JPH02200640A

JPH02200640A - 肝機能障害予防改善剤の製造法

Info

Publication number: JPH02200640A
Application number: JP1019477A
Authority: JP
Inventors: Toshihiro Nohara; 野原　稔弘; Takashi Takeshita; 竹下　尚; Nobuhito Irino; 信人入野
Original assignee: Nippon Mektron KK
Current assignee: Nippon Mektron KK
Priority date: 1989-01-31
Filing date: 1989-01-31
Publication date: 1990-08-08

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、肝機能障害予防改善剤の製造法に関する。更
に詳しくは、鶏骨草の含有するトリテルペノイドサポニ
ンを有効成分とする肝機能障害予防改善剤の製造法に関
する。

〔従来の技術〕および〔発明が解決しようとする課題〕
鶏骨草（Ａｂｒｕｓ　ｃａｎｔｏｎｉｅｎｓｉｓ　Ｈａ
ｎｃｅ）は、古来より中国で民間薬として用いられてお
り、近年では大病院などにおいても伝染性肝炎の治療薬
としても用いられるようになってきており、多大の効果
を挙げている。

これの成分としては、アブリン（トリプトファン）、コ
リン、ステロールなどの他に、メタノールエキスの加水
分解物として、１−リテルペノイトアグリコンのカント
ニエンシストリオール（Ｐｌａｎｔａ　ｍｅｄｉｃａ第
４６巻第５２頁、１９８２）、ソヤサボゲノールＡおよ
びＢ、ソフラジオールなどが見出されている。

本発明の目的は、鶏骨草の低級アルコール抽出エキスか
ら、新規化合物を含有する肝機能障害予防改善剤を製造
する方法を提供することにある。

〔課題を解決するための手段〕

かかる本発明の目的は、鶏骨草の低級アルコール抽出エ
キスをｎ−ブタノールと水とで分配し、分配されたｎ−
ブタノール層エキスをシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィーにかけ、クロロホルム−メタノール−水（７：３：
０．５）混合溶媒で流下し、分画された６個の画分の内
の画分５および６をそれぞれ粗トリテルペノイドサポニ
ンＩまたはＩＩとして採取することによって達成される
。

鶏骨草の低級アルコール抽出は、メタノール、エタノー
ルによって代表される低級アルコールを用い、その還流
温度で還流すＺことによって行われる。このような抽出
は、一般に複数回くり返して行われ、その後溶媒を留去
して低級アルコール抽出エキスを得る。

得られた低級アルコール抽出エキスは、ｎ−ブタノール
と水との分配に付される。分配は、エキスを水中にけん
濁させた後、一般に水と等量のｎ−ブタノールを加えて
行われ、その後ｎ−ブタノール層エキスが分離される。

このｎ−ブタノール層エキスは、シリカゲルカラムクロ
マトグラフィーにかけ、クロロホルム−メタノール−水
（７：　３　：　０．５）混合溶媒で流下させ、１画分
約２Ｑずつ分取し、６個の画分に分画した。その内の画
分５および６を、それぞれ粗１−リテルペノイドサポニ
ン■またはＩＩとして得る。

得られた粗トリテルペノイドサポニンＩおよび■は、既
知のサポゲノール（非糖部）と新規のサポゲノールとを
与える。即ち、これを２Ｎ　ＨＣ，Ｑ　−ＭｅＯＨ中で
煮沸還流し、中和、脱塩、溶媒留去した後、シリカゲル
カラムクロマトグラフィーを用い、ｎヘキサン−アセト
ン（５：　１）混合溶媒で流下させ、各画分を再カラム
クロマ１−グラフィーにかけあるいは化学修飾（例えば
、常法によるアセチル化など）を行い、既知の１〜リテ
ルペノイドアグリコン（ソホラジオール、ソヤサポゲノ
ールＡおよびＢ、カント丘エンジストリオール、クズサ
ポゲノールＡ）を”Ｈ，１３Ｃ−ＮＭＲおよびＴＬＣで
同定すると共に、サポゲノール１〜７およびそれらの一
部のアセチル化体を得た。

（以下余白）構造式１の化合物のアセチル化体：性状：無色針状晶１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣＱ　３．４００ＭＨｚ）　：δ：
５．２８（ＬＨ，ｂｒ　ｔ、　Ｊ＝３．５Ｈｚ、　Ｈ−
１２）、　４．６６（Ｉｌｌ、　ｔ、　Ｊ＝３．７Ｈｚ
、　Ｈ−２２）、　４．５０（］、Ｈ，ｄｄ、ｌ、　Ｊ
５．５，１０．６Ｈｚ、　Ｈ−３）、　３．６７．３．
７３（２Ｈ，ＡＢｑ、Ｊ＝１１．０Ｈｚ、　Ｉ（−２９
）構造式２の化合物：性状：無色針状晶旋光度：　［α］ｏ＋２６．１″（ｃ＝０．３５．ピリ
ジン）融点：２７８〜２８０°Ｃ ”’Ｃ−ＮＭＲ’（ピリジン−ｄ５）：δ：３８．９；
　２８．１．８０．１．４３．２．５６．３．１９．０
゜３３．５．４０．０．４８．１．３７．０．２４．ｉ
、　１２２．４゜１４４．９．４２．４．２６．４．２
８．９．３８．３．４４．８゜４］、、５．３６．５．
３７．３．７５．６．２３．５．６４．４゜１６．３．
　］、７．１．２５．５．２４．５．７３．０．２１．
１　（Ｃ。

Ｃ３０）構造式２の化合物のアセチル化体：性状：無色針状晶旋光度：　［（Ｅ］Ｄ＋６１．３°（ｃ＝０．５．ＣＨ
ＣｆｌｌＩ）融点：１５６〜１５７°Ｃ１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣＤ、、４００ＭＨｚ）：δ：５．
２８（ＩＨ，ｂｒ　ｔ、　Ｊ＝３．３Ｈｚ、、　Ｈ−１
２）、４．７１（］Ｈ，ｔ、　Ｊ＝３．５Ｈｚ、　Ｈ−
２２）、　４．５９（］、Ｈ，ｄｄ、　Ｊ５．５，１０
．６Ｈｚ、　）ｌ−３）、　４．１４，４．３７（２Ｈ
，ＡＢｑ、　Ｊ＝］、１．５）１ｚ、　Ｈ−２４）、　
３．６７．３．７３（２Ｈ，ＡＢｑ、　Ｊ＝１．０．６
１（ｚ）構造式３の化合物のアセチル化体：性状：無色針状晶 ’　Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣＤ　３．４００ＭＩ（ｚ）　：
δ：５．２９（ＬＨ，ｂｒ　ｔ、　Ｊ＝３．３Ｈｚ、　
１ｌ−３）、　５．１７（’］）Ｉ、　ｄ、　Ｊ＝３；
３ｌ−１ｚ、　Ｈ−２２）、　４．９７（Ｉｌｌ、　ｄ
、　、１７Ｈｚ、　Ｈ−２１）　、　４．５０（ＬＨ，
ｄｄ、　Ｊ＝５．５，１０．６Ｈｚ。

Ｈ−３）　、　３．５５，３．８７（２Ｈ，ＡＢｑ、　
Ｊ＝１１．０Ｈｚ、　Ｈ−２９）構造式４の化合物：性状：無色針状晶旋光度＝［αコｏ＋７６．７°（ｃ＝０．３．ピリジン
）融点：２９０〜２９１°Ｃ１３Ｃ−ＮＭＲ（ピリジン−ｄ、）： δ：３９．２，２８．１，７８．１，３９．４，５５．
８，１８．８゜３３．２，４０．０，４８゜１，３７．
２，２３．８，１２２．８゜１４４．７，４２．４，２
６．４，２８．５，３８．１，４５．２゜４２．１，３
５．９，３８．７，７５．２，２８．７，１５．８゜１
６．６．１７．２．２５．８．３０．０．２１．３．７
０．２　（Ｃ１Ｃ３ｏ）構造式４の化合物のアセチル化体：性状：無色針状晶旋光度：［（Ｅ］Ｄ＋７６．５°（ｃ−０−５、’　Ｃ
ｌＩＣＱ　３　）融点＝２２２〜２２４℃ １Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣρ３．４００Ｍ１１ｚ）　：δ：
５．２３（ＩＨ，ｂｒ　ｔ、　Ｊ＝４ｔｌｚ、　Ｈ−１
：ｌ’）、　４．６６（ＩＨ。

ｔ、　Ｊ＝３Ｈｚ、　Ｈ−２２）、　４．５０（１Ｂ、
　ｄｄ、　Ｊ−４，８Ｈｚ。

Ｈ−３）、　３．９９，４．１２（２Ｈ，ＡＢｑ、　Ｊ
＝１．］、Ｈｚ、　Ｈ−３０）構造式５の化合物：性状：無色針状晶旋光度＝［α］Ｄ＋６７．７°（ｃ−０，５，ＣＩ＋ａ
Ｏ’Ｈ）融点＝２４９〜２５２°Ｃ１３ｃｍＮ阿Ｒ（ピリジン−ｄ５）： δ：３８．！’］、　２８．４．８０．１．４３．２．
　’５６，４．．１９．２゜３３．５，４０．０，４８
．１，３７．０，２４．１，１２２．７゜１４４．７．
４２．４．　２６．４．　２８．７．３８．１．４５．
２゜４２．１，３５．９．３ｇ、８，７５．２，２３．
６，６４．６゜１６．３．１７．１．２５．１１．　２
８．５．　２１．３．７０．３　（Ｃ。

Ｃ３０）構造式５の化合物のアセチル化体：性状：無色針状晶旋光度：［αコＤ＋７２．２６（Ｃ＝０．５．　ＣＨＣ
Ａ３）融点：２８３〜２８５℃ ”　Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣＱ　３，４００ＭＨｚ）　：δ
：５．２６（ＩＨ，ｂｒ　ｔ、　Ｊ＝３．３Ｈｚ、　Ｈ
−１２）、　４．６６（ＩＨ，ｔ、　Ｊ＝３．３Ｈｚ、
　Ｈ−２２）、　４．５９（ＩＨ，ｄｄ、　Ｊ＝５．１
，１０．８Ｈｚ、　Ｈ−３）、　４．１１，４．３７（
２Ｈ，ＡＢｑ、　Ｊ−１０，８Ｈｚ、　Ｈ−２４）、　
３．９９，４．１４（２Ｈ，ＡＢｑ、　Ｊ］０．ｌｔ＋
ｚ、　Ｈ−３０）構造式６の化合物：性状：無色針状晶旋光度＝［αコｏ　−５，３３°（ｃ＝０．３．ＣＨ３
０Ｈ）融点：２３１〜２３３℃ Ｘ線解析：別図参照構造式６の化合物の３−〇−モノアセチル化体：性状：
無色針状品旋光度＝［αコｏ−２９．６°（ｃ＝０．５．ｃＨｃＱ
３）融点：２４２〜２４４℃ ”Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣＱ　３．４００ＭＨｚ）　：δ：
４．５１（ＩＨ，ｄｄ、　Ｊ＝７．１０）１．ｚ、　＋
１−３）、　３．５５（ｉｌｌ。

ｄｄ、　Ｊ＝７．］ＯＨｚ、　Ｈ−２２）構造式７の化
合物：性状：無色針状晶旋光度：［αコｏ＋１５．４°（ｃ−１−１、Ｃ）ＩＣ
Ｑ　３　）融点：６６〜６７℃ ！３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣΩ３）： δ：３８．６．２７．２．７８．９．３８．８．５５．
３．１８．３゜３２．７．３９．６．４７．６．３７．
０．２３．５．１２３．７゜１４１．６．４１．９．２
５．３．２８．１．４７．６．４７．６゜４６．７．３
２．０．５０．８．２１６．５．２７．２．１５．５゜
１５．５．１６．８．２５．４．２９．７．３４．１．
２０．５　（Ｃ工Ｃ３ｏ）［化合物６のＸ線解析］結晶データＣａ、ＨｓｏＯｚ’Ｈ２０，阿、Ｌ　　４６０．７．ｍ
ｏｎｏｃｌｉｎｉｃ。

Ｐ２□、　ａ＝１５．１９９（２）、　ｂ−１２，１１
５（２）、　ｃ＝７．２４４（１）、　　β＝９５．７
５（１）、　Ｖ＝１３２７．１．　ｚ＝２．　Ｄｘ＝１
．１５２ｇ／ｃｎ？、Ｆ（ｏｏｏ）＝５１２．　　μ＝
０．５１８ｍｍ−１（ＣｕＫ　ａ　、　　λ＝１．５４
１８人）。

観測反射数　１９３４　　　　　最終Ｒ値　０．０５ｇ
〔アセチル化体〕ＣＯＨ体〕また、粗トリテルペノイドサポニンＩおよび■のフラク
ションをメチルエステル化すると、前記構造式Ａで示さ
れる新規サポニンＡを与える。メチルエステル化反応は
、このフラクションに０．１ＮＨＣΩ−ＭｅＯＨを加え
て還流温度で還流することにより行われ、反応混合物は
シリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、クロロホ
ルム−メタノール−水（７：　３　：　０．２）の混合
溶媒で流下させ、得られた画分から通常の方法に従い、
サポニンＡを分離する。

サポニンＡ：性状：無色針状晶旋光度：［αコｏ−７．９°（ｃ＝０．５３．ピリジン
）融点：２６６〜２６８℃（分解点）１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣＱ　３）　： δ：３８．６．２０．９．９０．０．３９．４．５５．
７．１８．７゜３３．０．３９．８．４７．７．３６．
６．２３．６．１２２．３゜１４４．６．４２．１．２
６．２．２８．５．３７．７．４５．１゜４６．５．３
０．６．４２．０．７５．４．２８．２．１５．５゜１
６．６．１７．０．２５．５．２８．５．３３．０．２
０．９（サポゲノールＣ□−Ｃ３，）、　１０５．２．
７７．９．７６．５゜７３．０．７７．９．１７０．４
（ｇｌｃＵＡ、Ｍｅ　１−６）、　１０１．７゜７５．
８．８４．５．６９．０．７５．４．６１．９（ｇａｌ
　１−６）。

１０５．２，７５．４，７８．１，７１．２，７８．１
，７４．６゜７８．１．６２．２（ｇｌｃ　１−６）、
　　１０２．１．７２．０．７２．４゜７４．１．　６
９．６．　１．８．３（ｒｈａ　　１−６）。

〔発明の効果〕

鶏骨草の低級アルコール抽出エキスの水と分配されたｎ
−ブタノール層エキスから採取され、いずれも前記サポ
ゲノール１〜７およびサポニンＡを含有している粗トリ
テルペノイドサポニンＩおよび■は、肝機能障害予防改
善剤として有効な薬効を有する。

これを肝機能障害予防改善剤として人間に投与する場合
には、その有効投与量は患者の年齢、体重、疾患の程度
などによっても異なるが１通常酸人で１日量として約３
５０〜７００■を３〜４回に分け、経口的に服用するの
で適当である。

また、この薬剤の安全性を知る目的で、急性投与での急
性毒性試験をｄｄｙ系マウスについて行ない、毒性が低
く安全性の高い薬剤であることを確認した。

〔実施例〕

次に、実施例について本発明を説明する。

実施例乾燥鶏骨草４Ｋｇを、水浴温度８０℃で６Ｑのメタノー
ルで還流抽出する。このような操作を３回くり返した後
溶媒を留去し、メタノールエキス１２２ｇを得た。この
エキスを等量比のｎ−ブタノールと水で分配し、水層エ
キス４９ｇおよびｎ−ブタノール層エキス７２ｇとに分
けた。

ｎ−ブタノール層エキスをシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィーにかけ、クロロホルム−メタノール−水（７：
　３　：　０．５）混合溶媒で流下させ、１画分約２Ｑ
ずつ分取して得られた６個の画分の内の画分５および６
として、それぞれ粗トリテルペノイドサポニンＩ　４．
４０ｇおよびｎ１３．２４ｇを分離した。

この粗トリテルペノイドサポニンＩおよび■は、酸加水
分解により既知のサポゲノール（非糖部）と新規のサポ
ゲノールとを与える。即ち、上記サボ二ン画分を、２Ｎ
　ＨＣｆｌ−ＭｅＯＨ中で２時間煮沸還流し、中和、脱
塩、溶媒留去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフ
ィーを用い、ｎ−ヘキサン−アセトン（５：１）混合溶
媒で流下させ、各画分を再カラムクロマトグラフィーに
かけあるいは化学修飾（例えば、常法によるアセチル化
など）を行い、既知のトリテルペノイトアグリコン（ソ
ホラジオール、ソヤサポゲノールＡ、同Ｂ、カントニエ
ンシストリオール、クズサポゲノールＡ）と共に、サボ
ゲノール１〜７およびそれらの一部のアセチル化体を得
た。

また、前記サポニンフラクション（粗トリテルペノイド
サポニン■および■）のメチルエステル化を次のように
して行い、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを用い
て、新規サポニンＡを得た。

即ち、上記サポニンフラクションに０．ＩＮ　ＨＣＱ　
−ＭｅＯＨを加えて、２０分間水浴上にて煮沸還流し、
再度シリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、クロ
ロホルム−メタノール−水（７：　３　：　０．２）混
合溶媒で流下させ、得られた画分から通常の方法に従い
、新規サポニンのメチルエステル体（サポニンＡ）を分
離した。

［薬効試験］５週令のｄｄｙ系雄性マウスを購入し、約１週間予備飼
育した後、６週令で試験に供した。

５つの群に対する投与物対照群：　０．５％ＣＭＣ−Ｎａ水溶液を１０ｍ　Ｑ　
／Ｋｇの割合で、１日１回、３日間連続経口投与し、最
終投与２時間後にオリーブ油を５ｍ　Ｑ　／Ｋｇの割合
で腹腔内投与する。

ＣＣＱ４対照群：対照群の投与において、オリーブ油の
代わりに、ｃｃ　ｎ　４を０．７５容積％になるように
オリーブ油に溶解したものを５ｍ　Ｑ　／Ｋｇの割合で
腹腔内投与する。

粗サポニンＩ＋ＣＣＬ群、粗サポニンｎ＋ｃｃＱ。

群およびＤｓ−ｔ　＋　ＣＣＱ　４群：各被験物質（凍
結乾燥品）Ｉｇを０．５％ＣＭＣ−Ｎａ水溶液２０ｍ氾
中にけん濁し、１０ｍ氾／Ｋｇの割合で１日１回、３日
間連続経口投与し、最終投与２時間後に、気炎剤のｃｃ
　ｎ　４を０．７５容積Ｘになるようにオリーブ油に溶
解したものを５ｍ　ｎ　／Ｋｇの割合で腹腔内投与する
。

ＣＣＱ４投与２４時間後に、エーテル麻酔下に上大静脈
より血液約１ｍｆｌを採血し、肝臓を摘出した血液は遠
心分離しく３０００ｒｐｍ、１０分間）、得られた血清
についてＧＯＴおよびＧＰＴ活性を自動分析装置（日立
製作所層７３６−１０型）を用いて測定した。また、摘
出した肝臓については、重量測定を行った。

なお、各偏差値については、平均および標準偏差を求め
、各被験物質投与群と対照群またはＣＣＱ４投与群との
有意差を５ｔｕｄｅｎｔのｔ−ｔｅｓｔにより検定し、
下記の式により抑制率を算出した。

上昇抑制効果が認められた。具体的には、ＣＣＩＩ４対
照群のＧＯＴまたはＧＰＴ活性の上昇に対して、粗サポ
ニン■投与群では、１４．３５％のＧＰＴ活性の上昇抑
制率が、粗サポニン■投与群では、２４．２７％のＧＯ
Ｔ活性の上昇抑制率および２４．９５％のＧＰＴ活性の
上昇抑制率がそれぞれ得られた。

（以下余白）Ａ：気炎側単独投与群Ｂ：対照群Ｃ：被験物質および気炎剤投与群下記衣に示された結果から、ＣＣμ、対照群、粗サポニ
ンＩ、同■投与群のいずれにおいても、対照群と比較し
て、ＧＯＴおよびＧＰＴ活性の上昇抑制効果が認められ
た。また、ＣＣＵ　４対照群と比較して。

すべての被験物質投与群で、ＧＯＴまたはＧＰＴ活性の
手続補正書（方式）％式％発明の名称肝機能障害予防改善剤の製造法補正をする者事件との関係　　特許出願人名称　日本メクトロン株式会社

Claims

【特許請求の範囲】１、鶏骨草の低級アルコール抽出エキスをｎ−ブタノー
ルと水とで分配し、分配されたｎ−ブタノール層エキス
をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、クロロ
ホルム−メタノール−水（７：３：０．５）混合溶媒で
流下し、分画された６個の画分の内の画分５を粗トリテ
ルペノイドサポニン I として採取することを特徴とす
る肝機能障害予防改善剤の製造法。２、鶏骨草の低級アルコール抽出エキスをｎ−ブタノー
ルと水とで分配し、分配されたｎ−ブタノール層エキス
をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、クロロ
ホルム−メタノール−水（７：３：０．５）混合溶媒で
流下し、分画された６個の画分の内の画分６を粗トリテ
ルペノイドサポニンIIとして採取することを特徴とする
肝機能障害予防改善剤の製造法。