JPH02167300A - 棘皮動物由来の抗腫瘍性物質並びにその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は抗腫瘍性物質並びにその製造法に関し、更に詳
しくは練成動物の生殖巣の水性溶媒抽出物である新規な
抗腫瘍性物質並びにその製造法に関するものである。

天然物質からの非細胞毒性の癌化学療法剤として抗腫瘍
性多糖が１９６４年頃より注目されるようになり、笹か
らのパンフォリン又はサルノコシカケ、シイタケ、シロ
キクラゲ、ウラジロコウヤクタケ、チャヒラタケ等の担
子菌類熱水抽出エキス、細菌類、酵母類、地衣類からの
多糖類等が細胞毒に起因せずに顕著な抗腫瘍性を示すこ
とが報告されている。

本発明者らも非細胞毒性の癌化学療法剤の開発を企画し
て研究を行い、一連の高等植物および微生物からの多糖
類が宿主介在性抗腫瘍性を示すことを発見した。しかし
ながら、それらは抗癌スペクトルが狭く、臨床的利用に
は限界があるので、より広い抗癌スペクトルを有し、か
つ強力な非細胞毒性抗腫瘍剤を求めて検索し、対象とし
て海洋生物に注目して研究した結果、軟体動物から得ら
れる高分子画分が抗腫瘍性を有することを確かめ、先に
特許出願したく特開昭５２−１２２６１２号〉。

本発明者らはさらに海洋生物の抗腫瘍性物質について研
究した結果、練成動物の生殖巣から得られる高分子画分
はさらに優れた抗腫瘍性を有することを見出し、本発明
を完成した。

従って、本発明は、練成動物の生殖巣から得られる新規
な抗腫瘍性物質並びにその製造法を提供するものである
。

本発明の抗腫瘍性物質は、例えば練成動物の生殖巣の微
細化物を水性溶媒で抽出し、この抽出液を限外濾過、ゲ
ル濾過、透析、有機溶媒沈澱、イオン交換樹脂処理、塩
析及び電気泳動からなる群から選ばれた一つ以上の処理
に付して分子量１０、０００以上の両分を採取すること
により製造される。

練成動物には、二ホンウミシダ（Ｃｏｍａｎｔｈｕｓｊ
ａｐｏｎｉｃａ）等が属する有柄類、ヒトデ（Ａｓｔｅ
ｒｉａｓａｍｕｒｅｎｓｉｓ）、クモヒトデ（Ｏｐｈｉ
ｏｐｌｏｃｕｓ」ａρｏｎｉｃｕｓ）等が属する星形類
、ムラサキウニ（Ａｎｔｈｏｃｉｄａｒｉｓ　ｃｒａｓ
ｓｉｐｓｉｎａ）、マナマコ（Ｓｔｉｃｈｏｐｕｓ　ｊ
ａｐｏｎｉｃｕｓ）等が属するウリ型類の３亜門があり
、本発明では、当該物質を含むものは何れをも原料とし
て使用できるが、就中ムラサキウニが特に好ましい。

これらの練成動物のうち、ウニ類、ナマコ類は食用に供
されているが、特にウニ類はその生殖巣のみが、生食或
は加工用として利用され、生殖巣を採取した残りの殻（
ランタンを含む）および内臓は廃棄されるか、すいぜい
磯釣り等の１！（コマセ）として利用されているにすぎ
ない。本発明の物質は、ウニの生殖巣に含有される。

本発明により、練成動物から抗腫瘍性物質を得るには、
まず練成動物の生殖巣をワーリング・ブレンダー、超音
波処理等によって破砕して微細化物とする。

次いでこの微細化物を水性溶媒で抽出する。水性溶媒と
しては、水、各種塩類溶液、あるいは低級アルコール、
アセトン、ジオキサン等の有機溶媒と水との混合溶媒が
使用される。抽出は通常低温ないし室温で行われる。抽
出液は遠心分離、濾過等によって非水溶性区分と分離し
た後、限外濾過、ゲル濾過、透析等によって脱塩し、必
要があれば限外濾過、減圧ａｗ３等によって濃縮する。

上記のごとくして得られた抽出物はさらに分子量分画し
て分子ｆｆｉ　１０．０００以上の画分を採取する。

その方法としては、例えば超遠心分離、限外濾過、ゲル
濾過、イオン交換体処理、透析、塩析、溶媒沈殿、電気
泳動なと高分子複合蛋白質類の分画に使用される方法を
使用することができる。

上記の方法により練成動物の生殖巣から水性溶液によっ
て抽出され、分画、精魁されたものは溶液状態あるいは
乾燥状態に調整し、保存することができる。

斯くして得られる本発明の抗腫瘍性物質は次のような物
性を有する。

■分子量（分子篩による） ｔｏ、　ｏｏｏ以上 ■塩基性、酸性、中性の区別 弱酸性（ｐＨ５〜６） ■物質の色 淡黄色 ■比旋光度 〔α）　二０：　ｏ　　（Ｃ＝０．１％、　０９ＩＮ　
Ｎａ０）ｌ）■元素分析値 炭素：約３０〜５３％、水素：約６〜８％、窒素：約３
〜１２％ ■蛋白質、糖含量 蛋白質：約２０〜７８％、糖：約５〜４４％■赤外線吸
収スペクトル ３４００〜３２００ｃｍ−’、２９４０〜２９２０ｃｍ
−’、１６５０〜１６６０ｃｍ−’および１５４０〜１
５３０ｃｍ　−’に特性吸収を有する。

本発明抗腫瘍性物質は、後記実施例に示す如く、その一
定量を、ＩＣＲ系マウスに移植したザルコーマ１８０腫
瘍に対して局所注射したところ、平均腫瘍抑制率は４３
．４％（最高６５．１％）という驚くべき抗腫瘍性を示
した。

上記のように本発明の物質はいずれも温血動物、たとえ
ば人、家畜、家禽、犬、猫、ウサギ、ラット、マウスな
どの各種の腫瘍特に治療の困難性が指摘されている固型
腫瘍に対してすぐれた抑制作用を示す。

マウスに移植したザルコーマ１８０［ｒ瘍、５Ｎ−３６
腫瘍、ＭＭ−４６腫瘍、ＣＣＭ腺癌、ＮＴＦＩＢ網細胞
肉腫細胞肉腫リッヒ腫瘍などの発育は、本物質を腫瘍細
胞移植前、移植後あるいは移植と同時に腫瘍内、腹腔内
、静脈内もしくは皮下に、あるいは経口的に１回もしく
は繰り返して、１回当りの投与量が約１〜１．　ＱＯＯ
ｍｇ　／　ｋｇとなるように投与することにより顕著に
抑制された。

本物質の毒性はきわめて低く、たとえば急性毒性試験に
おいてマウスあるいはラットに経口投与および腹腔内投
与した時のＬＤ、。値はそれぞれ５ｇ／ｋｇ以上、２ｇ
／ｋｇ以上であり、人に対しても安全に反復投与するこ
とができる。

投与方法としては腫瘍治療における一般的な方法を適用
できる。それは腫瘍内、皮下、静脈内もしくは必要に応
じて筋肉内への注射、経口投与、直腸内への投与および
外用剤として塗布、点滴などが可能である。投与量およ
び投与スケジュールは患者および腫瘍の種類、症状など
を勘案して適宜選択でき、一般には一回約０．２〜２．
０００ｍｇ　／　ｋｇ体重を１日１〜６回投与するのが
好ましい。特に注射剤の場合、１日当り１〜２．０００
ｍｇ／　ｋｇ程度、好ましくは３〜５００ｍｇ／ｋｇ程
度がよい。

本物質は他の抗腫瘍剤と併用することもできる。

免疫学的効果の増強をもたらすような併用は特に効果的
である。

本発明の抗腫瘍物質は、上述の如くそれ自体医薬品とし
て使用できるが、更にこれを分画して使用することもで
きる。

次に実施例を挙げて説明する。

実施例１ キタムラサキウニの生殖巣８００ｇ　（湿重量）を集め
、これに０℃の生理食塩水１０倍量を加え、冷却しつつ
ワーリング・ブレンダーにより４分間攪拌してから１分
間攪拌を中止し、さらに４分間攪拌して抽出を行なった
。抽出液を冷却遠心分離機により１６．０ＯＯＧ　（０
℃）で２０分間遠心分離して得た上清液を、グイアフロ
−（ＤＩ＾ＦＬＯ）　Ｐ　Ｍ　−１０により限外濾過し
て濃縮し、濾過されなかった分子ｆｆｉ　１０．０００
以上の区分を凍結乾燥し、１２６．２ｇの粉末（ＳＵ−
３００）を得た。この物質の物理化学的性質は下記の如
くである。

（１）元素分析値 炭素：５１，７７％、水素二ア、１２％、窒素：５．４
４％（２）分子量（分子篩による） １０、０００以上 （３）旋光度 Ｃａ〕二’：　０　（Ｃ＝Ｑ、１％、０．１Ｎ　Ｎａ０
Ｈ）（４）紫外線吸収スペクトル 第１図参照 （５）赤外線吸収スペクトル 第２図参照 （６）酸性、アルカリ性、中性の区別 弱酸性（ｐＨ５〜６） （７）物質の色 淡黄色 （８）蛋白質、糖含量 蛋白質：４３．５％、糖：４３．３％ 実施例２ キタムラサキウニからの生殖巣８００ｇ（ｆｆ１重量〉
を集め、これに０℃の生理食塩水工０倍量を加え、氷冷
しつつワーリング・ブレンダーにより４分間攪拌してか
ら１分間攪拌を中止し、さらに４分間攪拌して抽出を行
なった。

抽出液を冷却式遠心分離機により１６．ＱＯＯＧ　（０
℃）で２０分間遠心分離して得た上ａ液を、ダイアフロ
ーＰＭ−１０により限外濾過して濃縮し、濾過されなか
った分子ｆ！　１０．０００以上の区分を凍結乾燥して
５Ｕ−３００の粉末１２６．２ｇを得た。

この粉末８ｇを少量の０．ＯＩＭＩＪン酸緩衝液（ｐＨ
７，５）に溶解し、同じ溶液で緩衝化した７００ｒｎ１
のＤＢＡｔ！セファローズ（ＳＢＰＩＩＡＲＯ３［りＣ
Ｌ　−６Ｂ　（ファルマシアジャパンＫＷ製）を充填し
たカラム（直径５ｃｍ、長さ３５ｃｍ）に吸着させ、次
いで０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）で溶出され
る両分を分取し、コレをＶＩＳＫＩＮＧ　ＣＯＭＰＡＮ
ＹａｌシームＬｚス（＝ルｏ　−スチューブを用い、蒸
留水（４℃）に対して４８時間透析してから凍結乾燥し
５．２ｇの乾燥粉末（ＳＵ３１０と称す）を得る。この
物質の物理化学的性質および生物化学的性質は下記の如
くである。

（１）元素分析値 炭素：５２．２０％、水素二ア、２９％、窒素：３．５
７％（２）分子量（分子篩による） １０、０００以上 （３）旋光度 Ｃａ〕ｏ’　：　０　　（Ｃ＝０．１％、　Ｏ，ＩＮ　
Ｎａ０Ｈ）（４）紫外線吸収スペクトル 特異吸収なし く５）赤外線吸収スペクトル 第３図参照 （６）蛋白質、糖含量 蛋白質：２１．０％、糖：４３．６％ （７）物質の色 淡黄色 （８）抗腫瘍活性 実施例３参照 画分５Ｕ−３１０を溶出した後、０．０７Ｍ　ＮａＣｊ
２を含む同緩衝液で溶出せる区分を分取し、上記と同様
な処理により０．２ｇの乾燥粉末（ＳＵ−３２０と称す
）を得る。この物質の物理化学的性質および生物化学的
性質は下記の如くである。

（１）元素分析値 炭素：３０，９９％、水素：６．２１％、窒素＋８．２
８％〔２）分子量（分子篩による） １０、０００以上 （３）旋光度 ［１１２１：”：　０　（Ｃ＝０．１％、　０．１Ｎ　
Ｎａ１ｌ（）（４）紫外線吸収スペクトル λ　二：、””　：　　２　４　５　、　　２　８　５
　　ｎｍ（ｓｈ）（５）赤外′ａ＠収スペクトル 第４図参照 （６）蛋白質、糖含量 蛋白質：２Ｂ、５％、糖：５．５％ （７）物質の色 淡黄色 （８）抗腫瘍活性 実施例３参照 画分５Ｕ−３２０を溶出した後、ＯＪ５Ｍ　ＮａＣｊ！
を含む同緩衝液で溶出せる画分を分取し、上記と同様な
処理により１．１ｇの乾燥粉末（ＳＵ−３３０と称す）
を得る。この物質の物理化学的性質および生物化学的性
質は下記の如くである。

（１）元素分析値 炭素：４７．０１％、水素：６．５９％、窒素：１１，
７９％ （２）分子量（分子篩による） １０、０００以上 （３）旋光度 ［α〕：ｏ、　Ｏ（Ｃ＝０．１％、Ｑ、１ＮＮａ叶）（
４）紫外線吸収スペクトル λ　二Ｈ，）ＩａＯＨ：　　２　８　２．　　２　８　
９Ｈｍ（５）赤外線吸収スペクトル 第５図参照 （６）蛋白質、糖含量 蛋白質ニア７．９％、糖：１Ｂ、３％ （７）物質の色 淡黄色 （８）抗腫瘍活性 実施例ト３参照 画分５Ｏ−３３０を溶出した後、ＬＭ　Ｎａ（ｊ！を含
む同緩衝液で溶出せる画分を分取し、上記と同様な処理
により０．０８ｇの乾燥粉末（ＳＵ−３４０と称す）を
得る。この物質の物理化学的性質および生物化学的性質
は下記の如くである。

〔１）分子量（分子篩による） １０、０００以上 （２）旋光度 Ｃα１ｇ０：　０　　（Ｃ＝０．１％、　Ｏ，ＩＮ　Ｎ
ａＯＨ）（３）紫外線吸収スペクトル λ号、）ＩａＯＨ、２６１ｎｍ （４〕赤外線吸収スペクトル 第６図参照 （５）蛋白質、糖含量 蛋白質：５．０％以下、糖：５．０％ （６）物質の色 淡黄色 （７）抗腫瘍活性 実施例３参照 実施例３ 体重約２３ｇのＩＣＲ系マウスの右鼠径部皮下に２Ｘ１
０’個のザルコーマ１８０腫瘍細胞を移植し、移植後４
．６．８日目に１日１回、３日間実施例１および実施例
４で得た画分５Ｕ−３１０，５Ｕ−３２０，５Ｕ−３３
０，５Ｕ−３４０を腫瘍内に投与した。移植後３５日目
の腫瘍結節を摘出してその重量を測定し、無投与対照群
のそれと比較して腫瘍阻止率を算出した。

なお試料は注射用蒸留水に懸濁もしくは溶解して投与し
た。

各検体の腫瘍阻止率を第１表に示す。

以下余白 第１表 実施例４ 直接細胞毒性の検討は、マウス由来Ｓ−１８０肉腫細胞
培養系（細胞数３Ｘ１０’）に各試料を加え４０時間後
の殺細胞能を算出したがｉｎ　ｖｉｖ。

において抗腫瘍性を示した両分はいずれも１ｎｖｉｔｒ
ｏにおいてＳ−１８０肉腫細胞に対して０．１■／ｍｊ
’の濃度でも平均３０％程度の弱い細胞増殖抑制効果を
示したにすぎなかった。

注１） 阻止率（％） 対照区腫瘍部平均重量 ×１００ ４、

【図面の簡単な説明】

第１図は５Ｕ−３００の紫外線吸収スペク）Ｊべ第２図
１ｔｓＵ−３００，第３図１ｔｓＵ−３１０゜第４図は
５ｔ−３２０Ｓ第５図１ｔｓＵ−３３０゜第６図は５Ｕ
−３４０の各赤外線吸収スペクトルを示す。 以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、棘皮動物の生殖巣の水性溶媒抽出物で、次の物性、 （１）分子量（分子篩による） １０，０００以上 （２）塩基性、酸性、中性の区別 弱酸性（ｐＨ５〜６） （３）物質の色 淡黄色 （４）比旋光度 〔α〕＿Ｄ＾２＾０：０（Ｃ＝０．１％、０．１ＮＮａ
   ＯＨ）（５）元素分析値 炭素：約３０〜５３％、水素：約６〜８％、窒素：約３
   〜１２％ （６）蛋白質、糖含量 蛋白質：約２０〜７８％、糖：約５〜４４％（７）赤外
   線吸収スペクトル ３４００〜３２００ｃｍ＾−＾１、２９４０〜２９２０
   ｃｍ＾−＾１、１６５０〜１６６０ｃｍ＾−＾１および
   １５４０〜１５３０ｃｍ＾−＾１に特性吸収を有する。 を有する抗腫瘍性物質。 ２、棘皮動物の生殖巣の微細化物を水性溶媒で抽出し、
   この抽出液を限外濾過、ゲル濾過、透析、有機溶媒沈澱
   、イオン交換樹脂処理、塩析、電気泳動からなる群から
   選ばれた一つ以上の処理に付して分子量１０，０００以
   上の画分を採取することを特徴とする抗腫瘍性物質の製
   造法。