色素及び／または緩衝剤
の性質及び機能を物質的に変化させず、蛋白試験に緩衝
しない任意の成分、例えば界面活性剤もまた、二指示試
薬組成物中に包含せしめることができることは理解され
るべきである。同様に、その他のこのような非必須成分
には、非反応性バックグラウンド色素、ポリマ及び可塑
剤がある。
いが、緩衝剤はすべての場合に必須であるとは限らない
。例えば、特別な場合には、試験試料が二指示試薬組成
物と接触する前に、尿またはその他の試験試料に緩衝剤
を添加することが望ましいかもしれない。また、試験試
料は、組成物を一定のｐＨに維持するために適切な種類
の緩衝剤を適切な量ですでに含有していてもよく、ある
いは、二指水薬色素組成物は、ｐＨ変化に対して無反応
であるかもしれない。そのような場合には、二指水薬色
素は、二指示試薬組成物における唯一の活性成分である
ことができる。しかし、指示薬色素及び／または緩衝剤
の性質及び機能を物質的に変化させず、蛋白試験に緩衝
しない任意の成分、例えば界面活性剤もまた、二指示試
薬組成物中に包含せしめることができることは理解され
るべきである。同様に、その他のこのような非必須成分
には、非反応性バックグラウンド色素、ポリマ及び可塑
剤がある。
尿またはその他の試験試料に接触した際、二指示試薬組
成物の変色は蛋白の存在を表示する。さらに、変色の強
さ及び程度は、試験試料により発生した色を既知の濃度
の蛋白を有する溶液により発生した色と比較しまたは相
関させることで、試験試料中の蛋白の半定量濃度を測定
するために使用することができる。本発明の重要な特徴
によると、二指示試薬組成物は、試験試料中の蛋白の量
が分光光度計または比色計などの測色機器を使用しなく
とも測定及び正確に決定されつるべ（、充分に分解及び
識別された変色を提供するということが証明されている
。しかし、所望なら、そのような潤色機器を使用して試
験試料と既知のアルブミン濃度を有する溶液との間の色
の程度及び強さの差異を測定することができる。
成物の変色は蛋白の存在を表示する。さらに、変色の強
さ及び程度は、試験試料により発生した色を既知の濃度
の蛋白を有する溶液により発生した色と比較しまたは相
関させることで、試験試料中の蛋白の半定量濃度を測定
するために使用することができる。本発明の重要な特徴
によると、二指示試薬組成物は、試験試料中の蛋白の量
が分光光度計または比色計などの測色機器を使用しなく
とも測定及び正確に決定されつるべ（、充分に分解及び
識別された変色を提供するということが証明されている
。しかし、所望なら、そのような潤色機器を使用して試
験試料と既知のアルブミン濃度を有する溶液との間の色
の程度及び強さの差異を測定することができる。
したがって、適当に緩衝化した二指示試薬組成物を利用
する蛋白試験は、試験の精度及び信頼性を向上し、さら
に試験に対する医師の信頼をも増大する。そのうえ、実
験室内の訓練された医師または技術者とは異なって、未
熟な患者により家庭で実施される蛋白についての尿試験
の件数を考慮すると、尿中の蛋白含有量についての正確
で信頼できる半定量試験方法を提供することが必要であ
る。
する蛋白試験は、試験の精度及び信頼性を向上し、さら
に試験に対する医師の信頼をも増大する。そのうえ、実
験室内の訓練された医師または技術者とは異なって、未
熟な患者により家庭で実施される蛋白についての尿試験
の件数を考慮すると、尿中の蛋白含有量についての正確
で信頼できる半定量試験方法を提供することが必要であ
る。
本発明の重要な特徴にしたがって、表■では、本発明の
二指示試薬組成物中で蛋白指示薬色素として用いること
ができる代表的なｐＨ指示薬色素をノスｌ−している。
二指示試薬組成物中で蛋白指示薬色素として用いること
ができる代表的なｐＨ指示薬色素をノスｌ−している。
表■には、現在蛋白試験に使用されている指示薬色素に
加え、約２．８から５．２のｐＨ範囲で変色を受けるそ
の他いくつかの適当な指示薬色素をも含めている。
加え、約２．８から５．２のｐＨ範囲で変色を受けるそ
の他いくつかの適当な指示薬色素をも含めている。
表↓
ブロモクロロフェ
ノールブルー（ＢＣＰＢＩ 黄−緑
ヨードフェノール
ブルー（ＩＰＢ） 黄−青
ローズベンガル（ＲＢ） 無色−ピンクブロモフェノ
ール ブルー（ＢＰＢＩ 黄−青 メチルオレンジ（ＭＯ）赤−黄 テトラブロモフェ ノールブルー（ＴＢＰＢＩ 黄−青 ブロモビロガロール レッド（ＢＰＧＲＩ 黄−赤 ブロモクレゾール グリーン（ＢＣＧＩ 黄−緑 テトラブロモフェ ノールフタレインエ チルエステル（ＴＲＥＥ） 黄−緑 ブロモフェノール レッド（ＢＰＲＩ 黄−赤 ４．７ＨＬ
Ｏ３０１” 無色−緑 ４．７ブロモクレ
ゾール パープル（ＢＣＰ） 黄−紫 ５．２”Ｉ
−ＩＬＯ３０１は、化学名８−アミノ−１）−アザ−６
チアー［５，１２−ナックセンキノン］を有する四環式
色素である。
ール ブルー（ＢＰＢＩ 黄−青 メチルオレンジ（ＭＯ）赤−黄 テトラブロモフェ ノールブルー（ＴＢＰＢＩ 黄−青 ブロモビロガロール レッド（ＢＰＧＲＩ 黄−赤 ブロモクレゾール グリーン（ＢＣＧＩ 黄−緑 テトラブロモフェ ノールフタレインエ チルエステル（ＴＲＥＥ） 黄−緑 ブロモフェノール レッド（ＢＰＲＩ 黄−赤 ４．７ＨＬ
Ｏ３０１” 無色−緑 ４．７ブロモクレ
ゾール パープル（ＢＣＰ） 黄−紫 ５．２”Ｉ
−ＩＬＯ３０１は、化学名８−アミノ−１）−アザ−６
チアー［５，１２−ナックセンキノン］を有する四環式
色素である。
表■の蛋白指示薬色素の一覧は、酸性ｐＨで変色を受け
る色素を含む部分的−覧である。一般に、蛋白について
の試験は、指示薬色素は低い酸性ｐＨ値でより強力に蛋
白と相互作用することができるという理由から、酸性ｐ
Ｈにおいて、酸性ｐＨで変色を受ける指示薬色素を用い
て実施されてきた。低いｐＨ値での指示薬色素と蛋白間
の相互作用は、正荷電力ヂオン蛋自分子と負荷電アニオ
ン指示薬色素分子間の強力な引きっけが原因で、さらに
それに加えて、酸性状態が部分的に蛋白を変性させ、そ
の結果指示薬色素と相互作用する蛋白の能力を増強する
べく作用することが原因で、増大する。
る色素を含む部分的−覧である。一般に、蛋白について
の試験は、指示薬色素は低い酸性ｐＨ値でより強力に蛋
白と相互作用することができるという理由から、酸性ｐ
Ｈにおいて、酸性ｐＨで変色を受ける指示薬色素を用い
て実施されてきた。低いｐＨ値での指示薬色素と蛋白間
の相互作用は、正荷電力ヂオン蛋自分子と負荷電アニオ
ン指示薬色素分子間の強力な引きっけが原因で、さらに
それに加えて、酸性状態が部分的に蛋白を変性させ、そ
の結果指示薬色素と相互作用する蛋白の能力を増強する
べく作用することが原因で、増大する。
しかし、蛋白と相互作用し約５．２以上のｐＨ値で変色
を受けることができるその他の指示薬色素もまた、本発
明の方法において用いることができることは理解される
べきである。
を受けることができるその他の指示薬色素もまた、本発
明の方法において用いることができることは理解される
べきである。
したがって、酸性または中性からアルカリ性のいずれか
のｐＨ範囲で変色を受けることができるその他の指示薬
色素を組み合わせて、色の分解度及び識別の改良ならび
に試験感度の増大を提供する二指示試薬組成物を調製す
ることもできる。しかし、二指示試薬組成物に含まれる
指示薬色素は蛋白と相互作用することができなくてはな
らず、二つの色素はほぼ同等のｐＨ範囲内で変色を受け
なければならず、そして色素は充分に差異が明らかな変
色を受けなければならない。本発明の方法において使用
することができ、下は０．１５から」二は１４までの範
囲の変色ｐＨを有するその他のｐＨ指示薬色素の例は、
Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｈ Ｉｎｄｅｘ、 Ｎ１ｎｔｈ Ｅｄ
ｉｔｊｏｎのＭＩＳＣ−９４及びＭＴＳＣ−９５頁（１
９７６年）、及びＨａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ、 ５１ｓｔＥｄｉ
ｔｊｏｎのＤ−＋０６〜Ｄ−１０９頁（１９７０〜１９
７１年）に掲載されている。それに加え、その他いくつ
かの適当なｐＨ指示薬色素が数多くの製造元及び販売元
から市販されている。
のｐＨ範囲で変色を受けることができるその他の指示薬
色素を組み合わせて、色の分解度及び識別の改良ならび
に試験感度の増大を提供する二指示試薬組成物を調製す
ることもできる。しかし、二指示試薬組成物に含まれる
指示薬色素は蛋白と相互作用することができなくてはな
らず、二つの色素はほぼ同等のｐＨ範囲内で変色を受け
なければならず、そして色素は充分に差異が明らかな変
色を受けなければならない。本発明の方法において使用
することができ、下は０．１５から」二は１４までの範
囲の変色ｐＨを有するその他のｐＨ指示薬色素の例は、
Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｈ Ｉｎｄｅｘ、 Ｎ１ｎｔｈ Ｅｄ
ｉｔｊｏｎのＭＩＳＣ−９４及びＭＴＳＣ−９５頁（１
９７６年）、及びＨａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ、 ５１ｓｔＥｄｉ
ｔｊｏｎのＤ−＋０６〜Ｄ−１０９頁（１９７０〜１９
７１年）に掲載されている。それに加え、その他いくつ
かの適当なｐＨ指示薬色素が数多くの製造元及び販売元
から市販されている。
本発明の重要な特徴によると、いくつかの適当な組み合
わせの指示薬が、表■にリストしている指示薬から想定
される。例えば、メチルオレンジ（ＭＯ）は、ブロモク
ロロフェノールブルー（ＢＣＰＢ）、ブロモフェノール
ブルー（ＢＰＢ） 、テトラブロモフェノールブルー（
ＴＢＰＢ）またはヨードフェノールブルー（ＩＰＢ）と
組み合わされ、色の分解度を向上し、その結果試験の感
度を増大する変色を発生することができる。それぞれの
場合において、蛋白との相互作用以前には、メチルオレ
ンジ（ＭＯ）の強い赤色がきわたっている。しかし、蛋
白との相互作用及び色素の変色の後は、結果的なメチル
オレンジ（ＭＯ）の黄色は、第二の色素のより強烈な緑
または青に圧倒される。さらに、これら第二の指示薬色
素（ＢＣＰＢ 、 ＢＰＢ 、 ＴＢＰＢ及びＩＰＢ）
とメチルオレンジ（ＭＯ）のそれぞれは蛋白と相互作用
することができ、各第二の指示薬色素はメチルオレンジ
（ＭＯ）にとっての変色ｐＨと同等またはほぼ同等であ
る近似の変色ｐＨを有する。したがって、ローズベンガ
ル（ＲＢ）は、メチルオレンジ（ＭＯ）と組み合わせて
二指示試薬組成物を調製するには適当な指示薬色素では
ないかもしれないことに注意すべきである。ローズベン
ガル（ＲＢ）は蛋白と相互作用することができ、メチル
オレンジ（ＭＯ）にとっての変色ｐＨに近似した変色ｐ
Ｈを有するが、無色からピンクへのローズベンガル（Ｒ
Ｂ）の変色は、赤から黄へのメチルオレンジの変色に類
似するのに充分であることから、色の分解度の改良及び
その結果の試験感度の増大という利点が達成されないか
もしれない。
わせの指示薬が、表■にリストしている指示薬から想定
される。例えば、メチルオレンジ（ＭＯ）は、ブロモク
ロロフェノールブルー（ＢＣＰＢ）、ブロモフェノール
ブルー（ＢＰＢ） 、テトラブロモフェノールブルー（
ＴＢＰＢ）またはヨードフェノールブルー（ＩＰＢ）と
組み合わされ、色の分解度を向上し、その結果試験の感
度を増大する変色を発生することができる。それぞれの
場合において、蛋白との相互作用以前には、メチルオレ
ンジ（ＭＯ）の強い赤色がきわたっている。しかし、蛋
白との相互作用及び色素の変色の後は、結果的なメチル
オレンジ（ＭＯ）の黄色は、第二の色素のより強烈な緑
または青に圧倒される。さらに、これら第二の指示薬色
素（ＢＣＰＢ 、 ＢＰＢ 、 ＴＢＰＢ及びＩＰＢ）
とメチルオレンジ（ＭＯ）のそれぞれは蛋白と相互作用
することができ、各第二の指示薬色素はメチルオレンジ
（ＭＯ）にとっての変色ｐＨと同等またはほぼ同等であ
る近似の変色ｐＨを有する。したがって、ローズベンガ
ル（ＲＢ）は、メチルオレンジ（ＭＯ）と組み合わせて
二指示試薬組成物を調製するには適当な指示薬色素では
ないかもしれないことに注意すべきである。ローズベン
ガル（ＲＢ）は蛋白と相互作用することができ、メチル
オレンジ（ＭＯ）にとっての変色ｐＨに近似した変色ｐ
Ｈを有するが、無色からピンクへのローズベンガル（Ｒ
Ｂ）の変色は、赤から黄へのメチルオレンジの変色に類
似するのに充分であることから、色の分解度の改良及び
その結果の試験感度の増大という利点が達成されないか
もしれない。
別の例においては、黄から赤への変色を有するブロモフ
ェノールレッド（ＢＰＲ）は、黄から緑への変色を有す
るブロモクレゾールグリーン（ＢＣＧＩ と組み合わせ
ると、試験試料中の蛋白含有量の増加に対応して黄から
緑そして紫へと連続する変色を発生する。同様に、黄か
ら赤への変色を有するブロモフェノールレッド（ＢＰＲ
）は、無色から緑への変色を有する８−アミノ−１）−
アザ−６−チア−［５，１２ナフタセンキノン］ （
ＨＬＯ３０１）と組み合わせると、試験試料中の蛋白含
有量の増加に対応して黄から橙そして紫へと連続する変
色を発生ずる。
ェノールレッド（ＢＰＲ）は、黄から緑への変色を有す
るブロモクレゾールグリーン（ＢＣＧＩ と組み合わせ
ると、試験試料中の蛋白含有量の増加に対応して黄から
緑そして紫へと連続する変色を発生する。同様に、黄か
ら赤への変色を有するブロモフェノールレッド（ＢＰＲ
）は、無色から緑への変色を有する８−アミノ−１）−
アザ−６−チア−［５，１２ナフタセンキノン］ （
ＨＬＯ３０１）と組み合わせると、試験試料中の蛋白含
有量の増加に対応して黄から橙そして紫へと連続する変
色を発生ずる。
本発明の方法により達成される新規で予期せぬ結果を証
明するために、ブロモフェノールブルーＢＰＢ） とメ
チルオレンジ（ＭＯ）の指示薬を含む二指示試薬組成物
を調製し、試験試料の蛋白総合有量についての水性液相
試験に使用した。ブロモフェノールブルー（ＢＰＢＩ及
びメチルオレンジ（１）１０１の双方とも、蛋白と相互
作用し、はぼ同一のｐＨ３で変色を受ける。ブロモフェ
ノールブルー（ＢＰＢ）は黄から濃青へと変色し、メチ
ルオレンジ（ＭＯ）は濃赤から黄へと変色する。適当な
緩衝剤とともに適量のブロモフェノールブルー（ＢＰＢ
）及びメチルオレンジ（ＭＯ）を含む二指示試薬組成物
は、標準蛋白溶液と接触すると表ＩＩに要約されている
変色を起こした。
明するために、ブロモフェノールブルーＢＰＢ） とメ
チルオレンジ（ＭＯ）の指示薬を含む二指示試薬組成物
を調製し、試験試料の蛋白総合有量についての水性液相
試験に使用した。ブロモフェノールブルー（ＢＰＢＩ及
びメチルオレンジ（１）１０１の双方とも、蛋白と相互
作用し、はぼ同一のｐＨ３で変色を受ける。ブロモフェ
ノールブルー（ＢＰＢ）は黄から濃青へと変色し、メチ
ルオレンジ（ＭＯ）は濃赤から黄へと変色する。適当な
緩衝剤とともに適量のブロモフェノールブルー（ＢＰＢ
）及びメチルオレンジ（ＭＯ）を含む二指示試薬組成物
は、標準蛋白溶液と接触すると表ＩＩに要約されている
変色を起こした。
ＬＬ
標準蛋白溶液（ｐＨ＝３．２）と相互作用した際のメチ
ルオレンジ／ブロモフェノールブルー二指示試薬組成物
の変色 標準蛋白溶液 の濃度（ｍｄＬ） 跣叛立九左進０ （ブ
ランク） 赤またはオレンジ１０（痕跡量）
黄または 非常に淡い緑 ３０ 淡緑 ６０ 青緑 １００青 ３００ａ青 本発明の重要な特徴により、メチルオレンジ／ブロモフ
ェノールブルーの二指示試薬組成物を使用することによ
って達成される色の分解度の改善により、０、ｌ０１２
０及び３０ｍｇ／ｄＬの蛋白濃度の間での検出及び識別
が可能になる。対照的に、単一の指示薬色素を用いた先
行技術の方法はいずれも、０から約１５ｍｇ／ｄＬの範
囲では蛋白値を識別することができず、０から約３０ｍ
ｇ／ｄＬの範囲の蛋白値については最低限の識別しか行
うことができない。しかし、本発明によると、試験感度
の改善が、特に約３０ｍｇ／ｄＬ及びそれ以下の試験試
料の蛋白値において達成され、最終的に、より正確で意
味のある試験結果が提供される。
ルオレンジ／ブロモフェノールブルー二指示試薬組成物
の変色 標準蛋白溶液 の濃度（ｍｄＬ） 跣叛立九左進０ （ブ
ランク） 赤またはオレンジ１０（痕跡量）
黄または 非常に淡い緑 ３０ 淡緑 ６０ 青緑 １００青 ３００ａ青 本発明の重要な特徴により、メチルオレンジ／ブロモフ
ェノールブルーの二指示試薬組成物を使用することによ
って達成される色の分解度の改善により、０、ｌ０１２
０及び３０ｍｇ／ｄＬの蛋白濃度の間での検出及び識別
が可能になる。対照的に、単一の指示薬色素を用いた先
行技術の方法はいずれも、０から約１５ｍｇ／ｄＬの範
囲では蛋白値を識別することができず、０から約３０ｍ
ｇ／ｄＬの範囲の蛋白値については最低限の識別しか行
うことができない。しかし、本発明によると、試験感度
の改善が、特に約３０ｍｇ／ｄＬ及びそれ以下の試験試
料の蛋白値において達成され、最終的に、より正確で意
味のある試験結果が提供される。
蛋白総合有量についての液相試験を実施するには、最初
に二指示試薬組成物を製造する。例えば、ある二指示試
薬組成物の製造として、ブロモフェノールブルー（ＢＰ
Ｂ）０．６０ｇ （０，９０ミリモル）及びメチルオレ
ンジ０．６０ｇ （１，８３ミリモル）を充分な量の
１００ｍＭクエン酸緩衝液に溶かずと、ｐＨ３，２に緩
衝化されたブロモフェノールブルー（ＢＰＢＩ につい
て０．９ｍＭであり、メチルオレンジについては１．８
３ｍＭである二指示試薬水性組成物１リットルが得られ
る。尿試料中の蛋白の有無及び濃度は、該指示試薬組成
物１ｍＬに尿を一滴［約５０μＬ（マイクロリットル）
］滴下することにより測定した。得られた溶液の色は赤
から青に変化し、その結果、約１００ ｍｇ／ｄＬの蛋
白が尿中に存在することが分かった。
に二指示試薬組成物を製造する。例えば、ある二指示試
薬組成物の製造として、ブロモフェノールブルー（ＢＰ
Ｂ）０．６０ｇ （０，９０ミリモル）及びメチルオレ
ンジ０．６０ｇ （１，８３ミリモル）を充分な量の
１００ｍＭクエン酸緩衝液に溶かずと、ｐＨ３，２に緩
衝化されたブロモフェノールブルー（ＢＰＢＩ につい
て０．９ｍＭであり、メチルオレンジについては１．８
３ｍＭである二指示試薬水性組成物１リットルが得られ
る。尿試料中の蛋白の有無及び濃度は、該指示試薬組成
物１ｍＬに尿を一滴［約５０μＬ（マイクロリットル）
］滴下することにより測定した。得られた溶液の色は赤
から青に変化し、その結果、約１００ ｍｇ／ｄＬの蛋
白が尿中に存在することが分かった。
一般的に、蛋白についての水性液相試験では、変色を視
覚及び／または機器により検出及び測定するのに充分な
量の二指示試薬組成物を用いる。
覚及び／または機器により検出及び測定するのに充分な
量の二指示試薬組成物を用いる。
しかし、蛋白以外の試験試料成分との非特異的な相互作
用を実質的に排除すべく、過剰量の二指示試薬組成物の
使用は避けるべきである。通常は、指示試薬組成物中の
色素の総濃度は、約０．５ｍＭから約５ｍＭの範囲であ
れば、視覚及び／または機器により検出可能かつ識別可
能な変色を起こし、蛋白以外の試験試料成分との色素の
相互作用による試験障害を排除または最小限にするには
充分である。本発明の利点を最大限に利用するには、二
指示試薬組成物中の色素の総濃度は約０．５ｍＭから約
２ｍＭの範囲が特に好ましいことが分かっている。その
うえ、上記の例で使用されるクエン酸緩衝液に加えて、
所望のｐＨは、適当な緩衝剤、例えばマロン酸塩、乳酸
塩、トリクロル酢酸塩、スルホサリチル酸塩、酒石酸塩
、リン酸塩、硼酸塩、酢酸塩、ピペラジン−Ｎ、Ｎ’−
ビス（２−ヒトロギシプロパン）スルホン酸（ＰＯＰＳ
Ｏ） 、 Ｎ−２−ヒドロキシエヂルビベラシン−Ｎ°
−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳＩ、３−Ｎ−（ト
リス−ヒドロキシメチル）メチルアミノ２−ヒドロキシ
プロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ） 、、 ２（［トリ
ス−（ヒドロキシメチル）メチルアミノ）エタンスルホ
ン酸（ＴＥＳ）またはこの分野で周知のその他の適当な
緩衝剤を使用することにより、実質的に一定の値に維持
することができることも分かっている。
用を実質的に排除すべく、過剰量の二指示試薬組成物の
使用は避けるべきである。通常は、指示試薬組成物中の
色素の総濃度は、約０．５ｍＭから約５ｍＭの範囲であ
れば、視覚及び／または機器により検出可能かつ識別可
能な変色を起こし、蛋白以外の試験試料成分との色素の
相互作用による試験障害を排除または最小限にするには
充分である。本発明の利点を最大限に利用するには、二
指示試薬組成物中の色素の総濃度は約０．５ｍＭから約
２ｍＭの範囲が特に好ましいことが分かっている。その
うえ、上記の例で使用されるクエン酸緩衝液に加えて、
所望のｐＨは、適当な緩衝剤、例えばマロン酸塩、乳酸
塩、トリクロル酢酸塩、スルホサリチル酸塩、酒石酸塩
、リン酸塩、硼酸塩、酢酸塩、ピペラジン−Ｎ、Ｎ’−
ビス（２−ヒトロギシプロパン）スルホン酸（ＰＯＰＳ
Ｏ） 、 Ｎ−２−ヒドロキシエヂルビベラシン−Ｎ°
−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳＩ、３−Ｎ−（ト
リス−ヒドロキシメチル）メチルアミノ２−ヒドロキシ
プロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ） 、、 ２（［トリ
ス−（ヒドロキシメチル）メチルアミノ）エタンスルホ
ン酸（ＴＥＳ）またはこの分野で周知のその他の適当な
緩衝剤を使用することにより、実質的に一定の値に維持
することができることも分かっている。
さらに、二指示試薬組成物に含まれる二指水薬色素は、
必ずしも同量で存在しなければならないわけではない。
必ずしも同量で存在しなければならないわけではない。
各色素の相対量は、様々なパラメータ、例えば色素の変
色の強さ及び蛋白と相互作用する色素の能力に依存する
。しかし、第一の色素と第二の色素との比率を、約５：
１から約］：５、好ましくは約３＝１から約１＝３の範
囲にすると、本発明の利点が充分に得られることが分か
っている。
色の強さ及び蛋白と相互作用する色素の能力に依存する
。しかし、第一の色素と第二の色素との比率を、約５：
１から約］：５、好ましくは約３＝１から約１＝３の範
囲にすると、本発明の利点が充分に得られることが分か
っている。
そのうえ、本発明の別の重要な特徴によると、既知の蛋
白濃度の溶液から得られた標準色に視覚及び／または機
器にＪ：り比較することが可能であるように、検出可能
かつ識別可能な変色を起こさせるために水性溶媒、二指
示試薬組成物及び尿試料の相対量を変化させ、さらに色
素及び緩衝剤の種類及び量を変化させることにより尿ま
たはその他の液体試験試料中の蛋白の水性半定量試験用
の装置を設計することは、試験装置を製作する当業者の
実験技術の範囲内に充分大る。
白濃度の溶液から得られた標準色に視覚及び／または機
器にＪ：り比較することが可能であるように、検出可能
かつ識別可能な変色を起こさせるために水性溶媒、二指
示試薬組成物及び尿試料の相対量を変化させ、さらに色
素及び緩衝剤の種類及び量を変化させることにより尿ま
たはその他の液体試験試料中の蛋白の水性半定量試験用
の装置を設計することは、試験装置を製作する当業者の
実験技術の範囲内に充分大る。
蛋白の湿式水性試験に使用する他に、二指示試薬組成物
は、蛋白の乾式試験パッド試験に使用することもできる
。二指示試薬組成物を用いる蛋白の乾式試験パッド試験
は、この分野で周知の方法に従って実施される。一般に
、蛋白の試験は、尿またはその他の試験試料を二指示試
薬組成物を含む被検体検出具に接触させることにより実
施される。被検体検出具を試験試料中に浸漬するか、あ
るいは、試験試料を被検体検出具に滴下する方法が利用
できる。被検体検出具の色について起こる変化が蛋白の
存在を表わす。さらに、そのように試験具を設計するこ
とによって、得られる変色を、標準色票と比較して、尿
または試験試料中の蛋白濃度の半定量測定を行なうこと
ができる。
は、蛋白の乾式試験パッド試験に使用することもできる
。二指示試薬組成物を用いる蛋白の乾式試験パッド試験
は、この分野で周知の方法に従って実施される。一般に
、蛋白の試験は、尿またはその他の試験試料を二指示試
薬組成物を含む被検体検出具に接触させることにより実
施される。被検体検出具を試験試料中に浸漬するか、あ
るいは、試験試料を被検体検出具に滴下する方法が利用
できる。被検体検出具の色について起こる変化が蛋白の
存在を表わす。さらに、そのように試験具を設計するこ
とによって、得られる変色を、標準色票と比較して、尿
または試験試料中の蛋白濃度の半定量測定を行なうこと
ができる。
通常、被検体試験具は、単一パッド試験細片（単一の分
析対象物のみの試験用）または複式バット試験細片（複
数の分析対象物の同時分析用）のいずれかとして設計さ
れている試薬含浸型試験細片である。いずれの形態の試
薬含浸型試験細片についても、試験細片は、通常、疎水
性プラスチックで構成された支持細片、つまりハンドル
、及び吸水性または非吸水性キャリヤーマトリックスか
ら成る試薬試験バットを含む。一般に、キャリヤーマト
リックスは、試験試料がマトリックスを通って毛管作用
に応じて移動し、指示試薬組成物に接触して検出可能か
つ測定可能な変色を起こすことを可能にする吸収材料で
ある。
析対象物のみの試験用）または複式バット試験細片（複
数の分析対象物の同時分析用）のいずれかとして設計さ
れている試薬含浸型試験細片である。いずれの形態の試
薬含浸型試験細片についても、試験細片は、通常、疎水
性プラスチックで構成された支持細片、つまりハンドル
、及び吸水性または非吸水性キャリヤーマトリックスか
ら成る試薬試験バットを含む。一般に、キャリヤーマト
リックスは、試験試料がマトリックスを通って毛管作用
に応じて移動し、指示試薬組成物に接触して検出可能か
つ測定可能な変色を起こすことを可能にする吸収材料で
ある。
キャリヤーマトリックスは、化学試薬に関して実質的に
不活性であり、液体試験試料に関して多孔質及び／また
は吸収性である限り、対象の試験を実施するために必要
とされる化学試薬を組み込むことができるいかなる物質
であってもよい。
不活性であり、液体試験試料に関して多孔質及び／また
は吸収性である限り、対象の試験を実施するために必要
とされる化学試薬を組み込むことができるいかなる物質
であってもよい。
［キャリヤーマトリックス」という呼称は、水及びその
他の生理学的流体に対して不溶性であり、かつ水及びそ
の他の生理学的流体に暴露された際に構造上の一体性を
維持する吸水性または非吸水性マトリックスのことを言
う。適当な吸水性マトリックスには、濾紙、スポンジ材
料、セルロス、木材、織布及び不織布などがある。非吸
水性マトリックスには、ガラス繊維、ポリマーフィルム
及び予備成形もしくは微孔質の膜がある。その他適当な
キャリヤーマトリックスには、親水性無機粉末、例えば
シリカゲル、アルミナ、珪藻土など：粘質物；布；親水
性天然高分子材料、特にセルロース系材料、例えばセル
ロースビーズ、及び特に繊維含有紙、例えば濾紙もしく
はクロマトグラフィー紙；合成または変性天然ポリマー
、例えば酢酸セルロース、ポリ塩化ビニル、ポリアクリ
ルアミド、ポリアクリル酸エステル、ポリウレタン、架
橋デキストランもしくはアガロース：ならびにそのよう
なものの架橋または非架橋の水工溶性親水ポリマーがあ
る。疎水性及び非吸収性物質は、本発明のキャリヤーマ
トリックスとして使用するには適していない。キャリヤ
ーマトリックスは、種々の化学組成物または化学組成物
の混合物から成ることができる。マトリックスはまた、
硬度・軟度と合わせた滑らかさ・荒さの点でも変化する
。しかし、あらゆる場合において、マドノックスは、親
水性または吸収性材料を含まなければならない。ハンド
ルは、通常、疎水性材料、例えば酢酸セルロース、ポリ
エチレン、テレフタル酸エステル、ポリカーボネートま
たはポリスチレンから形成され、キャリヤーマトリック
スは、吸水性濾紙または非吸水性ポリマーフィルムから
構成されることがもっとも好ましい。
他の生理学的流体に対して不溶性であり、かつ水及びそ
の他の生理学的流体に暴露された際に構造上の一体性を
維持する吸水性または非吸水性マトリックスのことを言
う。適当な吸水性マトリックスには、濾紙、スポンジ材
料、セルロス、木材、織布及び不織布などがある。非吸
水性マトリックスには、ガラス繊維、ポリマーフィルム
及び予備成形もしくは微孔質の膜がある。その他適当な
キャリヤーマトリックスには、親水性無機粉末、例えば
シリカゲル、アルミナ、珪藻土など：粘質物；布；親水
性天然高分子材料、特にセルロース系材料、例えばセル
ロースビーズ、及び特に繊維含有紙、例えば濾紙もしく
はクロマトグラフィー紙；合成または変性天然ポリマー
、例えば酢酸セルロース、ポリ塩化ビニル、ポリアクリ
ルアミド、ポリアクリル酸エステル、ポリウレタン、架
橋デキストランもしくはアガロース：ならびにそのよう
なものの架橋または非架橋の水工溶性親水ポリマーがあ
る。疎水性及び非吸収性物質は、本発明のキャリヤーマ
トリックスとして使用するには適していない。キャリヤ
ーマトリックスは、種々の化学組成物または化学組成物
の混合物から成ることができる。マトリックスはまた、
硬度・軟度と合わせた滑らかさ・荒さの点でも変化する
。しかし、あらゆる場合において、マドノックスは、親
水性または吸収性材料を含まなければならない。ハンド
ルは、通常、疎水性材料、例えば酢酸セルロース、ポリ
エチレン、テレフタル酸エステル、ポリカーボネートま
たはポリスチレンから形成され、キャリヤーマトリック
スは、吸水性濾紙または非吸水性ポリマーフィルムから
構成されることがもっとも好ましい。
本発明の利点を最大に利用するには、二指示試薬組成物
は、適当なキャリヤーマトリックスに含浸され、試験試
料中の蛋白の試験のための乾式試験細片中で用いられる
。本発明の方法により、家庭または実験室内で実施する
ことができる試験試料中の蛋白の総濃度についての低順
で正確で信頼性が高い試験法が提供される。さらに、本
発明の方法により、試験試料中の低い蛋白濃度の検出、
識別及びホ１）定が可能になり、その結果、試験が臨床
的により有用なものとなる。
は、適当なキャリヤーマトリックスに含浸され、試験試
料中の蛋白の試験のための乾式試験細片中で用いられる
。本発明の方法により、家庭または実験室内で実施する
ことができる試験試料中の蛋白の総濃度についての低順
で正確で信頼性が高い試験法が提供される。さらに、本
発明の方法により、試験試料中の低い蛋白濃度の検出、
識別及びホ１）定が可能になり、その結果、試験が臨床
的により有用なものとなる。
本発明の方法によると、蛋白の乾式試験細片試験を実施
するには、約０．５ｍＭから約５ｍＭの総濃度でメチル
オレンジ（ＭＯＩとブロモフェノールプル（ＢＰＢ）の
二指水薬色素を含む水溶液を最初に準備する。次に、二
色素を含んでいる水溶液を、濾紙のシー１〜または予備
切断された細片上に塗布、浸漬または噴霧することによ
り、吸水性材料、例えば濾紙を該水溶液で飽和及び含浸
する。約２０〜３０分間空気炉内約５０℃でオーブン乾
燥して水性溶媒を除去した後、ｐＨ３，２の２５０ｍＭ
クエン酸緩衝液を浸漬または噴霧して濾紙を飽和及び含
浸する。約５０℃で２０〜３０分間オーブン乾燥した後
、二指示試薬組成物で含浸した濾紙を適当な大きさ、例
えば約０．２５ｃｍＸ Ｏ，５ｃｍがら約０．５ｃｍ
Ｘ １．、Ｏｃｍのサイズに切断する。他の方法として
、すべての成分を一含浸液中に合わせ、それにより二段
階浸漬の含浸手法の必要性を回避することも場合により
可能である。単一段階浸漬法は、緩衝液への二回目の浸
漬により色素のいくらがが吸水性マトリックスから浸出
するほど二色素が水溶性である場合、特に薦められる。
するには、約０．５ｍＭから約５ｍＭの総濃度でメチル
オレンジ（ＭＯＩとブロモフェノールプル（ＢＰＢ）の
二指水薬色素を含む水溶液を最初に準備する。次に、二
色素を含んでいる水溶液を、濾紙のシー１〜または予備
切断された細片上に塗布、浸漬または噴霧することによ
り、吸水性材料、例えば濾紙を該水溶液で飽和及び含浸
する。約２０〜３０分間空気炉内約５０℃でオーブン乾
燥して水性溶媒を除去した後、ｐＨ３，２の２５０ｍＭ
クエン酸緩衝液を浸漬または噴霧して濾紙を飽和及び含
浸する。約５０℃で２０〜３０分間オーブン乾燥した後
、二指示試薬組成物で含浸した濾紙を適当な大きさ、例
えば約０．２５ｃｍＸ Ｏ，５ｃｍがら約０．５ｃｍ
Ｘ １．、Ｏｃｍのサイズに切断する。他の方法として
、すべての成分を一含浸液中に合わせ、それにより二段
階浸漬の含浸手法の必要性を回避することも場合により
可能である。単一段階浸漬法は、緩衝液への二回目の浸
漬により色素のいくらがが吸水性マトリックスから浸出
するほど二色素が水溶性である場合、特に薦められる。
その後、二指示試薬組成物で含浸した濾紙を両面接着テ
ープを用いて不透明もしくは透明な疎水性プラスチック
ハンドルに固定する。次に、得られる試験細片を新鮮で
遠心分離していない尿試料中に試験パッドが試料で飽和
するのに充分な時間だＧ″ＪＪ浸漬。所定の間、例えば
１５〜６０秒間放置した後、応答の有無について試験細
片を視覚または機器により検査する。試験パッドの変色
が見られるなら、それは尿試料中の蛋白の存在及び／ま
たは濃度を表わしている。
ープを用いて不透明もしくは透明な疎水性プラスチック
ハンドルに固定する。次に、得られる試験細片を新鮮で
遠心分離していない尿試料中に試験パッドが試料で飽和
するのに充分な時間だＧ″ＪＪ浸漬。所定の間、例えば
１５〜６０秒間放置した後、応答の有無について試験細
片を視覚または機器により検査する。試験パッドの変色
が見られるなら、それは尿試料中の蛋白の存在及び／ま
たは濃度を表わしている。
上述した蛋白の水性液相試験と同様、本発明の方法及び
組成物を用いる蛋白の半定量試験を設計するために、試
薬パッドのサイズと、試薬含浸用溶液の濃度と、試験試
料の債と、試験試料を試験細片に導入する方法、例えば
浸漬ではなくビペットの使用との間で適切な均衡を決定
することは、試験具を製造する当業者の実験技術の範囲
内に充分大る。
組成物を用いる蛋白の半定量試験を設計するために、試
薬パッドのサイズと、試薬含浸用溶液の濃度と、試験試
料の債と、試験試料を試験細片に導入する方法、例えば
浸漬ではなくビペットの使用との間で適切な均衡を決定
することは、試験具を製造する当業者の実験技術の範囲
内に充分大る。
多くの場合、試験細片を視覚的に観察することにより所
望の情報が得られる。より正確な情報が求められる場合
は、試験細片で使用される特定の二指示試薬組成物に対
して様々な既知の蛋白濃度に相当する色点を有する色票
（カラー・ヂャト）を調製することができる。尿試料と
の接触の後に得られる試験細片の色は、色票の色点と比
較され、この結果試験試料の蛋白濃度を測定することが
できる。
望の情報が得られる。より正確な情報が求められる場合
は、試験細片で使用される特定の二指示試薬組成物に対
して様々な既知の蛋白濃度に相当する色点を有する色票
（カラー・ヂャト）を調製することができる。尿試料と
の接触の後に得られる試験細片の色は、色票の色点と比
較され、この結果試験試料の蛋白濃度を測定することが
できる。
より一層正確な測定が求められる場合は、分光光度計ま
たは比色計を使用して、より正確に変色の程度を測定す
ることができる。さらに、水性液相式試験及び乾式試薬
細片試験の双方とも、視覚的技術とは異なって、分光光
度または潤色技術を用いることで反定量化され、より確
実でより正確に変色の程度を測定し、その結果、より正
確に試験試料中の蛋白の濃度、特に比較的低い蛋白濃度
、例えば３０ｍｇ／ｄＬ未満の濃度、を測定することが
できる。
たは比色計を使用して、より正確に変色の程度を測定す
ることができる。さらに、水性液相式試験及び乾式試薬
細片試験の双方とも、視覚的技術とは異なって、分光光
度または潤色技術を用いることで反定量化され、より確
実でより正確に変色の程度を測定し、その結果、より正
確に試験試料中の蛋白の濃度、特に比較的低い蛋白濃度
、例えば３０ｍｇ／ｄＬ未満の濃度、を測定することが
できる。
図１〜４の詳細な説明において、以下、より詳しく説明
するとおり、二指示試薬組成物を用いて試験試料中の低
濃度の蛋白を検出、識別及び測定する能力は、驚くべき
ことに、かつ、思い掛けないことに、試験試料中に存在
するかもしれない検出困難な低分子蛋白を試験する方法
を提供する。
するとおり、二指示試薬組成物を用いて試験試料中の低
濃度の蛋白を検出、識別及び測定する能力は、驚くべき
ことに、かつ、思い掛けないことに、試験試料中に存在
するかもしれない検出困難な低分子蛋白を試験する方法
を提供する。
例えば、尿中の低分子量のベンズ・ジョーンズ蛋白の存
在は、患者が白血病または骨髄腫にががっているという
医療診断上の兆候である。しかし、従来の方法によると
、尿中のベンズ・ジョーンズ蛋白の検出は、高価で時間
がががり過ぎる加熱・沈殿技術を必要とする。さらに、
乾式試験細片は、尿中の高分子蛋白、例えばアルブミン
がベンズ・ジョーンズ蛋白試験に干渉し、それを遮蔽す
る理由から、ベンズ・ジョーンズ蛋白の試験には使用さ
れてこなかった。尿中には高分子蛋白がベンズ・ジョー
ンズ蛋白より相当多大な量で存在し、このためその高分
子蛋白が指示薬色素と優先的に反応する。そのうえ、ベ
ンズ・ジョーンズ蛋白を尿中の他の蛋白成分から分離す
ることは、従来のベンズ・ジョーンズ蛋白試験と同程に
高価で時間がかかるものであり、結果的に、乾式試験細
片試験に先立つ蛋白分離段階が意味のない操作試験とな
る。したがって、本発明の方法以前は、乾式試験細片技
術を利用して通常尿中に見られる低濃度のベンズ・ジョ
ーンズ蛋白を正確に検出及び測定することはできなかっ
た。
在は、患者が白血病または骨髄腫にががっているという
医療診断上の兆候である。しかし、従来の方法によると
、尿中のベンズ・ジョーンズ蛋白の検出は、高価で時間
がががり過ぎる加熱・沈殿技術を必要とする。さらに、
乾式試験細片は、尿中の高分子蛋白、例えばアルブミン
がベンズ・ジョーンズ蛋白試験に干渉し、それを遮蔽す
る理由から、ベンズ・ジョーンズ蛋白の試験には使用さ
れてこなかった。尿中には高分子蛋白がベンズ・ジョー
ンズ蛋白より相当多大な量で存在し、このためその高分
子蛋白が指示薬色素と優先的に反応する。そのうえ、ベ
ンズ・ジョーンズ蛋白を尿中の他の蛋白成分から分離す
ることは、従来のベンズ・ジョーンズ蛋白試験と同程に
高価で時間がかかるものであり、結果的に、乾式試験細
片試験に先立つ蛋白分離段階が意味のない操作試験とな
る。したがって、本発明の方法以前は、乾式試験細片技
術を利用して通常尿中に見られる低濃度のベンズ・ジョ
ーンズ蛋白を正確に検出及び測定することはできなかっ
た。
したがって、本発明の重要な特徴によれば、指示試薬組
成物を適当なギヤリヤーマトリックスに含浸することに
より、尿試料中のベンズ・ジョーンズ蛋白の有無および
濃度が乾式試験細片を使用することにより確認されるこ
とが証明された。驚くべきことであり、思い掛けないこ
とであるが、ベンズ・ジョーンズ蛋白の乾式試験細片試
験が、ベンズ・ジョーンズ蛋白を試料から分離すること
なく、さらにベンズ・ジョーンズ蛋白３武験が尿中に存
在するより豊富で干渉効果の強いより高分子の蛋白によ
り遮蔽されることなく、実施できる。先に述べたように
、試験試料中の蛋白質の試験に使用される乾式試験細片
は、−殻に、指示試薬組成物によって処理及び含浸され
易く、尿もしくはその他の試験試料が、比較的迅速に蛋
白質試験を行なうのに充分なだけ急速にキャリヤーマト
リックスに浸透する、ことを可能にし：そしてその後の
試験を不確定、不正確もしくは疑わしくするような方法
で、尿もしくはその他の試験試料を、キャリヤーマトリ
ックスを構成する成分の試験試料による抽出、または、
尿もしくはその他の試験試料を相当に変質することのい
ずれかにより、汚染しない：吸収性マトリックスから成
るキャリャーマ！・リックスを含む。
成物を適当なギヤリヤーマトリックスに含浸することに
より、尿試料中のベンズ・ジョーンズ蛋白の有無および
濃度が乾式試験細片を使用することにより確認されるこ
とが証明された。驚くべきことであり、思い掛けないこ
とであるが、ベンズ・ジョーンズ蛋白の乾式試験細片試
験が、ベンズ・ジョーンズ蛋白を試料から分離すること
なく、さらにベンズ・ジョーンズ蛋白３武験が尿中に存
在するより豊富で干渉効果の強いより高分子の蛋白によ
り遮蔽されることなく、実施できる。先に述べたように
、試験試料中の蛋白質の試験に使用される乾式試験細片
は、−殻に、指示試薬組成物によって処理及び含浸され
易く、尿もしくはその他の試験試料が、比較的迅速に蛋
白質試験を行なうのに充分なだけ急速にキャリヤーマト
リックスに浸透する、ことを可能にし：そしてその後の
試験を不確定、不正確もしくは疑わしくするような方法
で、尿もしくはその他の試験試料を、キャリヤーマトリ
ックスを構成する成分の試験試料による抽出、または、
尿もしくはその他の試験試料を相当に変質することのい
ずれかにより、汚染しない：吸収性マトリックスから成
るキャリャーマ！・リックスを含む。
試験細片が試験試料の蛋白総含有量の試験用として設計
されている場合、キャリヤーマトリックスは、指示試薬
組成物により含浸した試験細片の試験域を飽和すべく試
験試料が透過することを可能にするいかなる吸水性もし
くは非吸水性材料であってもよい。本発明の利点を最大
に利用するために、試験試料の蛋白総含有量の試験にお
いては、キャリヤーマトリックスは、セルロース材料、
例えば紙及び好ましくは濾紙を含む親木吸水性マトリッ
クスとする。濾紙は、本発明の吸水性マトリックスに要
求される特性のすべて、それに加え豊富な人手性、好ま
しい経済性及び様々な品質等級という利点を有する。濾
紙は、指示薬色素及び緩衝剤の両者を懸濁及び配置する
ためのマトリックス材料として使用するには極めて満足
なものであることが分かった。
されている場合、キャリヤーマトリックスは、指示試薬
組成物により含浸した試験細片の試験域を飽和すべく試
験試料が透過することを可能にするいかなる吸水性もし
くは非吸水性材料であってもよい。本発明の利点を最大
に利用するために、試験試料の蛋白総含有量の試験にお
いては、キャリヤーマトリックスは、セルロース材料、
例えば紙及び好ましくは濾紙を含む親木吸水性マトリッ
クスとする。濾紙は、本発明の吸水性マトリックスに要
求される特性のすべて、それに加え豊富な人手性、好ま
しい経済性及び様々な品質等級という利点を有する。濾
紙は、指示薬色素及び緩衝剤の両者を懸濁及び配置する
ためのマトリックス材料として使用するには極めて満足
なものであることが分かった。
しかし、試験試料中の低分子蛋白、例えばベンズ・ジョ
ーンズ蛋白の有無及び／または濃度を測定するための方
法及び試験具に二指示試薬組成物を用いる場合において
は、濾紙及び吸水性セルロースのマトリックスは不適で
あることが分かった。吸水性濾紙のマトリックス及び同
類の吸水性のマトリックスは、比較的高分子の蛋白、例
えばアルブミンが吸水性マトリックスを透過し、含浸し
た二指示試薬組成物と接触及び相互作用して変色を起こ
すことを可能にするのに充分なだけの多孔性を有する。
ーンズ蛋白の有無及び／または濃度を測定するための方
法及び試験具に二指示試薬組成物を用いる場合において
は、濾紙及び吸水性セルロースのマトリックスは不適で
あることが分かった。吸水性濾紙のマトリックス及び同
類の吸水性のマトリックスは、比較的高分子の蛋白、例
えばアルブミンが吸水性マトリックスを透過し、含浸し
た二指示試薬組成物と接触及び相互作用して変色を起こ
すことを可能にするのに充分なだけの多孔性を有する。
したがって、尿またはその他の試験試料中に割合として
は大量に存在する比較的高分子の蛋白は、試験試料中に
割合として少量で存在する低分子蛋白の検出を妨げる。
は大量に存在する比較的高分子の蛋白は、試験試料中に
割合として少量で存在する低分子蛋白の検出を妨げる。
その結果、比較的高分子の蛋白を除外するには充分なほ
ど小さい多孔性を有し、同時に低分子蛋白による透過を
許すには充分なほど大きな多孔性を有するキャリヤーマ
トリックスに二指示試薬組成物を組み込むことにより、
試験試料中の低い値の低分子蛋白を検出及び／または識
別する方法が提供される。
ど小さい多孔性を有し、同時に低分子蛋白による透過を
許すには充分なほど大きな多孔性を有するキャリヤーマ
トリックスに二指示試薬組成物を組み込むことにより、
試験試料中の低い値の低分子蛋白を検出及び／または識
別する方法が提供される。
本発明の重要な特徴によると、重合ウレタンを基材とす
るフィルム、層または膜は、低分子蛋白、例えばベンズ
・ジョーンズ蛋白の浸透を許し、同時により豊富な比較
的高分子の蛋白、例えばアルブミンの浸透を妨げるに充
分な多孔性を有するギヤリヤーマトリックスとなること
が分かった。以下に記載する本発明の実施態様において
実証されるように、二指示試薬組成物は、ウレタンを基
材とするフィルム、層もしくは膜を成形した後、または
、重合ウレタン基材のフィルム、層もしくは膜の成形中
のいずれかにおいて、該重合つレタンを基材とするフィ
ルム、層または膜に組み込むことができる。しかし、い
ずれの場合にも、重合ウレタンを基材とするフィルム、
層または膜は、該フィルム、層または膜が蛋白を検出す
る試験具において使用される前に、必要に応じて適当な
緩衝剤により処理されなければならない。そのうえ、重
合ウレタンを基材としたフィルム、層または膜は、試験
試料中のベンス・ジョーンズ蛋白の検出及び測定を可能
にするに適した多孔性を有しなければならない。また、
重合ウレタンを基材とするフィルム、層または膜を本発
明の二指示試薬組成物とともに利用して液体試料の蛋白
総合有量を試験することができるように、比較的高分子
量の蛋白、例えばアルブミンによる浸透を許すのに充分
なほど高い多孔性を有する重合ウレタン基材のフィルム
、層または膜を製造することができることをも理解すべ
きである。
るフィルム、層または膜は、低分子蛋白、例えばベンズ
・ジョーンズ蛋白の浸透を許し、同時により豊富な比較
的高分子の蛋白、例えばアルブミンの浸透を妨げるに充
分な多孔性を有するギヤリヤーマトリックスとなること
が分かった。以下に記載する本発明の実施態様において
実証されるように、二指示試薬組成物は、ウレタンを基
材とするフィルム、層もしくは膜を成形した後、または
、重合ウレタン基材のフィルム、層もしくは膜の成形中
のいずれかにおいて、該重合つレタンを基材とするフィ
ルム、層または膜に組み込むことができる。しかし、い
ずれの場合にも、重合ウレタンを基材とするフィルム、
層または膜は、該フィルム、層または膜が蛋白を検出す
る試験具において使用される前に、必要に応じて適当な
緩衝剤により処理されなければならない。そのうえ、重
合ウレタンを基材としたフィルム、層または膜は、試験
試料中のベンス・ジョーンズ蛋白の検出及び測定を可能
にするに適した多孔性を有しなければならない。また、
重合ウレタンを基材とするフィルム、層または膜を本発
明の二指示試薬組成物とともに利用して液体試料の蛋白
総合有量を試験することができるように、比較的高分子
量の蛋白、例えばアルブミンによる浸透を許すのに充分
なほど高い多孔性を有する重合ウレタン基材のフィルム
、層または膜を製造することができることをも理解すべ
きである。
適切な多孔性の重合ウレタンを基材とするフィルム、層
または膜を得るには、ウレタン化合物、例えばウレタン
プレポリマーを、重合性ウレタン含有組成物の成分とし
て、完全に硬化していない形態で包含せしめる。重合性
ウレタン化合物は、液状ビヒクル中に分散または溶解さ
れる。液状ビヒクルは、重合性ウレタン含有組成物の硬
化の間に分散液または溶液から除去可能で、重合性ウレ
タン含有化合物が連続性のある層、フィルムまたは膜と
して乾燥及び硬化することを可能にする。
または膜を得るには、ウレタン化合物、例えばウレタン
プレポリマーを、重合性ウレタン含有組成物の成分とし
て、完全に硬化していない形態で包含せしめる。重合性
ウレタン化合物は、液状ビヒクル中に分散または溶解さ
れる。液状ビヒクルは、重合性ウレタン含有組成物の硬
化の間に分散液または溶液から除去可能で、重合性ウレ
タン含有化合物が連続性のある層、フィルムまたは膜と
して乾燥及び硬化することを可能にする。
硬化した層、フィルムまたは膜は、比較的小さな低分子
蛋白の透過を思い掛けなくも可能にし、比較的大きな高
分子蛋白を排除することを可能にする正確な孔径を有す
る。重合性ウレタンが基材のフィルム、層または膜は、
したがって、ベンス・ジョーンズ蛋白の試験用に設計さ
れた乾式試薬試験細片のキャリヤーマトリックスとして
機能するのに適している。液状ビヒクル連続相中に分散
または溶解したウレタン化合物は、オリゴマー、プレポ
リマーまたは完全に硬化していないポリマであることが
できる。重合性ウレタン含有組成物は、硬化に先立ち二
指示試薬組成物と混合することができ、そして、二指示
試薬組成物を含むキャリヤーマトリックスが、ウレタン
含有組成物を硬化させることにより、層状に成形される
。このキャリヤーマトリックスを、細片に、それからパ
ッドに裁断し、プラスチックのハンドルに固定する。
蛋白の透過を思い掛けなくも可能にし、比較的大きな高
分子蛋白を排除することを可能にする正確な孔径を有す
る。重合性ウレタンが基材のフィルム、層または膜は、
したがって、ベンス・ジョーンズ蛋白の試験用に設計さ
れた乾式試薬試験細片のキャリヤーマトリックスとして
機能するのに適している。液状ビヒクル連続相中に分散
または溶解したウレタン化合物は、オリゴマー、プレポ
リマーまたは完全に硬化していないポリマであることが
できる。重合性ウレタン含有組成物は、硬化に先立ち二
指示試薬組成物と混合することができ、そして、二指示
試薬組成物を含むキャリヤーマトリックスが、ウレタン
含有組成物を硬化させることにより、層状に成形される
。このキャリヤーマトリックスを、細片に、それからパ
ッドに裁断し、プラスチックのハンドルに固定する。
重合またはさらなる重合が可能なウレタン化合物、例え
ばオリゴマー、プレポリマー、完全に硬化していないポ
リマーもしくはそれらの混合物を含む重合性ウレタン含
有組成物は、硬化中に液状ビヒクル連続相が除去されて
硬化または重合する際に、硬化したフィルム、層または
膜を成形し、低分子蛋白に対しては予想外に充分な透過
性を有し、比較的高分子の蛋白に対しては実質的に透過
性を有しないフィルム、層または膜を提供することが分
かった。ウレタン化合物は、連続相中に例えば乳化剤を
含ませることにより溶解または分散させた後、いかなる
公知の方法によっても硬化することができる。そのうえ
、ウレタン化合物の溶液または分散液は、適当な硬化触
媒を含むことができるか、あるいは、重合性ウレタン化
合物の溶液または分散液が、完全に硬化していない溶液
または分散液の形態で層として塗布される限り、熱硬化
することができる。一般に、本発明に従って有用である
ウレタン化合物は、液状ビヒクル、例えばジメチルホル
ムアミ１へのような有機溶媒中に溶解または分散するこ
とができるウレタン化合物であり、溶解または分散した
形態で重合性であり、硬化すると実質的に無色で連続し
たフィルム、層もしくは膜を与える。
ばオリゴマー、プレポリマー、完全に硬化していないポ
リマーもしくはそれらの混合物を含む重合性ウレタン含
有組成物は、硬化中に液状ビヒクル連続相が除去されて
硬化または重合する際に、硬化したフィルム、層または
膜を成形し、低分子蛋白に対しては予想外に充分な透過
性を有し、比較的高分子の蛋白に対しては実質的に透過
性を有しないフィルム、層または膜を提供することが分
かった。ウレタン化合物は、連続相中に例えば乳化剤を
含ませることにより溶解または分散させた後、いかなる
公知の方法によっても硬化することができる。そのうえ
、ウレタン化合物の溶液または分散液は、適当な硬化触
媒を含むことができるか、あるいは、重合性ウレタン化
合物の溶液または分散液が、完全に硬化していない溶液
または分散液の形態で層として塗布される限り、熱硬化
することができる。一般に、本発明に従って有用である
ウレタン化合物は、液状ビヒクル、例えばジメチルホル
ムアミ１へのような有機溶媒中に溶解または分散するこ
とができるウレタン化合物であり、溶解または分散した
形態で重合性であり、硬化すると実質的に無色で連続し
たフィルム、層もしくは膜を与える。
本発明の一実施態様によると、重合性ウレタン化合物は
、ウレタンプレポリマー、特に、プレボッマーの鎖の各
端がインシアネート官能基で終了する実質的に繰返しの
ウレタン単位から成るウレタンプレポリマーである。ウ
レタン化合物は、その性質において中性またはカチオン
性であるか、あるいは、中性ウレタン化合物とカチオン
性ウレタン化合物の組み合わせが使用できる。適当な市
販ウレタンプレポリマーの例としては、ＤＥＳＭＯＤＥ
ＲＭ ＫＢＨＧＲＡＮＵＬＡＴＥ及びＤＥＳＭＯＤＥＲ
Ｍ ＫＰＫｌ）ＩＳＰＥＲ５ＴＯＮがあり、双方とも１
３ Ａ Ｙ Ｅ Ｒ届社から市販されている。
、ウレタンプレポリマー、特に、プレボッマーの鎖の各
端がインシアネート官能基で終了する実質的に繰返しの
ウレタン単位から成るウレタンプレポリマーである。ウ
レタン化合物は、その性質において中性またはカチオン
性であるか、あるいは、中性ウレタン化合物とカチオン
性ウレタン化合物の組み合わせが使用できる。適当な市
販ウレタンプレポリマーの例としては、ＤＥＳＭＯＤＥ
ＲＭ ＫＢＨＧＲＡＮＵＬＡＴＥ及びＤＥＳＭＯＤＥＲ
Ｍ ＫＰＫｌ）ＩＳＰＥＲ５ＴＯＮがあり、双方とも１
３ Ａ Ｙ Ｅ Ｒ届社から市販されている。
「ウレタンプレポリマー」という呼称は、ウレタンの繰
返し単位から成る実質的に線状のポリマーを指すと理解
される。ウレタンプレポリマは、分子あたり少なくとも
二つのイソシアネート官能基を有し、ポリウレタンプレ
ポリマーは、少なくとも５０，０００の重量平均分子ｉ
ｔ （Ｍｗ）を有する。
返し単位から成る実質的に線状のポリマーを指すと理解
される。ウレタンプレポリマは、分子あたり少なくとも
二つのイソシアネート官能基を有し、ポリウレタンプレ
ポリマーは、少なくとも５０，０００の重量平均分子ｉ
ｔ （Ｍｗ）を有する。
５０、０００未満、例えば約３０．０００の重量平均分
子量のウレタンプレポリマーもまた、該プレポリマーが
硬化時に連続フィルム、層または膜を成形する限り、有
用である。最大Ｍｗは、ウレタンプレポリマーが液状ビ
ヒクルまたは連続相、例えばジメヂルホルムアミドのよ
うな有機溶媒中に溶解または分散されるときのＭｗであ
る。完全に硬化していない分散ウレタンプレポリマーに
ついては、約５００．０００までの重量平均分子量が本
発明について実用的であると予測される。硬化すると、
フィルム、層または膜の分子量に対しては上限がない。
子量のウレタンプレポリマーもまた、該プレポリマーが
硬化時に連続フィルム、層または膜を成形する限り、有
用である。最大Ｍｗは、ウレタンプレポリマーが液状ビ
ヒクルまたは連続相、例えばジメヂルホルムアミドのよ
うな有機溶媒中に溶解または分散されるときのＭｗであ
る。完全に硬化していない分散ウレタンプレポリマーに
ついては、約５００．０００までの重量平均分子量が本
発明について実用的であると予測される。硬化すると、
フィルム、層または膜の分子量に対しては上限がない。
本発明の利点を最大に利用するには、重合性ウレタンプ
レポリマーのＭｗは、約７０，０００から約８０．００
０のＭｗ範囲内であることが分かった。
レポリマーのＭｗは、約７０，０００から約８０．００
０のＭｗ範囲内であることが分かった。
本発明の方法において有用であるウレタン化合物、例え
ばウレタンプレポリマーは、イソシアネート含有モノマ
ー、ヒドロキシル含有モノマ及び適当な第三のモノマー
単位をウレタンプレボッマーに共重合させることにより
ウレタン化合物に組み込まれる他のモノマー単位を含ま
せることができる。同様に、本発明の方法において有用
なポリウレタン化合物は、性質において中性（ＤＥＳＭ
ＯＤＥＲＭ ＫＢＨ） 、アニオン性またはカチオン性
（叶ＳＭＯＤＥＲＭ ＫＰＫ）のいずれかであることが
できる。特にＤＥＳＭＯＤＥＲｌｉｌ ＫＢＨは、エチ
レングリコール７０モル％及び１，４−ブタンジオール
（Ｍｗ＝２．０００１３０モル％を含むアジピン酸のポ
リエステル７５部；アジピン酸及び１．４−ブタンジオ
ール（Ｍｗ＝２．２５０１のポリエステル２５部；１，
４−ブタンジオール２５部：及びジフェニルメタンジイ
ソシアネ−１・８５部を反応させることにより得られる
熱可塑性粒状重合ウレタン物質である。カチオン性ウレ
タンは、一般に、ボッイソシアネート、ポリオール及び
ヒドロキシル含有第３級アミンの反応により成形され、
この反応では、ポリ−ウレタンのアミン部はその後有機
酸により中和され、続いて、この中和された重合ウレタ
ンが水中に分散される。したがって、ＤＥＳＭＯＤＥＲ
Ｍ ＫＰＫは、アジピン酸、フタル酸及びエチレングリ
コール（Ｍｗ＝１，７００１のポリエステル２００部；
トルエンジイソシアネート５０部−Ｎ−メチルジェタノ
ールアミン２０部；及びｐ−キシリレンジクロリド６部
の反応生成物であるカチオン性の乳化剤を含まない重合
ウレタン分散液である。
ばウレタンプレポリマーは、イソシアネート含有モノマ
ー、ヒドロキシル含有モノマ及び適当な第三のモノマー
単位をウレタンプレボッマーに共重合させることにより
ウレタン化合物に組み込まれる他のモノマー単位を含ま
せることができる。同様に、本発明の方法において有用
なポリウレタン化合物は、性質において中性（ＤＥＳＭ
ＯＤＥＲＭ ＫＢＨ） 、アニオン性またはカチオン性
（叶ＳＭＯＤＥＲＭ ＫＰＫ）のいずれかであることが
できる。特にＤＥＳＭＯＤＥＲｌｉｌ ＫＢＨは、エチ
レングリコール７０モル％及び１，４−ブタンジオール
（Ｍｗ＝２．０００１３０モル％を含むアジピン酸のポ
リエステル７５部；アジピン酸及び１．４−ブタンジオ
ール（Ｍｗ＝２．２５０１のポリエステル２５部；１，
４−ブタンジオール２５部：及びジフェニルメタンジイ
ソシアネ−１・８５部を反応させることにより得られる
熱可塑性粒状重合ウレタン物質である。カチオン性ウレ
タンは、一般に、ボッイソシアネート、ポリオール及び
ヒドロキシル含有第３級アミンの反応により成形され、
この反応では、ポリ−ウレタンのアミン部はその後有機
酸により中和され、続いて、この中和された重合ウレタ
ンが水中に分散される。したがって、ＤＥＳＭＯＤＥＲ
Ｍ ＫＰＫは、アジピン酸、フタル酸及びエチレングリ
コール（Ｍｗ＝１，７００１のポリエステル２００部；
トルエンジイソシアネート５０部−Ｎ−メチルジェタノ
ールアミン２０部；及びｐ−キシリレンジクロリド６部
の反応生成物であるカチオン性の乳化剤を含まない重合
ウレタン分散液である。
いずれにしても、本発明で利用されるウレタン化合物は
、ウレタン含有組成物のその他の成分と混合した後に硬
化し、低分子蛋白に対しては透過性を示し、比較的高分
子量の蛋白に対しては不透過性を示す物理的構造及び電
荷構造を有するフィルム、層または膜を与えなければな
らない。そのうえ、ウレタン含有組成物は、中性ウレタ
ン化合物、カチオン性ウレタン化合物または中性ウレタ
ン化合物とカチオン性ウレタン化合物の混合物のいずれ
かを含むことができる。ウレタン化合物は、ウレタン含
有組成物中に、ウレタン含有組成物の総重量に基づいた
約３重量％から約３０重量％、好ましくは約５重量％か
ら約２０重量％の範囲内で存在する。
、ウレタン含有組成物のその他の成分と混合した後に硬
化し、低分子蛋白に対しては透過性を示し、比較的高分
子量の蛋白に対しては不透過性を示す物理的構造及び電
荷構造を有するフィルム、層または膜を与えなければな
らない。そのうえ、ウレタン含有組成物は、中性ウレタ
ン化合物、カチオン性ウレタン化合物または中性ウレタ
ン化合物とカチオン性ウレタン化合物の混合物のいずれ
かを含むことができる。ウレタン化合物は、ウレタン含
有組成物中に、ウレタン含有組成物の総重量に基づいた
約３重量％から約３０重量％、好ましくは約５重量％か
ら約２０重量％の範囲内で存在する。
以下、より詳しく述べるとおり、ウレタン含有組成物に
使用されるウレタン化合物の割合及びウレタン化合物の
性質、つまり中性、カチオン性または中性／カチオン性
の混合は、色の分解度、発色の安定性及び発色の速度に
影響する。したがって、本発明の方法によると、ウレタ
ンを基材としたキャリヤーマトリックスを含む被検体試
験具は、必要に応じて、色分鮮度の改善、色安定性の増
大または発色速度の増加を考慮して設計することができ
る。
使用されるウレタン化合物の割合及びウレタン化合物の
性質、つまり中性、カチオン性または中性／カチオン性
の混合は、色の分解度、発色の安定性及び発色の速度に
影響する。したがって、本発明の方法によると、ウレタ
ンを基材としたキャリヤーマトリックスを含む被検体試
験具は、必要に応じて、色分鮮度の改善、色安定性の増
大または発色速度の増加を考慮して設計することができ
る。
重合性ウレタン化合物に加え、キャリヤーマドノックス
を成形するために使用される重合性ウレタン含有組成物
は、無機相が水不溶性の無機化合物、例えば硫酸バリウ
ムを含む分散した無機相を含んでいる。
を成形するために使用される重合性ウレタン含有組成物
は、無機相が水不溶性の無機化合物、例えば硫酸バリウ
ムを含む分散した無機相を含んでいる。
ウレタン含有化合物には、ウレタン含有組成物の総重量
に基づき、水不溶性無機化合物、例えば硫酸バリウム約
１５〜約４０重量％、好ましくは約２０〜約３０重量％
が充填剤として含まれている。充填剤として用いる無機
化合物の厳密な種類は、該充填剤が白色であり、指示薬
色素と蛋白との相互作用の際の色の検出及び測定に干渉
しない限り、さらに無機充填剤が本質的に水不溶性であ
り、このため溶解したアニオン及び／またはカチオンが
蛋白試験に対して化学的または物理的に干渉するよう作
用しない限り、重要ではない。したがって、本発明の方
法に従って用いられる水不溶性無機化合物には、硫酸カ
ルシウム、二酸化ヂタン、アルミナ、酸化亜鉛、酸化マ
グネシウム、酸化カルシウム、二酸化珪素、タルク、酸
化マグネシウムアルミニウム、酸化マグネシウムチタン
、酸化バリウム、硫酸バリウム、硫酸ストロンチウム及
びその他白色の水不溶性無機化合物、特に酸化物、また
はそれらの混合物がある。
に基づき、水不溶性無機化合物、例えば硫酸バリウム約
１５〜約４０重量％、好ましくは約２０〜約３０重量％
が充填剤として含まれている。充填剤として用いる無機
化合物の厳密な種類は、該充填剤が白色であり、指示薬
色素と蛋白との相互作用の際の色の検出及び測定に干渉
しない限り、さらに無機充填剤が本質的に水不溶性であ
り、このため溶解したアニオン及び／またはカチオンが
蛋白試験に対して化学的または物理的に干渉するよう作
用しない限り、重要ではない。したがって、本発明の方
法に従って用いられる水不溶性無機化合物には、硫酸カ
ルシウム、二酸化ヂタン、アルミナ、酸化亜鉛、酸化マ
グネシウム、酸化カルシウム、二酸化珪素、タルク、酸
化マグネシウムアルミニウム、酸化マグネシウムチタン
、酸化バリウム、硫酸バリウム、硫酸ストロンチウム及
びその他白色の水不溶性無機化合物、特に酸化物、また
はそれらの混合物がある。
不溶性無機化合物がウレタン含有組成物に粉末として組
み込まれ、該不溶性無機化合物が該ウレタン含有組成物
全体に亘って均一に分散することを確実にする。それに
加え、不溶性無機化合物を粉末の形態で利用することに
より、不溶性無機化合物は、硬化工程の間、ウレタン含
有組成物全体に亘って均一に分散した状態に維持される
。不溶性無機化合物の均一な分散により、その中に均一
に分散した不溶性無機化合物を有する重合ウレタンを基
材とするフィルム、層または膜が提供される。
み込まれ、該不溶性無機化合物が該ウレタン含有組成物
全体に亘って均一に分散することを確実にする。それに
加え、不溶性無機化合物を粉末の形態で利用することに
より、不溶性無機化合物は、硬化工程の間、ウレタン含
有組成物全体に亘って均一に分散した状態に維持される
。不溶性無機化合物の均一な分散により、その中に均一
に分散した不溶性無機化合物を有する重合ウレタンを基
材とするフィルム、層または膜が提供される。
重合性ウレタン含有組成物はまた、不溶性無機化合物を
湿潤することを促進し、その結果不溶性無機化合物をウ
レタン含有組成物全体に均質に分散させることを助長す
るアニオン性界面活性剤を含むこともできる。アニオン
性界面活性剤は、ウレタン含有組成物の総重量に基づい
た０重量％がら約５重量％までの範囲で存在することが
できる。アニオン性界面活性剤は、さらに、蛋白と二指
示試薬組成物どの接触の結果で発生する色を安定させる
べく作用することができる。本発明の方法で有用である
とされるアニオン性界面活性剤は必ずしも特定のタイプ
に限定されず、アンモニウム、アルキルアンモニウム、
カリウム及び／またはナトリウムドデシルベンゼンスル
ホネ−１・、アルキルスルホネート、シリルアルギルス
ルホネト、硫酸アルキル、硫酸アルキルエーテル、ジメ
チルスルホキシネ−１・、α−オレフィンスルホネート
及びアルキルサルコシネート、またはそれらの混合物が
ある。
湿潤することを促進し、その結果不溶性無機化合物をウ
レタン含有組成物全体に均質に分散させることを助長す
るアニオン性界面活性剤を含むこともできる。アニオン
性界面活性剤は、ウレタン含有組成物の総重量に基づい
た０重量％がら約５重量％までの範囲で存在することが
できる。アニオン性界面活性剤は、さらに、蛋白と二指
示試薬組成物どの接触の結果で発生する色を安定させる
べく作用することができる。本発明の方法で有用である
とされるアニオン性界面活性剤は必ずしも特定のタイプ
に限定されず、アンモニウム、アルキルアンモニウム、
カリウム及び／またはナトリウムドデシルベンゼンスル
ホネ−１・、アルキルスルホネート、シリルアルギルス
ルホネト、硫酸アルキル、硫酸アルキルエーテル、ジメ
チルスルホキシネ−１・、α−オレフィンスルホネート
及びアルキルサルコシネート、またはそれらの混合物が
ある。
さらに、他の界面活性剤、例えばジメチルポリシロキサ
ン液のような珪素含有材料は、ウレタン含有組成物の総
重量に基づいた２重量％までの範囲で該ウレタン含有組
成物に組み込むことができる。これら珪素含有物質は、
表面張力が低いことから、不溶性無機化合物の湿潤をさ
らに促進し、またウレタン含有組成物の表面張力を変化
させ、レベリング効果を与えて平滑で１磨かれた」フィ
ルム、層または膜を均一な厚さで与える。
ン液のような珪素含有材料は、ウレタン含有組成物の総
重量に基づいた２重量％までの範囲で該ウレタン含有組
成物に組み込むことができる。これら珪素含有物質は、
表面張力が低いことから、不溶性無機化合物の湿潤をさ
らに促進し、またウレタン含有組成物の表面張力を変化
させ、レベリング効果を与えて平滑で１磨かれた」フィ
ルム、層または膜を均一な厚さで与える。
先に述べたように、ウレタン含有組成物はまた、ウレタ
ン化合物及び存在が考えられるいかなるアニオン性界面
活性剤もしくは珪素含有物質をも可溶化及び／または分
散させることができる液状ビヒクル、例えば有機溶媒を
含む。液状ビヒクルはまた、不溶性無機塩を分散させる
ことができなくてはならない。有機溶媒は、ウレタン化
合物と反応しないコニう、比較的不活性でなくてはなら
ず、溶媒は、比較的低い温度で蒸発して乾燥ウレタンを
基材とするフィルム、層または膜を提供しなければなら
ない。有機非プロトン性溶媒、例えばジメチルホルムア
ミド、Ｎ−メチルピロリドン及びジメチルスルホキシド
は、ウレタン含有組成物の成分を溶解及び分散するため
に必要な溶解力を提供し、溶媒とウレタン化合物との反
応を阻止するために必要な不活性を提供し、溶媒を含ま
ない重合ウレタンを基材とするフィルム、層または膜を
提供するために必要な蒸気圧を有する。硬化中に除去さ
れた液状ビヒクルは、ウレタン含有組成物中に少なくと
も３０％の量で含まれ、好ましくは、重合性ウレタン含
有組成物の総重量に基づいた少なくとも５０重量％から
約９０重量％の量で存在する。
ン化合物及び存在が考えられるいかなるアニオン性界面
活性剤もしくは珪素含有物質をも可溶化及び／または分
散させることができる液状ビヒクル、例えば有機溶媒を
含む。液状ビヒクルはまた、不溶性無機塩を分散させる
ことができなくてはならない。有機溶媒は、ウレタン化
合物と反応しないコニう、比較的不活性でなくてはなら
ず、溶媒は、比較的低い温度で蒸発して乾燥ウレタンを
基材とするフィルム、層または膜を提供しなければなら
ない。有機非プロトン性溶媒、例えばジメチルホルムア
ミド、Ｎ−メチルピロリドン及びジメチルスルホキシド
は、ウレタン含有組成物の成分を溶解及び分散するため
に必要な溶解力を提供し、溶媒とウレタン化合物との反
応を阻止するために必要な不活性を提供し、溶媒を含ま
ない重合ウレタンを基材とするフィルム、層または膜を
提供するために必要な蒸気圧を有する。硬化中に除去さ
れた液状ビヒクルは、ウレタン含有組成物中に少なくと
も３０％の量で含まれ、好ましくは、重合性ウレタン含
有組成物の総重量に基づいた少なくとも５０重量％から
約９０重量％の量で存在する。
本発明の一実施態様に従い、重合性ウレタン含有組成物
を実施例１で概説した処方に従って混合した。そして、
実施例１のウレタン含有組成物Ａ及びＢを、同一の硬化
工程に従って、ウレタンを基材とするフィルム、層また
は膜に変換した。
を実施例１で概説した処方に従って混合した。そして、
実施例１のウレタン含有組成物Ａ及びＢを、同一の硬化
工程に従って、ウレタンを基材とするフィルム、層また
は膜に変換した。
大溝ｌ硼上
ＤＥＳＭＯＤＥＲＭ ＫＢＨ（中性ウレタン）すＩ−リ
ウムジオクチル スルホサクシネート 硫酸ハリラム ジメヂルボリシロキサン液 ナトリウムドデシル ベンゼンスルホネート ＤＥＳＭＯＤＥＲＭ ＫＰＫ （カチオン性ウレタン
）ジメチルホルムアミド 合計 ウレタン含有組成物−Ｂ ＤＥＳＭＯＤＥＲＭ ＫＢＨ（中性ウレタン）Ｄｒａｌ
ｏｎ Ｕ ナトリウムドデシル ベンゼンスルホネート タルク ジメチルボリシロキザン液 ジメチルホルムアミド ７．３ ０．２ ２２．０ １．４ １．４ ＩＯｌｏ ５７．７ １００．０ ５．８ １．６ ０．３ ２８．３ ０．１ ６３．９ ％ ％ ％ ％ ％ ％ 合計 １００．０％Ｄ
ｒａｌｏｎ Ｕは、構造式１で示される一般構造を有す
る平均分子量が４８．０００のスルホン化ポリマーであ
る。
ウムジオクチル スルホサクシネート 硫酸ハリラム ジメヂルボリシロキサン液 ナトリウムドデシル ベンゼンスルホネート ＤＥＳＭＯＤＥＲＭ ＫＰＫ （カチオン性ウレタン
）ジメチルホルムアミド 合計 ウレタン含有組成物−Ｂ ＤＥＳＭＯＤＥＲＭ ＫＢＨ（中性ウレタン）Ｄｒａｌ
ｏｎ Ｕ ナトリウムドデシル ベンゼンスルホネート タルク ジメチルボリシロキザン液 ジメチルホルムアミド ７．３ ０．２ ２２．０ １．４ １．４ ＩＯｌｏ ５７．７ １００．０ ５．８ １．６ ０．３ ２８．３ ０．１ ６３．９ ％ ％ ％ ％ ％ ％ 合計 １００．０％Ｄ
ｒａｌｏｎ Ｕは、構造式１で示される一般構造を有す
る平均分子量が４８．０００のスルホン化ポリマーであ
る。
実施例１の組成物Ａ及び組成物Ｂの製造にあたっては、
該組成物が均質になるまで、高速ミキサーを使用して各
成分を徹底的に混合した。組成物ＡまたはＢのいずれか
をフィルム、層または膜に硬化させるため、該組成物を
透明で不浸透性のプラスチックの支持体上に塗布した。
該組成物が均質になるまで、高速ミキサーを使用して各
成分を徹底的に混合した。組成物ＡまたはＢのいずれか
をフィルム、層または膜に硬化させるため、該組成物を
透明で不浸透性のプラスチックの支持体上に塗布した。
塗布した組成物の厚さは、ドクターブレードを用いて約
１５０μ〜約７５０μの湿潤厚さに調整した。プラスチ
ックの支持体にウレタン含有組成物を塗布した直後、該
プラスチック支持体を約２５〜約４３℃の恒温に維持し
た循環水浴中に浸漬した。組成物を塗布した支持体を、
３０分から１６時間の間、水浴に浸漬することにより、
ウレタン含有組成物を該水浴中で硬化させた。硬化後、
フィルム、層または膜は、自然乾燥またはオーブン乾燥
させた。その後、先に説明したように、二指示試薬組成
物のような試薬を、乾燥したフィルム、層または膜に含
浸させた。他の方法として、二指示試薬組成物を特徴と
する試薬がウレタン含有組成物の製造に使用される有機
溶媒、例えばジメチルホルムアミド中に可溶性であり、
さらに二指示試薬組成物を特徴とする試薬が水可溶性で
ある場合、硬化に先立ち、該試薬をウレタン含有組成物
中に組み込ませ、該ウレタン含有組成物を支持体に塗布
した。
１５０μ〜約７５０μの湿潤厚さに調整した。プラスチ
ックの支持体にウレタン含有組成物を塗布した直後、該
プラスチック支持体を約２５〜約４３℃の恒温に維持し
た循環水浴中に浸漬した。組成物を塗布した支持体を、
３０分から１６時間の間、水浴に浸漬することにより、
ウレタン含有組成物を該水浴中で硬化させた。硬化後、
フィルム、層または膜は、自然乾燥またはオーブン乾燥
させた。その後、先に説明したように、二指示試薬組成
物のような試薬を、乾燥したフィルム、層または膜に含
浸させた。他の方法として、二指示試薬組成物を特徴と
する試薬がウレタン含有組成物の製造に使用される有機
溶媒、例えばジメチルホルムアミド中に可溶性であり、
さらに二指示試薬組成物を特徴とする試薬が水可溶性で
ある場合、硬化に先立ち、該試薬をウレタン含有組成物
中に組み込ませ、該ウレタン含有組成物を支持体に塗布
した。
試験試料中の蛋白の量を検出及び測定するために二指示
試薬組成物を使用することから生れた新規で思い掛けな
い結果を示し、さらに、特に試験試料中の低分子蛋白、
例えばベンス・ジョーンズ蛋白の検出及び測定に関し、
二指示試薬組成物をウレタンを基材とするフィルム、層
または膜に組み込むことから生れた驚くべき結果を示す
ために、総蛋白試験ならびに濾紙の吸水性マトリック又
とウレタン基材のキャリヤーマトリックスに含浸した単
一の指示薬を含む乾式試験細片及び二指示試薬組成物を
濾紙の吸水性マトリックスと重合ウレタン基材のキャリ
ヤーマトリックスに含浸させることにより得られるベン
ズ・ジョーンズ蛋白試験について、色空間プロットを作
成した。
試薬組成物を使用することから生れた新規で思い掛けな
い結果を示し、さらに、特に試験試料中の低分子蛋白、
例えばベンス・ジョーンズ蛋白の検出及び測定に関し、
二指示試薬組成物をウレタンを基材とするフィルム、層
または膜に組み込むことから生れた驚くべき結果を示す
ために、総蛋白試験ならびに濾紙の吸水性マトリック又
とウレタン基材のキャリヤーマトリックスに含浸した単
一の指示薬を含む乾式試験細片及び二指示試薬組成物を
濾紙の吸水性マトリックスと重合ウレタン基材のキャリ
ヤーマトリックスに含浸させることにより得られるベン
ズ・ジョーンズ蛋白試験について、色空間プロットを作
成した。
図１〜４は、四つのアルブミン標準溶液及びベンズ・ジ
ョーンズ蛋白槽重溶液と、濾紙または重合ウレタン基材
のフィルム、層もしくは膜から成るキャリヤーマトリッ
クスに含浸した単一指示薬色素あるいは二指示試薬組成
物のいずれかを含む種々の乾式試験細片とを接触させて
得た色空間プロットである。
ョーンズ蛋白槽重溶液と、濾紙または重合ウレタン基材
のフィルム、層もしくは膜から成るキャリヤーマトリッ
クスに含浸した単一指示薬色素あるいは二指示試薬組成
物のいずれかを含む種々の乾式試験細片とを接触させて
得た色空間プロットである。
例えば、図１は、濾紙のキャリヤーマトリックスに含浸
した単一指示薬であるテトラブロモフェノールブルー（
ＴＢＰＢ）を含む乾式試験細片と、アルブミンＯｍｇ／
ｄＬ （０） 、アルブミン１０ｍｇ／ｄＬ （１０１
、アルブミン５０ｍｇ／ｄＬ （５０）、アルブミン１
００ ｍｇ／ｄＬ（＋００）及びベンズ・ジョーンズ蛋
白（ＢＪ） ＩＱ（１ｍｇ／ｄｔを含む標準溶液とを接
触させた結果から作成した色空間プロットである。図２
は、濾紙のキャリヤーマトリックスに含浸したテトラブ
ロモフェノールブルー（ＴＢＰＢＩ及びメチルオレンジ
（ＭＯ）を含む二指示試薬組成物を含む乾式試験細片を
用いて、同じアルブミン及びベンズ・ジョーンズ蛋白の
標準溶液に接触させた結果から作成した色空間プロット
である。同様に、図３は、標準蛋白溶液と、実施例１の
組成物Ａを硬化さぜることにより得られる重合ウレタン
を基材とするフィルムに組み込んだ単一の指示薬である
テトラブロモフェノールブルー（ＴＢＰＢ）を含む乾式
試験細片とを接触させることにより得られた色空間プロ
ットである。図４は、標準蛋白溶液と、実施例１の組成
物Ｂを硬化させることにより得られる重合ウレタンを基
材とするフィルムに組み込んだテトラブロモフェノール
ブルー（ＴＢＰＢ）及びメチルオレンジ（ＭＯ）を含む
二指示試薬組成物を含む乾式試験細片とを接触させるこ
とにより得られた色空間プロットである。
した単一指示薬であるテトラブロモフェノールブルー（
ＴＢＰＢ）を含む乾式試験細片と、アルブミンＯｍｇ／
ｄＬ （０） 、アルブミン１０ｍｇ／ｄＬ （１０１
、アルブミン５０ｍｇ／ｄＬ （５０）、アルブミン１
００ ｍｇ／ｄＬ（＋００）及びベンズ・ジョーンズ蛋
白（ＢＪ） ＩＱ（１ｍｇ／ｄｔを含む標準溶液とを接
触させた結果から作成した色空間プロットである。図２
は、濾紙のキャリヤーマトリックスに含浸したテトラブ
ロモフェノールブルー（ＴＢＰＢＩ及びメチルオレンジ
（ＭＯ）を含む二指示試薬組成物を含む乾式試験細片を
用いて、同じアルブミン及びベンズ・ジョーンズ蛋白の
標準溶液に接触させた結果から作成した色空間プロット
である。同様に、図３は、標準蛋白溶液と、実施例１の
組成物Ａを硬化さぜることにより得られる重合ウレタン
を基材とするフィルムに組み込んだ単一の指示薬である
テトラブロモフェノールブルー（ＴＢＰＢ）を含む乾式
試験細片とを接触させることにより得られた色空間プロ
ットである。図４は、標準蛋白溶液と、実施例１の組成
物Ｂを硬化させることにより得られる重合ウレタンを基
材とするフィルムに組み込んだテトラブロモフェノール
ブルー（ＴＢＰＢ）及びメチルオレンジ（ＭＯ）を含む
二指示試薬組成物を含む乾式試験細片とを接触させるこ
とにより得られた色空間プロットである。
図１〜４に示すように、色空間プロットは、ニつの軸、
つまりビ、Ａ８、Ｂ８の各軸を含む。垂直軸上にプロッ
トされたビの値は、色の強さの尺度であり、これによる
と大きなビの値は淡い色を示し、ビ＝０であれば完全な
黒色を表わす。水平のＡ°軸は、緑から赤への変色の尺
度であり、これによるとＡ１の値がより正になるにつれ
、より赤色に近（なり、同様に、八〇の値がより負にな
るにつれ、より緑色に近（なる。同じく、第三〇軸Ｂ１
は、青から黄色への変色の尺度であり、これによると８
１の値が大きくなるにつれ、より黄色に近（なり、同様
に、Ｂｏの値が小さくなるにつれ、より青色に近くなる
。
つまりビ、Ａ８、Ｂ８の各軸を含む。垂直軸上にプロッ
トされたビの値は、色の強さの尺度であり、これによる
と大きなビの値は淡い色を示し、ビ＝０であれば完全な
黒色を表わす。水平のＡ°軸は、緑から赤への変色の尺
度であり、これによるとＡ１の値がより正になるにつれ
、より赤色に近（なり、同様に、八〇の値がより負にな
るにつれ、より緑色に近（なる。同じく、第三〇軸Ｂ１
は、青から黄色への変色の尺度であり、これによると８
１の値が大きくなるにつれ、より黄色に近（なり、同様
に、Ｂｏの値が小さくなるにつれ、より青色に近くなる
。
色空間偏差（△Ｅ）は以下の方程式から計算される。
方程式ｌ
（式中、Ｌｌ” Ｉ ＡＩ”及び８１′は、第一の標準
蛋白溶液について決定した色空間値であり、Ｌ２” 、
Ａ２”及びＢ１）は、第一の標準蛋白溶液とは異なる蛋
白濃度を有する第二の標準蛋白溶液から決定した色空間
値であり、 △Ｅは、第−及び第二の標準蛋白溶液の色空間プロット
間の色空間偏差である）。
蛋白溶液について決定した色空間値であり、Ｌ２” 、
Ａ２”及びＢ１）は、第一の標準蛋白溶液とは異なる蛋
白濃度を有する第二の標準蛋白溶液から決定した色空間
値であり、 △Ｅは、第−及び第二の標準蛋白溶液の色空間プロット
間の色空間偏差である）。
色空間偏差（△Ｅ）は、三次元色空間プロットにおける
二点間の直線距離である。理論上は、「ｌ」の色空間偏
差は、肉眼で区別できる最小の色の偏差である。しかし
、個人の視覚能力間の本来の差のために、色を実際に自
信を持って区別するには約「５」の色空間偏差（△Ｅ）
が要求される。
二点間の直線距離である。理論上は、「ｌ」の色空間偏
差は、肉眼で区別できる最小の色の偏差である。しかし
、個人の視覚能力間の本来の差のために、色を実際に自
信を持って区別するには約「５」の色空間偏差（△Ｅ）
が要求される。
図１〜４の色空間プロット上に記入したビ、Ａ８及びＢ
１の値は、４００ｎｍ （ナノメートル）と７００ｎｍ
との間で均等間隔を置いた１６の異なる波長において採
取した反射率測定値を基に、この分野では周知である標
準的な方程式を用いて算出した。一般に、１６の異なる
波長のそれぞれにおける反射率にその波長における光度
を掛けた。さらに、これらの値に、赤、緑及び青の各色
についての標準重み関数を掛け、最後に合計した。これ
らの計算により三刺激値Ｘ、Ｙ及びＺが得られ、Ｌｏ、
八１及びＢ１は、Ｘ、Ｙ及びＺの三刺激値から以下の方
程式を用いて算出した。
１の値は、４００ｎｍ （ナノメートル）と７００ｎｍ
との間で均等間隔を置いた１６の異なる波長において採
取した反射率測定値を基に、この分野では周知である標
準的な方程式を用いて算出した。一般に、１６の異なる
波長のそれぞれにおける反射率にその波長における光度
を掛けた。さらに、これらの値に、赤、緑及び青の各色
についての標準重み関数を掛け、最後に合計した。これ
らの計算により三刺激値Ｘ、Ｙ及びＺが得られ、Ｌｏ、
八１及びＢ１は、Ｘ、Ｙ及びＺの三刺激値から以下の方
程式を用いて算出した。
Ｌｏ・１）６ Ｘ ［（Ｙ／Ｙｏｌｌ／３−１．６））
（方程式２）％式％）］ （方程式３） Ｂ” ＝ ２００ Ｘ ［（Ｙ／Ｙｏ）ｌ／３− （Ｚ
／Ｚｏｌｌ／３］（方程式４） ［式中、ｘＯｌＹＯ及びＺＯは、完全な白色（すなわち
、反射率＝全波長で１００％）の場合の三刺激値であり
、Ｘ、Ｙ及びＺは、４００％ｍと７００％ｍの間の１６
の波長から上述のとおり算出した三刺激値である］ 図１〜４の色空間プロットから色空間偏差（△Ｅ）を算
出し、表ＩＩＩに要約した。表ＩＩＩを解釈する際、△
Ｅ （Ａｌｂ１０−０１という表記は、アルブミン１０
ｍｇ／ｄＬを含む蛋白溶液の蛋白試験とアルブミンＯｍ
ｇ／ｄＬを含む蛋白溶液の蛋白試験との間での色空間偏
差である。同様に、△Ｅ （Ａｌｂ５０−０）という表
記は、蛋白質５０ｍｇ／ｄＬを含む蛋白溶液の蛋白試験
と蛋白Ｏｍｇ／ｄＬを含む蛋白溶液の蛋白試験との間で
の色空間偏差である。
（方程式２）％式％）］ （方程式３） Ｂ” ＝ ２００ Ｘ ［（Ｙ／Ｙｏ）ｌ／３− （Ｚ
／Ｚｏｌｌ／３］（方程式４） ［式中、ｘＯｌＹＯ及びＺＯは、完全な白色（すなわち
、反射率＝全波長で１００％）の場合の三刺激値であり
、Ｘ、Ｙ及びＺは、４００％ｍと７００％ｍの間の１６
の波長から上述のとおり算出した三刺激値である］ 図１〜４の色空間プロットから色空間偏差（△Ｅ）を算
出し、表ＩＩＩに要約した。表ＩＩＩを解釈する際、△
Ｅ （Ａｌｂ１０−０１という表記は、アルブミン１０
ｍｇ／ｄＬを含む蛋白溶液の蛋白試験とアルブミンＯｍ
ｇ／ｄＬを含む蛋白溶液の蛋白試験との間での色空間偏
差である。同様に、△Ｅ （Ａｌｂ５０−０）という表
記は、蛋白質５０ｍｇ／ｄＬを含む蛋白溶液の蛋白試験
と蛋白Ｏｍｇ／ｄＬを含む蛋白溶液の蛋白試験との間で
の色空間偏差である。
△Ｅ （Ａ］ｂ１０Ｏ
０）及
び△Ｅ （ＢＪｌｏｏ
という表記も同様に定義され
る。
図１の色空間プロット及び表１）＋において例証したと
おり、濾紙のキャリヤーマトリックスに含浸した単一の
指示薬、テトラブロモフェノールブルーのみを有する乾
式試験細片を用い、アルブミン及びベンズ・ジョーンズ
蛋白を含む標準溶液を対象に蛋白試験を実施した。図１
及び表ＩＩＩより、アルブミン１０ｍｇ／ｄＬを含む溶
液と、アルブミンを含まない溶液との間の色空間偏差は
、４．８であると理解される。肉眼では通常的５の色空
間偏差を有する色の間でしか識別できないことから、そ
のような試験では試料がアルブミンを含むかどうかにつ
いて結論を出すことができない。すなわちアルブミンＯ
ｍｇ／ｄＬの溶液に接触している試験細片と、］、Ｏｍ
ｇ／ｄＬの試験細片に接触している試験細片との間の色
の偏差が測定できないからである。測定者は、せいぜい
、試料中にはＯｍｇ／ｄＬから約１．０ｍｇ／ｄＬのア
ルブミンが含まれると推測できる程度であった。
おり、濾紙のキャリヤーマトリックスに含浸した単一の
指示薬、テトラブロモフェノールブルーのみを有する乾
式試験細片を用い、アルブミン及びベンズ・ジョーンズ
蛋白を含む標準溶液を対象に蛋白試験を実施した。図１
及び表ＩＩＩより、アルブミン１０ｍｇ／ｄＬを含む溶
液と、アルブミンを含まない溶液との間の色空間偏差は
、４．８であると理解される。肉眼では通常的５の色空
間偏差を有する色の間でしか識別できないことから、そ
のような試験では試料がアルブミンを含むかどうかにつ
いて結論を出すことができない。すなわちアルブミンＯ
ｍｇ／ｄＬの溶液に接触している試験細片と、］、Ｏｍ
ｇ／ｄＬの試験細片に接触している試験細片との間の色
の偏差が測定できないからである。測定者は、せいぜい
、試料中にはＯｍｇ／ｄＬから約１．０ｍｇ／ｄＬのア
ルブミンが含まれると推測できる程度であった。
同様に、図１及び表ＩＩＩは、濾紙のマトリックスに含
浸した単一色素を有する試験具により提供される色空間
偏差が４．４、すなわち通常肉眼ではほとんど検出でき
ない色空間偏差でしかないことから、測定者が、ベンズ
・ジョーンズ蛋白をＯｍｇ／ｄＬから約１００ ｍｇ／
ｄＬ含んだ試験試料中のベンズ・ジョーンズ蛋白の濃度
を測定できなかったことを示している。表Ｉ１）及び図
１は、さらに、色空間偏差がそれぞれ１９．２と２５．
５であることから、５０ｍｇ／ｄＬ〜１００ ｍｇ／ｄ
Ｌのアルブミンの存在の結果である色の偏差を検出する
ことができることを示す。
浸した単一色素を有する試験具により提供される色空間
偏差が４．４、すなわち通常肉眼ではほとんど検出でき
ない色空間偏差でしかないことから、測定者が、ベンズ
・ジョーンズ蛋白をＯｍｇ／ｄＬから約１００ ｍｇ／
ｄＬ含んだ試験試料中のベンズ・ジョーンズ蛋白の濃度
を測定できなかったことを示している。表Ｉ１）及び図
１は、さらに、色空間偏差がそれぞれ１９．２と２５．
５であることから、５０ｍｇ／ｄＬ〜１００ ｍｇ／ｄ
Ｌのアルブミンの存在の結果である色の偏差を検出する
ことができることを示す。
しかし、驚くべきことであり、思い掛けないことである
が、濾紙のマトリックスを本発明の二指示試薬組成物で
含浸することにより、測定者はアルブミンＯｍｇ／ｄＬ
を含む試料とアルブミン１０ｍｇ／ｄＬを含む試料とを
視覚的に識別することができた。図２及び表ＩＩＩから
、アルブミン１０ｍｇ／ｄＬを含む溶液とアルブミンを
含まない溶液との間の色空間偏差（△Ｅ）は、テトラブ
ロモフェノールブルー及びメチルオレンジを含む二指示
試薬組成物を使用した場合、９．１であった。この程度
の色空間偏差は肉眼で認識するには充分であり、図１の
単一指示薬色素により得られる４、１の色空間偏差に比
べ本質的な向上を示す。同様に、ベンズ・ジョーンズ蛋
白１００ ｍｇ／ｄＬの溶液とベンズ・ジョーンズ蛋白
Ｏｍｇ／ｄＬの溶液との間の色空間偏差カ月２．２であ
ることから、測定者は、試験試料中のベンズ・ジョーン
ズ蛋白を視覚的に検出することができた。この程度の色
の偏差は、肉眼による色の識別を可能にするには充分で
ある。同様に、表ＩＩＩ及び図２は、アルブミンを含ま
ない溶液に比較し、アルブミン５０ｍｇ／ｄＬ及び１０
０ ｍｇ／ｄＬを含む溶液についての色の識別の改善を
示す。
が、濾紙のマトリックスを本発明の二指示試薬組成物で
含浸することにより、測定者はアルブミンＯｍｇ／ｄＬ
を含む試料とアルブミン１０ｍｇ／ｄＬを含む試料とを
視覚的に識別することができた。図２及び表ＩＩＩから
、アルブミン１０ｍｇ／ｄＬを含む溶液とアルブミンを
含まない溶液との間の色空間偏差（△Ｅ）は、テトラブ
ロモフェノールブルー及びメチルオレンジを含む二指示
試薬組成物を使用した場合、９．１であった。この程度
の色空間偏差は肉眼で認識するには充分であり、図１の
単一指示薬色素により得られる４、１の色空間偏差に比
べ本質的な向上を示す。同様に、ベンズ・ジョーンズ蛋
白１００ ｍｇ／ｄＬの溶液とベンズ・ジョーンズ蛋白
Ｏｍｇ／ｄＬの溶液との間の色空間偏差カ月２．２であ
ることから、測定者は、試験試料中のベンズ・ジョーン
ズ蛋白を視覚的に検出することができた。この程度の色
の偏差は、肉眼による色の識別を可能にするには充分で
ある。同様に、表ＩＩＩ及び図２は、アルブミンを含ま
ない溶液に比較し、アルブミン５０ｍｇ／ｄＬ及び１０
０ ｍｇ／ｄＬを含む溶液についての色の識別の改善を
示す。
図３に関しては、重合ウレタンを基材としたフィルム、
層またはマトリックスに含浸させた単一指示薬色素では
、試験試料中の低い値のアルブミンの有無及び濃度を測
定する方法は提供されないことが実証された。アルブミ
ン１０ｍｇ／ｄＬを含んだ溶液については、アルブミン
Ｏｍｇ／ｄＬを含んだ対照溶液との間での色空間偏差（
△Ｅ）は３．２にすぎなかった。この色空間偏差では、
肉眼での識別には不充分である。しかし、図３の色空間
偏差が、濾紙のマトリックスを使用した図１における△
Ｅ４．４に対して、２９．３に増加するにつれ、重合ウ
レタンを基材としたフィルムマトリックスは、ベンズ・
ジョーンズ蛋白に関して劇的に増大した感度を提供した
ことは驚くべきことである。
層またはマトリックスに含浸させた単一指示薬色素では
、試験試料中の低い値のアルブミンの有無及び濃度を測
定する方法は提供されないことが実証された。アルブミ
ン１０ｍｇ／ｄＬを含んだ溶液については、アルブミン
Ｏｍｇ／ｄＬを含んだ対照溶液との間での色空間偏差（
△Ｅ）は３．２にすぎなかった。この色空間偏差では、
肉眼での識別には不充分である。しかし、図３の色空間
偏差が、濾紙のマトリックスを使用した図１における△
Ｅ４．４に対して、２９．３に増加するにつれ、重合ウ
レタンを基材としたフィルムマトリックスは、ベンズ・
ジョーンズ蛋白に関して劇的に増大した感度を提供した
ことは驚くべきことである。
予測できないことだが、ベンズ・ジョーンズ蛋白試験に
関しては、−段と感度が増大することが図４において分
かった。図４の場合では、二指示試薬組成物が重合ウレ
タンを基材としたフィルムマトリックスに組み込まれて
いた。図３に比較すると、色空間指数は２９．３から４
８．９に増加し、色の分解度及びベンズ・ジョーンズ蛋
白に対する感度において予測できない向上が見られた。
関しては、−段と感度が増大することが図４において分
かった。図４の場合では、二指示試薬組成物が重合ウレ
タンを基材としたフィルムマトリックスに組み込まれて
いた。図３に比較すると、色空間指数は２９．３から４
８．９に増加し、色の分解度及びベンズ・ジョーンズ蛋
白に対する感度において予測できない向上が見られた。
図４は、さらに、アルブミン１０ｍｇ／ｄＬを含んだ溶
液についてΔＥ値が、単一の指示薬色素を用いた図４に
おける視覚的に認知不可能な△Ｅ値である３、２に対し
、視覚的に認知可能な値の７．１にまで増加したことか
ら、重合ウレタンを基材とするフィルムマトリックスに
組み込んだ二指示試薬組成物をアルブミンの試験に使用
する利点を示している。
液についてΔＥ値が、単一の指示薬色素を用いた図４に
おける視覚的に認知不可能な△Ｅ値である３、２に対し
、視覚的に認知可能な値の７．１にまで増加したことか
ら、重合ウレタンを基材とするフィルムマトリックスに
組み込んだ二指示試薬組成物をアルブミンの試験に使用
する利点を示している。
全般的には、図１〜４及び表ＩＩ＋は、濾紙のマトリッ
クスまたは重合ウレタンを基材としたフィルムマトリッ
クスに含浸させた二指示試薬組成物が、液体試験試料中
の蛋白総合有量、特に３０ｍ ｇ／ｄ Ｌ未満の低蛋白
値の試験において色の分解度及び試験感度を改善するこ
とを示している。本発明の方法及び組成物により、試薬
含有キャリヤマトリックスと蛋白をＯｍｇ／ｄｉ−から
ｌ Ｏｍｇ／ｄＬの間の値で含んだ試験試料との接触の
結果である変色を視覚的に識別することができ、このた
めより正確で信頼性の高い試験が提供された。本発明は
、さらに、分析の妨害となる高分子蛋白を本質的に除去
するキャリヤーマトリックスを提供することにより、そ
して低濃度の低分子蛋白の検出及び測定を可能とするに
充分な感度を有する試薬組成物を提供することにより、
試験試料中のベンズ・ジョーンズ蛋白及びその他の低分
子蛋白について迅速かつ正確に試験する方法を提供した
。
クスまたは重合ウレタンを基材としたフィルムマトリッ
クスに含浸させた二指示試薬組成物が、液体試験試料中
の蛋白総合有量、特に３０ｍ ｇ／ｄ Ｌ未満の低蛋白
値の試験において色の分解度及び試験感度を改善するこ
とを示している。本発明の方法及び組成物により、試薬
含有キャリヤマトリックスと蛋白をＯｍｇ／ｄｉ−から
ｌ Ｏｍｇ／ｄＬの間の値で含んだ試験試料との接触の
結果である変色を視覚的に識別することができ、このた
めより正確で信頼性の高い試験が提供された。本発明は
、さらに、分析の妨害となる高分子蛋白を本質的に除去
するキャリヤーマトリックスを提供することにより、そ
して低濃度の低分子蛋白の検出及び測定を可能とするに
充分な感度を有する試薬組成物を提供することにより、
試験試料中のベンズ・ジョーンズ蛋白及びその他の低分
子蛋白について迅速かつ正確に試験する方法を提供した
。
−指示試薬組成物を用いると、キャリヤーマドリックス
が濾紙であるか、重合ウレタンを基材とするフィルム、
マトリックス、膜または層であるかに係わらず、色の差
異が強調されることが実証された。さらに、重合ウレタ
ンを基材としたフィルムマトリックスにおいて二指示試
薬組成物を用いることにより、低分子蛋白に対する感度
の劇的な増大が見られ、その結果、低分子蛋白の試験に
対して簡易な乾式試験細片手法が提供された。図１〜４
及び表ＩＩ＋において実証したとおり、ベンズ・ジョー
ンズ蛋白１００ ｍｇ／ｄＬを含んだ溶液を濾紙のマト
リックスに組み込んだ単一の指示薬色素を用いて試験し
た場合、ベンズ・ジョーンズ蛋白を含まない溶液の試験
と比較して、感知不可能な色偏差である４、４が得られ
た。しかし、色の分解度及び試験感度は、該単一色素を
重合ウレタン含有のマトリックスに組み込むことで改良
され、これにより色偏差は容易に感知可能な値である２
９．３となった。そのうえ、重合ウレタンを基材とする
フィルムマトリックスに組み込んだ二指示試薬組成物を
使用すると、さらに、色偏差が４８．９という思い掛け
ない値にまで増加するほど、色分鮮度及び試験感度か劇
的に向上した。
が濾紙であるか、重合ウレタンを基材とするフィルム、
マトリックス、膜または層であるかに係わらず、色の差
異が強調されることが実証された。さらに、重合ウレタ
ンを基材としたフィルムマトリックスにおいて二指示試
薬組成物を用いることにより、低分子蛋白に対する感度
の劇的な増大が見られ、その結果、低分子蛋白の試験に
対して簡易な乾式試験細片手法が提供された。図１〜４
及び表ＩＩ＋において実証したとおり、ベンズ・ジョー
ンズ蛋白１００ ｍｇ／ｄＬを含んだ溶液を濾紙のマト
リックスに組み込んだ単一の指示薬色素を用いて試験し
た場合、ベンズ・ジョーンズ蛋白を含まない溶液の試験
と比較して、感知不可能な色偏差である４、４が得られ
た。しかし、色の分解度及び試験感度は、該単一色素を
重合ウレタン含有のマトリックスに組み込むことで改良
され、これにより色偏差は容易に感知可能な値である２
９．３となった。そのうえ、重合ウレタンを基材とする
フィルムマトリックスに組み込んだ二指示試薬組成物を
使用すると、さらに、色偏差が４８．９という思い掛け
ない値にまで増加するほど、色分鮮度及び試験感度か劇
的に向上した。
低分子蛋白の試験において重合ウレタンを基材としたフ
ィルム、層または膜を二指示試薬組成物のキャリヤーマ
トリックスとして使用することに関しては、すべてのウ
レタン基材のフィルムマトリックスが蛋白含有溶液との
接触に同等に反応するわけではなく、したがって、いく
つかのウレタン基材のマトリックスは、高いブランク色
の発生度、蛋白値開での色の識別の不充分さ及び／また
は水性相への色の浸出が理由で、不適当であることが分
かった。実施例１の組成物Ａ及び組成物Ｂを硬化させる
ことにより得られる重合ウレタンを基材とする二つのマ
トリックスは、これらの欠点を示さず、したがって好ま
しいことが示された。しかし、組成物Ａ及びＢは、良好
な蛋白測定を行なうために本発明の方法に従ってマトリ
ックスとして用いることができる唯一の組成物でないこ
とは強調されるべきである。
ィルム、層または膜を二指示試薬組成物のキャリヤーマ
トリックスとして使用することに関しては、すべてのウ
レタン基材のフィルムマトリックスが蛋白含有溶液との
接触に同等に反応するわけではなく、したがって、いく
つかのウレタン基材のマトリックスは、高いブランク色
の発生度、蛋白値開での色の識別の不充分さ及び／また
は水性相への色の浸出が理由で、不適当であることが分
かった。実施例１の組成物Ａ及び組成物Ｂを硬化させる
ことにより得られる重合ウレタンを基材とする二つのマ
トリックスは、これらの欠点を示さず、したがって好ま
しいことが示された。しかし、組成物Ａ及びＢは、良好
な蛋白測定を行なうために本発明の方法に従ってマトリ
ックスとして用いることができる唯一の組成物でないこ
とは強調されるべきである。
それにもかかわらず、実施例１の組成物Ａまたは組成物
Ｂのいずれかを硬化させることによって得られる膜、層
またはフィルムには長所及び短所がある。例えば、実施
例１の組成物へを硬化させることによって得られる膜ま
たはフィルムは、試験試料が膜から拭き取られて乾燥し
た後でも、イｑれた色の識別及び優れた色の安定性を提
供する。
Ｂのいずれかを硬化させることによって得られる膜、層
またはフィルムには長所及び短所がある。例えば、実施
例１の組成物へを硬化させることによって得られる膜ま
たはフィルムは、試験試料が膜から拭き取られて乾燥し
た後でも、イｑれた色の識別及び優れた色の安定性を提
供する。
例えば、実施例１の組成物Ａを硬化させることによって
得られる膜またはフィルムを用いた被検体試験具につい
ては、アルブミンまたはベンズ・ジョーンズ蛋白との接
触の結果である変色は、数日間にわたって色の強さまた
は深さにおいて目に見える劣化は示さなかった。しかし
、組成物Ａから得られたフィルムの色の発色は遅く、し
たがって、このフィルムは、通常の含浸／読取りの形態
で使用される場合、制限を受けるかもしれない。
得られる膜またはフィルムを用いた被検体試験具につい
ては、アルブミンまたはベンズ・ジョーンズ蛋白との接
触の結果である変色は、数日間にわたって色の強さまた
は深さにおいて目に見える劣化は示さなかった。しかし
、組成物Ａから得られたフィルムの色の発色は遅く、し
たがって、このフィルムは、通常の含浸／読取りの形態
で使用される場合、制限を受けるかもしれない。
その結果、組成物Ａから得られたフィルムマトリックス
を使用した場合、ピペットを使って試験試料をフィルム
マトリックス上に移し、約２分間フィルムマトリックス
と接触させた。そして、アルブミンとの接触に応答して
発生した色を、視覚または機器を使用して、また、試験
試料がマトリックスと接触したままの状態または試料が
マトリックスから拭き取られた後で測定した。
を使用した場合、ピペットを使って試験試料をフィルム
マトリックス上に移し、約２分間フィルムマトリックス
と接触させた。そして、アルブミンとの接触に応答して
発生した色を、視覚または機器を使用して、また、試験
試料がマトリックスと接触したままの状態または試料が
マトリックスから拭き取られた後で測定した。
実施例１の組成物Ｂを硬化させることによって得られた
ウレタンを基材としたフィルムマトリックスもまた、非
常に良好な色分鮮度及び識別を提供した。しかし、実施
例１の組成物Ａを硬化させて成形したキャリヤーマトリ
ックスと異なり、実施例１の組成物Ｂを硬化さぜること
によって得られたフィルムマトリックス上の色の発色は
速く、したがって、このフィルムマトリックスは、アル
ブミンの試験において通常の含浸／読取り形式で使用す
ることができた。しかし、ベンズ・ジョーンズ蛋白の試
験においては色の発色は遅く、発色が完了するには２分
間が必要であった。
ウレタンを基材としたフィルムマトリックスもまた、非
常に良好な色分鮮度及び識別を提供した。しかし、実施
例１の組成物Ａを硬化させて成形したキャリヤーマトリ
ックスと異なり、実施例１の組成物Ｂを硬化さぜること
によって得られたフィルムマトリックス上の色の発色は
速く、したがって、このフィルムマトリックスは、アル
ブミンの試験において通常の含浸／読取り形式で使用す
ることができた。しかし、ベンズ・ジョーンズ蛋白の試
験においては色の発色は遅く、発色が完了するには２分
間が必要であった。
したがって、変色を起こさせるには、試験細片を比較的
長時間、尿試料中に含浸したままにしなければならない
であろう。この欠点を克服するには、尿試料を試験パッ
ド上にピペットで移し、応答の有無について試験細片を
検査する前に２分間の反応時間を置（。そのうえ、試料
をマトリックスから拭き取った後、含有蛋白に応答して
発生した色は褪せ始め、このため、変色の程度及び深さ
は、液体試験試料を試験細片から除去した直後に測定し
なければならない。
長時間、尿試料中に含浸したままにしなければならない
であろう。この欠点を克服するには、尿試料を試験パッ
ド上にピペットで移し、応答の有無について試験細片を
検査する前に２分間の反応時間を置（。そのうえ、試料
をマトリックスから拭き取った後、含有蛋白に応答して
発生した色は褪せ始め、このため、変色の程度及び深さ
は、液体試験試料を試験細片から除去した直後に測定し
なければならない。
したがって、本発明の重要な特徴によると、尿またはそ
の他の液体試験試料中の蛋白総合有量または低分子蛋白
含有量のより正確でより信頼性が高い試験を二指示試薬
組成物を用いて実施することができる。二指示試薬組成
物は、試験の色分鮮度を改善し、したがって、試験の感
度、特に約３０ｍｇ／ｄＬ及びそれ以下の低いアルブミ
ン値での感度を改善する。さらに、重合ウレタンを基材
とする膜、フィルムまたは層を二指示試薬組成物のキャ
リヤーマトリックスとして含む乾式試験細片を用いて試
験を実施することにより、試験試料中の低分子蛋白、例
えばベンズ・ジョーンズ蛋白の有無及び／または濃度を
測定する新規で思い掛けないほど正確な方法が捉供され
る。
の他の液体試験試料中の蛋白総合有量または低分子蛋白
含有量のより正確でより信頼性が高い試験を二指示試薬
組成物を用いて実施することができる。二指示試薬組成
物は、試験の色分鮮度を改善し、したがって、試験の感
度、特に約３０ｍｇ／ｄＬ及びそれ以下の低いアルブミ
ン値での感度を改善する。さらに、重合ウレタンを基材
とする膜、フィルムまたは層を二指示試薬組成物のキャ
リヤーマトリックスとして含む乾式試験細片を用いて試
験を実施することにより、試験試料中の低分子蛋白、例
えばベンズ・ジョーンズ蛋白の有無及び／または濃度を
測定する新規で思い掛けないほど正確な方法が捉供され
る。
本発明の精神及び範囲に反することなく、以上に述べた
本発明の数多くの修正及び変更を構成することができる
ことは明らかであり、したがって、添付の特許請求の範
囲に明記したような限定以外は課されるものではない。
本発明の数多くの修正及び変更を構成することができる
ことは明らかであり、したがって、添付の特許請求の範
囲に明記したような限定以外は課されるものではない。
図１は、単一の指示薬色素、テトラブロモフェノールブ
ルー（ＴＢＰＢ）を組み込んだ濾紙の吸水性マトリック
スをから成る乾式試験細片を使用した場合の、アルブミ
ンをそれぞれ０．１０．５０及び１００ｍｇ／ａＬ含む
液体試料ならびにベンズ・ジョーンズ蛋白１００ ｍｇ
／ｄＬを含む液体試料の試験を示す色空間プロットであ
り： 図２は、二指水薬色素、テトラブロモフェノルブルー（
ＴＢＰＢ）及びメチルオレンジ（ＭＯ）を組み込んだ濾
紙の吸水性マトリックスから成る乾式試験細片を使用し
た場合の、アルブミンをそれぞれ０．１０．５０及び１
００ ｍｇ／ｄＬ含む液体試料ならびにベンズ・ジョー
ンズ蛋白１００ ｍｇ／ｄＬを含む液体試料の試験を示
す色空間プロットであり；図３は、単一の指示薬色素、
テトラブロモフェノールブルー（ＴＢＰＢ）を組み込ん
だ重合ウレタン含有フィルムから成るキャリヤーマトリ
ックスを含む乾式試験細片を使用した場合の、アルブミ
ンをそれぞれ０．１０．５０及び１００ ｍｇ／ｄＬ含
む液体試料ならびにベンズ・ジョーンズ蛋白Ｉｏｎ ｍ
ｇ／ｄＬを含む液体試料の試験を示す色空間プロットで
あり；そして 図４は、二指水薬色素、テトラブロモフエノルブルー（
ＴＢＰＢＩ及びメチルオレンジ〔ＭＯ）を組み込んだ重
合ウレタン含有フィルムから成るキャリヤーマトリック
スを含む乾式試験細片を使用した場合の、アルブミンを
それぞれ０．１０．５０及びｔｏｏ ｍｇ／ｄＬ含む液
体試料ならびにベンズ・ジョーンズ蛋白１００ ｍｇ／
ｄＬを含む液体試料の試験を示す色空間プロットである
。
ルー（ＴＢＰＢ）を組み込んだ濾紙の吸水性マトリック
スをから成る乾式試験細片を使用した場合の、アルブミ
ンをそれぞれ０．１０．５０及び１００ｍｇ／ａＬ含む
液体試料ならびにベンズ・ジョーンズ蛋白１００ ｍｇ
／ｄＬを含む液体試料の試験を示す色空間プロットであ
り： 図２は、二指水薬色素、テトラブロモフェノルブルー（
ＴＢＰＢ）及びメチルオレンジ（ＭＯ）を組み込んだ濾
紙の吸水性マトリックスから成る乾式試験細片を使用し
た場合の、アルブミンをそれぞれ０．１０．５０及び１
００ ｍｇ／ｄＬ含む液体試料ならびにベンズ・ジョー
ンズ蛋白１００ ｍｇ／ｄＬを含む液体試料の試験を示
す色空間プロットであり；図３は、単一の指示薬色素、
テトラブロモフェノールブルー（ＴＢＰＢ）を組み込ん
だ重合ウレタン含有フィルムから成るキャリヤーマトリ
ックスを含む乾式試験細片を使用した場合の、アルブミ
ンをそれぞれ０．１０．５０及び１００ ｍｇ／ｄＬ含
む液体試料ならびにベンズ・ジョーンズ蛋白Ｉｏｎ ｍ
ｇ／ｄＬを含む液体試料の試験を示す色空間プロットで
あり；そして 図４は、二指水薬色素、テトラブロモフエノルブルー（
ＴＢＰＢＩ及びメチルオレンジ〔ＭＯ）を組み込んだ重
合ウレタン含有フィルムから成るキャリヤーマトリック
スを含む乾式試験細片を使用した場合の、アルブミンを
それぞれ０．１０．５０及びｔｏｏ ｍｇ／ｄＬ含む液
体試料ならびにベンズ・ジョーンズ蛋白１００ ｍｇ／
ｄＬを含む液体試料の試験を示す色空間プロットである
。
Claims (10)
- （１）第一の色から第二の色への検出可能かつ測定可能
な変色をすることができる第一の指示薬色素； 第一の指示薬色素とほぼ同等なｐＨにおいて、第一の指
示薬色素の第二の色と異なる色への検出可能かつ測定可
能な変色をすることができる第二の指示薬色素；及び 第一の色素の変色ｐＨ及び第二の色素の変色ｐＨに充分
に近似した一定のｐＨを維持するための適当な緩衝剤 から成ることを特徴とする、蛋白含有液体試験試料と接
触した際に充分な変色を呈示して液体試験試料中の蛋白
の有無及び／または濃度を示すことができる組成物。 - （２）（ａ）液体試料と； 第一の色から第二の色への検出可能かつ測定可能な変色
をすることができる第一の指示薬色素、第一の指示薬色
素とほぼ同等なｐＨにおいて、第一の指示薬色素の第二
の色と異なる色への検出可能かつ測定可能な変色をする
ことができる第二の指示薬色素、及び 第一の色素の変色ｐＨ及び第二の色素の変色ｐＨに充分
に近似した一定のｐＨを維持するための適当な緩衝剤 から成る二指示試薬組成物とを接触させ、そして（ｂ）
該二指示試薬組成物の変色の強さ及び／または程度から
液体試料中の蛋白の有無及び／または濃度を測定するこ
と を特徴とする液体試料中の蛋白の有無及び／または濃度
を測定する方法。 - （３）支持細片； 試薬試験パッド；及び 該試薬試験パッドに組み込んだ二指示試薬組成物 から成り、該二指示試薬組成物が第一の色から第二の色
への検出可能かつ測定可能な変色をすることができる第
一の指示薬色素；第一の指示薬色素とほぼ同等なｐＨに
おいて、第一の指示薬色素の第二の色と異なる色への検
出可能かつ測定可能な変色をすることができる第二の指
示薬色素；及び 第一の色素の変色ｐＨ及び第二の色素の変色ｐＨに充分
に近似した一定のｐＨを維持するための適当な緩衝剤 から成ることを特徴とする、液体試験試料中の蛋白の有
無及び／または濃度を測定するための被検体試験具。 - （４）（ａ）液体試料と； 第一の色から第二の色への検出可能かつ測定可能な変色
をすることができる第一の指示薬色素、第一の指示薬色
素とほぼ同等なｐＨにおいて、第一の指示薬色素の第二
の色と異なる色への検出可能かつ測定可能な変色をする
ことができる第二の指示薬色素、及び 第一の色素の変色ｐＨ及び第二の色素の変色ｐＨに充分
に近似した一定のｐＨを維持するための適当な緩衝剤 から成る二指示試薬組成物とを接触させ、そして（ｂ）
該二指示試薬組成物の変色の強さ及び／または程度から
液体試料中の蛋白の有無及び／または濃度を測定するこ
と を特徴とする液体試料中の少量から痕跡量の蛋白を検出
及び測定する方法。 - （５）液状ビヒクル中に分散した重合性ウレタン化合物
から重合され、試験流体中の蛋白と反応することができ
る二指示試薬組成物を中に均一に組み込んで成るマトリ
ックス層を含んで構成され、該反応が該マトリックスに
おける検出可能な変化を発生させる反応であり、該マト
リックスが該蛋白に対して透過性である試験流体中の蛋
白の相対濃度を検出するための試験具。 - （６）液状で担持され、ウレタン含有物質中に均一に組
み込まれた二指示試薬組成物を含み、該二指示試薬組成
物が蛋白と反応して該ウレタン含有物質において検出可
能な変色を起こすことができるウレタン含有重合性物質 から成ることを特徴とする、液体中の蛋白の存在を感知
するための試薬細片。 - （７）除去可能な液状ビヒクル中に分散した重合性ウレ
タン化合物の層から成形した蛋白透過性の層（該液状ビ
ヒクルの相当な部分は、分散した層状の該ウレタン化合
物が重合する間に除去）；及び 重合物質の該層中に均一に組み込まれた蛋白試薬組成物 から成ることを特徴とする、生物学的流体中の蛋白の相
対濃度を測定するための物品。 - （８）除去可能な液状ビヒクル中に分散した完全には硬
化していない重合性物質中に所定の量の試薬組成物を混
合させて試薬含有マトリックス材を成形し； 該試薬含有マトリックス材を層状に成形し；そして 該液状ビヒクルを除去しながら該層を乾燥させて該重合
性物質を重合し、蛋白に対して透過性であり該所定の蛋
白が乾燥したマトリックス材層に浸透する際に該蛋白と
反応することができる試薬組成物を含有する乾燥したマ
トリックス材層を成形すること を特徴とする試験流体中の蛋白の有無を決定するための
試験具の製法。 - （９）除去可能な液状ビヒクル中に分散した完全には硬
化していない重合性物質の層を成形し；該液状ビヒクル
を除去しながら該層を乾燥させて該重合性物質を重合し
、蛋白が乾燥したマトリックス材層に浸透する際に該蛋
白と反応することができる試薬組成物に対して透過性で
ある乾燥したマトリックス材層を成形し； 該乾燥したマトリックス材層と該試薬組成物とを接触さ
せて、該乾燥したマトリックス材層に該試薬組成物を均
一に含浸させ； 試薬組成物を含浸した該マトリックス材層を乾燥させ； 試薬組成物を含浸した該マトリックス材層の表面と該試
験流体とを接触させて、該マトリックス材層において視
覚的に検出可能な変色を起こさせ；そして 該変色の程度に基づいて該蛋白の濃度を測定すること を特徴とする試験流体中の蛋白濃度の測定法。 - （１０）重合性ウレタン化合物を除去可能な液状ビヒク
ル中に分散させて、完全には硬化していない重合性の層
を形成する組成物を成形し； 完全には硬化していない該膜の組成物の層を支持体の表
面に塗布し； 該ウレタン化合物を層状に重合させ、分散した層状の該
ウレタン化合物の重合の間に液状ビヒクルの相当な部分
を除去して、ベンス・ジョーンズ蛋白に対して透過性で
ある重合ウレタンを基材としたポリマーの硬化連続層を
成形すること を特徴とする、生物学的流体において見られるアルブミ
ン及びその他の高分子量蛋白を選別・排除しつつベンス
・ジョーンズ蛋白に対して透過性であるウレタンを基材
としたポリマーの連続層を含む試験具の製法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/251,297 US5049358A (en) | 1988-09-30 | 1988-09-30 | Composition and test device for assaying for proteins |
| US251297 | 1988-09-30 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02122264A true JPH02122264A (ja) | 1990-05-09 |
| JPH0752199B2 JPH0752199B2 (ja) | 1995-06-05 |
Family
ID=22951329
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1246631A Expired - Fee Related JPH0752199B2 (ja) | 1988-09-30 | 1989-09-25 | 蛋白を試験するための試験具及び試験方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5049358A (ja) |
| EP (1) | EP0361244B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0752199B2 (ja) |
| AU (1) | AU613508B2 (ja) |
| CA (1) | CA1337752C (ja) |
| DE (1) | DE68917399T2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100241205B1 (ko) * | 1996-01-15 | 2000-02-01 | 니시무로 타이죠 | 수지밀봉형 반도체장치 및 그 제조방법 |
| WO2005071420A1 (ja) * | 2004-01-23 | 2005-08-04 | Arkray, Inc. | 蛋白質測定方法 |
| WO2014073349A1 (ja) * | 2012-11-06 | 2014-05-15 | 栗田工業株式会社 | 溶解物濃度の自動測定方法 |
Families Citing this family (35)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2001557A1 (en) * | 1988-12-19 | 1990-06-19 | Timothy M. Coryn | Test method and device for total protein assay |
| US5550061A (en) * | 1989-02-02 | 1996-08-27 | Hybrivet Systems, Inc. | Test swab and method of using same |
| US5330917A (en) * | 1989-02-02 | 1994-07-19 | Hybrivet Systems, Inc. | Test swab device and method of detecting lead, mercury, arsenic, and bismuth |
| US5364792A (en) * | 1989-02-02 | 1994-11-15 | Hybrivet Systems, Inc. | Test swab and method of making and using same |
| US5096833A (en) * | 1990-05-29 | 1992-03-17 | Miles Inc. | Method and device for determining protein using carrier matrix composed of urethane, water insouble inorganic compound and insoluble organic compound and method of making the device |
| US5155046A (en) * | 1990-08-10 | 1992-10-13 | Puritan-Bennett Corporation | System and method for measuring oxygen in the presence of halothane |
| US5801060A (en) * | 1990-10-10 | 1998-09-01 | Chimera Research & Chemical, Inc. | Method of using automated analyzer testing of urine for presence of a pH abnormality with single reagent indicator |
| US6468805B1 (en) | 1990-10-10 | 2002-10-22 | Chimera Research And Chemical Inc. | Automated analyzer testing of urine for presence of a pH abnormality |
| EP0579748A4 (en) * | 1991-04-08 | 1995-05-17 | Environmental Test Systems | MULTI-LAYER STRUCTURE OF TEST DEVICE. |
| ATE143144T1 (de) * | 1991-06-06 | 1996-10-15 | Bayer Ag | Teststreifen mit merocyanin und nitro- oder nitroso-substituierten polyhalogenierten phenolsulfonphthaleinen als protein-indikatoren |
| WO1993003649A1 (en) * | 1991-08-23 | 1993-03-04 | Gillette Canada Inc. | Sustained-release martrices for dental application |
| US5340581A (en) * | 1991-08-23 | 1994-08-23 | Gillette Canada, Inc. | Sustained-release matrices for dental application |
| US5326707A (en) * | 1991-11-29 | 1994-07-05 | Miles Inc. | Composition and device for urinary protein assay and method of using the same |
| US5267532A (en) * | 1992-05-05 | 1993-12-07 | Anitox Corporation | pH-indicating material and cat litter containing same |
| US5662067A (en) * | 1996-04-29 | 1997-09-02 | Cherokee Sun Corporation | Insect repelling cat litter |
| IT1292163B1 (it) * | 1997-06-13 | 1999-01-25 | Giorgio Torelli | Dispositivo immunocromatografico a fissazione dell'analita |
| DE19741335C1 (de) * | 1997-09-19 | 1999-06-10 | Bosch Gmbh Robert | Sensormembran einer Optode sowie Verfahren, Vorrichtung und deren Verwendung zur Bestimmung von Gasen in Gasgemischen |
| US6602677B1 (en) * | 1997-09-19 | 2003-08-05 | Promega Corporation | Thermostable luciferases and methods of production |
| US5908787A (en) * | 1997-09-23 | 1999-06-01 | Bayer Corporation | Total protein detection method |
| US20030044856A1 (en) * | 1997-09-26 | 2003-03-06 | Puschett Jules B. | Method of determining volume dependent hypertension through protein reduction in phosphorylation or concentration and related apparatus |
| US20010039010A1 (en) * | 1998-09-03 | 2001-11-08 | Leigh Alexander Burgoyne | Sample collection medium incorporating material for sample visualization |
| GB9823468D0 (en) | 1998-10-28 | 1998-12-23 | Secr Defence | Novel enzyme |
| GB9925161D0 (en) | 1999-10-26 | 1999-12-22 | Secr Defence | Novel enzyme |
| DE10035911A1 (de) * | 2000-07-21 | 2002-02-07 | Abb Research Ltd | Verfahren und Sensor zum Überwachen von Flüssigkeiten |
| EP1405080B1 (en) * | 2001-06-25 | 2008-03-26 | Bayer Healthcare LLC | Total protein detection methods and devices at low ph |
| EP2040074B1 (en) | 2002-08-09 | 2013-04-24 | ARKRAY, Inc. | Method for assaying urine albumin |
| EP1548443A4 (en) * | 2002-08-09 | 2006-09-06 | Arkray Inc | TEST MEMBER FOR PROTEIN ASSAY AND METHOD OF MANUFACTURING THE SAME |
| GB2426334A (en) * | 2005-05-20 | 2006-11-22 | Orion Diagnostica Oy | Application of a reagent to a matrix material |
| US9804154B2 (en) | 2013-03-12 | 2017-10-31 | Epinex Diagnostics, Inc. | Rapid test for urine albumin and urine creatinine |
| EP3120144A4 (en) * | 2014-03-19 | 2017-08-23 | Vigilant Biosciences, Inc. | Device for detection of disease states and applications of same |
| US9732373B2 (en) | 2014-09-11 | 2017-08-15 | Promega Corporation | Luciferase sequences utilizing infrared-emitting substrates to produce enhanced luminescence |
| CN106370646B (zh) * | 2016-08-16 | 2022-06-28 | 南阳师范学院 | 检测待测样品中蛋白质的方法 |
| DE102017114537A1 (de) * | 2017-06-29 | 2019-01-03 | Endress+Hauser Conducta Gmbh+Co. Kg | Sensormembran, Sensorkappe und optischer Sensor |
| US20200340897A1 (en) | 2017-10-26 | 2020-10-29 | Essenlix Corporation | Devices and methods for monitoring liquid-solid contact time |
| DE102017128564A1 (de) * | 2017-12-01 | 2019-06-06 | Endress+Hauser Conducta Gmbh+Co. Kg | Sensormembran, Sensorkappe, optischer Sensor und Verfahren zur Herstellung einer Sensormembran |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60178356A (ja) * | 1984-02-24 | 1985-09-12 | Dainippon Printing Co Ltd | 体液検査体 |
| JPS62119454A (ja) * | 1985-11-15 | 1987-05-30 | バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト | 透明な試験片系 |
| JPS62138758A (ja) * | 1985-12-12 | 1987-06-22 | Fuji Photo Film Co Ltd | 一体型多層分析要素 |
| JPS62287156A (ja) * | 1986-05-28 | 1987-12-14 | マイルス・ラボラトリ−ズ・インコ−ポレ−テッド | 疎水性試薬を含む試薬層の製造方法 |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2643230A (en) * | 1950-09-12 | 1953-06-23 | American Cyanamid Co | Universal ph indicator |
| US3485587A (en) * | 1956-02-29 | 1969-12-23 | Miles Lab | Protein indicator |
| BE577056A (ja) * | 1956-05-21 | |||
| US3438737A (en) * | 1965-10-01 | 1969-04-15 | Miles Lab | Protein test composition,device and method |
| US3592603A (en) * | 1968-05-01 | 1971-07-13 | A R Stryker | Broad spectrum ph indicator and method |
| DE2510633C3 (de) * | 1975-03-12 | 1978-07-13 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Diagnostisches Mittel zum Nachweis von Eiweiß in Körperflüssigkeiten und dafür geeignete Indikatorfarbstoffe |
| DE2625471A1 (de) * | 1975-06-10 | 1976-12-23 | Grace W R & Co | Polyurethanschaum mit in ihm gebundenem biologischen material und verfahren zu seiner herstellung |
| SE410229B (sv) * | 1976-05-11 | 1979-10-01 | Kockums Chem | Vattenhaltig komposition med reglerad ph-forskjutning vid frysning, samt sett for dess framstellning |
| US4125376A (en) * | 1977-04-22 | 1978-11-14 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Method for detecting water pollutants |
| US4287153A (en) * | 1978-09-20 | 1981-09-01 | Towsend Marvin S | Disposable article with non-leachable saline water indicator |
| US4376827A (en) * | 1979-07-30 | 1983-03-15 | Miles Laboratories, Inc. | Composition, test device and method for determining the ionic strength or specific gravity of a liquid sample utilizing a strong polyelectrolyte |
| JPS58179359A (ja) * | 1982-04-14 | 1983-10-20 | Fuji Photo Film Co Ltd | 蛋白質定量用多層分析材料 |
| DE3222325A1 (de) * | 1982-06-14 | 1983-12-15 | Max Planck Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V., 3400 Göttingen | Verfahren und anordnung zur messung der ionenstaerke |
| CA1261717A (en) * | 1982-12-23 | 1989-09-26 | John R. Bacon | Method and apparatus for oxygen determination |
-
1988
- 1988-09-30 US US07/251,297 patent/US5049358A/en not_active Expired - Fee Related
-
1989
- 1989-07-26 CA CA000606748A patent/CA1337752C/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-08-08 AU AU39427/89A patent/AU613508B2/en not_active Ceased
- 1989-09-16 DE DE68917399T patent/DE68917399T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-09-16 EP EP89117173A patent/EP0361244B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-09-25 JP JP1246631A patent/JPH0752199B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60178356A (ja) * | 1984-02-24 | 1985-09-12 | Dainippon Printing Co Ltd | 体液検査体 |
| JPS62119454A (ja) * | 1985-11-15 | 1987-05-30 | バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト | 透明な試験片系 |
| JPS62138758A (ja) * | 1985-12-12 | 1987-06-22 | Fuji Photo Film Co Ltd | 一体型多層分析要素 |
| JPS62287156A (ja) * | 1986-05-28 | 1987-12-14 | マイルス・ラボラトリ−ズ・インコ−ポレ−テッド | 疎水性試薬を含む試薬層の製造方法 |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100241205B1 (ko) * | 1996-01-15 | 2000-02-01 | 니시무로 타이죠 | 수지밀봉형 반도체장치 및 그 제조방법 |
| WO2005071420A1 (ja) * | 2004-01-23 | 2005-08-04 | Arkray, Inc. | 蛋白質測定方法 |
| US8460877B2 (en) | 2004-01-23 | 2013-06-11 | Arkray, Inc. | Method of protein measurement |
| WO2014073349A1 (ja) * | 2012-11-06 | 2014-05-15 | 栗田工業株式会社 | 溶解物濃度の自動測定方法 |
| JP2014112077A (ja) * | 2012-11-06 | 2014-06-19 | Kurita Water Ind Ltd | 溶解物濃度の自動測定方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE68917399T2 (de) | 1994-12-22 |
| AU613508B2 (en) | 1991-08-01 |
| DE68917399D1 (de) | 1994-09-15 |
| JPH0752199B2 (ja) | 1995-06-05 |
| AU3942789A (en) | 1990-04-05 |
| EP0361244A3 (en) | 1991-05-08 |
| EP0361244A2 (en) | 1990-04-04 |
| EP0361244B1 (en) | 1994-08-10 |
| CA1337752C (en) | 1995-12-19 |
| US5049358A (en) | 1991-09-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH02122264A (ja) | 蛋白を試験するための試験具及び試験方法 | |
| US5077222A (en) | Method for assaying for proteins using a dual indicator reagent composition | |
| JP3061447B2 (ja) | 総蛋白を分析するための試験用パッドの製造方法、試験具、それを用いる測定方法及び試験具の製造方法 | |
| US5240735A (en) | Method of manufacturing a test article for the determination of protein | |
| US4824639A (en) | Test device and a method for the detection of a component of a liquid sample | |
| US5302531A (en) | Composition for the semiquantitative determination of specific gravity of a test sample | |
| US4960710A (en) | Device and method of assaying for trace mounts of proteins | |
| JPH06294790A (ja) | 試験試料のイオン強度または比重を測定するための方法、組成物および試験具 | |
| JP3219874B2 (ja) | 尿タンパク質検定のための改良された組成物および試験具ならびにそれを用いる方法 | |
| JP2519102B2 (ja) | 水性液を比重に関して試験するための組成物及び方法 | |
| MXPA97002503A (en) | Reagent test stress to determine glucose in the san | |
| US5320969A (en) | Method, composition and device for the semiquantitative determination of specific gravity of a test sample | |
| US4786605A (en) | Analytical method and element for protein assay | |
| EP0374594B1 (en) | Test method and device for total protein assay | |
| US5087575A (en) | Composition for determining trace amount of protein | |
| US4230601A (en) | Calibrator composition based upon dialyzed blood serum | |
| EP0041175B2 (en) | Ion specific analytical element | |
| US5443990A (en) | Composition for measuring ionic strength or specific gravity of liquid specimen and test piece prepared from said composition | |
| JPH09133678A (ja) | 流体試料の比重測定方法、試験具および試験片 | |
| JPS61122569A (ja) | グルコースの半定量的測定法、それに用いる試験組成物及び試験具 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |