JPH02216056A - プロキシミテイーアツセイ用支持構造体 - Google Patents
プロキシミテイーアツセイ用支持構造体Info
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- JPH02216056A JPH02216056A JP1333008A JP33300889A JPH02216056A JP H02216056 A JPH02216056 A JP H02216056A JP 1333008 A JP1333008 A JP 1333008A JP 33300889 A JP33300889 A JP 33300889A JP H02216056 A JPH02216056 A JP H02216056A
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- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
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- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は液体サンプル中の放射標識反応体を検出するだ
めのプロキシミテイーアッセイ（ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ
ａｓｓａｙ）に使用する支持構造体に関する。
めのプロキシミテイーアッセイ（ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ
ａｓｓａｙ）に使用する支持構造体に関する。
米国特許第４，５６８，６４９号には、結合分子、通常
は免疫グロブリンが、それ自身、発光物質支持粒子の表
面に結合されたプロキシミテイーアツセイが記載されて
いる。粒子は小型ビーズの形状とすることができる。活
性既知の放射性リガンドを、未知量の非標識リガンドを
含むサンプルと一緒に含有する溶液をビーズとともにイ
ンキュベートする。標識同位元素が低エネルギ放射を有
するたとえばトリチウムである場合には、免疫グロブリ
ンに結合し、発光物質に近接した（数μｒＡ）サンプル
部分のみが、発光現象を生じて液体シンチレーションカ
ウンターにより計数されるが、非結合分子は記録される
には距離が離れすぎている。インキュベーション後には
標識および非標識リガンドの競合により、発光物質に近
接する標識リガンドの割合が変化することになる。この
技術は結合成分をサンフルの残部から物理的に分離する
必要がない。しかしながら、ビーズは液体メジウム中に
懸濁されているので、この技術ではスビリツジが起こり
やすく、標準的シンチレーションカウンタでの計数にシ
ンチレーションバイアル中で使用するためには大容量の
検定メジウムが必要になる。
は免疫グロブリンが、それ自身、発光物質支持粒子の表
面に結合されたプロキシミテイーアツセイが記載されて
いる。粒子は小型ビーズの形状とすることができる。活
性既知の放射性リガンドを、未知量の非標識リガンドを
含むサンプルと一緒に含有する溶液をビーズとともにイ
ンキュベートする。標識同位元素が低エネルギ放射を有
するたとえばトリチウムである場合には、免疫グロブリ
ンに結合し、発光物質に近接した（数μｒＡ）サンプル
部分のみが、発光現象を生じて液体シンチレーションカ
ウンターにより計数されるが、非結合分子は記録される
には距離が離れすぎている。インキュベーション後には
標識および非標識リガンドの競合により、発光物質に近
接する標識リガンドの割合が変化することになる。この
技術は結合成分をサンフルの残部から物理的に分離する
必要がない。しかしながら、ビーズは液体メジウム中に
懸濁されているので、この技術ではスビリツジが起こり
やすく、標準的シンチレーションカウンタでの計数にシ
ンチレーションバイアル中で使用するためには大容量の
検定メジウムが必要になる。
本発明の目的はプロキシミテイーアツセイにこれまで用
いられてきた支持構造体を改良することにある。これは
、本発明の支持構造体、すなわち蛍光物質が合体されて
おりそしてリガンドが付着された繊維マットであってこ
のリガンドは上記反応体と結合可能で蛍光物質を活性化
し検出すべき光子を生成せしめるものである支持構造体
によって達成される。
いられてきた支持構造体を改良することにある。これは
、本発明の支持構造体、すなわち蛍光物質が合体されて
おりそしてリガンドが付着された繊維マットであってこ
のリガンドは上記反応体と結合可能で蛍光物質を活性化
し検出すべき光子を生成せしめるものである支持構造体
によって達成される。
本発明の第一の態様においては、支持構造体はマトリッ
クスを形成する固体発光物質繊維からなる繊維マットで
ある。固体発光物質は、ガラス、たとえばセシウム負荷
ガラスまたは効率的な発光物質を生じるイツトリウムシ
リケ−１・のような希土類をベースとしたガラスとする
ことができる。このようなガラスにはテルビウム、ユー
ロピウムまたはリチウムのようなアクティベーターを導
入することもできる。また、繊維は発光物質を負荷した
ポリマーたとえばポリビニルトルエンから製造すること
ができる。
クスを形成する固体発光物質繊維からなる繊維マットで
ある。固体発光物質は、ガラス、たとえばセシウム負荷
ガラスまたは効率的な発光物質を生じるイツトリウムシ
リケ−１・のような希土類をベースとしたガラスとする
ことができる。このようなガラスにはテルビウム、ユー
ロピウムまたはリチウムのようなアクティベーターを導
入することもできる。また、繊維は発光物質を負荷した
ポリマーたとえばポリビニルトルエンから製造すること
ができる。
発光物質繊維の別の態様として、発光物質を含む溶媒を
蒸発させることによって、発光物質を非発光物質繊維の
繊維マット上に被覆することもできる。適当な発光物質
にはＰＰ０（２，５−ジフェニルオキサゾール）、アン
トラセン、ブチル−ＰＢＤ（２（４’−ｔｅｒｔ−ブチ
ルフェニル）５−（４″−ビフェニル） −１，３，４
−オキサジアゾールコマたはＰＭＰ（１−フェニル−３
−メシチル２−ピラゾリン）があり、単独でまたはスペ
クトルシフターたとえばＰＯＰＯＰ Ｃ１，４−ビス−
２（５−フェニルオキザゾリル）ベンゼン〕もしくはビ
ス−ＭＳＢ（１，４−ビス−（２−メチルスチリル）ベ
ンゼン〕とともに用いられる。固体溶媒として働く固相
材料、たとえばテトラメチルベンゼンを使用してもよい
。疎水性の固体発光物質は水溶液とするために界面活性
剤で修飾してもよい。
蒸発させることによって、発光物質を非発光物質繊維の
繊維マット上に被覆することもできる。適当な発光物質
にはＰＰ０（２，５−ジフェニルオキサゾール）、アン
トラセン、ブチル−ＰＢＤ（２（４’−ｔｅｒｔ−ブチ
ルフェニル）５−（４″−ビフェニル） −１，３，４
−オキサジアゾールコマたはＰＭＰ（１−フェニル−３
−メシチル２−ピラゾリン）があり、単独でまたはスペ
クトルシフターたとえばＰＯＰＯＰ Ｃ１，４−ビス−
２（５−フェニルオキザゾリル）ベンゼン〕もしくはビ
ス−ＭＳＢ（１，４−ビス−（２−メチルスチリル）ベ
ンゼン〕とともに用いられる。固体溶媒として働く固相
材料、たとえばテトラメチルベンゼンを使用してもよい
。疎水性の固体発光物質は水溶液とするために界面活性
剤で修飾してもよい。
別法として、発光物質は、繊維マトリックスの製造時に
水溶性発光物質で被覆することにより合体することもで
きる。水溶性発光物質は、本来疎水性の有機発光物質を
スルホン化処理しそのナトリウム塩を生成させることに
よって製造できる。必要により、水不溶性は、たとえば
シラニゼーションによって生成する末端キャッピングで
修飾できる。
水溶性発光物質で被覆することにより合体することもで
きる。水溶性発光物質は、本来疎水性の有機発光物質を
スルホン化処理しそのナトリウム塩を生成させることに
よって製造できる。必要により、水不溶性は、たとえば
シラニゼーションによって生成する末端キャッピングで
修飾できる。
上述の構造体によって測定できるリガンドは多様で、タ
ンパク質抗原たとえばα−フェトプロティン、癌胎児性
抗原、または酵素たとえばクレアチンキナーゼおよびブ
ロスタン酸ホス７アーターゼが包含される。ウィルス、
細菌、かびおよび寄生虫のような微生物の広範囲の種お
よび変異体が検定できる。これらの例は一般に、繊維状
発光物質マトリックスに付着した免疫グロブリンによっ
て測定されるが、他の結合分子たとえば核酸または核酸
結合残基を使用することもできる。この方法で広範囲の
特異的核酸配列を検出するためには、核酸の相補性配列
を使用できる。たとえば細菌および他の種は、適当なリ
ポソームＲＮＡ配列を選択することにより、はとんどす
べてのレベルの特異性を検出することが可能である。別
の態様では、ポリメラーゼ連鎖反応増幅技術によって豊
富化される稀なりＮＡ配列がこの検定で検出できる。検
定材料は当然、慣用の抽出操作によりまたは体液から直
接得られる。
ンパク質抗原たとえばα−フェトプロティン、癌胎児性
抗原、または酵素たとえばクレアチンキナーゼおよびブ
ロスタン酸ホス７アーターゼが包含される。ウィルス、
細菌、かびおよび寄生虫のような微生物の広範囲の種お
よび変異体が検定できる。これらの例は一般に、繊維状
発光物質マトリックスに付着した免疫グロブリンによっ
て測定されるが、他の結合分子たとえば核酸または核酸
結合残基を使用することもできる。この方法で広範囲の
特異的核酸配列を検出するためには、核酸の相補性配列
を使用できる。たとえば細菌および他の種は、適当なリ
ポソームＲＮＡ配列を選択することにより、はとんどす
べてのレベルの特異性を検出することが可能である。別
の態様では、ポリメラーゼ連鎖反応増幅技術によって豊
富化される稀なりＮＡ配列がこの検定で検出できる。検
定材料は当然、慣用の抽出操作によりまたは体液から直
接得られる。
以上述べた固体発光物質マトリックスの繊維は結合のた
めの大きな表面積を提供するが、さらに毛細管作用が、
サンプルをマトリックスに浸透させるために使用でき、
−旦充填されれば以後の計数の間またサンプルもしくは
多重サンプルを含むフィルターをプラスチック袋のよう
な容器に入れて密封したのちも、サンプルをマトリック
ス内に保持することが本発明の特徴である。本発明で提
案された平らな形態はサンプルを保持すると同時に米国
特許第４，２９８，７９６号に記載された型の平床シン
チレーションカウンター用に良好な計数形態を与える。
めの大きな表面積を提供するが、さらに毛細管作用が、
サンプルをマトリックスに浸透させるために使用でき、
−旦充填されれば以後の計数の間またサンプルもしくは
多重サンプルを含むフィルターをプラスチック袋のよう
な容器に入れて密封したのちも、サンプルをマトリック
ス内に保持することが本発明の特徴である。本発明で提
案された平らな形態はサンプルを保持すると同時に米国
特許第４，２９８，７９６号に記載された型の平床シン
チレーションカウンター用に良好な計数形態を与える。
容量が小さくてよいことから、放射性廃棄物の容量が低
下し、多重ウユル内の液体の場合よりも処理に安全な形
態である。また検定に必要なインキュベーション時間も
短縮される。
下し、多重ウユル内の液体の場合よりも処理に安全な形
態である。また検定に必要なインキュベーション時間も
短縮される。
結合分子を含むマトリックスは、直接、多数のサンプル
の適用に耐えうるものであり、またサンプルの付着の位
置および様式を、サンプル領域の周囲にラテックスもし
くは合成樹脂のような不透過性の障壁を設けて制限し、
サンプルを物理的に連続した支持体上で分離させておく
こともできる。この場合、障壁は疎水性に、サンプル領
域は親水性にする。
の適用に耐えうるものであり、またサンプルの付着の位
置および様式を、サンプル領域の周囲にラテックスもし
くは合成樹脂のような不透過性の障壁を設けて制限し、
サンプルを物理的に連続した支持体上で分離させておく
こともできる。この場合、障壁は疎水性に、サンプル領
域は親水性にする。
また別法として、発光物質マトリックスのディスクを支
持トレーの浅いウェルに固体することもできる。ディス
クはその材料の均一なシートから打ち抜くことによって
製造が可能であり、検定の正確度を決定する結合分子の
正確な分配を可能にする、重量に高い再現性のあるディ
スクを製造できる。これは本発明のひとつの特徴である
。さらに、サンプル領域の障壁による分画化は、サンプ
ルと放射性リガンドの混合物に提供される結合分子の量
の定量にも使用することができる。
持トレーの浅いウェルに固体することもできる。ディス
クはその材料の均一なシートから打ち抜くことによって
製造が可能であり、検定の正確度を決定する結合分子の
正確な分配を可能にする、重量に高い再現性のあるディ
スクを製造できる。これは本発明のひとつの特徴である
。さらに、サンプル領域の障壁による分画化は、サンプ
ルと放射性リガンドの混合物に提供される結合分子の量
の定量にも使用することができる。
特許出願人 コリン・ジエラルド・ボッター同
ジエラルド・トラスコツト・
ウオーナ−
外２名
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）液体サンプル中の放射標識反応体を検出するための
プロキシミテイーアツセイに使用する支持構造体におい
て、この支持構造体は蛍光物質が合体されておりそして
リガンドが付着された繊維マットであって、このリガン
ドは上記反応体と結合可能で蛍光物質を活性化し検出す
べき光子を生成せしめるものであることを特徴とする上
記支持構造体。 ２）繊維マットは小型のディスクの形状である請求項１
記載の構造体。 ３）小型のディスクは薄い透明または半透明のトレーの
密封可能なウェル内に固定された請求項２記載の構造体
。 ４）繊維マットには２個以上の検定領域が表示され、こ
の各検定領域は繊維マットの厚さ方向に設けられた障壁
によって区画されている請求項１記載の構造体。 ５）障壁は疎水性である請求項４記載の構造体。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE19888804657A SE8804657D0 (sv) | 1988-12-27 | 1988-12-27 | Support structure for use in a proximity assey |
| SE8804657-8 | 1988-12-27 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02216056A true JPH02216056A (ja) | 1990-08-28 |
Family
ID=20374332
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1333008A Pending JPH02216056A (ja) | 1988-12-27 | 1989-12-25 | プロキシミテイーアツセイ用支持構造体 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0378059B1 (ja) |
| JP (1) | JPH02216056A (ja) |
| AT (1) | ATE94990T1 (ja) |
| DE (1) | DE68909394T2 (ja) |
| SE (1) | SE8804657D0 (ja) |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE69307685T2 (de) * | 1993-03-11 | 1997-07-24 | Packard Instr Bv | Szintillationszählmedium und Verfahren |
| US5512753A (en) * | 1994-06-08 | 1996-04-30 | Packard Instrument, B.V. | Scintillation counting system using scintillator capsules |
| US6100026A (en) * | 1995-04-25 | 2000-08-08 | Irori | Matrices with memories and uses thereof |
| US5874214A (en) | 1995-04-25 | 1999-02-23 | Irori | Remotely programmable matrices with memories |
| US6319668B1 (en) | 1995-04-25 | 2001-11-20 | Discovery Partners International | Method for tagging and screening molecules |
| US6025129A (en) * | 1995-04-25 | 2000-02-15 | Irori | Remotely programmable matrices with memories and uses thereof |
| US6017496A (en) | 1995-06-07 | 2000-01-25 | Irori | Matrices with memories and uses thereof |
| US6284459B1 (en) | 1995-04-25 | 2001-09-04 | Discovery Partners International | Solid support matrices with memories and combinatorial libraries therefrom |
| US6331273B1 (en) | 1995-04-25 | 2001-12-18 | Discovery Partners International | Remotely programmable matrices with memories |
| US5961923A (en) * | 1995-04-25 | 1999-10-05 | Irori | Matrices with memories and uses thereof |
| US6340588B1 (en) | 1995-04-25 | 2002-01-22 | Discovery Partners International, Inc. | Matrices with memories |
| US5925562A (en) * | 1995-04-25 | 1999-07-20 | Irori | Remotely programmable matrices with memories |
| US6352854B1 (en) | 1995-04-25 | 2002-03-05 | Discovery Partners International, Inc. | Remotely programmable matrices with memories |
| US6416714B1 (en) | 1995-04-25 | 2002-07-09 | Discovery Partners International, Inc. | Remotely programmable matrices with memories |
| US5741462A (en) | 1995-04-25 | 1998-04-21 | Irori | Remotely programmable matrices with memories |
| US5739001A (en) * | 1996-10-29 | 1998-04-14 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Solid phase cell-based assay |
| US6139749A (en) * | 1997-11-20 | 2000-10-31 | 3M Innovative Properties Company | Method for radioactive species analysis using a self-scintillating sheet material |
| US6977141B2 (en) | 1998-02-10 | 2005-12-20 | Vicuron Pharmaceuticals Inc. | Direct adsorption scintillation assay for measuring enzyme activity and assaying biochemical processes |
| SE0104101D0 (sv) * | 2001-12-05 | 2001-12-05 | Astrazeneca Ab | New assay |
| SE0104102D0 (sv) | 2001-12-05 | 2001-12-05 | Astrazeneca Ab | New assay |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5468696A (en) * | 1977-11-04 | 1979-06-01 | Int Diagnostic Tech | Method of making sampler for immunological quantity measurement |
| EP0154734B1 (en) * | 1984-03-15 | 1990-08-29 | Immunex Corporation | Immediate ligand detection assay, a test kit and its formation |
-
1988
- 1988-12-27 SE SE19888804657A patent/SE8804657D0/xx unknown
-
1989
- 1989-12-15 EP EP89850434A patent/EP0378059B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-12-15 DE DE89850434T patent/DE68909394T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-12-15 AT AT89850434T patent/ATE94990T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-12-25 JP JP1333008A patent/JPH02216056A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SE8804657D0 (sv) | 1988-12-27 |
| DE68909394D1 (de) | 1993-10-28 |
| EP0378059A1 (en) | 1990-07-18 |
| EP0378059B1 (en) | 1993-09-22 |
| ATE94990T1 (de) | 1993-10-15 |
| DE68909394T2 (de) | 1994-03-24 |
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