JPH02184626A - 血小板凝集抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は血小板凝集抑制剤、特に茶葉中に見出される成
分を有効成分とする血小板凝集抑制剤に関するものであ
る。

（従来の技術） 近年、わが国の食生活の変化や高齢化現象に伴って、動
脈硬化が促進され、また心筋梗塞や脳血栓など血栓性疾
患が漸増し、主要な社会問題となっている。血小板は血
栓形成において中心的な役割を果たす一方、血栓症の基
礎疾患である粥状動脈硬化の成立や進行にも直接関与す
ることが明かとなり、血小板凝集抑制剤が血栓性疾患に
有用な薬剤として使用されるようになっている。このよ
うな薬剤として、これまでにアスピリン、インドメタシ
ン等数種が知られている。

（発明が解決しようとする課題） しかしながら、これらの血小板凝集抑制剤は、他の薬理
作用を持つ薬剤に血小板凝集抑制作用を見出して造られ
ているものであり、強い副作用を持つものがある。例え
ば、ラットにおけるアスピリンのＬＤ、。（５０％致死
りは体重１ｋｇ当たり１．７５ｇと言われている。

抗血栓剤としての血小板凝集抑制剤は、治療および予防
的に長期にわたって連用されることが多いので、より安
全性の高いものが望まれている。

上記に鑑み、本発明者は、食品として日常摂取している
ものの中から副作用のない血小板凝集抑制剤を開発する
ことを試み、茶葉の持つさまざまな薬理活性に着目し、
その結果、茶葉抽出物から有効かつ安全性の高い血小板
凝集抑制剤を見出すに至ったものである。

（課題を解決するための手段） 上記課題を解決するために、本発明者はエピガロカテキ
ンガレート乃至（この乃至は「又は」、「及び」の雨後
を含むものとする）エビカテキンガレートが血小板凝集
抑制効果を奏することを見出した。本発明は、このエピ
ガロカテキンガレ−）　　（ＥＧＣＧ）乃至エビカテキ
ンガレ−）　　（ＥＣＧ）を有効成分として血小板凝集
抑制剤となしたことを特徴とする。

上記有効成分は茶葉の可溶性抽出物であってもよく、或
いは茶葉の可溶性抽出物を精製して得られる茶カテキン
類であってもよい。

（作用） 上記血小板凝集抑制剤は、血小板の凝集に起因する血栓
性疾患の予防、及び治療に使用することが可能である。

（実施例） 以下、本発明を実施例によって説明する。

本発明における茶葉としては、緑茶、ウーロン茶、紅茶
などいずれの茶葉を用いてもよい。

茶葉の可溶性抽出物は、茶葉１ｋｇ当たり約２０〜４０
１の熱水を加えて約１０〜３０分間浸出させ、所望によ
り圧搾し、得られる搾汁を集めて凍結乾燥することによ
り得られる。上記浸出条件は、抽出効率、凍結乾燥など
の後処理効率上置も好ましい範囲であるが、これに限定
されるものではない。この茶葉抽出物にはＥＧＣＧおよ
びＥＣＧが３０％程度含まれている。

茶カテキン類は、茶葉を熱水または親水性有機溶媒で抽
出後、カフェイン等の天然高分子類をクロロホルムで抽
出除去し、さらに酢酸エチル等有機溶媒で抽出すること
により得られる。

ＥＧＣＧおよびＥＣＧは、上記茶葉の可溶性抽出物また
は茶カテキン類をカラムクロマトグラフィ上でアセトン
等親水性有機溶媒で溶出することにより得られる。ＥＧ
ＣＧとＥＣＧは、逆相分配カラムを用いた高速液体クロ
マトグラフィーで分離される。

以下に、血小板凝集抑制剤作用の実験例を挙げて説明す
る。

実施例Ｉ ＥＧＣＧの血小板凝集能を下記のようにして測定した。

・洗浄血小板浮遊液の調整 家兎の耳静脈又は動脈から採血した血液に、速やかに１
／９量のＡＣＤ液（０，８％クエン酸−２，２％クエン
酸ナトリウム−２，４５％グルコース）を混合し、１５
０ｘｇ、１０分間の遠心で、多血小板血漿を得た。次い
で９００ｘｇ、１０分間の遠心で血小板の沈渣を得、こ
れをタイロード液に再浮遊させて洗浄血小板浮遊液を得
た。

・血小板凝集能の測定 血小板凝集試験は、Ｂｏｒｎの比濁法に準じ、アブリボ
メーター（二元バイオサイエンス社製）を用いて行なっ
た。

即ち、上記血小板浮遊液（２ｘ　１０’個／−）０、　
４ｒｎｌに検体を２μ！加え、３７℃で１分間反応させ
、次に凝集惹起剤を加えて血小板浮遊液の濁度変化（透
過率）を観察することにより凝集能を測定した。

検体としては、実施例として茶葉から得られたＥＧＣＧ
を１．　２５〜４０ｍｇ／ｍＩ！の範囲の割合で順次溶
解した生理食塩水溶液を用い、参考例としてアスピリン
を１，２５〜２０ｍｇ／−の範囲の割合で順次溶解した
エタノール溶液を用い、対照例として生理食塩水、エタ
ノールをそれぞれ用いた。

凝集惹起剤としては、１ｍｇ／−のコラーゲン（終濃度
２５μｇ／ｍＩりを１０．ｕＡ、４Ｘ１０−’Ｍの血小
板活性化因子（ＰＡＦ）（１０−”Ｍ）を１０μｆ、２
０Ｕ／−のトロンビン（０，Ｉ　Ｕ／−）２μｌを用い
た。

・血小板凝集能の結果 対照例に対するＥＧＣＧの５０％阻害濃度（ＩＣ６゜）
＝血小板の凝集を対照例の５０％まで低下させる濃度は
、コラーゲン凝集に対して０．１１ｍＭ　（ｍｍｏｌｅ
／ｊり　、ＰＡＦ凝集に対し０．０４ｍＭ、）ロンビン
凝集に対しては０．４５ｍＭであった。

一方、アスピリンのＩＣ１ｏは、コラーゲン凝集に対し
て０．１８ｍＭであった。

以上のようにＥＧＣＧは、現在、抗血栓剤として使用さ
れているアスピリンと同程度以上の血小板凝集抑制作用
が認められた。

なお、アスピリンには胃粘膜の出血、食欲不振、アレル
ギーなどの副作用が知られているが、茶は数千年来飲用
されてきており、１日に上級煎茶を５００ｍ！！飲用す
ると、ＥＧＣＧを約０．３ｇ摂取していることになり、
上記のような副作用のおそれはない。また、ＥＧＣＧの
ＬＤｉｏは２．　３〜２゜５ｇ／ｋｇとの報告があり、
アスピリンが１．７５ｇ／ｋｇであるのと比して安全性
がより高い。

実施例２ 次に、茶葉の可溶性抽出物の血小板凝集抑制効果を調べ
た。

・血小板凝集能の測定 緑茶（煎茶）、ウーロン茶、紅茶の各２５ｇに１０００
ｍ１の熱水（８０℃）を加え、１０分間抽出し、圧搾し
て得た搾汁液を４０℃で減圧下で約２００−に濃縮後、
凍結乾燥し、可溶性抽出物としてそれぞれ、５．１ｇ、
４．５ｇ、及び５．０ｇを得た。これら可溶性抽出物を
生理食塩水に溶かして実施例としての検体とし、他は前
記実験例１で示したのと同様な方法で、血小板凝集を測
定した。

・血小板凝集能の結果 結果は第１図に示されているとおりであった。

これによれば、緑茶、ウーロン茶、紅茶の可溶性抽出物
は、０．１２５　■／ｍ１ｏ）？ａ度でコラーゲンによ
る凝集の最大凝集率を、対照例に対してそれぞれ８８％
、７８％、８１％に低下させ、コラーゲン添加から凝集
開始までの遅延時間をそれぞれ３．１倍、３．３倍、４
．４倍に延長し、ＥＧＣＧ、ＥＣＧを含む可溶性抽出物
として血小板凝集抑制効果を示した。

実施例３ 次に、茶カテキン類の血小板凝集抑制効果を調べた。

・血小板凝集能の測定 緑茶（煎茶）５０ｇに８０℃の熱水２０００ｍｌを加え
て１０分間抽出し、圧搾して得た搾汁液的７５０−を７
００ａｌ！のクロロホルムで２回抽出操作を行ってカフ
ェイン等を除き、残りの水層から８００−の酢酸エチル
で２回茶カテキン類を抽出し、溶媒留去後、少量の水に
溶かし、凍結乾燥を行なって、粗カテキン３．７ｇを得
た。

次に粗カテキン１．２ｇを水に溶解して、カラムクロマ
トグラフィー（１，５ｘ３０ｃｍ・品名セファデックス
ＬＨ２０）にかけ、０％、１５％、３０％、６０％アセ
トンで順次溶出し、主にエビカテキン（ＥＣ）とエピガ
ロカテキン（ＥＧＣ）を含む分画であるカテキンＡ０．
２６ｇと、主にＥＧＣＧとＥＣＧを含む分画であるカテ
キンＢＯ，４４ｇを得た。第２図は粗カテキン、カテキ
ンＡ１及びカテキンＢを高速液体クロマトグラフィーで
分析した結果である。

粗カテキン、カテキンＡ１及びカテキンＢを生理食塩水
に溶解して実施例としての検体とし、他は実施例１と同
様にして血小板凝集を測定した。

カテキンＢには約７０％のＥＧＣＧと、約３０％のＥＣ
Ｇが含まれていた。

・血小板凝集能の結果 結果は第３図に示されているとおりであった。

粗カテキン及びカテキンΔは０．２５ｍｇ／ｍｌの濃度
で、コラーゲン添加５分後の凝集率をそれぞれ対照例に
対し、１４％及び５４％まで低下させ、カテキンＢは０
．１２５ｍｇ／−の濃度で、コラーゲンによる血小板凝
集をほぼ完全に近く抑制した。

なお、実施例１の実験において、ＥＧＣＧ単体の場合は
０．１２５ｍｇ／ｍｌの濃度においてカテキンＢとほぼ
同様にコラーゲンによる血小板凝集をほぼ完全に近く抑
制する結果が得られた。

このことと上記カテキンＢの効果とを勘案すると、カテ
キン已に約３０％含まれるＥＣＧにも顕著な血小板凝集
抑制効果があると認定できた。

（発明の効果） このようにして、本発明の血小板凝集抑制剤によれば、
有効な血小板凝集抑制効果を奏し、しかも長年飲用され
続けてきた茶葉成分を由来とすることから、安全性が高
く、血栓症、粥状動脈硬化症等の予防に長期使用するの
に好適である。

【図面の簡単な説明】

第１図は茶葉抽出物である可溶性抽出物の血小板凝集阻
害効果を示すグラフ、第２図は茶カテキン類の高速液体
クロマトグラフィーによる分析グラフ、第３図は茶カテ
キン類の分析物による血小板凝集抑制効果を示すグラフ
である。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）エピガロカテキンガレート乃至エピカテキンガレ
   ートを有効成分とする血小板凝集抑制剤。
2. （２）前記有効成分が茶葉の可溶性抽出物で用いられる
   第１項記載の血小板凝集抑制剤。
3. （３）前記有効成分が茶葉の可溶性抽出物を精製して得
   られる茶カテキン類で用いられる第１項記載の血小板凝
   集抑制剤。