JPH0216996A - モノクローナル抗体の製造法 - Google Patents
モノクローナル抗体の製造法Info
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- JPH0216996A JPH0216996A JP63165850A JP16585088A JPH0216996A JP H0216996 A JPH0216996 A JP H0216996A JP 63165850 A JP63165850 A JP 63165850A JP 16585088 A JP16585088 A JP 16585088A JP H0216996 A JPH0216996 A JP H0216996A
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- Japan
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- antibody
- cell
- producing
- gst
- monoclonal antibody
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（発明の技術分野）
本発明は、胎盤由来酵素を認識するモノクローナル抗体
の製造法に関する。以下胎盤由来酵素のうちとりわけグ
ルタチオンＳ−転位酵素（ＧＳＴ）としてとられたアイ
ソザイムであるＧＳＴ−πにて説明する。
の製造法に関する。以下胎盤由来酵素のうちとりわけグ
ルタチオンＳ−転位酵素（ＧＳＴ）としてとられたアイ
ソザイムであるＧＳＴ−πにて説明する。
現在ＧＳＴ−πは、ＧＳ、Ｔ−πに対するポリクローナ
ル抗体を用いて５ＲＩＤ法（Ｓｉｎｇｌｅ Ｒａｄｉｃ
ａｌ １ｍｍｕｎｏｄｉｆ Ｉｕｓｉｏｎ 単純免疫
拡散法、以下５ＲＩＤ法）や免疫組織化学的検討により
、原発性肝実質細胞癌の一部や肝硬変にある程度発現し
、胆管癌や胃癌、大腸癌の転移性癌に強く、また大腸ポ
リープの５０％、大腸癌、胃の前癌病変や胃癌、膵臓癌
等にも広く発現することが知られている（臨床病理、Ｖ
ｏｌ ３５．１２．．１９８７．１３６９ １３７４）
、これらのこれらのことがらＧＳＴ−πはヒト腫瘍マ
ーカーとして有用である。
ル抗体を用いて５ＲＩＤ法（Ｓｉｎｇｌｅ Ｒａｄｉｃ
ａｌ １ｍｍｕｎｏｄｉｆ Ｉｕｓｉｏｎ 単純免疫
拡散法、以下５ＲＩＤ法）や免疫組織化学的検討により
、原発性肝実質細胞癌の一部や肝硬変にある程度発現し
、胆管癌や胃癌、大腸癌の転移性癌に強く、また大腸ポ
リープの５０％、大腸癌、胃の前癌病変や胃癌、膵臓癌
等にも広く発現することが知られている（臨床病理、Ｖ
ｏｌ ３５．１２．．１９８７．１３６９ １３７４）
、これらのこれらのことがらＧＳＴ−πはヒト腫瘍マ
ーカーとして有用である。
（従来の技術）
従来、ＧＳＴ−πを検出するにあたっては、家兎等に免
疫して得られたポリクローナル抗体を用いて、組織中や
血清中より、５ｌｒＩＤ法、ＲＩＡ法（Ｒａｄｉｏ Ｉ
ｍｍｕｎｏ Ａｓ５ａＶ ｉ以下ＲＩ Ａ） 、ＥＬＩ
ＳＡ法（［！ｒ＋ｚｙｍｅ Ｌｉｎｋｅｄ Ｉｍｍｕｎ
ｏｓｏｒｂｅｎｔ Ａｓ５ａｙＨ以下ＥＬ４Ｓ＾）にて
検討されている。また、ＧＳＴ−πの組織内の局在は同
様な抗体を用いたＡＢＣ法（Ａｂｉｄｉｎｌｌｉｏｔｉ
ｎ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ Ｃｏｌ１ｐｌｅｘ法、以下
ＡＢＣ法）やＰＡＰ法（Ｐｅｒｏｘｊｄａｓｅ Ａｎｔ
ｉ −Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｃｏｍｐｌｅｘ法、以下
ＰＡＰ法）による免疫組織化学的方法により検討されて
いる。
疫して得られたポリクローナル抗体を用いて、組織中や
血清中より、５ｌｒＩＤ法、ＲＩＡ法（Ｒａｄｉｏ Ｉ
ｍｍｕｎｏ Ａｓ５ａＶ ｉ以下ＲＩ Ａ） 、ＥＬＩ
ＳＡ法（［！ｒ＋ｚｙｍｅ Ｌｉｎｋｅｄ Ｉｍｍｕｎ
ｏｓｏｒｂｅｎｔ Ａｓ５ａｙＨ以下ＥＬ４Ｓ＾）にて
検討されている。また、ＧＳＴ−πの組織内の局在は同
様な抗体を用いたＡＢＣ法（Ａｂｉｄｉｎｌｌｉｏｔｉ
ｎ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ Ｃｏｌ１ｐｌｅｘ法、以下
ＡＢＣ法）やＰＡＰ法（Ｐｅｒｏｘｊｄａｓｅ Ａｎｔ
ｉ −Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｃｏｍｐｌｅｘ法、以下
ＰＡＰ法）による免疫組織化学的方法により検討されて
いる。
（発明が解決しようとする問題点）
ＧＳＴに限らず胎盤由来酵素の検出には通常ボリフロー
ナル抗体を用いて行われて来た。しかし、例えばＧＳＴ
には多種にわたるアイソザイムが存在し、ポリクローナ
ル抗体では、厳重な吸収操作を施してもその特異性には
限界があるため、充分な特異性を得たと判断した場合で
あっても測定系の感度を上昇させることにより、各アイ
ソザイムに共通ずる共通抗原への反応が起こってしまう
ことがあったり、通常のメスのマウスを用いた抗体産生
法では極めて効率が悪く、このことは胎盤由来酵素に共
通していることをつきとめた。
ナル抗体を用いて行われて来た。しかし、例えばＧＳＴ
には多種にわたるアイソザイムが存在し、ポリクローナ
ル抗体では、厳重な吸収操作を施してもその特異性には
限界があるため、充分な特異性を得たと判断した場合で
あっても測定系の感度を上昇させることにより、各アイ
ソザイムに共通ずる共通抗原への反応が起こってしまう
ことがあったり、通常のメスのマウスを用いた抗体産生
法では極めて効率が悪く、このことは胎盤由来酵素に共
通していることをつきとめた。
（問題点を解決するための手段）
本発明者等は、この問題点を解決するために特異性が高
く、継続的に同質の抗体の得られる胎盤由来酵素を認識
するモノクローナル抗体の作成を試みたところオスのマ
ウスを使用することにより効率よく産生できる方法を見
出し本発明を完成した。
く、継続的に同質の抗体の得られる胎盤由来酵素を認識
するモノクローナル抗体の作成を試みたところオスのマ
ウスを使用することにより効率よく産生できる方法を見
出し本発明を完成した。
本発明に使用できる胎盤由来酵素としては、例えば、Ｇ
ＳＴ−π、アミノペプチドＡ／Ｂ、オキシトシナーゼ、
胎盤性アルカリフォスファターゼを挙げることができる
。
ＳＴ−π、アミノペプチドＡ／Ｂ、オキシトシナーゼ、
胎盤性アルカリフォスファターゼを挙げることができる
。
本発明である抗胎盤由来酵素モノクローナル抗体を作成
するにあたりマウスに対する免疫及び各種分析に用いた
抗原はヒト胎盤よりＳｏｍａらの方法（Ｂｉｏｃｈｊｍ
Ｂｉｏｐｈｓ Ａｃｔａ ８６９．２４７ ２５８
）により分離精製した。
するにあたりマウスに対する免疫及び各種分析に用いた
抗原はヒト胎盤よりＳｏｍａらの方法（Ｂｉｏｃｈｊｍ
Ｂｉｏｐｈｓ Ａｃｔａ ８６９．２４７ ２５８
）により分離精製した。
得られた酵素を抗原としてマウスなどの動物に免疫する
が、免疫方法は常法に従って行うことができる。使用す
る抗原量、免疫回数や間隔は、動物の免疫応答能力、抗
原の精製程度などによって異なる。抗原量が極めて少な
い場合免疫が充分に成立しないので抗原の投与を繰り返
す必要がある。
が、免疫方法は常法に従って行うことができる。使用す
る抗原量、免疫回数や間隔は、動物の免疫応答能力、抗
原の精製程度などによって異なる。抗原量が極めて少な
い場合免疫が充分に成立しないので抗原の投与を繰り返
す必要がある。
しかし、通常の場合でも、初回免疫の他に、追加免疫を
するのが好ましい。また、免疫は通常アジュバントを用
いて行われる。アジュバントとしては、フロイント、コ
ンブリードアシュバンド、インコンプリートアジュバン
ト、ミョウバンなどの一般的に用いられるアジュバント
活性を持つものならばすべて用いることができる。
するのが好ましい。また、免疫は通常アジュバントを用
いて行われる。アジュバントとしては、フロイント、コ
ンブリードアシュバンド、インコンプリートアジュバン
ト、ミョウバンなどの一般的に用いられるアジュバント
活性を持つものならばすべて用いることができる。
抗体産生細胞は、最終免疫後数日を経過して、その細胞
を有する臓器から採取、調製されるが通常は、最終免疫
後３〜４日目に調製するのが好ましい。
を有する臓器から採取、調製されるが通常は、最終免疫
後３〜４日目に調製するのが好ましい。
このようにして調製された抗体産生細胞はできるだけ速
やかに腫瘍細胞と融合させるのが好ましい。
やかに腫瘍細胞と融合させるのが好ましい。
融合に用いる腫瘍細胞としては、ｐ３Ｘ６Ｊｇ＋＋ ＋
ＰＪｉＪｇｓ−Ｕ＋等のマウスミエローマ細胞株が最も
好ましい。ミエローマ細胞株はＢＡＬＢ／Ｃマウスに由
来するのが普通であるが、ＢＡＬＢ／ｃ以外の系統のマ
ウスから得られたものでも、ラットから得た細胞と融合
させても高いハイブリドーマ形成率を得ることも可能で
ある。しかし、ミエローマ細胞株の起源となった動物種
と抗体産生細胞の供与動物の種とが一致するのが望まし
い。また、細胞融合には、対数増殖期の細胞を使用する
のが好ましい。
ＰＪｉＪｇｓ−Ｕ＋等のマウスミエローマ細胞株が最も
好ましい。ミエローマ細胞株はＢＡＬＢ／Ｃマウスに由
来するのが普通であるが、ＢＡＬＢ／ｃ以外の系統のマ
ウスから得られたものでも、ラットから得た細胞と融合
させても高いハイブリドーマ形成率を得ることも可能で
ある。しかし、ミエローマ細胞株の起源となった動物種
と抗体産生細胞の供与動物の種とが一致するのが望まし
い。また、細胞融合には、対数増殖期の細胞を使用する
のが好ましい。
この発明において、ハイブリドーマの増殖に用いられる
培地としてはＤＭＥ培地が使用される。
培地としてはＤＭＥ培地が使用される。
ＤＭＥ培地にはウシ胎児血清（Ｆｅ２）が添加される。
この発明において、細胞融合は細胞融合試薬を用いて行
なわれる。細胞融合試薬としてはポリエチレングリコー
ル（ＰＥＧ）を使用するのが普通である。使用されるＰ
ＥＧとしては種々の平均分子量のものが使用でき、一般
には平均分子量が１０００．１５００．２０００．４０
００および６０００のものが使用される。また、使用さ
れるＰＥＧ濃度は３〇−５０％の範囲で通常使用される
。ＰＥＧ溶液の添加手順については何ら制限されないが
、例えば抗体産生細胞とミエローマ細胞にＰＥＧを溶液
を加えて撹拌又は振とうしてもよいし、または抗体産生
細胞とミエローマ細胞とをＰＥＧ？８液と混和して低速
遠心して細胞融合を行なってもよい。抗体産生細胞と、
腫瘍細胞の比率も特に特定されるものではないが、約５
：ｌ−１０：Ｉ（抗体産生細胞；腫瘍細胞）になるよう
に混合するのがよい。
なわれる。細胞融合試薬としてはポリエチレングリコー
ル（ＰＥＧ）を使用するのが普通である。使用されるＰ
ＥＧとしては種々の平均分子量のものが使用でき、一般
には平均分子量が１０００．１５００．２０００．４０
００および６０００のものが使用される。また、使用さ
れるＰＥＧ濃度は３〇−５０％の範囲で通常使用される
。ＰＥＧ溶液の添加手順については何ら制限されないが
、例えば抗体産生細胞とミエローマ細胞にＰＥＧを溶液
を加えて撹拌又は振とうしてもよいし、または抗体産生
細胞とミエローマ細胞とをＰＥＧ？８液と混和して低速
遠心して細胞融合を行なってもよい。抗体産生細胞と、
腫瘍細胞の比率も特に特定されるものではないが、約５
：ｌ−１０：Ｉ（抗体産生細胞；腫瘍細胞）になるよう
に混合するのがよい。
また、細胞電気融合法により電気的な力による融合も可
能となっており、この方法も採用できる。
能となっており、この方法も採用できる。
細胞融合されて得られたハイブリドーマは、未融合細胞
と混在しているので、例えばヒボキサンチン−アミノプ
テリン−チミジン培地（ＨＡＴ培地）で培養することに
よってハイプリドーマを選択して得ることができる。
と混在しているので、例えばヒボキサンチン−アミノプ
テリン−チミジン培地（ＨＡＴ培地）で培養することに
よってハイプリドーマを選択して得ることができる。
得られたハイブリドーマの培養上清中の抗体を検出して
目的とする抗体を産生ずるクローンのみをクローン化す
る。このクローン化も常法に従って行うことができる。
目的とする抗体を産生ずるクローンのみをクローン化す
る。このクローン化も常法に従って行うことができる。
このようにして得られた抗体産生クローンを含む融合細
胞群について再び目的とする抗体の存否を調べ、抗体陽
性の細胞だけを更に培養する。このようにクローニング
は２回以上行なうのが好ましい。
胞群について再び目的とする抗体の存否を調べ、抗体陽
性の細胞だけを更に培養する。このようにクローニング
は２回以上行なうのが好ましい。
前述の様にして得られた高い特異性を持つ抗体を産生ず
るクローンを大量に培養して、組織適合抗原の一致した
マウスの腹腔に注入して増殖させ得られた腹水から目的
とするモノクローナル抗体を得ることができる。本発明
は、融合細胞調整に際して、免疫マウスをオスマウスと
することを必須の要件とするものである。かかるモノク
ロナール抗体、及び融合細胞は、凍結保存することがで
き、常に均一の標品として得ることができ、きわめて有
用である。
るクローンを大量に培養して、組織適合抗原の一致した
マウスの腹腔に注入して増殖させ得られた腹水から目的
とするモノクローナル抗体を得ることができる。本発明
は、融合細胞調整に際して、免疫マウスをオスマウスと
することを必須の要件とするものである。かかるモノク
ロナール抗体、及び融合細胞は、凍結保存することがで
き、常に均一の標品として得ることができ、きわめて有
用である。
以下実施例により本発明を更に詳細に説明する。
実施例１
（ＧＳＴ−π抗原の免疫および融合用抗体産生細胞の調
整） 免疫動物はＢａ１ｂ／ｃマウスを用いメス２匹、オス２
匹の合計４匹に免疫を行なった。ヒト満期胎盤よりＳｏ
ｍａらの方法により分離精製したＧＳＴ−π抗原０．２
ｍｇをマウス腹腔内に接種し、２週間後に再び同量のＧ
ＳＴ−π抗原を腹腔内に接種した。
整） 免疫動物はＢａ１ｂ／ｃマウスを用いメス２匹、オス２
匹の合計４匹に免疫を行なった。ヒト満期胎盤よりＳｏ
ｍａらの方法により分離精製したＧＳＴ−π抗原０．２
ｍｇをマウス腹腔内に接種し、２週間後に再び同量のＧ
ＳＴ−π抗原を腹腔内に接種した。
更に２週間後、同量の抗原を接種しその３日後に肺臓を
摘出した。取り出した肺臓を１００メツシユのステンレ
スグリッド上でほぐし、０．８３％塩化アンモニウムで
赤血球を容器させ融合用肺細胞とした。
摘出した。取り出した肺臓を１００メツシユのステンレ
スグリッド上でほぐし、０．８３％塩化アンモニウムで
赤血球を容器させ融合用肺細胞とした。
（親細胞株の調整）
親細胞株はＰ３・Ｕｌｌｌｌ胞を用いた。Ｐ３・旧細胞
は１０％ＦＣ３を含むＤＭＥ培地で維持継代したものを
用いた。Ｐ３・Ｕｌ細胞はあらかじめＨＡ Ｔ選択培地
で死滅することを確認した。
は１０％ＦＣ３を含むＤＭＥ培地で維持継代したものを
用いた。Ｐ３・Ｕｌ細胞はあらかじめＨＡ Ｔ選択培地
で死滅することを確認した。
ｌ胞融合）
融合用抗体産生細胞１０１１コとＰ３・Ｕ１細胞１０７
コを試験管に取り、血清を含まないＤＭＥ培地で２回洗
浄した後５０％ＰＥＧ１００Ｏを１棚！加え細胞を融合
させた。融合後、血清を含まないＤＭＥ培地で細胞を洗
浄し、２０％ＦＣ５を加えた［１１４Ｅ培地で３７°Ｃ
５％ＣＯ□ インキュベーター内で２４時間培養した。
コを試験管に取り、血清を含まないＤＭＥ培地で２回洗
浄した後５０％ＰＥＧ１００Ｏを１棚！加え細胞を融合
させた。融合後、血清を含まないＤＭＥ培地で細胞を洗
浄し、２０％ＦＣ５を加えた［１１４Ｅ培地で３７°Ｃ
５％ＣＯ□ インキュベーター内で２４時間培養した。
その後、培養上清を除きＨＡＴ選択培地に細胞を浮遊し
９６六マイクロプレートに１０５コ／ ０．１ ｙａ
ｌ ／ｗｅ１１の割合で３００ｗａｌｌ。
９６六マイクロプレートに１０５コ／ ０．１ ｙａ
ｌ ／ｗｅ１１の割合で３００ｗａｌｌ。
２ ＸＩＯ’ ／ ０．１ ｔｓｌ ／ ｗｅｌｌの割
合で３００ｗａｌｌに植込み培養した。４日後に０．１
ｍｆｆ１のＨＡＴ培地を加え、更に７日後にＨＡＴ培地
の半量交換を行ない、その４日後に培養上清のアッセイ
をＥＬＩＳＡにて行なった。細胞融合は、免疫マウスメ
ス２匹オス２匹の計４回行なった。
合で３００ｗａｌｌに植込み培養した。４日後に０．１
ｍｆｆ１のＨＡＴ培地を加え、更に７日後にＨＡＴ培地
の半量交換を行ない、その４日後に培養上清のアッセイ
をＥＬＩＳＡにて行なった。細胞融合は、免疫マウスメ
ス２匹オス２匹の計４回行なった。
実施例２
（抗体の測定）
ＧＳＴ−π抗原を０．０５ Ｍ Ｐ、Ｂ（ｐＨ７、５）
で０Ｄｚｓ。０．０１０に調整しマイクロモジュールプ
レート（ＮＵＮＣ社製）に固相化した。 ０．０１ Ｍ
Ｐ、Ｂ、Ｓ。
で０Ｄｚｓ。０．０１０に調整しマイクロモジュールプ
レート（ＮＵＮＣ社製）に固相化した。 ０．０１ Ｍ
Ｐ、Ｂ、Ｓ。
Ｔｗｅｅｎで洗浄後、１％ＢＳＡ溶液にて残りの結合部
位をブロックし測定に用いた。
位をブロックし測定に用いた。
培養上清を固相化プレートに１００Ｉｌずつ３７°Ｃで
１時間反応させ０． ＯＩ Ｍ Ｐ、Ｂ、Ｓ。
１時間反応させ０． ＯＩ Ｍ Ｐ、Ｂ、Ｓ。
Ｔｗｃｅｎで洗浄後、ペルオキシダーゼ標識抗マウス免
疫グロブリン抗体（Ｔａｇｏ社製）を１０００倍希釈し
、 ■００μｌずつ３７°Ｃで１時間反応させた。０
．ＯＩＭ Ｐ、Ｂ、Ｓ、−丁ｗｅｅｎで洗浄後、基質
液（１１，０□および八ＢＴＳ）を１００μ！加え室温
で３０分反応させ ０．１６ Ｍシュウ酸１００μｌで
反応停止した後、吸光度を測定した。
疫グロブリン抗体（Ｔａｇｏ社製）を１０００倍希釈し
、 ■００μｌずつ３７°Ｃで１時間反応させた。０
．ＯＩＭ Ｐ、Ｂ、Ｓ、−丁ｗｅｅｎで洗浄後、基質
液（１１，０□および八ＢＴＳ）を１００μ！加え室温
で３０分反応させ ０．１６ Ｍシュウ酸１００μｌで
反応停止した後、吸光度を測定した。
・イムノプロット法
イムノプロット法は、Ｃ３Ｔ各アイソザイムをＳＤＳ電
気電気移動後トロセルロース膜に転写し、各培養上清を
反応させ、アビジン／ビオチン／パーオキシダーゼコン
プレックス法（ＡＢＣ法）により抗体の検出を行った。
気電気移動後トロセルロース膜に転写し、各培養上清を
反応させ、アビジン／ビオチン／パーオキシダーゼコン
プレックス法（ＡＢＣ法）により抗体の検出を行った。
・免疫組織化学
ヒト大腸癌組織を材料とし、培養上清を反応させた後、
ＡＢＣ法による免疫組織化学的染色を行った。
ＡＢＣ法による免疫組織化学的染色を行った。
実施例３
（クローニング）
ＥＬＩＳＡにて陽性かつイムノプロット法または免疫組
織化学的染色法で陽性のものは、限界希釈によるクロー
ニングを行なった。
織化学的染色法で陽性のものは、限界希釈によるクロー
ニングを行なった。
（細胞融合）
細胞融合の結果は表のようになった。すなわち、メスの
マウスを用いた１、２回目の融合では融合効率も低く
、ＥＬＩＳＡで陽性と判定されるものはなかったが、オ
スのマウスを用いた３、４回目の融合では、融合効率も
高＜ ＥＬＩＳＡでの１次スクリーニングで陽性と判定
されたものは１２２ｗｅｌｌであった。
マウスを用いた１、２回目の融合では融合効率も低く
、ＥＬＩＳＡで陽性と判定されるものはなかったが、オ
スのマウスを用いた３、４回目の融合では、融合効率も
高＜ ＥＬＩＳＡでの１次スクリーニングで陽性と判定
されたものは１２２ｗｅｌｌであった。
（単りローン抗ＧＳＴ−π抗体の樹立）上記１２２ｉｙ
ｅｌｌを１ｌｓＡで２次スクリーニングを行なったとこ
ろ６３ｗｅ１１で陽性を示した。この６３ｉｖａｌｌ全
てに関しイムノプロットおよび免疫組織化学的染色法で
検討を行なったところ、強陽性を示したものは５ｗｅｌ
＋となった。これらを限界希釈によるクローニングを行
なったところ、最終的に４種類のモノクローナル抗体を
得ることができた。 （πｂ −２； ＩｇＭ、 ｇ
ｃ−８； ＩｇＭ、 πｄ −１； ＩｇＧｚａ ＋
πｆｌ；ＩｇＧ＋）モノクローナル抗体の特異性の検討 最終的に得られた４種のモノクローナル抗体について、
その反応の特異性を３種のＧＳＴアイソザイム（ＧＳＴ
−π、α、μ）を用いて検索した。
ｅｌｌを１ｌｓＡで２次スクリーニングを行なったとこ
ろ６３ｗｅ１１で陽性を示した。この６３ｉｖａｌｌ全
てに関しイムノプロットおよび免疫組織化学的染色法で
検討を行なったところ、強陽性を示したものは５ｗｅｌ
＋となった。これらを限界希釈によるクローニングを行
なったところ、最終的に４種類のモノクローナル抗体を
得ることができた。 （πｂ −２； ＩｇＭ、 ｇ
ｃ−８； ＩｇＭ、 πｄ −１； ＩｇＧｚａ ＋
πｆｌ；ＩｇＧ＋）モノクローナル抗体の特異性の検討 最終的に得られた４種のモノクローナル抗体について、
その反応の特異性を３種のＧＳＴアイソザイム（ＧＳＴ
−π、α、μ）を用いて検索した。
ＧＳＴ活性を有する未変性のＧＳＴ−πに対しπｂ−２
，πｃ−８，πｄ−１の３種の抗体は結合後、ＧＳＴ活
性を３０〜７０％低下させた。
，πｃ−８，πｄ−１の３種の抗体は結合後、ＧＳＴ活
性を３０〜７０％低下させた。
πｆ−１抗体では有意な活性の低下は認められなかった
。また、免疫学的にＧＳＴ−πと異なるＧＳＴ−αやμ
では、いずれの抗体でも活性の低下は認められなかった
。
。また、免疫学的にＧＳＴ−πと異なるＧＳＴ−αやμ
では、いずれの抗体でも活性の低下は認められなかった
。
イムノプロットによる検討ではＳＤＳ変性後のＧＳＴ
−πに対し、πｃ−８，πｄ−１，πｆ１の３種が反応
したが、ＧＳＴ−αやμとは反応しなかった。
−πに対し、πｃ−８，πｄ−１，πｆ１の３種が反応
したが、ＧＳＴ−αやμとは反応しなかった。
これらの結果からπｆ−１は酵素活性を有する未変性の
ＧＳＴ−πとは反応しないことより、ＳＤＳ変性後に生
ずる構造に反応することが示唆された。一方、πｂ−２
はイムノプロットでＣ３Ｔπと反応しなくなることから
そのエピトープはＳＤＳにより失なわれることが示唆さ
れた。 以上の様な結果により、４種のモノクローナ
ル抗体は、Ｇ Ｓ Ｔ−πに特異的と考えられた。
ＧＳＴ−πとは反応しないことより、ＳＤＳ変性後に生
ずる構造に反応することが示唆された。一方、πｂ−２
はイムノプロットでＣ３Ｔπと反応しなくなることから
そのエピトープはＳＤＳにより失なわれることが示唆さ
れた。 以上の様な結果により、４種のモノクローナ
ル抗体は、Ｇ Ｓ Ｔ−πに特異的と考えられた。
表 融合細胞及び抗体産生細胞の出現頻度１ ””
１ｘｌＯ’ ３／３００（１）” ０
／３ （０）”２Ｘ１０５２１／３００（７）
Ｏ／２１（０）丁ｏｔａｌ ２４／６０
０（４） ０／２４（０）Ｔｏｔａｌ
３０／６００（５，０） Ｏ／３０（０）Ｔｏ
ｔａ １ ５８７／ ６００ （９Ｂ）８９１５
Ｂ？ （１５） Ｔｏｔａｌ ’ ４７６／６００（７９）
３３／４７６（７）４、発明の効果 本発明は、胎盤由来酵素を認識するモノクロナール抗体
の製造常法である。本発明は、オスマウスを用いること
により該抗体の製造に極めて有効である。
１ｘｌＯ’ ３／３００（１）” ０
／３ （０）”２Ｘ１０５２１／３００（７）
Ｏ／２１（０）丁ｏｔａｌ ２４／６０
０（４） ０／２４（０）Ｔｏｔａｌ
３０／６００（５，０） Ｏ／３０（０）Ｔｏ
ｔａ １ ５８７／ ６００ （９Ｂ）８９１５
Ｂ？ （１５） Ｔｏｔａｌ ’ ４７６／６００（７９）
３３／４７６（７）４、発明の効果 本発明は、胎盤由来酵素を認識するモノクロナール抗体
の製造常法である。本発明は、オスマウスを用いること
により該抗体の製造に極めて有効である。
Claims (1)
- （１）モノクローナル抗体を製造する方法において、オ
スマウスに胎盤由来酵素を免疫してなる該抗体の製造法
。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63165850A JPH0216996A (ja) | 1988-07-05 | 1988-07-05 | モノクローナル抗体の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63165850A JPH0216996A (ja) | 1988-07-05 | 1988-07-05 | モノクローナル抗体の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0216996A true JPH0216996A (ja) | 1990-01-19 |
Family
ID=15820184
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63165850A Pending JPH0216996A (ja) | 1988-07-05 | 1988-07-05 | モノクローナル抗体の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0216996A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2011526689A (ja) * | 2008-07-04 | 2011-10-13 | ユニヴェルシテ ジョセフ フーリエ | 診断及び予後の方法を実施するためのｉｒａｐタンパク質の使用 |
| CN109957015A (zh) * | 2019-04-01 | 2019-07-02 | 中国人民解放军海军军医大学国家肝癌科学中心 | 一种hmgb1封闭性抗体的制备方法及其应用 |
-
1988
- 1988-07-05 JP JP63165850A patent/JPH0216996A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2011526689A (ja) * | 2008-07-04 | 2011-10-13 | ユニヴェルシテ ジョセフ フーリエ | 診断及び予後の方法を実施するためのｉｒａｐタンパク質の使用 |
| CN109957015A (zh) * | 2019-04-01 | 2019-07-02 | 中国人民解放军海军军医大学国家肝癌科学中心 | 一种hmgb1封闭性抗体的制备方法及其应用 |
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