JPH02163078A - Ｔリンパ球の増殖を抑制できるモノクロナール抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は１９８７年１２月２３日に出願された継続中の
米国特許出願第１３７５４７号の一部継続出願に基づく
ものである。

（産業上の利用分野） 本発明は、細胞に媒介される免疫を抑制することのでき
るモノクロナール抗体の生産及び使用に関し、更に詳細
ｌこは抗原もしくはマイトジェン（分裂促進因子）によ
る刺激の結果として誘導される１１７３球の増殖を抑制
することができるモノクロナール抗体に関する。

（従来の技術） 細胞に媒介される免疫の明確な特徴は、それはＴ細胞機
能のインビトロ測定のために利用されているが、特定の
抗原、非自己抗原もしくはポリクロナールマイトジェン
に対する１１７３球の増殖もしくは分裂応答である。

特別な理論に基づかなくても、一般にＴ細胞の増殖は認
識事象とそれに続く活性化事象を含む２工程のプロセス
であると信じられている。第１のもしくは認識事象（受
容（コンペテンス）とも言われている）はりガント（例
えば、抗原もしくはマイトジェン）がＴ細胞の受容体複
合体（即ち、ａ　／　Ｂ鎖［ＷＴ３１］　、ＣＤ３複合
体［Ｌｅｕ４］もしくはＣＤ２抗原［Ｌｅｕ−５ｂ］）
に結合することにより起こると信じられている。従って
、１１７３球はマイトジェンレクチン（例えば、フィト
ヘムアグルチニン［Ｐ　ＩＩ　Ａ　］　まにはコンカナ
バリン−Ａ［Ｃｏｎ−Ａ］）またはモノクロナール抗体
（例えば、抗−Ｌｅｕ−４または２以上の抗−ＣＤ２抗
体）によって活性化を開始することができる。

一旦リガントが結合すると、細胞はＧ、相になる。認識
事象は、主に１１７３球のヘルパーサフセットによるイ
ンターロイキン−２（または”ＩＬ　−２”という）を
含むリンフ才力インの分泌を引き起こすと信じられてい
る。更に、この事象はＩＬ−２受容体複合体のＴ細胞表
面発現を開始させると信じられている。

第２のもしくは増殖工程（“プロダレッション″とも言
われる）はＩＬ−２がその高親和性受容体に結合するこ
とから開始される。−旦受容体に結合すると、トランス
ダクッション事象が起こり遺伝子活性化を招き、次に該
活性化は細胞をＳ相および増殖に導入する。

ＩＬ−２高親和性受容体は、活性化されｔ；リンパ球の
細胞表面上に発現される少なくとも５５６０ｋＤ（もし
くは’　ｐ５５　”という）の糖タンパク質及び７Ｏ−
７５ｋＤ　（もしくは“ｐ７０”という）のタンパク質
の複合体であると提案されている。それらの構造から両
方とも明らかにＩＬ２リンフォ力インと結合することが
できる；しかじ、２つのタンパク質が複合体として存在
するときのみに、それらは強い親和性でＩＬ−２と結合
し、そして高親和性受容体複合体に結合することのみが
Ｔ細胞活性化を起こすことができる。さらに最近、第３
の鎖が高親和性受容体の形成及び作用において直接的又
は間接的に含まれている可能性があることが示唆されて
いる。

現在、ｐｓｓｇタンパク質またはＣＤ２５抗原を認識す
る数多くの抗体が存在している（例えば、抗−ＴＡＣ，
７Ｇ７／Ｂ６又は抗−ＩＬ−２Ｒ）；しかし、ｐ７０の
構造を認識する抗体に関する報告が確認された。ＩＬ−
２が制限されているときにのみ起こることではあるが、
抗−ＣＤ２５抗体は！Ｌ−２依存性Ｔ細胞増殖の部分的
なブロックを示す。従って、マイトジェン刺激（例えば
、ＰＨＡによる）のような更に抗原刺激に近似した状態
では、抗−ＩＬ−２Ｒのような抗体はＴ！ＩＪＪ胞増殖
をブロックすることにおいて一般に有効ではなく、従っ
て免疫抑制の達成においても有効ではない。同様に、細
胞活性化に部分的に含まれる細胞表面構造に対するモノ
クロナール抗体（もしくは’ＭＡｂｓ”という）（例え
ば、抗−Ｌｅｕ５ｂ）は、次に、細胞がＩＬ−２にさら
されたときはＴ細胞増殖を抑制しない。更に、それらは
ＰＨＡ活性化を部分的に抑制するのみである。それゆえ
に、現在までに利用可能な抗体のいずれもＩＬ−２に導
かれる細胞性免疫をブロックするか又は抑制することは
できない。

細胞に媒介される免疫をブロックするためのこれらの抗
体の欠点は、幾つかの結果を招く。臓器移植において、
例えば、非自己臓器の移植は認識段階として作用する。

増殖をブロックする手段がないならば、拒絶反応が起こ
るであろう。換言すれば、骨髄移植において、レシピエ
ンドの造血系の致命的な放射線照射及びそれに統〈骨髄
移植は移植片対宿主病を起こす移植による宿主組織の拒
絶反応を導くことになる。再度述べると、有効量のブロ
ック剤をレシピエンドに与えることによる増殖のブロッ
クによって、ＧＶＨＤ　（移植片対宿主病）は防ぐこと
できるか、又は少なくともその症状は改善される。

別法として、細胞増殖をブロックする抗体は、Ｉ　Ｌ−
２応答性のリンパ球の監視又は細胞媒介炎症を監視する
ために診断用に使用できる。そのような診断及び治療用
投与は、もしそのモノクロナール抗体がその増殖工程を
ブロックできるならば有効となるであろう。

（発明の構成） 本発明で説明されているモノクロナール抗体、Ｌ１２９
　（クローン　８Ｆ５）はＴ細胞増殖を有効にブロック
し、従ってブロック剤として作用するというユニークな
機能的性質を有している。

Ｌ１２９は、マイトジェン活性化１９２３球上で発現す
る９５ｋＤ構造物に分子特異性を持つＩｇＧ２−＊抗体
である。Ｌ１２９によって認識されるその抗原は正常抹
消血単核細胞（もしくは”　Ｐ　Ｂ　Ｍ　Ｃ”という）
上に弱く発現されているが、次の活性化によって発現が
増加する。９５ｋＤの構造物を認識しそして細胞の増殖
をブロックするその能力は他には存在しないようである
。その特定の理論は分からないが、Ｌ１２９は何等かの
方法によってＩＬ−２高親和性受容体複合体を変化させ
ることによって増殖をブロックすることができる。９５
ｋＤタンパク質が高親和性受容体の一部分であり、そし
てその変化がＩＬ−２が受容体に結合することに基づく
のか又はＭａｂが９５ｋＤ構造物に結合することによっ
てもたらされるカスケード事象の結果であろうとなかろ
うと、いずれにしてもＬ１２９は活性化されたＴ細胞増
殖をブロックする。

モノクロナール抗体はマウス薬剤マーカー付き形質細胞
腫（もしくは′°融合パートナー゛′という、例えば、
５Ｐ１０　　Ａｇ　　１４）をＰ　ＨＡ活性化Ｔリンパ
芽球で免疫されたマウスの脾臓から得られる細胞と融合
させることにより得られる。この融合により得られるハ
イブリドーマを含む上澄液をＰＨＡ芽細脳細胞反応性に
よってスクリーニングした。８Ｆ５クローンが最終的に
選択された。

このクローンから生産されるモノクロナール抗体は上澄
液から回収され、精製することができる。

別法として、それをマウス株に注射することができ、そ
の腹水から精製することができる。試薬としては、それ
は蛍光分子もしくは酵素で標識することができ、又は標
識された第２の抗体もしくは類似の分子によって間接的
に検出できる。免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によっ
て、結合モノクロナール抗体の存在は検出することがで
きる。

同様の抗体を生産するために他の手段を用いることがで
きることが認識されるであろう。例えば、９５ｋＤタン
パク質を保持する他の細胞を免疫原として使用すること
ができ、そして他の種類のものもしくは細胞株を各々免
疫化又は融合パートナ−に使用することができる。別法
として、ハイブリドーマは細胞株の形質転換にエプスタ
インバーウィルスを用いて形成することができる。結局
治療目的のためには、Ｌｌ　２９は１９８４年８月２７
日に出願されＩこモリソン（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ）らのＵ
ＳＳＮ第６４４４７３号または１９８７年３月２６日に
出願されたウィンター（Ｗｉｎｔｅｒ）らのイギリス特
許出願ＧＢ第２１８８６３８号に各々開示されている方
法によってキメラまたはモザイクとして作ることができ
る。

第１図は、Ｐ　Ｉ−Ｉ　Ａ活性化Ｔ細胞におけるＭＡｂ
濃度と３Ｈ−チミジン取り込みのプロットである。

第２図は、抗−ＣＤ３活性化Ｔ細胞におけるＭＡｂ濃度
と３Ｈ−チミジン取り込みのプロン１−である。

第３図は、０．５％ＩＬ−２存在下で抗−ＣＤ３活性化
Ｔ細胞におけるＭＡｂａ度と”Ｈ−チミジン取り込みの
プロットである。

第４図は、Ｉ　Ｌ−２活性化Ｔ細胞におけるＭＡｂ濃度
と３Ｈ−チミジン取り込みのプロントである。

第５図は、ＰＨＡ活性活性化脳細胞するＬＬ２９添加の
時間と３Ｈ−チミジン取り込みのプロットである。

第６図は、７０−サイトメーターに表示される、抗原と
反応性のない’　ｇ　Ｇ　ｚ−ｈ　Ｍ　Ａ　ｂ対照にさ
らした後のヤギ抗−マウスＩｇ−ＦＩＴＣで標識された
Ｔ細胞及びｌμｇのＬ１２９にさらされた後のヤギ抗−
マウスＩｇ−ＦＩＴＣで標識されたＴ細胞の蛍光のヒス
トグラムおよび測定データである。

第７図は、フローサイトメーターに表示される、種々の
抗−ＣＤ２５　ＭＡｂ及びＬ１２９にさらされた後のヤ
ギ抗−マウスＩｇ−ＦＩＴＣで標識されたＴ細胞の蛍光
のヒストグラムおよび測定データである。

第８図は、Ｌ１２９または活性化Ｔ細胞の界面活性剤溶
解物から得られる他の抗体によって免疫沈澱する抗原の
分子特異性を示している、還元状態または非還元状態（
プライムの印で示しＩ；）下での１０％５ＤＳ−ＰＡＧ
Ｅゲルの図であって、Ａは２Ｃ１０であり（非市販品、
Ｔ細胞上の活性化抗原に対する）、ＢはＩＧ３であり（
非市販品、ｐ５５サブユニットに対する）、Ｃは高分子
量の標準であり、Ｄは抗−Ｈ−２ＫＫであり、Ｅは抗−
トランスフェリン受容体であり、Ｆは低分子量の標準で
あり、ＧはＬ１２９であり、ＨはＬ５４であり、及び■
は４Ｄ１０である（非市販品、ｐ５５サブユニットに対
する）。

“ＣＤ　”表示は、調製されたモノクロナール抗体に用
いる“クラスター表示”抗原用の国際的標準規格である
。特に断らない限り、ここで述べられるモノクロナール
抗体は、Ｌ１２９を除いてベクトン・ディキンソン・イ
ムノサイトメトリー・システムズ（Ｂｅｃｔｏｎ　Ｄｉ
ｃｋｉｎｓｏｎ　！ｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅＬｒｙＳｙ
ｓｔＩｓ）より入手できる。

８Ｆ５クローンの単離は次のように行われる。

パルプ／ｃ　（Ｂａ　Ｉ　ｂ／ｃ）　マウスを１０’個
のＰＨＡ活性化ＰＢＭＣで腹腔内に一旦免疫した。

ＰＢＭＣはフィコールーハイバクエ（ＦｉｃｏｌｌＨｙ
ｐｘｑｕｅ）　（ファルマシア（Ｐｂｉｒ＋ａｘｃｉｓ
））上の密度依存遠心分離によってヒト血液から単離さ
れた。

そのマウスは、２０．４２及び６５日目にそれぞれ１０
’　　５Ｘ１０’及び１０’個のＰＨＡ−活性化Ｔリン
パ球芽（６しくはＰＨＡ−活性化ＰＢＭＣ）を静脈注射
して免疫が強化された。マウスは６８日目に殺して脾臓
を取り出した。

免疫されたマウスからの脾臓細胞は不滅形質細胞腫融合
パートナ−細胞株ＳＰ２／０　　Ａｇ　　１４（エム　
シュルマン（１１１，５１１ｎ１ｍｓｎ）らネイチャー
（Ｎａｔｕｒｅ）２７６：２６９　（１９７ｇ））と３
５％ポリエチレングリコール中で融合された。脾臓細胞
の調製及び融合のための同様の方法は以前のアメリカ特
許第４，１７２，１２４号及び第４，１９６．２６５号
に開示されている。マウス−マウス融合は他のげっ歯口
の種（例えばラット−ラット）で行うこともできる。そ
れゆえに、Ｌ１２９の単離はマウス種に限定されない。

融合された細胞は、２０％牛脂児血清（“Ｆｅ２”）及
び１５ｍＭヘペス（Ｈｅｐｅｓ）緩衝液（ギブコ（ＧＩ
ＢＣＯ））を含んでいるヅルベツコ（Ｄｎｌｂｅｃｃｏ
）の修飾イーグル培地（ギブコ（ＧＩＢＣＯ））が入っ
ている９６穴マイクロカルチヤープレート（Ｂ−Ｄ７フ
ルコン（Ｆａｌｃｏｎ））に撒いた。アザセリン−ハイ
ポキサンチン（２μｇ　／　ｍ　１で最終濃度１０−’
Ｍ）が選択培地としてバイブリドを選択的に増殖させる
ために加えられた。インキュベーションは７〜１０日間
、又は目に見えるハイブリッドのコロニーが出現するま
で続けられた。

細胞が増殖したこれらの各人からの上溝液は、最初に陽
性選択としてＰＨＡ−活性化Ｔ細胞を及び陰性選択とし
てＬＢ　　Ｂリンパ系細胞株用いたパンデックス（Ｐａ
ｎｄｅｘ）免疫アッセイ（パンデックス・ラボラトリー
ズ・インク（ＰａｎｄＣｘ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ
Ｉｎｃ、））によってスクリーニングした。５Ｘ１０’
個のＰＨＡ−活性化ＰＢＭＣまたは５Ｘ１０’個のＬＢ
　　Ｂリンパ系細胞を９６穴パンデツクスプレートの各
人に添加した。各人に２５〜５０μａの上澄液を添加し
た。３０分後、細胞は０．１５Ｍリン酸で緩衝された生
理食塩水（Ｐ　Ｂ　Ｓ）で洗浄した。フルオレセインイ
ソチオシアネート（ＦＩＴＣ）と結合したヤギ抗−マウ
スＩｇ抗体を多穴に添加した。免疫アッセイの結果はバ
ンデックス装置を用いて読み取られた。

上澄液が陽性を示したそれらの穴から得られた細胞を２
４穴マイクロカルチヤープレートに再度撒き、選択培地
を入れないで増殖させた。これらの穴から得られた各上
澄液は、上澄液を上記のように活性化Ｔ細胞またはＬＢ
細胞のどちらかを含んでいる穴に添加することによって
再スクリーニングした。ヤギ抗−マウスＩｇ−ＦＩＴＣ
抗体が再度各式に添加された。これらの多穴から得られ
た細胞はＦＡＣ５１１４４０フローサイトメーター（ベ
クトン・ディキンソン・イムノサイトメトリー・システ
ムズ）によるフローサイトメ−ドリーによる分析を行っ
た。

最初に、染色された細胞が前方及び側方散乱光について
調べられた。そしてゲートはリンパ球集団について設定
されている。そして、染色された細胞は蛍光について分
析された。この分析から、８Ｆ５クローンは陽性穴から
単離され、そして次ｉ：　Ｌ　１２９と再命名された。

Ｌ１２９は正常ＰＢＭＣと弱く反応し、活性化Ｔリンパ
球とは強く反応する。それはマクロファージおよび単核
球とは反応しないようである。Ｌ１２９はブタペスト条
約の規定の下にＡＴＣＣに寄託されており、受は入れ番
号ＨＢ−９５７６が与えられている。

更にＬ１２９の特徴ずけが次のように行われた。

最初に、当業者には周知の方法に従って、界面活性剤溶
解物の免疫沈澱物が３５５−メチオニンにより標識され
た活性化Ｔリンパ球から調製された。

免疫沈澱物は１０％ＳＤＳ／ＰＡＧＥによっテ分析され
た、そしてＬ１２９が活性化Ｔ細胞上の９５ｋＤのタン
パク質を認識することが示された。

第８図を参照されたい。

Ｌ１２９はその機能的能力によって更に特徴ずけられる
。一般に、正常ヒトドナーから単離された１　ｘ　１０
１１ＰＢＭＣを、抗原と反応性ある及び反応性のない対
照を含む種々の濃度のＭＡｂｓの存在下でマイクロタイ
タープレートに入っているｌＯ％ＦＣ９を含む２００μ
ＱＲＰＭ１１６４０（ギブコ（ＧＩＢＣＯ））中でイン
キュベーションした。

免疫抑制の割合は、適当なマイトジェンリガンドによる
３日間の活性化に続くイソタイプ対照との比較として３
Ｈ−チミジンの取り込みの減少として測定された。ＤＮ
Ａ合成を測定するために、細胞は採集する前に１８時間
３Ｈ−チミジン（０，４μＣ１１ニユー・イングランド
・ヌクレアー（ＮｅｗＥｎ（ｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ
））にさらした。取り込みは液体シンチレーションカウ
ンターで測定した。

第１図を参照すると、ＰＨＡ　（０，５％）がマイトジ
ェンリガンドとして使用された。ＰＢＭＣをＬｌ　２９
、ＲＥ７８　（２Ａ３クローンと同じエピトープを認識
する非市販品の抗−ＣＤ２５　　ＭＡ　ｂ　ＣＩ　ｇ　
Ｇ　＊、］　）または対照としてＬｅａ　　Ａ−１ＭＡ
ｂ（ｐ７０活性化構造物を認識できる、Ｔセル・サイエ
ンスズ（Ｔ　Ｃｅ１ｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ）から入手で
きる）の存在下で上記のように増殖させた。

２５μｇ　／　ｍ　１の濃度で、ｓＨ−チミジン取り込
みとして測定される細胞増殖の最大抑制がＬ１２９によ
り達成される。これに対して、Ｌｅａ　　Ａ−１及びＲ
Ｅ７８では濃度が５０μｇ／ｍ１以上であっても、細胞
増殖の明確な抑制は起こらなかっｊこ　。

第２図を参照すると、抗−Ｌｅｕ−４がマイトジェンリ
ガンドとして使用された。第２ｂ図において、抗−ＣＤ
２５　　ＭＡｂｓ（７Ｅ１１．Ｌ６１及びＬ６２は市販
されていない）が使用され、Ｉ　ｇＧ＋が反応性のない
対照として使用された。

第２ａ図において、Ｈ−２Ｋｋ（反応性のないＩｇＧ１
．対照）が抗−Ｌｅｕ−５ｂとして使用された。抗−Ｃ
Ｄ２５　　ＭＡｂｓが高濃度の場合、ある程度の阻害が
観察されるが、一方Ｌ１２９は強い阻害を示した。抗−
Ｌｅｕ−５ｂも阻害能力を示したが、このＭＡｂは受容
能をブロックすると考えられており、即ち、増殖工程で
は働かない。

抗−Ｌｅｕ−４のみがマイトジェンリガンドとして使用
されたとき得られる結果と対照的に、ある抗−ＣＤ２５
　　ＭＡｂｓは外因性のＩＬ−２が活性化細胞に添加さ
れたときには３Ｈ−チミジン取り込みによって測定され
る増殖のブロックにおいてかなり有効である。第３図を
参照すると、ＲＥ７８は、Ｌ１２９のように外因性のＩ
Ｌ−２が存在すると抗−Ｌｅｕ−４で活性化されたＴ細
胞の増殖をブロックする。

しかし、全ての抗−ＣＤ−２５ＭＡｂｓではないかこの
効果を示すものがある。第４図を参照すると、Ｉ　Ｘ　
１０’のＰＢＭＣを他の刺激因子が存在しない条件下で
制限的な量である５ユニツト／　ｍ　ｌのＩＬ−２（エ
レクトロヌクレオニックス（Ｅｌｅｃｔｒｏｎｕｃｌｅ
ｏａｉｃｓ））にさらした。ＭＡｂｓを含む他の全ての
パラメーターは第２図で述べたのと同じである。図に示
されているように、Ｌ１２９は比較的低い濃度（即ち、
１．０μｇ／ｍ＋）でＴ細胞の増殖をブロックしている
。一方ここで使用されている特定の抗−ＣＤ２５　　Ｍ
Ａｂｓはブロック効果を殆どあるいは全く示さない。

最後に、Ｌ１２９は活性化の初期に添加すると最も効果
的であると思われる。第５図を参照すると、２５μｇの
Ｌ１２９をＰＨＡ活性活性化脳細胞性化後の種々の時間
に添加した。活性化細胞は同調化されていないけれども
、３Ｈ−チミジンの取り込みによる測定によれば、Ｌ１
２９はＰＨＡの添加後０〜６時間の間に添加された方が
それ以降に添加するよりもより効果的である。更に、こ
の結果は活性化細胞によるＩＬ−２の放出のブロックに
起因するものではないことが示されている。

これに反して、ＰＨＡで活性化された細胞は抗−Ｌｅｕ
−５ｂにさらされたときＩＬ−２の放出の阻害を示す。

これらの機能的アッセイとは別に、更に７０−サイトメ
トリー分析が行われた。第６図を参照すると、ＰＨＡで
活性化されたＰＢＭＣが上記のようにプレートに撒かれ
、種々の量のＬ１２９が添加された。抗原と反応性のな
い１ｇＧ２ａｋＭＡｂが対照として使用された。そして
、ヤギ抗−マウスＩｇ−ＦＩＴＣ抗体が添加された。そ
して、細胞を洗浄し、前方及び側方散乱光によりリンパ
球ゲートを設定した後ＦＡＣ３ｃａｎＴｆｆｌフローサ
イトメーターを用いてスクリーニングした。第６図は、
１ｇＧ２ａｈ対照で染色された細胞及びＬ１２９で染色
された細胞についてのバックグラウンド蛍光を示してい
る。

第７ａ図および第７ｂ図を参照すると、第６図と同様に
抗−ＣＤ２５　　ＭＡｂｓ、抗−ＩＬ−２Ｒ及びＬ５４
（非市販品、Ｉ　ｇＧ、イソタイプ）が使用され、第６
図におけるＬ１２９と比較した。

再度、Ｉ　ｇＧ、がバンクグラウンド蛍光を示すのに使
用された。第６図において、フローサイトメトリー分析
はＬ１２９染色により検出される全集団シフトを示して
いる。第７ａ図および第７ｂ図における抗−ＣＤ２５　
　ＭＡｂｓとともに見られる２つの分布染色はＬ１２９
がＣＤ２５を認識しないことを示唆している。

ゆえに、機能的及び７０−シトメトリー分析の両方とも
、Ｌ１２９はｐ５５　１Ｌ−２分子に関連しない、受容
体を通したＴリンパ球の増殖のブロックによって明らか
な免疫抑制を引き起こすという発見と一致している。結
論として、Ｌ１２９は、研究、診断及び治療の分野での
応用において有益なＭＡｂであり、従ってそれらの分野
で使用できるであろう。

本明細書中に述べられた全ての出版物、特許及び特許出
願は本発明に関係する当業者の水準を表している。全て
の出版物及び特許出願は、個々の出版物又は特許出願が
特定的に又は個々に参照により含められるために示され
たように参照により本明細書に含められる。

特許請求された範囲およびその思想から離れることなく
本発明の範囲内で多くの変更及び修飾が当業者にとって
可能であることは明らかである。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＰＨＡ活性活性化脳細胞けるＭＡｂ濃度と３
Ｈ−チミジン取り込みのプロットである。 第２図は、抗−ＣＤ３活性化Ｔ細胞におけるＭＡｂ濃度
と１Ｈ−チミジン取り込みのブロンドである。 第３図は、０．５％ＩＬ−２存在下で抗−ＣＤゝ３活性
化Ｔ細胞におけるＭＡｂ濃度と３Ｈ−チミジン取り込み
のプロットである。 第４図は、ＩＬ−２活性化Ｔ細胞におけるＭＡｂ濃度と
３Ｈ−チミジン取り込みのプロットである。 第５図は、ＰＨＡ活性活性化脳細胞するＬ１２９添加の
時間と３Ｈ−チミジン取り込みの４０ツトである。 第６図は、フローサイトメーターの画面に表示される、
ヤギ抗−マウスＩｇ−ＦＩＴＣで標識されたＴ細胞の蛍
光のヒストグラム及び測定データの模式図である。 第７図は、フローサイトメーターの画面に表示される、
ヤギ抗−マウスＩｇ−ＦＩＴＣで標識されたＴ細胞の蛍
光のヒストグラム及び測定データの模式図である。 第８図は、Ｌ１２９または活性化Ｔ細胞の界面活性剤溶
解物から得られる他の抗体によって免疫沈澱する抗原の
分子特異性を示している、還元状態または非還元状態（
プライムの印で示した）下での１０％５ＤＳ−ＰＡＧＥ
ゲルの図である。 ＦＩＧ、１ ”ｙ％　Ａ　＜　ｐ−Ｌ３／　ｍｌ　）．００１ ．１ 、０１ ．１ ．００１ ＦＩＧ、４ａ 、０１ う鬼 、１　　　　　　１　　　　　　１０ Ａ（パ／ｒｎ１） ．００１ ．０１ ．１ ＦＩＧ、５ Ｌ１２９の 令ｐ１痔聞 （出→ 図面の浄書（内容に変更なし） ｒＬ２ ＦＩＧ、６ 図面の浄古（内容に変更なし） ■　の ＝　〜 の ば）　　　− ？　　ｎ 図面の浄含１≦内容；こ変更なし） ！２４　ＭεＪ＋３７１１２ １２４：ＭεＪ１３７１２３ Ｓ４６ １１４：門ＥＪ１２７の１２ ｘ１４：１１ＥＪ１２７２の２ １゜ １１件の表示 昭和６３年特ンｌ願第３２５７１１号 ２、発明の名称 Ｔリンパ球の増殖を抑制できるモノクロナール抗体３゜ 補正をする者 ｙｊｆ件との関係　　　特許出願人 住所 名　称　　ベクトン・ディッキンソン・アンド・カンパ
ニ４、代 理 人 住 所 東京都千代［１１区大手町二丁目２番１号５、補正命令
の１−１付 平成１年 ３月２８Ｌ１ ａ邑苫１」） ５、　？＋［ｉ正の対象 （１）明細書第２２頁下６行〜下４行の「第２図・・・
・　である。」を「第２ａ図は、抗−ＣＤ３活性化Ｔ細
胞におけるＭＡｂ濃度（Ｌ１２９、Ｉ　ｇＧ２ａ及びＬ
ｅｕ−５ｂ）と″′Ｈ−チミジン取り込みのプロットで
ある。 第２ｂ図は、抗−ＣＤ３活性化Ｔ細胞におけるＭＡｂ濃
（７Ｅｌｌ、Ｌ６２、Ｌ６１及びＩｇＧ＋）度と３Ｈ−
チミジン取り込みのプロットである。」と補正する。 （２）同第２３頁第１行〜第３行の「第４図　・・・・
　である。」を「第４ａ図は、ＩＬ−２活性化Ｔ細胞に
おけるＭＡｂ濃度（Ｌ　１２９、ＩｇＧ２ａ及びＬｅｕ
−５ｂ）と３Ｈ−チミジン取り込みのプロットである。 第４ｂ図は、ＩＬ−２活性化Ｔ細胞におけるＭＡｂ濃度
（７Ｅ１１、Ｌ６２、Ｌ６１及びＩ　ｇ　Ｇ　＋）と３
Ｈ−チミジン取り込みのプロットである。」と補正する
。 （３）同第２３頁第１１行〜第１４行の「第７図・・・
・　である。」を「第７ａ図は、フローサイトメーター
の画面に表示される、抗−ＩＬ２Ｒ染色後にヤギ抗−マ
ウスＩ　ｇ−Ｆ　ＩＴＣで標識されたＴ細胞の蛍光のヒ
ストグラム及び測定データの模式図である。 第７ｂ図は、フローサイトメーターの画面に表示される
、Ｌ５４染色後にヤギ抗−マウスＩｇ−ＦＩＴＣで標識
されたＴ細胞の蛍光のヒストグラム及び測定データの模
式図である。」と補正する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、骨髄腫株と活性化ヒトＴ細胞により免疫されたマウ
   スから得られる脾臓細胞の融合により形成され、 （ａ）Ｔ細胞増殖をブロックし；及び （ｂ）活性化Ｔリンパ球上の９５ｋＤタンパクと反応す
   る； ＩｇＧモノクロナール抗体を生産するハイブリドーマ。 ２、生産される抗体がＩｇＧ＿２＿■サブクラスである
   、請求項１記載のハイブリドーマ。 ３、マウスの骨髄腫株がＳＰ２／０Ａｇ１ ４であり且つ脾臓細胞がＢａｌｂ／ｃマウスから得られ
   る、請求項１記載のハイブリドーマ。 ４、マウスの骨髄腫株と活性化ヒトＴ細胞により免疫さ
   れたマウスから得られる脾臓細胞の融合により形成され
   るハイブリドーマにより生産される、 （ａ）Ｔ細胞増殖をブロックし；及び （ｂ）活性化Ｔリンパ球上の９５ｋＤタンパクと反応す
   る； ＩｇＧモノクロナール抗体。 ５、生産される抗体がＩｇＧ＿２＿ａサブクラスである
   、請求項４記載のモノクロナール抗体 ６、マウスの骨髄腫株がＳＰ２／０Ａｇ１ ４であり且つ脾臓されるがＢａｌｂ／ｃマウスから得ら
   れる、請求項４記載のモノクロナール抗体。 ７、受託番号ＡＴＣＣＨＢ−９５７６号で寄託されてい
   るハイブリドーマ。 ８、受託番号ＡＴＣＣＨＢ−９５７６号で寄託されてい
   るハイブリドーマによって生産されるモノクロナール抗
   体。