JPH02215721A - 制癌剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は制癌剤に関し、更に詳細には強い制癌効果を有
し、しかも副作用の少ない制癌剤に関する。

［従来の技術及びその謀頴］ 癌は科学技術の進歩のめざましい今日にあっても人類が
未だ克服することのできない難病の一つであり、癌を克
服するために底知れぬ努力がはられれ、これまで数多く
の治療法が実施されてきた。

この中で化学療法の手段として多くの制癌剤が世に出さ
れてきた。

しかしながら、今日臨床において応用されている制癌剤
は、効果と副作用の諸刃の剣で癌に立向かうものであり
、今のところ十分満足の行く制癌剤は見出されていない
。

一方、近年になって菌界、地衣界、植物界から得られる
多糖類の中に制癌活性を持つものが見出され、すでに一
部のものについては臨床の場で応用されている。これら
の多糖類の大部分はβ−（ｌ→６）　〈１→３）−グル
カン、β−（１→℃）−グルカン、β−（１−３）−グ
ルカン等グルコースを構成糖とするホモ多糖類である。

しかしながら、これら多糖類はアルキル化剤、代謝拮抗
剤、抗生物質、アルカロイド、ホルモン製剤等に比べて
副作用が少ないという利点を有するが、制癌剤としての
効果は必ずしも満足の行くものではなかった。

また、従来の多糖類は天然または自然条件下で栽培され
る植物体から抽出により得られるものであり、抽出、精
製に大変手間がかかるばかりでなく、植物の産地、収穫
時期、栽培方法、天候等の違いにより成分そのものが異
なり、均一の多糖類が得られないという欠点を有してい
た。

［課麗を解決するための手段］ 本発明者は上記課題に鑑み鋭意研究を行った結果、アラ
ビノース、マンノース、ガラクトース、グルクロン酸及
びキシロースを構成成分として含有する特定の酸性ヘテ
ロ多糖類が強い制癌効果を有し、しかも副作用が少なく
、均一なものが得られ、制癌剤の有効成分として有用で
あることを見出し本発明を完成した。

すなわち、本発明はアラビノース、マンノース、ガラク
トース、グルクロン酸及びキシロースを構成成分として
含有し、それらの結合様式と構成比が ＾ｒＢ　ｌ　−＋　：　−＋　３＾ｒａｌ−＋　：　　
Ｇａｊ！　１　　→　：　−＋３Ｍａｎｌ　　−＋：↑ 一４Ｇ１ｃｔｌ＾１−：　　Ｘｙｌ　１　−＝１．６　
〜２．４：１．２　〜↑ ２．０：１．０　〜１．８：１．４　〜２．２：１．４
　〜２．２：０．１〜０．３ であり、分子量がｌＸｌ０’〜２Ｘ１０’である酸性ヘ
テロ多糖類を有効成分として含有することを特徴とする
制癌剤を捷供するものである。

本発明の有効成分である多糖類は、例えば、次の様にし
て製造することができる。すなわち、ポリアンテス属に
属する植物を用い、該植物から誘導さ°れるカルスを植
物ホルモン含有培地で培養し、その培養物から多糖類を
採取することによって製造される。

ポリアンテス属に属する植物としては、例えばチエ−ベ
ローズ（Ｐｏｌｉａｎｔｈｅｓ　ｔｕｂｅｒｏｓａ　Ｌ
、）が挙げられる。これは、その花、茎、葉、鱗茎、根
等の器官または組織の一部が外植片として使用されるが
、就中特に花の一部が好ましい。

カルス誘導用の基本培地としては、植物組織培養に通常
用いられるＭｕｒａｓｉｇａ　−Ｓｋｏｏｇの培地、Ｌ
ｉｎｓｍａｉｅｒ　−Ｓｋｏｏｇの培地、Ｇａｍｂｏｒ
Ｈの培地、Ｗｈｉｔｅの培地、Ｔｕｌｅｅｋａの培地、
Ｎ１ｔａｃｈ＆　Ｎ１ｔｓｃｈの培地などが用いられう
る。

この基本培地には植物ホルモンを添加する必要があり、
植物ホルモンとしては、２．４−ジクロロフェノキシ酢
！　（２，４−Ｄ）　、α−ナフタレン酢酸（Ｎ＾＾）
、インドール酢１！２（Ｉ＾＾）、インドール酪酸（１
０＾）等のオーキシン類；フルフリルアミノプリン（カ
イネチン）、ベンジルアデニン（Ｂ＾）、ジメチルアミ
ノプリン（２ｉＰ）等のサイトカイニン類が挙げられる
。その中でも、２．４−Ｄ単独、もしくはＮ＾＾とＢ＾
の組合わせ、またはＮ＾＾とカイネチンの組合わせが良
好な結果を与える。カルス誘導に必要な植物ホルモン濃
度は、２．４−Ｄ単独の場合は５Ｘ１０−’Ｍ、からＩ
　Ｘ　１０−’Ｍ。

Ｎ＾＾とＢ＾またはＮ＾＾とカイネチンの組合わせの場
合は、ＮＡ＾の濃度は５　Ｘ　１０−’ＭからｌＸｌ０
−’Ｍ、Ｂ＾またはカイネチンの濃度はｌＸｌ０−’Ｍ
からＩ　Ｘ　１０−’Ｍである。

カルス誘導培地には上記の基本培地と植物ホルモンのほ
かに炭素源として糖が加えられる。糖としては、クルコ
ース、フラクトース、マンノース、キシロース、サッカ
ロース、ラムノース、フコース、デンプンなどが挙げら
れるが、通常はサツカロースが用いられる。

カルス誘導は固体培地でも液体培地でも可能であるが、
通常は固体培地が用いられる。

誘導されたカルスは上記のカルス誘導培地で同じ形態を
維持したまま１０代以上にわたって継代培養をすること
ができる。縫代培養用の培地としては、通常基本培地と
してＬｉｎｓｍａｉｅｒ　−Ｓｋｏｏｇの培地、Ｍｕｒ
ａｓｉｇｅ　−Ｓｋｏｏｇの培地、植物ホルモンとして
Ｉ　Ｘ　１０−’　〜Ｉ　Ｘ　１０−’Ｍの２．４−Ｄ
またはｌＸｌ０−’〜Ｉ　Ｘ　１０−’ＭのＮＡＡとｌ
Ｘｌ０−４〜Ｉ　Ｘ　１０−’ＭのＢ＾、炭素源として
は、グルコース、フラクトース、マンノース、キシロー
ス、サッカロース、ラムノース、フコース、デンプン等
が用いられるが、就中サッカロースが好ましく、その添
加量は１〜６重量％（以下、単に％という）が好ましい
。

カルスから多糖類を製造するには、カルスを寒天培地等
の固体培地、液体培地で培養するが、就中液体培地で培
養するの゛が好ましい。

基本培地としてはカルス誘導培地と同じもの、例えばＭ
ｕｒａｓｉＢｅ　−Ｓｋｏｏｇの培地、Ｌｉｎｓｍａｉ
ｅｒ　−３ｋｏｏｇの培地、Ｇａｍｂｏｒｇの培地、Ｗ
ｈ　ｉ　ｔｅの培地、Ｔｕｌｅｃｋｅの培地、Ｎ１ｔｓ
ｃｈ＆　Ｎ１ｔｓｃｈの培地などが用いられつるが、就
中Ｍｕｒａｓｉｇｅ　−Ｓｋｏｏｇの培地、Ｌｉｎ５ｍ
１ｅｒ　−Ｓｋｏｏｇの培地が好ましい。

植物ホルモンの種類及び濃度は多糖類の生産性に関係が
あり、例えば２．４−Ｄ、ＮＡＡ、［Ａ＾、ＩＯＡ等の
オーキシン類；カイネチン、Ｂ＾、２１Ｐ等のサイトカ
イニン類；ジベレリン＾ａ（Ｇ＾、）等のジベレリン類
等が使用される。この中で、２．４−〇、Ｎ＾＾を単独
で、またはＮＡＡと口＾もしくはカイネチンを組合わせ
て用いるのが好ましい。その濃度は、２．４−Ｄ又はＮ
ＡＡを単独で用いる場合は５　Ｘ　１０−’ＭからＩ　
Ｘ　１０−’Ｍ、特に５ＸＩＯ−’Ｍから５Ｘ１０−’
Ｍが、　ＮＡＡとＢ＾またはＮＡＡとカイネチンを組合
わせて用いる場合には、ＮＡＡの濃度は１×１０−４＆
ｌから１．　Ｘ　１０−’　Ｍ、特に１×１０−’Ｍか
ら５　Ｘ　１０−’Ｍ、口＾またはカイネチンの濃度は
５Ｘ１０−’ＭからＩ　Ｘ　１０−’Ｍ、特にｌＸｌ０
−’ＭからＩ　Ｘ　１０−’Ｍが好ましい。

炭素源としては、グルコース、フラクトース、マンノー
ス、キシロース、サッカロース、ラムノース、フコース
、デンプンなどが用いられる。多糖類の生産は添加する
炭素源の種類にはあまり強く影響されるものではなく、
通常サッカロースが用いられる。炭素源の濃度と多糖類
の生産量との間にもあまり深い関係はないが、一般には
１〜６％が好ましい。

培養法は特に制限されないが、通常、２０〜３０℃の温
度で１５〜３０日間行うのが好ましく、また振とう培養
が好ましい。

このようにして得られた培養物から多糖類を採取するに
は、例えば培養物から細胞を遠沈又はろ過等によって除
去したのち、培養液をロータリーエバポレーター等を用
いて濃縮し、濃縮液にエタノールを加えて沈澱させ、沈
澱物を凍結乾燥することによって行われる。

上記多糖類の精製は、通常の多糖類の精製法に従って精
製することができる。例えば、粗精製の上記多糖類を水
に溶解し、遠心分離して不溶物を完全に除去し、透析あ
るいはイオン交換樹脂を用いる方法によって高純度精製
品を得ることもできる。

畝上の方法により得られる多糖類中には、本発明制癌剤
の有効成分であるペテロ多糖類が含まれている。このも
のは、２ＮのＨ，ＳＯ，を用い、１００℃、８時間加水
分解したあと、酢酸エチル：ピリミジン：酢酸：水＝５
：５：１：３の混合比の展開溶媒を用いて薄層クロマト
グラフィーを行い、アニリン：ジフェニルアミン：アセ
トン：燐酸試薬で呈色させるとアラビノース、マンノー
ス、ガラクトース、グルクロン酸、キシロースが検出さ
れた。また、ガスクロマトグラフィーによる分析結果か
らも、アラビノース、マンノース、ガラクトース、グル
クロン酸、キシロースが構成糖として含まれることが確
認された。そして、箱守法によるメチル化、加水分解の
後のガスクロマド分析（ＧＣ−ＭＳ法）によれば、その
結合様式と構成比は、 ＾ｒＢ　ｌ　−＊　：　−ｂ　３＾ｒａｇ、−４：　　
Ｇａｌ１ｌ　　→：　→３Ｍａｎｌ　　→↑ ：　−４Ｇｆ　ｃｔｌＡｌ　−：　ＸｙＪ！　１　−＝
１．６　〜２．４　　：　１．２↑ 〜１．６：１．０　〜１．４：１．４　〜２．２：１．
４　〜２．２：０．１　〜０．３ であることが認められた。また、グルクロン酸のカルボ
キシル基はその０〜５０％がメチルエステル体として存
在する。更に、本発明の有効成分である多糖類は陰イオ
ン交換樹脂等に吸着するので酸性であると判断された。

更にまた、高速液体り０７トグラフイー（東回！！Ｌｕ
ＴＳにＧｅｔ　４０００ＰＮ、　５０００ｐＨ，６００
０ＰＭのカラムを用いる）によれば、その分子量は１．
ＯＸ　１０　’〜２．０Ｘ１０’であった。

この酸性ヘテロ多糖類は、更に次の物理化学的性質を有
する。

溶媒に対する溶解性 水に可溶で、エタノール、エーテル、アセトンに不溶で
ある。

呈色反応 アンスロン反応：ｌｌ！性 カルバゾール反応：陽性 エルソンーモルガン反応：　陰性 色および形状 エタノール沈澱を経たものは白色ないし灰白色粉末であ
る。

透析を経てイオン交換により精製し、凍結乾煙を経たも
のは白色綿状または繊維状である。

比旋光度 〔α］！５．０〜＋２０（ｃ＝１．０、水溶液）赤外吸
収スペクトル 赤外吸収スペクトルは第１図に示すとうりである。

核磁気共鳴スペクトル ｌ″Ｃ−核磁気共鳴スペクトルは第２図に示すとうりで
ある。（溶媒二〇２０、チューブ５　ｎｕａ、内部標準
ジオキサン） また、本発明の酸性ヘテロ多糖類は、次の繰返し構造を
有する。

→　４　）　−β−ローＧβ　ａｌｌ＾（１−２）−α
−０−Ｍａｎ（１−〜１２４頁、１９８３年）　、Ｄｒ
ｏｓｅｒａ　ｂｉｎａｔａから得らＲＲ Ｒ：Ｌ−＾ｒａｌ→、　　　　　　　　　　　　　　　
　■ローＧａ１　（１−＝３）＾ｒａｔ−＋、　　　　
　　　　　　　　　　　　■Ｄ−ＧａＪ１　→、　　　
　　　　　　　　　　　　　■し一へｒａ（１→３）−
Ｌ−Ａｒａｌ−１または　　■ＸｙＡ１　→　　　　　
　　　　　　　　　　　　■モしてＲの構成比は、■：
■：■：■：■＝１．２〜１．６：０．８〜１．２：０
．４〜ｏ、ｇ：ｏ、４〜０．８：０．０５〜０６１５で
ある。

本発明の有効成分である酸性ヘテロ多糖類が新規である
ことは、特願昭６３−２２６２１号ですでに述べた通り
他の多糖類との比較から明らかである。すなわちζ本発
明の酸性ヘテロ多糖類に含まれるグルクロノマンナン構
造〔→２）α−Ｄ−Ｍａｎ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇ１
ｃｕ＾−（１−〕を部分構造として持つ公知ｈｙｄｅ、
Ｒｅｓ、　　９１巻、４９〜５８頁、１９８１年；＾に
ＩＹＡＭＡら＾ｇｒｉｃ、　Ｄｉａｌ、　Ｃｈｅｍ、　
４８巻、２号、４０３〜４０７頁、１９８４年）などが
知られている。

しかしながら、口ｒｏｓｅｒａ　ｃａｐｅｎｓｉｓ、　
Ｄｒｏｓａｒａｂｉｎａｔｅから得られる多糖類は、主
な結合様式に一２Ｍａｎｌ−，−４Ｇ１　ｃＵＡｌ−が
あり、−３＾ｒａｌ−がないという点であきらかに本発
明の酸性ヘテロ多糖類と異なる。Ｎ１ｃｏｔｉａｎａ　
ｔａｂａｃｕｍの多糖については、ＣＨＡＮＮＢらの報
告では主な結合様式に一３＾ｒａｌ−がないということ
、また八ＫＩＹＡＭＡらの報告では主な結合様式に一４
Ｇｉ！ｃロ＾１−　−２Ｍａｎｌ−−５＾ｒａｌ−があ
り、−３＾ｒａｌ−がないという点で本発明の酸性ヘテ
ロ多糖類とはあきらかに異なる。従って本発明の有効成
分である酸性ヘテロ多糖類は、従来得られたものとは異
なる新規な酸性ヘテロ多糖類であるといえる。

これら多糖類を含有する本発明制癌剤は、非経口投与剤
として用いることが好ましい。本発明に用いる多糖類は
水溶性であるため、静脈注射剤又は点滴剤と混合して静
脈注入が可能である。しかし、水溶液とした場合、高濃
度であると粘性が高くなるため、濃度は５％以下が好ま
しい。特に、静脈に直接注射する場合及び点滴剤と混合
して用いる場合は１％以下が好ましい。

投与量は、成年男子１週あたり２〜５ｍｇとし、１回当
たりの投与量は１ｍｇ前後とすることが好ましい。

［発明の効果］ 本発明制癌剤は、現存の制癌剤に比べ副作用が極めて少
なく、且つ制癌効果が高い。しかも、必須成分である多
糖類は植物組織培養法の応用により均一に製造すること
ができる。

［実施例］ 次に、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、
本発明はこれらに限定されない。

実施例１ 多糖類の製造： ポリアンテス属に属する植物として、チューベローズ（
Ｐｏｌｉａｎｔｈｅｓ　ｔｕｂｅｒｏｓａ　Ｌ、）を用
いた。カルスは滅菌したチューベローズの開花２〜７日
前の蕾みを植物ホルモンとしてＩ　Ｘ　１０−’ＭのＮ
＾＾とｌ　Ｘ　１０−’ＭのＢＡを含み、炭素源として
３％のサッカロースを含むＬｉｎｓｍａｉｅｒ−３ｋｏ
ｏｇの培地（寒天培地）を用いて誘導した。誘導された
カルスは同培地で継代培養した。数代以上に継代し安定
化したカルスを植物ホルモンとしてｌＸｌ０−’Ｍの２
．４−Ｄ含み、炭素源として５％のサッカロースを含む
しｉｎｓｍａ　ｉｅｒ−Ｓｋｏｏｇの培地（液体培地）
に５％濃度となるよう接種した。培養は暗所にてロータ
リーシェーカーを用いて振とう数１２゜ｒ、ρ、ｆｆ１
１．２７±１℃で３０日間行なった。この後、濾過及び
遠心分離により、培養液からｍ胞を取除き、これをロー
タリーエバポレーターを用いて濃縮した。この濃縮液に
約３倍量のエタノールを加え、５℃で２４時間静置し沈
殿を得た。この沈殿を遠心分離によって回収し、７０％
エタノールで３回洗浄した後、凍結乾燥により水分を除
去し、目的とする多糖類を得た。

以上の操作を５回行ない、ロフトによる多Ｉｉ類収量、
全糖量、ウロン酸量、蛋白質量、水分量、中性糖組成比
の変動を比較した。結果を表１に示す。

表１ 以下余白 ＊＾「ａを１０とした時のＸｙｊ！、Ｍａｎ、　Ｇａｌ
の比率表１より、上記製造法により得ｄだ多糖類は完全
人工制御下での培養によって得られるためロフトによる
多糖類収量、全糖量、ウロン酸量、蛋白質量、水分量、
中性糖組成比の変動は少なく、均一性の高いものである
ことが判る。

実施例２ サルコーマ１８０　（腹水ｆｉ）に対する効果：生後５
週間のＩＣＲ系雌マウス各群１６匹ずつ計３２匹の腹腔
内に、ＩＣＲ系雌マウスの腹腔内で継代したサルコーマ
１８０細胞をｌＸｌ０’個接種した。実施例１の■で得
た酸性ヘテロ多糖類を所定の濃度（９ａ１ｇ／ｍｆ）に
なるよう生理食塩水に溶解し、０．４ｄ！／匹ずつサル
コーマ１８０ｉ１ｆｌ胞の接種日から毎日１回５日間上
記マウスの一群に腹腔内投与した。５日間の合計投与量
は１８ａ＋ｇ／ｋｇであった。一方、対照群は同時期に
生理食塩水のみを投与した。生存率の変化を第３図に示
す。

第３図から明らかなように、本発明制癌剤の制癌作用は
顕著であり、接種後２６日目において本発明制癌剤投与
群の生存率が７５％であるのに対し、対照群のそれは６
％であった。

実施例３ サルコーマ１８０（固型癌）に対する効果：６退会のＩ
ＣＲ系雌マウスを本発明制癌剤投与群４匹及び対照群５
匹に分け、両投与群マウスの鼠瞑部皮下に、ＩＣＲ系雌
マウスの腹腔内で継代したサルコーマ１８０細胞を５Ｘ
１０’個接種した。実施例１の■で得た酸性ヘテロ多糖
類を所定の濃度（１，２５ｍｇ　／　ｍｌ　＞になるよ
う生理食塩水に溶解し、０．４ｍｅ／匹ずつザルコーマ
１８０細胞の接種日から２４時間後より毎日１回１０日
間上記マウスの一群に腹腔内投与した。１０日間の合計
投与量は５　ｍｇ　／　ｋｇであった。一方、対照群は
同時期に生理食塩水のみを投与した。５週間後に、両群
の体重及び腫瘍重量を測定し阻止率を下記式により求め
た。結果を表２に示す。

対照群の腫瘍重量−投与群の腫瘍重量 阻止率＝ 対照群の腫瘍重量 表２ 以下余白 表２から明らかなように、本発明制癌剤はサルコーマ１
８０　（固型癌）に対し、高い抑制効果を示した。

実施例４ 急性毒性試験ニ ア退会のＩＣＲ系雌マウス５匹を用いて、急性毒性試験
を行なった。実施例１のＩで得た酸性ヘテロ多糖類の１
９．７ｍｇ　／　ｔｎ　Ｉ液を２時間間隔で４回全投与
量力月０００ｍｇ／ｋｇとなるようマウスに腹腔内投与
した。

その結果、７日目において全てのマウスが生存しており
、投与後の全身症状にも変化は認められなかった。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の有効成分である酸性ヘテロ多糖類の
赤外線吸収スペクトルを示す図面であり、第２図はこの
多糖類の１１Ｃ−核磁気共鳴スペクトルを示す図面であ
る。第３図は、本発明制癌剤のサルコーマ１８０（腹水
癌）に対する制癌効果（生存率）を示す図面である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ポリアンテス属（ＰｏｌｉａｎｔｈｅｓＬ．）に属
   する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性
   ヘテロ多糖類を有効成分として含有することを特徴とす
   る制癌剤。 ２、アラビノース、マンノース、ガラクトース、グルク
   ロン酸及びキシロースを構成成分として含有し、それら
   の結合様式と構成比が Ａｒａ１→：→３Ａｒａｌ→：Ｇａｌ１→：→▲数式、
   化学式、表等があります▼→：→▲数式、化学式、表等
   があります▼→：Ｘｙｌ１→＝１．６〜２．４：１．２
   〜２．０：１．０〜１．８：１．４〜２．２：１．４〜
   ２．２：０．１〜０．３ であり、分子量が１×１０＾４〜２×１０＾７である酸
   性ヘテロ多糖類を有効成分として含有することを特徴と
   する制癌剤。 ３、酸性ヘテロ多糖類が、ポリアンテス属 （ＰｏｌｉａｎｔｈｅｓＬ．）に属する植物から誘導さ
   れたカルスが細胞外に分泌するものである請求項２記載
   の制癌剤。