JPH02229804A - ペプチド合成用担体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、新規な重合体担体，その製造方法およびペブ
チド類およびそれらの中間体の製造のためのその使用に
関するものである．この方法は，クロロメチル化ボリス
チレン（ジビニルベンゼンで架橋した）を４−ヒドロキ
シ−２−置換一ベンジルアルコール（リンカー）と反応
させ、このようにして得られた担体にアミノおよび側鎖
保護されたα−アミノ酸を結合させ、そして固相ペブチ
ド合成（ＳＰＰＳ）の分野において知られている方法に
よってペプチドを形成することからなる．この方法は、
非常におだやかな酸性条件下で中間体または最終生成物
を除去して高度な純度および収率で生成物を与えること
を可能にする．２一置換分は，メトキシのような電子供
与基からなる． ベプチドを合成する２つの在来の方法，即ち，古典的な
所謂液相合成方法とＲ．　Ｂ．メリフィールド［Ｊ．　
Ａ＋ａ．　Ｃｈｅａｐ．　Ｓｏｃ．．　８　５巻．２１
４９頁（１　９６３年）１によって開発された内相ベプ
チド合成（ＳＰＰＳ）方法とがある． 天然α−アミノ酸類の二宮雌性は、何れの合成方法にお
いても保護基の使用を必要とする．液相技術はそれぞれ
の工程後の生成物の単離および精製を可能にするけれど
も，固相方法はこのような中間的な精製を可能にしない
．どちらかといえば，保護基および樹脂担体を強酸で開
裂したときの最終生成物は、その低い等級のために，し
ばしば厄介な生成方法に付さなければならない６このよ
うに、構成ブロック（例えば、他の合成のための）とし
て有用な保護された官能基を未だ有する中間体（フラグ
メント）の製造は不可能である。 欧州特許出願ＥＰＡＯ２００４０４には、担体樹脂から
の開裂によってペブチドアミドを得る同相合成方法が記
載されているが、しかしながら，残念なことに、保護さ
れたべブチドフラグメントを製造することが必要である
場合、酸感受性保護基はどれも側鎖官能基に対して使用
することができない． 驚くべきことには，以下に記載するような本発明によっ
て製造された新規な重合体担体（樹脂一リンカー化合物
）は、初めて、非常におだやかな反応条件下における遊
離末端力ルボキシル基を有する保護された形態のべブチ
ドの有利な開裂を可能にすることが判った．換言すると
、本方法は、何れかの選ばれた方法によって、例えば，
液相ペブチド合成方法によって更に処理することのでき
る保護された中間体（フラグメントまたは構成ブロック
）の弔雌および製造を可能にする。本発明は、その−Ｌ
において生長ペブヂドが合成でき、かつ、それから、こ
のようなペブチド（またはフラグメント）が極めておだ
やかな酸性条件下で遊離できるため側鎖中の保護された
官能基が開裂反応において未攻撃のまま残るような物質
（材料）の構成に依存するものである．このような開裂
は何れの段階においても実施することができるというこ
とは強調されなければならない．この技術は，ベブチド
合成の戦略的範囲をかなり広げる．このように、得られ
たフラグメントはもし必要ならば容易に精装することが
でき，そして場合によっては、重に何れかの選定された
方法によって処理してカルボキシル末端またはα−アミ
ノ末端基においてベブチド鎖な更に延長することができ
る。 式（Ｉ）： 》 級アルキルを表す）の重合体樹脂．この重合体化合物は
，場合によっては、ハロゲンまたは低級アルキルによっ
て場合により置換されていてもよいジビニルベンゼン０
．５〜２％で架橋されている． 有機基に関連する“低級一なる語は，基が７個までの炭
毒原子、好適には、４個までの炭累原子を有することを
示す．低級アルコキシは、例えばメトキシ，エトキシ．
ｎ−ブロボキシ、インブロボキシ、ｎ−へキシルオキシ
、イソへキシルオキシまたはｎ−へブチルオキシである
。 低級アルキルチオは、例λばメヂルチオ、エチルチ才、
ｎ−プロビルチオ、イソブチルチオ、第３級ブチルチ才
，ｎ−ブチルチオ，ｎ−ベンチルチ才、ｎ−へキシルチ
才またはｎ−へブチルチオを表し、そして、低級ジアル
キルアミノ基中の置換分としてのＲ，およびＲ２はメチ
ル、エチル、ｎ−プロビル，イソブロビル、ｎ−ブチル
、イソブチル、第２級ブチル、第３級ブチル、ｎ　−ベ
ンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシルま
たはｎ−へブチルを表し、そして、ジ低級アルキルアミ
ノ基としてのＲは、例えば，Ｎ．Ｎ−ジメチルアミノ、
Ｎ一エチルーＮ−メチルアミノまたはＮ．Ｎ−ジエチル
アミノである．ハロゲンは，例えば、塩素、臭素、沃素
または弗素である． 本発明の好適な実施態様は、Ｒが低級アルコキシを表し
、そして、非置換ジビニルベンゼン１〜２％で架橋され
た式（１）の重合体から誘導された市合体視体（ＦＭ脂
−リンカー化合物）である．特に重要なのは、Ｒがメト
キシを表し、そして、非置換１．４−ジビニルベンゼン
１〜２％で架橋された式（Ｉ）の重合体から誘導された
重合体担体である． 構造（１）の重合体化合物は，場合によってはハロゲン
または低級アルキルによって置換されていてもよいジビ
ニルベンゼン０．５〜２％で架橋された式（　ＩＩ　）
のクロロメチル化ボリスチレン（ｎ．　ｎ．メリフィー
ルド：前記引用文献）を塩基性条件下で４−ヒドロキシ
ー２一置換ベンジルアルコール（リンカーと称す）と反
応せしめてそれによってフェノール性ヒドロキシル基を
樹脂にエーテル化することによって誘導することができ
る． このようなリンカー物質は，式（ｎｌ）の４−ヒドロキ
シ−２−Ｒ置換ペンジルアルコール，特に、４−ヒドロ
キジ−２−メトキシベンジルアルコールによって示され
る．この化合物は、！１．　Ｃ．シェパードおよびＢ．
ウィリアムスによってＩｎｔ．　Ｊｏｏｒｎ．　Ｐｅｐ
ｔ．　Ｐｒｏｔ．　Ｒｅｓ．．　２　０巻，４５１頁（
１　９８２年）に記載されている４−ヒドロキシ−２−
メトキシベンズアルデヒド（３ーメトキシ−４−ホルミ
ルフェノール）の還元によって製造できる新規な化合物
である．フェノール性ヒドロキシル基のエーテル化は，
例えばＳ．　Ｓ．ワングによってＪ．　Ａｍ．　Ｃｈｅ
＋ｓ．　Ｓｏｃ．．９５巻，１３２Ｂ頁（１９７３年）
に例示されているように該フェノール性基と塩を形成す
るような塩基の存在下で遂行することができる．重合体
担体、即ち、スチレンージビニルベンゼン共重合体およ
びリンカー物質からなるこのようにして得られた化合物
に、合成されるべきペプチドまたはベブチドフラグメン
トのカルボキシ末端アミノ酸が結合される．保護された
形態のアミノ基を有するカルボキシ末端アミノ酸は、エ
ステル形成によって結合される。アミノ官能基に対する
マスキング基は、優先的に塩基性条件下，即ち、塩基に
よる処理によって開裂できる種類のものである．エステ
ル化は，既知方法によりカルポキシルＪｋの活性化によ
って行なうことができる．このように，カルボキシル基
は、例えば、酸アジト，無水物、イミダゾリド、イソキ
サゾリドまたは活性エステルに、または、Ｎ．Ｎ′−ジ
シクロへキシル力ルポジイミド（ＤＣＣ）のようなカル
ボジイミドとの反応により０−アシルイソ尿素に変換す
ることができる．もつとも普通に使用されている方法は
、カルボジイミドおよび４−ジメチルアミノビリジンま
たはＮ−ヒドロキシサクシンイミドのような触媒を使用
する方法からなる．（１９７４年のシュツットガルト、
ゲオルグ　チェメ　ヘルラグのＨｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ
のＭｅｔｈｏｄｅｎ　ｄｅｒＯｒｇ．　Ｃｈｅｍｉｅ　
１　５／　ＩおよびＩＩ（４版）のＥ．ベンシュのＳｙ
ｎｔｈｅｓｅ　ｖｏｎ　Ｐｅｐｔｉｄｅｎを参照）．ジ
クロ口メタンまたはジメチルホルムアミドまたはこれら
両者の混合物のような溶剤中において０〜５０℃の温度
，好適には、２０〜２５℃の温度で２〜２４時間，好適
には、・１２時間、例えば、ジシクロへキシル力ルポジ
イミドおよび４−第３級アミノビリジンを使用してアミ
ノ保護基を有するアミノ酸またはペブチドフラグメント
を担体樹脂に結合させる． 縮合されるべきアミノ酸ならびにその後縮合されるアミ
ノ酸が側鎖中にカルボキシー，アミノー，アミドー５ヒ
ドロキシー、メルカブトーまたはグアニジノー官能基の
ような官能基を有する場合は、これらの官能基はあとの
段階における担体樹脂からのべブチドまたはフラグメン
トの開裂反応に抵抗性であるような基によって優先的に
保護される．達成される個々の具体的な目的が、側鎖官
能基に対する保護基の適当な選択を決定する． カルボキシルー保護基は、通常ペブチド化学において使
用されているものである．このような基は、望ましくな
い副反応を防止するようにおだやかな反応条件下で開裂
できる．開裂は、酸性または塩基性媒質中におけるソル
ボリシス（加溶媒分解）によって、水素添加分解、還元
、光分解によってまた生理学的条件下で行うことができ
る．一般に、カルボキシル保護基は水素によって置換さ
れる．この種の保護基およびそれらの基の開裂は．１９
７３年のＮ．　Ｙ．、ニューヨーク、ロンドンのプレナ
ムプレスの”Ｐｒｏｔｑｃｔｉｖｅ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉ
ｎＯｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ″および１９６
５年のＮ．　Ｙ、．ニューヨーク，ロンドンのアカデミ
ック　プレスの−Ｔｈｅ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ”　．　　
１巻（シュレーデルおよびルベク）ならびに１９７４年
のシュツットガルト、ゲオＪレグ　チェメ　ヘノレラグ
のＨｏｕｂｅｎ一貰ｅｙｌの″Ｍｅｔｈｏｄｅｎ　ｄｅ
ｒ　Ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ　Ｃｈｅ＋ｓｉｅ　　　（
　４　．Ａｕｆｌａｇｅ，　Ｂｄ，　ｌ　５　／　１　
）に記載されている．この合成方法においては、カルボ
キシル基は、例えば、エステル化によって保護すること
ができる．この反応に対して特に適したものは２．２．
２−トリクロ口エタノール、第３級ブタノール、ベンゾ
イルメタノールまたはベンジルアルコールのような低級
置換アルカノールである． とくに好適な基は第３級ブチル基およびペンジル基であ
る。 アミノ官能基に対する保護基は、脂肪族、芳香族または
芳香脂肪族カルボン酸のアシルのようなアシル基、特に
アセチルまたはプロビ才ニルのような低級アルカノイル
またはベンゾイルのようなアロイルまたはホルミルまた
はペンジルオキシ力ルボニルまたはフルオレニルメチル
才キシカルボニル（　Ｆｍｏｃ）のような炭酸半一エス
テルのアシルであることができる． アミノ官能基からの保護基として作用するこのようなア
シル残基の開裂は、アルコーリシスによって例示される
ソルボリシスのような既知方法によって遂行することが
できる．更に、それは酸性または塩基性媒質中における
加水分解によって行うことができる．アシル残基のアル
コーリシス開裂は、例えば、ｎ−ブタノールまたはエタ
ノールのような低級アルカノールを使用して塩基性試薬
の存在下および（または）上昇した温度、例えば、５０
〜１２０℃で行うことができる．アルカリ金属アルコレ
ート、例えば，ナトリウムまたはカリウムエトキシドま
たはアルカリ金属水酸化物、例えば、水酸化ナトリウム
または水酸化カリウムのような塩基が使用される． 低級アルコキシーカルボニル基，例えば，第３級プトキ
シカルボニルのような他のアミノ保護基は、特におだや
かな酸性条件下、例えば、トリフルオロ酢酸による処理
によって開裂できる．特におだやかな条件下で開裂でき
る他の基は、トリフェニルシリル、ジメチルブチルシリ
ルまたは特にトリメチルシリルのような３個の炭化水素
残基で置換されたシリル基をβ一位に有するエトキシ力
ルボニル基からなる．これらは，フルオライドイオン，
特に、テトラエチルアンモニウムフル才ライドのような
第４級アンモニウム塩基のフル才ライド塩と反応させる
ことによって開裂することができる． 樹脂−リンカーにそして次に生長ペブチドに結合される
アミノ酸のα−アミノ基に対して特に適した保護基は，
９−フル才レニルメチル才キシカルボニル（Ｆａ＋ｏｃ
）基である．それは、アルカリ金属の水酸化物または炭
酸塩のような塩基で、そして、ビペリジンのような有機
塩基でおだやかに開裂することができる． 側鎖アミノ（ε−アミン）基の保護については、通常ベ
ブチド化学において使用されている何れの基も適用する
ことができる。しかしながら、合成順序（シーケンス）
の生長反応のためにα−アミノ官能から基を開裂するこ
とが必要であるということを考えると、α−アミノ保護
基が分裂されるときに開裂しないような基を選択するこ
とが望ましい．例えば，　Ｆｍｏｃのような塩基処理に
より除去できる基をα−アミノ保護に対して使用する場
合は、優先的に合成の完了後酸性処理によって除去でき
る基を側鎖アミノ基に対して使用する正戦略（ｏｒｔｈ
ｏｇｏｎａｌ　ｓｔｒａｔｅｇｙｌは、この方法論につ
いて科学文献において使用されている語である． 側鎖ヒドロキシル基の保護については、通常ペブチド分
野において有用であることが知られているすべての保護
基を使用することができる．例えば、前述したＨｏｕｂ
ｅｎ−Ｗｅｙｌを参照されたい．しかしながら、側鎖ア
ミノ基に関して上述した理由のために、アシドリシス（
酸分解）によって開裂できる基が好適である．これらは
、例えば２−テトラヒド口ビラニルおよび特に第３級ブ
チル右よび第３級ブトキシ力ルボニルである．更に、ベ
ンジル右よびベンジルオキシカルボニルのような還元に
よって開裂できるような基またはソルボリシスまたは水
素添加分解によって除去できるアセチルまたはベンゾイ
ル（場合によっては置換されていてもよい）のようなア
シルを使用することができる． 側鎖メルカブト基の保護については、ペブチド分野のす
べての通常の保護基を適用することができる．特にメル
カプト基はアシル化，アルキル化またはジスルフィド形
成によって閉塞することができる．好適なメルカブト保
護基は，例えば，４−メトキシベンジルのような場合に
よってはフェニル部分において、例えば，メトキシまた
はニトロによって置換されていてもよいペンジル、４．
４−ジメトキシージフェニルメチルのような場合によっ
てはフェニル部分において，例えば、メトキシによって
置換されていてもよいジフエニルメチル、トリフエニル
メチル、トリメチルエチル、ペンジルチ才メチル，テト
ラヒド口ビラニル，アシルアミノメチル，ベンゾイル、
ペンジル才キシ力ルボニルまたはエチルアミノ力ルボニ
ルのようなアミノカルボニルである．アスパラギンおよ
びグルタミンにおいて存在するような側鎖カルボン酸ア
ミド基の保護については、ペブチド化学において知られ
、そして、通常使用されている基を適用することができ
る．特に、このような保護は、メトキシ置換ベンジル，
ジフエニルメチルまたはキサンチル基によるアミド官能
基のＮ一原子におけるアルキル化によって与えられる．
これらはすべてアニソールのような補集剤の存在下また
は不存在下におけるアシドリシスによって除去できる． アルギニンの側鎖において存在するようなグアニジノ基
は，同様にペブチド合成の技術において知られている方
法によって保護することができる．例えば．　Ｎ．　Ｙ
．　，ニューヨーク，ロンドンのブレナム　プレスの″
Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎＯｒｇａｎ
ｉｃ　（：ｈｅｍｉｓｔｒｙ　　．　（１　９　７　３
年）を参照されたい．使用される保護基は、トシル、ｐ
−メトキシーベンゼンスルホニル、４−メトキシー２．
３．６−トリメチルベンゼンスルホニル、メシチレンス
ルホニル，カルボベンゾキシおよび第３級ブトキシ力ル
ボニル基を包含する．脱閉塞（脱保護）は、アシドリシ
スまたは水素添加によって遂行することができる． 目的（最終）生成物のカルボキシ末端部分として位置さ
れるＮ一保護アミノ酸を有する樹脂一リンカーから得ら
れた化合物は、カルボキシ末端部分としてこのアミノ酸
を有するすべてのべブチドに対する出発物質として役立
つ．α−アミノ基の遊離、次いで次のアミノ酸（Ｎα一
保護を有する）の結合は、ペブチド鎖の生長をもたらす
．鎖生長反応は、Ｎα一保護基の除去およびＮα一保護
された形態の次のアミノ酸の結合によって達成される． 新規な樹脂−リンカー結合物およびアミノ酸またはペプ
チドからなるこのようにして得られたフラグメントは，
また，新規でありそして更に合成するための中間体とし
て有用である． 一般式（　ＩＶ　）

【式中，Ｒは式（１）において定義した意義を有し，そ
して，Ｙは担体に末端力ルボキシル基で縮合（エステル
）されたアミノ酸またはペブチドの残基である．アミノ
酸の官能基は場合によっては保護されていてもよい，】
のこれらのフラグメントは，また，本発明の主題でもあ
る．本発明の具体的な実施態様は，■が低級アルコキシ
、特に、メトキシを表す一般式（　ｒｖ　）のフラグメ
ントである．樹脂一リンカー結合物からの保護されたべ
ブチドの除去は，すべての他の保護基をもとのまま残す
非常におだやかな酸性条件下で遂行することができる．
生成物は、不溶性樹脂一リンカー結合物を枦去し、そし
て、枦液を当該技術において知られている方法により処
理することによって単離される．この技術は、４０、５
０．６０またはそれ以上のアミノ酸からなるベブチドの
合成を可能にする． “Ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ａｎｄ　Ａａ＋ｉｎｏ　Ａｃｉｄ
ｓ″′４−７頁（１９６６年）　　［Ｎ．　Ｙ．、ニュ
ーヨークのＷ．　Ａ．ペンジャミン社］にκ．Ｄ．コベ
ーによって記載されているようなすべての入手できるア
ミノ酸、特に、ベブチド中に天然に存在するアミノ酸そ
してまたそれらの対掌体（Ｄ一系）、同族体および異性
体を構成単位として使用することができる．もし特に説
明しない場合には、アミノ酸の通常使用されている略語
はＬ一系のものを意味する．限定するものではないが，
本発明を以下の例によって説明する。温度は℃で示す。 略語はペブチド合成の分野で使用されているものである
．［ＦＲＧ、シュツットガルト，Ｇ．チェメの１９７４
年のＩｌｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌの′″Ｍｅｔｈｏｄｅｎ
　ｄｅｒＯｒｇ．　Ｃ｝ｉｅｍｉｅ−双巻の“ペブチド
の合成”　［編集者Ｅ．ベンシュを参照されたい］． 実施例ｌ ３−メトキシー４−ホルミルフェノール［Ｒ．　Ｃ．シ
ェパードおよびＢ．ウィリアムス：Ｉｎｔ．　Ｊ．　Ｐ
ｅｐｔ．　Ｐｒｏｔ．　Ｒｅｓ．．　２　０巻．４５ｌ
頁（１　９８２年１１６０．８５ｇを、空気の排除下に
おいて、撹拌によって、固体の水酸化ナトリウム１６．
０ｇ、水１２００Ｉｌｌおよびメタノール４００ｍｌの
混合物中に溶解する．反応の進行をシリカゲルプレート
および溶離剤としてクロロホルム：メタノール：酢酸”
８５：　ｌｏ＋５（ｖ／ｖ）の混合物を使用する油層ク
ロマトグラフィーによって監視しながら、硼水素化ナト
リウム１５．１３ｇを少量ずつ加える． 還元剤の添加完了後、撹拌を１時間つづける．僅かに濁
った反応溶液を食塩水１．０２でうすめる．次に硫酸水
素カリウム５７．１３ｇを混合物に注意深く添加する．
混合物は，生成物の沈殿のために徐々に濁った状態に変
化する．これを、それぞれ１．　５１２の酢酸エチルを
使用して２回抽出する．水性相のｐＨ値は７〜８に保持
しなければならない．抽出液を若干の固体の重炭酸ナト
リウムとともに浸盪し、食塩水１．０βずつで２回洗浄
し、硫酸ナトリウム上で乾燥し次に真空中で蒸発する（
この操作中に生成物の一部が沈殿する）．３−メトキシ
ー４−ヒドロキシメチルーフェノールの粗製生成物は、
更に精製することなしに，アルキル化反応（次の工程）
のために使用することができる。 しかしながら，撹拌および冷却しながら最少量のメタノ
ールー酢酸エチル（１　：　ｌ）に溶解しそしてヘキサ
ンを滴加することによって精製することができる．結晶
性の生成物を枦過によって集める．無色の計状晶．融点
１２８〜１３０℃。生成物は、非常に酸感受性である． 実施例２ この実施例においては．　　ｌ　．　０　４ｍｅｑ　ｃ
ｌ／ｇを含有するポリ（クロロメチルスチレンーＣｏ（
共）−１％ジビニルベンゼン）を使用した．しかしなが
ら、満足な結果は、またｏ．６７ｍｅｑ　ｃｌ／ｇの樹
脂を使用しても得られる．反応前に、樹脂１１１．４ｇ
をジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）７５０＋１中で予備
膨潤（好適には一夜）する．この溶剤は，予め分子ふる
い（４人）上で数日間放置する． この樹脂の懸濁液に、ジメチルアセトアミド２５０ｍｌ
中の３−メトキシー４−ヒドロキシメチルフェノール５
５．７ｇの溶液を加える．ナトリウムメトキシド１９．
４ｇを少量ずつ添加したときに、撹拌混合物を徐々に５
０”Ｃに加熱する．酸素の排除下において、撹拌を同じ
温度で７時間つづける．暗赤色の混合物を冷却し、水を
加えて沈殿した塩化ナトリウムを溶解する。樹脂は収縮
し、そして、その暗色は殆ど退色する．それをｉ戸去し
，そして、暗赤色の炉液をすてる．得られた重合体ｐ−
（３−メトキシー４−ヒドロキシメチルーフエノキシメ
チル）ボリスチレンを膨潤するために、後者をジ才キサ
ンまたはテトラヒド口フランで３回洗浄する．残留する
着色不純物を５０％水性ジオキサンによる３回の洗浄に
よって除去する．゛生成物を脱水するために、それをテ
トラヒド口フランまたはテトラヒド口フランとメタノー
ルまたはジイソブ口ビルエーテルとの混合物で洗浄する
．このようにして得られた生成物は、殆ど無色であって
ピンク色またはベージュ色の色相を有している．真空乾
燥後、生成物の重量は１　３０ｇである．塩素含量二０
．１％以下．実施例３ 実施例２で得られた樹脂に対する９−フル才レニルメチ
ル才キシカルポニルーアラニン（Ｆｍｏｃ−Ａｌａ）の
結合 樹脂２５．３２ｇを、ジメチルホルムアミド―塩化メチ
レン＝　１　：　４　（ｖ／ｖ）で数回洗浄し、それか
ら同じ溶剤混合物１００＋ｓｌ中、０℃で撹拌すること
によって予備膨潤する．この懸濁液にＦｍｏｃ−Ａｌａ
１　９　．　７　ｇおよび触媒として４−ジメチルアミ
ノビリジン０．２３ｇを加える．数分撹拌した後，ジシ
クロへキシル力ルポジイミド１０．７４ｇを少量づつ加
える．混合物を一夜撹拌して，そして，この時間の間に
室温に到達させる．重合体および形成したジシクロヘキ
シル尿素を枦去し，そして，後者なジメチルホルムアミ
ドおよび塩化メチレンの混合物で５回，塩化メチレンー
イソブ口バノール混合物で３回、塩化メチレンおよびジ
イソブ口ビルエーテルで洗浄することによって溶解する
．最後に、樹脂を真空乾燥する． Ｆｍｏｃ一含量：０．６８５ミリグラム等量（ｓＩｅｑ
）．Ｆｒａｎｃ−Ａｌａ／ｇ　（以下の記載を参照され
たい）．重量分析：　０　．　６　３　：３＋ｅｑ　Ｆ
＋ｍｏｃ−Ａｌａ／ｇ．ラセミ化の検査：　Ｄ−Ａｌａ
　Ｏ．　　１％．保護されたアミノ酸の負荷が不十分で
ある場合は、方法を反復することができる．残留する遊
離ヒドロキシル基はこの段階において（荷重後）閉塞し
なければならない．方法は、また、キャッピング（ｃａ
ｐｐｉｎｇ）と称される．したがって、適当な試薬は塩
化ベンゾイルであることが知られている，　Ｆｒａｎｃ
−Ａｌａ一樹脂の３５．７ｇを塩化メチレン２００ｍｌ
に懸濁する．水浴中で冷却しなからビリジン（１８ｓ＋
１），そして，数分後に塩化ベンゾイル（２８ｍｌ）を
混合物に注意深く加える．３０分の撹拌後に、樹脂を炉
取し，塩化メチレン，ジメチルホルムアミド，イソブロ
バノール、ジイソブ口ビルエーテルで，そして，塩化メ
チレン，イソブロパノールおよびジイソブ口ビルエーテ
ルで２回洗浄する．真空乾燥後，樹脂３７．８ｇが得ら
れた．これを、ペブチド合成に対して直接使用した． 重合体は，以下の通り特徴づけられる．Ｃ，１　　Ｆ■
ｏｃ一測定： 少量の計量した試料をビペリジン／ジメチルホルムアミ
ド＝１＝４で３０分処理してＦａ＋ｏｃ基を開裂する．
形成した開裂生成物９−フルオレニルメチルビペリジン
を測光的（３０１ｎｍ、ε１７２００）に定１する． Ｃ．１　　重量分析（　Ｆｉｅｏｃ−アミノ酸の開裂）
計量した試料を塩化メチレン中のトリフル才口酢酸の１
％の溶液で処理する（以下の記載を参照されたい）．樹
脂を塩化メチレンで洗浄しそして乾燥する．Ｆ■ＯＣ−
アミノ酸の溶液を中和しそして真空蒸発する．残留物を
乾燥しそして計量する．乾燥した樹脂もまた計量する．
この実験は、また開裂条件を決定することを可能にする
．Ｃ３）　　ラセミ化の程度 はじめにＦ■ＱＣ基を除去するために計量した試料をビ
ペリジンージメチルホルムアミドで処理する．注意深く
洗浄した後，それをトリフルオロ酢酸一塩化メチレン（
１　：　１）で開裂する．開裂は完全であることの必要
はない．試料をか遇し、そして，塩化メチレンおよびプ
ロバノールで洗浄する．炉液をプロバノールとともに完
全に数回蒸発する．アミノ酸のＮ−トリフルオロアセチ
ルーｎ−プロとルーエステルの光学的純度なキラル吸収
剤を充填したカラムを使用して検査する．実施例４ ｆａｔ　アシル化重合体上の合成を，ｊ．メイアホッフ
ァ等によってＩｎｔ．　Ｊ．　ＰｅｐＬ．　Ｐｒｏｔ．
　Ｒｅｓ．１３巻３５頁（１　９７９年）に発表された
ようなＦｎ＋ｏｃ−アミノ酸を使用し、十分に記載され
た固体ペブチド合成法（Ｓ　Ｐ　Ｐ　Ｓ）によって遂行
する．方法は，カイザー試験［Ｅ．カイザー等：Ａｎａ
ｌ．　Ｂｉｏｃｈ．　３　４巻５９５頁（１９７０年）
１およびＦｍｏｃ一測定（前述した記載を参照されたい
）によって監視する．使用した溶剤は，ジメチルホルム
アミドおよび塩化メチレンおよびそれらの混合物である
，　Ｆｍｏｃ−アミノ酸は２倍又はそれ以上の高い過剰
で使用し、そして、ジシクロへキシル力ルポジイミド／
４−ジメチルアミノビリジンによって活性化する． （ｂｌ樹脂からの十分に保護されたべブチドの開裂．反
応に先立って，負荷した樹脂を塩化メチレンで洗浄し、
そして，同じ溶剤中で数時間撹拌する．水またはアルコ
ールのような不純物は反応を妨害する．同様に、完全に
洗浄除去されないジシクロヘキシル尿素は生成物中に不
純物として現われ、そして、川に使用したトリフルオロ
酢酸の一部を消費する． ｉｃｌ　カシニンｌ−５ Ｂｏａ−八ｓｐ　（ＯＢｕｔ）−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｌｙ
ｓ　（Ｂｏｃｌ　−Ｓｅｒ　［Ｂｕｔ）Ｏｉｌ２％トリ
フル才口酢酸溶液（塩化メチレン中の）１００＋ａｌを
加えたときに負荷した樹脂１２．６３ｇを塩化メチレン
１００ｍｌ中で５時間撹拌する．混合物を３０分撹拌し
そしてか遇する．ｉ戸去した樹脂を１％トリフルオロ酢
酸溶液２００■ｌ中に再懸濁し、そして、４５分攪拌す
る．樹脂は，この操作中にピンク色〜紫色に変化する．
方法を１回以上反復し，そして、３つの炉液を薄層クロ
マトグラフィーによって検査する．生成物の大部分は第
２の炉液中に含有される．枦液な直接中和し、集め，そ
して真空濃縮し、次に，留去した溶剤を酢酸エチルによ
り置換する．このようにして得られた溶液を５％重炭酸
ナトリウム溶液および食塩水（２：１）の混合物１５０
ｍｌで洗浄する．有機相中に残った生成物をＩＮ　　Ｋ
ｆ｛ＳＯ４溶液および食塩水（２：ｌ）の混合物１５０
ｍｌ．そして，最後に食塩水（１０％塩化ナトリウム溶
液）１００ｍｌで洗浄する．有機相を硫酸ナトリウム上
で乾燥し、次に、真空蒸発する． Ｃ　　　　　　　　Ｈ　　　　　　　Ｎ実験値：　　５
７．０６％　　８．５１％　　９．３８％計算値：５７
、３７％　　　８．５８％　　９．８０％実施例５ ＡＮＦ　（心房性ナトリウム排泄増加因子）１−１０Ｂ
ｏｃ−Ｓｅｒ　（Ｂｕｔｌ　−Ｌｅｕ−Ａｒｇ　（Ｍｔ
ｒ）　−Ａｒｇ　ｌＭｔｒ）　−Ｓｅｒ　（Ｂｕｔ）　
−Ｓｅｒ　（Ｂｕｔｌ　−Ｃｙｓ　（Ａｍｃ）　−Ｐｈ
ｅ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨ充填した樹脂（ペブチド樹脂
）５．０３ｇをはじめに塩化メチレンで数回洗浄し、次
に、塩化メチレン中のトリフル才口酢酸の１％溶液のそ
れぞれ１００＋ｍｌずつで３０分（それぞれの時間）４
回攪拌する．はじめの部分はｍ−クレゾール０．２ＩＩ
Ｉ１を含有していた．生成物の大部分は、はじめの２回
の部分に現われる．樹脂を塩化メチレンで洗浄しそして
乾燥する．４回の酸性炉液をとリジンで中和しそして集
める．溶液は粘稠にそしてゲル様に変化する．大部分の
溶剤を真空除去し、そして、残った油状縮合物をジイソ
ブ口ビルエーテルと共にはげし《攪拌する．懸濁液を稀
塩酸と共に攪拌してビリジン右よびその塩を除去する．
懸濁液中に残留するベブチド生成物を炉去し、そして，
水およびジイソブ口ビルエーテルで洗浄する．生成物２
．４３ｇが得られた．重合体からの喪失：２．１３ｇ．

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、重合体が、ハロゲンまたは低級アルキルにより置換
   されていてもよいジビニルベンゼン０．５〜２．０％で
   場合により架橋された式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒは低級アルコキシ、低級アルキルチオまたは
   ▲数式、化学式、表等があります▼（式中、Ｒ＿１およ
   びＲ＿２は低級アルキルを表す）を表す］の重合体から
   なる新規な樹脂−リンカー化合物。 ２、重合体が非置換ジビニルベンゼン１．０〜２．０％
   で架橋された式（ I ）（式中Ｒは低級アルコキシであ
   る）の重合体からなる請求項１記載の新規な樹脂−リン
   カー化合物。 ３、重合体が非置換１，４−ジビニルベンゼン１．０〜
   ２．０％で架橋された式（ I ）（式中Ｒはメトキシで
   ある）の重合体からなる請求項１記載の新規な樹脂−リ
   ンカー化合物。 ４、式（III） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒは請求項１に定義した意義を有す）の４−ヒ
   ドロキシ−２−Ｒ置換−ベンジル化合物（４−ヒドロキ
   シメチル−３−Ｒ置換−フェノール）。 ５、Ｒがメトキシを示す式（III）の４−ヒドロキシ−
   ２−Ｒ置換ベンジルアルコール。 ６、ジビニルベンゼン０．５〜２．０％で架橋された式
   （IV） ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒは請求項に定義した意義を有し、そして、Ｙ
   はカルボキシル基がエステル様式で樹脂−リンカーに縮
   合されており、そして、官能基が場合によっては保護さ
   れていてもよいアミノ酸またはペプチドの残基を表す）
   の重合体からなる新規なフラグメント（ペプチジル樹脂
   ）。 ７、Ｒが低級アルコキシであり、そして、Ｙが場合によ
   っては保護されていてもよい官能基を有する天然に存在
   するα−アミノ酸またはそれらの対掌体（Ｄ−系）、同
   族体および異性体の残基を表す式（IV）の重合体からな
   る請求項６記載の新規なフラグメント。 ８、Ｒがメトキシであり、そして、Ｙが場合によっては
   保護されていてもよい官能基を有する天然に存在するα
   −アミノ酸の残基を表す式（IV）の重合体からなる請求
   項６記載の新規なフラグメント。 ９、Ｒがメトキシであり、そして、Ｙがα−アミノ基が
   Ｆｍｏｃ−基（９−フルオレニルメチルオキシカルボニ
   ル）により閉塞（ブロック）されている天然に存在する
   α−アミノ酸の残基を表す式（IV）の重合体からなる請
   求項６記載の新規なフラグメント。 １０、Ｒがメトキシであり、そして、ＹがＡｌａ−残基
   を表す式（IV）の重合体からなる請求項６〜９記載の新
   規なフラグメント。 １１、Ｒがメトキシであり、そして、ＹがＡｒｇ−残基
   を表す式（IV）の重合体からなる請求項６〜９記載の新
   規なフラグメント。 １２、Ｒがメトキシであり、そして、ＹがＡｓｎ−残基
   を表す式（IV）の重合体からなる請求項６〜９記載の新
   規なフラグメント。 １３、Ｒがメトキシであり、そして、ＹがＧｌｎ−残基
   を表す式（IV）の重合体からなる請求項６〜９記載の新
   規なフラグメント。 １４、Ｒがメトキシであり、そして、ＹがＧｌｙ−残基
   を表す式（IV）の重合体からなる請求項６〜９記載の新
   規なフラグメント。 １５、ペプチド合成の担体樹脂としての請求項１〜３記
   載の新規な樹脂−リンカー結合物の使用。 １６、ペプチドの合成に対する請求項６〜１４記載の新
   規なフラグメントの使用。