JPH0216971A - 植物の組織培養物の製造方法 - Google Patents
植物の組織培養物の製造方法Info
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- JPH0216971A JPH0216971A JP63165204A JP16520488A JPH0216971A JP H0216971 A JPH0216971 A JP H0216971A JP 63165204 A JP63165204 A JP 63165204A JP 16520488 A JP16520488 A JP 16520488A JP H0216971 A JPH0216971 A JP H0216971A
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Landscapes
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は植物の組織培養に係り、特に木本植物としてく
わ科イチジク属の観葉植物の細胞を培養し、その組織培
養物を製造するに好適な細胞培養法に関する。
わ科イチジク属の観葉植物の細胞を培養し、その組織培
養物を製造するに好適な細胞培養法に関する。
植物の生殖細胞を用いず、体細胞を培養し開花時期に係
りなく植物体を再生する方法として、組織培養法がある
。組織培養に番よ（１）茎頂点等の器官を培養し植物体
を再生する方法と（２）植物細胞をプロトプラストを呼
ばれる裸細胞にし、この１つの細胞から細胞分裂をくり
返し細胞群をつくり、植物体を再生する方法がある。（
２）の法は同種の遺伝子をもつ細胞を大量に生産できる
利点があり、また遺伝子の導入あるいは細胞融合による
優良品種を産生ずる手法において、後者のプロトプラス
トから植物体を再生する培養方法の確立は重要である。
りなく植物体を再生する方法として、組織培養法がある
。組織培養に番よ（１）茎頂点等の器官を培養し植物体
を再生する方法と（２）植物細胞をプロトプラストを呼
ばれる裸細胞にし、この１つの細胞から細胞分裂をくり
返し細胞群をつくり、植物体を再生する方法がある。（
２）の法は同種の遺伝子をもつ細胞を大量に生産できる
利点があり、また遺伝子の導入あるいは細胞融合による
優良品種を産生ずる手法において、後者のプロトプラス
トから植物体を再生する培養方法の確立は重要である。
これまで主としてプロトプラストから植物体を再生する
系が確立されている植物種としては、タバコ（Ｓｋｏｏ
ｇ、 Ｆ、 、 Ｍ目１ｅｒ、ｃ、ｏ ：Ｓｙｍｐ、Ｅ
ｘｐ、 Ｂｉｏｌ、、１１＋ｐｐＨ８〜１３Ｌ （１９
５７）） 、馬鈴薯（富田他：第１０回植物組織培養シ
ンポジウム講演要旨集、Ｐ２Ｏ３（１９８７）） 、
イネ（増田他：第１０回植物組織培養シンポジウム講演
要旨集、 ｐ、 ２３３ （１９８７））。
系が確立されている植物種としては、タバコ（Ｓｋｏｏ
ｇ、 Ｆ、 、 Ｍ目１ｅｒ、ｃ、ｏ ：Ｓｙｍｐ、Ｅ
ｘｐ、 Ｂｉｏｌ、、１１＋ｐｐＨ８〜１３Ｌ （１９
５７）） 、馬鈴薯（富田他：第１０回植物組織培養シ
ンポジウム講演要旨集、Ｐ２Ｏ３（１９８７）） 、
イネ（増田他：第１０回植物組織培養シンポジウム講演
要旨集、 ｐ、 ２３３ （１９８７））。
キク（高山著：図解バイオテクノロジー、第■章３節、
Ｐ、１８４）など草本植物に限られている。
Ｐ、１８４）など草本植物に限られている。
ベンジャミンにおいては、新芽に存在する茎頂点を利用
した組織培養法（古川他編：図解組織培養入門、Ｐ、９
２）はあるが、プロトプラストがら植物体を再生する培
養例はない。
した組織培養法（古川他編：図解組織培養入門、Ｐ、９
２）はあるが、プロトプラストがら植物体を再生する培
養例はない。
プロトプラストの培養方法としては、葉等の植物組織を
保護細胞としてプロトプラストと一緒に培養する保護培
養（ナース培養）（細胞工学：Ｖｏｌ、３Ｎ０．６ Ｐ
５１０ （１９８４））等があるが、木本観葉植物細胞
を培養する方法は確立されていない。
保護細胞としてプロトプラストと一緒に培養する保護培
養（ナース培養）（細胞工学：Ｖｏｌ、３Ｎ０．６ Ｐ
５１０ （１９８４））等があるが、木本観葉植物細胞
を培養する方法は確立されていない。
木本観葉植物のベンジャミン及びガジュマルの体細胞、
例えばベンジャミン根茎細胞プロトプラスト及びガジュ
マル葉柄細胞プロトプラストがら組織培養物を製造する
方法又は植物体再生について、上記従来技術では木本観
葉植物のプロトプラストの細胞分裂を促進する植物成長
ホルモン種及び濃度あるいは数種類の植物成長ホルモン
の添加による相乗効果等の培養条件に関する配慮はされ
ていない。
例えばベンジャミン根茎細胞プロトプラスト及びガジュ
マル葉柄細胞プロトプラストがら組織培養物を製造する
方法又は植物体再生について、上記従来技術では木本観
葉植物のプロトプラストの細胞分裂を促進する植物成長
ホルモン種及び濃度あるいは数種類の植物成長ホルモン
の添加による相乗効果等の培養条件に関する配慮はされ
ていない。
本発明は前記木本観葉植物の体細胞を用いて植物体再生
に重要な組織培養物を得る方法を提供することにある。
に重要な組織培養物を得る方法を提供することにある。
上記した目的は、木本観葉植物の体細胞を細胞分裂させ
、コロニー、カルス等の細胞群を得るのに好適な培養液
組成、主として植物成長ホルモン種、濃度及び相乗的な
効果が期待できるホルモンの組合わせを決定することに
より達成できる。
、コロニー、カルス等の細胞群を得るのに好適な培養液
組成、主として植物成長ホルモン種、濃度及び相乗的な
効果が期待できるホルモンの組合わせを決定することに
より達成できる。
本発明、は、このような植物成長ホルモンの組合せとし
て、ジクロロフェノキシ酢酸および／又は１−ナフタレ
ン酢酸をＩ ９１１ｍｌ以下とゼアチンを１ｐｐｍ以下
からなる植物成長ホルモンを選定し、プロトプラストを
この植物成長ホルモンを含む培養液に着床し、組織培養
物を製造するものである。
て、ジクロロフェノキシ酢酸および／又は１−ナフタレ
ン酢酸をＩ ９１１ｍｌ以下とゼアチンを１ｐｐｍ以下
からなる植物成長ホルモンを選定し、プロトプラストを
この植物成長ホルモンを含む培養液に着床し、組織培養
物を製造するものである。
本発明において、木本観葉植物の体細胞をプロトプラス
ト化するに際して、木本観葉植物として、ガジュマル、
ベンジャミン等を使用する場合、ガジュマルの葉柄細胞
、ベンジャミンの根茎細胞を利用することが望ましい。
ト化するに際して、木本観葉植物として、ガジュマル、
ベンジャミン等を使用する場合、ガジュマルの葉柄細胞
、ベンジャミンの根茎細胞を利用することが望ましい。
このプロトプラストは、例えば、無機塩、ビタミン類を
含む培地をベースとし、この培地に上記した植物成長ホ
ルモンが添加された培養液に着床する。
含む培地をベースとし、この培地に上記した植物成長ホ
ルモンが添加された培養液に着床する。
植物成長ホルモンとしては、オーキシン系のジクロロフ
ェノキシ酢酸若しくは１−ナフタレン酢酸の各々単独で
ｉ ｐｐｍ以下、又はジクロロフェノキシ酢酸及び１−
ナフタレン酢酸の合計量で１９９ｍ以下と、サイトカイ
ニン系のゼアチンを１ ｐｐｍ以下からなる植物成長ホ
ルモンが使用される。
ェノキシ酢酸若しくは１−ナフタレン酢酸の各々単独で
ｉ ｐｐｍ以下、又はジクロロフェノキシ酢酸及び１−
ナフタレン酢酸の合計量で１９９ｍ以下と、サイトカイ
ニン系のゼアチンを１ ｐｐｍ以下からなる植物成長ホ
ルモンが使用される。
オーキシン系の植物成長ホルモンでは、特にジクロロフ
ェノキシ酢酸若しくは１−ナフタレン酢酸の各々単独で
Ｉ ｐｐｔａ 、又はジクロロフェノキシ酢酸及び１−
ナフタレン酢酸の合計量で１１）ｐＨが有効である。ま
た、サイトカイニン系の植物成長ホルモンであるゼアチ
ンは０．５ｐｐｍ〜１ｐｐＩＩｌが有効である。
ェノキシ酢酸若しくは１−ナフタレン酢酸の各々単独で
Ｉ ｐｐｔａ 、又はジクロロフェノキシ酢酸及び１−
ナフタレン酢酸の合計量で１１）ｐＨが有効である。ま
た、サイトカイニン系の植物成長ホルモンであるゼアチ
ンは０．５ｐｐｍ〜１ｐｐＩＩｌが有効である。
上記した培養液に対して、着床するプロトプラストは、
細胞濃度として１０−１０”個／Ｉｄとすることが望ま
しい。また、培養条件として、雰囲気温度は２０°Ｃ付
近がよく、さらに暗黒下で培養することが望ましい。
細胞濃度として１０−１０”個／Ｉｄとすることが望ま
しい。また、培養条件として、雰囲気温度は２０°Ｃ付
近がよく、さらに暗黒下で培養することが望ましい。
上記した植物成長ホルモンを含む培養液に、ベンジャミ
ン、ガジュマル等の木本観葉植物のプロトプラストを着
床させ、培養すると、プロトプラストが失活することな
く培養期間約３０日で細胞が１次分裂する。すなわち前
記の植物成長ホルモンの組合せによる相乗的な作用によ
り木本観葉植物のプロトプラストが１次分裂し、コロニ
ー、カルス等の組織培養物が製造できる。
ン、ガジュマル等の木本観葉植物のプロトプラストを着
床させ、培養すると、プロトプラストが失活することな
く培養期間約３０日で細胞が１次分裂する。すなわち前
記の植物成長ホルモンの組合せによる相乗的な作用によ
り木本観葉植物のプロトプラストが１次分裂し、コロニ
ー、カルス等の組織培養物が製造できる。
実施例１
ガジュマルの葉柄細胞プロトプラストを１０〜１０２個
／ｄの細胞濃度に調整し、第１表に示すＭｕｒａｓｈｉ
ｇｅ−３ｋｏｏｇ培地の無機塩及びビタミンの濃度を１
／２にした培養液をベースに第２表に示す植物成長ホル
モンの種類及び濃度を変化させ、培養液を調整した。
／ｄの細胞濃度に調整し、第１表に示すＭｕｒａｓｈｉ
ｇｅ−３ｋｏｏｇ培地の無機塩及びビタミンの濃度を１
／２にした培養液をベースに第２表に示す植物成長ホル
モンの種類及び濃度を変化させ、培養液を調整した。
第１表
これらの培養液の中、ゼアチンを１ ｐｐｍ及びジクロ
ロフェノキシ酢酸（以下、単に２，４Ｄと称する）を１
ｐｐＩ１１添加した培地（Ｎ０．５）、ゼアチンをＱ、
５ｐｐｍ及び２，４ＤをＩ ｐｐｍ添加した培地（Ｎ０
．６）、ゼアチンを０．５ｐｐｍ及び１−ナフタレン酢
酸（以下、単にＮＡＡと称する）を１ｐｐＩ１１添加し
た培地（Ｎ０．１０）においてそれぞれ培養を行った。
ロフェノキシ酢酸（以下、単に２，４Ｄと称する）を１
ｐｐＩ１１添加した培地（Ｎ０．５）、ゼアチンをＱ、
５ｐｐｍ及び２，４ＤをＩ ｐｐｍ添加した培地（Ｎ０
．６）、ゼアチンを０．５ｐｐｍ及び１−ナフタレン酢
酸（以下、単にＮＡＡと称する）を１ｐｐＩ１１添加し
た培地（Ｎ０．１０）においてそれぞれ培養を行った。
培養開始後約３０日でプロトプラストが１次分裂した。
第１図に前記Ｎ０．６の培養液で培養したプロトプラス
トの１次分裂の過程を示す。第１図において、（Ａ）は
培養開始、（Ｂ）は培養開始３日後、（Ｃ）は培養開始
７日後、（Ｄ）は培養開始１６日後、（Ｅ）は培養開始
３０日後の顕微鏡写真を基に作成した図である。
トの１次分裂の過程を示す。第１図において、（Ａ）は
培養開始、（Ｂ）は培養開始３日後、（Ｃ）は培養開始
７日後、（Ｄ）は培養開始１６日後、（Ｅ）は培養開始
３０日後の顕微鏡写真を基に作成した図である。
第１図に示すようにガジユマル葉柄細胞プロトプラスト
は培養開始後３日で内部に変化が観察され、培養開始後
、７日、１６日後と次第に新しい細胞は成長し、３０日
後において、はぼ元の細胞と同程度の大きさになった。
は培養開始後３日で内部に変化が観察され、培養開始後
、７日、１６日後と次第に新しい細胞は成長し、３０日
後において、はぼ元の細胞と同程度の大きさになった。
実施例２
ベンジャミン根茎細胞プロトプラストを実施例１と同様
に第１表の培養液の濃度を１／２にした培養液をベース
に第２表に示す植物成長ホルモン組成で培養した。その
結果、ゼアチンを０．５ ｐｐｍ及び２．４ＤをＩ Ｉ
）ｐｌｆｉ添加したＮ００６の培地において新しい細胞
の成長が観察された。
に第１表の培養液の濃度を１／２にした培養液をベース
に第２表に示す植物成長ホルモン組成で培養した。その
結果、ゼアチンを０．５ ｐｐｍ及び２．４ＤをＩ Ｉ
）ｐｌｆｉ添加したＮ００６の培地において新しい細胞
の成長が観察された。
第２図に前記Ｎ０．６の培養液で培養したベンジャミン
根茎細胞プロトプラストにおいて新しい細胞が成長して
いく過程を示す。第２図において、（Ｆ）は培養開始、
（Ｇ）は培養開始１５日後、（Ｈ）は培養開始２３日後
の顕微鏡写真を基に作成した図である。
根茎細胞プロトプラストにおいて新しい細胞が成長して
いく過程を示す。第２図において、（Ｆ）は培養開始、
（Ｇ）は培養開始１５日後、（Ｈ）は培養開始２３日後
の顕微鏡写真を基に作成した図である。
第２図に示すようにベンジャミン根茎細胞プロトプラス
トは培養開始後１５日、２３日と新しい細胞は大きくな
っており、細胞の成長が確認された。
トは培養開始後１５日、２３日と新しい細胞は大きくな
っており、細胞の成長が確認された。
比較例１
ガジユマル葉柄細胞プロトプラストを第２表に示す２．
４Ｄを１１ｊｐＨ１添加した培地（Ｎ０．１）、１ 〇
− ２，４Ｄを１ｐｐｍ、ベンジルアデニンＣ以下、単にＢ
Ａと称する）を２ ｐｐｍ及びカイネチンを２９ｐｍ添
加した培地（Ｎ０．２）、２．４Ｄを１ ｐｐｍＢＡを
０．５ｐｐｍ及びカイネチンを０．５ｐｐｍ添加した培
地（Ｎ０．３）、２．４ＤをＩ ＰＩ）Ｉｎ及びＮＡＡ
をＩ ＰｐＨｌ添加した培地（Ｎ０． ４）、２゜４
Ｄを０．２ｐｐｍ 、ＮＡＡを１ｐｐｍ及びゼアチンを
０．５ｐｐｍ添加した培地（Ｎ０．７）、ＮＡＡを０．
２ｐｐｍ及びＢＡを０．１ｐｐｍ添加した培地（Ｎ０．
８）、２，４Ｄをｉ ｐｐｍ 、 ＮＡＡを０゜２ｐｐ
ｍ、ゼアチンを０．５ｐｐｍ、ＢＡを０．２ｐｐｍ及び
カイネチンを０．２ｐｐｍ添加した培地（Ｎ０．９）に
対して、それぞれ１０〜１０２個／ ｔｎＲの細胞濃度
で培養を行った。その結果、これらの培養液では細胞の
成長が観察されなかった。
４Ｄを１１ｊｐＨ１添加した培地（Ｎ０．１）、１ 〇
− ２，４Ｄを１ｐｐｍ、ベンジルアデニンＣ以下、単にＢ
Ａと称する）を２ ｐｐｍ及びカイネチンを２９ｐｍ添
加した培地（Ｎ０．２）、２．４Ｄを１ ｐｐｍＢＡを
０．５ｐｐｍ及びカイネチンを０．５ｐｐｍ添加した培
地（Ｎ０．３）、２．４ＤをＩ ＰＩ）Ｉｎ及びＮＡＡ
をＩ ＰｐＨｌ添加した培地（Ｎ０． ４）、２゜４
Ｄを０．２ｐｐｍ 、ＮＡＡを１ｐｐｍ及びゼアチンを
０．５ｐｐｍ添加した培地（Ｎ０．７）、ＮＡＡを０．
２ｐｐｍ及びＢＡを０．１ｐｐｍ添加した培地（Ｎ０．
８）、２，４Ｄをｉ ｐｐｍ 、 ＮＡＡを０゜２ｐｐ
ｍ、ゼアチンを０．５ｐｐｍ、ＢＡを０．２ｐｐｍ及び
カイネチンを０．２ｐｐｍ添加した培地（Ｎ０．９）に
対して、それぞれ１０〜１０２個／ ｔｎＲの細胞濃度
で培養を行った。その結果、これらの培養液では細胞の
成長が観察されなかった。
以上の結果から前記観葉植物のプロトプラストを培養す
るには、サイトカイニン系の植物成長ホルモンの添加が
不可決であり、この植物成長ホルモンとしてのゼアチン
とオーキシン系の植物成長ホルモンである２、４Ｄ又は
ＮＡＡを添加した組合せが前記観葉植物の細胞の１次分
裂には有効である知見を得た。また実施例１及び２、比
較例１に示す培養において、照度は暗黒下、雰囲気温度
は２０°Ｃであった。
るには、サイトカイニン系の植物成長ホルモンの添加が
不可決であり、この植物成長ホルモンとしてのゼアチン
とオーキシン系の植物成長ホルモンである２、４Ｄ又は
ＮＡＡを添加した組合せが前記観葉植物の細胞の１次分
裂には有効である知見を得た。また実施例１及び２、比
較例１に示す培養において、照度は暗黒下、雰囲気温度
は２０°Ｃであった。
本発明によれば、次の効果を発揮することができる。
（１）木本植物、例えば、ガジユマル葉柄細胞プロトプ
ラスト及びベンジャミン根茎細胞プロトプラストを細胞
分裂させることができ、容易にコロニ、カルスなどの細
胞群と呼ばれる組織培養物が得られる。
ラスト及びベンジャミン根茎細胞プロトプラストを細胞
分裂させることができ、容易にコロニ、カルスなどの細
胞群と呼ばれる組織培養物が得られる。
（２）上記効果（１）で得られた組織培養物よりガジュ
マル、ベンジャミン等のクローン植物を再生できる。
マル、ベンジャミン等のクローン植物を再生できる。
（３） ガジュマル、ベンジャミン等の茎頂組織を利
用することなく、例えば葉柄細胞あるいは根茎細胞から
植物体を再生できる。
用することなく、例えば葉柄細胞あるいは根茎細胞から
植物体を再生できる。
（４）植物組織、例えば葉等を保護細胞とするナス培養
を利用することなく前記観葉植物のプロトプラストを培
養することができる。
を利用することなく前記観葉植物のプロトプラストを培
養することができる。
第１図はガジュマル葉柄細胞プロトプラストの１次分裂
の過程を示す顕微鏡写真を基に作成した図、第２図はベ
ンジャミン根茎細胞プロトプラストの１次分裂の過程を
示す顕微鏡写真を基に作成した図である。
の過程を示す顕微鏡写真を基に作成した図、第２図はベ
ンジャミン根茎細胞プロトプラストの１次分裂の過程を
示す顕微鏡写真を基に作成した図である。
Claims (8)
- （１）木本植物の体細胞をプロトプラスト化し、そのプ
ロトプラストを、ジクロロフェノキシ酢酸および／又は
１−ナフタレン酢酸を１ｐｐｍ以下とゼアチンを１ｐｐ
ｍ以下からなる植物成長ホルモンを含む培養液に着床し
、組織培養物を製造することを特徴とする植物の組織培
養物の製造方法。 - （２）前記木本植物の体細胞が、くわ科イチジク属のベ
ンジャミンの根茎細胞であることを特徴とする植物の組
織培養物の製造方法。 - （３）前記木本植物の体細胞が、くわ科イチジク属のガ
ジュマルの葉柄細胞であることを特徴とする請求項（１
）記載の植物の組織培養物の製造方法。 - （４）前記培養液に含まれるゼアチンが１．０〜０．５
ｐｐｍであることを特徴とする請求項（１）記載の植物
の組織培養物の製造方法。 - （５）前記培養液に含まれるジクロロフェノキシ酢酸が
１ｐｐｍ以下であることを特徴とする請求項（１）記載
の植物の組織培養物の製造方法。 - （６）前記培養液に含まれる１−ナフタレン酢酸が１ｐ
ｐｍ以下であることを特徴とする請求項（１）記載の植
物の組織培養物の製造方法。 - （７）前記培養液に含まれるジクロロフェノキシ酢酸と
１−ナフタレン酢酸の合計含有量が１ｐｐｍ以下である
ことを特徴とする請求項（１）記載の植物の組織培養物
の製造方法。 - （８）前記プロトプラストを１０〜１０＾２個／ｍｌの
細胞濃度で培養液に着床することを特徴とする請求項（
１）記載の植物の組織培養物の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63165204A JPH0216971A (ja) | 1988-07-01 | 1988-07-01 | 植物の組織培養物の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63165204A JPH0216971A (ja) | 1988-07-01 | 1988-07-01 | 植物の組織培養物の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0216971A true JPH0216971A (ja) | 1990-01-19 |
Family
ID=15807815
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63165204A Pending JPH0216971A (ja) | 1988-07-01 | 1988-07-01 | 植物の組織培養物の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0216971A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102599065A (zh) * | 2012-04-13 | 2012-07-25 | 董爱文 | 一种五爪龙的快速繁殖方法 |
| CN104026011A (zh) * | 2014-06-09 | 2014-09-10 | 浙江省萧山棉麻研究所 | 银叶薜荔的组织培养快速繁殖的培养基及繁殖方法 |
-
1988
- 1988-07-01 JP JP63165204A patent/JPH0216971A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102599065A (zh) * | 2012-04-13 | 2012-07-25 | 董爱文 | 一种五爪龙的快速繁殖方法 |
| CN104026011A (zh) * | 2014-06-09 | 2014-09-10 | 浙江省萧山棉麻研究所 | 银叶薜荔的组织培养快速繁殖的培养基及繁殖方法 |
| CN104026011B (zh) * | 2014-06-09 | 2016-04-20 | 浙江省萧山棉麻研究所 | 银叶薜荔的组织培养快速繁殖的培养基及繁殖方法 |
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