JPH02124861A

JPH02124861A - イソポリペプチド及びその製造方法

Info

Publication number: JPH02124861A
Application number: JP63264255A
Authority: JP
Inventors: Gyula Szokan; ヂュラ　ソーカーン; Ernoe Thihak; エルノエー　ティハーク; Bela Szende; ベーラ　センデ; Karoly Lapis; カーロイ　ラピシュ; Richard Gaborjanyi; リチャールド　ガーボリャーニュイ; Nee Neuport Marta Almas; マールタ　アルマーシュ　ネーエ　ネウポルト
Original assignee: MTA NOEVENYVEDELMI KUTATO INTEZET; Magyar Tudomanyos Akademia Kutatas es Szervezetelemzo Intezete
Current assignee: MTA NOEVENYVEDELMI KUTATO INTEZET; Magyar Tudomanyos Akademia Kutatas es Szervezetelemzo Intezete
Priority date: 1987-10-21
Filing date: 1988-10-21
Publication date: 1990-05-14
Also published as: FR2622195A1; IT8822389A0; FI884890A0; CN1033633A; KR890006670A; FI884890A7; GB8824278D0; HUT48279A; SE8803765L; DE3835962A1; GB2212810A; GB8824694D0; HU202553B; SE8803765D0; NL8802604A; DK585988D0; ES2012559A6; DK585988A; IT1230584B

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は新規なジアミノモノカルボン酸のイソポリペプ
チド、その塩、光学異性体及びラセミ体、並びに４れら
の化合物の製造方法に関する。

特に１本発明は下記−数式（１）からなる新規なジアミ
ノモノカルボン酸のイソポリペプチドに関する。

（式中　Ｒ４、ｎｓ、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ１、Ｒ’及ヒＲ１
ｌ１ｔ：［しぞれ独自に水素原子又はＣ１〜、のアルキ
ル基（以下、低級アルキル基と呼ぶ）：ｒは平均値ｌＧ
乃至４００；ｍはＯ乃至１０の整数；ｎはＯ乃至１０の
整数）なお、各項でそれぞれ対応する置換基の内容は必
ずしも同一である必要はなく異なっていてもよい。

（従来の技術）ジアミノ−モノカルボン酸のイソペプチドは自然界には
殆んど存在せず、ある種のペプチド抗生物質、バクテリ
アの細胞壁、いくつかのタンパク質の架橋中、およびク
ラビセパミン（ｃｌａｖｉｃｅｐａｍｉｎｅ　）に見ら
れるに過ぎない。これらのうちの成る物は生物学的作用
を示し、微生物学的手法によりつくることができる。

日本人研究者によって、２５〜３０モノマ一単位からな
り互いにイソペプチド結合により結合されたＬ−リシン
ポリマーをストレプトマイセス・アルプラス（ｓｔｒｅ
ｐｔｏｍｙｃｅｓ　ａｌｂｕｌｕｓ）によりつくること
が見出されている〔シマおよびサカイ：アグリ力ルチュ
ラル・アンド・バイオロジカル・ケミストリー（Ａｇｒ
ｉｃ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ、）　４５．２５０３（
１９８１））、このポリーε−Ｌ−リシンは種々のバク
テリアファージを不活性化し〔シマ等：　Ａｇｒｉｃ、
　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ、　４６゜１９１７　（１９８
２））、その生合成的手法がこの製造のために適用され
ている（シマ等：日本農芸化学会誌５７、第２２１〜２
２６頁（１９８３）］。

クラビセパミンは表向（麦角菌）の腐生培養から分離さ
れたりシン富化塩基性タンパク質であり、ヒトに対して
の薬理学的重要性を有する。これらのタンパク質は３０
〜９５モル％の高リジン含有の分子量、２０００〜１７
，０００の化合物に分別することができる。これらの化
合物についての生物学的研究の結果、これらの化合物は
細胞増殖遅延作用を有し、実質的な毒性の副作用をもた
らすことなく動物の腫瘍の生育を抑制する〔ティハク（
ＴｙｉｈＡｋ）：Ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ、１９７８
）。

Ｃ−リシン（ポリ）ペプチドはクラビセバミンの基本的
構造単位であることが、その構造判定に基づき立証され
た〔スジカン（Ｓｚ６に６ｎ）　、ケレメン（Ｋｅｌｅ
ｍｅｎ）及びテレク（Ｔ８ｒ８ｋ）：ジャーナル・オブ
・クロマトグラフィ（Ｊ、Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ、）、
　３６６、第２８３頁（１９８６））。今までクレビセ
パミンの有望な生物学的作用におけるポリイソリシン摺
造の役割については知られていなかった。

合成ポリ−Ｌ−イソリシン、そのアミノ酸とのアシル化
誘導体、及びポリーβ−Ｌ−α、β−ジアミノプロピオ
ン酸の抗ウィルス活性がインド国研究者により測定され
た。その結果、これらのポリペプチドの抗ウィルス活性
は、ＣＡＭ培養中にインターフェロン様抗ウィルス因子
を誘発する能力に関連していることが見出された〔イン
ディアン・ジャーナル・オブ・イクスペリメンタル・バ
イオロジー（Ｉｎｄｉａｎ　Ｊ、　Ｅｘｐｅｒ、　Ｂｉ
ｏｌｏｇｙ）　２０．第２２７頁（１９８２）　；イン
ディアン・ジャーナル・オブ・ケミストリー（Ｉｎｄｉ
ａｎ　Ｊ、　Ｃｈｅｗ、）　２１Ｂ、第４８３頁（１９
８２））。

（発明の開示）化学的構造と生物学的作用との関係を研究するため、本
発明は特定の分子Ｉｔ　（ＭＷ）及び多分散性（１０〜
４００単位）を有するし一ジアミノーモノカルボン酸の
イソペプチドを工業的規模でつくることを目標とした。

この所定の化合物についての基本的要望は高純度、低い
多分散性及び立体化学的高純度であった。

バイオポリマーの作用はその分子量分布に大きく左右さ
れることが知られている。アミノ酸の配置も非常に重要
である。なぜならば別の光学異性体が反対で全く別の生
物学的作用を有することがあるからである。例えば、動
物のＩｌｌｌｌ前がＤ−アルギニンにより抑制されるが
、これがＬ−アルギニンでは逆に刺激されるのである〔
スゼンド（Ｓｚｅｎｄｅ）及びティハク（ＴｙｉｂＡｋ
）　：　ランセット（Ｉａｎｃｅｔ）　７５４６、第８
２４頁（＋９６８）；スゼンド（Ｓｚｅｎｄｅ）：　Ｄ
ｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ、　１９７４）。そのラセミ体
混合物又はラセミ化ポリマーは元の好ましい生物学的作
用を示さなくなる。

上記ポリペプチドは高純度であり、かつ多分散度が小さ
いことが望まれ、この問題を解決するため合成法が選ば
れた。ハル（Ｈｕｌｌ）の方法〔パイオポリマース（Ｂ
ｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ）　１７．２４２７（１９７８）
）によりα−Ｚ−保護りシン活性エステルが、さらにガ
ンゴパデアイ（Ｇａｎｇｏｐａｄｈｙａｙ）及びマーサ
（Ｍａｔｈｕｒ）の方法〔インディアン・ジャーナル・
オブ・ケミストリー（Ｉｎｄｉａｎ　Ｊ、　Ｃｈｅｍ、
）　２１Ｂ、第４８３頁（１９８２））の方法によりα
−ＢＯＣ−保護りシン・ペンタクロロフェニル−エステ
ルがそれぞれ重縮合された。ニジ（Ｎｉｓｈｉ）の方法
〔インターナショナル・ジャーナル・オブ・バイオロジ
カル・マクロモレキュール（Ｉｎｔ、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ
、　Ｍａｃｒｏｍｏｌ、）　２．第５３頁（１９８０月
の方法によりα−Ｚ−Ｌｙｓ−ＯＨがジフェニルホスホ
リルアジド（ＤＩ’ＰＡ）を用いて重合された。この文
献には分子量（ＭＷ）、１分布及びその光沢的純度につ
いてのデータは全くない。しかし１本発明者の経験では
Ｉが低く（最大２５００）、多分散性の大きいもののみ
が低収率で得られ、これらは生物学的作用を有しないも
のであった。クシャワ（Ｋｕｓｈａｔｉａ）及び共同研
究者の合成法〔バイオポリマー（Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒ
）則、第２１９頁（１９８０））及びマーサー（Ｍａｔ
ｈｕｒ）等の合成法（インターナショナル・ジャーナル
・オブ・ペプチド・プロティン・リサーチ（Ｉｎｔ、　
Ｊ、　ＰｅｐｔｉｄｅＰｒｏｔ、　Ｒｅｓ、）　１７．
第１８９頁（１９８１））が分散性の小さい製品を得る
のに最も適しているように思われる。

ε−ポリ−リシン及びδ−ポリ−オルニチンが彼等によ
り合成されている。この方法の原理は双方の化合物とも
同じである。即ち、保護活性エステル又はアジ化物で保
護したアミノ酸メチルエステルから出発し、最初にトリ
ペプチド−メチルエステルを得る。次にアルカリ性加水
分解ののちに、このトリペプチド酸を活性化し工活性エ
ステル型（これはペンタクロロフェニルエステルに変換
される）とする。ω−７ミノ末端の脱保護をおこなった
のち、このトリペプチドは容易に重縮合される。最後に
α−アミノ保護基は除去され、イソポリペプチドが分離
される。これらの手法においては、α−位ではＢＯＤ、
α−位では２−アミノ保護基が用いられる。これら保護
基の除去は強酸を用いた処理及び接触水素添加によりそ
れぞれおこなわれる。上述の文献にはポリマーが分子量
１分子量分布又は光学的純度により特徴づけられていな
い。

本明細書で用いられている略記号は生化学命名について
のＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ委員会の推奨によるもので〔ジャ
ーナル・オブ・バイオロジー・アンド・ケミストリー（
Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｌｌ、）　２４７．第９７７
頁（１９７２））、これにさらに記号を付加し、以下に
要約する。

２：　　　ベンジルオキシカルボニルＢＯＣ：　　　ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−０
Ｎｐ：　　　Ｐ−ニトロフェニル −０５ｎ：　　　Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド−０
Ｐｃｐ：　　ペンタクロロフェニル−０Ｐｆｐ：　　ペ
ンタフルオロフェニル−０Ｂｔ：　　　Ｎ−ヒドロキシ
ベンゾトリアゾリルＢｕＯＣＯ：　　イソブチルオキシ
カルボニルＥｔＯＣＯ：　　エチルオキシカルボニルＮ
、：　　　アジドＥＥＤＱ：　　Ｎ−エトキシカルボニル−２−エトキシ
−１゜２−ジヒドロイソキノリン１！ｔＯＡｃ：　　酢酸エチルＩＩＤＱ：　　Ｎ−イソブトキシカルボニル−２−イソ
ブトキシ−１，２−ジヒドロイソキノリンＴＨＦ：　　
　テトラヒドロフランＤＭＦ：　　　ジメチルホルムアミド）ＩＰＬｃ：　　高性能液体クロマトグラフィ０ＰＴＬ
Ｃ：　　過圧薄層クロマトグラフィＩＥＦ：　　　等電
果束ＭＳ：　　　質量分析法ＮＭＲ：　　　核磁気共鳴分光Ｚｃｏ、　：　　解放されたＣＯ２から測定された２−
基Ｍｖ＝　　　分子量ＴＬＣ：　　　薄層クロマトグラフィＢｕＯＨ：　　　ブタノールＡｃＯＨ：　　酢酸上述の方法を再現した際、いくつかの欠点が判明した。

即ち、オリゴマーの製造においてそのカルボキシル基は
常にメチルエステルで保護され、そのため得られるオリ
ゴマーはそのまま重縮するのには適さない、活性中間体
を得るためにはカルボキシル基をアルカリ加水分解によ
り対応するメチルエステルから解放させなければならな
い、この工程はラセミ化ならびに他の副反応をもたらし
、これにより収率が減少する。さらに残念ながら合成さ
れたポリマーの多分散性は大きい、又、ベンジルオキシ
カルボニル−ω−アミノ保護基の適用はこれが接触水素
添加により除去されるため不利となる。さらに残念なが
ら、このようにして得られたポリマーは本発明で意図す
る生物学的テストにおいて有効なものでないことが判明
した。

本発明は従って上述のような従来の方法の欠点を除去し
得る新しい方法を提供することを目的とするもので、こ
の新規な方法はジアミノジカルボン酸のイソペプチドの
製造で従来試みられたことはなかった。

本発明は以下に説明する方法により上記目的を達成し得
ることを知見したことに基づくものである。即ち、まず
重縮合を直接おこなうことができる活性オリゴマーを製
造する６、ここでカルボキシル基は活性エステル基で保
護され、ペプチド結合はこの活性保護エステル基のアミ
ノ分解よりもかなり速い速度でおこなわれる。ここで本
発明者等は後退（ｂａｃｋｉｎｇ　ｏｆｆ）活性化法が
ジアミノカルボン酸を含むイソペプチド及びその塩を製
造するのに良く適していることを見出した。　Ｃ０ＯＨ
基の一時的保護及び同時の活性化のためにはρ−ニトロ
フェニルエステルが好ましく、ペプチド結合には混合無
水物法が好ましく、これにより後のアミド結合中のアミ
ノ基をＢＯＣ基で保護し、反応に参加しないアミノ基を
２基で保護する。このようにして。

いかなるジアミノ−カルボン酸のホモ又は序列イソペプ
チドをも合成することができる。さらに本発明者等は種
々の分子量のイソポリペプチドを小さい多分散性を以っ
て再現性良く製造し得ることを見出した。得られる中間
体及び最終製品は結晶性の良好な物質で純度も高く、か
つ容易に単離することができる。

本発明はさらに以下の知見に基づくものである。

即ち、ジアミノカルボン酸の場合、ｐ−ニトロフェニル
エステルはカルボキシル基の一時間保護及び同時活性化
のために最も都合のよい基であり、混合無水物法はペプ
チド結合に最適であり、Ｚ基及びＢＯＣ基は他の基の保
護のために選択的に用いられる。

最後に、本発明は以下の知見に基づくものである。即ち
、いかなるジアミノ−モノカルボン酸のホモ又は序列イ
ソペプチドをも上記方法で合成することができ、しかも
その形態が保持され、ラセミ化も生じない。

本発明は上記一般式（■）（置換基は上記定義同様）の
イソポリペプチド、その塩、光学異性体及びラセミ体を
提供するものである。

本発明の方法によれば、上記一般式（１）の化合物及び
その塩は以下のように製造される。

下記一般式（ＩＩ）のモノマー又はオリゴマー：（式中
、ｑは１乃至９の整数；Ｒ１はアミノ保護基（オリゴマ
ーの場合、全てのＲ１が同一）；Ｒ１は保護並びに活性
化のために適したカルボキシル基のタメノ活性エステル
保護基；Ｒ４、ＲＧ、ＲＧ、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ″、　Ｒ”
、　ｍ及びｎは前記のものと同様；但し、オリゴマーの
場合、置換基は同一又は異なるものでよい）を下記一般式（ＩＩＩ）のモノマー：（式中、Ｒ２はアミノ保護基でＲ１とは異なり、かつ８
１基とは別個に選択的に除去し得るもの；Ｘはカルボキ
シル−活性化基（但し、　−ＣＯＸ基はＣＯＯＲ３基よ
りも反応性が大き＆Ｎ）；Ｒ”、Ｒ４、Ｒ５，ＲＧ、Ｒ
’、Ｒ”、Ｒ’、　Ｒ”　、ｍ及びｎは前記と同様）と
カップリングさせ、得られた下記一般式（ＩＶ）の化合
物：（式中、全ての置換基は前記と同様；Ｓは２乃至１０の
整数）からＲ２保護基を除去し、ついでＳ≦９の場合、得られ
た化合物を一般式（ＩＩＩ）のモノマーと反応させるか
、又は常套手段により重縮合させる。ついでＲ１保護基
を生成物から取り除く、得られた一般式（１）の化合物
が遊離塩基の場合は所望により薬剤として使用可能な塩
に変換させ、又はそれが塩の場合は遊離塩基又は別の塩
に変換させることができる。

光学異性体は対応する異性体を出発物質として用いるこ
とにより得ることができる。ラセミ体ポリマーを得たい
場合はそのモノマーのラセミ体を出発物質として使用す
べきである。本発明の方法において、Ｒ１及びＲ２はペ
プチド化学で周知の選択的に除去し得る保護基である。

Ｒ１として好ましいものはベンジルオキシカルボニル基
（Ｚ）であり、Ｒ２として好ましいものは第３ブチルオ
キシカルボニル基（ＢＯＣ）である。−ＯＲ’基はカル
ボキシル基の保護及び活性化の双方のための活性エステ
ル基、例えば−０Ｎｐ、−０Ｓｎ、−０Ｐｃｐ、−０Ｐ
ｆｐ、−０ａｔである。

ＸはＢｕｉＯＣＯ−１ＥｔＯＣＯ−、Ｎ、、−０Ｓｎ、
−０Ｐｃｐ、−０Ｐｆｐであり、具体的には反応条件及
びＲ３の内容に依存し、例えばＢｕｉＯＣｏ−又はＥｔ
ＯＣＯ−基である。本発明の最も有利な方法において出
発物質として用いられる一般式（ＩＩ）のモノマーとし
てＲ１がＺ、　Ｒ”がＢＯＣ１Ｒ３が一０Ｎｐのものが
用いられる７このＢＯＣ基はアシドリシスによって除去
され、ついで保護されたジアミノカルボン酸（Ｒ”＝Ｚ
＝　Ｒ”＝ＢＯＣ）は混合無水物法により結合される。

ＢＯＣ保護基を除去したのち、得られたジペプチドは重
縮合され、又は再び上述のように次の保護されたアミノ
酸で結合され、この工程を繰り返し、てデカペプチドと
する。

最も良い方法は上記結合を繰り返してトリペプチドとし
、得られたオリゴマー（直接、重縮合するのに適したも
の）を予定数のアミノ酸残渣を有するイソポリペプチド
に変換する。２−保護基の除去（即ち、脱保護）は好ま
しくは酢酸中でＨＢｒによっておこなわれ、最終製品は
単離される。

混合無水結合法の最も有利な処理条件は以下の通りであ
る。

（ａ）溶　媒ニアセトニトリル、ＴＨＦ、　ＤＭＦ、ジ
クロロメタン；（ｂ）試薬形成無水物：エチルグロロホルメート、イソ
ブチル−クロロホルメート、ＥＥＤＱ、ＩＩＤＱ　；第３級塩基ニトリエチルアミン、ジイソプロピル−エチ
ルアミン、Ｎ−メチル−モルホリン：（ｃ）活性化時間及び温度：１０〜３０分、−１０℃乃
至−２０℃；（ｄ）アミノ成分塩の中和：反応混合物中でトリエチル
アミン又はジイソプロピル−エチルアミンを用いる。

純粋な最終製品の収率：６０〜８０％。

ホモ−及び序列−イソポリペプチドの双方とも本発明の
方法でつくることができる。

製造されたイソペプチドの分析については最新の分離技
術としてＨＰＬＣｌＯＰＴＬＣ，ＩＥＦ、さらに判定法
としてＩＲ，ＭＳ、　ＮＭＲが用いられた。これらの研
究および対照により化学構造が立証された。

生物学的活性の調査のため、実施例で記載したような方
法が精製された物質が用いられた。即ち、この精製は析
出、コラム及びゲルクロマトグラフィによっておこなわ
れた。

生物学的検査の結果、本発明の方法でつくられたポリー
Ｌ−イソリシン〔重合度（ｐ、ｄ、）：　１０〜４００
〕のうち９重合度４０〜２００（分子量：　５５００〜
２０，３００）のものは細胞増殖抑制作用、即ち生体内
、生体外での抗腫瘍活性を有し、腫瘍転移を抑制し得る
ことが本発明者等により見出された６特に分子量１０．
２００〜１５，４００（重合度＝８０〜１２０）のもの
はその作用が最も大きかった。得られた他の物質は今ま
でのところ、この点についての作用は見出されていない
。その理由は主としてクシャワ（Ｋｕｓｈａｖａ）又は
マーサー（Ｍａｔｈｕｒ）の方法によってもたらされる
高い多分散性及びラセミ化のためである。

クシャワ（Ｋｕｓｈａｗａ）又はハル（Ｈｕｌｌ）の方
法でつくられた重合度８０〜１２０のポリーＬ−イソリ
シンは抗ウィルス活性を全く示さなかった。

従来の方法と比較して本発明の合成法の主たる利点は以
下の通りである。

有望な生物学的作用を有する製品を再現性良く製造する
ことができる。

直接、重縮合し得るオリゴマーを得ることができ、これ
により前述の加水分解工程を省略でき、さらに生物学的
作用の点から非常に危険なラセミ化を回避することがで
きる。

広範な分子量の範囲において、好ましい分子量分布（即
ち、多分散性が小さい）の製品が得られ、これは所望の
生物学的効果を達成するのにも有利である（例えばポリ
マー５ＺＴＰ−１４の場合、分子量は１２，７００±２
００；多分散性：　３．７）。収率も高く、中間体及び
最終製品の純度も高い。さらに結晶化が容易で、単離も
容易である。工程の再現性についても特に困難はない。

ペプチドのカップリング工程での反応時間も短い。

本発明のアミノ保護基の組合せにより接触水素添加によ
る脱保護を省略することができる。これは工業的規模で
の製造において極めて有利となる。

本発明の方法における最も重要な利点はラセミ化のない
反応工程の適用にある。

上述のように、従来の方法で得られた製品は本発明者等
による生物学的テストでの作用効果は認められなかった
。これに対し、本発明で合成されたポリマーは極めて有
望な生物学的活性を示した。

本発明の方法により得られる一般式（１）の化合物にお
いて以下の事項は新規である。

Ｒ４、Ｒ％、ＲＧ、Ｒ？及びＲ１＠　がそれぞれ独自に
水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はブチル
基であり；Ｒ″及びＲ’がそれぞれ水素原子であり；ｒが１０乃至
４００の整数であり：ｍが６．１．２又は３であり；ｎがＯであること。

好ましい化合物群の場合では：Ｒ４、Ｒ５，ＲＧ、Ｒ’及ヒＲ”　カｌｌ’ｔＬ独自二
水素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はブチル
基であり；Ｒ１及びＲ″がそれぞれ水素原子であり；ｒが４０乃至
２００の整数であり；ｍが３で；ｎが０である。

好ましい他の化合物群の場合では：Ｒ４、Ｒ８，ＲＧ、Ｒ’　及ヒＲ”　がツレぞし水素原
子テあり；Ｒ”及びＲ’が水素原子であり；ｒが８０乃至１２０の整数であり；ｍが３で；ｎが０である。

さらに他の好ましい化合物群の場合では二Ｒ４、Ｒ”、
Ｒ’、Ｒ７及びＲ１１１がそれぞれ独自に水素原子、メ
チル基、エチル基、プロピル基又はブチル基であり；Ｒ８及びＲ９がそれぞれ水素原子であり；ｒがｌＯ乃至
１２０の整数であり；ｍが２で；ｎが０である。

さらに他の好ましい化合物群では：Ｒ４、Ｒ５、Ｒ＠、Ｒ７及びＲ１０がそれぞれ独自に水
素原子、メチル基、エチル基、プロピル基又はブチル基
であり：Ｒ１及びＲ９がそれぞれ水素原子であり；ｒが１０乃至
４００の整数であり；ｍが１で；ｎがＯである。

さらに他の好ましい化合物群では：Ｒ４、Ｒ５及びＲ１０がそれぞれ独自に水素原子、メチ
ル基、エチル基、プロピル基又はブチル基であり；Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１及びＲ９がそれぞれ水素原子であり：
ｒが１０乃至４００の整数であり；ｍ及びｎがＯである。

一般式（１）のイソポリペプチドのＬ−立体異性体及び
その塩は腫瘍及びウィルス性疾患に対し極めて効果的で
あることが見出された。

本発明の方法でつくられたポリイソリシンの生物学的活
性は生体外ならびに生体内で検査され。

以下の点で有望な作用が立証された。なお、抗腫瘍作用
は動物の腫瘍系統について測定し、抗ウィルス作用は植
物ウィルスについて検査したものである。

これらの実験において、分子量５５００乃至２５，６０
０のイソポリ−Ｌ−リシンが極めて効果的であり、特に
分子量１０，２００乃至１５，４００のものが最良であ
ることが判明した。

双方の測定において、物質５ＺＴＰ−１４が最も有効で
あった。その特性は以下の通りであった。

−ｚ−保護ポリマーノ粘度：　正＝３１．９２ｃｄ／ｇ
、・Ｚｅｏ、　：　１６．８％（計算値）；　１６．３
（実験値）。

遊離ポリマーはＨＢｒ塩として入手された。

・Ｂｒ成分：　３７．７％（計算値）、　３６．８％（
実験値）。

・Ａ２□；０（即ち、ＵＶ吸収はゼロ）。

精製はエーテルを用いアルコールから析出させることに
よりおこなわれた。

・〔α〕ら’＝＋３２．４’　（ｃ＝２；水）・分子量
＝１２，７００±２００坑Ｊ１Ｅ阪葺ｍ麦細胞増殖に影響を与える化合物の効果は通常、土生蓋の
場合は細胞培養を用い、１盗方の場合は移殖可能な動物
種を用いておこなわれる。したがって、本発明の化合物
はヒト赤血白血病細胞ライン（Ｋ−５６２，力ロリンス
力・インスティチュート（Ｋａｒｏｌｉｎｓｋａ　Ｉｎ
５ｔｉｔｕｔ）、ストックホルム〕、及び４種の移殖可
能なマウス腫（Ｉ１２ｘ。リンパ性白血病、ＰｊｍＤマ
クロファージ誘発腫誘発−ルリッヒ（Ｅｈｒｌｉｃｈ）
がん、ルイス（Ｉｅｗｉｓ）肺腫瘍〕についてテストし
た＠　Ｉ−ｔｘｔ。及びＲ３゜腫、ならびにエールリッ
ヒがんの場合は動物の生存数を効果の指標とした。ＬＬ
Ｔの場合は転移の数及び大きさ（肺又は肝ぞう中での）
を処置及び非処置マウスについて判定した。この実験は
注射用溶液、即ち各化合物をそれぞれ生理食塩水１０ｍ
Ｇに５０ｍｇ溶かした溶液を用いておこなった。

検査された化合物には以下のラベルを付した。

５ＺＴＰ　：本発明の方法でつくられたポリイソ−Ｌ−
リシン；５ＺＴＰ−１４：ポリイソ−し一リシンＨＢｒ塩、遊離
塩基に基づいて計算された分子量：　１２，７００±２
００；多分散性：　３．７（数平均／重量平均）；５Ｚ
ＴＰ−１５：ボリイソ−し−リシンＨＢｒ塩、遊離塩基
に基づいて計算された分子量：　１１，６００±２００
；５ＺＴＰ−１６：ポリイソーＬ−リシンＨＢｒ塩、遊
離塩基に基づいて計算された分子量：　１３，４００±
２００；５ＺＴＰ−１７：ポリイソーＬ−リシンＨＢｒ
塩、遊離塩基に基づいて計算された分子量：　１４，５
００±２００；５ＺＴＯ：本発明の方法で製造されたポ
リイソ−し−オルニチン；５ＺＴＯ−１８：ポリイソ−１，−オルニチン）ｌＢｒ
塩、遊離塩基に基づいて計算された分子量：８　、９００±２００ニド１７：ハル（Ｈｕｌｌ）等により製造されたポリイソ
リシン；に−１７：　クシャワ（Ｋｕｓｈａｗａ）等により製造
されたポリイソリシン；Ａ−３：　α−ポリリシン。

腫瘍細胞増　についての　験結果要約本発明の方法で製造された化合物は、生体外では投与量
に依存しながらも腫瘍細胞数が対照のものと比較して減
少した。この作用は投与量が少ない場合は細胞数の停滞
となって現われたが、投与量が多い場合は細胞を死滅さ
せた。Ｈ−１７及びト１７は全く効果がなかった。α−
ポリリシン（Ａ−３）は細胞数の停滞を示すにとどまっ
た。

生体内実験においては、５ＺＴＰによる処置の結果、そ
の処置を受けた動物の生存数の増加が見られた。

エールリッヒ腫の場合は、この処置によって無腫瘍期間
が非常に長くなり、腫瘍生育は処置停止後のみに見られ
た。

５ＺＴＰによる処置の結果、腫瘍を牌ぞう中に接種した
場合でも肝臓中への転移を完全に防止することができ、
筋肉内に腫瘍を接種した場合でも肺への転移の数及び大
きさの減少が見られた。

従って、本発明によって製造されたポリイソリシン及び
ポリイソオルニチンは腫瘍細胞増殖を抑制し得ることが
立証された。これらの化合物のうち、特にポリイソリシ
ンが極めて強い抑制作用を示した。この抑制作用は動物
の生存率の点で従来の最良の細胞増殖抑制薬と比較し得
るものであった。本発明の化合物はきわめてすぐれた抗
転移作用をも明確に示した。本発明の他の利点は毒性が
小さいことで従来の細胞増殖抑制薬と比べ著るしく小さ
いことである。

例えば、本発明における生物学的検査によれば治療指数
：　（最大許容投与量／最低有効投与量）は１０以上で
あり、これに対し従来の細胞増殖抑制薬のほとんどは通
常、１０をはるかに下回るものである。

又、オス−メス間での生物学的応答の差異は全くなく、
この点でも有利である。

以下、抗腫瘍効果の説明についてのデータを記載する。

１本外夫机表１ａ〜ＩＣは種々の方法で製造したポリイソリシン、
本発明で製造したポリイソオルニチン。

α−ポリリシンのに一５６２細胞の増殖に対する効果を
示している。

実験上のパラメータは以下の通りである。

細胞：　Ｋ−５６２ヒト赤血白血病細胞ライン〔力ロリ
ンス力・インスティチュート（ＫａｒｏｌｉｎｓｋａＩ
ｎｓｔｉｔｕｔｅ）、ストックホルム〕を用いた。

細胞数：　５　Ｘ　ｔｏ’／ｍＱ（ガラス製試験管中に
培地５〜６ＩＩＩＱ収容したものを用いた）。

検査数＝１投与当り３本の試験管を用いた。

培地＝１０％のウシ胎児血清で補なったパーカース（Ｐ
ａｒｋｅｒｓ）　Ｍ−１９９［フロー・ラボラドリース
（Ｆｌｏｗ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、スコツトラ
ンド］。

温度及び雰囲気：３７℃、５％ＣＯ□＋９５％空気。

処置：細胞培地の希釈後、２４時間経過後。

投与量：　１−１０−１００μｇ／ｍＱ。

評価：セルの計数を培地の希釈後、２４時間、４８時間
、７２時間、９６時間経過したのち、バーカーズ６チャ
ンバー（Ｂｕｅｒｋｅｒ’ｓ　ｃｈａｍｂｅｒ）を用い
ておこなった。

実験数：１化合物当り２回。

表１ａは５ＺＴＰ−，１４，５ＺＴＰ−１５，５ＺＴＰ
−１６，５ＺＴＰ−１７及び５ＺＴＰ−１８が、シカシ
特Ｌ：　５ＺＴＰ−１４が、細胞増殖の投与量依存的抑
制効果の大きいことを示している。ここで注目すべきは
、わずか１μｇ／ＩＩＩＱの投与による処置でも明瞭な
抗増殖作用をもたらしたことである。

表１ｂは、これとは反対に、Ｋ−５６２細胞増殖に対す
る影響を全く示さなかったことを示している。

表１０はα−ポリリシンが対照と比較したとき、細胞数
の停滞を及ぼしていることを示している。

しかし、高い投与量（１００μｇ／ｍ１２）の場合でも
細胞数の増加をもたらすことはなかった。

これら表中の値は与えられたその時間でのものである。

細胞数は各投与の場合も対照の場合も３本の試験管につ
いて数えた。

表１ａ（生体外でのに一５６２細胞ラインに対する本発
明の化合物の効果）処置：　１−１０−１００μｇ／＋ａＱ、培養希釈後２
４時間。

表１ａ細胞数Ｘ１０３７ｍＱ（栄養液）ＳＺＴＰ−１４４８時間　　　７２時間　　　９６時間
１００μｇ／ｍＱ　　　　　　　　０　　　　　　０　
　　　　　０１０μｇ／ｍ１２　　　　　　９０　　　
　　　９０　　　　　１５０１μｇ／ｌａＱ対照５ＺＴＰ−１５１００μｇ／ｒｎＱ１０７Ａ　ｇ／１ａＱ１　ｐ　ｇ／ｍＱ対照ＳＺＴＰ−１６１００μｇ／ｌｌｌＱ１０μｇ／ｍＱ１μｇ／ｍＱ対照５ＺＴＰ−１７１００μｇ／ｍＱ１０μｇ／ｍ１２１μｇ／ｍＱ対照５ＺＴＰ−１８１００Ｐｇ／＋ｍＱ１０μｇ／ｍＱ１μｇ／ｍＱ対照表１ｂ花」（斜−でのに−５６２細胞増殖に対するＦｌ−１７
及びに−１７の処置による効果。

処置：　１−１０−１００７Ａ　ｇ／ｍＱ、培地希釈後
２４時間。

Ｌ」細胞数Ｘ１０’／ｍＱ（栄養液）４８時間　　　７２時間　　　９６時時間−１７１００μｇ／ｍＱ　　　　　　　１２５　　　　　２３
０１０　ｐ　ｇ／ｍＱ　　　　　　　１２０　　　　　
２２０１μｇ／ｍＱ　　　　　　　１３０　　　　　２
４０に−１７１００ｕｇ／ｍＱ　　　　　　　１２０　　　　　２２
０１１０１ｔ／ｄ　　　　　　　１２５　　　　　２４
０１μｇ／ｍＱ　　　　　　　１４０　　　　　２４０
対　　照　　　　　　１２０　　　　　２１０表　　１
０生体外でのに一５６２細胞増殖に対するＡ−３の処置に
よる効果。

処置：　１−１０−１００　ｐ　ｇ／ｍＱ、培地希釈後
２４時間。

表１０細胞数Ｘ１０３７ｍＱ（栄養液）４８時間　　　７２時間　　　９６時間１００μｇ／ｒ
ｎＱ　　　　　　１１０　　　　１１０　　　　１００
１０μｇ／ｍＱ　　　　　　１３０　　　　１２０　　
　　１２０１μｇ／ｍＱ　　　　　　１１０　　　　　
１１０　　　　　１００対　　照　　　　　　１２０　
　　　　２５０　　　　　３００生体内検査（ａ）　ＬＬ２１１１腫瘍、５ＺＴＰ−１４の検査腫瘍
源：チエスター・ビーティ・インスティチュート（Ｃｈ
ｅｓｔｅｒ　Ｂｅａｔｔｙ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ）＋ロ
ンドン。

動物種：ＤＢＡ７２同種繁殖、自己繁殖。

動物の体重、性別＝２０〜２３ｇ、メス、１群当り５匹
腫瘍細胞数：１動物当り１０’、腹腔内接種。

処置：腫瘍接種後２４時間経たのち、腹腔的投与の方法
で投与量、５０■／ｋｇで８日間、１日１回の割合で薬
剤投与をおこなう。

対照群：生理食塩水を毎日０．２ｍＱ腹腔内投与した。

評　価：動物の生存数結　果：表２に示す如く、処置が与えられた動物の生存
率は対照のものよりすぐれ、例えば対照マウスでは腫瘍
接種後１０日経過して生存したものは一匹もなかったの
に対し、処置を受けた動物では全ての生存が認められ、
処置を受けた動物で最初に死亡が認められたものは腫瘍
接種から１３日経過後であり、最後の死亡が認められた
ものは１５日経過後であった。

表　　２（Ｉ、、□。ＪＩ瘍の接種を受けたＤＢＡ／２マウスの
生存に対する薬剤の５０■／ｋｇ／日での投与の効果）
ＢＤＦ／　１雑種、自己繁殖。

動物の体重、性別＝２０〜２３ｇ、オス、１群当り５匹
。

腫瘍細胞数＝１動物当り２，８　Ｘ　１０’、腹腔内接
種。

処　置：腫瘍接種後２４時間経たのち、毎日１０■／ｋ
ｇを腹腔的投与。

対照群：生理食塩水を毎日０．２ｍＱ腹腔内投与した。

評　価：動物の生存数結　果：表３は動物の生存数を示している。処置を受け
た全てのマウスは対照マウスを超えて生存した。

（ｃ）エールリッヒ腹水腫瘍、５ＺＴＰ−１４での処置
動物種ニスイス産、非同種繁殖、自己繁殖。

動物の体重及び性別：２０ｇ、オス５匹、メス５匹腫瘍
細胞数：１動物当り１０６処Ｗ：　ｊ１瘍接種２４時間後から開始し、毎日、５０
■／蹟及び７５■／ｋｇを２０日間腹腔内投与した。

対象：生理食塩水を毎日０．２ｍ１２腹腔内投与した。

評価：生存中における毎日の体重測定。

腫瘍接種後５５日間生存した動物を殺し、解剖し、腹水
量を測定し、腹腔内に時折り見られる固形腫瘍形成を記
録する。

結果：表４は腫瘍接種後１６日目がらマウスの体重を示
している。対照マウスは１７日乃至２２日目で死亡した
１体重過剰は腫瘍性腹水の形成を示している。各処置動
物群では１つの群を除いて腫瘍接種後５５日生存した。

これらの動物はついで殺され、腹水の量及び腫瘍内での
固形腫瘍の存否について調べた。これを表５に示す、こ
の結果、腫瘍の全くないものは見当らなかったが５２０
匹の処置を受けたマウスのうち、１６匹は対照マウスの
最後まで生存したものより３３日長く生存した。

表　　４［５ＺＴＰ−１４を５０■／ｋｇ及び７５■／ｋｇ腹腔
内投与した場合（２０日間）の体重及び生存に対する作
用（オス及びメススイスマウスにエールリッヒ腹水腫瘍
を接種した場合、なお腫瘍接種前の体重は２０　ｇ　）
）、表中、「Ｏ」は腫瘍のために死亡；［＋」は他の理
由により死亡したことを意味する。

ｏｏｏｏ。

２０２４２７２４２５．５（表４のつづき）３０．５２６３１３０３１２６２８３２４３　　＋人−旦（エールリッヒ腹水腫瘍で接種し、　５ＺＴＰ−１４を
５０■／−及び７５ｍｇ／ｋｇ投与し、腫瘍接種５５日
後に殺したスイスマウスの腹腔内の腹水斌及び固形腫瘍
）処　　置（ａ）ルイス肺腫瘍（ＩＬＴ）、肺臓中に接種。

動物種：同種繁ＭｃｓｔＢｘ、　ＬＡＴＴ、ゴドロ（Ｇ
５ｄ８１１δ）、ハンガリー動物の体重及び性別：２０〜２３ｇ、メス（対照６匹；
処置４匹）。

腫瘍細胞数：肺臓に接種されたＬＴＴ細胞：５ｘｌＯ’
。

処Ｗ：腫接種種２４時間後から開始し、毎日、７５■ｌ
聴を８日間投与。

評価：腫瘍接種後９日目に動物を殺し、肝臓転移につい
て計数する。

結果８表６は転移数を示している。　５ＺＴＰ−１４で
処置したのちは１個の肝臓転移も見当らなかった。

人−且（ＩＬＴを肺臓に接種したメスＣ，，Ｂｌマウスの肝臓
転移に対する５ＺＴＰ−１４での処理による効果（腹腔
内投与＝７５、／ｋｇを８日間）〕肝臓転移数対　　照　　　　３１　　２０　　６３　　３６　　３
８　　５６（マ＝４０．６６　；　　　　ｓ：１６．０
２　；　　　ｎ＝６）ＳＺＴＰ（４００００（ＩＩ＝４
）動物種：Ｃ，７Ｂ１同種繁殖ＬＡＴＴ、ゴドロ（Ｇ８ｄ
８１１δ）、ハンガリー動物の体重及び性別：２０〜２２ｇ、メス。

動物数：１群当り５匹。

腫瘍細胞：１動物当り５Ｘ１０’細胞、右もも筋肉の右
方最端部に筋肉内投与。腫瘍接種１０日後、腫瘍性端部
を取り除いた。この処置ののち、接種後の１１１日目１
７７日目の間ニ５ＺＴＰ−１４を５０＠／ｋｇの割合で
腹腔内投与した。対象動物に対しては生理食塩水を毎日
０．２■ａ、腹腔内投与した。

評価：腫瘍接種後の１８８日目動物を殺し、肺転移の数
、平均的大きさを立体顕微鏡で判定した。

結果８表７は肺転移の数及び平均的大きさを示している
。５ＺＴＰ−１４による処置により肺転移の数、平均的
大きさの顕著な減少が認められた。

−Ｉ〔ルイス肺腫瘍で腹腔内投与されたＣ、、Ｂｌマウスに
おける肺転移数及び平均的大きさに対する５ＺＴＰ−１
４による処置の効果（腫瘍接種後１１１日目１７７日目
の間に毎日５０■／）ｃｇを腹腔内投与した。〕対照　
　６３．１３±２７．５３　４９．４５±２９．０７Ｓ
ＺＴＰ−１４２６，２９１，１８，８７２０，ｌＯ＋３
５．３８無傷のタバコ植物〔ニコチアナ・タバカム・Ｃ
ｖ・サムサン（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ　ｔａｂａｃｕｍ　
ＣＶ、　Ｓａｍｓｕｎ））でタバコモザイクウィルス（
ＴＭＶ）に感染し易いものを機械的に接種した。この場
合、カーポランダム粉（粒径；５００メツシユ）を研磨
材として使用した。接種材料は０．１Ｍゼーレンセンり
ん酸緩衝液（ｐＨ７，２）中に２００ｒｇの耐精製タバ
コモザイクウィルス（ＴＭＶ　０１血統）を含有させた
。接種３時間後、集用スプレーとして。

５ＺＴＰ−１４で無傷の葉の処理をおこなった。この処
理は３日間連続して繰り返した。症状の程度は接種２週
間後に調査した。葉サンプルとして、接種された植物の
全ての序列の葉、即ち、高さの異なる部分の葉１種々の
日令の葉を接種１４日後に採取した。

ウィルスの濃度は凍結サンプル１ｇから測定した。

葉サンプルをりん酸緩衝液（ｐ）ｌ　７，２）４ｍＱ中
に均一に分散させエッペンドルフ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ
　）遠心分離（約１０．０００ｒ、ρ、ｍで５分間）を
おこなった。この上澄液１５μＱを定量分析用に用いた
。ロケット免疫電気泳動を用い、さらに特異的抗−ＴＭ
Ｗ　（旧）血清（免疫グロブリン／１３を１μＱ）を用
いてウィルス含有量の予測をおこなった。バルビッル酸
ナトリウム緩衝液（０，２阿、ｐＦｌ　８．６）を流動
緩衝液として使用した。

ウィルス含有量は標準目盛曲線により析出ピークの高さ
から計算した。

嚢−」− （抗ウィルス作用の概算例）ＳＺＴＰ−１４による処理　　　ウィルス含有量２００
ｍｇ／ｆｉ　　　　　　　　１１＋ｎｇ／ｍＱ２０■Ｉ
Ｑ　　　　　　　　２４．６■ｌ−２ｍｇ／１２　　　
　　　　２９．３■ｌｍＱ対　　照　　　　　　　　５
１．３■ｌｍＱ本発明によるイソポリペプチドは遊離塩
基及び無毒性塩の双方の形で有効成分として薬剤組成物
中に用いることができる。この場合、イソポリペプチド
を薬品工業で一般に用いられている担体及び補助剤と混
合して用いられる。さらに本発明の化合物は遊離塩基及
び塩の双方の形で植物のウィルス感染に対する抵抗を高
めるために用いることができる。この場合も植物保護用
に一般的に用いられている補助剤と混合して用いられる
。

薬理学的に許容し得る塩としては酸付加塩、例えば塩酸
塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、スルフェート、ニ
トレート、オキサレート、フマレート、グルコネート、
酒石酸塩、マレート、アセテート。

クエン酸塩、ベンゾエート、アルコルベート、ラクテー
ト、アルギン酸塩を用いることができる。

本発明による化合物を活性成分として含む薬剤製品とし
ては注射用溶液、錠剤、糖衣錠、生薬、懸濁液、飲料溶
液、粉末等の状態で用い得る。

本発明の化合物の薬理学的有効投与量は適用方法、患者
の状態等に依存するが、一般に０．０２〜２０■／体重
ｋｇ／日の投与割合を１日２〜４回に分けて用いられる
。経口投与の場合は投与量が多くなる。

有利な薬剤の形態は注射用溶液であり、これは静脈、皮
下、筋肉等を介して投与することができる。

この注射用溶液の製造において、等張ＮａＣ１溶液を所
望により、りん酸緩衝液、アスコルビン酸安定化剤等と
混ぜ合せて使用することができる。

この活性物質は固体又は液体の形の薬剤組成物として投
与することができる。液体の場合は甘味料、芳香料等を
添加してもよい。

固形の経口用投与単位は、錠剤、糖衣錠、カプセル等の
形で用いることが好ましい。これらの薬剤を製造する場
合は上記活性成分を通常の薬剤用担体と混合し、これを
プレスして錠剤としたり、これを糖衣錠に変えたり、こ
れをカプセル中に収容する０通常用いられている充填剤
、添加剤、例えばミルクシュガー、ステアリン酸マグネ
シウム、サッカロース。

タルク、ステアリン酸、ゼラチン、かんでん、ペクチン
、トラガカントゴム、コロイド状シリカゲル。

トウモロコシでん粉、アルギン酸等を用いることができ
る。

植物に対する処理は、本発明の化合物を通常の補助剤、
例えば湿潤剤、固形担体例えばカオリンを用いて固形状
又は液状製剤に変換させて、さらに好ましくはさらに他
の活性成分と組合せておこなうことができる。この場合
、このようにつくられた製剤を本発明の化合物が１乃至
５０ｐｐＨ含むような溶液又は懸濁液として、これを公
知の方法で好ましくは０．５乃至５ｇ／ｈａの割合で植
物に適用する。

（実施例）以下、本発明を実施例に基づいて説明するが、本発明が
これら実施例に限定されるものでない。

（ａ）　Ｎ”−ベンジルオキシカルボニル−し−リシン
−ｐ−ニトロフェニルエステル・ＨＣＩ　：Ｎｏ−ベンジルオキシカルボニル−（ＮＥ−第３ブチル
オキシカルボニル）−Ｌ−リシン−ｐ−ニトロフェニル
エステル１０ｇをトリフルオロ酢酸４０ｍＱ中に溶解さ
せ、これにＥｔＯＡＣ中に溶かした２Ｎ　ＨＣＩの等量
を加えた。これを１時間、室温にて静置したのち、この
溶液を真空中にて半分の量まで蒸発させた。ついでエー
テルをこれに加え、溶液を結晶化させた。

収電：　８．３　ｇ　（９６，０６％）；融点（ｍ、ｐ
、）　：　８３〜８６℃；ＴＬＣＲｔ＝０．６８（ＩＩ
−ブタノール−酢酸−水＝４　：　１　：　１）。

（ｂ）　Ｎ”−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ−（Ｎ’
　”−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ′ε−第３ブチル
オキシカルボニル−し−リシル）−Ｌ−リシン−Ｐ−ニ
トロフェニルエステル：Ｎｏ−ベンジルオキシカルボニル−（ＮＥ−第３ブチル
オキシカルボニル）−Ｌ−リシン７．６９　ｇ　（２０
ミルモル）を無水アセトニトリル中に溶解させた。つい
で、トリエチルアミン２．８ｍＱ　（２０ミリモル）、
さらにイソブチルクロロホルメート２．８ｔＱを激しい
攪拌下で滴下した。

次に、活性化（２０分）ののち、上記工程（ａ）で得た
塩９ｇを加え、ついでこれにアセトニトリル５ｍＱ中に
トリエチルアミン２．８■Ｑ溶かした冷溶液を滴下させ
た。次に、−１０℃で２時間攪拌を続けた。この混合物
を０．５ＭのＨＣＩ　３００＠Ｑで希釈した。その結果
得られた固形製品を集め、乾燥し、酢酸エチルと石油エ
ーテルの１：１混合物から再結晶させた。収量：　１２
．９ｇ（８９，０２％）；■、ｐ、　：　１２８〜１３
１℃０分析値：　−０ＮＰ含有量：　９９．８％。ＴＬ
ＣＲ，＝０．６４　（ＥｔＯＡＣ−シクロヘキサン＝３
　：　１）、　Ｒｆ＝０．９１（ＩＩ−ブタノール−酢
酸−水＝４：ｌ：１）　　；　ＨＰＬＣｔｒ、　＝８．
８分（Ｋ’＝２．２）；カラム：　０ＤＳ−ハイパージ
ル（Ｈｙｐｅｒｓｉｌ）−６（１２５Ｘ４ｍｍ）　；溶
出液：　ＭａＯＨ−ＣＨ３ＣＮ−０，０２Ｍ−ＮａＯＡ
ｃ緩衝液（ｐＨ４）＝４０　：　３０　：　３０（ｖ／
ｖ）　；流速：１ｍＱ／分；検出：　ＵＶ　２５４ｎｍ
。

（ｃ）　Ｎ”−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ”（Ｎ”
ベンジルオキシカルボニル−し−リシン）−Ｌ−リシン
−Ｐ−ニトロフェニルエステル塩酸塩：Ｎ“−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ−（Ｎ　’　”ベ
ンジルオキシカルボニル−Ｎ　／　ｉ−第３ブチルオキ
シカルボニル−し−リシル）−Ｌ−リシン−Ｐ−ニトロ
フェニルエステル１０．５ｇから上記工程（、）に従っ
て塩１０．２５　ｇを製造した。Ｍ、Ｐ　：　１０９〜
１１３℃、　ＴＬＣＲ，＝０．７０（ＩＩ−ＢｕＯＨ−
＾ｃＯＨ−Ｈ，０＝４　：　１　：　ｌ）。

（ｄ）　Ｎ’−第３ブチルオキシカルボニル−トリ（Ｎ
＝に一ベンジルオキシカルボニルーし一リジン）−ｐ−
ニトロフェニルエステル：Ｎｏ−ベンジルオキシカルボニル−（Ｎε−第３ブチル
オキシカルボニル）−Ｌ−リシン５．７１　ｇ　（Ｉｓ
ミ、リモル）を。

アセトニトリル中に溶解させたトリエチルアミン及びイ
ソブチルクロロホルメートを用いて上記工程（ｂ）と同
様にして混合無水物に変換させた。ついで、これに、ト
リエチルアミンの存在下でＮｏ−ベンジルオキシカルボ
ニル−Ｎε（Ｎ″−ベンジルオキシカルボニル−し−リ
シル）−Ｌ−リシン−Ｐ−ニトロフェニルエステル塩酸
塩を加えた。さらに上記工程（ｂ）と同様に処理し製品
１３．９ｇを得た（収率８５．４％）。さらにこれをア
セトニトリル及びエーテルから再結晶させた。ｍ、ｐ、
　：１４５〜１５０℃０分析値：含有率＝９９．６％：
　ＴＬＣＲ，＝０．９８（ＩＩ−ＢｕＯＨ−ＡｃＯＨ−
）１．Ｏ＝４　：　１　：　ｌ）　：　ｔｌＰＬＧｔｒ
、＝１８．２分（Ｋ′＝８．１）；カラム：０ＤＳ−ハ
イパージル−６（１２５Ｘ　４＋ｍ）　；溶出液：　Ｍ
ｅＯＨ−Ｃ１，ＣＮ−０，０２Ｍ　Ｎａ０ＡＣ！ｌｌＷ
液（ｐＨ４）＝４０　：　３０　：３０）；流速：１ｍ
Ｑ／分；検出：　ＵＶ　２５４ｎｍ。

（ｅ）トリー（Ｎ”−ベンジルオキシカルボニル−し−
リシン）−ｐ−ニトロフェニルエステル塩酸：上記工程（ｄ）で製造したエステル１２．２ｇを上記工
程（ａ）と同様に処理した。これによりその塩を１２．
１ｇ　（９５，４％）を得た。　ｍ、ｐ、　：　１０８
〜１２５℃。ＴＬＣＲ，＝０．７１（ＩＩ−ＢｕＯＨ：
　ＡｃＯＨ：　Ｈ，０＝４　：　１　：　ｌ）　−（ｆ
）ポリ−ε−Ｎ０−ベンジルオキシカルボニル−し−リ
シン：トリー（Ｎｏ−ベンジルオキシカルボニル−し−リシン
）−ｐ−ニトロフェニルエステル塩酸塩２３ｇ　（２４
ミリモル）をトリエチルアミン４．５ｔａＱの存在下で
ジメチルスルホキシド６０ｍＱ中で凝縮させゲル状物を
得た。このポリマーを５％Ｎａ、　Ｃｏｓ水溶液中に注
ぎ分離した。

収量：　１６．８ｇ（８９，６％１分析値：　Ｚｃｏ、
：　１６．８％（計算値）、１６．３％（実験値）；　
（ｒｔ　ｓｐ）／ｃ＝３１．９２ａｊ／ｇ（ｃ＝４．９
５ｇＩＱ、ジクロロ酢酸）。

（ｇ）ポリーε−Ｌ−リシン臭化水素酸塩：上記工程（
ｆ）の保護ポリマー１６ｇをトリフロオロ酢酸１００ｍ
ｊｌ中に溶解させ、さらに４Ｎ　ＨＢｒ／ＡｃＯＨ１０
０ｗｅＱを加えた。この最終製品はエーテルを用いて析
出させた。

収ｆ：　１４．７ｇ（９１，６％、分析値：　Ｂｒ：　
３７．７％（計算値）。

３６．８％（実験値）；　Ａ　２　ｓ　４　ｎ　ｓ＋　
＝　０、ペーパークロマトグラフィ：　ｖｌ　２３ｘ６
２．溶出液：　ｎ−ＢｕＯＨ−ＡｃＯＨ−Ｐｙｒ。

−）１．０＝３０：６：２４：２０．収率：　３６．８
２％（保護子ツマ−から計算して）：　１８．８５％（
遊離リシンから計算しテ）ｓ　ＭＷ＝５，５００−２０
，３００゜（ｈ）粗製最終製品の精製上記工程（ｇ）で得たポリマー２５０　ｇを水中に溶解
させ、ついでセファデックスＧ−５０（微細）カラムを
用いてクロマトグラフィをおこなった。溶出液：蒸留水
、０．９％ＮａＣ１溶液又は０．１Ｎ　ＨＣＩ溶液。留
分（１ｍＱ）の検出：　ＵＶ　２２０ｎｍ。

（ｉ）粗最終製品の精製ポリ−ε−リシン臭化水素酸塩（上記工程（ｇ）で得た
もの）２ｇを水２ｍＱ中に溶かし、ついでエタノール２
０閣Ｑを力■えた。このポリマーをジエチルエーテル８
０ｍＱを用いて析出させた。これを５℃で２４時間静置
させたのち、これを濾過し、洗浄し、乾燥させた。収量
：　１．２６ｇ（８３％）（保護トリペプチド出発物質
から計算して５７．７％）。

この得られた物質を５ＺＴＰ−１４と指定した。Ｍ％ｌ
＝＋２，７００；　　（α）６”＝＋３２−４＠　（ｃ
＝２；　　ｎ、ｏ）；多分散性＝３．７゜以下の物質を同様にして製造した。

５ＺＴＰ−１５：　Ｍｖ　＝１１−６００　±２００　
：　（α）３’　＋３１−９゜５ＺＴＰ−１６：四＝１
３．４００ｆ２００：（ａ）♂’＋３２．６”５ＺＴＰ
−１７：　Ｍｔｉ　＝１４．５００ｆ：２００：Ｃαｌ
も’＋３２．１’実施例１で得たポリマー１ｇを２Ｍ　
ＮａＣ１溶液４０■Ｑに溶かした溶液を２Ｍ　ＮａＣ１
溶液、さらに水で透析した。これを凍結真空乾燥の結果
、ポリマー０．８５ｇを得た６ドウエックス（Ｄｏｗｅｘ）　１−ＯＨアニオン交換樹
脂からイオン交換カラム（４０■Ｑ）をつくった、実施
例１のようにして製造したポリマー１ｇを２０ｍａＱの
水に溶かした溶液を流速１ｃｊ／分でクロマトグラフィ
に供した。両分を分析し、集め、凍結乾燥した結果、目
的ポリマー０．６５ｇを単離することができた。

ス】１１先Ｎｏ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ［−第３ブチルオ
キシカルボニル−〇−リシンーｐ−ニトロフェニルエス
テル１０ｇを出発物質とし、実施例１と同様に処理した
。その結果、目的ポリマー１．３ｇが得られた−　ＭＶ
＝８９００；　（ａ）３’＝４７−０８’　（ｃ＝０．
９２：水）。

実施例１の方法に従って、Ｎｏ−ベンジルオキシカルボ
ニル−（Ｎａ−第３ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−オ
ルニチン−ｐ−ニトロフェニルエステルｌｏｇからＮ”
−ベンジルカルボニル−し−オルニチン−Ｐ−ニトロフ
ェニルエステル塩酸塩７．９ｇを得た。■、ｐ、：　８
７−９０℃、この塩を上記工程（１ｂ）と同様にしてＮ
“−ベンジルオキシカルボニル−（Ｎａ−第３ブチルオ
キシカルボニル）−Ｌ−オルニチンと結合させ、　Ｎ”
　−Ｚ−Ｎ’（Ｎｏ６−第３ブチルオキシカルボニル−
し−オルニチン）−し−オルニチン−ｐ−ニトロフェニ
ルエステル　ジペプチド（１２，１ｇ）を得た。冒、Ｐ
、：　１３３〜１３６℃。

上記工程（１ａ）を繰り返し、Ｎ’−Ｚ−Ｎａ　−（Ｎ
’６−Ｚ−Ｌ−オルニチン）−Ｌ−オルニチン−ｐ−ニ
トロフェニルエステル塩酸塩をジペプチドから製造した
（１１．９９ｇ：ｍ、ｐ、：　１１５〜ｌ１９℃）、さ
らに、これから上記工程（ｌｂ）の方法に従ってカップ
リングすることによりＮａ−ＢＯＣ−トＩＪ　（Ｎ”−
Ｚ−Ｌ−オルニチン）−ｐ−ニド０７：ｃニルエステル
（１４，８ｇ、讃、Ｐ、：　１５０〜１５３℃）を得た
。

さらに、トリ（Ｎ”−Ｚ−Ｌ−オルニチン）−ｐ〜ニト
ロフェニルエステル塩を上記工程（１ｅ）の方法により
製造した。層、ｐ、：　１１５〜１３０℃、この製品２
２ｇを上記工程（１ｆ）と同様にして重縮合し、δ−ポ
リ−Ｎ０−ベンジルオキシカルボニル−し−オルニチン
１５．４　ｇ　（８７，６％）を得た。この製品から上
記工程（１ｇ）の方法に従ってポリ−δ−１−オルニチ
ン臭化水素酸塩１３．１　ｇ（９３％）得た。

実施例５の方法を用い、Ｎ”−ベンジルオキシカルボニ
ル−Ｎａ−第３ブチルオキシカルボニル−Ｄ−オルニチ
ン−ｐ−ニトロフェニルエステル１ｇを出発物質とし、
ポリ−δ−ローオルニチン臭化水素酸塩１．２ｇ（８９
％）を得た。

実施例７ポリ−γ−Ｌ−α　γ−ジアミノ酪酸実施例１と同様にしてＮ“−ベンジルオキシカルボニル
−Ｎａ−第３ブチルオキシカルボニル−し−α−γ−ジ
アミノ酪酸−ｐ−ニトロフェニルエステル９．８ｇから
Ｎｏ−ベンジルオキシカルボニル−し−α、γ−ジアミ
ノー酪酸−ｐ−ニトロフェニルエステル塩酸塩６．９ｇ
を得た。鵬、Ｐ、：　６７−７０℃、この塩を上記工程
（１ｂ）の方法と同様にしてＮ”−ベンジルオキシカル
ボニル−Ｎγ−第３ブチルオキシカルボニル畦−α、γ
−ジアミノ酪酸と結合さセ、　Ｎ”−Ｚ、Ｎγ−（Ｎ”
−Ｚ−Ｎ’γ−第３ブチルオキシカルボニル−α、γ−
ジアミノ）−酪酸−ｐ−ニトロフェニルエステルジペプ
チド（１０，８ｇ、園、ｐ、：１２５〜１２７℃）を得
た。上記工程（１ａ）を繰り返し、このジペプチドから
Ｎ“−Ｚ−Ｎγ−（Ｎ”−Ｚ−Ｌ−α、γ−ジアミノブ
チリル）−Ｌ−α、γ−ジアミノ酪酸−ニトロフェニル
エステル塩酸塩１０．３５ｇを合成した。

ｍ、ｐ、：ｉ０８〜１１２℃。この塩から上記工程（１
ｂ）の方法を用いてカップリングし、Ｎγ−ＢＯＣ−ト
リ（Ｎ“−Ｚ−Ｌ−α、γ−ジアミノ酪酸）−ｐ−ニト
ロフェニルエステル１３．７ｇを得た。鵬、ｐ、：１４
３〜１４５℃、上記工程（１ｅ）を用い、この製品から
さらにトリ（Ｎ”−Ｚ−Ｌ−α、γ−ジアミノ酪酸）−
ｐ−ニトロフェニルエステル塩を１０．５ｇ得た。■、
ｐ、：１０５〜１１０℃、さらに、上記工程（ｌｆ）の
方法に従い、メチルスルホキシド中で重縮合し、ポリ−
チーＮ０−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−α、γ−ジ
アミノ酪酸７．８　ｇ　（８６，５％）を得た。この保
護ポリマーを上記工程（１ｇ）の方法と同様にして処理
し、ポリーγ−Ｌ−α、γ−ジアミノ酪酸臭化水素酸塩
６．２ｇ（９０，５ｇ）を得た。

実施例１の方法を用い、Ｎｏ−ベンジルオキシカルボニ
ル−Ｎβ−第３ブチルオキシカルボニル−Ｌ−α。

β−ジアミノプロピオン酸−ｐ−ニトロフェニルエステ
ル９．６ｇからＮｏ−ベンジルオキシカルボニル−し−
α。

β−ジアミノプロピオン酸−ｐ−ニトロフェニルエステ
ル塩酸塩７．１ｇを得た０ｍ、ｐ、：　６５〜６７℃、
この塩を上記工程（１ｂ）の方法に従い、Ｎｏ−ベンジ
ルオキシカルボニル−Ｎβ−第３ブチルオキシカルボニ
ル−し−α、β−ジアミノプロピオン酸と結合させ、Ｎ
’−Ｚ−Ｎγ−（Ｎ”−Ｚ−Ｎ’β−第３ブチルオキシ
カルボニル）−α。

β−ジアミノプロピオニル）−α、β−ジアミノプロピ
オン酸−Ｐ−ニトロフェニルエステルジペプチド１１．
０ｇを得た。　ｍ、ｐ、：　１１９〜１２２℃。上記（
１ａ）の工程を繰り返し、このジペプチドからＮ’−Ｚ
−Ｎβ−（Ｎ’。

−Ｚ−Ｌ−α、β−ジアミノブチリル）−Ｌ−α、β−
ジアミノプロピオン酸−ｐ−ニトロフェニルエステル塩
酸塩１０．８５ｇを得た。収量：　１０．８５ｇ、　ｍ
、ｐ、：　１０２〜・１０５℃。上記工程（１ｂ）の方
法に従い、この塩からカップリングによりＮβ−ＢＯＣ
−トリ（Ｎ”−Ｚ−Ｌ−α、β−ジアミノプロピオン酸
）−ｐ−ニトロフェニルエステル１２．６ｇを得た。■
、Ｐ、：　１３８〜１４０℃。さらに上記工程（ｌｅ）
の方法に従い、この製品からトリ（Ｎ’−Ｚ−Ｌ−α、
β−ジアミノプロピオン酸）−ｐ−ニトロフェニルエス
テル塩１２．４ｇを得た。　ｎ＋、ｐ、：　１０２〜１
０６℃、上記工程（Ｉｆ）の方法に従い、この化合物を
ジメチルスルホキシド中で重縮し、ポリ−β−Ｎ０−ベ
ンジルオキシカルボニル−し−α、β−ジアミノープロ
ピオン酸８．７　ｇ　（９０，２％）を得た。この保護
ポリマーを上記工程（１ｇ）と同様にして処理し、ポリ
−β−し一α。

β−ジアミノプロピオン酸臭化水素酸塩５．６ｇ（８８
，７％）を得た。

ポリーＬ−リシン・）ＩＢｒ　５００ｍｇを生理食塩水
１０−Ｑ中に溶かした。この注射用溶液を無菌濾過した
。投与量は患者の状態に応じ、１〜１００ｍｇ／ｋｇ／
日で用いられる。

下記成分を用いて錠剤をつくった。

ポリイソ−Ｌ−リシン・ＨＣＩラクトースサッカロースとうもろこしでん粉ステアリン酸マグネシウムアルギン酸１０ｇ０ｇ６ｇ０ｇ２ｇ２ｇ上記物質を均一に混合し、この混合物から錠剤１００粒
をプレス成形した。

羞ポリイソ−Ｌ−リシン５ｇから、水１００Ωを用いて水
溶液をつくった。この溶液をｐＨをＮａＯＨ溶液を用い
て７．０〜７．２に調整した。ついで、これにツウィー
ン（Ｔｗｅｅｎ）２０を１ｍＱ加えた。この溶液を植物
の保護のため発芽後の状態のものに対し、面積１ヘクタ
ールの範囲で散布した。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）下記一般式（ I ）の化合物： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）（式中、Ｒ＾４、Ｒ＾５、Ｒ＾６、Ｒ＾７及びＲ＾１＾
０はそれぞれ独自に水素原子、Ｃ＿１＿〜＿４のアルキ
ル基；Ｒ＾８及びＲ＾９はそれぞれ水素原子；ｒは１０
乃至４００の整数；ｍは０、１、２又は３；ｎは０）及
びその塩、ラセミ体、光学的異性体。
（２）Ｒ＾４、Ｒ＾５、Ｒ＾６、Ｒ＾７及びＲ＾１＾０
がそれぞれ水素原子；ｒが１０乃至４００の整数；ｍは
０、１、２又は３；ｎが０である請求項（１）記載の一
般式（ I ）の化合物。
（３）平均分子量が５５００乃至２５，６００であるポ
リイソリシン。
（４）平均分子量が４４００乃至１３，５００のポリイ
ソオルニチン。
（５）請求項（１）記載の一般式（ I ）の化合物（但
し、Ｒ＾４、Ｒ＾５、Ｒ＾６、Ｒ＾７、Ｒ＾８、Ｒ＾９
、Ｒ＾１＾０はそれぞれ水素原子；ｒは４０乃至２００
の整数、ｍは０、１、２又は３；ｎは０；アミノ基がＬ
型）を有効成分として含み、これを薬剤用担体又は薬剤
用添加剤と混合してなる抗腫瘍、抗ウィルス薬剤組成物
。
（６）有効成分が平均分子量５５００乃至２２，５００
のポリイソリシンである請求項（５）記載の薬剤組成物
。
（７）請求項（１）記載の一般式（ I ）のポリイソジ
アミノカルボン酸（但し、Ｒ＾４、Ｒ＾５、Ｒ＾６、Ｒ
＾７、Ｒ＾８、Ｒ＾９、Ｒ＾１＾０はそれぞれ同一又は
異なるもので水素原子又はＣ＿１＿〜＿４のアルキル基
を意味し；ｒは１０乃至４００の整数；ｍは０乃至１０
の整数；ｎは０乃至１０の整数）及びその塩、ラセミ体
、光学異性体を、対応するモノマーのカップリング、さ
らに得られたオリゴマーを重縮合することにより製造す
る方法において；下記一般式（II）のモノマー又はオリゴマー：▲数式、
化学式、表等があります▼（II）（式中、ｑは１乃至９の整数；Ｒ＾１はアミノ保護基（
オリゴマーの場合、全てのＲ＾２が同一）；Ｒ＾３は保
護並びに活性化のために適したカルボキシル基のための
活性エステル保護基；Ｒ＾４、Ｒ＾５、Ｒ＾６、Ｒ＾７
、Ｒ＾８、Ｒ＾９、Ｒ＾１＾０、ｍ及びｎは前記のもの
と同様；但し、オリゴマーの場合、置換基は同一又は異
なるものでよい）を下記一般式（III）のモノマー： ▲数式、化学式、表等があります▼（III）（式中、Ｒ＾２はアミノ保護基でＲ＾１とは異なり、か
つＲ＾１基とは別個に選択的に除去し得るもの；Ｘはカ
ルボキシル活性化基（但し、−ＣＯＸ基はＣＯＯＲ＾３
基よりも反応性が大きい）；Ｒ＾１、Ｒ＾４、Ｒ＾５、
Ｒ＾６、Ｒ＾７、Ｒ＾８、Ｒ＾９、Ｒ＾１＾０、ｍ及び
ｎは前記と同様）とカップリングさせ、得られた下記一
般式（IV）の化合物： ▲数式、化学式、表等があります▼（IV）（式中、全ての置換基は前記と同様；ｓは２乃至１０の
整数）からＲ＾２保護基を除去し、ついでｓ≦９の場合、得ら
れた化合物を一般式（III）のモノマーと反応させるか
、又は常套手段により重縮合させ、得られた一般式（
I ）の化合物が遊離塩基の場合は所望により塩に変換さ
せ、又はそれが塩の場合は塩基又は別の塩に変換させる
ことを特徴とする方法。
（８）一般式（ I ）のポリイソジアミノカルボン酸（
但し、Ｒ＾４、Ｒ＾５、Ｒ＾６、Ｒ＾７、Ｒ＾１＾０及
びｒは請求項（１）のものと同様；ｍは３；ｎは０）及
びその塩の製造方法であって、一般式（II）のモノマー
又はオリゴマー（但し、Ｒ＾１、Ｒ＾３、Ｒ＾４、Ｒ＾
５、Ｒ＾６、Ｒ＾７、Ｒ＾１＾０及びｑは請求項（１）
と同様）を一般式（III）のモノマー（但し、Ｒ＾１、
Ｒ＾２、Ｒ＾４、Ｒ＾５、Ｒ＾６、Ｒ＾７、Ｒ＾１＾０
及びＸは請求項（１）と同様；ｍ及びｎは前記と同様）
と反応させ、得られた一般式（IV）の化合物（但し、全
ての置換基は前記と同様、ｓは請求項（１）と同様）か
らＲ＾２保護基を除去し、ｓ≦９のときは所望により得
られた化合物を一般式（III）のモノマーと反応させる
か、又は常套手段により重縮合させることを特徴とする
請求項（７）記載の方法。
（９）請求項（１）記載の一般式（ I ）のポリイソジ
アミノカルボン酸（但し、Ｒ＾１、Ｒ＾３、Ｒ＾４、Ｒ
＾５、Ｒ＾６、Ｒ＾７、Ｒ＾１＾０及びｑは請求項（１
）と同様；ｍ及びｎは前記と同様）及びその塩を製造す
る方法であって、一般式（II）のモノマー又はオリゴマ
ー（但し、Ｒ＾１、Ｒ＾３、Ｒ＾４、＾５、Ｒ＾６、Ｒ
＾７、Ｒ＾１＾０及びｑは請求項（１）と同様；ｍ及び
ｎは前記と同様）を一般式（III）のモノマー（但し、
Ｒ＾１、Ｒ＾２、Ｒ＾４、Ｒ＾５、Ｒ＾６、Ｒ＾７、Ｒ
＾１＾０及びＸは請求項（１）と同様；ｍ及びｎは前記
と同様）と反応させ、ついで得られた一般式（IV）の化
合物（但し、全ての置換基は前記と同様；ｓは請求項（
１）と同様）からＲ＾２保護基を除去し、ｓ≦９のとき
は所望により、得られた化合物を一般式（III）の化合
物と反応させるか、又は常套手段により重縮合すること
を特徴とする請求項（７）記載の製造方法。
（１０）ポリイソ−Ｌ−リシン及びその塩の製造方法で
あって、Ｎ＾α−Ｚ−Ｌ−リシン−ｐ−ニトロフェニル
エステル塩酸塩及びＮ＾α−Ｚ−Ｌ−Ｎ＾ε−ＢＯＣ−
Ｌ−リシンをイソブチルクロロホルメートと一緒に混合
無水物に変換したものを出発物質として用いることを特
徴とする請求項（７）記載の製造方法。
（１１）ポリイソ−Ｌ−オルニチン及びその塩の製造方
法であって、Ｎ＾α−Ｚ−Ｌ−オルニチン−ｐ−ニトロ
フェニルエステル塩酸塩及びＮ＾α−Ｚ−Ｎ＾β−ＢＯ
Ｃ−Ｌ−オルニチンをイソブチルクロロホルメートと一
緒に混合無水物に変換したものを出発物質として用いる
ことを特徴とする請求項（７）記載の製造方法。
（１２）ポリイソ−Ｄ−リシン及びその塩の製造方法で
あって、Ｎ＾α−Ｚ−Ｄ−リシン−ｐ−ニトロフェニル
エステル塩酸塩及びＮ＾α−Ｚ−Ｎ＾ε−ＢＯＣ−Ｄ−
リシンをイソブチルクロロホルメートと一緒に混合無水
物に変換したものを出発物質として用いることを特徴と
する請求項（７）記載の製造方法。
（１３）ポリイソ−Ｄ−オルニチン及びその塩の製造方
法であって、Ｎ＾α−Ｚ−Ｄ−オルニチン−ｐ−ニトロ
フェニルエステル塩酸塩及びＮＣ＾α−Ｚ−Ｎ＾β−Ｂ
ＯＣ−Ｄ−オルニチンをイソブチルクロロホルメートと
一緒に混合無水物に変換したものを出発物質として用い
ることを特徴とする請求項（７）記載の製造方法。
（１４）請求項（１）記載の化合物を有効成分として含
む薬剤を有効投与量用いることを特徴とするガンの治療
方法。