JPH021434A - 画像物質および治療物質として有用なハプテンの改良 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 モノクローナル抗体の生体内（ｉｎ　ｖｉｖｏ）用途の
重要性が高まってきている。その関心の中心は、疾患、
特に癌の画像化（イメージング）およびその治療に適用
できる可能性にある。例えば、金属イオンとキレート試
薬とのキレート錯体で襟識されたモノクローナル抗体は
、特定の疾患状態を画像化および治療する上で特に有用
である。一般に、このようなモノクローナル抗体は、ハ
ブテンとの化学的結合によって襟識されるか、あるいは
抗−ハブテン抗体の場合は、それが金属キレート体と特
異的に結合して非共有結合性のハプテン−抗体複合体を
形成できる能力に基づいて標識される。

モノクローナル抗体を腫瘍画像化および治療に使用する
ことに関連した最近の研究により、ハプテン、および例
えば腫瘍ターゲットに対して特異性を有する２機能性抗
体によってハプテンの腫瘍ターゲットへの到達性（デリ
バリ−）に関する機序が提供されることが明らかにされ
た。２機能性抗体系にあっては、疾患部位へのハプテン
の到達は、時間依存性結合、および抗体からのハプテン
の放出が関与している。従って、個々のハプテンに関す
る画像・物質または治療物質としての有用性は、使用す
る抗体だけでなく、さらに血清成分、例えばタンパク質
、脂質、および他の組織コンパートメント（ｔｉｓｓｕ
ｅ　ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔｓ）とハプテンとの相互作
用に左右されるものである゛。例えば、個々のハプテン
の本来の薬物動態性およびハプテンに対する抗体の親和
性により、共有結合した抗体結合物と区別できない程に
、非常に堅（抗−ハプテン抗体に結合しているハプテン
を生じることもあり、また疾患部位に抗体と共に局在化
できない程に抗−ハブテン抗体と非常にゆるく結合する
ハプテンを生じる場合もある。さらに、個々のハプテン
の本来の薬物動態性により、血清および組織と望ま゛し
くない相互作用を行い、ハプテンの肝、腎または腸への
蓄積量が耐えられないレベルにまで達することもある。

このような場合、ハプテンの生体分布および局在性は、
２機能性抗体のデリバリ−システムの臨床的価値を実質
的に制限してしまう。

従って、各種のハプテンの薬物動態性を生体内画像化お
よび生体内治療に適するよう改変する必要がある。さら
に、個々の適用に適するよう所望の性質を抗体デリバリ
−システムに与える新規なハプテン誘導体の必要性があ
る。本発明は、これらの必要性に応じるため、改変され
た薬物動態を有する新規なハプテン誘導体、および特定
のハプテンの薬物動態を改変するための方法を提供する
ものである。

生体内画像物質および治療物質として有用であるハプテ
ンは、意外にも、そのハプテン−の本来の薬物動態性が
変わるように、改良することができる。従って、本発明
は、新規なハプテン誘導体を提供するばかりでな（、放
射性画像物質または放射性治療物質としてのハプテンの
薬物動態を改変するための方法であって、適当なハプテ
ンおよびこのハプテンと結合可能な抗体を選択し、ハプ
テンを誘導体化してハプテン−抗体複合体の解離速度、
ならびにハプテンと血清成分および組織コンパートメン
トとの相互作用を改変することを特徴とする方法を提供
するものであり、その結果、血清半減期および組織に放
射される放射線量が増加または減少される。それ故、画
像化または治療を目的として、前もって決定した有効投
与量の誘導ハプテンおよび抗体を患者に投与することが
できる。

本発明によって誘導され得るハプテン類は、−般に、キ
レート試薬と金属イオンとの錯体から選択される。好ま
しくは、本発明での使用に選択されるハプテンは、エチ
レンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミ
ン五酢酸（ＤＴＰＡ）、１．４．７．ｔｏ−テトラアザ
シクロドデカン−Ｎ　、　Ｎ　Ｔ　、　Ｎ　ｌ　ｌ　、
　Ｎ　Ｉ　ｌ　１−四酢酸（ＤＯＴＡ）　、１，５゜９
．１３−テトラアザシクロヘキサデカン−Ｎ、Ｎ１　、
　Ｎ　ｌ　ｌ　、　Ｎ　ｌ　ｌ　１−四酢酸（ＨＥ　Ｔ
　Ａ）、１，４．７゜１０−テトラアザシクロトリデカ
ン−Ｎ、Ｎ’、Ｎ“１　、　Ｎ　ｌ　ｌ　ｌ−四酢酸（
ＴＲＩＴＡ）　、または１，４゜８．１１−テトラアザ
シクロテトラデカン−Ｎ、ＮＺ　Ｎ”Ｚ　Ｎ”°゛−四
酢酸酢酸　Ｅ　Ｔ　Ａ）の金属イオン錯体であり、これ
ら誘導ハプテンは、以下の式（Ｉ）で示される： ｐ−Ｒ’　　ＣａＨ４ＣＨ＊　　ＥＤＴＡ　　Ｍ　　　
（Ｉ）［式中、Ｒ１は、 −ＮＨ−Ｃ−ＣＨ，−ＮＨ−Ｒ− ＮＨ−Ｒ２、 または＝ＮＨＣ−ＣＨ２Ｓ　　Ｒ２であり、Ｒ２は水素
、アミ７基、−〇Ｃ→Ｙ）、ｐ−フェニル−ＣＨ７−Ｙ
、分枝鎖状＆Ｌ＜は直鎖状の非置換（Ｃ，−Ｃ３ｏ）ア
ルキル基、または分枝鎖状もしくは直鎖状の置換（Ｃ，
−Ｃ３，）アルキル、シクロアルキル、アリールもしく
はアリールアルキル基 （ここに、置換分は、ヒドロキシ、カルボキシ、ＳＲ’
、’フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード、アミノ、ニト
ロ、−８○３Ｈ，−ＮＨＲ’、ＮＨＲ’、−Ｎ（Ｒ３）
、、−ＣＯＮＨＲ３、Ｃ０ＯＲ’、−ＳＯ，、−ＰＯ，
，７エニー　ル、ベンジル、イミダゾロ、ならびに以下
の式で示される基 ＮＨ−Ｃ−Ｎ）（＝Ｒ’、−ＮＨ−Ｃ−ＮＨ−Ｒ３ＮＨ
０ および−ＮＨ−Ｃ−ＮＨ−Ｒ３、 の中から選ばれる１またはそれ以上の基である）である
。

ここに、Ｒ３は、水素、直鎖状もしくは分枝鎖状（Ｃ，
−Ｃ８゜）アルキル基、 ｐ−フェニル−ＣＨ，−Ｙ、−Ｃ−ＣＨ３、または非反
応性官能基であり、 Ｙは、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、ＤＯＴＡＳＨＥＴＡＳＴＲ
ＩＴＡまたはＴＥＴＡであり、Ｒ′は、Ｈまたは−ＣＨ
，−Ｃ−ＮＨＲ３であり、Ｍは金属イオンである。］。

好ましい態様では、式（Ｉ　ａ） ｐ−Ｒ’−Ｃ，Ｈ，ＣＨ，ＥＤＴＡ−Ｍ　　　　（Ｉ　
ａ＞［式中、Ｒ’は、 Ｓ。

−　Ｎ　Ｈ−Ｃ−Ｎ　Ｈ−Ｒ’、−Ｃ−Ｎ　Ｈ−Ｒ！、
または−ＮＨ−Ｃ−ＣＨ，−Ｒ’ （ここに、Ｒ２は水素、ＮＨ，、分枝鎖状もしくは直鎖
状の非置換（Ｃ，−Ｃ，。）アルキル基であるか、また
は−ＯＨ，−ＣＯＯＨ１＝Ｏ，＝Ｓ。

Ｓ　　　　ＣＱ、　Ｆ、　　Ｂｒ、　　　Ｉ、　　ＮＨ
２、ＮＯ７、−３Ｏ３Ｈ，−ＮＨ−Ｒ”、 −ＣＯＮＨＲ３、−ＣＯＯＲ’、−８○４、−ｐｏ、、
フェニルおよびベンジルの中から個別に選ばれる１また
はそれ以上の置換分によって置換されている分枝鎖状も
しくは直鎖状（Ｃ，−Ｃ，。）アルキル、シクロアルキ
ル、アリールまたはアリールアルキル基である） である。

ここに、Ｒ３はＨ１アルキル基または非反応性官能基で
あり、 Ｍは金属イオンである。］ で示される化合物が、画像物質または治療物質として有
用である。

特に好ましい本発明の化合物は、式（ｒｂ）：ｐ−Ｒ１
−Ｃ，Ｈ，−ＣＨ，−ＥＤＴＡ−Ｍ　　（Ｉｂ）［式中
、Ｒ′は、 −ＮＨ−Ｃ−ＮＨ−Ｒ”、 ＮＨ−Ｃ−ＣＨ，−３−Ｒ” ＮＨ−Ｃ−ＣＨ，−Ｒ”、−Ｎ　Ｈ−Ｒ２、−ＮＨ−Ｃ
−ＣＨ，−ＮＨ−Ｒ’、またはＮ　Ｈ−Ｃ−Ｎ　Ｈ−Ｒ
”であり、 Ｒ２は−ｐｐ−フェニル−Ｈ、−Ｙ、　−ＯＣ−＋Ｙ）
、または分枝鎖状もしくは直鎖状の置換（ＣＩ　　Ｃ３
０）アルキル、シクロアルキル、アリールもしくはアリ
ールアルキル基 （ここに、置換分は、ヒドロキシ、 ＮＨＲ’、−Ｎ（Ｒ’）ｔ、イミダゾロ、ならびに以下
の式で示される基： ＮＨＯ および−ＮＨ−Ｃ−ＮＨ−Ｒ’、 の中から選ばれる１またはそれ以上の基である）である
。

ここに、Ｒ３は−ｐ−フェニル−Ｃ８Ｈ４　　Ｙ、また
は−Ｃ−ＣＨ，であり、 Ｙは、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、ＤＯＴＡ、ＨＥＴＡ、ＴＲ
ＩＴＡまたはＴＥＴＡであり、Ｒ４は、Ｈまたは−ＣＨ
，−Ｃ−ＮＨＲ３であり、Ｍは金属イオンである。］ で示される化合物である。

さらに、本発明は、式（Ｉ）、（Ｉａ）または（Ｉｂ）
で示される化合物を、１つまたはそれ以上の薬学的に許
容され得る担体、希釈剤または賦形剤と共に含有してな
る医薬組成物を提供するものである。この組成物は、さ
らに本発明のハプテンとは分離されて、またはそれと組
合わされてハプテンと結合し得る抗体をも含有すること
ができる。

さらに、本発明は、前もって決定した有効量の本発明の
ハプテン、および適当な抗−ハプテン抗体を連続して、
同時に、またはそれらを組み合わせて患者に投与するこ
とを特徴とする、生体内画像方法および治療方法をも提
供するものである。

以下に記載した詳細な説明により、本発明はより理解さ
れるであろうし、かつ本発明の当業界への貢献度をも理
解されるであろう。

既述したように、本発明は、１つの目的として、ハプテ
ンを生体内放射線画像物質または放射線治療物質とする
ようハプテンの薬物動態を改変する方法を提供するもの
である。この方法は、画像化または治療にとって適当な
ハプテンおよびこのハプテンと結合できる抗体を選択し
、該ハプテンを誘導体化してハプテン−抗体複合体（ｃ
ｏｍｐｌｅｘ）の解離速度、ならびに血清および組織成
分とハプテンとの相互作用を改変し、その結果、血清半
減期を増加または減少させて所望の半減期とすることを
特徴とする方法である。誘導したハプテンおよび抗体は
、画像化または治療にとって有効であると前もって決定
した有効量を患者に投与する。好ましくは、誘導ハブテ
ン、および誘導ハプテンと抗体との複合体の生体分布お
よび局在性は、個々の診断目的または治療目的に応じて
増強させる。

本明細書中では、「ハプテン」なる用語は、抗体と特異
的に反応するが、担体タンパク分子（キャリアータンパ
ク分子）が組合わされているか、またはその一部を構成
していない限りは、抗体を産物して免疫応答を刺激する
ことのできない分子を意味する。本明細書中、「薬物動
態」なる用語は、経時的な、分子の生体分布に於ける変
化を意味する。本明細書で使用している「生体分布」お
よび「局在」なる用語は、動物の個々の器官に於けるあ
る時点での分子の分布を意味するものであって、それぞ
れ器官内に存在する分子の量および濃度を表す。さらに
、「局在」なる用語は、ある分子がある時間的間隔で、
その分子と組織コンパートメントとの間の相互作用の結
果として、特定の器官に於いて血中レベルと比較すれば
分子が過剰の濃度で存在していることをも内包する。

本発明の目的では、ハプテンは、一般に、ハプテンの化
学的、生物学的および生理学的特性、ならびに本発明の
所望の適用法に基づき、本発明の使用に応じて選択する
。例えば、特定のハプテンは、それを画像物質として使
用するか、または治療物質として使用するか、によって
選択され、その選択にあたっては、一般に、水溶性など
の化学的特性、特定器官からのクリアランスの速度など
の生物学的特性、および疾患部位でのレセプターへの結
合性などの生理学的特性を考慮することが必要である。

金属イオンとキレート試薬とのキレート錯体からなるハ
プテンは一般に、本発明の使用に応じて選択される。好
ましい本発明のキレート試薬は、エチレンジアミン四酢
酸（ＥＤＴＡ）　、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴ
ＰＡ）　、ＤＯＴＡ、ＨＥＴＡＳＴＲＩＴＡ、ＴＥＴＡ
およびその類似体である。ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、ならび
に類似体および本発明化合物の出発物質の製造方法は、
米国特許筒４，６２２．４２０号に記載されている。Ｄ
ＯＴＡ、トＩＥＴＡ、ＴＲＩＴＡ、ＴＥＴＡおよび本発
明に有用な出発物質の製造法は、米国特許筒４．６７８
，６６７号（マーレス（Ｍａｅｒｅｓ）ら）およびモイ
（＼Ｉｏｉ）ら、Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、＋　ｌ
　１０．　６２６６　（Ｉ９８８）に詳細に記載されて
いる。ＥＤＴＡおよびＤＴＰＡ類似体は、米国特許筒４
６２２．４２０号に記載されており、これらは種々の金
属イオンから生理学的に安定なキレート化合物を形成す
ることができる。同様に、ＤＯＴＡ、ＨＥＴＡ、、ＴＲ
ＩＴＡおよびＴＥＴＡ類似体は米国特許筒４，６７８，
６６７号およびＭｏｉらに記載されており、これらは種
々の金属イオンから生理学的に安定なキレート化合物を
形成することができる。

式（Ｉ）、（Ｉａ）および（ｒｂ）で使用しているｒＭ
Ｊは、金属イオンを表す場合、可能な原子価を特に特定
しないイオン形態の金属原子を意味する。当業者が認識
しているように、イオンの特定の原子価は、その個々の
金属に依存する。従って、ｒＭＪなる用語は、金属イオ
ンを特定の状態にある原子価に限定することを意図する
ものではない。好ましい金属イオンは次ぎに記載するが
、８０Ｙ３＋１および＋１＋Ｉｎ３ｅである。

本発明に使用する上で好ましいハプテンは、般にインジ
ウム−１ｌｌ（’目Ｉｎ）、テクネシウム−９９ｍ　（
””Ｔｃ）　、銅−６７（”Ｃｕ）、ガリウム　６７　
（”Ｇａ）およびイツトリウム−９０（”Ｙ）の中から
選ばれる金属イオンとのキレート錯体を形成している。

診断、即ち画像化に適用するには、金属イオンＩＩＩ　
Ｉ　ｎが一般に好ましく、治療適用には９０Ｙが一般に
好ましい。さらに、適当な金属イオンの選択にあたって
は、異なる金属錯体が特定の抗−ハプテン抗体に対して
異なる親和性を示すように、金属錯体は、本発明に於い
て利用される抗−ハブテン抗体に応じた親和性を有する
という、親和性についての配慮が必要であろう。

ＤＢ−１からＤＢ−Ｖｌｌｌまでの名称で示される本発
明の化合物は、抗−ハブテン抗体が異なる金属錯体に対
して異なる親和性を示すことに関連した、上記の困難性
を克服する上で特に有用である。これら本発明の特定の
ハプテンは、本発明で使用される金属イオンをキレート
化することのできる２つに分離した部分を膏するユニー
クな「亜鈴状（ｄｕｍｂｂｅｌｌ）形状」を有している
（従って、「ＤＢ」と命名している）。例えば、ＤＴＰ
Ａ部分は、例えば診断の目的には好ましい金属イオンで
ある＋１Ｊｎと結合できるであろう。診断操作が終了す
れば、その同じハプテンは、例えば治療目的として有用
な金属イオンである”ＹとそのＤＴＰＡ部分て結合させ
るよう使用することができる。従って、異なる抗−ハブ
テン抗体に於ける異なるハフテン−金属イオン錯体に対
する親和性に関する問題は、多少なりとも解決すること
ができ、克服することができるであろう。１つのハプテ
ンを使用することによって、診断用途および治療用途の
両方を行うことができる。

本発明の好ましいハプテンは、ペンシルＥＤＴＡ誘導体
を含むものである。このようなハプテンは、＋ｌｌＩｎ
および９０Ｙなどの所望の診断または治療適用のための
各種の金属イオンを都合よく結合できる構造部分を有し
ている。ベンジルＥＤＴＡ１その類似体、およびそれら
の製造方法は米国特許筒４，６２２，４２０号に記載さ
れている。本発明では、このようなハプテンを以下の式
（Ｉ）で示される構造を有するよう誘導体化する：ｐ−
Ｒ’−Ｃ，Ｈ，−ＣＨ２−ＥＤＴＡ−Ｍ　　　（Ｉ）［
式中、Ｒ１は、 ＮＨ−（、−ＮＨ−Ｒ２、−ＮＨ−Ｃ−ＮＨ−Ｒ’、○ Ｃ−ＮＨ−Ｒ’、−ＮＨ−Ｃ−ＣＨ２−Ｒ２、−ＮＨ−
Ｃ−ＣＩ（２−ＮＨ Ｒ″、−Ｎ　Ｈ−Ｒ’、 ○ または−ＮＨ−Ｃ−ＣＨ７−３−Ｒ”てあり、Ｒ′は水
素、アミ７基、−ｏｃ−＋ｙ）、−ｐ−フェニル−ＣＨ
，−Ｙ、分枝鎖状もしくは直鎖状の非置換（Ｃ３Ｃａ。

）アルキル基、または分枝鎖状もしくは直鎖状の置換（
ＣＩ−Ｃ３ｏ）アルキル、シクロアルキル、アリールも
しくはアリールアルキル基 （ここに、置換分は、ヒドロキシ、カルボキシ、ＳＲ４
、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード、アミノ、ニトロ
、−ＳＯ，Ｈ，−ＮＨＲ３、−ＮＨＲ’、−Ｎ（Ｒ３）
！、−ＣＯＮＨＲ’、−ＣＯＯＲ３、−ＳＯ，、−ＰＯ
，、フェニル、ベンジル、イミダゾロ、ならびに以下の
式で示される基： である。

ここに、Ｒ３は、水素、直鎖状もしくは分枝鎖状（Ｃ，
−Ｃ３，）アルキル基、 −ｐ−フェニルーＣＨ５−Ｙ、−Ｃ−ＣＨ，、または非
反応性官能基であり、 Ｙは、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、ＤＯＴＡ、ＨＥＴＡ、ＴＲ
ＩＴＡまたはＴＥＴＡであり、Ｒ４は、Ｈまたは−ＣＨ
，−Ｃ−ＮＨＲ’であり、Ｍは金属イオンである。］。

本発明の好ましい化合物は、式（Ｉａ）：ｐ−Ｒ’−Ｃ
，Ｈ，ＣＨ，ＥＤＴＡ−Ｍ　　　　（Ｉ　ａ）［式中、
Ｒ１は、 の中から選ばれるｌまたはそれ以上の基である）または
−ＮＨ−Ｃ−ＣＨ，−Ｒ” （ここに、Ｒ１は水素、ＮＨ，、分枝鎖状もしくは直鎖
状の非置換（Ｃ，−Ｃ，、）アルキル基であるか、＊た
ｌ；ｔ−ＯＨ，−ＣＯＯＨ，＝Ｏ１＝Ｓ１−Ｓ−−ＣＱ
　、−Ｆ、−Ｂｒ、−１，−ＮＨ，、−Ｎｏ、、−３Ｏ
，Ｈ，−ＮＨ−Ｒ３、−ＣＯＮＨＲ３、−ＣＯＯＲ３、
−ＳＯ，、−ＰＯ４、フェニルおよびベンジルの中から
個別に選ばれる１またはそれ以上の置換分によって置換
されている分枝鎖状もしくは直鎖状（Ｃ，−Ｃ，。）ア
ルキル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアル
キル基である） である。

ここに、Ｒ３はＨ１アルキル基または非反応性官能基で
あり、 Ｍは金属イオンである。］ で示される化合物である。

さらに、Ｒ″は、特定の組織相互作用を示す置換分を有
することのある非−反応性官能基、例えばアミノ酸、ポ
リペプチド類、ヌクレオチド類、ポリヌクレオチド類、
炭水化物または脂質をさらに含むことができる。Ｒ″お
よびＲ３の定義で使用している「非−反応性官能基」な
る用語は、生理的条件下で、組織または血清成分、およ
び利用される抗−ハブテン抗体と共有結合を形成するこ
とのできない官能基を意味する。

特に、好ましい化合物は、式（Ｉｂ）：ｐ−Ｒ’　、Ｃ
５Ｈ−ＣＨ＊　　ＥＤＴＡ　　Ｍ　　（Ｉ　ｂ）［式中
、Ｒ’は、 −ＮＨ−Ｃ−ＮＨ−Ｒ”、 −ＮＨ−Ｃ−ＣＨ，−３−Ｒ” −ＮＨ−Ｃ−ＣＨ，−Ｒ”、−ＮＨ−Ｒ”、−ＮＨ−Ｃ
−ＣＨｙ−ＮＨ−Ｒ”、または−ＮＨ−Ｃ−ＮＨ−Ｒ”
であり、 Ｒ″は−ｐ−フェニルーＣＨ，−Ｙ、−ＱＣ（Ｙ）、ま
たは分枝鎖状もしくは直鎖状の置換（ＣＩ−Ｃ３０）ア
ルキル、シクロアルキル、アリールもしくはアリールア
ルキル基 （ここに、置換分は、ヒドロキン、 −ＮＨＲ’、　Ｎ（Ｒ３）２、イミタゾロ、ならびに以
下の式で示される基； −Ｎ　Ｈ−Ｃ−Ｎ　Ｈ−Ｒ”、−ＮＨ−Ｃ−Ｎ）１−Ｒ
３ＮＨＯ および−ＮＨ−（、−Ｎｌ（−Ｒ’、 の中から選ばれる１またはそれ以上の基である）である
。

ここに、Ｒ３は−ｐ−フェニル−ＣＨ２−Ｙ、または一
〇−ＣＨ３てあり、 Ｙは、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡＳＤＯＴＡ、）ＩＥＴＡ、Ｔ
ＲＩＴＡまたはＴＥＴＡてあり、Ｒ４は、Ｈまたは−Ｃ
Ｈ，−Ｃ−ＮＨＲ’であり、○ Ｍは金属イオンである。］ で示される化合物である。

本発明の好ましい化合物に於ける１つの態様としては、
ｐ−チオウレイドベンジルＥＤＴＡ誘Ｉ体またはその類
似体が挙げられ、これらはイソチオシアネートベンジル
ＥＤＴＡから誘導される。インチオシアネートベンジル
ＥＤＴＡおよびインチオシアネートベンジルＤＴＰＡ、
それらの類似体、およびそれらの製造方法は、米国特許
第４，６２２．４．２０号に記載されている。このよう
な本発明の好ましいハブテンは、式： ％式％ ［式中、Ｒ２は水素、Ｎ　Ｈ２、置換されていない分枝
鎖状もしくは直鎖状の（Ｃ，−Ｃ，、）アルキル基であ
るか、または−ＯＨ，−Ｎ　８Ｈ４、Ｃ０ＯＨ，−ＣＯ
ＮＨ，、フェニル、ベンジル、−８Ｏ３Ｈ１および−Ｎ
ｏ３の中から選ばれる１またはそれ以上の置換分によっ
て置換されている分枝鎖状もしくは直鎖状（Ｃ，−Ｃ，
、）アルキル、シクロアルキル、アリールまたはアリー
ルアルキル基であり、 Ｍは金属イオンである］ で示される構造を有する。さらに、Ｒ２は、特定の組織
相互作用を示すことのある置換分を何する非−反応性官
能基、例えばアミノ酸、ポリペプチド類、ヌクレオチド
類、ポリヌクレオチド類、炭水化物または脂質をさらに
含むことかできる。

式（Ｉ）および（Ｉｂ）中、式： ０（、（Ｙ） で示される記号は、この式で規定する、Ｙ部分が、Ｙ部
分のカルボキシ基の１つを介して分子の隣接部分と結合
していることを表す。他方、記号：Ｙの単独使用は、Ｙ
部分が、Ｙ部分に存在するメチレン基（−ＣＨ，）の１
つを介して分子の隣接部分と結合していることを表す。

本発明に使用する上で好ましい一連の新規な誘導ハプテ
ンの構造を以下の第１表に示す。以下の説明中に於いて
は、これらの新規なハプテンを表すのに、第１表中に記
載しているそれぞれの略語を使用している。

第１表 ｐＲ２ＮＨＣ−ＮＨＣ８Ｈ４Ｃ８Ｈ４ ＤＴＡ−Ｍ Ｒ″ ハブテン略称 ＵＢＥ ＴＵＢＥ ＢＩＪＴＵＢＥ ＴＵＢＥ ０ＴＵＢＥ ＵＢＥ ＨＴＵＢＥ ＥＴＵＢＥ ＰＨＡＴＵＢＥ ＡＴＵＢＥ ＡＴＵＢＥ ＢＡＬＴＵＢＥ ＧＮＵ　Ｂ　Ｅ Ｂ−ＩＩＩ Ｂ−ＩＶ １３−Ｖ ＣＨ，ＣＨｊ （ＣＨ，）３ＣＨ３ （ＣＨ，）、ＣＨ３ −ＣＨ５ＣＨ，０Ｈ −ＣＨ，ＣＨ，ＮＩ（ｔ Ｃ，Ｈ。

−ＣＨ，Ｃ０Ｈ６ ４−（Ｃ，Ｈ，）ＣＨ，Ｃｏ、Ｈ （ＣＨ３）、Ｇｏ、Ｈ （ＣＨ２）３Ｃｏ、Ｈ （ＣＨ，）４ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ，）ＣＯＮＨ。

（ＣＨ，）、ＮＨＣＯ（ＣＨ２）３ＣＯ，ＨＣ，Ｈ，−
ＯＨ７−ＤＴＰＡ ＣＨ，ＯＨ７ＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨＣａＨ，ＣＨ，ＤＴＰ
Ａ−（ＯＨ７）４ＮＨＣ（＝Ｓ）ＮＨＣ，Ｈ，ＣＨ，Ｄ
ＴＰＡさらに、本発明の好ましい化合物を以下の第２表
に示す。

第２表 Ｘ−ＣＨ，−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−Ｃ，Ｈ，−ＣＨ，−Ｅ
ＤＴＡ−ＭＸ　　　　　　　　　　　　９Ｌ Ｓ（Ｃ８Ｈ４）ａｓｃ８Ｈ４（Ｃ＝Ｏ）ＮＨＣｅｌｌｔ
Ｃ８Ｈ４ＤＴＰＡ　　　　　　Ｄ　Ｂ　　ｌ５ＣＨ，Ｃ
Ｉ（０１１）ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ，ＳＣＨ，（Ｃ＝Ｏ）Ｎ
ＨＣ，Ｈ，ＣＩＩ、ＤＴＰＡ　Ｄ　Ｂ−ＩＩ−ＮＨ−Ｃ
，Ｈ，−ＣＩ、−ＤＴＰＡ　　　　　　　　　　　　Ｄ
　Ｂ　−Ｖ　１−ＮＨＣＨ，Ｃｌ１（ＯＲ）ＣＩＩ、Ｎ
ＨＣＨ，（Ｃ＝Ｏ）ＮＨＣ，Ｈ，ＣＨ，ＤＴＰＡ　　　
Ｄ　Ｂ　−Ｖ　ＩＩＩ当業者ならば、画像物質および治
療物質のための薬物動態基準は変わり得るものであると
いう理由から、本発明により提供される一連の新規な誘
導ハブテンには、本発明の具体的な適用にとって望まし
い薬物動態を有するハプテンを選択できる許容性のある
ことは理解されよう。例えば、誘導ハプテンの中には、
その能力として疾患部位に蓄積することができる故に、
治療剤としては望ましいものであり得るが、循環系から
速やかに消失しない故に、画像剤としては望ましくない
ことのある特定のハプテンがある。さらに、当業者なら
ば理解できるであろうが、本発明は第１表および第２表
に記載した特定の誘導ノ１ブテンに限定されるものでな
い。従って、本発明は、本明細書で開示した新規な誘導
ハプテンの構造に改変を加えることを意図するものであ
り、このような構造改変は、これらハプテンの本来の薬
物動態性を画像化または治療に指向して改変することを
目的とするものである。

本発明では、ハプテンを誘導体化することにより、ハプ
テン−抗体複合体の解離速度を改変し、さらに血清およ
び組織成分とノ＼ブテンとの相互作用を改変することは
、当業界周知の常法によって行うことができる。例えば
、ノ＼ブテン構造は、（Ｓ）−４−アミノベンジルＥＤ
ＴＡ中の芳香族アミンを、アシル化、アルキル化、シッ
フ塩基形成反応（これは、そのアミンを還元する前であ
っても、前でなくてもよい）、反応性インシアネートへ
の変換およびその後の置換尿素、スルホンアミドへの連
続変換、またはジアゾ化反応およびその後の求核体との
反応によって改変できる。これらの反応は、官能基の有
無に関係なく、単なる脂肪族の鎖、または分枝鎖、また
は芳香族もしくは複素環系化合物を含有する化合物を用
いて行うことができる［例えば、マーチ（Ｍａｒｃｈ）
ら、Ｊ　、　Ａ　ｄｖａｎｃｅｄＯｒｇａｎｉｃ　Ｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ、ジョーン（Ｊ　ｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ＆
Ｓ　ｏｎｓ）、ニューヨーク、（Ｉ９８５）を参照］。

さらに、本発明では、ハプテンの構造を改変して好まし
くは、ハプテンの生体分布および局在性を本発明の個々
の適用に応じて増強させる。また、本発明によって誘導
体化されたハプテンは、用途に応じて選択される抗−ハ
プテン抗体と結合する能力を保持していることは、理解
されるであろう。

式（Ｉ）、（Ｉａ）および（Ｉｂ）で示される本発明の
好ましいハプテンは、当業界周知の標準的な合成法によ
って製造される。例えば、本発明の好ましいチオ尿素−
型の化合物は、イソチオシアネート前駆体化合物をアミ
ンと反応させて製造される。本発明の目的にとって最も
有用なインチオシアネート類はイソチオシアネートベン
ジルＥＤＴＡ　（［ＴＣＢＥ）およびイソチオシアネー
トベンジルＤＴＰＡ　（ＩＴＣＢＤ）であり、これらは
ともに米国特許第４，６２２，４２０号に記載の方法に
よって製造される。従って、当業者であれば、所望の構
造の化合物を得るために、いずれの本発明化合物を製造
し、次いで必須のアミン化合物（群）とＩＴＣＢＥもし
くはＩＴＣＢＤのいずれか、またはこの両者（可能性は
ある）を反応させるか、は決定できる。同様に、対応す
る本発明のマクロ環式（大環式）のポリアミン誘導体を
製造するための、対応するインチオシアネート誘導体：
　ＤＯＴＡ、ＨＥＴＡ、ＴＲＩＴＡおよびＴＥＴＡは米
国特許第４，６７８．６６７号に記載されている。また
、ＨＥＴＡ、ＤＯＴＡ、ＴＲＩＴＡおよびＴＥＴＡの製
造法も、米国特許第４，６７８．６６７号に記載されて
いる。ＤＯＴＡの改良された合成法は、ＭｏｉらのＪ、
　Ａｍ、　ＣｈｅＩ＋１．　Ｓｏｃ、　８０．６２６６
（Ｉ９８８）に記載されている。本発明に於いて出発物
質として有用な対応するインチオシアネート化合物は、
ＩＴＣＢＤおよびＩＴＣＢＥの製造法と完全類似の方法
によって製造される。

本発明のアミド型の化合物を製造するには、２つの出発
物質：ｐ−ブロモアセトアミドベンジルＥＤＴＡ　（Ｂ
ＡＢＥ）およびｐ−ブロモアセトアミドベンノルＤＴＰ
Ａ　（ＢＡ、ＢＤ）か特に有用である。

これらの化合物は、プライマー（ＤｅＲｅｉｍｅｒ）ら
のＪ。

Ｌａｂ、　Ｃｏｍｐ、　ａｎｄ　Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ
、　、　１８．１５１７（Ｉ９８１）および米国特許筒
４．６２２．４．２０号に記載の方法によって製造され
る。ＨＥＴＡ、ＤＯＴＡ、ＴＲＩ　ＴＡおよびＴＥＴＡ
に対応するブロモアセトアミド誘導体は、ＢＡＢＥおよ
びＢＡＢＤの製造法と完全類似の方法によって製造され
る。これら出発物質の製造法は、米国特許筒４，６７８
，６６７号に記載されている。これらの化合物のα−ブ
ロモ部分は、隣接メチレン部分を、例えばスルフヒドリ
ルまたはアミン基などの基に対しての求核的攻撃を特に
受は易くする。従って、本発明の所望の化合物を製造す
るために必要なことは、式（Ｉ）、（Ｉａ）または（Ｉ
ｂ）のＲ２部分に関して適当な中間体を決定するだけで
あり、それを必要な出発物質と反応させる。

通常、本発明の所望の化合物は、ｐＨ値を約６〜約１２
に設定した緩衝化水溶液中で製造される。

好ましいｐＨ範囲は、約８〜約１１である。反応の進行
は、ＨＰ　Ｌ　Ｃによって容易に追跡できる。

温度は重要な事項ではないが、好ましくは約Ｏ′Ｃ〜約
６０°Ｃで、より好ましくは約２０１〜約４０°Ｃの範
囲で反応を行う。

この反応によって得られた生成物は、標準的なりロフト
グラフィー法によって精製することかできる。好ましい
分離法は、例えばＤＥＡＥセファデックスＡ、−２５樹
脂［ファルマンア・ファイン・ケミカルズ（Ｐｈａｒｍ
ａｃｉａ　Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）コまたはＡ
ＧｉＸ８、ホルメートカラム［バイオラド・ラボラトリ
ーズ（ＢｉｏＲａｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、リ
ソチモンド、カルフォルニア１を使用する陰イオン交換
クロマトグラフィー法である。当業者ならば当然に、最
終生成物を精製するための他の同等に有用な手段を認識
できるであろう。

さらに、本発明の化合物の多くは、薬学的に許容され得
る酸または塩基塩を形成することの可能な塩基性基また
は酸性基を含有している。例えば、ＪｌＪカルボキシ基
を含有するこれら化合物は、アルカリ土類金属塩基、例
えば重炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、炭酸カリウ
ム、重炭酸カリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウ
ムなどと反応して薬学的に許容され得る塩類を製造する
ことかでき、これらも本発明には有用である。同様に、
本発明の分子内に存在する遊離アミ７基は、酸性試薬と
反応させて対応する酸付加塩を形成することができる。

例えば、本発明のアミン含有化合物は、塩酸、硫酸、酒
石酸、乳酸、硝酸などの酸と反応させて対応する塩を製
造することができる。

本明細書中で使用している［薬学的に許容され得る」な
る用語は、温血動物の治療または診断に有用なそれらの
塩形態を意味する。従って、適当な化合物の薬学的に許
容され得る塩の形態も、本発明の範囲内に属するもので
ある。

本明細書に於いて記載している方法および以下の実施例
でさらに具体化している方法（これらの実施例は限定を
意図するものでない）は、本発明の化合物を製造する上
では現在好ましい方法であるが、当業者には、同様の他
の実施し得る同等な手段が認識できるかもしれない。従
って、式（Ｉ）（Ｉａ）または（Ｉｂ）の化合物を製造
するためのこれらの方法を、所望の化合物を製造するた
めに限定される方法と解釈してはならない。本発明化合
物を製造するための他の同等に許容され得る手段は利用
可能であるし、これらも本発明の範囲内に属するもので
ある。

このように、本発明のもう１つの目的は、式（ｒ） ｐ−Ｒ’　　Ｃ−Ｈ−ＣＨ２ＥＤＴＡ　　Ｍ　　　（＋
）［式中、Ｒ１は、 −Ｎ　Ｈ−Ｃ−Ｎ　Ｈ−Ｒ２、−ＮＨ−（、−ＮＨ−Ｒ
”、Ｃ−Ｎ　Ｈ−Ｒ２、ＮＨＣＣＨ２Ｒ’、−Ｎ　Ｈ−
Ｃ−ＣＨ、−Ｎ　Ｈ−Ｒ’、ＮＨ−Ｒ’、 または−ＮＨ−Ｃ−ＣＨ，−８−Ｒ雪であり、Ｒ２は水
素、アミノ基、−ＱＣ−（Ｙ）、ｐ−フェニル−ＣＨ，
−Ｙ、分枝鎖状もしくは直鎖状の非置換（ｃ、Ｃ３０）
アルキル基、または分枝鎖状もしくは直鎖状の置換（Ｃ
，−Ｃ，。）アルキル、シクロアルキル、了り−ルもし
くはアリールアルキル基 （ここに、置換置は、ヒドロキシ、カルボキシ、−３Ｒ
’、）′ルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード、アミノ、ニ
トロ、−ＳＯ，Ｈ，−ＮＨＲ３、ＮＨＲ’、−Ｎ（Ｒ３
）ｔ、−ＣＯＮＨＲ’、−ＣＯＯＲ’、−ＳＯ，、−ｐ
ｏ、、７　エニ）Ｌｒ、ベンジル、イミダゾロ、ならび
に以下の式で示される基： ＮＨ および−ＮＨ−Ｃ−ＮＨ−Ｒ３， １！ の中から選ばれる１またはそれ以上の基である）である
。

ここに、Ｒ３は、水素、直鎖状もしくは分枝鎖状（Ｃ，
−Ｃ，。）アルキル基、 ｐ−フェニル−ＣＨ，−Ｙ、−Ｃ−ＣＨ３、またはＩ 非反応性官能基であり、 Ｙは、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡＳＤＯＴＡ、ＨＥＴＡ、ＴＲ
ＩＴＡまたはＴＥＴＡであり、Ｒ４は、Ｈまたは−ＣＨ
，−Ｃ−ＮＨＲ３であり、Ｍは金属イオンである。］ で示される化合物の製造方法であって、（Ａ）　Ｒ’が
−ＮＨ（Ｃ＝Ｓ）ＮＨ−Ｒ−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−Ｒ雪
の場合、 １）インチオシアネートベンジルＥＤＴＡまたはインシ
アネートベンジルＥＤＴＡ、またはその適当な金属牛レ
ート化合物を、式：　Ｈ，Ｎ−Ｒ”　（式中、Ｒ２は既
述の定義と同意義である）で示される化合物と反応させ
ること、または ２）式：Ｒ”−Ｎ＝Ｃ＝Ｓ、Ｒ”−Ｎ＝Ｃ＝Ｏで示され
る化合物、または適当なその金属キレート化合物を、式
： ％式％ ［式中、Ｘは、既述のＲ２の定義に於ける置換置の１つ
またはそれ以上の置換置によって置換されていることも
あるＣ、−Ｃ８゜分枝鎖状または直鎖状鎖のアルキル、
アリールまたはアリールアルキル基であり、 ｎおよびｍはそれぞれ個別にＯまたはｌである］で示さ
れる化合物、またはその金属キレート化合物と反応させ
ること、 （Ｂ）Ｒ’が−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ，−８−Ｒ”の場合
は、ｐ−ブロモアセトアミドベンジル−ＥＤＴＡ（ＢＡ
ＢＥ）またはその金属キレート化合物を、式：Ｒ３−Ｒ
”（式中、Ｒ２は既述の定義と同意義である）で示され
る化合物と反応させること、（Ｃ）Ｒ’　Ｍ−ＮＨ（Ｃ
＝Ｏ）ＣＨ，−ＮＨ−Ｒ’の場合、ｐ−ブロモアセトア
ミドベンジルＥＤＴＡ　（ＢＡＢＥ）を式：　Ｈ，Ｈ−
Ｒ”　（式中、Ｒ雪は既述の定義と同意義できる）で示
される化合物と反応させるか、またはＲ１が、Ｒ１の置
換置がＮＨＲ’である一ＮＨ（Ｃ＝Ｓ）ＣＨ，−ＮＨ−
Ｒ”である場合は、ｐ−ブロモアセトアミドベンジル−
Ｙ（式％式％ その金属キレート化合物を、式： ＥＤＴＡ−ＣＨ，−ＣＯＯ，−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＣＩ＋、
−ＮＨ−Ｘ−ＮＨ。

［式中、Ｘは、既述のＲ２の定義中に於ける置換置の１
つまたはそれ以上の置換置によって置換されていること
もあるＣ、−Ｃ３゜分枝鎖状または直鎖状鎖のアルキル
、アリールまたはアリールアルキル基である］ で示される化合物、またはその金属キレート化合物と反
応させること、および （Ｄ）要すれば、得られた生成物を塩形態の化合物また
は金属キレート化合物に製造することを特徴とする製造
方法を提供するものである。

本発明の目的のため、使用に応じて選択される抗体は、
使用に応して選択される／％ブテンと特異的に結合でき
、それと結合できる抗−ノーブテン抗体である。当業者
ならば、この同一の抗体が、広い範囲の官能基を含み得
る本発明のハブテンと結合させるのに利用できることは
理解されるであろう。

本発明の使用に際して、好ましいものはモノクローナル
抗体であり、特に、特定の金属イオンとキレート試薬、
例えば１１ＩｎとヘンシルＥＤＴＡ誘導体とからなる本
発明に係るキレート錯体に選択的に結合する能力を示す
モノクローナル抗体である。このようなモノクローナル
抗体およびその製造法は、米国特許筒４，７２２，８９
２号に記載されている。しかし、当業者ならば、選択す
る抗体か使用に応じて選択されるハプテンに対しての必
須の特異性を示す限りは、そのようなモノクローナル抗
体またはポリクローナル抗体を利用できることは理解さ
れるであろう。現在、モノクローナル抗体およびポリク
ローナル抗体の製造方法は、当業界では周知である［例
えば、コーラ−（Ｋｏｈｌｅｒ、　Ｇ）およびミルスタ
イン（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ、　Ｃ）のナイチｗ　−（Ｎａ
ｔｕｒｅ）、２５６．４９５（Ｉ９７５）を参照］。

本発明で使用する上で特に好ましいものは、本発明のハ
プテンに対する１つまたはそれ以上の結合部位、および
疾患部位、例えば腫瘍ターゲットに対する１つまたはそ
れ以上の結合部位という二元性の特異性を有する２機能
性モノクローナル抗体である。このような２機能性抗体
は、ハブテンのみならず疾患部位に対しても特異的であ
るので、ハブテンのキャリアーとして、および疾患部位
関連レセプターとして両方の機能を果たすことかできる
。従って、このような２機能性抗体により、誘導ハプテ
ンの部位−指向性デリバリ−および疾患部位への局在性
に係る効率的な機序（メカニズム）が提供される。この
ような２機能性抗体か認識する疾患部位としては、例え
ば、α−フェトプロティン（ＡＦＰ）、癌胎児性抗原（
ＣＥＡ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）、前立
腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）　、前立腺特異性抗原
（ＰＳＡ）、フェリチン、ボンベシン、メラノーマ関連
抗原ｐ９７およびｇｐ２４０、または乳脂肪グロブリン
などの腫瘍関連抗原が挙げられる。

さらに、上記の２機能性抗体が特異的である疾患部位に
は、例えば感染部位または血栓症部位が挙げられる。２
機能性抗体およびその調製法は欧州特許公開第１０５３
６０号に記載されている。２機能性抗体の調製は、例え
ば細胞融合法によってポリドーマ（ｐｏｌｙｄｏｍａｓ
）を調製することによって、生物学的に、または合成法
によって化学的に行うことができ、これらは現在では当
業界周知のものである［例えば、米国特許筒４，４７０
．９２５号および米国特許筒４，４４４，８７８号を参
照］。

本発明のある適用法については、必須のハプテン結合特
異性を有するヒトモノクローナル抗体、特にヒト２機能
性抗体が好ましい。ヒトモノクローナル抗体は、当業界
周知の手法によって調製することができ、例えばヒトＢ
−リンパ球とヒトまたはマウスのメラノーマセルライン
との融合産物であるハイブリドーマから調製される。ヒ
ト２機能性抗体は、さらに周知の従来からの方法によっ
て調製することができる［Ｈｕｍａｎ　Ｈｙｂｒｉｄｏ
ｍａｓ　ａｎｄＭｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄ
ｉｅｓ、イングルマン（Ｅ、　Ｇ、　Ｅｎｇｌｅｍａｎ
）、フォウング（Ｓ、　Ｋ、　Ｆｏｕｎｇ）、ラリツク
（Ｊ、Ｌａｒｒｉｃｋ）、ラビノツチェック（Ａ、　Ｒ
ａｕｂｉｔｓｃｈｅｃｋ）ｉ、ブレナン出版（Ｐｌｅｎ
ｕｍ　Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク（Ｉ９８５）］。

さらに、本発明の特定の適用法にとって好ましいものは
、使用に応じて選択されるハプテンと結合することので
きるキメラモノクローナル抗体である。キメラ抗体は一
般に、ある１つの吐乳動物種、例えばマウス由来の可変
領域、即ち結合領域、および２つ目の別の哺乳動物種、
例えばヒト由来の定常領域から構成される。マウス／ヒ
トキメラ抗体は、マウス抗体に係る特異性および親和性
を保持する一方、実質的に免疫原性が減少していると期
待されるので、このような抗体は、本発明のある種の適
用法には有用である。このような、融合免疫グロブリン
遺伝子の産物であり得るマウス／ヒトキメラ抗体は、当
業界周知の組換えＤＮＡ法および遺伝子トランスフェク
ション法によって調製することができる［例えば、欧州
特許公開第１７３４９４号およびＷＯ３６１０１５３３
参照］。２機能性であるキメラモアクローナル抗体は、
本発明のある種の適用法に関しては特に好ましい。

本発明で有用なキメラ２機能性抗体は、使用に応じて選
択されるハプテンおよび疾患部位、例えば腫瘍ターゲッ
トの両者に対する可変領域特異性をコードしている融合
免疫グロブリン遺伝子の産物であり得る。このような抗
体は、通常の組換えＤＮＡ法および遺伝子トランスフェ
クション法によって調製することができる［例えば、欧
州特許公開第０１２５０７号参照］。さらに、合成キメ
ラ２機能性、またはキメラ２機能性抗体は、ビス−（マ
レイミド）メチルエーテル（ＢＭＭＥ）もしくは他の当
業界周知の同様の架橋剤などの２機能性架橋剤によって
架橋される抗体の半分子またはそのフラグメントから調
製することができる。

また、キメラ抗体それ自体、架橋されたキメラ抗体また
はキメラ２機能性抗体のいずれで表そうとも、「キメラ
抗体」なる用語は、「ヒューマナイズド抗体（ｈｕｍａ
ｎｉｚｅｄ　ａｎｔｉｂｏｄｙ）Ｊ　、即ちフレームワ
ーク（Ｖｒａｍｅｗｏｒｋ）、即ち補体性決定領域（ｃ
ｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎ
ｇ　ｒｅｇｉｏｎｓ）　（ＣＤ　Ｒ）が改変されて親免
疫グロブリンとは異なった特異性の免疫グロブリンのＣ
ＤＲを含有した抗体を意味するものである。好ましい態
様では、マウスＣＤＲをヒト抗体のフレームワーク領域
に移植シ、「ヒューマナイズド抗体］を調製する。特に
好ましいＣＤＲは、キメラかつ２機能性抗体に対する上
述の抗原を認識する配列を表すものに対応している。

ＣＤＲ改変抗体に関しての教示は、ＥＰ　Ａ　０２３９
　４００　（Ｉ９８７年９月３０日）に記載されている
。

さらに、本発明は、融合活性タンパク質、例えば１９８
６年３月１３日に公開されたニューベルガー（Ｎｅｕｂ
ｅｒｇｅｒ）らのＷＯ３６１０１５３３に開示されてい
るタイプの酵素に対する免疫グロブリンまたは免疫グロ
ブリンフラグメントをその範囲内に包含している。

さらに、当業者であれば、本発明が、既述の抗体の全構
成内に、Ｆａｂ、　Ｆａｂ’およびＦ　（ａｂ）’　、
フラグメントなどの抗体フラグメント、または使用に応
じて選択される抗体の必須結合機能を保持している他の
抗体フラグメントの使用をも包含していることは認識で
きるであろう。しかし、２機能性抗体が必要である本発
明を利用する上では、本発明のハプテンが自身の特異性
を有しているなら、好適には、ＦａｂまたはＦａｂ’フ
ラグメントを利用できるのみであることも認識できるで
あろう。抗体フラグメントは、例えばペプシンまたはパ
パイン消化によるタンパク分解酵素の消化、還元性アル
キル化、または組換え技法など当業界周知の方法によっ
て調製することができる［ニソノフ（Ｎｉｓｏｎｏｆ　
ｆ、　Ａ）、Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｙ参照］０シニア０アソシエ−ト（Ｓｉｎａｕｅｒ　Ａ
ｓ５ｏｃｉａｔｅｓ）、マサシューセッツ（Ｉ９８２）
。当業者ならば、本発明の特定の適用法に於いては、２
つまたはそれ以上の抗体またはそのフラグメントの混合
物、あるいはすべての抗体を有する抗体フラグメントの
混合物を使用すると都合がよいことを理解できるであろ
う。

さらに、本発明の特定の適用法では、高い親和性の抗体
を選択するのが都合よく、他方、本発明の他の適用法で
は、低い親和性の抗体を選択するのが有利であることも
、当業者ならば理解できるであろう。従って、本発明は
、使用に応じて選択されるハプテンに対して高い親和性
または低い親和性を有することを特徴とし得る抗体、お
よび２機能性抗体の場合には、疾患部位に対して高い親
和性または低い親和性であることを特徴とし得る抗体を
選択することを包含するものである。

本発明では、生体内画像化および診断を目的として、誘
導ハプテンおよび抗−ハプテン抗体を、連続して、同時
に、あるいは複合体として組み合わせて患者に投与する
ことができる。

使用に応じて選択される抗−ハブテン抗体が２機能性抗
体である場合の本発明の好ましい方法は、本発明のハプ
テンおよび抗体を別々に投与することである。好ましく
は、抗体を投与し、誘導ハプテンを投与する前にそれを
患者の全身に分布させる。疾患部位に２機能性抗体が局
在できるのに十分な時間が経過した後、誘導ハブテンを
患者に投与する。誘導ハブテンは、時間をかけた複数回
投与で、あるいは緩徐な注入によって投与することがで
きる。その後、誘導ハブテン抗体複合体が生体内で形成
され、診断または治療効果を観察することかできる。こ
のような方法は、使用に応じて選択される２機能性抗体
が疾患部位の局在化に比較的長時間を要するか、または
誘導ハブテンが比較的短時間の血清半減期もしくは比較
的短時間の同位体半減期である場合の本発明の適用法で
は、望ましい方法である。

さらに、もう１つの好ましい本発明の方法では、１番目
の２機能性抗−ハブテン抗体を使用に応じて選択し、そ
れを患者に投与し、次いである時間の経過後、誘導ハブ
テンおよび２番目のキャリアー抗−ハブテン抗体の混合
物を投与する。この誘導ハブテンおよび２番目のキャリ
アー抗体は、１番目の２機能性抗体か疾患部位に局在化
するのに十分な時間の経過後に患者に投与する。２番目
のキャリアー抗体は、誘導ハブテンを、疾患部位に前も
って局在化している２機能性抗体に効率良く運ぶことを
可能にする。循環する２機能性抗体の濃度が誘導ハブテ
ンと結合するのには不十分である場合の本発明のある特
定の適用法では、誘導ハブテンが循環系からクリアラン
スする前に疾患部位に到達するよう、誘導ハブテンを２
番目のキャリアー抗体と共に投与することが必要である
かもしれない。

あるいは、誘導ハブテンおよび抗体を混合物として患者
に投与することができる。従って、誘導ハブテンおよび
抗体をインビトロ（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）で組合わせれば
、患者に投与する前に誘導ハブテン−抗体複合体を形成
することができる。この複合体を患者に投与した後、所
望の診断または治療効果を観察することができる。

誘導ハブテンおよび抗体を別々に、または混合物として
、といずれで投与しようとも、これらを投与することは
、静脈注射、腹腔内注射、リンパ線内注射、皮内注射ま
たは筋肉内注射によって行うことができる。

既述のように、本発明によって提供される新規な誘導ハ
ブテンは、生体内画像および治療用の組成物の調製に有
用である。従って、本発明は、さらなる態様として、ハ
ブテン−抗体複合体の解離速度、ならびにハブテンと血
清成分および組織コンパートメントとの相互作用を改変
して誘導することにより、血清半減期および組織への放
射線線量を増加または減少させたハブテンを含有する生
体内画像および治療用組成物を提供するものである。従
って、本発明の組成物の薬物動態は、画像化および治療
の目的に応じて改変されるものである。好ましくは、本
発明組成物の生体分布および局在性を、改変していない
ハブテンを含有する組成物と比して増強させる。より詳
細には、本発明組成物の生体分布および局在性を増強さ
せることにより、疾患部位に於ける誘導ハブテンの蓄積
性は、増加し、かつより急速となり、さらに誘導ハブテ
ンの正常組織からのクリアランスは改善されることにな
る。

本発明組成物として使用するのに好ましいものは、既述
の構造を有する誘導ハブテン類である。

特に好ましいものは、既述の第１表および第２表に記載
した一連の新規なハブテン誘導体である。

既述のように、この一連の本発明の新規なハブテン誘導
体により、本発明の個々の適用にとって最善のハブテン
を選択することかできる。

本発明の組成物は、さらにハブテンと結合できる抗体、
特にモノクローナル抗体を含有することができる。本発
明組成物への使用に際し、特に好ましいものは、ハブテ
ン結合特異性のみならず、疾患部位への特異性をも有し
ている２機能性抗体である。さらに、ヒト抗体またはキ
メラ抗体を含有する組成物は、本発明の特定の適用法に
とって特に好ましい。また、当業者ならば理解できるで
あろうが、本発明組成物は、既述の抗体フラグメントま
たは抗体もしくはそのフラグメントの混合物を含有する
ことができる。

本発明はさらなる態様として、前もって決定した有効量
の本発明によって誘導体化されたハプテン、およびこの
ハプテンと結合可能な抗体または抗体フラグメントを患
者に投与することを特徴とする、生体内画像化および治
療方法を提供するものである。連続して、同時に、また
は複合体として投与することのできる、この誘導ハプテ
ンおよび抗−ハプテン抗体は、好ましくは注射に適した
剤形で使用できるよう製剤化する。

従って、本発明は、式（Ｉ）　、（Ｉ　ａ）または（Ｉ
ｂ）で示される化合物を、１つまたはそれ以上の薬学的
に許容され得る担体、希釈剤または賦形剤と共に含゛有
する医薬製剤をも提供するものである。当業者に理解さ
れているように、「薬学的に許容され得る」なる用語は
、温血動物の診断または治療に有用であると認識されて
いる担体、希釈剤または賦形剤を意味する。

このような製剤は、単位投与剤形の形態が好ましく、こ
れには所望のハプテンを例えば約１０ピコモル〜約ｌＯ
ミリモルの範囲で１回投与量としてそれぞれ含有させる
。好ましい製剤は、約１０Ｏピコモル〜約１マイクロモ
ルの誘導ハプテンを含有している。新規な誘導ハプテン
および抗−ハブテン抗体は、関連した疾患の状態、疾患
部位に於ける抗原密度、ハプテン−抗体の親和性、非−
特異的結合相互作用の程度、投与方法および患者の状態
などの因子に応じて、広い範囲の投与量で有効である。

以下に、図面について説明する。

第１図は、前混合プロトコールに於ける、第１表に記載
の誘導ハプテンに係る２４時間および４８時間の時点の
腫瘍取り込みを示す。

第２図は、前混合プロトコールに於ける、第１表に記載
の誘導ハプテンに係る２４時間および４８時間の時点の
血液に対する腫瘍の割合を示す。

第３図は、前局在プロトコールに於ける、誘導ハプテン
：ＥＯＴＵＢＥ％ＴＵＢＥ、ＮＵＢＥおよびＰＨＡＴＵ
ＢＥに関する４時間の時点での生体分布（％投与量／ｇ
器官）を示す。

第４図は、前局在プロトコールに於ける、誘導ハプテン
：　ＥＯＴＵＢＥ、、ＴＵＢＥ、ＮＵＢＥおよびＰＨＡ
ＴＵＢＥに関する２４時間の時点での生体分布（％投与
Ｍ／ｇ器官）を示す。

第５図は、前局在プロトコールに於ける、誘導ハプテン
：　ＥＯＴＵＢＥ、、ＴＵＢＥ、ＮＵＢＥおよびＰＨＡ
ＴＵＢＥに関する４８時間の時点での生体分布（％投与
ｆｆｔ／ｇ器官）を示す。

第６図は、前局在プロトコールに於ける、誘導ハプテン
：　ＥＯＴＵＢＥ、ＴＵＢＥ％ＮＵＢＥおよびＰＨＡＴ
ＵＢＥに関する４時間の時点での器官に対する腫瘍の割
合を示す。

第７図は、前局在プロトコールに於ける、誘導ハプテン
：　ＥＯＴＵＢＥ、ＴＵＢＥ、ＮＵＢＥおよびＰＨＡＴ
ＵＢＥに関する２４時間の時点での器官に対する腫瘍の
割合を示す。

第８図は、前局在プロトコールに於ける、誘導ハプテン
：　ＥＯＴＵＢＥ、ＴＵＢＥ、ＮＵＢＥおよびＰＨＡＴ
ＵＢＥに関する４８時間の時点での器官に対する腫瘍の
割合を示す。

本発明をさらに詳細に説明するため、以下に実施例を記
載するが、これらは本発明の範囲を限定するものではな
い。

実施例 本発明の新規なハプテン誘導体を製造するための実施例
の幾つかで使用している分子はインチオシアネートベン
ジルＥＤＴＡ　（ＩＴＣＢＥ）であり、以下の構造を有
している： ｐ−Ｓ　＝　Ｃ＝　Ｎ　　Ｃａ　Ｈ−Ｃ８Ｈ４　Ｅ　Ｄ
　Ｔ　Ａ　−また、以下の実施例中で使用している出発
物質はインチオシアネートベンジルＤＴＰＡ　（ＩＴＣ
ＢＤ）であり、以下の構造を有している：ｐ−３＝Ｃ”
Ｎ−Ｃ５Ｈ，−ＣＨ，ＤＴＰＡ　０ｉｎ　ｖｉｔｒｏお
よびｉｎ　ｖｉｖｏに於ける特性化（特徴付）には、特
に明記しない限り、本発明に係る新規なハプテン誘導体
のインジウム錯体を使用した。ｉｎ　ｖｉｔｒｏの特性
化には、ＣＨＡ２５５と命名されるモノクローナル抗体
であって、ベンジルＥＤＴＡのインジウム錯体に対する
特異性を有する抗体を使用した。しかし、当業者ならば
理解できるでろうが、インジウム・ベンジルＥＤＴＡＩ
体に対する特異性を有する代替の抗体を製造し、これを
ＣＨＡ　２５５の代わりに使用してもよい。

ｉｎ　ｖｉｖｏの特性化には、本発明の新規なハプテン
誘導体と共に、２機能性抗体を使用した。使用したＥＣ
ＨＯ３７，２と命名される２機能性抗体は、癌胎児性抗
原（ＣＥ　Ａ）とベンジルＥＤＴＡのインジウム錯体と
に対する二元性の特異性を有している。しかし、当業者
ならば理解できるでろうが、ＣＥＡおよびインジウム・
ベンジルＥＤＴＡ錯体に対する特異性を有する代替の抗
体を製造し、これをＥＣＨＯ３７，２の代わりに使用し
てもよい。

実施例１ 本合成で使用するガラス器具およびプラスチック製器具
はすべて、酸で洗浄し、金属イオンを除去した。ガラス
器具は混酸（等量の濃硫酸および硝酸）で洗浄し、プラ
スチック製器具は６Ｍ塩酸で洗浄した。使用前には、こ
の両方とも脱イオン水で十分に洗った。金属の付着して
いないプラスチック製ピペット　［バイオラド（Ｂｉｏ
Ｒａｄ）　、リッチモンド、ＣＡ］を使用して溶液を移
した。この実験系全体に渡って使用した脱イオン水は、
少なくとも１．５　Ｍｏｈｍ−ｃｍの抵抗値のものであ
った。このイオン水は、装置Ｍｉｌｌｉ　Ｑ　Ｍｉｌｌ
ｉ−ＲＯ４［ミリボア・コーポレーション（Ｍｉ　１ｌ
ｉｐｏｒｅ　Ｃｏｒｐ、　）、ベツドフォールド、ＭＡ
］に水を通して得た。「Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水」なる用語は
、この脱イオン水を意味する。使用した試薬はすべて、
特級の市販品であった。種々のアミン類はすべて、アル
ドリッチ・ラホラトリーズ［Ａ　１ｄｒｉｃｈ　Ｌ　ａ
ｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、　　ミルウォーキー、ウィスコ
ンンン］から入手し、これらはさらに精製することなく
使用した。

米国特許束４，６２２，４２０号およびメアレス（Ｍｅ
ａｒｅｓ、　Ｃ，Ｆ、　）のＡ　ｎａｌ、　Ｂ　ｉｏｃ
ｈｅｍ、　１４２．６８−７５（Ｉ９８４）に記載のよ
うに、（Ｓ）−ｐ−ニトロペンシルＥＤＴＡを製造し、
これを（Ｓ　）−４−イソチオシアネートベンジルＥＤ
ＴＡ　（ＩＴＣＢＥ）に変換した。

同様に、ｐ−インチオシアネートベンジルＤＴＰＡ（Ｔ
ＴＣＢＤ）を製造した。本発明に係る対応するＤＯＴＡ
、ＨＥＴＡ、ＴＥＴＡおよびＴＲＩＴＡハブテンを製造
するためには、同様に、米国特許束４，６７８，６６７
号に記載された対応するイソチオシアネート誘導体を使
用することができるであろう。以下に記載のＨＰ　Ｌ　
Ｃグラジェント系を使用すると、ＩＴＣＢＤの保持時間
は５．０分であった。凍結乾燥ＩＴＣＢＥを０．３Ｍ塩
酸（ＵＩｔｒｅｘ、　Ｊ　、　Ｔ、、ベーカー・ケミカ
ル（Ｂａｋｅｒ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ、フィリノフスバー
グ、ニュージャーノー））中に再）静濁し、最終濃度を
大体５０ｍＭに調整しｔこ。この溶液は一７０１で保存
した。特に明記しない限り、すべての反応は４０１の水
溶液中で行った。

生成物は、ＡＧ−１ｘ３　ホルメート・フオーム［バイ
オラド］またはＤＥＡＥセファテックスＡ−２５（Ａ−
２５カラム）［ファルマシア・ファイン・ケミカルズ（
Ｐｈｒｍａｃｉａ　Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）、
アップサラ（ＩＪｐｐｓａｌａ）、スウェーデン］のい
ずれかを使用した陰イオン交換クロマトグラフィーによ
って精製した。カラムは、Ｌ　Ｋ　Ｂ　　Ｕ　Ｖ　１ｃ
ｏｒｄＳ検出器を使用し、２８０ｎｍでモニターした。

フルオレスフアミン（Ｆｌｕｏｒｅｓｃａｍｉｎｅ）　
［Ｆ　ｌｕｒａｍＴＭホフマンーラロツシｘ　（ｌｌｏ
ｆ　ｆ’ｍａｎ−ＬａＲｏｃｂｅ）、ナノトレイ、Ｎ、
Ｊ、］を使用し、アミンの存在について試験した。試験
する試料をワットマン４濾紙にスポットした後、アセト
ニトリル中、０．２Ｍホウ酸ナトリウム（ｐＨ−９，５
）および０．２５ｚｇ／ｍ（ｌフルオレスフアミンで連
続してスプレーした。アミンの存在を示す蛍光を、試料
に短波長ＵＶランプを照射して検出した。ＨＰ　Ｌ　Ｃ
分析は、マイクロポアＣ１８カラム［ヒレノド・パ、カ
ート（Ｈｅｗｌｅｔｔ　Ｐａｃｋａｒｄ）＃　７９９１
６０Ｄｏｐｔ５５２］のＨｅｗｌｅｔｔ　Ｐａｃｋａｒ
ｄ　１０９０液体クロマトグラフィーを使用して行った
。出発緩衝液からそのままのメタノールまでの直線グラ
ジェントを１０分かけて使用した。流速は０．４ｍ１２
／分を一定に維持し、カラム流出液を２８０ｎｍでモニ
ターした。この実験系では、ＩＴＣＢＥ出発物質の保持
時間は５．３分てあった。

ＮＭＲスペクトルは、多核の検出可能なＶａｒｉａｎ　
ｍｏｄｅｌ　ＸＬ−３００３００ＭＨｚ装置を使用して
得た。試料をり、Ｏに溶解し、Ｎａ０ＤまたはＤＣＣで
ｐＨを調節した。

キレート化合物の濃度は、メアレス（Ｍｅａｒｅｓ）ら
のＡｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　１４２．６８−７８
（Ｉ９８４）に記載された操作法の変法に従い、放射活
性ＩＩＩ　ｌ　ｎで封鎖したインジウムによる滴定によ
って測定した。正確に知られた質量のインジウム箔［プ
ラトニック、アルファ”プロダクツ（ＰｕｒａＬｏｎｉ
ｃ、Ａｌｆａ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）、ダンバーズ（Ｄａ
ｎｖｅｒｓ）、マサチューセッツ］をＵｌｔｒｅｘ　Ｈ
Ｃ（ｌ　［Ｊ、　Ｔ、　Ｂａｋｅｒ、　ｃｈｅｍｉｃａ
ｌ　Ｃｏ、　］中に溶解することによ・ってインジウム
の標準溶液を調製した。この滴定では、Ｏ，１３Ｍクエ
ン酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ＝６．０）を使用し、メ
アレスらに開示されているようにＴＬＣシステムを使用
した。

特にことわらない限り、ハプテン（出発物質：ｒＤＢＪ
と命名する）を１１１Ｉｎ３°および９０Ｙ３１で標識
することは、以下の方法に従った：標識するべきハプテ
ンの２５ｚｇ／ｙｔＱグリシン（ｐＨ＝４．５−６．５
）中、２μＭ溶液を調製する。ｌｌＩ［ｎＬｌ″標識は
、ｌ１ｌ）ｎ３６のグリシン溶液（０，０８８Ｍ）２．
５肩Ｃｉ／Ｍ１２を使用して行う。これらハプテン溶液
および１１１Ｉｎ３°溶液のそれぞれ等量を一緒にし、
旋回し、少なくとも１０分間室温で放置する。次いで、
得られた標識化溶液に、加えたｌ１ｌｌｎ３４溶液の量
の３倍量の０゜２２Ｍグリシン、０．２Ｖ　ＤＴＰＡ、
４％（ｗ／ｖ）ＮＨ，ＣＱ（ｐＨ＝８．２）を加え、該
溶液を中和する。９°Ｙ３°標識は、７０ｍＭ塩酸中、
１容量の２００＊Ｃ１／ｘＱ　”Ｙ”を１０容量のＤＢ
ハブテンキレート試薬を混合して行う。得られた混合物
を旋回し、少なくとも５分間（ただし、６分を越えない
時間）室温で放置する。得られた混合物に１５０ｍＭア
スコルビン酸、５０ｍＭ　　トリス、０゜１１ＩＩＭ　
ＤＴＰＡ　（ｐＨ＝７．４）のハプテンキレート試薬の
１４倍量を加えることによって、該混合物を素早く中和
する。

１１１（ｎ３°およびｅｏＹ３４標識されたＤＢハブテ
ンのラジオ−ＨＰＬＣを、Ｃ１８逆相カラム（ＩＢＭ　
Ｎｏ、８６３５３０８）を使用した１８Ｍ９５３３型ク
ロマトグラフイーにより行った。溶出は、そのままの緩
衝液Ａ（５０ｍＭ水性トリエチルアンモニウムアセテー
ト、ｌｏｍＭ　ＥＤＴＡＳｐＨ＝６．．０．）からその
ままのメタノールへの２０分間直線グラジェントで、流
速１１１１１２／分で行った。

２つの異なるシステムを使用して放射検出を行った。”
Ｙ検出は、Ｃａｎｂｅｒｒａ　２００７ｐ／８０２〜３
　：ｉつ化ナトリウム結晶を用いて行った。目ＩＩｎ検
出は、４４−６型サイド・ウィンドー〇　−Ｍ検出器を
連結したＬ　ｕｄｌｅｍ　１７７型Ａｌａｒｍレートメ
ーターを使用して行った。両システムともに、直列形で
あり、積分器に連結した。注入前に、試料を既述のＨＰ
ＬＣ緩衝液Ａで希釈した。このシステムでは　＋１＋Ｉ
ｎｆｉｌｌ標識化ハブテンキレートのすべてが１つの良
好に帰属できるピークとして現れた。＠０Ｙ３６標識化
ＤＴＰＡ種は、互いに０゜５分以内にあるダブレットで
現れ、先行するピークと後続のピークの面積の比は、そ
れぞれ３：２であった。

吸光度の測定は、Ｈｅｗｌｅｔｔ　Ｐａｃｋａｒｄモデ
ル８４５１Ａダイオードアレイ分光光度計（Ｈｅｗｌｅ
ｔｔＰａｃｋａｒｄ　Ｍｏｄｅｌ　８４５１Ａ　Ｄｉｏ
ｄｅ　Ａｒｒａｙ　５ｐｅｃｔｒｏｐｈ。

ｔ□ｍｅｔｅｒ）で行った。全試験に関し、１ｃπ行路
長のキュベツトを使用し、試料をＰＢＳ（Ｉ０ｍＭ　リ
ン酸ナトリウム、ｌ　５ＱｍＭ　ＮａＣ（２、ｐＨ＝７
゜２）で希釈し、このＰＢＳと比較測定した。モル吸光
係数は、インジウム滴定によって測定した濃度と比較し
、金属を含まないキレート試薬に関して計算した。

Ｂ、ハプテンＥＴＵＢＥの合成 ２０ｍＭ　　ＩＴＣＢＥ２．５ｍ１２を２００ｍＭエチ
ルアミン１．２５＊Ｑに加え、ＩＯＮ水酸化ナトリウム
を用いてｐＨを１１．８に調節した。水を加えて容量５
順に調節し、得られた混合物を１５分間反応させ、この
間、ＨＰＬＣ分析によって検査した。ＩＴＣＢＥのすべ
てを、保持時間が３゜６分であるＥＴＵＢＥに変換した
。

得られた生成物を、０．５Ｍギ酸で平衡化したＡＧＩＸ
８（ホルメートフオーム）カラム５肩Ｑの陰イオン交換
によって精製した。流液がフルオレスフアミン陰性にな
るまで、即ち過剰のアミンのすべてが除去されたことが
示されるまで、このカラムを０．５Ｍギ酸で洗浄した。

カラムを８Ｍギ酸で洗浄することによって、生成物：　
ＥＴＵＢＥを溶出した。過剰のキ酸は凍結乾燥によって
除去した。得られた生成物を、インジウム滴定、１１Ｐ
ＬＣおよびＵＶ／可視吸光度によって特性化した。得ら
れた物質は２４４１ｍで極大吸収を示し１、ε−２，０
Ｘ　Ｉ　Ｏ’Ｍ−１ｃｍ−’であった。

Ｅ　Ｔ　Ｕ　Ｂ　Ｅの構造を以下に示す。

１０「１であった。

ＢＵＴＵＢＥの構造を以下に示す。

エチルアミンの代わりに４−アミノ酪酸を使用すること
を除いては、実施例ＩＢと全く同じ方法によって、Ｂ　
Ａ　Ｔ　Ｕ　Ｂ　Ｅをラシ造した。得られた生成物のＨ
Ｐ　Ｌ　Ｃ保持時間は３．１分であり、極大吸収は２４
４ｎｍて示し、Ｉｌ：＝１．８ＸＩＯ’Ｍｃｕ　’であ
った。

Ｂ　Ａ　Ｔ　Ｕ　Ｂ　Ｅの構造を以下に示す。

エチルアミンの代わりに４−アミツブクンを使用するこ
とを除いては、実施例ＩＢと全く同じ方法によって、Ｂ
ＵＴＵＢＥを製造した。得られた生成物のＨＰ　ｔ、　
ｃ　保持時間は４．８分であり、極大吸収は２４４．　
ｎ　ｍで示し、ε＝１．９Ｘ１０’Ｍエチルアミンの代
わりにβ−アラニンを使用することを除いては、実施例
ＩＢと全く同じ方法によって、ＰＡＴＵＢＥを製造した
。得られた生成物のＨＰ　Ｌ　Ｃ保持時間は３．０分で
あり、極大吸収は２４４ｎｍで示し、ε＝　１．８　Ｘ
　Ｉ　Ｏ’Ｍ−’ｃｒｔｔであった。

ＰＡＴＵＢＥの構造を以下に示す。

エチルアミンの代わりにベンジルアミンを使用すること
を除いては、実施例ＩＢと全く同じ方法によって、ＢＥ
ＴＵＢＥを製造した。得られた生成物のＨＰＬＣ保持時
間は５．１分であり、極大吸収は２４４ｎｍで示し、ε
−２，４Ｘ１０’ＭｃＩＩ−’であった。

ＢＥＴＵＢＥの構造を以下に示す。

を、酸で洗浄したフラスコ中で凍結乾燥し、乾固させた
。これに、５Ｍギ酸アンモニウム（ｐＨ−１０−１０，
５）］、２ｉ１２を加えた。室温で１５分間経過した後
、反応をＨＰ　Ｌ　Ｃで検査すると、出発物質であるキ
レート試薬の約半分量か生成物（保持時間３．１４分）
に変換しているのみであった。次いて、２４％（Ｗ／Ｖ
）水酸化アンモニウムでこの混合物のｐＨを１０．５に
調節した。得られた反応物を〆見合し、ＨＰ　Ｌ　Ｃで
検査した。ＩＴＣＢＥのすべてが所望の生成物　ＴＵＢ
Ｅに変換していた。得られた反応混合物を凍結乾燥によ
って乾固させた。

ＴＵＢＥの構造を以下に示す。

０．３Ｍ塩酸中、４２．７ｍＭ　　Ｉ　ＴＣＢ　Ｅ　２
．ｗＱ２０ｍＭ　　Ｉ　ＴＣＢＥ２．５．ｚ（を、４０
％（ｖ／ｖ）水性エタノール中、２０ｍＭオクチルアミ
ン１２５コρに加えた。ｌ□Ｎ水酸化ナトリウムでこの
混合物のｐＨを１１．８に調節し、４０％（ｖ／ｖ）水
性エタノールを追加して容量を５ＲＱに増量した。生成
物のＨＰＬＣ保持時間は７，４分であり、極大吸収は２
４４ｎｍであった。水に対する溶解性が低かったので、
モル吸光係数の測定が正確に行えなかった。

０ＴＵＢＥの構造を以下に示す。

２０ｍＭ　　Ｉ　ＴＣＢＥ２．５２１２を、２００ｍＭ
　アニリン１．２５ｄに加え、ｌＯＮ水酸化ナトリウム
でこの混合物のｐＨを７．６に調節した。水を加えてそ
の容量を５＋ｖ１２とし、７５分間反応の進行を許容し
た。得られた生成物を、実施例ＩＢのように精製すると
、ＨＰＬＣ保持時間は４．４分であった。得られた生成
物は２５８ｎｍで極大吸収を示し、６　＝　２．３　Ｘ
　１０　’Ｍ−’ｃｍ−’であった。

ＰＨＴＵＢＥの構造を以下に示す。

アミンとしてｐ−アミノフェニル酢酸を使用することを
除いては、実施例ＩＨと全く同じ方法によって、ＰＨＡ
ＴＵＢＥを製造した。得られた生成物のＨＰＬＣ保持時
間は３，５分であり、２５６０ｍで極大吸収を示し、ｅ
　＝　２．４　Ｘ　Ｉ　Ｏ’Ｍ−’ｃｒ’であった。

ＰＨＡＴＵＢＥの構造を以下に示す。

エチルアミンの代わりにエタノールアミンを使用し、反
応物の最終ｐＨを１１．０に調節することを除いては、
実施例ＩＢと全く同じ方法によって、ＥＯＴＵＢＥを製
造した。得られた生成物のＨＰＬＣ保持時間は３．１分
であった。

得られた生成物を、０．■から１Ｍギ酸アンモニウム（
ｐＨ＝６）の直線グラジェント８０ｘｇで溶出するＤＥ
ＡＥセファデックスＡ−２５（Ｉ１ｆｆＣカラム）の陰
イオン交換クロマトグラフィーで精製した。所望の生成
物を含有するフラクションを溜め、凍結乾燥した。得ら
れた生成物は２４５ｎｍで極大吸収を示し、６＝１．８
ＸＩＯ’Ｍ−１ｃｍ−’であった。

その構造を１３ＣＮＭＲスペクトルによって調査した。

ＩＴＣＢＥのインチオシアネート部分に於ける炭素原子
に対応したピークは１３９　ｐｐｍであり、これがＥＯ
ＴＵＢＥに於いては１８２　ｐｐｍのピークと置き換わ
っていた。これはチオ尿素連鎖の炭素原子に対応するも
のである。ＩＴＣＢＥのスペクトルに於ける芳香族領域
（Ｉ２８−１３８ｐｐｍ）には４つのピークが認められ
、他方ＥＯＴＵＢＥのそれは３つである。脂肪族領域で
は、ＩＴＣＢＥおよびＥＯＴＵＢＥに共通して５つのピ
ークがあり、ＥＯＴＵＢＥには６４および４９ｐｐｍに
さらに２つのピークを有している。この後者の２つのピ
ークは、それぞれヒドロキシおよびチオ尿素部分に隣接
した炭素原子に対応するものである。

ＥＯＴＵＢＥの構造を以下に示す。

アミンとしてＮ−α−アセチル−Ｌ−リシン・アミドを
使用し、反応物のｐＨを１１．５に調節することを除い
ては、実施例ＩＢに記載のように、ＢＡＬＴＵＢＥを製
造した。

実施例１Ｂのように、ＢＡＬＴＵＢＥを精製した。得ら
れた生成物は２４４ｎｍで極大吸収を示し、８−２．３
　Ｘ　１０　’Ｍ−’ｃｊＩ−””Ｑあツタ。ソノ構造
をＩ３ＣＮＭＲスペクトルで調査したので、以下に示す
。

ヤー（Ｙｅｈ、　Ｓ、　Ｍ、　）らのＡｎａｌ、　Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ、　１００．１５２−１５９（Ｉ９７９）に
記・１戊の操作法によって、Ｎ−α−アセチル−し−リ
シンのアミドを、メチルエステルを介して製造した。Ｎ
−α−アセチル−し−リシンメチルエステル１ｇを無水
メタノール４５７ｅに溶解し、得られた溶液をアンモニ
アガスで飽和させた。反応物を窒素雰囲気下に置き、２
＝３日間、１日に２回アンモニアで飽和させた。この反
応を／リカプレート（ＰｏｌｙＧｒａｍ　Ｓｉｌ　Ｇ／
ＵＶ、ブノンクマン・インストルメント（Ｂｒｉｎｋｍ
ａｎｎ　ＩｎｓｔｒｕｍｅｎＬｓ、　Ｉｎｃ）、ウェス
トバリー　ニューヨーク）のＴＬＣによって追跡した［
展間溶媒、エタノール、２５％水酸化アンモニウム（４
：１、Ｖ／Ｖ）］。スポットはニンヒドリン噴射試薬に
よって視覚化した。このメチルエステルのＲｆ値は、０
．３であった。ＮＭＲでは、ニンヒドリンによっては視
覚化できない別の物質の存在か示された。ＮＭＲ分析に
より、この副生成物は分子内反応によって形成された７
員環アミドであることか確認された。この副生成物を除
去するために、メチルエステルを添加する前にメタノー
ルを前もって飽和させたが、うまくいかなかった。

反応が終了した後、回転エバポレーターによって乾固さ
せ、得られた固形物を十分量の水に再度溶解し、ｌｏｍ
Ｍの溶液を調製した。このアミドを、前もって１０ｍＭ
　　トリメチルアンモニウムホルメート（ｐＨ＝５）で
平衡化させたセファデックスＣＭ−２５（ファルマ／ア
・ファイン・ケミカルズ）の９０！（２カラムのクロマ
トグラフィーによって清遊りした。適用する前に、試料
のｐ　Ｌ（を、１０ｍＭ　　トリメチルアンモニウムホ
ルメートで８以下に調節した。上記の環状アミドの副生
成物は、試料ヲ適用し、ＩＯｍＭ）リメチルアンモニウ
ムホルメートを２カラム容量流す間にカラムから流出し
た。次いで、所望の生成物を、トリメチルアンモニウム
ホルメート（ｐＨ−５）ｌＱｍＭがら５００ｍＭの直線
グラジェント９００！ｌ（で溶出させた。フルオレスフ
アミンを使用して個々のフラクションをアミンの存在に
関して試験した。フルオレスフアミン陽性のフラクショ
ンをまとめ、凍結乾燥した。ＮＭＲ分析の結果は、Ｎ−
アセチル−Ｌ−リシンアミドの期待される構造と一致し
ていた。アミドの濃度を、トリニトロベンゼンスルホン
酸（ＴＮＢＳ）を使用する分析によって測定した［グレ
イサ−（Ｇｌａｚｅｒ、　Ａ、　Ｎ、　）らのＣｃｈｅ
ｍｉｃａｌＭｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｒｏｔ
ｅｉｎｓｓ　７６　７７頁、アメリカン・エルンーバ−
（Ａｍｅｒｉｃａｌ　Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）、ニューヨー
ク（Ｉ９７５）　］。

Ｍ、ハブテンＮＵＢＥの合成 エチレンジアミンニに？ＡＱｔｌ塩（Ｉ１５ｚｇ、８７
５μｍｏｌ）をエチレンジアミンＬＯ８μ（！（Ｉ，６
２４μｍｏｌ）に加えた。得られた溶液に、０．３Ｍ塩
酸中、４２．２ｍＭ　　ＩＴＣＢＥ２．５ｚ（！（Ｉ０
５μｍ０１）を撹拌下に加えた。トリエチルアミンまた
は塩酸を用いてそのｐＨを９−１０に調節した。

）（Ｐ　Ｌ　Ｏ分析により、この反応は即座に起こった
ことか判明した。ＮＵＢＥのＨＰ　Ｌ　Ｃ保持時間は、
実施例ＩＡのＨＰ　Ｌ　Ｃ条件下で２．６７分であった
。

得られた反応混合物を水て希釈して５００ｚ夕とし、２
０ｍＭ）リエチルアンモニウムホルメート（ｐ　Ｈ＝　
６−７　）で平衡化したＤＥＡＥセファデックスＡ２５
クロマトグラフィーカラム１５ｘＱに適用した。次いで
、このカラムをトリエチルアンモニウムホルメート２０
から２５０ｍＭの直線グラジェント５０Ｍで溶出した。

ピークのフラクション（２５０ｎｍの吸光度で判定）を
まとめ、凍結乾燥した。ＩＴＣＢＥの１３ＣＮＭＲスペ
クトルと比較すると、新たな共鳴が１８３．０．４４７
および４］、、８ｐｐｍに認められた（それぞれ、チオ
尿素、エチレンシアミンおよびメチレン炭素原子に対応
する）。さらに、ＩＴＣＢＥスペクトルに於ける１　４
０　ｐｐｍ領域近くの１つのシグナル（イソチオシアネ
−１・の炭素原子と帰属される）がＮＵＢＥスペクトル
ではｌ肖失していた。

ＮＵＢＥの構造を以下に示す。

無水グルタル酸１６ｍｇ　（Ｉ４０μｍｏｌ）のジメチ
ルアセトアミド１００μＱ溶液を、実施例１Ｍに記載の
ように製造したＮＵＢＥの３５ｍＭ溶液（８００μＱ　
、２８μｍｏＬ　ｐＨ８）に撹拌下に加えた。この反応
を室温で２０時時間待させ、次いテ２０ＩＩＩＭトリエ
チルアンモニウムホルメート（ｐ　ｆ（６，５）　２５
０ｚＱで希釈して反応を停止させた。実施例ＩＡに記載
の条件下に於けるＨＰＬＣ保持時間は３．１９分であっ
た。

次いで、得られた溶液を、２０ＩＩＩＭトリエチルアン
モニウムホルメート（ｐＨ６，５）で平ｉ化したＤＥＡ
ＥセファデックスＡ−２５力ラム１５ｍ（ｌ　ニｊｆｌ
用し、このカラムを同じ緩衝液２００から８００１１Ｉ
Ｍのグラジェント５００ｉ＆で溶出した。ピークのフラ
クション（２５０ｎｍの吸光で判定）をまとめ、凍結乾
燥した。ＮＵＢＥの１３ＣＮＭＲスペクトルと比較する
と、グルタルアメート（ｇｌｕｔａｒａｍａｔｅ）置換
基由来の酸、アミドおよび３つのメチレン炭素原子に対
応する新たな共鳴がそれぞれ１８０．６．１７８．７．
３７．７．３５．９および２３．６ｐｐＩ１１に認めら
れた。さらに、４４．７ｐｐｍにあったＮＵＢＥ共鳴が
ＧＮＵＢＥでは４６．８ｐｐｍにシフトしており、これ
はおそらく隣接したアミンのアシル化に基づくものと推
定された。

ＧＮＵＢＥの構造を以下に示す。

ｐ−ブロモアセトアミドベンジル−ＥＤＴＡ　（ＢＡＢ
Ｅ）を、米国特許第４．６２２，４２０号に概略水され
た方法に従って製造する。次ぎに、ＢＡＢＥを、１Ｍ酢
酸ナトリウム（ｐＨ８，０）中、ｌＯ％重１モル濃度過
剰の放射活性のないインジウムで標識し、最終ｐＨを約
４に調節した（以下の操作に従い、微量のインジウム−
１１１を加える）。

その標識化の条件は以下である： １Ｍ酢酸ナト＋ＪつＡ（ｐＨ８，０）２０００．ｃ１５
０ｍＭ塩酸中、１００ｍＭ　Ｉ　ｎＣＱ３１０８９１ｔ
ＱＩｎ−１１１１２０μ１２ ＢＡＢＥ　（Ｉ１０ｍＭ　）　９ｏｏμｃこれらの反応
試薬をこの順番で、酸洗浄した撹拌棒を備えた酸洗浄し
た容器内に入れた。ＩＯＮ水酸化ナトリウムまたはＩＮ
水酸化ナトリウムのいずれかを使用してｐＨを４．０に
調節し、得られた反応物を３０−６０分撹拌する。ＥＤ
３Ａ　（エチレンジアミン・トリアセテート）カラムを
５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４，０）緩衝液で平衡化
した。カラム６ＲＱを充填し、反応混合物を樹脂許容量
の約３４．４％まで積層し、生成物を溶出させた。約り
５％純度のＢＡＢＥ−Ｉｎが得られた。

ｐ−ブロモアセトアミドベンジル−ＤＴＰＡ　（ＢＡＢ
Ｄ）を、米国特許第４，６２２．４２０号に於ける先に
記載したＢＡＢＥに関する操作法と類似の方法によって
製造する。ＢＡＢＤ　（４７，１μｍｏＬ　　ｌ　４５
ｍＭ）を、Ｏ，１Ｍ重炭酸ナトリウム（ｐＨ８，２）中
、５ｍＭ１，４−ブタンジチオール（４０倍過剰の１，
４−ブタンジチオールを加える）２３．５５１１２で反
応させた。この反応をＨＰＬＣで追跡した。反応が完了
した後、得られた反応混合物を３２０ＯＲＰＭで１０分
間遠心分離し、得られた上清を２３Ｍギ酸で酸性にし、
最終濃度０゜５Ｍギ酸とした。得られた沈澱物を一７０
℃で保存した。次いで、反応物をジエチルエーテルの４
０ｆｆｆｆ部分量で抽出し、この操作を抽出液がＤＴＮ
Ｂ陰性になるまで続けた。水層を一晩凍結乾燥し、−７
０℃で保存した。得られたｒＭＢＤＪの収率は７３．５
％であった。

ＭＢＤ　（３１，５μｍｏｌ；　０．ＩＭ重重炭酸ナト
リウム中　９．１ｍＭ（ｐＨ８，２））を既述のように
製造した６３．０μｍｏｌ　ＢＡＢＥ−Ｉｎ　（０，３
Ｍ塩酸中１００ｍＭ）と反応させた。最終容量は６゜３
順であった。反応試薬は以下のものを使用した： ０．１Ｍ重炭酸ナトリウム（ｐＨ８，２）４．０２Ｊ１
１２ 要すれば、飽和炭酸ナトリウムでｐＨ８，２に調節した
ＭＢＤｌ、６４５順 要すれば、飽和炭酸すｈ　ｌ）ラムでｐｉ（８，２に再
ひ調節したＢＡＢＥ−Ｉｎ０．６３０ｆｆＣ０ＨＰＬＣ
で１則定すると、反応時間は約１−２時間であった。得
られた反応混合物を２ｉ１２クロマトグラフイーカラム
（０，１Ｍ重炭酸ナトリウム（ｐＨ８，２）で平衡化し
たＢ　１ｏＲａｄ　Ａｆ’ｆｉ−ｇｅｌ−５０１カラム
）に適用した。溶出夜釣３０ｍ１２を集め、溶出液のｐ
　Ｈを２３Ｍギ酸で６．０に調節した。

次イで、この溶出液を素早＜Ａ−２５カラム（Ｉ０ｍＭ
ギ酸アンモニウム（ｐＨ６，３緩衝液）で平衡化）に適
用した。このカラムを１０　ｍＭ　緩衝液で洗浄し、試
料は溶出されないことを確認した。

１０ｍＭから１．０Ｍ　（ｐＨ６，０）ギ酸アンモニウ
ムのグラジェント５０ｍ（ｌを用いて行った。生成物の
Ｈｐｔ、ｃ保持時間は５．０８分であった。

Ｐ、ハプテンＤＢ−Ｉ＋の合成 り　Ｂ−１１を、ＤＴＴ　（ジチオトレイトール）をＢ
ＡＢＤと反応させた後、ＢＡＢＥ−Ｉｎと反応させるこ
とによって製造した。

ＢＡＢＤ　（０，２Ｍ塩酸中、８３３μρ、１００ｍＭ
）をＤＴＴ　（重炭酸ナトリウム中、０．５Ｍ（ｐＨ８
））に加えた。ｐ　Ｈを８８２に調節し、反応は２時間
で完了した（ＨＰＬＣで確認）。反応物を２３Ｍギ酸で
酸性にし、次いでＤＴＮＢ陰性になるまでジエチルエー
テルで抽出した。生成物を一晩凍結乾燥し、次いで水１
．０ｆｆ（に溶解した。

次いで、得られた反応生成物［Ｍ　Ｂ　Ｄ−２と命名す
る］を、実施例１の０項で製造したＢＡＢＥ＋ｎと反応
させた。この反応条件は以下である。

０．１Ｍ重炭酸ナトリウム（ｐＨ８，２）４４４０μＱ ＭＢＤ−２（３３ｍＭ）９００μρ ＢＡＢＥ−Ｉｎ　（Ｉ１３ｍＭ）５２０μ＆この反応は
２時間で完了した（ＨＰＬＣて確認）。

得られた反応混合物を、Ｏ，１Ｍ重炭酸ナトリウム（ｐ
）（８，２）で溶出するＢｉｏＲａｄ　Ａｆｆｉ−ｇｅ
ｌカラム５．５ｘＩ２で精製した。溶出物質のｐＨを６
に調節し、さらに１０ｍＭから１Ｍギ酸アンモニウム（
ｐ　Ｈ６緩衝液）のグランエンドＩＯＭで溶出するＡ−
２５カラムで精製した。得られた生成物は、ＨＰＬＣの
分析によると純度約７８％であり、その保持時間は４月
分であった。

Ｑ、ハプテンＤＢ−ＩＩ＋の合成 りＢ−ＩＩ＋を、ｐ−アミノベンジルＥＤＴＡ　（ＡＢ
Ｅ）をｌ）−イソチオンアネートベンジルＤＴＰＡ（Ｉ
ＴＣＢＤ）と反応させることによって製造する。これら
両出発物質は米国特許第４，６２２．４２０号に記載の
方法によって製造される。

ＡＢＥをＱ、１Ｍ酢酸ナトリウム（ｐＨ６）中、２０％
過剰モル４Ｂｔのインジウム溶液で標識する。

これらの反応試薬は以下の如く加えた。

０．１Ｍ酢酸ナトリウム（ｐＨ６）２３１０μＱ１００
ｍＭ　　Ｉ　ｎＣＱ３１４１０μ１２１２９．６ｍＭ　
ＡＢＥ　　９００１１（２１ＯＮ水酸化ナトリウムを使
用してｐｌ（を６に調節し、反応を１時間続けた。次い
で、インジウム標識化ＡＢＥをＥＤＴＡ　（エチレンジ
アミン四酢酸）カラム２８７ＩＱに通し、ｌＱｍＭ酢酸
ナトノウム（ｐＨ６）ｎｔ衝液で溶出した。得られた混
合物を一晩凍結乾燥し、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水１ｍＱに再度
溶解した。インジウム核種がはずれる（スクランブルす
る）のを防くために、ｐＨは、全操作を通じてｐ　Ｈ６
か、それ以上に設定しなければならない。

ＩＴＣＢＤ　（Ｉ，２ＩＩＩＬ　５１ｍＭ）を、インジ
ウム標識化ＡＢＥを添加する前に凍結乾燥した。この添
加は以下のように行った： 重炭酸ナトリウム（Ｉ，５，ｚρ、Ｏ，］Ｍ、ｐＨ８２
）を既述のように製造した７　０．３ｍＭ　Ａ、　Ｂ　
ＥＩｎｌｚｊに加えた。飽和炭酸ナトリウムてｐｌｌを
８に調節し、次いでこの溶液を凍結乾燥したＩＴＣＢＤ
に加えた。得られた混合物を４０°Ｃで反応させると２
時間後には反応が終了した（ＨＰＬＣて確認）。得られ
た生成物は純度７８．４％であり、ＨＰ　Ｌ　Ｃ保持時
間は約３．０４分であった。試料のｐＨをギ酸で６に調
節し、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水で２０ＭＱに希釈し、１０ｍＭ
ギ酸アンモニウム（ｐＨ６）緩衝液で平衡化したＡ−２
５カラムに通して精製した。１０ｍＭからＩＭのギ酸ア
ンモニウム（ｐＨ６）緩衝液のグラジェント２００１を
使用し、生成物を溶出した。水中（ｐＨ７）、２（３Ｑ
’ｎｍに於ける吸光係数は約２０，３８０であった。

Ｉｎ−１１１およびＹ−９０を使用して得られた生成物
を放射標識し、次いで放射−ＨＰＬＣに適用することに
よって、ＤＢ−Ｉｌｌに伴われた活性がＩｎ−１１１お
よびＹ−９０標識化合物についてそれぞれ１００％およ
び９８％であることを確認した。このＨＰＬＣシステム
では、”ｙ”標識化合物は、９０Ｙ３６標識ＤＴＰＡキ
レ一ト化合物に関連する特徴的なダブレットを示した。

１′ｌｎ３°および９０Ｙ３ａｐ識核種についてそれぞ
れ９６％および９７％の標識化Ｄ　Ｂ−Ｉｌｌが抗体Ｃ
ＨＡ２５５と結合した。

ＤＢ−ＩＩＩのＩＨおよび”ＣＮＭＲを以下のように測
定した： 試料は、溶媒として蒸留したり、Ｏを使用し、酸洗浄し
たＮＭＲ管中で操作直前に調製した。必要ならＮａ０Ｄ
またはＤｅ１２を使用してｐＨを６゜５に調節した。こ
のｐＨ値は、Ｄ、Ｏ活性についての補正なしの実際のｐ
Ｈメーターの読みである。

Ｉ３ＣＮＭＲスペクトルでは、ｐ−ジオキサンを内部標
準物質として使用しく６６．５ｐｐｍの低磁場側シフト
）、プロトンＮＭＲスペクトルではＨＤＯピーク（４，
７０ｐｐｍ）を対照として使用した。すべてのスペクト
ルをパリアンＸ　Ｌ　　３００型（Ｗａｒｉａｎ　Ｍｏ
ｄｅｌ　ＸＬ−３００）ＮＭＲスペクトルメーターで記
録した。

以下に、＋３ｃ　ＮＭＲスペクトルに関し、得られた結
果を示す（ｐｐｍ（δ））。ただし、すべてのピークを
挙げていない： １７９．５．１７７．６．１７６０．１７５．８．１７
５．５．１７０．９．１７０．３．１７０２．１３５．
３．１３４．４．１３０．２（ＣＨ）、１３０．１（Ｃ
Ｈ）、１２６．８（ＣＨ）、１２６．７（ＣＨ）、６２
．５（ＣＨ）、６１．０（ＣＨ）、５９．７（ＣＨ，）
、５７．７（ＣＨ２）、５７．２（ＣＨ，）、５６゜７
　＜ＣＨ、）、ｓｓ、４（ｃｔｒｔ）、５３．９（ＣＨ
，）、５３．５（ＣＨ，）、５３．１（ＣＨ，）、５１
．５（ＣＨ９）、４８．５（ＣＨ，ｌ）、３２．３（Ｃ
Ｈ２）、３１．９（ＣＨ２）。

以下のようにｌ５Ｂ−１１１を８０Ｙ標識した：１０μ
Ｑ　　０．２２Ｍ　　グリシン、ｐＨ８，２１μｐ　　
０．１ｍＭ　ＤＢ−ＩＩＩ ５μ（”Ｙ（Ｉ８０μＣｉ／μの 得られた混合物を室温で３０分間インキュベートした。

Ｒ，ハプテンＤ　Ｂ　−ＩＶの合成 り　Ｂ　−ＩＶは、他のＤＢ−ハプテンの製造に関して
既述した方法と類似の方法によって、ＮＵＢＥを［ＴＣ
ＢＤと反応させることによって製造される。

使用すべきＮＵＢＥおよびＩＴＣＢＤを混合する前に凍
結乾燥した。炭酸ナトリウム（５０μＱ、ｐＨ１ｌ−１
２）をＮＵＢＥに加えた後、ＩＴＣＢＤを加えた。反応
を４０℃で行った。使用した量は以下のとおりである。

２５ｊｉ　Ｉ　ＴＣＢＤ　（５１ｍＭ）１２５μ１２Ｎ
ＵＢＥ　（２０ｍＭ）（Ｉ００％過剰のＮＵＢＥを加え
た） 炭酸ナトリウム（ｐＨ１１−１２）最終容量５０μＱ この反応をＨＰＬＣでモニターし、約１．５時間以内で
完了していた。得られた生成物の保持時間は、約３６４
２分であった。

Ｓ９　ハプテンＤＢ−Ｖの合成 ＩＴＣＢＤをブチルジアミンと反応させ、ＢＵＢＥを製
造した。次いで、このＢＵＢＥに放射活性のない（コー
ルド）インジウムを入れた後、ＩＴＣＢＤと反応させ、
ＤＢ−Ｖを製造する。

詳細には、ブチルジアミン（ＢＵＤＡ、８００μｍｏｌ
）　８０　ｕＱを３Ｎ塩酸３００’ｔｔ’（ｌに混合し
、ｐＨを約１０．５とした。ＩＴＣＢＤ　（Ｉ！（２，
３９ｎ＋Ｍ）を、撹拌下にこの混合物へ滴加した。ＢＵ
ＤＡ　Ｉ　ＯμＱをさらに追加し、ｐＨ−１０，５を維
持させた。ＨＰＬＣにより確認して反応が完了したなら
、得られた反応混合物をＭｉｌｌｉ−Ｑ水で希釈し、０
．３Ｎ塩酸を用いてそのｐＨを３に調節した。得られた
生成物をＡＣ−ＩＸ８樹脂を入れたカラムで精製した。

ＢＵＤＡを５０ｍＭギ酸で溶出し、溶出液を試験してフ
ルオレスフアミン陰性になるまでこれを行った。次いて
、生成物をｌＮＮ酪酸溶出した。生成物を含有するフラ
クションをまとめ、凍結乾燥した。

次ぎに、上記のように製造したＢＵＤＡをコールドイン
ジウムで標識した。過剰のインジウムをエチレンシアミ
ン四酢酸カラムで除去した。先に製造したＩ　ＴＣＢ　
Ｄ（０，５ｙｔｒＱ、３９ｍＭ）を凍結乾燥し、次いで
０．１Ｍ重炭酸ナトリウムｌｘＱに再度溶解した。この
ｐＨをＩＮ水酸化ナトリウムで７に調節した。前記で製
造したＩｎ−ＢＵＢＥ（２３７１ｍｏｌ）を０．１Ｍ重
炭酸ナトリウム（ｐ　Ｈ８）０．５．１Ｃに溶解した。

得られた２つの溶液を混合し、ＩＮ水酸化ナトリウムで
１．０．５に調節した。

この反応は、ＨＰ　Ｌ　Ｃで確認すると約３時間で完了
した。

得られた反応混合物を、１０ｍＭからＩＭのギ酸アンモ
ニウム（ｐＨ６緩衝液）で行うグラジェント２００ｆｆ
１２を使用するＡＧ−２５カラムで精製した。所望の生
成物を含有するフラクションをまとめ、凍結乾燥し、次
いて１．００ｍＭキ酸アギ酸ニウム（ｐｉ（６）＋、ｍ
ｃに溶解し、特性化した。

得られた生成物は、Ｉ（Ｐ　Ｌ　Ｏの保持時間が３．８
３分てあり、約８８６％の純度であった。この生成物は
、吸光係数２６，７００であり、２４６ｎｍて最大吸収
を示した。

Ｔ、ハプテンＤＢ−Ｖｌの合成 米国特許第４，６２２，４２０号の教示に従い、既述の
ＡＢＥの製造法と類似の方法によって、ｐアミノベンジ
ル−ＤＴＰＡ　（ＡＢＤ）を製造した。

既述のように製造したＢＡＢＥを以下のようにインジウ
ム標識した： 塩化インジウム（Ｉ２Ｎ塩酸中、３０．６ｍＭ、２、　
ＯＲのをＢＡＢＥ溶液（Ｉ４４，ｍＭ、４００μρ）に
加え、ＩＯＮおよびＩＮ水酸化ナトリウムを用い、ｐＨ
を約６．０に調節した。得られた混合物を３０分間イン
キュベートし、次いてエチレンジアミン四酢酸カラムで
精製した。生成物は、１０ｍＭ酢酸ナトリウムで溶出さ
せた。所望の生成物を含有するカラムフラクションをま
とめ、凍結乾燥した。

インジウムを結合させたＢＡＢＥ　（水１１中、２０μ
ｍｏｌ）をＡ　Ｂ　Ｃ（２０μｍｏｌ）の水溶液（０゜
５７１＋りに加えた。そのｐＨを約５．６に調節し、得
られた反応物を３７°Ｃで一晩インキユベートした。Ｉ
（ＰＬＣ分析により、反応完了を確認し、得られた反応
混合物を、０．１から１．ＱＭ）リエチルアミンホルメ
ート（ｐＨ８，７）のグラジェントを使用するＡ−２５
カラムで精製し、物質を溶出させた。所望の生成物を含
有するフラクションをまとめ、凍結乾燥した。得られた
ＤＢ−ＶｌのＨＰＬＣ保持時間は約３．３分であった。

１３ＣＮＭＲスペクトルは以下のケミカルシフト（ｐｐ
ｍ（δ））を示したく内部標準物質、ジオキサン）。：
１７８゜８．１７８６．１７８．３．１７７．７．１７
５６．１７３．１．１７３．０、］、７２．１．１４９
４．１３８．Ｌ　　１３６．５．１３３．１（ＣＨ）、
１３２．７（ＣＩ）、１２７．０．１２５．６（ＣＨ）
、１１６．８（ＣＩ（）、６５．５（ＣＨ）、６４．０
　（ＣＨ）、６２．５（ＣＨ２）、６０．６（ＣＨ，）
、６０．２（ＣＨｚ）、５９．６（ＣＨ２）、５６．８
（ＣＨ，）、５６．５（ＣＨ，）、５６．０（ＣＨ，）
、５５．７（ＣＨ，）、５４．４（ＣＨ３）、５１．３
（ＣＨ，）、５０．７　　（ＣＨ，）、３５．０（ＣＨ
，）、３４．２（ＣＨ，）。

プロトンＮ　Ｍ　Ｒ（内部標準物質：ＨＯＤ）では以下
の数値で共鳴（δ）を示した：　７．３１（ｄ、　　ｌ
　）（、Ｊ　＝８．４Ｈｚ）　、７．１９　（ｄ、ＩＨ
，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．０８（ｄ、ＬＨ，Ｊ＝８．４
Ｈｚ）、６．７（ｄ、　　１．　ＨＳＪ　＝　８．４　
Ｈｚ）、３．９４（ｓ、２Ｈ）、２、７０　（ｍ、　２
　Ｉ（）、２．５５（ｍ、ＩＨ）。

Ｕ、ハプテンＤＢ−Ｖｌｌ＋の合成 りＢ−Ｖｌｌ＋は、ｐ−ブロモアセトアミドベンジルＤ
ＴＰＡ（ＢＡＢＤ）を、ＢＡＢＥと１．３−ジアミノ−
２−ヒドロキシプロパンとから製造されるインジウムを
結合させたＤ　ＨＰ　Ｂ　Ｅと反応させることによって
製造される。ＢＡＢＤは、ＢＡＢＥの製法について既述
した類似の方法によって製造され、これらは一般に、プ
レイマー（ＤｅＲｅｉｍｅｒ、　Ｌ、　Ｍ）らのＪ、Ｉ
、ａｂ、　Ｃｏｍｐ、　ａｎｄ　Ｒａｄｉｏｐｂａｒｍ
、　１８．　［５１７（Ｉ９８１）および米国特許第４
，６２２，４２０号の方法を踏襲するものである。

詳細には、１，３−ジアミノ−２−ヒドロキシプロパン
（２８ｚｇ）を５０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ１Ｏ）
１ｍＣに溶解し、既述のように製造したＢＡＢＥ　（２
４ｍＭ、１７１１１２）を滴加した。

得られた反応物を室温で一晩撹拌し、ＨＰＬＣで反応の
完了を確認した。この反応混合物を６０肩ρに希釈し、
１００ｍＭ）リエチルアンモニウムホルメート（ｐＨ８
，７）で平衡化したＡ−２５カラム（Ｉ０ｚのに適用し
た。このカラムを、１００ｍＭからｌ、ＱＭＩ−リエチ
ルアンモニウムホルメートのグラジェント（ｐ　Ｈ８，
７）（４００酎）で溶出した。得られたフラクションを
ＨＰＬＣで分析して生成物を含有するフラクションをま
とめ、凍結乾燥した。得られた生成物を水（Ｉｘｆ２）
に溶解しく２４　、ｃｚｍｏｌ）　、塩化インジウム（
３０，６ｍＭ、４００μａ）を加えた。ｐＨを約５．８
に設定し、溶液を３０分間インキュベートした。この混
合物は生成物および出発物質が同じ保持時間を有してい
ることを示したので、さらに過剰の塩化インジウム（６
００μのを加えた。ｐＨを約６．０にし、得られた物質
をエチレンジアミン四酢酸カラムに適用した。このカラ
ムを１０ｍＭ酢酸ナトリウムで溶出し、生成物を含有す
るフラクションをまとめ、凍結乾燥した。

得られたインジウムを結合させたＤＨＰＢＥ　（２Ｑμ
ｍｏｌ）を水１酎に溶解し、ＢＡＢＤ　（４０μｍｏｌ
）に滴加した。ｐＨを約９，０に調節し、得られた反応
物を３７°Ｃで約６日間撹拌した。ＨＰＬＣ分析は、い
くつかの生成物の生成を示した。Ａ２５およびＢ　１ｏ
Ｒａｄ　Ａｆｆｉ−ｇｅｌｌ　０２カラムでの精製を繰
り返した後、１つの生成物（ＤＢＶｌｌ＋と命名する）
を得た。この生成物のＨＰＬＣ保持時間は３．２分であ
った。

実施例２ 抗体を産生ずるハイブリドーマセルラインを以下のよう
に調製した： その抗原で複数回免疫したＢＡＬＢ／ｃマウス由来の肺
臓細胞をＰ３．６５３ミエローマの変種セルラインと融
合させた［ゲーハード（Ｇｅｒｈａｒｄ）、Ｍｏｎｏｃ
ｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ケネス（Ｋｅｎｎ
ｅｔｈ）ら編、ブレナム出版（Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓ
ｓ）、ニューヨーク（Ｉ９８０）参照］。得られたハイ
ブリドーマを、インジウム−アミノベンジル−ＥＤＴＡ
との結合能に関し、固相法第２抗体放射免疫検定法（ｓ
ｏｌｉｄ　ｐｈａｓｅ　５ｅａｏｎｄ　ａｎｔｉｂｏｄ
ｙ　ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）によってスク
リーニングした［ウアング（Ｗａｎｇ）らのＪｏｕｒｎ
ａｌ　ｏｆ　１ｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ、　ｔｇ、　１５７（Ｉ９７？）］　ｏさらに研究
するため、非標識化抗原による結合阻害を基に測定した
これらの高い力価および比較的高い親和性から判断して
、ＣｌＡ２５５と命名されるモノクローナル抗体を選別
し一１腹水産生のために、それをＢＡＬＢ／ｃマウスに
腹腔内注射した。パーハム（Ｐａｒｈａｍ）らのＪ、　
Ｉｍａ＋ｕｎｏ１．　Ｍｅｔｈ、　、　５３＋　１３：
１（Ｉ９８２）に記載のように、ＤＥＡ、Ｅ−セルロー
スのイオン交換クロマトグラフィーによって、モノクロ
ーナル抗体をマウスの腹水から精製した。モノクローナ
ル抗体ＣＨＡ２５５はリードン（Ｒｅａｒｄｏｎ、　Ｄ
、Ｔ。

）らのネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）　３１６，２６５−
２６８（Ｉ９８５）に詳細に記載されている。

８、　２機能性抗体ＥＣＨＯ３７，２の調製実施例２人
に記載のように調製したモノクローナル抗体ＣＨＡ２’
５５を発現するハイブリドーマセルラインと癌胎児性抗
原（ＣＥ　Ａ）に対して特異性を有する抗体を発現する
、ＯＥＭ２３１．６゜７と命名されるハイブリドーマセ
ルラインとの生物学的な融合によってテトラドーマ（ｔ
ｅｔｒａｄｏｍａ）を形成させ、２機能性抗体ＥＣＨＯ
３７，２を調製した。ハイブリドーマセルラインは、ブ
タペスト条約の下、１９８８年１８７日にアメリカン・
タイプ・カルチャー・コレクションとして寄託されてい
る（ＡＴＣＣ受託番号ＨＢ９６２０）。従って、産生さ
れる２機能性抗体はインジウム−ベンジル−ＥＤＴＡお
よびＣＥＡの両者に対する特異性を有している。ＥＣＨ
Ｏ３７，２と命名された２機能性抗体を発現するテトラ
ドーマは、バーネット（Ｂｕｒｎｅｔｔ、　Ｋ、　Ｇ、
　）らのＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　：Ａｐｐｌ　１
ｃａｔ　ｉ。

ｎｓ　ａｎｄ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ＋　４０１−４０９頁
［ＣｈｅｒｅｍｉｓｉｎｏｆｆおよひＯｕｃｌｌｅｔｔ
ｅｇ、Ｔｃｃｈｎｏｍｉｃ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃ
ｏｍｐａｎｙ。

ペンフルバニア（Ｉ９８５）］に記載されたノ＼イブリ
ドーマセルラインＣＨΔ２５５とＣＥＭ２３１．６７と
の生物学的融合によって調製した。Ｅ　ＣＨ０３７２を
２段階工程の培養液から精製した。パーハム（Ｐａｒｈ
ａｍ）らのＪ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｍｅｔｈ、　、　
５３．１３３（Ｉ９８２）（こ記、戎の３太う（こＤＥ
ＡＥ−セルロースのクロマトグラフィーによって、１ｇ
０分子を培養培地の他の１戊分からまず中離し、次いで
ヒドロキンルアパタイト（ｈｙｄｒｏｘｙｌａｐａｔｉ
ｔｅ）のＨＰ　Ｌ　Ｃ［Ｂ　１ｏＲａｄＬａｂｏｒａｔ
ｏｒｉｅｓ］によってさらに精製した。２機能性抗体Ｅ
ＣＨＯ３７，２を、リン酸ナトリウム１０ｍ〜■から１
６０ｍＭ　（ｐ　Ｈ６，８）のグランエンドを使用して
溶出させた。この２つの緩衝液には共に、カラム分解を
防くためにｌ　ＯｍＭ　Ｃａ２゛も含有させた。この２
機能性抗体ＥＣＨＯ３７，２の同定は、７５％アクリル
アミドゲル（ＳＤＳ）の電気泳動によって得られるタン
パクの帯のパターン、ｔｓ、ｕｊインジウム−ベンジル
ＥＤＴＡキレート化合物とＣＥＡの両者に対する抗体の
結合能を基礎にして行った。

ハブテン能力検定 インジウム−ベン／ルーＥＤＴＡに結合する抗体の能力
を測定するため、抗体と（Ｓ）−４−ｐ−ニトロベンジ
ルＥＤＴＡのＩｎ”キレート化合物トを、１．５ｍｇ／
ｉ（正常血清アルブミンを含有するＰＢＳ（ｌｏｍＭ　
　リン酸ナトリウム、１５０ｍＭ　ＮａＣ（、ｐＨ７，
５）中で一緒にした。抗体の濃度は０．１．５＋＋＋ｇ
／ｍＱであり、インジウム＝（Ｓ）　−４−ｐ−ニトロ
ベンジルＥＤＴＡの濃度は３μＭであった。このキレー
ト体を　１ｌｌｉｎの比活性０．５−３．Ｏμｃｉ／ｎ
ｍｏｌで放射線標識した。

室温で５分間インキュベートした後、この混合物の２つ
の標本各４００ａＱを分離用ＣｅｎｔｒｉｆｒｅｅＴ９
限外濾過装置［ＮＭＷ遮断＝３０，０００；アミコン（
Ａｍｉｃｏｎ）製、デンバー、マサチューセッツ］に移
した。これらを１５００９で１０分間遠心分離した。前
Ｃｅｎｔｒｉｆｒｅｅ試料２つ（各５０μのをカウント
し、平均をとった。得られた値をｒＴｃｊと名付けた。

Ｃｅｎｔｒｉｆｒｅｅｉ＋！液の５０μ１２標本を２つ
カウントし、平均した。得られた値をｒＦＪと名付けた
。能力の理論値のパーセントを以下の式から計算した （Ｉ−Ｆ／ＴＣ）ｘＭ　。

Ｍは、無傷の抗体（ＣＨＡ２５５）　、Ｆａｂフラグメ
ント、Ｆ　（ａｂ）’　２２機能性抗体および無傷の２
機能性抗体（ＥＣＨＯ３７，２）ではそれぞれ１５０、
＋００．２００または３００の値に帰属された。

ＣＥＡに結合する抗体の能力を試験するため、免疫反応
試験を改良し、ＣＥＡに結合した放射線（票識化抗−Ｃ
ＥＡ抗体調製物のパーセンテイジを測定した。この値は
、ＣＥＡとの反応性を有する２番目の抗体によってポリ
スチレンビードと結合している固相ＣＥＡを使用した２
点免疫検定ｍ（ｔｗｏ　５ｉｔｅ　ｉｍｍｕｎｏａｓｓ
ａｙ）によって測定した［詳細は米国特許筒４，３７６
．８０号に記載されている］。市販されているＴＡＮＤ
ＥＭ−ＲＣＥＡ試験キット［ハイブリチック・インコー
ホレイテッド（ｌｌｙｂｒｉｔｅｃｈ　Ｉｎｃｏｒｐｏ
ｒａｔｅｄ）、す′デ１ゴ・カルフォルニア］から入手
できるＣＥＡビードを、高ＣＥＡおよびゼロ−キャリブ
レータ−（ｃａｌｉｂｒａｔ。

ｒｓ）中でインキュベートすることによって抗原陽性と
陰性のビードを調製した。非結合性ＣＥＡ抗原をビート
から洗浄排除した後、比活性１０μＣ１／μｇまでの１
″Ｉで放射線標識した抗体約ｉｎｇを加えた。抗原の存
在下にビードと結合した場合のカウントのパーセンテイ
ジを計算することによって免疫反応性のパーセンティジ
を測定した。

ＣＥＡ抗原の存在しないビードに結合した場合のバーセ
ンテイジによって非−特異的な結合コントロールを測定
した。

抗体ＣＨＡ　２５５結合検定 既述のように、モノクローナル抗体ＣＨＡ２５５は、■
ｎ３゛−ベンジルＥＤＴＡ錯体に特異的である。この親
和性および特性は既にＮ　ａｒｕｒｅ、　３１６゜２６
５（Ｉ９８５）に記載されている。結合試験を行い、Ｄ
ＢＩからＤＢ−ＩＩ＋と命名されたハブテンの本体を確
認した。この検定の条件下では、９０Ｙ３゜または”’
Ｉｎ”ＤＴＰＡはいずれも単独ではＣＨＡ２５５と結合
しなかった。９０Ｙ３°ノ１ブテンキレートに関して詳
細に言えば、ＣｌＡ２５５結合には、本発明の化合物に
於いて提供されるＩｎ−ベンジル−ＥＤＴＡ部分の存在
が条件とされた。

４４μｇ／ｘ（ｌヒト血清アルブミンおよび０６０５％
トリトン−Ｘ−１００洗浄剤を含有するＰＢＳ（Ｉ０ｍ
Ｍ　　リン酸ナトリウム、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、
ｐＨ７，４）中で、標識化ＤＢハブテンキレートを抗体
ＣＨＡ２５５と一緒にした。放射線標識化ハブテンキレ
ート試薬および抗体の濃度はそれぞれ５ｎＭおよび１３
３ｎＭであった。

この混合物を旋回させ、室温に１５分間放置し、次いで
それをＮＭＷ限界３０，０００のアミコンＣｅｎｔｒｉ
ｆｒｅｅＴ）Ｉ装置に入れ、遠心分離して抗体結合キレ
ートを遊離のハブテンキレートと分離させた。抗体と結
合した種は膜によって保持され、遊離の牛レートは膜か
ら濾液として流れ出る。次いで、抗体−ハブテンキレー
ト結合の存在を確かめる。

実施例３ 誘導ハブテンのインビトロ特性化 実施例２人で調製したモノクローナル抗体ＣＨＡ２５５
を使用し、抗体ハブテン複合体から遊離されるｌ１ｌＩ
ｎ３゛キレ一ト体の量を、インジウム−１１５と結合し
たハブテンの１００倍過剰量（抗体結合部位より１００
倍）の添加後に於ける時間の関数として測定することに
よって、ハブテン−抗体の解離速度を測定した。即ち、
それぞれのノ＼ブテンについて、以下の組成の７００μ
ｆｆ溶１ｆｆｌヲ調製した：濃度１６０ｎＭの抗体、イ
ンジウム結合ハブテン［＋１＋　１　ｎで標識されたト
レース（全濃度−１６０ｎＭ）］、全濃度１．５ｍｇ／
ｍ１２の正常ヒト血清アルブミン、および等強性リン酸
緩衝化食塩水（Ｉ０ｍＭ　ＰＯ，！−１１５０ｍＭ　Ｎ
ａＣＱ、ｐＨ７，２）。インジウム−１１５の結合した
ハブテンを最終濃度３２μＭで加えた。試料容器を旋回
装置のヘッド上のラックに置き、反応物を撹拌した。

過剰量のハブテンを加えた後、種々の時間で、反応溶液
の４００μｅ部分量をＣｅｎｔｒｉｆｒｅｅ管［アミコ
ン・コーポレーション］に移し、１５００ｘ９で８−１
Ｏ分間遠心分離した。反応時間として、過剰量のハブテ
ンを加える間の時間と遠心の速度が所望の速度に達する
までの時間をとった。２つの試料各々について、それぞ
れの速度定数の測定のため、２つのおよその反応半減期
の範囲で６つの時間ポイントをとった。次いで、遠心分
離された溶液および遠心分離されていない溶液から得た
、それぞれ２００μｅの部分量をｌ′′Ｉｎに関してカ
ウントした。各時間ポイントについて、遊離ハブテンの
相対的濃度を、遠心分離されていない溶液に対する遠心
分離された溶液のカウントの率としてとった。記録した
回数は、１分当たり約１０回であった。

室温の速度定数は、恒温槽を使用せずに測定した。環境
温度は２２°±ＩＣを維持していた。

相対的複合体濃度と時間との対数のプロットから、速度
定数および標準偏差を得た。データは、Ｒ８／ｌプログ
ラム［ＢＢＮ　ソフトウェア−・プロダクツ・コーポレ
ーション（ＢＢＮ　Ｓｏｆｔｗａｒｅ　Ｐｒｏｄｕｃｔ
ｓ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ケンブリッジ、マサチ
ューセッツ］の直線回帰モジュールを使用して分析した
。

Ａ）抗体に１００％結合している標識ハブテンという初
期条件が適合しているか、またＢ）抗体の不存在下に、
１００％のカウントがＣｅｎｔｒｉｆｒｅｅ膜を透過で
きるかどうかを調査するため、それぞれの実験に、対照
試料を加えた。対照実験Ａにて、初期にはカウントの有
意な量が抗体と結合していないことを示した場合には、
すべての遠心分離および非遠心分離の試料溶液から、２
つの対照実験に於けるカウントの平均値を引く。対照実
験Ｂにて、すべてのカウントが必ずしも膜を透過してい
ないことを示した場合には、各カウント率（即ち、遊離
ハブテンの相対的濃度）を、２つの対照実験に於ける膜
透過フラクションの平均で割り算する。反応半減期（ｔ
ｌ／１分）として表される抗体−ハブテン解離速度を以
下の第３表に示す。

ｃＮＩＪ　ＹうＥ ＢＥＴＵＢＥ ＢＡＬＴＵＢＥ Ｂ　Ｕ　Ｔ　Ｕ　Ｂ　Ｅ ＡＴＵＢＥ ｉ”　ＩＪ　Ｂ　Ｅ ＨＴＵＢＥ ＡＴＵＢＥ Ｅ　Ｔ　Ｕ　Ｂ　Ｅ ＰＨＡＴＵＢＥ ＥＯＴＩＪＢＥ ＵＢＥ 第３ ９０．９ ９０．６ ８４．２ ７５．０ ７−１．３ ７１．５ 表 １．２ ３．０ ２．６ ２．５ ０．８ ＋、８ ０．８ ０．９９５ ０．９９９ ０．９９８ ０、９９９ ０．９９７ ０、９９８ 第３表に示すように、本発明のハブテンは、非常に広い
範囲の速度域で抗体から解離する。従って、ターゲット
への全投与量が最も重要な配慮事項である治療等に適用
する場合には、ハブテンは、抗体からゆっくりと解離す
るよう選択、または改変する、−とができる。逆に、半
減期が比較的短いハブテンの場合には、／イズ（例えば
、血液プール）に対する（ターゲットへの）シグナルが
ｉも重要な因子である画像法などに適用する場合、また
はハブテンを抗体間に移し換えることが必要なプロトフ
ールの場合にはより都合がよい。

実施例４ ２つのプロトコールを使用し、２機能性抗体ＥＣＨＯ３
７，２の存在下に於ける誘導ハプテンの生体分布を調査
した。前混合プロトコールでは、ＥＣＨＯ３７，２およ
び誘導ハブテンを、動物に注入する前に、組み合わせた
。前局在プロトコールでは、放射標識化ハブテンを注入
する前に、ＥＣＨＯ３７，２を動物に注入し、前もって
抗体を２４時間局在化させておいた。

生体分布研究は、Ｅ　ＣＩ−（０３７、２によって認識
される癌胎児性抗原（ＣＥ　Ａ）を発現するヒト結腸癌
腫セルラインＴ−３８０を皮下移植したヌードマウスで
行った。概略説明すれば、Ｂａ１ｂ／ＣＮｕ／Ｎｕマウ
スに、Ｔ−３８０腫瘍を細かく切断した移植調製物を皮
下注射し、約２週間飼育するか、または腫瘍移植物が約
０．５ｇの大きさになるまで飼育したＬバーガン（Ｈａ
ｇａｎ、　Ｐ、　Ｌ、　）らのＪ、　Ｎｕｃ、　Ｍｅｄ
、、２６１４１８−１４２３（Ｉ９８５）］。マウスは
、細菌またはウィルス感東による合併症の併発を防くた
め、無菌環境下に置いた。生体分布は、ハルバーン（＋
１ａｌｐｅｒｎ、　Ｓ）らのＣａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　
４３．５３４７−５３５５（Ｉ９８３）に記載のように
行った。要約すれば、放射標識化ハブテンを正常マウス
に静脈注射し、薬物動Ｈ３を注射後７回のポイントで評
価した。これらの評価時点では、マウスを殺し、重量を
測定した。器官を取り出し、これらの重量を記録し、次
いで各器官を滅菌ＰＢＳ　（ｐ）（７，０）で洗浄し、
ホルマリン溶液中に固定化した。血液、尿および糞便の
試料も捕集し、同時にそれらの重量も記録した。器官ま
たはその部分をきれいな試験管に移し、ウェル型のガン
マ−計数器（ガンマ−カウンター）でそれらの放射活性
量を測定した。

各器官の相対的放射活性１を、器官毎の注射投与量のパ
ーセンテイジとして表した。

Ｂ　生体分布用試料の調製−前混合プロトフールインジ
ウム標識のために、Ｑ、１ｍＭ　リガンドノ本発明ハプ
テン１０μ（７を、”’ＩｎＣρ、（５０ｍＭ塩酸中）
ＸμＱおよび０．２６Ｍクエン酸アンモニウム（ｐＨ６
，０）（ｘ＋１０）μＱと７昆合した。Ｘは以下の式か
ら計算される Ｘ＝（２００μＣｉ）／（ＡμＣｉ／μｍ２）［式中、
Ａは目１Ｉｎの比活性である１゜標識化は、酸洗浄した
微小遠心管中で行った。

上記の各成分をすべて一緒にした後、得られた溶液を旋
回し、室温で１５分間放置した。

Ｉｎの牛レート試薬への導入度は、展開溶媒　メタノー
ル／水性酢酸アンモニウムでＦＭ　開する／リカのＴＬ
Ｃで測定した［メアレス（Ｍｅａｒｅｓ）らのＡｎａｌ
、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　、　１４２．６８−７５（Ｉ９
８４）］　、試料を生体分布検定に供するには、９５％
以上の放射活性の導入度が必要であった。

注射する前に、２機能性抗体を加えておいたｌｙｇ／ｚ
（ｌ正常ヒト血清アルブミン「ブミネー１−（Ｂｕｍｉ
ｎａｔｅ）、２５％溶液、トラベノール・ラボラトリー
ズ（Ｔｒａｖｅｎｏｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、
グレンダール、カルフォルニア〕を含有させた調製した
ばかりの等偏性重炭酸ナトリウム（Ｉ，３９％ｗ／ｖ）
中で１１’Ｉｎ標識化ハプテンを希釈した。この溶液の
最終組成は０．２ｘｇ／ｍＱ　Ｅ　ＣＨＯ３７，２，０
，５μＭキレート化合物、０．１μＣｉ／μ１２　”’
Ｉ　ｎ、全量２．ｏＩ（２であった。この生体分布試験
のため、得られた溶液１００μｅを各動物の尾静脈に注
射した。

以下の第４表および第５表は、既述の前混合プロトコー
ルを使用して測定した、異なるハプテン類の生体分布の
結果を示すものである（注射投与量／器官のｇ数のパー
センテイジとして表している）。

第４表 前混合プロトコールに於いて、Ｔ−３８０腫瘍を有する
ヌードマウスを使用した各種ハプテンと２０μｇＥｃＨ
Ｏ３７，２との比較 ４８時間目に於ける％投与ｆｔ／ｇ ＥＴＵＢＥ　　　５．９　１．２ ＢＥＴＵＢＥ　　　５．５　１．５ ＰＡＴＵＢＥ　　　７．６　１．７ ＢＡＴＵ８Ｅ　　　７．９　１．５ ＢＵＴＵＢＥ　　　５．８　１．２ ０ＴＵＢＥ　　　　Ｏ，５０，２ ＴＵＢＥ　　　　：（，８１，Ｉ ＥＯＴＵＢＥ　　　４．７　１．４ ＢＡＬＴＵＢＥ　　５．２　１．９ ＰＨＴＬＩＢＥ　　　５．４　１．７ ＰＨＡＴＵＢＥ　　３．７　０．８ ＮＵＢＥ　　　　２．０　２．５ ＧＮＵＢＥ　　　８．０　１．５ ２．４　１０．４　３６．０ １．９　　７．５　１２．０ ２．４　　９．８　３６．０ ２．０　１２．１　３０．４ ３．８　　５．７　２７．０ Ｇ、６　　０．７　１Ｇ、９ １．６　　６．５　４８．８ ３．１　　１４，５　４９．３ ２．２　１２．９　２６．５ ２．３　１０．６　２４．５ １．１　　　ａ、９　２２．４ １．９　　　ｇ、１　５２．６ ２．４　　１２．０　２６．９ １５．２　　６６．６　　１．７６ ２９、Ｑ　　　５４．２　　１．３６ ８．９　　６１．７　　１．２９ ２１．１　　　１１ｉ８Ｊ　　　１．５３２６．５　　
６９．３　　０．９８ ６８．４　　　８１．４　　１．４０ ９．８　　６９．５　　１．７１ ７．９　　　７２Ｊ　　　３．０９ １３．８　　　５７．８　　２．４ｇ ２１．７　　　６２．４　　１．９６ ３４．９　　　６６．４　　１．８６ １２．９　　　７４．１　　４．０ １？、８　　　６３．１　　１．４９ ＊ 尿および糞便は全注入量に対する％値である。

第５表 前混合プロトコールに於いて、Ｔ−３８０腫瘍を有する
ヌードマウスを使用した各種ハプテンと２０μｇＥｃＨ
Ｏ３７，２との比較 ２４時間目に於ける％投与量／ｇ ＥＴＵＢＥ　　　１Ｇ、４　２．４ ＢＥＴＵＢＥ　　　９．０　２．５ １’ＡＴＵＢＥ　　１２．２　２．２ ＢＡＴＵＢＥ　　１１．８　２．５ ＢＵＴＵＢＥ　　　９．０　１．７ ０ＴＵＢＥ　　　１．１　０．５ ＴＵＢＥ　　　　８．０　２．４ ＥＯＴＵＢＥ　　　９．３　２．８ ＢＡＬＴＵＢＥ　　１１．０　３．６ ＰＨＴＵＢＥ　　　８．９２．９ ＰＨＡＴＩＪＢＥ　　６．２　１．２ ＮＵＢＥ　　　　５．９　４．０ ＧＮＵＢＥ　　　８０　２．７ ３．５　　　ｇ、０　２５．８ ２．７　　８．０　８．４ ３．３　１０．６　２３．６ ３．３　１１．５　２０．０ ＆４　　５．３　２２．０ ０．８　　１．１　８．９ ４．０　　８．５　２３．７ ３．８　１２．５　２５．９ ４．０　１３．０　１６．３ ３．６　１２．４　２０．３ １．７　　　＆４　２１．７ ３．１　　　ｇ、５　４２．５ ３．４　　９．０　１４．２ ５．９　　　５２．２　　０．７？ １７．４　　　４４．６　　０．８９ ５．０　　　５３．７　　０．８７ ８．９　　　５０．８　　０．９７ １６．８　　　６３．８　　０．５９ ５Ｂ、５　　　６８．９　　１．００ ４．１　　　４８．２　　１．０６ ６．２　　　５５．６　　１．：ａ４ ６．８　　　５２．０　　１．１８ １３．９　　　５７．２　　１．３９ ２２．０　　　５９．７　　１．３５ ５．９　　　６６．３　　１．４４ １０．６　　　５２．０　　０．７０ ＊ 尿および糞便は全注入量に対する％値である。

第１図は、各ハプテンに係る腫瘍の絶対的取り込みを示
し、第２図は、各ハプテンに係る腫瘍／血液比率の変動
を示している。これらの図に於いては、略語ｒｅＪ、ｒ
ｂｅＪ、ｒｐａＪ、ｒｂａＪ、ｒｂｕ玉ｒｏＪ、ｒｅｏ
Ｊ、ｒｂａｌＪ、ｒｐｈＪ、およびｒｐｈａＪは、それ
ぞれＥＴＵＢＥ、ＢＥＴＵＢＥ、ＰＡＴＵＢＥ、ＢＡＴ
ＵＢＥ、ＢＵＴＵＢＥ、０ＴＵＢＥ、ＥＯＴＵＢＥ、Ｂ
ＡＬＴＵＢＥ、ＰＨＴＵＢＥ、およびＰＨＡＴＵＢＥを
意味している。第４表と第５表および第１図と第２図で
示されるように、得られた生体分布は、ハプテンが何で
あるかに依存している。例えば、最も単純なハプテンＴ
ＵＢＥを、増加した脂肪族の長鎖を有する誘導体（ＥＴ
ＵＢＥ、ＢｔＪＴＵＢＥおよび０ＴＵＢＥ）と比較した
場合、生理学的挙動にそのいくらかの傾向を認めること
ができる。ＥＴＵＢＥの生体分布は、ＴＵＢＥのそれと
非常に類似しているが、鎖の長さの増加分（および実施
例１で測定したＨＰＬＣにより、さらに、以下の第６表
で示されている疎水性の増加）として、腫瘍に於けるハ
プテンの量が減少している［例えば、ＥＴＵＢＥ、ＢＵ
ＴＵＢＥおよび０ＴＵＢＥではそれぞれ、２４時間目で
は８，０．５．３および１，１％注射投与ｆｆｉ／ｇで
あり、４８時間目ではそれぞれ１０，４．５．７および
０．７％注射投与ｆｆｉ／ｇである］。この同じ化合物
群に関し、消化管を介して糞便に排泄される物質量に劇
的な増加が認められる。例えば、注射後４８時間目では
、ＥＴＵＢＥＳＢＵＴＵＢＥおよび０ＴＵＢＥはそれぞ
れ、注入物質の１５．２．２６．５および６８．４％が
糞便中に排泄されている。

般に、化合物の脂肪親和性が増加すれば（ＨＰＬＣの保
持時間として示される）、それだけ、腸を介して糞便と
して外に排泄される物質の量は増加する（前混合プロト
コール）。このことは、以下の第６表に示されている。

（以下余白） ＮＵＢＥ ＮＵＢＥ ＡＴＵＢＥ ＡＴＵＢＥ ０ＴＵＢＥ ＮＵＢＥ ＢＡＬＴＵＢＥ ＰＨＡＴＵＢＥ ＥＴＵＢＥ Ｐ　ＨＴ　ｔＪ　Ｂ　Ｅ ＢＵＴＵＢＥ ＥＴＵＢＥ ＥＴＵＢＥ ＊　　襟章偏差 ＊＊　相関係数 第６表 ２．６ ２．８ ３．０ ３．１ ３．１ ３．２ ３．５ ３．５ ３．６ ４．５ ４．８ ５．１ ７．４ ５．９ ４．１ ５．０ ６．９ ６．２ １０．６ ８．５ ２２、Ｏ ６，７ １３，９ １６，８ １７，４ ５６，５ １２，９ ９，９ ８，９ ２１，１ ７，９ １７，８ １３，８ ３４，９ １５，２ ２７，１ ２６，５ ２９，０ ６８，４ 第６表から分かるように、ＨＰＬＣの保持時間が４分よ
りも長い化合物は、腹腔内でバブテンを画像化しようと
試みても、腸内が高レベルに観察されるため、それは困
難であり、従ってこれらの化合物は画像物質として望ま
しいものとは判定されなかった。また、末端炭素がカル
ボキシ、ヒドロキ７またはアミ７基をその列内に有して
いる化合物、ＥＴＵＢＥ、ＰＡＴＵＢＥＳＥＯＴＵＢＥ
およびＮＵＢＥを比較すると、興味深い。ＥＯＴＵＢＥ
化合物は、その抜群の腫瘍取り込み（第１図）および良
好な腫瘍／Ｉｆ［ｌ液比率（第２図）故に、憂れている
。

Ｃ１生体分布用試料の調製−前局在プロトコール前局在
プロトコール用のインジウム標識のために、キレート試
薬、Ｏ，１ｍＭキレート試薬５μρを、■’　Ｉ　ｎ　
Ｃ（！３　（５０ｍＭ塩酸中）　Ｘｔｔ（ｌおよび０．
２６Ｍクエン酸アンモニウム（ｐＨ６，０）（Ｘ＋５）
μＱと混合した。Ｘは以下の式から計算される： Ｘ＝２００μＣｉ／ＡμＣｉ／μρ ［式中、ＡはＩＩＩＴｎＣ，２３溶液の比活性である］
。

得られた溶液を旋回し、室温で１５分間放置した後、Ｉ
ＩＩ　（ｎ標識をキレート試薬に加え、上述の前混合プ
ロトコールのように、測定した。次いで、少なくとも９
５％のＩＩＩ　Ｉｎがキレート試薬に結合したら、得ら
れた物質を、１ｍｇ／＋＋２正常ヒト血清アルブミンを
加えた等張性重炭酸ナトリウム（Ｉ，３９％、ｗ／ｖ）
中に希釈し、最終容量２Ｍ（Ｉとした。次いで、この物
質（Ｉ００μＱ）を、正常ヒト血清アルブミンを加えた
等強性重炭酸ナトリウムｌＯＯμσ中、ＥＣＨＯ３７，
２の５μｇを２４時間前に注射しておいたマウスの尾静
脈にそれぞれ注射した。

さらに、本発明のハブテン中、４つのハブテン、ＴＵＢ
Ｅ、ＥＯＴＵＢＥ、ＮＵＢＥおよびＰＨＡＴＵＢＥにつ
いて、前記の前局在性の生体分布プロトコールを行った
。これらの結果を以下の第３表、第４表および第５表に
示し、腫瘍／器官比率を第６表から第８表に示す。

第３図〜第５図から分かるように、ＰＨＡＴＵＢＥは、
他の化合物と比較した場合、高度な糞便排泄によって特
徴付られ、このことは前混合プロトコールでの結果と一
致するものである。従って、このハプテンに関する腫瘍
／器官値は例外的であるが（第６図〜第８図）、すべて
の時間について高度に糞便排泄されることは、このハプ
テンが画像物質として理想的であることを示唆するもの
である。

ＥＯＴＵＢＥの生体分布は、すべての時間に於ける高度
な腫瘍取り込み（第３図〜第５図）、および２４時間目
に於ける高度な腫瘍／器官比率（第７図）によって特徴
付けられる。この理由から、このハプテンを、このプロ
トコールで調査された４つの一連の化合物の中では最適
の画像物質として選択した。

第７表は、■ＩＩｎ標識化ＤＢ−１．ＤＢ−ＩＩおよび
ＤＢ−ＩＩＩをＥＣＨＯ３７，２２０μｇとともに組合
わせ、移植Ｔ−３８０腫瘍を有するヌードマウスに注射
した場合の、これら化合物の組織局在性の平均を示すも
のである。２４時間目に於ける見出し語Ｅ％投与ｆｆｉ
／ｇ］は、ＤＢ−１およびＤＢ−ＩＩについては５つの
実験の平均であり、４８時間に於いてはＤＢ−１，ＤＢ
−ｊ！およびＤＢ−ＩＩＩのデータは６つの実験の平均
のデータを表している。各数値について標準偏差を示す
。

第７表 ＤＢ−ＩおよびＤＢ−ＩＩの組織局在性（％投与量／ｇ
） 注入後２４時間 ・・ブテン　　血液　　　！　　　肝　　　腫瘍　？Ｄ
Ｂ−８０，１±１．６　　２．４±０．５７　　３．６
±１．３　　　　７．７±０．８　　２５．４ＤＢ−ｎ
　　　８．０３±２．７　　２．６±０．７０　　３．
６±１．３　　　　５．６±１．３　　４０．９ＤＢ−
ＩＩ［１２，２±３．０３．４±０．９４　３．３±０
．７４　１５．６±２．４　１９．０注入後４８時間 ハプテン　　血顔　　　育　　　肝 ＤＢ−Ｉ　　５．９±１．６　２．８±１．４３．９±
１．５ＤＢ−ＩＩ　　４．４±１．９　１．６±０．６
１　２．５８±１．７ＤＢ−ＩＩＩ　　　８．２±１．
１２．７±０．３６　　３．２±０．９２馴　デ ８．２±１．８５　　３０．０ ６．９±２．９　　５０．１ １７．５±３．１　　　３２．６ ＊　尿／糞便データは％投与量／器官である。

蝉 ７．９ ４．８９ ５．２ 第８表は、１１１Ｉｎ標識化−ＤＢ−ＩＩＩ、　Ｎ、Ｕ
ＢＥおよびＴＵＢＥの組織局在性を示すものである。

前混合プロトコールを使用し、移植Ｔ−３８０腫瘍を有
するヌードマウスに、これらのハプテンおよびＥＣＨＯ
３７，２２０μｇを注射してデータを得た。

第８表 （％投与量／ｇ） ＤＢ−１［［ＮＵＢＥ　　　　　ＴＵＢＥ砥迭　腫瘍　
　Ｕ　腫瘍　　砥液　腫瘍２４時間　　１２．２　１５
．６　　５．８　１１．７　　８．０　　８．５４８時
間　　８．２　１７．５　　３！　　１２．２　　３．
８　　６．５７２時間　　６．６　１８．１　　０．７
　１Ｇ、５　　１．７　　５．３当業者にとっては、本
発明の範囲から逸脱しない限りは、本発明を変化させ、
改変させることができることは明白であろう。従って、
特許請求の範囲の請求項は、これらのすべての改変およ
び変化を包含するものである。

【図面の簡単な説明】

第１図および第２図は、前混合プロトコールに関する２
・４時間と４８時間の時点に於ける本発明誘導ハプテン
の、それぞれ、腫瘍取り込み、および血液に対する腫瘍
の割合を示すグラフであり、第３図〜第５図は、前局在
プロトコールに於ける、誘導ハブテン：、ＥＯＴＵＢＥ
、ＴＵＢＥ、ＮＵＢＥおよびＰＨＡＴＵＢＥに関して、
それぞれ４時間、２４時間および４８時間の時点での生
体分布（％投与量／ｇ器官）を示すグラフであり、第６
図〜第８図は、前局在プロトコールに於ける、誘導ハプ
テン：　ＥＯＴＵＢＥ、ＴＵＢＥ、ＮＵＢＥおよびＰＨ
ＡＴＵＢＥに関して、それぞれ４時間、２４時間および
４８時間の時点での器官に対する腫瘍の割合を示すグラ
フである。 特許出願人　ハイブリチック・インコーホレイテッド 代　理　人　弁理士　青白　葆　（外１名）ＦＩＧ、１ ＝＝２４−時間 二　　すｇ時閉 ＦＩＧ、２ ＝　２＋吟間 二吋呼Ｍ ＦＩＧ、４ 〔＝コ ロｍ 図＝コ 皿■］ ２＋田げ旧　ＥＯＴυＢＥ ン鷹補ＴｔｌＢＥ ｊＩ＋蜂Ｐｎ　ＮＬＩＢＥ Ｊ＋−イ鱈　ＰＨＡＴＵＢＥ ＦＩＧ、６ 四■旧 睦ル／制 千叶１’（ｐｕＡＴｕＢＥ 図面の浄書（内容に変更なし） ＦＩＧ、５ ０＝コ こ３２ 区＝コ ■＝口 ４８時Ｆｊ’ｌ　　Ｅｏｖｕ日Ｅ ４ｇ１１４間ＴＵＢＥ ４！１崎ｐＨＮＵＢＥ ４８時間ＰＨＡＴＵＢＥ ＦＩＧ、７ 田ｍｍｎ　　鐘ψト自刃官 ２十ぎ汁冶ＰＨＡＴＩＪＢＥ 手続補正書 平成 １年特許願第 ２６５２４号 発明の名称 画像物質および治療物質として有用なハブテンの改良補
正をする者 事件との関係

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式（ I ）： ｐ−Ｒ＾１−Ｃ＿８Ｈ＿４−ＣＨ＿２−ＥＤＴＡ−Ｍ（
   I ）［式中、Ｒ＾１は、 ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、
   表等があります▼、 ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、
   表等があります▼、 ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、
   表等があります▼、 または▲数式、化学式、表等があります▼であり、 Ｒ＾２は水素、アミノ基、−ＯＣ■Ｙ）、 −ｐ−フェニル−ＣＨ＿２−Ｙ、分枝鎖状もしくは直鎖
   状の非置換（Ｃ＿１−Ｃ＿３＿０）アルキル基、または
   分枝鎖状もしくは直鎖状の置換（Ｃ＿１−Ｃ＿３＿０）
   アルキル、シクロアルキル、アリールもしくはアリール
   アルキル基 （ここに、置換分は、ヒドロキシ、カルボキシ、＝Ｏ、
   ＝Ｓ、▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化
   学式、表等があります▼、−Ｓ−、 −ＳＲ＾４、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード、アミ
   ノ、ニトロ、−ＳＯ＿３Ｈ、−ＮＨＲ＾３、−ＮＨＲ＾
   ４、−Ｎ（Ｒ＾３）＿２、−ＣＯＮＨＲ＾３、−ＣＯＯ
   Ｒ＾３、−ＳＯ＿４、−ＰＯ＿４、フェニル、ベンジル
   、イミダゾロ、ならびに以下の式で示される基： ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、
   表等があります▼ および▲数式、化学式、表等があります▼、 の中から選ばれる１またはそれ以上の基である）である
   。 ここに、Ｒ＾３は、水素、直鎖状もしくは分枝鎖状（Ｃ
   ＿１−Ｃ＿３＿０）アルキル基、 −ｐ−フェニル−ＣＨ＿２−Ｙ、▲数式、化学式、表等
   があります▼、または非反応性官能基であり、 Ｙは、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、ＤＯＴＡ、ＨＥＴＡ、ＴＲ
   ＩＴＡまたはＴＥＴＡであり、 Ｒ＾４は、Ｈまたは▲数式、化学式、表等があります▼
   であり、 Ｍは金属イオンである。］ で示される化合物、またはその薬学的に許容され得る塩
   。 ２、式（ I ａ）： ｐ−Ｒ＾１−Ｃ＿８Ｈ＿４ＣＨ＿２ＥＤＴＡ−Ｍ（ I
   ａ）［式中、Ｒ＾１は、 ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、
   表等があります▼、 または▲数式、化学式、表等があります▼ （ここに、Ｒ＾２は水素、ＮＨ＿２、分枝鎖状もしくは
   直鎖状の非置換（Ｃ＿１−Ｃ＿３＿０）アルキル基であ
   るか、または−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、＝Ｏ、＝Ｓ、−Ｓ−
   、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＨ＿２、−ＮＯ＿
   ２、−ＳＯ＿３Ｈ、−ＮＨ−Ｒ＾３、−ＣＯＮＨＲ＾３
   、−ＣＯＯＲ＾３、−ＳＯ＿４、−ＰＯ＿４、フェニル
   およびベンジルの中から個別に選ばれる１またはそれ以
   上の置換分によって置換されている分枝鎖状もしくは直
   鎖状（Ｃ＿１−Ｃ＿３＿０）アルキル、シクロアルキル
   、アリールまたはアリールアルキル基である） である。 ここに、Ｒ＾３はＨ、アルキル基または非反応性官能基
   であり、 Ｍは金属イオンである。］ で示される化合物、またはその薬学的に許容され得る塩
   。 ３、式（ I ｂ）： ｐ−Ｒ＾１−Ｃ＿６Ｈ＿４−ＣＨ＿２−ＥＤＴＡ−Ｍ（
   I ｂ）［式中、Ｒ＾１は、 ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼、 ▲数式、化学式、表等があります▼、 ▲数式、化学式、表等があります▼または ▲数式、化学式、表等があります▼であり、 Ｒ＾２は−ｐ−フェニル−ＣＨ＿２−Ｙ、−ＯＣ■Ｙ）
   、または分枝鎖状もしくは直鎖状の置換（Ｃ＿１−Ｃ＿
   ３＿０）アルキル、シクロアルキル、アリールもしくは
   アリールアルキル基 （ここに、置換分は、ヒドロキシ、 ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、
   表等があります▼、−ＳＲ＾４、−ＮＨＲ＾３、−ＮＨ
   Ｒ＾４、−Ｎ（Ｒ＾３）＿２、イミダゾロ、ならびに以
   下の式で示される基： ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、
   表等があります▼ および▲数式、化学式、表等があります▼、 の中から選ばれる１またはそれ以上の基である）である
   。 ここに、Ｒ＾３は−ｐ−フェニル−ＣＨ＿２−Ｙ、また
   は▲数式、化学式、表等があります▼であり、 Ｙは、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、ＤＯＴＡ、ＨＥＴＡ、ＴＲ
   ＩＴＡまたはＴＥＴＡであり、 Ｒ＾４は、Ｈまたは▲数式、化学式、表等があります▼
   であり、 Ｍは金属イオンである。］ で示される化合物、またはその薬学的に許容され得る塩
   。 ４、Ｒ＾１が式：−ＮＨ（Ｃ＝Ｓ）ＮＨ−Ｒ＾２［式中
   、Ｒ＾２は、−Ｈ、−ＣＨ＿２ＣＨ＿３、−（ＣＨ＿２
   ）＿３ＣＨ＿３、−（ＣＨ＿２）＿７ＣＨ＿３、−ＣＨ
   ＿２ＣＨ＿２ＯＨ、−ＣＨ＿２ＣＨ＿２ＮＨ＿２、−Ｃ
   ＿６Ｈ＿５、−ＣＨ＿２Ｃ＿６Ｈ＿５、−４−（Ｃ＿８
   Ｈ＿４）ＣＨ＿２ＣＯ＿２Ｈ、−（ＣＨ＿２）＿２ＣＯ
   ＿２Ｈ、−（ＣＨ＿２）＿３ＣＯ＿２Ｈ、−（ＣＨ＿２
   ）＿４ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ＿３）ＣＯＮＨ＿２、および
   −（ＣＨ＿２）＿２ＮＨＣＯ（ＣＨ＿２）＿３ＣＯ＿２
   Ｈの中から選ばれる基である］ で示される基である請求項２に記載の化合物またはその
   薬学的に許容され得る塩。 ５、Ｒ＾２が式：−ＣＨ＿２ＣＨ＿２ＯＨで示される基
   である請求項４に記載の化合物。 ６、Ｒ＾１が式：−ＮＨ（Ｃ＝Ｓ）ＮＨ−Ｒ＾２［式中
   、Ｒ＾２は−Ｃ＿８Ｈ＿４−ＣＨ＿２−ＤＴＰＡ、−Ｃ
   Ｈ＿２ＣＨ＿２−ＮＨ（Ｃ＝Ｓ）ＮＨ−Ｃ＿８Ｈ＿４−
   ＣＨ＿２ＤＴＰＡ、または−（ＣＨ＿２）＿４−ＮＨ（
   Ｃ＝Ｓ）ＮＨ−Ｃ＿８Ｈ＿４−ＣＨ＿２ＤＴＰＡである
   ］で示される基である請求項３に記載の化合物。 ７、Ｒ＾２が式：−Ｃ＿８Ｈ＿４−ＣＨ＿２−ＤＴＰＡ
   で示される基である請求項６に記載の化合物。 ８、式： Ｘ−ＣＨ＿２ＣＯＮＨ−Ｃ＿８Ｈ＿４ＣＨ＿２−ＥＤＴ
   Ａ−Ｍ［式中、Ｘは−ＮＨ−Ｃ＿６Ｈ＿４−ＣＨ＿２−
   ＤＴＰＡ、−Ｓ（ＣＨ＿２）＿４ＳＣＨ＿２（Ｃ＝Ｏ）
   ＮＨＣ＿６Ｈ＿４ＣＨ＿２ＤＴＰＡ、−ＳＣＨ＿２ＣＨ
   （ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ＿２ＳＣＨ＿２（Ｃ＝Ｏ）Ｎ
   ＨＣ＿６Ｈ＿４ＣＨ＿２ＤＴＰＡ、または−ＮＨＣＨ＿
   ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ＿２ＮＨＣＨ＿２（Ｃ＝Ｏ）ＮＨＣ
   ＿６Ｈ＿４ＣＨ＿２ＤＴＰＡである］で示される請求項
   ３に記載の化合物。 ９、Ｘが−ＮＨ−Ｃ＿６Ｈ＿４−ＣＨ＿２−ＤＴＰＡで
   ある請求項８に記載の化合物。 １０、金属イオンがインジウムまたはイットリウムであ
   る請求項１から請求項９までのいずれかに記載の化合物
   。 １１、金属イオンが＾１＾１＾１Ｉｎまたは＾８＾０Ｙ
   である請求項１０に記載の化合物。 １２、薬学的に許容され得る担体、希釈剤または賦形剤
   と共に、活性成分として請求項１から請求項１１までの
   いずれかに記載の式（ I ）、（ I ａ）または（ I ｂ
   ）で示される化合物またはその薬学的に許容され得る塩
   を含有する診断用または治療用組成物。 １３、請求項１から請求項１１までのいずれかに記載の
   化合物、およびその化合物と結合し得る抗体またはその
   フラグメントを同時に、連続的に、または複合体として
   投与するのに適した、免疫診断物質または免疫治療物質
   の投与用キット。 １４、抗体がモノクローナル抗体またはそのフラグメン
   トである請求項１３に記載のキット。 １５、抗体が２機能性抗体またはそのフラグメントであ
   る請求項１３に記載のキット。 １６、抗体がキメラ抗体またはそのフラグメントである
   請求項１３に記載のキット。 １７、抗体がヒューマナイズド抗体またはそのフラグメ
   ントである請求項１６に記載のキット。 １８、抗体がキメラ２機能性抗体またはそのフラグメン
   トである請求項１６または１７に記載のキット。 １９、抗体が合成架橋抗体またはそのフラグメントであ
   る請求項１５から１８までのいずれかに記載のキット。 ２０、温血動物に、診断学的有効量の請求項１から請求
   項１１までのいずれかに記載の式（ I ）、（ I ａ）ま
   たは（ I ｂ）で示される化合物またはその薬学的に許
   容され得る塩を、抗体と同時に、連続的に、または抗体
   複合体として投与することを特徴とする該温血動物の診
   断方法。 ２１、温血動物に、治療学的有効量の請求項１から請求
   項１１までのいずれかに記載の式（ I ）、（ I ａ）ま
   たは（ I ｂ）で示される化合物またはその薬学的に許
   容され得る塩を、抗体と同時に、連続的に、または抗体
   複合体として投与することを特徴とする該温血動物の治
   療方法。