JPH0222293A - 上皮小体ホルモン拮抗薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は生体内及び試験管内に於て天然ホルモンペプチ
ドを阻害するペプチドホルモン類縁体の用途に関する。

これらのペプチドホルモン類縁体はを推動物例えば哺乳
類に投与した場合ペプチドホルモン又は他の類縁体分子
の内分泌活性を遮断する。またこれらのペプチドホルモ
ン類縁体は試験管内に於ける天然ホルモンのバイオアッ
セイに有用である。ペプチドホルモン類縁体はホルモン
の過剰に起因する種々の疾患の治療及びホルモン作用に
よく似ているホルモン様因子を分泌するホルモン腫瘍の
治療に有用である。

本発明の一つの具体例は生体内及び試験管内の両方に於
いて上皮小体ホルモンの作用を阻害するのに有用な上皮
小体ホルモン類縁体の合成に関する。

ホルモン機能と構造との関係の解析はペプチドホルモン
の作用機序に重要な洞察を提供している。

各種ペプチドホルモンはそれが結合する個々のレセプタ
ーに親和性をもつ。結合時にペプチドホルモンは直接作
用するかあるいは第二メツセンジャー分子例えばサイク
リックＡＭＰ、サイクリックＧＭＰ、イノシトール又は
カルシウムイオンの細胞内濃度に変化を誘起する。これ
らの第二メツセンジャー分子はまた細胞の代謝又は生理
に変化を誘起する。これらの細胞の代謝又は生理の変化
はペプチドホルモンがその特異的細胞表面レセプターに
結合することに直接的又は間接的に依存する。

従って細胞表面レセプターが遮断される場合にはホルモ
ンの作用もまた遮断される。

ペプチドホルモン類縁体はホルモンの生化学を研究評価
することができる方法として長い間知られている。内分
泌研究者は第二メツセンジャー分子の変化を活性化せず
従ってホルモン誘発代謝変化を避けて特異的ホルモンレ
セプターを遮断することができるペプチドホルモン類縁
体の種類を生産する方法を長い間所望していた。

Ｒｏｓｅｎｂｌａｔｔ等（米国特許第４．４２３．０３
７号、この引例を本明細書中に引用する）はある種のペ
プチドホルモン類縁体の構造及びその細胞レセプターへ
の結合を述べている。特にこの引例は上皮小体ホルモン
類縁体の特性及びその生理特性を述べている。

ペプチドホルモンと各々のペプチドホルモンに特異的な
細胞表面レセプター間の相互反応を理解するために長手
にわたって科学的努力が探索されてきた。ペプチドホル
モンの１つ、上皮小体ホルモンは上皮小体ホルモン（Ｐ
ＴＨ）の類縁体を用いて研究されている。これらの研究
の目的の一つは天然ホルモンと同等か又は強い親和性に
より結合する類縁体が構成されるようにペプチドホルモ
ンを細胞表面レセプターに結合することを理解すること
であった。これによって上皮小体ホルモンのペプチドホ
ルモン類縁体は天然上皮小体ホルモンの作用を遮断する
ために使用することができる。

この探索に於て臨床上薬理的に有効な上皮小体ホルモン
類縁体に対して見い出される主な問題点はアゴニスト活
性である。アゴニスト活性は天然ホルモンに伴う生理変
化を誘起する第二メツセンジャーにおける変化を刺激す
るペプチドホルモン類縁体の特性である。従ってこの問
題点は適当なホルモン細胞表面レセプターに高い親和性
をもって結合するが第二メツセンジャー濃度に変化を刺
激せず即ちホルモン自体として作用しないホルモン類縁
体を生成することである。その時にはこれらの類縁体は
ホルモン関連疾患の治療に使用することができる。

Ｃｈｏｕ−Ｆａｓａ＋ａｎパラメーター（ＣｈｏｕＳＲ
，Ｙ、等、Ｂｉｏｐｈｙｓ　ｓ　Ｊ、第２６巻、３６７
〜３７３ｍ　（１９７９年）を使用するＰＴＨの二次構
造解析はＰＴＨの１２位のまわりの領域のβ−ターンや
ヘリックスを明確に指示してないない０本発明はへワッ
クス型又はターン型二次構造コンホーメーションを安定
化するためにこの領域に於てアミノ酸の置換を達成する
。従って本発明の主な目的はＰＴＨ類縁体の生物活性を
高めるためにＰＴＨの生物活性コンホーメーションを安
定化することである。

本発明の別の目的は新規なＰＴＨ類縁体を提供すること
である０本発明の別の目的は新規なＰＴ）ｌ類縁体の投
与によりＰＴＨの作用を阻害する方法を提供することで
ある。更に本発明の別の目的はアミノ酸変性が第二メツ
センジャー分子を活性化せずに表面レセプターの全てに
結合が生じるＰＴ１１類縁体を提供することである。上
記及び他の目的は本発明により以下に詳細に記載される
方法で達成される。

本発明は、ＰＴ）Ｉ（３−３４）Ｎｌｌｔ、（Ｔｙｒ”
）　ＰＴＨ（３−３４）ＮＨ”。

（Ｎｌｅ”　”、　Ｔｙｒ”）　ＰＴＨ（３−３４）Ｎ
ｌｌｚ　；　ｒ’ＴＨ（４−３４）Ｎ）Ｉ”。

（Ｔｙｒ３４）　ＰＴＩＩ（４−３４）ＮＩｌｚ＋　　
（Ｎｌｅ”’　＋　Ｔｙｒ”）ＰＴＨ（４−３４）ＮＨ
ｚ　ｉ　　ＰＴＩＩ（５−３４）Ｎｌｌｚ　、（Ｔｙｒ
”）　ＰＴＩＩ（５−３４）ＮＨｚ　、　（Ｎｌｅ１１
″８．　Ｔｙｒ”）　ＰＴＩＩ（５−３４）Ｎｌｌｚ　
；ＰＴＨ（６−３４）Ｎｆｌｔ　、　（Ｔｙｒ”）　Ｐ
ＴＩ（６−３４）Ｎｌｌ”（Ｎｌｅ”　’　、　Ｔｙｒ
”）　ＰＴＩＩ（６−３４）Ｎ１１．　；　ＰＴＩＩ（
７−３４）Ｎｌｌｚ。

（・＋　”　ｌ　Ｉ’ｌｌＮ’７　、’１ｎＮＩＩ□、
Ｎｉ＋、・Ｉｌ、　ｌ　　、　１ｙ、、’ｌ　＋　ＪＰ
ＴＨ（７−３４）Ｎ１１” （式中ＧｌｙＩｚはＤ−Ｔｒｐ　、　Ｌ−Ｔｒｐ　、　
Ｌ又はＤ−１２又はβ−ナフチルアラニン又はＤ又はＬ
−α−ＭｅＴｒｐに置換される）を包含しているペプチ
ドを提供する。

ＰＴＨはヒト上皮小体ホルモン（ｈＰＴＨ）　、ウシ上
皮小体ホルモン（ｂＰＴＨ）又はラット上皮小体ホルモ
ン（ｒＰＴＨ）であることができる。

本発明のペプチド類縁体のいくつかの代表例は次の通り
である。

ＣＤ−Ｔｒｐ”）　ｈＰＴＨ（７−３４）ＮＨ２，（Ｄ
−ＴｒｐＩｚ、Ｔｙｒ”）ｈＰＴＩｌ（７−３４）ＮＨ
ｌ　、　ＣＤ−Ｉｒｐ”　、　Ｎｌｅ””　、　Ｔｙｒ
ゴ４〕ｈＰＴＨ（７−３４）ＮＨｇ　　；　　（Ｌ−Ｔ
ｒｐ’ｚ）ｈＰＴＨ（７−３４）Ｎｌｌｚ　。

（Ｌ−Ｔｒｐ”　、　Ｎｌｅ””　、　Ｔｙｒ’）　ｈ
ＰＴＨ（７−３４）ＮＨｚ　＋（Ｌ−Ｔｒｐｌｚ、　Ｔ
ｙｒ”　）　ｈＰＴＨ（７−３４）ＮＨｚ　。

（Ｄ４ｒｐ”）　ｂＰＴＨ（７−３４）ＮＨｇ　＋　Ｃ
Ｄ−Ｔｒｐｌｚ＋Ｔｙｒ”）ｂＰＴＨ（７−３４）ＮＨ
ｚ　＋　（Ｄ−Ｔｒｐ”、　Ｎｌｅ””　、　Ｔｙｒ”
）ｂＰＴｌｌ（７−３４）Ｎｌ（ｚ　　；　　ＣＬ−Ｔ
ｒｐ”）　ｂＰＴｌｌ（７−３４）ＮＨｔ　。

（Ｌ−Ｔｒｐ”　、　Ｔｙｒ３４）　ｂＰＴＨ（７−３
４）ＮＨｚ　。

（Ｌ−Ｔｒｐ”　、　Ｎｌｅ”　、　Ｔｙｒ”）　ｂｒ
’Ｔｌ１（７−３４）ＮＨｚ　　；Ｉ　　Ｉｒｐ”ｌ　
　ｒｌ’ｉ’１ｌ（ｌ：Ｌｉ）Ｎｌｌ７．　　（ＩＩ　
　Ｔａｐ’　　、　　’ｒｙｒ”ＪｒＰＴＨ（７−３４
）ＮＨｔ　　＋　　（Ｄ−Ｔｒｐ”、　　Ｎｌｅ”　　
”　　、　　Ｔｙｒ”）ｒＰＩＩＴ（７−３４）ＮＨｚ
　、（Ｌ−Ｔｒｐ”）　ｒＰＴＨ（７−３４）Ｎｆｌｚ
　。

（Ｌ−Ｔｒｐ”）　Ｔｙｒ”）　ｒＰＴＨ（７−３４）
Ｎｌｌｚ　。

（Ｌ−ＴｒｐＩｚ、　Ｎｌｅ””　、　Ｔｙｒ”）　ｒ
ＰＴＨ（７−３４）ＮＨｚこれらの代表例は本発明を限
定するものとして解決されるべきではない。

また本発明は前記上皮小体ホルモン類縁体の治療上有効
な量を投与することを特徴とする上皮小体ホルモンの作
用を阻害する方法を提供する。また本発明は前記上皮小
体ホルモン類縁体の治療上有効な量を投与することを特
徴とする骨粗ｎ症又は高カルシウム血症の治療方法を提
供する。また本発明の上皮小体ホルモン類縁体の治療上
有効な量を投与することを特徴とする上皮小体機能充進
症の治療方法を提供する。また高カルシウム血症症状、
腎不全又は高血圧症として表現される上皮小体機能先進
症の治療方法を提供する。またペプチド様分子を過剰産
生ずる腫瘍又は細胞によって生じた症状の治療方法及び
症状が炎症、アレルギ一応答又はリンパ球過剰を包含す
る免疫疾患の治療もまた本発明の新規なペプチドホルモ
ン類縁体により提供される。

本発明の種々の他の目的、特徴及び付随する利点は以下
の詳細な記述からより理解されるにつれて更に十分に認
められるであろう。

構造及び活性の広範囲の研究は今では各々の細胞表面レ
セプターに対して高い結合親和性を持つが第二メツセン
ジャー分子の生産を刺激しないペプチドホルモン類縁体
の記号に誘導されている。

かかるペプチドホルモン類縁体の具体例はＣＤ−Ｔｒｐ
”、Ｔｙｒ”）　ｈＰＴＨ（７−３４）ＮＨｔ及び（Ｄ
−Ｔｒｐ”Ｔｙｒ”）　ｂＰＴＨ（７−３４）ＮＨｚで
あり試験管内に於てＰＴＨを阻害するがアゴニストとし
て作用しない。

アゴニスト活性はＮ−末端アミノ酸配列の存在に依存す
る。２−６端の末端アミノ酸を取り除くと全てのアゴニ
スト活性でないとしてもほとんど喪失してしまう。従っ
て第二メツセンジャー分子は変性したアミノ末端を有す
る類縁体によって影響されない。

Ｎ−末端から２−６アミノ酸が除去されるＰＴＨ類縁体
は阻害剤を生成し、これはサイクリックＡ　Ｍ　Ｐ　ｔ
Ｍ度に変化を誘起せずに高い親和性によりペプチドホル
モンレセプターに結合する。

次にウシ上皮小体ホルモン（ｂＰＴＨ）の３４アミノ酸
配列である。

Ｈ２Ｎ−Ａ　ＬＡ　−ＶＡＬ−ＳＥＲ−ＧＬＵ−ＩＬＥ
−ＧＬＮ　−ＰＨＥ−ＭＥＴ−ＨＩＳ−ＡＳＮ　−ＬＥ
Ｕ−ＧＬＹ−ＬＴＳ−Ｈｌ５−ＬＥＩＪ　（１５）　−
ＳＥＲ−３ＥＲ−ＭＥＴ−ＧＬＵ−ＡＲＧ　−ＶＡＬ−
ＧＬＵ−ＴＲＰ−ＬＥＵ−ＡＲＧ−ＬＹＳ−ＬＹＳ−Ｌ
ＥＵ−ＧＬＮ−ＡＳＰ（３０）−ＶＡＬ−ＨＩＳ−ＡＳ
Ｎ−ＰＨＥ−ＣＯＯ１１゜次はヒト上皮小体ホルモン（
ｈＰＴＨ）の３４−アミノ酸配列である。

１１２Ｎ−５ＥＲ−ＶＡ　Ｌ−ＳＥＲ−ＧＬＵ−ＩＬＥ
−ＧＬＮ−ＬＥＵ−ＭＩＥＴ−ＨＩ　Ｓ−ＡＳＮ（１０
）−ＬＥｌｌ−ＧＬＹ−ＬＹＳ−ＨＩＳ−ＬＥＵ−へ５
Ｎ−３ＥＩ？−肝Ｔ−ＧＬローＡＲＧ（２０）　−ＶＡ
Ｌ−ＧＬＵ−ＴＲＰ−Ｌ［！Ｕ−ＡＲＧ−ＬＹＳ−１、
ＹＳ−ＬＥＵ−ＧＬＮ−ＡＳＰ（３０）−ＶＡＬ−ＨＩ
ｓ−ＡＳＮ−ＰＩＩＥ−ＣＯＯ１１次はラット上皮小体
ホルモン（ｒＰＴＨ）の３４−アミノ酸配列である。

Ｈ２Ｎ−ＡＬＡ　−ＶＡＬ−ＳＥＲ−ＧＬＵ−Ｉ　ＬＥ
−ＧＬＮ−ＬＥＵ−ＭＥＴ−１１１Ｓ−ＭＳＮ（１０）
−ＬＥＵ−ＧＬＹ−ＬＹＳ−ＨＩＳ−ＬＥＵ−ＡＬＡ−
ＳＢＲ−ＶＡＬ−ＧＬＵ−ＡＲＧ（２０）−ＭＩＥＴ−
ＧＬＮ−ＴＲＰ−ＬＥＵ−ＡＲＧ−ＬＹＳ−ＬＹＳ−Ｌ
ＥＵ−ＧＬＮ−ＡＳＰ（３０）−ＶＡＬ−ＨＩＳ−ＡＳ
Ｎ−ＰＨＥ−ＣＯＯ１＋。

細胞表面レセプターへの結合に特異的な領域を含むペプ
チドホルモンのフラグメントは阻害剤又は遮断剤として
使用することができる。上皮小体ホルモンとしてＮ−末
端３４アミノ酸は上皮小体ホルモン細胞表面レセプター
に対する結合特異性を定義するのに十分である。このレ
セプター特異性はまた本明細書中に引用される次の文献
、Ｍ、Ｒｏｓｅｎｂｌａｔｔ等、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ
ｏｇｙ第１０７巻２．５４５〜５５０頁１９８０年及び
Ｓ、Ｒ，Ｎｕｓｓｂａｕ＋ｓ等Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ第２５５巻
１０１８３頁（１９８０年）により定義される。

ペプチドホルモンに於てＬ−アミノ酸の代わりにＤ−ア
ミノ酸を存在させると異化作用に抵抗するペプチドが生
じる。しかしながらかかる置換が全て活性ペプチドホル
モンを生じるとは限らない。

ＰＴＨの３４位にチロシンアミドを挿入するとペプチド
の安定性が増加するほかホルモンの生物活性の著しい増
加が生じる。ペプチドホルモン合成に於けるＤ−アミノ
酸の利用は本明細書中に引用される次の文献、Ｃｏ　ｌ
　ｔｒｅｒａ等、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第１９巻
、４３８０〜４３８５頁、１９８０年Ｒｏｓｅｎｂｌａ
ｔｔ等、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ第２０巻、７２４６
〜７２５０頁１９８１年に述べられている。

記述のバランスは２つの部分に分けられる。区分ｌには
ペプチドホルモンの阻害剤の製造及び構造を述べ区分■
にはペプチドホルモン阻害剤の用途を述べる。

■　ペプチドホルモン　　　の　　　び　゛龜Ｍｅｒｒ
ｉｆｉｅｌｄ（５ｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ　Ｐｅｐｔｉｄ
ｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓＡｄｒａｎｃｅｓｉｎ　Ｅｎｚ
ｙ＋＋ｏｌｏｇｙ　％第３２巻２２１〜２９６頁１９６
９年）及びＧ、Ｂａｒａｎｙ　＆　Ｒ，Ｂ、Ｍｅｒｒｉ
ｆｉｅｌｄ′″５ｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ　Ｐｅｐｔｉｄ
ｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ″Ｔｈｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ第
２巻、編集者Ｅ、Ｇｒｏｓｓ　＆　Ｊ、Ｍｅｉｅｎｈｏ
ｆｅｎ（１９８０年）により開発された固相ペプチド合
成の手法は上皮小体ホルモンを含むペプチドホルモンの
合成に都合よく使用されている。この方法は固体支持体
に共有結合されるペプチドがカルボキシル末端を有する
という方法に基づいている。この所望のペプチド配列は
、１個のアミノ酸をカルボキシルからアミノ末端に伸長
するペプチド鎖に段階的結合させることにより製造され
る。典型的にはカップリングは樹脂に付加されるアミノ
酸のカルボキシル基の活性化により達成されこの樹脂は
閉塞された別の潜在的反応性基を有してもよい。アミノ
酸を伸長するポリペプチドに加えた後、鎖が更に延長す
る前にα−アミノ保３ｉ（ＢＯＣ）基が典型的に除去さ
れる。各アミノ酸がほとんど同じ連続の反応によって結
合されるため、合成の精巧な方法に対する要件は最小限
にされる。溶解度はペプチドが固体支持体に結合される
ため合成中主要な問題ではない。この方法は迅速であり
、１人の研究者によって使用することができる。これは
１回の合成がアミノ末端近くの複数の方向で分けること
ができそれによりアミノ末端領域内だけが異なる多数の
類縁体を生成することができるためアミノ末端置換を有
する複数類縁体の合成に極めて便利である。

■、ペプチドホルモン　　　の ペプチドホルモンの作用を阻害する方法は本発明のいか
なるペプチドホルモン又は類縁体の治療上有効な量を投
与することを包含する。これらのホルモン類縁体は生理
応答を刺激せずに細胞表面レセプターに特異性を維持す
る。この用途方法はペプチドホルモン又はその類縁体全
体あるいはレセプター結合部位を含むペプチドホルモン
のフラグメントに適用する。

ペプチドホルモン類縁体の用途は上皮小体ホルモン類縁
体によって例示される。上皮小体ホルモンはウシ、ヒト
、ラット又はあらゆるを椎動物由来であることができる
。類縁体は変性Ｎ−末端領域を除くアミノ酸全てを含む
ことができるかあるいはＮ−末端７−３４アミノ酸を包
含していることができる。個々のアミノ酸は生物学的又
は化学的安定性を改良するために本発明に例示される通
り置換することができる。

本発明のペプチドホルモン類縁体は試験管内で天然ペプ
チドホルモンの濃度を測定するために使用することがで
きる。このバイオアッセイ操作は上皮小体ホルモンに対
するバイオアッセイにより具体的に説明される。上皮小
体の溶液中の未知の濃度は上皮小体ホルモン細胞表面レ
セプターに結合することを阻害するのに必要とされる上
皮小体ホルモン類縁体の量を測定することによって決定
することができる。、上皮小体ホルモンの作用を遮断す
るために必要とされるＰＴＨ［縁体の濃度は上皮小体ホ
ルモン濃度の直接表示である。

上皮小体ホルモン類似体は本発明の上皮小体ホルモン類
縁体の治療上有効な量を投与することにより骨粗鬆症又
は高カルシウム血症の病因を診断するため又は治療する
ために使用することができる。同様に上皮小体機能亢進
症及び高カルシウム血症症状、腎不全又は高血圧症のよ
うな上皮小体機能光進症の別の症状は本発明の上皮小体
ホルモン類縁体の投与により治療することができる。

腫瘍及び他の異常細胞増殖はしばしば症状に起因するホ
ルモン様物質を生産する。かかるホルモン様物質が起因
する刺激を遮断するためにペプチドホルモン類縁体を使
用すると症状を軽減することができる。従って本発明の
ペプチドホルモン類縁体はホルモン様物質の異常生産に
起因する疾患を治療するために投与することができる。

炎症、アレルギ一応答及びリンパ球過剰のような免疫疾
患は免疫系の細胞にＰＴＨが結合することを阻害するＰ
ＴＨ９縁体のような、ペプチドホルモンの作用を遮断す
るペプチドホルモン類縁体を投与することにより治療す
ることができる。

本発明のペプチドホルモン類縁体は経口及び非経口再活
性を示し、経口、非経口、鼻内又は局所投与の投薬形態
で処方することができる。経口投与に対する固形投薬形
態はカプセル剤、錠剤、乳剤、散剤及び顆粒剤を含む。

かかる固形投薬形態では有効化合物は少なくとも１種の
不活性賦形剤例えばスクロース、−ラクトースはデンプ
ンと混和される。またかかる投薬形態は通常の実施の場
合、不活性賦形剤以外の別の物質を包含することができ
る。カプセル剤、錠剤及び乳剤の場合には投薬形態は緩
衝剤を包含することもできる。錠剤及び乳剤は更に腸溶
皮で調製することができる。

経口投与に対する液状投薬形態は医薬業界で一般に用い
られる不活性希釈剤を含む医薬的に使用し得る乳剤、液
剤、懇濁液剤、シロップ剤及びエリキシル剤を含む。不
活性希釈剤のほかに、かかる組成物は湿潤剤、乳化及び
沈殿防止剤及び甘味剤のような佐剤も含む。非経口投与
に対する本発明による製剤は、滅菌水性又は非水性液剤
、懸濁液剤又は乳剤を含む。非水性溶剤又は賦形剤の具
体例はプロピレングリコール、ポリエチレングリコール
、植物油例えばオリーブ油及び注射用有機エステル例え
ばエチルオレエートである。

本発明の組成物中の有効成分の用量は異なってよいが、
有効成分の量が適当な投薬形態が得られるようになるこ
とは必要である。選択される投薬形態は所望の治療効果
、投与経路及び治療期間に依存する。

上記教示の説明に於て本発明の多くの変更及び変動が可
能であることは明白である。従って本発明は、特許請求
の範囲内で本明細書に詳細に述べた以外の方法で実施す
ることができることは理解されるべきである。

実施例Ｉ Ｐ　Ｔ　Ｈのペプチドホルモン　　　のＡ　　び上皮小
体ホルモンの類縁体はメリーフィールドの固体相法を一
部変更して製造した。合成はアプライドバイオシステム
４３０Ａシンセサイザーを用いて行なった。カルボキシ
アミド（ＣＯＮＩＩ　ｚ）　Ｃ０ＯＨ末端変性を行なう
ために固体支持体として４−メチルベンズヒドリルアミ
ン塩酸塩樹脂（ポリスチレン−１％／ジビニルベンゼン
・ＵＳＢ）を（ｉ用した。

カンブリング中各アミノ酸のα−アミノ基を保護するた
めにｔｅｒ　ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂ　ＯＣ）
基を用いた。側官能基の保護は次の通り生成した。（ａ
）セリンのヒドロキシル基は０−ベンジルエーテル（Ｂ
ＺＬ）として保護した（ｂ）チロシンのヒドロキシル基
はＯ−２，６−シクロヘキシルエステル（ＤＣＢ）又は
ｐ−ブロモヘンシルオキシカルボニルエステル（Ｂ　ｒ
　Ｚ）として保護した（Ｃ）グルタミン酸及びアスパラ
ギン酸のカルボキシル基はベンジル（ＢＺ）又はシクロ
ヘキシルエステル（Ｃｈｘ）として保護した（ｄｌヒス
チジンのイミダゾール窒素はベンジルオキシメチル（Ｂ
ＯＭ）によってアルギニンのグアニジン官能基はＩ）−
トルエン−スルホニル（ＴＯ３）基によってインドール
イミンはホルミル基（ＦＯＲ）によって保護した（ｅ）
リシンとアミノ基は２−クロロベンジルカルボニル（Ｃ
Ｉ　Ｚ’）によって保護した。

アミノ酸は全てアプライドバイオシステム社、ペニンス
ララボラトリーズ又はバケムケミカルズから入手した。

ペプチド−樹脂合成は、アプライドバイオシステム社の
詳細なプロトコルを用いて行なった。二重カップリング
は各アミノ酸を組み込むために行なった。トリフルオロ
酢酸との脱保護は製造業者のプロトコルより６分延長し
た。

ペプチドはタム、Ｊ、八、Ｃ，Ｓ、第１０５巻、６４４
２〜６４５５頁（１９８３年）によって述べられた２工
程ＨＦ切断操作と同様の側鎖保護基の同時除去により共
重合体樹脂から切断した。第１工程のＩＩＦは次の試薬
比を用いた。５％ｐ−クレゾール、５％ｐ−チオクレゾ
ール、６５％ジメチルスルフィド及び２５％ＨＦ、ペプ
チド−樹脂１ｇ当り混合液１０ｍＪを０℃で２時間用い
た。第２工程のＨＦは、次の試薬比を用いた。５％ｐ−
クレゾール、５％ｐ−チオクレゾール及び９０％ＨＦ、
切断は０℃で７５分間行なった。ＨＦを除去した後ペプ
チド−樹脂混合物を無水エーテルで洗浄して捕集剤を除
去した。次いでペプチドを５０％酢酸及び水で抽出した
。洗液を合わせ５０％ＨＯＡｃで溶離するセファデック
スＧ−５０Ｆを用いてクロマトグラフィ処理した。

凍結乾燥した後、部分精製ペプチドを逆相１１ＰＬｃ（
Ｖｙｄａｃ　Ｃ４結合シリカ、１５Ｆ粒子サイズ、３０
０４細孔サイズ、０．１％ＴＦＡを含む水性アセトニト
リル勾配を用いる）によってクロマトグラフィ処理した
。

実施例２ ＰＴＨ七人アッセイ′七− Ｐ　Ｔ　Ｈ類縁体をローゼンブラット等、Ｅｎｄｏｃｔ
ｉｎ。

第１０７巻５４５〜５５０頁（１９８０年）に報告され
ているアッセイを変更した新しいレセプターアッセイ　
（ゴールドマン等、Ｅｎｄｏｃｒｉｎ　（１９８８年）
第１２３巻、１４６８〜１４７５頁）で解析した。

（Ｎｌｅ”・”　　”Ｓ■−Ｔｙｒ”　）　ｂＰＴＨ（
１−３４）ＮＨｚを用いた結合アッセイをＨＰＬＣ（ツ
バパックｃｐｓ、０、１％ＴＦＡ中３２〜３５％ＣＩｈ
ＣＮ）で精製し、２５ｍＭ）リスＨ（１／１％ＢＳＡ中
のアリコートとして一７０℃で貯蔵した。ウシ腎皮質血
漿膜を１−リス含有緩衝液（２５０μＮ）中ＰＴＨ類縁
体を存在させずに又は存在させてラジオリガンド（２５
，０００ｃｐりと２１℃で３００分間温置た。平衡に達
した時に結合させ遊離のラジオリガンドを遠心分離によ
って分離した。ウシ腎皮質膜に対して高い特異結合（８
５％）が一致して得られた。

表 拷−遺 ＣＤ−Ｔｒｐ１２．Ｔｙｒ”　　）　ｂＰＴＨ（７−３
４）ＮＨｚ（ＮｌｅＲ′”、　Ｄ−Ｔｒｐ”、Ｔｙｒ”
）　ｂＰＴＩＩ（７−３４）ＮＨｚ（Ｔｙｒ”　　）　
ｂＰＴｌｌ（７−３４）ＮＨｚ［ＮＩｅ”　”、Ｔｒｐ
”　　）　ｂＰＴｌｌ（７−３４）ＮＨｚ（Ｔｒｐ１２
．　　Ｔｙｒ”）　ｂＰＴＨ（７−３４）ＮＨｚＣＮｌ
ｅ”　”、Ｔｒｐ”＋Ｔｙｒ”　　）　　ｂＰＴＨ（７
−３４）ＮＨｚ結合 Ｋｎ（ｎＭ） ８±１ １３±３ ７６±９．０ １４５±１３ １０６±９ ５１±３ ＰＴＨ類縁体をＲ，Ｊ、マジェス力等 Ｅｎｄｏｃｔｉｎｏｌ 第１０７巻、１４９４頁（１９８０年）に述べられてい
る方法によりラット骨肉腫細胞系（ＲＯ３１７／２．８
）の１　ｎＭ　（Ｎｌｅ”　”　Ｔｙｒ”）　ｂＰＴＨ
（１−３４）Ｎｉｌ□によるサイクリックＡＭＰ刺激を
阻害する能力を解析した。簡単に言えば〔３Ｈ〕アデニ
ンと予め混ぜる細胞をＰＴＨ９縁体を存在させてまたは
存在させずにアゴニストＰ　Ｔ　Ｈ（１−３４）とＩＢ
ＭＸ（ホスフォジェステラーゼ阻害剤）の存在下３７℃
で５分間温置した。Ｐ　Ｔ　Ｈ類縁体の作用を決定する
ために（３Ｈ）ｃＡＭＰを生成した。

アテニレートサイクラーゼ 揚遺　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｋ、
（ｎ門）ＣＤ−Ｔｒｐ”、Ｔｙｒ３４）　　ｂＰＴＨ（
７−３４）Ｎｌｌｚ　　　　　　　２１１±１１６ＣＤ
−Ｔｒｐ”、Ｎｌｅ””、　　Ｔｙｒ３４）　　ｂＰＴ
ｌｌ（７−３４）ＮＨｚ　　６９±１７（Ｔｙｒ３４）
　ｂＰＴＩＩ（７−３４）ＮＨｚ　　　　　　　　　　
　　２７２０±５２０ＰＴＨ類縁体を３ｎＭ　（Ｎｌｅ
”１８．７ｙｒ３４）ｂＰＴＨ（１−３４）　Ｎｉ＋！
で刺激したウシ背腹によるサイクリックＡＭＰ産生の刺
激への作用について評価した。ウシ背腹をＰＴＨ類縁体
を存在させて又は存在させずにアゴニストと３０℃で３
００分間温置た。生産したサイクリックＡＭＰを（Ｂ、
Ｌ、ブラウン等、Ａｄｒ、Ｃｙｃｌｉｃ　Ｎｅｕｃｌｅ
ｏｔｉｄｅ　Ｒｅｓ、第２巻、２４頁（１９７２年））
に述べられている通り測定した。

（Ｄ−ＴｒｐＩｆｆｉ、　　Ｔｙｒ３４）　ｂＰＴＨ（
７−３４）ＮＨｚ（Ｎｌｅ”・鵞−Ｄ−Ｔｒｐ”　＋　
Ｔｙｒゴ４〕ｂｐＴｏ（７−３４）ＮＨ２ （Ｔｙｒ”　　）　　ｂＰＴＩＩ（７−３４）ＮＨｚ（
Ｎｌｅ””、　　Ｔｙｒ”）　ｂＰＴＨ（７−３４）Ｎ
Ｈ。

（Ｔｒｐ”、　　Ｔｙｒ”）　　ｂＰＴＨ（７−３４）
Ｎｌｌｚ６９±５ １２５±７ ８８０±７０ １６３１±３５０ ７３７±１０５ ＰＴＨ類縁体をマツグーＲ１等、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ
ｏｇｙ（１９８８年）第１２２（６）巻３００８〜１０
頁に述べられている通り骨由来ラット骨肉腫細胞系ＲＯ
３１７／２．８に対するＩ目５−標識ＰＴＨ結合能を解
析した。結果は次の通りである。

猪金 侃遣　　　　　　　　　　　　　　Ｋｎ（ｎＭ）ＣＤ−
Ｔｒｐ”、　Ｔｙｒ”）　ｂＰＴｌｌ（７−３４）ＮＨ
ｚ　　　１２３（Ｎｌｅ””、　Ｄ−Ｔｒｐ１２＋　Ｔ
ｙｒ３４）ｂＰＴｌｌ　（７−３４）　Ｎｌ＋□　　　
　　　　　　　１８２±３２（Ｎｌａｌ１１８．　Ｔｙ
ｒ”）　ｂＰＴＩｌ（７−３４）ＮＨｚ　　　９６４±
１７０（Ｔｒｐ”、　Ｔｙｒ”）　ｂＰＴＩＩ（７−３
４）ＮＨｚ　　　　３９７±２１（Ｔｙｒ″４）　ｂＰ
ＴＨ（７−３４）ＮＨｚ　　　　　　　７００±９０Ｐ
ＴＨ類縁体を実施例２で述べた同様のアッセイでイヌ腎
皮質膜に対する＋２５１−標識結合能をアッセイした。

構造 ［Ｔｙｒ”　　）　ｂＰＴＨ（７−３４）ＮｌｌｚＣＤ
−Ｔｒｐ”、　　Ｔｙｒ”）　　ｂＰＴｌｌ（７−３４
）Ｎｌｌｚ天ＪＬｆ生１ ＰＴＨ人アッセイ　　　（ヒト 猪金 」上恒牡 ４５．８±１１．３ ０．３８±０．１４ ＰＴＨ類縁体を実施例５で述べた同様の方法でヒ＝ｆ−
続ネ市止ｔ■ ト骨肉腫細胞 （Ｂ ■ Ｏ） に対する １１２５−標識ＰＴＨ モ成１年８月１５［１ 結合能をアッセイした。

猪金

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式 【遺伝子配列があります】 （式中Ｇｌｙ＾１＾２はＤ−Ｔｒｐ、Ｌ−Ｔｒｐ、Ｌ又
   はＤ−α又はβ−ナフチルアラニン又はＤ又はＬ−αＭ
   ｅＴｒｐに置換される） で表わされるペプチド。 ２、【遺伝子配列があります】 である請求項１記載のペプチド。 ３、【遺伝子配列があります】 である請求項１記載のペプチド。 ４、【遺伝子配列があります】 である請求項１記載のペプチド。 ５、請求項１記載のペプチドの高カルシウム血症治療有
   効量を哺乳類に投与することを特徴とするＰＴＨレセプ
   ターに作用する方法。 ６、請求項１記載のペプチドの高カルシウム血症治療有
   効量及び医薬的に使用し得る担体を包含している医薬組
   成物。