JPH02138299A - 病原性細菌に対する免疫保護抗原タンパク質 - Google Patents
病原性細菌に対する免疫保護抗原タンパク質Info
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- JPH02138299A JPH02138299A JP1096539A JP9653989A JPH02138299A JP H02138299 A JPH02138299 A JP H02138299A JP 1096539 A JP1096539 A JP 1096539A JP 9653989 A JP9653989 A JP 9653989A JP H02138299 A JPH02138299 A JP H02138299A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
ポル−°−−ペル シス、すなわち百日咳の原因物質は
、マウスの実験的感染において主な毒素及び免疫保護抗
体であることが示されている高い活性アデニル酸シクラ
ーゼを指数増殖の間、分泌し又は開放する。
、マウスの実験的感染において主な毒素及び免疫保護抗
体であることが示されている高い活性アデニル酸シクラ
ーゼを指数増殖の間、分泌し又は開放する。
この酵素は、真核性タンパク質、すなわちカルモジュリ
ン（ＣａＭ）により活性化する特性を、バシース アン
−シス、すなわち炭厄菌の分泌されたアデニル酸シク
ラーゼ（浮腫因子）及び真核性アデニル酸シクラーゼと
共に共有する。高められたＡＣ調製物による実験は、こ
の酵素が種々の真核細菌中に侵入し、そして続いて、急
速であるが調節されていない細胞内のｃＡＭＰの上昇を
促進することができるある証拠を提供した。このｃＡＭ
Ｐ介在細胞変性効果は、ｌ−さ及叉之久の他の毒素、す
なわち百日咳毒素により産生される真核性アデニル酸シ
クラーゼの調節解除とは明らかに異なる。
ン（ＣａＭ）により活性化する特性を、バシース アン
−シス、すなわち炭厄菌の分泌されたアデニル酸シク
ラーゼ（浮腫因子）及び真核性アデニル酸シクラーゼと
共に共有する。高められたＡＣ調製物による実験は、こ
の酵素が種々の真核細菌中に侵入し、そして続いて、急
速であるが調節されていない細胞内のｃＡＭＰの上昇を
促進することができるある証拠を提供した。このｃＡＭ
Ｐ介在細胞変性効果は、ｌ−さ及叉之久の他の毒素、す
なわち百日咳毒素により産生される真核性アデニル酸シ
クラーゼの調節解除とは明らかに異なる。
Ｂ、ペルタシスは、ＡＣ活性を含むいくつかの表現型特
性の発現の欠除に関係する自発的な相変化を受けること
がその発見以来知られている。しかしながら、これらの
表現型変化が分子の発現（合成、輸送及び／又は開放）
の欠除又は触媒活性の欠除のいづれかに起因するかどう
かは明らかでない。
性の発現の欠除に関係する自発的な相変化を受けること
がその発見以来知られている。しかしながら、これらの
表現型変化が分子の発現（合成、輸送及び／又は開放）
の欠除又は触媒活性の欠除のいづれかに起因するかどう
かは明らかでない。
一＆［ｌの抗−ＡＣ抗体を用いることによって、本発明
者は、毒性又は非毒性Ｂ ペルタシス変異体におけるＡ
Ｃ抗原の発現を調べ、そしてこの免疫学的検出は酵素活
性と相互関係した。
者は、毒性又は非毒性Ｂ ペルタシス変異体におけるＡ
Ｃ抗原の発現を調べ、そしてこの免疫学的検出は酵素活
性と相互関係した。
それらの研究を実施することによって、毒性及び非毒性
細菌性粗抽出物中に、触媒性アデニル酸シクラーゼ活性
を欠くが、しかし有益な抗原特性を有するタンパク質を
見出した。
細菌性粗抽出物中に、触媒性アデニル酸シクラーゼ活性
を欠くが、しかし有益な抗原特性を有するタンパク質を
見出した。
百日咳菌感染及び病原性細菌による毒性作用に対する免
疫保護抗原として有用な新規タンパク質をヒト及び動物
中に付与することが本発明の目的である。
疫保護抗原として有用な新規タンパク質をヒト及び動物
中に付与することが本発明の目的である。
本発明のタンパク質は、次の特徴を有するニーその分子
量Ｍｒが約４３±４．３Ｋドルトンであり、 −その等電点Ｐｉが５．７〜６．１、特に５．９であり
、 −それが精製された活性ＡＣ３Ｊｌ製物に対して生ぜし
められたポリクローナル抗−ＡＣ抗体により特異的に認
識され、 −それがアデニル酸シクラーゼＣａＭ活性可能な活性を
欠き、そして −それがＣａＭに対する親和性を欠いている。
量Ｍｒが約４３±４．３Ｋドルトンであり、 −その等電点Ｐｉが５．７〜６．１、特に５．９であり
、 −それが精製された活性ＡＣ３Ｊｌ製物に対して生ぜし
められたポリクローナル抗−ＡＣ抗体により特異的に認
識され、 −それがアデニル酸シクラーゼＣａＭ活性可能な活性を
欠き、そして −それがＣａＭに対する親和性を欠いている。
分子量（分子量範囲Ｍｒ）は、対照としてオボアルブミ
ンを用いて決定された。等電点Ｐｉは、文献（６）にお
けるＯ’Ｆａｒｒｅｌｌなどの方法に従って決定される
場合、電気泳動性移動に相当する（前記文献は本明細書
の最後に示されている）。
ンを用いて決定された。等電点Ｐｉは、文献（６）にお
けるＯ’Ｆａｒｒｅｌｌなどの方法に従って決定される
場合、電気泳動性移動に相当する（前記文献は本明細書
の最後に示されている）。
触媒性アデニル酸シクラーゼ酸素活性に関して不活性で
あるそのようなタンパク質が、百日咳菌、及びより特定
には−１−：ｊ四」−２ノ、の活性ＡＣに構造的抗原性
上類領することが注目に値する。
あるそのようなタンパク質が、百日咳菌、及びより特定
には−１−：ｊ四」−２ノ、の活性ＡＣに構造的抗原性
上類領することが注目に値する。
本発明によれば、不活性及び活性アデニル酸シクラーゼ
が共通エピトープを少なくとも有することが見出された
。
が共通エピトープを少なくとも有することが見出された
。
本明細書に使用される用語“不活性“及び“活性”とは
、アデニル酸シクラーゼの酵素活性を言及する。
、アデニル酸シクラーゼの酵素活性を言及する。
前記タンパク質は、また約９０にドルトンの高い分子量
の形で存在し、前記タンパク質と同じ性質、特に同じＰ
ｉを有し、そしてそれがダイマーであることを示唆する
。
の形で存在し、前記タンパク質と同じ性質、特に同じＰ
ｉを有し、そしてそれがダイマーであることを示唆する
。
本発明のタンパク質は、毒性細菌及び活性ＡＣを発現す
るその変異体、より特定には、病原性細菌（このＡＣは
真核細胞のＡＣを妨げることができる）から得ることが
できる。従って、活性形及び不活性形の両者が、前記細
菌に存在する。活性形のみが分泌される。しかしながら
、旦、ヱｌ？９人培養物は不活性形のみを含む。
るその変異体、より特定には、病原性細菌（このＡＣは
真核細胞のＡＣを妨げることができる）から得ることが
できる。従って、活性形及び不活性形の両者が、前記細
菌に存在する。活性形のみが分泌される。しかしながら
、旦、ヱｌ？９人培養物は不活性形のみを含む。
前記タンパク質は、百日咳菌から手に入れることができ
る。本発明のタンパク質を得るために使用される百日咳
菌は、を椎動物における呼吸器疾患の原因である細菌、
たとえばヒトにおいては±ｋｊ−と孟 ご」弓シとム及
び」Ｊ弓たＬ乏 、ペラ：支火り之ス、及び動物におい
ては工土ヱ孟立 ブロンキャプチカ及びメ匝ｉ アビウ
ムである。
る。本発明のタンパク質を得るために使用される百日咳
菌は、を椎動物における呼吸器疾患の原因である細菌、
たとえばヒトにおいては±ｋｊ−と孟 ご」弓シとム及
び」Ｊ弓たＬ乏 、ペラ：支火り之ス、及び動物におい
ては工土ヱ孟立 ブロンキャプチカ及びメ匝ｉ アビウ
ムである。
前記タンパク質の１つとは異なる分子量を有する交差反
応性タンパク質がまた、ｆｆｉス ヱヱ上立之ム、エル
シニアエ及びパスーウレーエから特徴づけられ得る。
応性タンパク質がまた、ｆｆｉス ヱヱ上立之ム、エル
シニアエ及びパスーウレーエから特徴づけられ得る。
前記抗原性タンパク質及び交差反応性抗原はまた、アデ
ニル酸シクラーゼの酸素活性が今まで見出されたことが
ない非毒性変異体からも手に入れることができる。
ニル酸シクラーゼの酸素活性が今まで見出されたことが
ない非毒性変異体からも手に入れることができる。
前記毒性及び非毒性菌株の変異体は、それらが交差反応
性を有する抗原性分子を産生ずるので本発明に従って使
用され得る。
性を有する抗原性分子を産生ずるので本発明に従って使
用され得る。
本発明の交差反応性を有するタンパク質及び分子の抽出
のために有利な細菌性抽出物は、たとえばＡＣを発現す
る細菌性細胞を尿素により処理することによって及び遠
心分離の後その上清液を回収することによって得られる
。いずれか他の種類の細菌溶解又は分子クローニングが
、そのタンパク質のための源として使用され得る。
のために有利な細菌性抽出物は、たとえばＡＣを発現す
る細菌性細胞を尿素により処理することによって及び遠
心分離の後その上清液を回収することによって得られる
。いずれか他の種類の細菌溶解又は分子クローニングが
、そのタンパク質のための源として使用され得る。
本発明のタンパク質は、旦−二υｉ乙入及び旦。
パｊご９にえクツ、の生来のアデニル酸シクラーゼに対
する特異的抗体との免疫親和性を通して精製され得る。
する特異的抗体との免疫親和性を通して精製され得る。
本発明のタンパク質を合成する細菌により付与される感
染のマウスモデルの研究は、それらの抗原特性の指摘を
可能にした。
染のマウスモデルの研究は、それらの抗原特性の指摘を
可能にした。
前記タンパク質は、事実、保護を誘発することができる
ように思える。なぜならば特定の抗体かに乞ム又はＢ
バーベル シスによる鼻腔内チャレンジに対して十分な
保護性を受動的に付与することができるからである。
ように思える。なぜならば特定の抗体かに乞ム又はＢ
バーベル シスによる鼻腔内チャレンジに対して十分な
保護性を受動的に付与することができるからである。
マウスに鼻腔内投与され又は非経口投与される場合、そ
の毒性の不在性を示すこれらの抗原を産生ずる細菌に対
して毒物学的アッセイが行われれ、そしてその精製され
たタンパク質は、それらが処理された真核生物のタンパ
ク質と交差反応を示さないという条件で、ワクチン主成
分の調製のために都合良く使用され得る。
の毒性の不在性を示すこれらの抗原を産生ずる細菌に対
して毒物学的アッセイが行われれ、そしてその精製され
たタンパク質は、それらが処理された真核生物のタンパ
ク質と交差反応を示さないという条件で、ワクチン主成
分の調製のために都合良く使用され得る。
本発明のワクチンは、それらが医薬キャリヤーと共に前
記抗原性タンパク質を含む分子ワクチンであることを特
徴とする。
記抗原性タンパク質を含む分子ワクチンであることを特
徴とする。
通常の投与量及び医薬形が使用される。
本発明のワクチン組成物においては、抗原性タンパク質
は同じ接種物中にＰＨＡと組合しても良く又はしなくて
も良い０次にＦＨＡはアデニル酸シクラーゼと同時に又
は異なった時に投与されるであろう。ＦＨＡ調製物は、
たとえばＳａ ｔｏなど、、Ｉｎｆｅｃｆ。
は同じ接種物中にＰＨＡと組合しても良く又はしなくて
も良い０次にＦＨＡはアデニル酸シクラーゼと同時に又
は異なった時に投与されるであろう。ＦＨＡ調製物は、
たとえばＳａ ｔｏなど、、Ｉｎｆｅｃｆ。
Ｉ ｍ５ｕｎ、１９Ｂ３，４１，３１３〜３２０ページ
又はＩ ｍａｉｚｕｍｉなど、、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、 Ｍｅｔｈｏｄｓ ２゜３３
４〜３４７ページ（１９８４）の方法を用いて都合良く
得られる。
又はＩ ｍａｉｚｕｍｉなど、、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、 Ｍｅｔｈｏｄｓ ２゜３３
４〜３４７ページ（１９８４）の方法を用いて都合良く
得られる。
もう１つの態様において、抗原性タンパク質は、１９８
６年１１月１７日に出願されたＦＲ特許願第８６１５９
６３号に開示される精製されたＡＣ調製物、及び場合に
よってはＰＨＡとも組合され得る。
６年１１月１７日に出願されたＦＲ特許願第８６１５９
６３号に開示される精製されたＡＣ調製物、及び場合に
よってはＰＨＡとも組合され得る。
好都合には、本発明のワクチン組成物は、特に土及ヱｉ
ｉにより引き起こされる感染を阻止する。
ｉにより引き起こされる感染を阻止する。
予防接種は、鼻腔内、経口又は非経口路により都合良く
行われる。
行われる。
従って、ｋジ四ｍによる鼻腔内感染に対する活性免疫化
は、非毒性ＡＣ旦−二五叉之入から調製された完全な細
胞ワクチンにより得られる。
は、非毒性ＡＣ旦−二五叉之入から調製された完全な細
胞ワクチンにより得られる。
本発明はまた、新規生成物として前記タンパク質に対し
て向けられるポリクローナル抗体にも関する。
て向けられるポリクローナル抗体にも関する。
これらの抗体は、問題のタンパク質により動物、たとえ
ばウサギ又はマウスを免疫化することによって及び前記
抗体を含む抗血清及び抗体自体の標準方法による回収に
よって得られる。
ばウサギ又はマウスを免疫化することによって及び前記
抗体を含む抗血清及び抗体自体の標準方法による回収に
よって得られる。
本発明はまた、マウス骨髄腫と前記精製されたタンパク
質により免疫化されたマウスに由来する肺臓リンパ球と
の融合により得られるモノクローナル抗体にも関する。
質により免疫化されたマウスに由来する肺臓リンパ球と
の融合により得られるモノクローナル抗体にも関する。
これらのモノクローナル免疫グロブリンの調製物は、そ
れらが保護抗体の合成の誘発を導く精製されたタンパク
質のエピトープを特異的に認識することを特徴とする。
れらが保護抗体の合成の誘発を導く精製されたタンパク
質のエピトープを特異的に認識することを特徴とする。
好都合なことには、本発明の抗体は、上記細菌の病原性
効果に対して免疫保護効果を及ぼす。
効果に対して免疫保護効果を及ぼす。
本発明の他の特徴及び利点は、次の例に与えられるであ
ろう。この例に使用される材料及び方法は次の通りであ
る。： 箱１１し一旦一一５１にり＞Ｘ１８３２３（ＡＴＣＣ９
７９７）の同質遺伝子型ＡＣ” （アデニル酸シクラ
ーゼ酵素活性の点で）又はＡＣ−変異体を、Ｂｏｒｄｅ
＋ −Ｇｅｎ−ｇｏｕ血液寒天プレート上での培養物か
ら選択した（１）。
ろう。この例に使用される材料及び方法は次の通りであ
る。： 箱１１し一旦一一５１にり＞Ｘ１８３２３（ＡＴＣＣ９
７９７）の同質遺伝子型ＡＣ” （アデニル酸シクラ
ーゼ酵素活性の点で）又はＡＣ−変異体を、Ｂｏｒｄｅ
＋ −Ｇｅｎ−ｇｏｕ血液寒天プレート上での培養物か
ら選択した（１）。
ペリプラズム及び細胞外抽出物からのＡＣのカルモジュ
リン−親和性精製、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）及
び酵素活性の計量を、それぞれ（２） 、 （３）及び
（４）に記載のようにして行った。
リン−親和性精製、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）及
び酵素活性の計量を、それぞれ（２） 、 （３）及び
（４）に記載のようにして行った。
対照ＲＩＡが、濃縮されたタンパク質調製物による非特
異的阻害を調べるために、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ
）の濃縮溶液によりアッセイされた。
異的阻害を調べるために、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ
）の濃縮溶液によりアッセイされた。
親和性カルモジュリン精製分子に対して生ぜしめられた
マウスポリクローナル及びモノクローナル抗体は、（２
）に記載される。王血迫星等１立ｌ五床軌及び５Ｏ５−
ＰＡＧＥ電気泳動を、Ｏ’ Ｆａｒｒｅｌｌ（６）に従
って行った。Ａｍｐｈｏｌｉｎｅ ｐＨ３〜１０ （Ｐ
ｈａ−ｒｍａｃｉａ）及びｐＨ４〜９ （５ｅｒｖａｌ
ｙｔｅ）を使用した。
マウスポリクローナル及びモノクローナル抗体は、（２
）に記載される。王血迫星等１立ｌ五床軌及び５Ｏ５−
ＰＡＧＥ電気泳動を、Ｏ’ Ｆａｒｒｅｌｌ（６）に従
って行った。Ａｍｐｈｏｌｉｎｅ ｐＨ３〜１０ （Ｐ
ｈａ−ｒｍａｃｉａ）及びｐＨ４〜９ （５ｅｒｖａｌ
ｙｔｅ）を使用した。
タンパク質濃度は、対照としてＢＳＡを用いてＳ ｃｈ
ｎａｆｄｅｒの方法（７）により従来通り決定した。
ｎａｆｄｅｒの方法（７）により従来通り決定した。
ウェス −ンプロ・・ト ： ５ＯＳ−ＰＡＧＥの後
、タンパク質を、Ｔｏｗｂｉｎ方法（８）によりニトロ
セルロースに移した。移した後、そのニトロセルロース
を、５０ｍＨのＴｒｉｓ Ｈ（ｌ（ｐＨ８） 、 １５
０ｍＭのＮａｃｌ溶液（緩衝液Ａ）中、５％ミルク粉末
により飽和し、そしてミルク緩衝液中に希釈されたマウ
ス抗体と共にインキエベートした。緩衝液Ａにより洗浄
した後、２種の暴露を、３．３−ジアミノベンジジン（
５００ｇ／ｍｌ） 、０．０３％Ｈｚ（ｈ＋ １００ｍ
ＭのＴｒｉｓＨｃＪ！ （ｐＨ７，６）の溶液により表
されるホースラジイシュ ペルオキシダーゼ接合のヤギ
抗−マウスｌ ｇ （Ｂｉｏｓｙｓ Ｆｒａｎｃｅ）又
はホスファターゼ接合の抗体（Ｂ １ｏｓｙｓ Ｆ ｒ
ａｎｃｅ）のいづれかにより行った。
、タンパク質を、Ｔｏｗｂｉｎ方法（８）によりニトロ
セルロースに移した。移した後、そのニトロセルロース
を、５０ｍＨのＴｒｉｓ Ｈ（ｌ（ｐＨ８） 、 １５
０ｍＭのＮａｃｌ溶液（緩衝液Ａ）中、５％ミルク粉末
により飽和し、そしてミルク緩衝液中に希釈されたマウ
ス抗体と共にインキエベートした。緩衝液Ａにより洗浄
した後、２種の暴露を、３．３−ジアミノベンジジン（
５００ｇ／ｍｌ） 、０．０３％Ｈｚ（ｈ＋ １００ｍ
ＭのＴｒｉｓＨｃＪ！ （ｐＨ７，６）の溶液により表
されるホースラジイシュ ペルオキシダーゼ接合のヤギ
抗−マウスｌ ｇ （Ｂｉｏｓｙｓ Ｆｒａｎｃｅ）又
はホスファターゼ接合の抗体（Ｂ １ｏｓｙｓ Ｆ ｒ
ａｎｃｅ）のいづれかにより行った。
１、抗−ＡＣ抗体による細菌性ペリプラズム抽出物のイ
ムノプロット。
ムノプロット。
種々の抗−ＡＣ抗体による。毒性又は非毒性の旦−二土
叉之久からの細菌性ペリプラズム抽出物のイムノプロッ
ト（７，５％のアクリルアミドを有する５ＯＳ−ＰＡＧ
Ｅ）を行った。
叉之久からの細菌性ペリプラズム抽出物のイムノプロッ
ト（７，５％のアクリルアミドを有する５ＯＳ−ＰＡＧ
Ｅ）を行った。
抽出物は、（３）により得られたーＷ−二５四」−２ノ
、１８３２ＢのＡＣ”及びＡＣ−変異体の尿素抽出物で
あった。
、１８３２ＢのＡＣ”及びＡＣ−変異体の尿素抽出物で
あった。
それらを下記のものと反応せしめた：
Ａ／精製されたＡＣ調製物に対して生ぜしめられたポリ
クローナル抗体及びＢ／前記精製されたＡＣ調製物に対
して生ぜしめられたモノクローナル抗体。
クローナル抗体及びＢ／前記精製されたＡＣ調製物に対
して生ぜしめられたモノクローナル抗体。
それらの精製されたＡＣｇＪｌ製物は、出願者の名義で
ＦＲ特許出願（参照２）に開示されているものである。
ＦＲ特許出願（参照２）に開示されているものである。
そのような調製物は、それらが高度の純度を有し、そし
て汚染性細菌物質、特に百日咳毒素、リポ多糖（又はＬ
ＰＳ）及び繊維性赤血球凝集素（又はＦＨＡ）を完全に
欠くことを特徴とする。従って、ＡＣは、スクロース密
度グラジェントにおいて３．６に等しいＳ係数で沈澱し
、そしてそれぞれ４５及び４３Ｋドルトンの２種の構造
的に関連する分子形で存在する均−形で得ることができ
る。
て汚染性細菌物質、特に百日咳毒素、リポ多糖（又はＬ
ＰＳ）及び繊維性赤血球凝集素（又はＦＨＡ）を完全に
欠くことを特徴とする。従って、ＡＣは、スクロース密
度グラジェントにおいて３．６に等しいＳ係数で沈澱し
、そしてそれぞれ４５及び４３Ｋドルトンの２種の構造
的に関連する分子形で存在する均−形で得ることができ
る。
もう１つの観点によれば、ＡＣｇｌｌ製物は、それらが
達成することができ、そしてさらに１６００μモルのｃ
ＡＭＰ／分０ｍｇを越える活性を有することを特徴とす
る。
達成することができ、そしてさらに１６００μモルのｃ
ＡＭＰ／分０ｍｇを越える活性を有することを特徴とす
る。
前記精製されたＡＣ調製物は、前もって濃縮された、ア
デニル酸シクラーゼを示す細菌培養物の上清液又はこれ
らの細菌の抽出物とカルモジュリンとを接触することに
よって得ることができる。
デニル酸シクラーゼを示す細菌培養物の上清液又はこれ
らの細菌の抽出物とカルモジュリンとを接触することに
よって得ることができる。
ポリクローナル抗体は、ＡＣが遊離状態で存在するか又
は真核タンパク質、特にカルモジュリンとの複合体の形
で存在する問題のＡＣＩ製物により動物、たとえばウサ
ギ又はマウス免疫化し、そして、抗体を含む抗血清及び
次に抗体自体を標準方法により回収することによって生
成される。
は真核タンパク質、特にカルモジュリンとの複合体の形
で存在する問題のＡＣＩ製物により動物、たとえばウサ
ギ又はマウス免疫化し、そして、抗体を含む抗血清及び
次に抗体自体を標準方法により回収することによって生
成される。
モノクローナル抗体は、マウス骨髄腫と精製されたアデ
ニル酸シクラーゼにより免疫化されたマウスに由来する
肺臓リンパ球との融合により得ることができる。
ニル酸シクラーゼにより免疫化されたマウスに由来する
肺臓リンパ球との融合により得ることができる。
モノクローナル抗体（８〜２５）が特に使用される。そ
れらは、５０ 、４５及び４３Ｋドルトンのトリブレッ
ト及び粗抽出物における１００にドルトン以上の分子量
のタンパク賞並びに細菌細胞から精製された酵素の調製
物を免疫沈澱せしめる。
れらは、５０ 、４５及び４３Ｋドルトンのトリブレッ
ト及び粗抽出物における１００にドルトン以上の分子量
のタンパク賞並びに細菌細胞から精製された酵素の調製
物を免疫沈澱せしめる。
モノクローナル抗体を生成するハイプリドーマ株は、１
９８６年１０月９日、ｌ−６１０としてＮａｔｉｏ−ｎ
ａｌ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｕ１ｔｕｒｅ
ｓ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａ−ｎｉｓｓｓ（ＣＮＣＭ
）に寄託された。
９８６年１０月９日、ｌ−６１０としてＮａｔｉｏ−ｎ
ａｌ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｕ１ｔｕｒｅ
ｓ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａ−ｎｉｓｓｓ（ＣＮＣＭ
）に寄託された。
得られたイムノプロットは、第１図に報告され、ここで
上記反応に対応するパー）Ａ及びＢにおいて、レーンｌ
及び３はそれぞれＡＣ”及びＡＣ−変異体の粗抽出物と
の反応に対応し、そしてレーン２及び４は、カルモジュ
リン結合タンパク質の消耗の後、その同じ抽出物に対応
する。（１）の活性は２．０００単位であり、（２）の
活性は１００単位であり、（３）及び（４）は１単位以
下である。
上記反応に対応するパー）Ａ及びＢにおいて、レーンｌ
及び３はそれぞれＡＣ”及びＡＣ−変異体の粗抽出物と
の反応に対応し、そしてレーン２及び４は、カルモジュ
リン結合タンパク質の消耗の後、その同じ抽出物に対応
する。（１）の活性は２．０００単位であり、（２）の
活性は１００単位であり、（３）及び（４）は１単位以
下である。
第１図は、種々の抗体による認識の種々のパターンが前
記抽出物により表わされることを示す。
記抽出物により表わされることを示す。
ＡＣ”細菌性尿素抽出物（レーン１）においては、それ
ぞれＭｒ ４３ 、４５及び９０にドルトンでの３種の
バンドが、純粋な均質性の４３〜４５にドルトンのＡＣ
複合体に対して生ぜしめられたポリクローナル抗体によ
るウェスターンプロットに見うけられた。粗ＡＣ”尿素
抽出物からのカルモジュリン結合分子の消耗の後、４５
にドルトンのバンドが消出した。
ぞれＭｒ ４３ 、４５及び９０にドルトンでの３種の
バンドが、純粋な均質性の４３〜４５にドルトンのＡＣ
複合体に対して生ぜしめられたポリクローナル抗体によ
るウェスターンプロットに見うけられた。粗ＡＣ”尿素
抽出物からのカルモジュリン結合分子の消耗の後、４５
にドルトンのバンドが消出した。
モノクローナル抗−ＡＣ抗体によるＡＣ”尿素抽出物の
ウェスターンプロット分析は、カルモジュリン結合分子
のみがこの抗体により認識されたことを示した。
ウェスターンプロット分析は、カルモジュリン結合分子
のみがこの抗体により認識されたことを示した。
この抗原は、ポリクローナル又はモノクローナル抗−Ａ
Ｃ抗体によりＡＣ−粗尿素抽出物中に検出されなかった
（レーン２及び４）。
Ｃ抗体によりＡＣ−粗尿素抽出物中に検出されなかった
（レーン２及び４）。
これらの種々の抽出物の活性の計量は、４５にドルトン
のバンドの消出が有意なＡＣ活性の損出と相互関係して
いることを示した。尿素抽出物においては、ＡＣ”活性
が約１ 、０００〜２，５００単位（１単位は、３０℃
、ｐＨ８で１分角たりに形成される１ナノモルのｃＡＭ
Ｐに相当する）であり、そしてこの粗抽出物がＣａＭ−
親和性カラムを通された後、たった２０〜４０単位であ
った。ＣａＭ−親和性溶離分子は、ポリ又はモノクロー
ナル抗体により認識され、１ ｍ４２当たり８，０００
〜２０．０００単位のシクラーゼ活性及び４５にドルト
ンの明らかなるＭｒを有した。
のバンドの消出が有意なＡＣ活性の損出と相互関係して
いることを示した。尿素抽出物においては、ＡＣ”活性
が約１ 、０００〜２，５００単位（１単位は、３０℃
、ｐＨ８で１分角たりに形成される１ナノモルのｃＡＭ
Ｐに相当する）であり、そしてこの粗抽出物がＣａＭ−
親和性カラムを通された後、たった２０〜４０単位であ
った。ＣａＭ−親和性溶離分子は、ポリ又はモノクロー
ナル抗体により認識され、１ ｍ４２当たり８，０００
〜２０．０００単位のシクラーゼ活性及び４５にドルト
ンの明らかなるＭｒを有した。
２、平面ポリアクリルアミドゲル上での免疫プロット：
平面ポリアクリルアミドゲル上で免疫プロットを行い、
そのゲルは次のものを含んだ：■）モノクローナル抗体
による表わされるＣａＭ精製ＡＣ（同じイメージがポリ
クローナル抗体により得られる） 、 ｐｉ ＝５．
１ 、 Ｍｒ ＝４５にドルトン、ラベルされたウサギ
ＩｇＧ抗−マウスペルオキシダーゼ、ジエチル−アミノ
−ベンジジン（ＤＡＢ） ：■）毒性変異体の粗尿素抽
出物（第１図におけるのと同じ）。
そのゲルは次のものを含んだ：■）モノクローナル抗体
による表わされるＣａＭ精製ＡＣ（同じイメージがポリ
クローナル抗体により得られる） 、 ｐｉ ＝５．
１ 、 Ｍｒ ＝４５にドルトン、ラベルされたウサギ
ＩｇＧ抗−マウスペルオキシダーゼ、ジエチル−アミノ
−ベンジジン（ＤＡＢ） ：■）毒性変異体の粗尿素抽
出物（第１図におけるのと同じ）。
その得られた免疫プロットは、それぞれ第２Ｉ及び２■
図に示される。前記図において、Ａ及びＢは次のものに
対応するニ ーモノクローナル抗体、ＩｇＧペルオキシダーゼ、ＤＡ
Ｂによる初めの検出（Ａ） 一ラベルされたポリクローナル抗体抗マウスホスファタ
ーゼによる第２検出（ポリクローナル抗体によりのみ表
わされる粗抽出物は、Ａ＋Ｂと同じ写真を示す）。
図に示される。前記図において、Ａ及びＢは次のものに
対応するニ ーモノクローナル抗体、ＩｇＧペルオキシダーゼ、ＤＡ
Ｂによる初めの検出（Ａ） 一ラベルされたポリクローナル抗体抗マウスホスファタ
ーゼによる第２検出（ポリクローナル抗体によりのみ表
わされる粗抽出物は、Ａ＋Ｂと同じ写真を示す）。
精製されたＡＣがモノクローナル及びポリクローナル抗
体の両者により検出され（第２１図）、そしてそれはＭ
ｒ４５にドルトン及び５．２〜５．１の等電点（ｐｉ）
を有した。このｐｉ値は、オートラジオダラムにより検
出されるＣａＭ親和性精製ＡＣのＩ２ｓ ｌラベリング
から確認された。
体の両者により検出され（第２１図）、そしてそれはＭ
ｒ４５にドルトン及び５．２〜５．１の等電点（ｐｉ）
を有した。このｐｉ値は、オートラジオダラムにより検
出されるＣａＭ親和性精製ＡＣのＩ２ｓ ｌラベリング
から確認された。
ＡＣ”尿素抽出物（第２■図）は、ポリクローナル抗体
により３種の分子を示し、そしてそれらのＭｒ及びｐｉ
においては、１つは４５にドルトン及び５．２〜５．１
のｐｉを有し、２つのそれぞれ４３Ｋドルトン及び９０
にドルトン及び６〜５．８のｐｉを有した＊Ｐｘ５〜５
．８でのこれらの２種のバンドは、ＣａＭ親和性カラム
にかけた後、その流動中に認識された。
により３種の分子を示し、そしてそれらのＭｒ及びｐｉ
においては、１つは４５にドルトン及び５．２〜５．１
のｐｉを有し、２つのそれぞれ４３Ｋドルトン及び９０
にドルトン及び６〜５．８のｐｉを有した＊Ｐｘ５〜５
．８でのこれらの２種のバンドは、ＣａＭ親和性カラム
にかけた後、その流動中に認識された。
モノクローナル抗体は、ＡＣ”尿素抽出物中において４
５にドルトンでのみバンドを表わし、そしてＡＣ”尿素
抽出物がＣａＭ 親和性カラムを通された後、いづれか
のバンドももはや表わさなかった。
５にドルトンでのみバンドを表わし、そしてＡＣ”尿素
抽出物がＣａＭ 親和性カラムを通された後、いづれか
のバンドももはや表わさなかった。
の ・ ＋９）
ポリクローナル抗−ＡＣ抗体を、抗原がウェスターンプ
ロットによりすでに移されているニトロセルロースのス
トリップと共にインキュベートし、Ｍｒ ４３Ｋドルト
ンのタンパク質に限定される抗原調製物を単に有するよ
うに、そのストリップを切断した。＋１の大きさのスト
リップを、抗−ＡＣポリクローナル抗体により４３Ｋド
ルトンの抗原を表わす個々のウェスターンプロットの対
照サンプル片上に前もって免疫プロットしたものから選
択した。
ロットによりすでに移されているニトロセルロースのス
トリップと共にインキュベートし、Ｍｒ ４３Ｋドルト
ンのタンパク質に限定される抗原調製物を単に有するよ
うに、そのストリップを切断した。＋１の大きさのスト
リップを、抗−ＡＣポリクローナル抗体により４３Ｋド
ルトンの抗原を表わす個々のウェスターンプロットの対
照サンプル片上に前もって免疫プロットしたものから選
択した。
ニトロセルロースストリップに固定された抗体の溶離を
、２分、５分又は１０分のインキュベーションの後、Ｐ
Ｈ２，８のＨ（Ｊグリシン緩衝液により行い、続いてす
ぐにリン酸緩衝液により中和することによって達成した
。これらの抗体を、種々の抗原調製物に対する特異性の
ために試験した。
、２分、５分又は１０分のインキュベーションの後、Ｐ
Ｈ２，８のＨ（Ｊグリシン緩衝液により行い、続いてす
ぐにリン酸緩衝液により中和することによって達成した
。これらの抗体を、種々の抗原調製物に対する特異性の
ために試験した。
４にドルトンの相同分子と反応するこれらの抗体は、Ｃ
ａＭ−親和性精製された４５にドルトンのＡＣと交差反
応した。
ａＭ−親和性精製された４５にドルトンのＡＣと交差反
応した。
一ジオイムノア セイ
ラジオイムノアッセイにおいては、ポリクローナル抗体
上への１″％ＩによりラベルされたＣａＭ−結合ＡＣの
固定化の阻止が、ｌ−王土叉之久抽出物によりアッセイ
された。第３図に示されるように、ＡＣ”細菌及び培養
上清液の精製されたＡＣ及び尿素抽出物は、類似する態
様で固定化を阻止した。
上への１″％ＩによりラベルされたＣａＭ−結合ＡＣの
固定化の阻止が、ｌ−王土叉之久抽出物によりアッセイ
された。第３図に示されるように、ＡＣ”細菌及び培養
上清液の精製されたＡＣ及び尿素抽出物は、類似する態
様で固定化を阻止した。
ＡＣ−上清液又は尿素抽出物は、ＡＣに対する抗−ＡＣ
抗体の固定化を弱く阻止した。
抗体の固定化を弱く阻止した。
種々の゛ンバク質の抽出物による阻害の％は、サンプル
の相対的なタンパク質濃度の関数として変化した。
の相対的なタンパク質濃度の関数として変化した。
免疫ｍカ里
１回の感染において皮下投与された、熱不活性化された
ワクチン（８０°Ｃ）は、５０％の保護率を提供した。
ワクチン（８０°Ｃ）は、５０％の保護率を提供した。
本明細書に言及される文献を下記に示す：（１） Ｂ
ｒ＋’ｚｉｎ、 Ｃ、など、＋ＦＢＭＳ Ｍｉｃｒ
ｏｂｉｏｌ。
ｒ＋’ｚｉｎ、 Ｃ、など、＋ＦＢＭＳ Ｍｉｃｒ
ｏｂｉｏｌ。
Ｌｅｔｔ、４２． ７５〜８０ページ、１９８７゜（２
） Ｉ ｎ５ｔｉｔｕｔ Ｐａ５ｔｅｕｒ ａｎｄ
Ｉｎ５ｅｒｔｓ の名義で１９８６年１１月１７日
に出願されたフランス特許出願第８６１５９６３号。
） Ｉ ｎ５ｔｉｔｕｔ Ｐａ５ｔｅｕｒ ａｎｄ
Ｉｎ５ｅｒｔｓ の名義で１９８６年１１月１７日
に出願されたフランス特許出願第８６１５９６３号。
（３） Ｌ ａｄａｎｔ、 Ｄ 、など、、 Ｊ 、
Ｂ ｉｏｌ、 Ｃｈｅ＋ｍ、２６１゜１６２６４〜１
６２６９ページ、 １９８６゜（４） Ｗｈｉｔｅ Ａ
、 Ａ、など、、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚ ｍｏｌ。
Ｂ ｉｏｌ、 Ｃｈｅ＋ｍ、２６１゜１６２６４〜１
６２６９ページ、 １９８６゜（４） Ｗｈｉｔｅ Ａ
、 Ａ、など、、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚ ｍｏｌ。
３８Ｇ、４１〜４６ページ、 １９７４．たとえばＨａ
ｎｏｕ−ｎｅなどにより改良された方法＋ Ｊ、 Ｂ
ｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、。
ｎｏｕ−ｎｅなどにより改良された方法＋ Ｊ、 Ｂ
ｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、。
２５２、２０３９〜２０４６ページ、 １９７７゜（５
） Ｌａｅ＋＋ｖ＋Ｉｉ Ｎａｔｕｒｅ、Ｌｏｎ
ｃｌｒｅｓ＋ ２２７． ６８０〜６８５ページ、
１９７６゜ （６） Ｏ’ Ｆａｒｒｅｌｌ、 Ｊ Ｂｉ
ｏｌ、Ｃｈｅｎ＋、、 １９７５゜２５０、４００７
〜４０２１ページ。
） Ｌａｅ＋＋ｖ＋Ｉｉ Ｎａｔｕｒｅ、Ｌｏｎ
ｃｌｒｅｓ＋ ２２７． ６８０〜６８５ページ、
１９７６゜ （６） Ｏ’ Ｆａｒｒｅｌｌ、 Ｊ Ｂｉ
ｏｌ、Ｃｈｅｎ＋、、 １９７５゜２５０、４００７
〜４０２１ページ。
（７） ５ｃｈｎａｆｔｅｒ、 Ｗ、など、＋ Ａｎａ
ｌ、 Ｂ １ｏｃｈ−＋１９７３、５６．５０２〜５１
４ページ。
ｌ、 Ｂ １ｏｃｈ−＋１９７３、５６．５０２〜５１
４ページ。
（８） Ｔｏｗｂｉｎ、Ｈ，（１９７９）、 Ｐｒ
ｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ。
ｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ。
旦虹、竪紅７６ 、４３５０ページ、及び（９） Ｎ
ｇｈｉｅｍ Ｈ，０，１９８８＋ Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｉｍｍ！Ｊｎｏｌｏ １ｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ
、 ＪＩＭ ０４８０６出版。
ｇｈｉｅｍ Ｈ，０，１９８８＋ Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｉｍｍ！Ｊｎｏｌｏ １ｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ
、 ＪＩＭ ０４８０６出版。
第１図は、種々の抗−ＡＣ抗体による、毒性又は非毒性
ｌ−玉土り之スからの抽出物のイムノプロットを表わし
、 第２Ｉ及び２■図は、抗−ＡＣ抗体による、精製された
ＡＣ又は抽出物の平面ゲル電気泳動のイムノプロットを
表わし、そして 第３図はラジオイムノアッセイを表わす。 これらの図面は、写真であって図面に代わる写真である
。 図面の浄書（内容に変更なし） ９４に− ６７に− ４３Ｋ艷 □−−− 畷ハ 、 ＦＩＧ、２ ＩＩ ４９４に ４６７に ４４３Ｋ Ｈ ＦＩＧ、２１ ＦＩＧ、３ ５．９ 手 続 補 正 書（方式） ％式％ 事件の表示 平成１年特許願第９６５３９号 発明の名称 病原性細菌に対する免疫保護抗原タンパク質補正をする
者 事件との関係 特許出願人 名称 アンスティテユ バストウール （外１石） ４、代理人 住所 〒１０５ 東京都港区虎ノ門−丁目８番１０号 ６、補正の対象 （１）願書の「出願人の代表者」の欄 （２）委任状 （３）図 面 ７、補正の内容 １１）（２１別紙の通り （３） 図面の浄書（内容に変更なし）８、添附書
類の目録 （１）訂正願書 （２）委任状及び訳文 （３）浄書図面 （４）と ＄ １ １通 各１通 １通 １県
ｌ−玉土り之スからの抽出物のイムノプロットを表わし
、 第２Ｉ及び２■図は、抗−ＡＣ抗体による、精製された
ＡＣ又は抽出物の平面ゲル電気泳動のイムノプロットを
表わし、そして 第３図はラジオイムノアッセイを表わす。 これらの図面は、写真であって図面に代わる写真である
。 図面の浄書（内容に変更なし） ９４に− ６７に− ４３Ｋ艷 □−−− 畷ハ 、 ＦＩＧ、２ ＩＩ ４９４に ４６７に ４４３Ｋ Ｈ ＦＩＧ、２１ ＦＩＧ、３ ５．９ 手 続 補 正 書（方式） ％式％ 事件の表示 平成１年特許願第９６５３９号 発明の名称 病原性細菌に対する免疫保護抗原タンパク質補正をする
者 事件との関係 特許出願人 名称 アンスティテユ バストウール （外１石） ４、代理人 住所 〒１０５ 東京都港区虎ノ門−丁目８番１０号 ６、補正の対象 （１）願書の「出願人の代表者」の欄 （２）委任状 （３）図 面 ７、補正の内容 １１）（２１別紙の通り （３） 図面の浄書（内容に変更なし）８、添附書
類の目録 （１）訂正願書 （２）委任状及び訳文 （３）浄書図面 （４）と ＄ １ １通 各１通 １通 １県
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、特に精製されたアデニル酸シクラーゼ（ＡＣ）調製
物に対して発生せしめられたポリクローナル抗−ＡＣ抗
体により認識され、アデニルシクラーゼカルモジュリン
（ＣａＭ）−活性可能な活性を欠き、そしてＣａＭに対
する親和性を欠く、約４３±４．３Ｋドルトンの分子量
Ｍｒ及び５．７〜６．１、特に５．９の等電点Ｐｉを有
するタンパク質。 ２、約９０Ｋドルトンの高い分子量を有する請求項１記
載のタンパク質。 ３、毒性又は非毒性のボルデテラペルタシス（Ｂｏｒｄ
ｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、ボルデテラパラ
ペルタンス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐａｒａｐｅｒｔ
ｕｓｓｉｓ）、バシラスアントランス（Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ ａｎｔｏｒａｃｉｓ）、エルシニアエ（Ｙｅｒｓｉ
ｎｉａｅ）及びパステウレラエ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌ
ａｅ）並びにそれらの変異体から得ることができる、請
求項１又は２記載のタンパク質（但し異なった分子量を
有する）との抗原性交差反応性を有するタンパク質。 ４、ボルデテラペルタシス、ボルデテラパ ラペルタンス、ボルデテラブロンキセプチカ（Ｂｏｒｄ
ｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）及びボ
ルデテラアビウム（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ａｖｉｕｍ
）並びにそれらの変異体から成る群から選択された毒性
又は非毒性ボルデテラから得ることができる請求項３記
載のタンパク質。 ５、請求項１〜４のいづれか１項記載の精製されたタン
パク質に対して形成されるポリクローナル抗体の調製物
。 ６、請求項１〜４のいづれか１項記載の精製されたタン
パク質により免疫化されたマウスの肺臓リンパ球とマウ
ス骨髄腫との融合により得られるモノクローナル抗体。 ７、請求項５又は６記載の抗体の保護物質としての使用
。 ８、分子ワクチンである事実を特徴とするワクチンであ
って、医薬キャリヤー、ヒト及び動物において病原性細
菌による感染及び毒性効果に対して保護を誘発すること
ができる請求項１〜４のいづれか１項記載のタンパク質
及び場合によっては同じ接種物中にＦＨＡ（繊維状赤血
球凝集素）及び／又は製造されたＡＣを組合して含むこ
とができ又はそうでなくても良いワクチン。 ９、鼻腔内、経口又は非経口調製物の形で存在すること
を特徴とする請求項８記載のワクチン。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP88400950A EP0338170A1 (en) | 1988-04-19 | 1988-04-19 | Immunoprotective antigenic protein against pathogenic bacteria |
| EP88400950.7 | 1988-04-19 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02138299A true JPH02138299A (ja) | 1990-05-28 |
Family
ID=8200382
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1096539A Pending JPH02138299A (ja) | 1988-04-19 | 1989-04-18 | 病原性細菌に対する免疫保護抗原タンパク質 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5095094A (ja) |
| EP (1) | EP0338170A1 (ja) |
| JP (1) | JPH02138299A (ja) |
| DK (1) | DK190889A (ja) |
| PT (1) | PT90311A (ja) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2091186T3 (es) * | 1988-04-19 | 1996-11-01 | Pasteur Institut | Procedimiento para obtener antigenos protectores contra infecciones y procesos toxicos de bordetella. |
| FR2646776B1 (fr) * | 1989-05-12 | 1994-06-03 | Pasteur Institut | Utilisation de preparations vaccinantes a base d'adenyl cyclase ou de bacteries les produisant en tant qu'antigenes protecteurs contre les effets des bordetella |
| DK0425082T3 (da) * | 1989-09-04 | 1995-07-03 | Evans Medical Ltd | Vacciner |
| FR2728170A1 (fr) * | 1994-12-15 | 1996-06-21 | Pasteur Institut | Vaccin de type acellulaire anti-bordetella |
| US6030625A (en) * | 1994-12-15 | 2000-02-29 | Institut Pasteur | Bordetella pertussis and Bordetella parapertussis strains |
| FR2736064B1 (fr) | 1995-06-30 | 1997-09-05 | Pasteur Institut | Epitopes protecteurs de l'adenyl cyclase-hemolysine(ac-hty). leur application au traitement ou a la prevention des infections par bordetella |
| US8012539B2 (en) * | 2008-05-09 | 2011-09-06 | Kraton Polymers U.S. Llc | Method for making sulfonated block copolymers, method for making membranes from such block copolymers and membrane structures |
| US8263713B2 (en) * | 2009-10-13 | 2012-09-11 | Kraton Polymers U.S. Llc | Amine neutralized sulfonated block copolymers and method for making same |
| US8445631B2 (en) * | 2009-10-13 | 2013-05-21 | Kraton Polymers U.S. Llc | Metal-neutralized sulfonated block copolymers, process for making them and their use |
| US9394414B2 (en) | 2010-09-29 | 2016-07-19 | Kraton Polymers U.S. Llc | Elastic, moisture-vapor permeable films, their preparation and their use |
| BR112013007705A2 (pt) | 2010-10-18 | 2016-08-09 | Kraton Polymers Us Llc | solução tendo uma composição de copolímero em bloco sulfonado, película ou membrana, dispersão aquosa, compósito, composição de copolímeto em bloco sulfonado, processo, método para formar uma composição de copolímero em bloco sulfonado, e, célula eletrodialítica |
| US9861941B2 (en) | 2011-07-12 | 2018-01-09 | Kraton Polymers U.S. Llc | Modified sulfonated block copolymers and the preparation thereof |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1587193A (en) * | 1976-08-25 | 1981-04-01 | Univ Birmingham | Process for preparation of antisera |
| US4427653A (en) * | 1981-01-26 | 1984-01-24 | President And Fellows Of Harvard College | Method of making monoclonal antibodies |
| GB8412207D0 (en) * | 1984-05-12 | 1984-06-20 | Wellcome Found | Antigenic preparations |
-
1988
- 1988-04-19 EP EP88400950A patent/EP0338170A1/en not_active Withdrawn
-
1989
- 1989-04-18 JP JP1096539A patent/JPH02138299A/ja active Pending
- 1989-04-19 DK DK190889A patent/DK190889A/da not_active Application Discontinuation
- 1989-04-19 PT PT90311A patent/PT90311A/pt not_active Application Discontinuation
-
1990
- 1990-02-20 US US07/483,298 patent/US5095094A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0338170A1 (en) | 1989-10-25 |
| PT90311A (pt) | 1989-11-10 |
| DK190889A (da) | 1989-10-20 |
| DK190889D0 (da) | 1989-04-19 |
| US5095094A (en) | 1992-03-10 |
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