JPH02142467A - 植物組織培養法 - Google Patents
植物組織培養法Info
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- JPH02142467A JPH02142467A JP29729788A JP29729788A JPH02142467A JP H02142467 A JPH02142467 A JP H02142467A JP 29729788 A JP29729788 A JP 29729788A JP 29729788 A JP29729788 A JP 29729788A JP H02142467 A JPH02142467 A JP H02142467A
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- microalgae
- plant
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は、植物組織培養法に関する。
［従来の技術］
一般に、植物組織培養においては、植物体の一部あるい
は全部を植物の生長に必要な無機塩類。
は全部を植物の生長に必要な無機塩類。
ビタミン、糖などのほかに植物ホルモン（オーキシン類
、サイトカイニン類）を加えたものを培地として、カル
スをつくらせ（これをカルス誘導あるいは脱分化という
）たり、そのカルスを植え継いで培養を続は有用物質を
得たり、又はそのカルスから植物体を再生（復元）させ
たりしている。
、サイトカイニン類）を加えたものを培地として、カル
スをつくらせ（これをカルス誘導あるいは脱分化という
）たり、そのカルスを植え継いで培養を続は有用物質を
得たり、又はそのカルスから植物体を再生（復元）させ
たりしている。
植物体の再生では、カルスから不定胚を経る場合や園芸
植物のランなどのように植物棒組ｍ（−殻内には生長点
と呼ばれる分裂のさかんな部分）からプロトコーム状球
体を経て植物を再生することなども行なわれている。
植物のランなどのように植物棒組ｍ（−殻内には生長点
と呼ばれる分裂のさかんな部分）からプロトコーム状球
体を経て植物を再生することなども行なわれている。
［発明が解決しようとする課題］
上述される植物組織培養において、インドール酢酸、ナ
フトール酢酸、２・４−ジクロロフェノキシ酢酸などの
オーキシン類やカイネチン、ベンジルアデニン、ゼアチ
ンなどのサイＩ・カイニジ類といった種々の植物ホルモ
ンを相互に種々の割合で添加したり、カゼイン分解物や
酵母抽出液などを加えてカルスの増殖や分化（植物体の
再生を伴う形態的分化、有用物質を生産する代謝的分化
）を制御する試みがなされている。しかしながら。
フトール酢酸、２・４−ジクロロフェノキシ酢酸などの
オーキシン類やカイネチン、ベンジルアデニン、ゼアチ
ンなどのサイＩ・カイニジ類といった種々の植物ホルモ
ンを相互に種々の割合で添加したり、カゼイン分解物や
酵母抽出液などを加えてカルスの増殖や分化（植物体の
再生を伴う形態的分化、有用物質を生産する代謝的分化
）を制御する試みがなされている。しかしながら。
実際には増殖や分化の制御は困難であり、特に植物ホル
モン類は、添加量によって、増殖や分化を阻害するなど
の問題があった。
モン類は、添加量によって、増殖や分化を阻害するなど
の問題があった。
［課題を解決するための手段］
本発明は、上述せる問題点に鑑みなされたもので、微細
藻類抽出物及び／又は微細藻類培養濾液を含む培地によ
り植物組織培養をすることを特徴とする植物組織培養法
を要旨とするものである。
藻類抽出物及び／又は微細藻類培養濾液を含む培地によ
り植物組織培養をすることを特徴とする植物組織培養法
を要旨とするものである。
ここで植物組織培養には、（１）植物体培養（全体培養
） 、 （２）胚培養、（３）器官培養、（４）組織培
養、カルス培養、（５）細胞培養などがある。
） 、 （２）胚培養、（３）器官培養、（４）組織培
養、カルス培養、（５）細胞培養などがある。
本発明で利用できる微細藻類としては、紅藻類、緑藻類
、黄緑藻類、珪藻類、黄色鞭毛藻類、渦鞭毛藻類などが
ある。緑藻類としては、ブラキオモナス（Ｂｒａｃｈｉ
ｏＩｌｌｏｎａｓ ）属、クラミドモナス（Ｃｈｌａ＠
ｙｄｏｍｏｎａｓ ）属、クロレラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌ
ａ）ｉ、ロボモナス（Ｌｏｂｏｍｏｎａｓ） 馬、ネフ
ェロクラミス（Ｎｅｐ）＋ｒ。
、黄緑藻類、珪藻類、黄色鞭毛藻類、渦鞭毛藻類などが
ある。緑藻類としては、ブラキオモナス（Ｂｒａｃｈｉ
ｏＩｌｌｏｎａｓ ）属、クラミドモナス（Ｃｈｌａ＠
ｙｄｏｍｏｎａｓ ）属、クロレラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌ
ａ）ｉ、ロボモナス（Ｌｏｂｏｍｏｎａｓ） 馬、ネフ
ェロクラミス（Ｎｅｐ）＋ｒ。
ｃｈｌａｍｙｓ）属、ネフェロデエラ（Ｎｅｐｈｒｏｄ
ｉｅｌｌａ）属、プロトシフオン（Ｐｒｏｔｏｓｉｐｈ
ｏｎ）属、プロトテカ（Ｐｒｏｔｏｔｈｅｃａ）ｆｉ、
セネデスムス（Ｓｃｅｎｅｄｅｓｍｕｓ）属、セレナス
トウルム（Ｓｅｌｅｎａｓｔｒｕｍ）属などがあり、具
体例としては、ブラキオモナス・スブマリナ（Ｉｌｒａ
ｃｈｉｏｍｏｎａｓ ｓｕｂｍａｒｉｎａ） Ａ Ｔ
ＣＣ３０５９７、クラミドモナス・トルソベントラリス
（Ｃｈｌａｍｙｄｏｍ。
ｉｅｌｌａ）属、プロトシフオン（Ｐｒｏｔｏｓｉｐｈ
ｏｎ）属、プロトテカ（Ｐｒｏｔｏｔｈｅｃａ）ｆｉ、
セネデスムス（Ｓｃｅｎｅｄｅｓｍｕｓ）属、セレナス
トウルム（Ｓｅｌｅｎａｓｔｒｕｍ）属などがあり、具
体例としては、ブラキオモナス・スブマリナ（Ｉｌｒａ
ｃｈｉｏｍｏｎａｓ ｓｕｂｍａｒｉｎａ） Ａ Ｔ
ＣＣ３０５９７、クラミドモナス・トルソベントラリス
（Ｃｈｌａｍｙｄｏｍ。
ｎａｓ ｄｏｒｓｏｖｅｎｔｒａｌｉｓ） Ａ Ｔ Ｃ
Ｃ３０５９４、クラミドモナス・オウガメトス（Ｃｈｌ
ａｍｙｄｏｍｏｎａｓ ｅｕｇａｍｅｔｏｓ）ＡＴＣＣ
３０４０１，クラミドモナス・モノイカ（Ｃｈｌａｍｙ
ｄｏｍｏｎａｓ ｍｏｎｏｉｃａ） Ａ Ｔ ＣＣ３０
６２９、クラミドモナス・プソウダグロエ（ＣｈｌａＩ
ＩｌｙｄｏＩＩｌｏｎａｓ ｐｓｅｕｄａｇｌｏｅ）
Ａ Ｔ ＣＣ１２２３５。
Ｃ３０５９４、クラミドモナス・オウガメトス（Ｃｈｌ
ａｍｙｄｏｍｏｎａｓ ｅｕｇａｍｅｔｏｓ）ＡＴＣＣ
３０４０１，クラミドモナス・モノイカ（Ｃｈｌａｍｙ
ｄｏｍｏｎａｓ ｍｏｎｏｉｃａ） Ａ Ｔ ＣＣ３０
６２９、クラミドモナス・プソウダグロエ（ＣｈｌａＩ
ＩｌｙｄｏＩＩｌｏｎａｓ ｐｓｅｕｄａｇｌｏｅ）
Ａ Ｔ ＣＣ１２２３５。
クロレラ・エリツブソイデア（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｅ
ｌｌｉｐｓｏｉｄｅａ）ＡＴＣＣ１１４６６、クロレラ
・ルテオヴイリディス（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａｌｕｔｅｏ
ｖｉｒｉｄｉｓ） Ａ Ｔ ＣＣ３０４０６、クロレラ
・ミニアタ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａｍｉｎｉａｔａ）ＡＴ
ＣＣ３０５４６、クロレラ・サツ力ロフイラ（Ｃｈｌｏ
ｒｅｌｌａ ５ａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌａ ｖａｒ、５
ａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌａ） Ａ Ｔ ＣＣ３０４０８
、クロレラ属（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｓｐ、）Ａ Ｔ
ＣＣ１１４６９、クロレラ・バリエガタ（Ｃｈｌｏｒｅ
ｌｌａ ｖａｒｉｅｇａｔａ） Ａ Ｔ ＣＣ３０４０
９、クロレラ・ブルガリス（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｖｕ
ｌｇａｒｉｓ）ＡＴＣＣｌ １４６８、クロレラ・キサ
ンセラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｘａｎｔｈｅｌｌａ）
Ａ Ｔ ＣＣ３０４１１、ロボモナス・ピリフォーミス
（Ｌｏｂｏｍｏｎａｓ ｐｉｒｉｆｏｒｍｉｓ） Ａ
Ｔ ＣＣ３０４０３、ネフエロクラミス・スブソリタリ
ア（Ｎｅｐｈｒｏｃｈｌａｍｙｓ ５ｕｂｓｏ１ｉｔａ
ｒｉａ） Ａ Ｔ ＣＣ３０４３３、ネフエロデエラ・
プレビス（Ｎｅｐｈｒｏｄｉｅｌｌａ ｂｒｅｖｉｓ）
Ａ Ｔ ＣＣ３０４４０、プロ１−シフオン・ボテリ
オイデス（Ｐｒｏｔｏｓｉｐｈｏｎ ｂｏｔｒｙｏｉｄ
ｅｓ） Ａ Ｔ ＣＣ３０４３６、ブロトテカ′スタッ
グノラ（Ｐｒｏｔｏｔｈｅｃａ ｓｔａｇｎｏｒａ）Ａ
ＴＣＣ１６５２８，セネデスムス・ビジュガトウス（Ｓ
ｃｅｎｅｄｅｓｍｕｓ ｂｉｊｕｇａｔｕｓ） Ａ Ｔ
ＣＣ１１４６２、セネデスムス・クウアドリ力ウド（
Ｓｃｅｎｅｄｅｓｍｕｓ ｑｕａｄｒｉｃａｕｄａ）
Ａ Ｔ ＣＣ３０４２８などが挙げられる５黄緑藻類と
しては、ボテイリデウム（１３ｏｔｒｙｄｉｕｍ）属、
ミショコツカス（Ｍｉｓｃｈｏｃｏｃｃｕｓ）、ｌｉＥ
、モノダス（Ｍｏｎｏｄｕｓ）属、オフイオシテイウム
（Ｏｐｈｉｏｃｙｔｉｕｍ）属などがあり、具体例とし
ては。
ｌｌｉｐｓｏｉｄｅａ）ＡＴＣＣ１１４６６、クロレラ
・ルテオヴイリディス（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａｌｕｔｅｏ
ｖｉｒｉｄｉｓ） Ａ Ｔ ＣＣ３０４０６、クロレラ
・ミニアタ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａｍｉｎｉａｔａ）ＡＴ
ＣＣ３０５４６、クロレラ・サツ力ロフイラ（Ｃｈｌｏ
ｒｅｌｌａ ５ａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌａ ｖａｒ、５
ａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌａ） Ａ Ｔ ＣＣ３０４０８
、クロレラ属（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｓｐ、）Ａ Ｔ
ＣＣ１１４６９、クロレラ・バリエガタ（Ｃｈｌｏｒｅ
ｌｌａ ｖａｒｉｅｇａｔａ） Ａ Ｔ ＣＣ３０４０
９、クロレラ・ブルガリス（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｖｕ
ｌｇａｒｉｓ）ＡＴＣＣｌ １４６８、クロレラ・キサ
ンセラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｘａｎｔｈｅｌｌａ）
Ａ Ｔ ＣＣ３０４１１、ロボモナス・ピリフォーミス
（Ｌｏｂｏｍｏｎａｓ ｐｉｒｉｆｏｒｍｉｓ） Ａ
Ｔ ＣＣ３０４０３、ネフエロクラミス・スブソリタリ
ア（Ｎｅｐｈｒｏｃｈｌａｍｙｓ ５ｕｂｓｏ１ｉｔａ
ｒｉａ） Ａ Ｔ ＣＣ３０４３３、ネフエロデエラ・
プレビス（Ｎｅｐｈｒｏｄｉｅｌｌａ ｂｒｅｖｉｓ）
Ａ Ｔ ＣＣ３０４４０、プロ１−シフオン・ボテリ
オイデス（Ｐｒｏｔｏｓｉｐｈｏｎ ｂｏｔｒｙｏｉｄ
ｅｓ） Ａ Ｔ ＣＣ３０４３６、ブロトテカ′スタッ
グノラ（Ｐｒｏｔｏｔｈｅｃａ ｓｔａｇｎｏｒａ）Ａ
ＴＣＣ１６５２８，セネデスムス・ビジュガトウス（Ｓ
ｃｅｎｅｄｅｓｍｕｓ ｂｉｊｕｇａｔｕｓ） Ａ Ｔ
ＣＣ１１４６２、セネデスムス・クウアドリ力ウド（
Ｓｃｅｎｅｄｅｓｍｕｓ ｑｕａｄｒｉｃａｕｄａ）
Ａ Ｔ ＣＣ３０４２８などが挙げられる５黄緑藻類と
しては、ボテイリデウム（１３ｏｔｒｙｄｉｕｍ）属、
ミショコツカス（Ｍｉｓｃｈｏｃｏｃｃｕｓ）、ｌｉＥ
、モノダス（Ｍｏｎｏｄｕｓ）属、オフイオシテイウム
（Ｏｐｈｉｏｃｙｔｉｕｍ）属などがあり、具体例とし
ては。
ボティリデウム・ペケリアニウム（Ｂｏｔｒｙｄｉｕｍ
ｂｅｃｈｅｒｉａｎｕｍ）ＡＴＣＣ３０６０２、ボテ
イリデウム・シストスム（Ｂｏｔｒｙｄｉｕｍ ｃｙｓ
ｔｏｓｕｍ） Ａ Ｔ ＣＣ３０５８９、ミシミコツカ
ス・スフアエロセファラス（Ｍｉｓｃｈｏｃｏｃｃｕｓ
５ｐｈａｅｒｏｃａｐｈａｌｕｓ） Ａ Ｔ ＣＣ３
０５９２、モノダス・セプテラネウス（Ｍｏｎｏｄｕｓ
５ｕｂｔｅｒｒａｎｅｕｓ）ＡＴＣＣ３０５９３、オ
フイオシテイウム・マジュス（Ｏｐｈｉｏｃｙｔｉｕｍ
ｎ＋ａｊｕｓ） Ａ Ｔ ＣＣ３０６０１などが挙げ
られる。黄色鞭毛藻類としては、オクロモナス（Ｏｃｈ
ｒｏｍｏｎａｓ ）属などがあり、具体例としては、オ
クロモナス・ダニ力（Ｏｃｈｒｏｍｏｎａｓ ｄａｎｉ
ｃａ） Ａ Ｔ ＣＣ３０００４、オクロモナス−マル
バメンシス（Ｏｃｈｒｏｍｏｎａｓ ｍａｌｈａ＋ｎｅ
ｎｓｉｓ）ＡＴＣＣ１１５３２などが挙げられる。また
、微細藻類は、上記した菌体あるいはその変種や変異株
に限ることなく、天然から分離した海洋性、淡水性の微
細藻類も含まれる。更に、これらの画調は１種又は種以
上併用してもがまはない。微細藻類の培養は、通常、無
機塩類等を含む培地を用い、タンク培養あるいは太陽光
を利用した屋外開放培養で行い得るが、本発明において
は、目的とする微細藻類が天然にある程度豊富に存在す
るならば、その菌体の生育存在する海水あるいは淡水を
培養液とすることができる。微細藻類培養濾液は上述し
た培養法で得られる培養液を遠心分前あるいは濾過など
を行って取得されるが、目的とする培養濾液の生物活性
が弱い場合は、前記培養濾液を減圧濃縮などにより濃縮
して用いてもかまわない、この際、濃縮倍率が大きくな
り塩濃度が高くなると植物組織に悪影響を与えることが
あるので、電気透析などで植物組織に悪影響がなくなる
まで脱塩して使用するのが望ましい。また、微細藻類抽
出物は、前記のようにして得られた菌体または適度に破
砕した菌体を常温または加熱した適当な溶媒と接触させ
て行い得たものであるが、ここで用いる溶媒としては、
菌体によって種々の溶媒を単独または複数併用してかも
まわないが、−殻内には水性溶媒が好ましい０例えば水
性溶媒としては、水単独あるいは酸、塩基、塩類、もし
くは有機溶媒を溶解した溶液などがある。また、メタノ
ール、エタノール、酢酸エチルエステル、エーテル等の
有機溶媒で抽出後、有機溶媒を除去し水に溶解させても
よい。本発明で使用できる抽出物としては前記した方法
により得られた抽出液。
ｂｅｃｈｅｒｉａｎｕｍ）ＡＴＣＣ３０６０２、ボテ
イリデウム・シストスム（Ｂｏｔｒｙｄｉｕｍ ｃｙｓ
ｔｏｓｕｍ） Ａ Ｔ ＣＣ３０５８９、ミシミコツカ
ス・スフアエロセファラス（Ｍｉｓｃｈｏｃｏｃｃｕｓ
５ｐｈａｅｒｏｃａｐｈａｌｕｓ） Ａ Ｔ ＣＣ３
０５９２、モノダス・セプテラネウス（Ｍｏｎｏｄｕｓ
５ｕｂｔｅｒｒａｎｅｕｓ）ＡＴＣＣ３０５９３、オ
フイオシテイウム・マジュス（Ｏｐｈｉｏｃｙｔｉｕｍ
ｎ＋ａｊｕｓ） Ａ Ｔ ＣＣ３０６０１などが挙げ
られる。黄色鞭毛藻類としては、オクロモナス（Ｏｃｈ
ｒｏｍｏｎａｓ ）属などがあり、具体例としては、オ
クロモナス・ダニ力（Ｏｃｈｒｏｍｏｎａｓ ｄａｎｉ
ｃａ） Ａ Ｔ ＣＣ３０００４、オクロモナス−マル
バメンシス（Ｏｃｈｒｏｍｏｎａｓ ｍａｌｈａ＋ｎｅ
ｎｓｉｓ）ＡＴＣＣ１１５３２などが挙げられる。また
、微細藻類は、上記した菌体あるいはその変種や変異株
に限ることなく、天然から分離した海洋性、淡水性の微
細藻類も含まれる。更に、これらの画調は１種又は種以
上併用してもがまはない。微細藻類の培養は、通常、無
機塩類等を含む培地を用い、タンク培養あるいは太陽光
を利用した屋外開放培養で行い得るが、本発明において
は、目的とする微細藻類が天然にある程度豊富に存在す
るならば、その菌体の生育存在する海水あるいは淡水を
培養液とすることができる。微細藻類培養濾液は上述し
た培養法で得られる培養液を遠心分前あるいは濾過など
を行って取得されるが、目的とする培養濾液の生物活性
が弱い場合は、前記培養濾液を減圧濃縮などにより濃縮
して用いてもかまわない、この際、濃縮倍率が大きくな
り塩濃度が高くなると植物組織に悪影響を与えることが
あるので、電気透析などで植物組織に悪影響がなくなる
まで脱塩して使用するのが望ましい。また、微細藻類抽
出物は、前記のようにして得られた菌体または適度に破
砕した菌体を常温または加熱した適当な溶媒と接触させ
て行い得たものであるが、ここで用いる溶媒としては、
菌体によって種々の溶媒を単独または複数併用してかも
まわないが、−殻内には水性溶媒が好ましい０例えば水
性溶媒としては、水単独あるいは酸、塩基、塩類、もし
くは有機溶媒を溶解した溶液などがある。また、メタノ
ール、エタノール、酢酸エチルエステル、エーテル等の
有機溶媒で抽出後、有機溶媒を除去し水に溶解させても
よい。本発明で使用できる抽出物としては前記した方法
により得られた抽出液。
あるいはこれらを適宜濃縮あるいは希釈して使用できる
。さらに、これらの抽出液及び分画液を減圧乾燥、凍結
乾燥、噴霧乾燥等により乾燥し粉末としても使用できる
。微細藻類培養濾液及び／又は微細藻類抽出物の基本培
地への添加量は、０゜０１〜７０％で使用目的、使用方
法によって適宜選択できるが、望ましくは０．０１〜２
５％である。
。さらに、これらの抽出液及び分画液を減圧乾燥、凍結
乾燥、噴霧乾燥等により乾燥し粉末としても使用できる
。微細藻類培養濾液及び／又は微細藻類抽出物の基本培
地への添加量は、０゜０１〜７０％で使用目的、使用方
法によって適宜選択できるが、望ましくは０．０１〜２
５％である。
以上述べた、微細藻類抽出物及び／又は培養濾液を基本
培地に添加し、その培地により植物組織培養をするので
あるが、基本培地、培養方法などは通常の植物組織培養
におけるものと同様である。
培地に添加し、その培地により植物組織培養をするので
あるが、基本培地、培養方法などは通常の植物組織培養
におけるものと同様である。
すなわち基本培地としては、ムラシゲ（Ｍｕｒａｓｈｉ
ｇｅ） ＆スクーグ（Ｓｋｏｏｇ ） （１９６２）の
無機塩。
ｇｅ） ＆スクーグ（Ｓｋｏｏｇ ） （１９６２）の
無機塩。
微量成分、およびビタミン等を含む基本的合成培地、あ
るいは植物組織培養に適した種々の改変培地を適宜選択
して使用できる。更に、通常の培養に使用される植物ホ
ルモン、ココナツツミルク、カゼイン分解物や酵母抽出
物等を目的に応じて併せて添加してもよい。
るいは植物組織培養に適した種々の改変培地を適宜選択
して使用できる。更に、通常の培養に使用される植物ホ
ルモン、ココナツツミルク、カゼイン分解物や酵母抽出
物等を目的に応じて併せて添加してもよい。
また、培養の対象となる植物は１分化全能性を有してい
ることが知られている。すなわち外植体（植物体全体又
はそれらの一部）が培養可能である。
ることが知られている。すなわち外植体（植物体全体又
はそれらの一部）が培養可能である。
また、前記した植物体全体又はそれらの一部の初代培養
あるいは継代培養したものも培養可能である。特に、茎
頂部、形成層、若い胚軸等が好ましい。
あるいは継代培養したものも培養可能である。特に、茎
頂部、形成層、若い胚軸等が好ましい。
［実施例］
以下、実施例によってさらに詳しく説明する。
実施例１
（１）ニンジン培養細胞の作製
ニンジンの無菌種子の芽ばえにおいて胚軸が１０口位に
生長したものを約１０１位に切断し、下記培地中で２５
℃、暗条件下で培養した。培地は基本培地としてＭ ｕ
ｒａｓｈｉｇｅ ｋ Ｓｋｏｏｇ培地を使用し、これに
３％、２・４−Ｄ １■／Ω（オーキシン類）を添加し
ｐ）１５．５〜ｐＨ５，７に調整した。
生長したものを約１０１位に切断し、下記培地中で２５
℃、暗条件下で培養した。培地は基本培地としてＭ ｕ
ｒａｓｈｉｇｅ ｋ Ｓｋｏｏｇ培地を使用し、これに
３％、２・４−Ｄ １■／Ω（オーキシン類）を添加し
ｐ）１５．５〜ｐＨ５，７に調整した。
約１ケ月の培養後、培地中の２・４−Ｄ濃度を０゜１１
■／Ωに減少させた培地に移植し、振盪速度９０回／分
のレシプロ式シェーカーを用いて振盪培養した。その後
、１週間に１回の割合で、２・４−Ｄ ０．１１■／
Ｑを含む培地に植え継いで生長の早いニンジン培養細胞
を得る。
■／Ωに減少させた培地に移植し、振盪速度９０回／分
のレシプロ式シェーカーを用いて振盪培養した。その後
、１週間に１回の割合で、２・４−Ｄ ０．１１■／
Ｑを含む培地に植え継いで生長の早いニンジン培養細胞
を得る。
（■）微細藻類培養濾液及び微細藻類抽出物の調微細藻
類として、クロレラ・ブルガリス（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ
ｖｕｌｇａｒｉｓ） Ａ Ｔ ＣＣ１１４６８、クロ
レラ・サツ力ロフィラ変種（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ５ａ
ｃｃｈａｒｏｐｈｉｌａ ｖａｒ、５ａｃｃｈａｒｏｐ
ｈｉｌａ） Ａ Ｔ ＣＣ３０４０８、クロレラ・エリ
プソイデア（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｅｌｌｉｐｓｏｉｄ
ｅａ）ＡＴＣＣ１１４６６を用いて調製した。前記微細
藻類をＡＴＣＣ指定の培養条件にて培養後、培養液を遠
心濾過し濾液を得、エバポレイターで１００倍に濃縮し
た。この濃縮液をモザイク荷電膜脱塩器（デザルトン
ＤＳ−１０３：東ソー株式会社）で脱塩し、０．４５μ
ｍのメンンブランンフィルターを用いて濾過し、得られ
た濾液を微細藻類培養濾液とした。微細藻類抽出物は菌
体を集菌後凍結乾燥し、水に対して３％になるように菌
体を懸濁させ、ｌＯＯ’Ｃで６０分間熱水抽出し、遠心
分離して上澄液を０．４５μｍメンブランフィルタ−を
用いて濾過して得た。
類として、クロレラ・ブルガリス（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ
ｖｕｌｇａｒｉｓ） Ａ Ｔ ＣＣ１１４６８、クロ
レラ・サツ力ロフィラ変種（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ５ａ
ｃｃｈａｒｏｐｈｉｌａ ｖａｒ、５ａｃｃｈａｒｏｐ
ｈｉｌａ） Ａ Ｔ ＣＣ３０４０８、クロレラ・エリ
プソイデア（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｅｌｌｉｐｓｏｉｄ
ｅａ）ＡＴＣＣ１１４６６を用いて調製した。前記微細
藻類をＡＴＣＣ指定の培養条件にて培養後、培養液を遠
心濾過し濾液を得、エバポレイターで１００倍に濃縮し
た。この濃縮液をモザイク荷電膜脱塩器（デザルトン
ＤＳ−１０３：東ソー株式会社）で脱塩し、０．４５μ
ｍのメンンブランンフィルターを用いて濾過し、得られ
た濾液を微細藻類培養濾液とした。微細藻類抽出物は菌
体を集菌後凍結乾燥し、水に対して３％になるように菌
体を懸濁させ、ｌＯＯ’Ｃで６０分間熱水抽出し、遠心
分離して上澄液を０．４５μｍメンブランフィルタ−を
用いて濾過して得た。
（ＩＩＩ）ニンジン培養細胞の培養
（Ｉ）で作製したニンジン培養細胞を用いて培地に対し
て（ＩＩ）で得られたクロレラ・ブルガリス菌体抽出液
と培養濾液を培地に対して１％添加した培地と、無添加
の培地で１２日培養した結果を表−１に示す。
て（ＩＩ）で得られたクロレラ・ブルガリス菌体抽出液
と培養濾液を培地に対して１％添加した培地と、無添加
の培地で１２日培養した結果を表−１に示す。
表−１
× 細胞数の測定は、「植物組織培養の技術」（１９８
３年発行、性向、中高、古谷、朝食書店）ｐ、３８に準
じて下記のように測定した。
３年発行、性向、中高、古谷、朝食書店）ｐ、３８に準
じて下記のように測定した。
セルラーゼ・オノズカＲ−１０２％、マルセロチームＲ
−１０ｉ％、ドリセラーゼ２％、塩化カルシウム（Ｃａ
Ｃ１，・２Ｈ，Ｏ） ０．５％、マンニトール０．７
Ｍを用いて、３０℃、６０分間、振幅７国、振盪回数９
０回／分で振盪し、次に５０回／分のｍ盪を９０分間行
ない、遊離してきたプロトプラストの数を０．１ｍｎの
深さのへモサイトメーターを用いて計測し細胞を測定し
た。
−１０ｉ％、ドリセラーゼ２％、塩化カルシウム（Ｃａ
Ｃ１，・２Ｈ，Ｏ） ０．５％、マンニトール０．７
Ｍを用いて、３０℃、６０分間、振幅７国、振盪回数９
０回／分で振盪し、次に５０回／分のｍ盪を９０分間行
ない、遊離してきたプロトプラストの数を０．１ｍｎの
深さのへモサイトメーターを用いて計測し細胞を測定し
た。
実施例２
実施例１の（１）で作製したニンジン培養細胞は、形態
的分化を行ない、不定胚を形成することが知られている
が、その際における微細藻類抽出物と微細藻類培養濾液
の添加による影響を調べた。
的分化を行ない、不定胚を形成することが知られている
が、その際における微細藻類抽出物と微細藻類培養濾液
の添加による影響を調べた。
培地は実施例１の（１）で用いた培地において。
植物ホルモンである２・４−Ｄ を含まない基本培地を
用いた。実施例１の（ＩＩ）で作製されたクロレラ・サ
ツ力ロフイラ菌体の抽出液と培養濾液を培地に対して１
％添加した培地と、無添加の培地で温度２５℃、暗条件
下で３０日間培養し形成された不定胚について１０日月
日２０日目、３０日月日顕微ｊ１観察した結果を表−２
に示す。
用いた。実施例１の（ＩＩ）で作製されたクロレラ・サ
ツ力ロフイラ菌体の抽出液と培養濾液を培地に対して１
％添加した培地と、無添加の培地で温度２５℃、暗条件
下で３０日間培養し形成された不定胚について１０日月
日２０日目、３０日月日顕微ｊ１観察した結果を表−２
に示す。
表−２
×１．不定胚形成率：不定胚数を全細胞あるいは細胞塊
数で割った値。
数で割った値。
＊２． Ｏ：不定胚から発芽、発根の形態の変化がす
みやかに起こり生長も速かった。
みやかに起こり生長も速かった。
×：不定胚から発芽１発根の形態の変化がすみやかに起
らなかった。
らなかった。
実施例３
ラン科植物であるカドレアの生長点培養において、培地
中に実施例１の（ＩＩ）で作製した微細藻類抽出液及び
微細藻類培養濾液をそれぞれ０．５％添加してプロトコ
ーム状球体（以下、ｒＰＬＢＪト呼ぶ。）への影響につ
いて調べた。
中に実施例１の（ＩＩ）で作製した微細藻類抽出液及び
微細藻類培養濾液をそれぞれ０．５％添加してプロトコ
ーム状球体（以下、ｒＰＬＢＪト呼ぶ。）への影響につ
いて調べた。
材料は、カドレア類に属するレリオカトレア（Ｌａｅｌ
ｉｏｃａｔｔｌｅｙａ）の側芽の生長点付近の分裂組織
から誘導されたＰＬＢである。ＰＬＢ培養培地としては
、ハイボネックス（Ｈｙｐｏｎｅス：７−６−１９）に
ジャガイモジュース７％、炭素源としてショ糖２％を含
むものを使用した。
ｉｏｃａｔｔｌｅｙａ）の側芽の生長点付近の分裂組織
から誘導されたＰＬＢである。ＰＬＢ培養培地としては
、ハイボネックス（Ｈｙｐｏｎｅス：７−６−１９）に
ジャガイモジュース７％、炭素源としてショ糖２％を含
むものを使用した。
初期誘導のＰＬＢを１５個まで増殖し、１個のＰＬＢを
４つに分割し、分割された６０個のＰＬＢを調整した。
４つに分割し、分割された６０個のＰＬＢを調整した。
ＰＬＢ培養培地に対して実施例１の（■）で作製したク
ロレラ・エリプソイデア菌体抽出液と培養濾液を０．５
％添加した培地と、無添加の培地で１ケ月間培養した結
果を表−３に示す。
ロレラ・エリプソイデア菌体抽出液と培養濾液を０．５
％添加した培地と、無添加の培地で１ケ月間培養した結
果を表−３に示す。
表−３
※（１） ＰＬＢの個数が増加しなかったもの。
（２） ＰＬＢの個数が増加したもの。
（３）芽、根に分化したもの。
実施例４
タバコのカルスからの植物体の再生において微細藻類抽
出物及び微細藻類培養濾液の添加による影響について調
べた。
出物及び微細藻類培養濾液の添加による影響について調
べた。
材料は、タバコ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ
Ｌ、ｃｖ。
Ｌ、ｃｖ。
Ｂ ｒｉｇｈｔ Ｙ ｅｌｌｏｖ）の茎の髄組織由来の
カルスである。カルスの培養は、Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ
＆ Ｓ ｋｏｏｇ培地を使用し、これに植物ホルモンと
して、インドール酢酸（１ｍｇ／Ｑ）とカイネチン（０
，１■／Ｑ） を添加した寒天培地上で継代培養した。
カルスである。カルスの培養は、Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ
＆ Ｓ ｋｏｏｇ培地を使用し、これに植物ホルモンと
して、インドール酢酸（１ｍｇ／Ｑ）とカイネチン（０
，１■／Ｑ） を添加した寒天培地上で継代培養した。
芽の分化誘導の基本培地としては、Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ
＆ Ｓｋｏｏｇ培地に植物ホルモンであるインドール酸
１！！ （０，１ｍｇ／ Ｑ） とカイネチン（１ｍｇ
／Ｑ）を加えた寒天培地を使用した。
＆ Ｓｋｏｏｇ培地に植物ホルモンであるインドール酸
１！！ （０，１ｍｇ／ Ｑ） とカイネチン（１ｍｇ
／Ｑ）を加えた寒天培地を使用した。
上記基本培地に対して、実施例１の（ＩＩ）で作製した
クロレラ・エリプソイデア抽出液と培養濾液を１．５％
添加した培地と無添加の培地を作製した。それぞれの培
地に対して、継代培養されたカルスをカミソリの刃を用
いて５ｍｍ角の大きさに切断し、カルス切片を試験管１
本に１個の割合で移植したものを各２５本用意し１４日
間培養した結果を表−４に示す。
クロレラ・エリプソイデア抽出液と培養濾液を１．５％
添加した培地と無添加の培地を作製した。それぞれの培
地に対して、継代培養されたカルスをカミソリの刃を用
いて５ｍｍ角の大きさに切断し、カルス切片を試験管１
本に１個の割合で移植したものを各２５本用意し１４日
間培養した結果を表−４に示す。
表−４
実施例５
ニンジン培養細胞β−カロチン産生株に対して。
微細藻類抽出物と微細藻類培養濾液の添加による影響を
調べた。
調べた。
培地は、Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ ＆ Ｓｋｏｏｇ培地を使
用し、これにショ糖３％、 ２・４−Ｄ １■／Ｑを添
加し、ｐＨ５，５〜５．７ に調整し寒天を１％加えた
寒天固体培地を基本培地として使用した。
用し、これにショ糖３％、 ２・４−Ｄ １■／Ｑを添
加し、ｐＨ５，５〜５．７ に調整し寒天を１％加えた
寒天固体培地を基本培地として使用した。
実施例１の（Ｉｔ）で作製したクロレラ・サツ力ロフィ
ラ抽出液と培養濾液を基本培地に対して１％添加した培
地と、無添加の培地で温度２５℃、暗条件下で５０日間
培養し細胞内に蓄積されたβ−カロチン量を測定した。
ラ抽出液と培養濾液を基本培地に対して１％添加した培
地と、無添加の培地で温度２５℃、暗条件下で５０日間
培養し細胞内に蓄積されたβ−カロチン量を測定した。
β−カロチン量は、培養細胞の生重量を測定後、乳鉢中
で細胞を破砕し、少量のアセ１−ンを加えてβ−カロチ
ンを抽出し。
で細胞を破砕し、少量のアセ１−ンを加えてβ−カロチ
ンを抽出し。
３ｍ１）の石油エーテルを加え、石油エーテル層中にβ
−カロチンを移行させ、分光光度計を用いて、石油エー
テル層の４５３ｎｍの吸光度を測定し、培養細胞内に蓄
積されたβ−カロチン量を算出した。
−カロチンを移行させ、分光光度計を用いて、石油エー
テル層の４５３ｎｍの吸光度を測定し、培養細胞内に蓄
積されたβ−カロチン量を算出した。
その結果を表−５に示す。
表−５
［発明の効果］
本発明によれば、植物組織培養において、微細藻類抽出
物及び／又は微細藻類培養濾液を添加することにより、
細胞の増殖および分化を促進し効率よく培養を行なうこ
とができ、かつ、合成植物ホルモンの悪影響を極力おさ
えるための処置法となることができる。従って、植物を
一定の条件下で培養し、その器官１組織及び細胞を目的
に応じる形態に誘導でき、有用物質産生細胞の産生能を
向上させることができる。あるいは、細胞の生長（増殖
）を促進する効果を併せ持つ為、有用物質産生細胞の大
量作出を容易に行なうことができる。
物及び／又は微細藻類培養濾液を添加することにより、
細胞の増殖および分化を促進し効率よく培養を行なうこ
とができ、かつ、合成植物ホルモンの悪影響を極力おさ
えるための処置法となることができる。従って、植物を
一定の条件下で培養し、その器官１組織及び細胞を目的
に応じる形態に誘導でき、有用物質産生細胞の産生能を
向上させることができる。あるいは、細胞の生長（増殖
）を促進する効果を併せ持つ為、有用物質産生細胞の大
量作出を容易に行なうことができる。
Claims (1)
- 微細藻類抽出物及び／又は微細藻類培養濾液を含む培地
により植物組織培養をすることを特徴とする植物組織培
養法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29729788A JPH02142467A (ja) | 1988-11-25 | 1988-11-25 | 植物組織培養法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29729788A JPH02142467A (ja) | 1988-11-25 | 1988-11-25 | 植物組織培養法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02142467A true JPH02142467A (ja) | 1990-05-31 |
Family
ID=17844687
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP29729788A Pending JPH02142467A (ja) | 1988-11-25 | 1988-11-25 | 植物組織培養法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH02142467A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103651117A (zh) * | 2013-11-11 | 2014-03-26 | 青岛佰众化工技术有限公司 | 一种红藻无菌外植体的制备方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5765178A (en) * | 1980-10-06 | 1982-04-20 | Kurorera Kogyo Kk | Plant tissue or cell culture |
-
1988
- 1988-11-25 JP JP29729788A patent/JPH02142467A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5765178A (en) * | 1980-10-06 | 1982-04-20 | Kurorera Kogyo Kk | Plant tissue or cell culture |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103651117A (zh) * | 2013-11-11 | 2014-03-26 | 青岛佰众化工技术有限公司 | 一种红藻无菌外植体的制备方法 |
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