JPH02236169A - 標的リガンド検出用水不溶性微孔質製品，検出方法および診断試験キット - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、安定化特異的バインディング試薬を含んでな
る微孔質製品、および標的リガンドを検出するための方
法におけるその使用に関する。また、本発明は前記製品
を含んでなる診断試験キットにも関する。本発明は、診
断方法において有用である。

〔従来の技術〕

医業では、生物学的流体、細胞または組織中に存在する
生物学的および化学的物質の迅速かつ正確な検出または
定量に関する調査および診断方法の必要性が依然として
存在する。例えば、生物学的検体における薬剤、ホルモ
ン、ステロイド、ポリペブチド、ヌクレオチド、プロス
タグランジン、蛋白質、炭水化物または感染性生物体（
Ｉｌｌ菌、カビまたはウィルス）の存在は、適切な診断
または処置のために正確かつ迅速な方法で測定されねば
ならない。

例えば、特定のストレプトコッカス（鉦匹匹虹ｃｏｃｃ
ｕｓ　）属に属するようなダラム陽性菌に分類される生
物体は、ヒトの病原体として知られている。

例えば、グループＡの生物体は、主にＢ型溶血性肺炎、
■紅熱、リウマチ熱、心臓病続発症、糸球体腎炎、敗血
性咽喉痛および産褥感染症を引き起こす原因となる。ス
トレプトコッカスＡにより生ずる惑染力の深刻な作用の
ため、その存在を早い段階で診断することが重要であり
、そうすることで適切な処置方針をとることが可能とな
る。多くの場合、診断試験は数時間または少なくとも３
０分程度かかる．この限定された待時間でさえも、開業
医が多くの待機している患者を持つ多《の事例では我慢
されないであろうし、患者自身も相当な出費、不便また
は不安なしには診断を待つことはできない。

診断上の測定方法を提供する目的で、測定される生物学
的または化学的物質（本明細書では「標的リガンド」ま
たは単に「リガンド」という）と受容体（前記物質と特
異的に反応またはバインディングする分子）との間の特
異的バインディング反応を利用する前記物質の単離同定
について多種多様な方法が案出されてきた。リガンドと
その対応する受容体との間の前記反応は、特異的バイン
ディング反応として知られている。そのリガンドと受容
体のいずれかが抗体であるとき、反応は免疫反応として
知られている．かかる反応には１種を越えるリガンドま
たは受容体が関与し得る．前記のような反応は、いろい
ろな方法で検出される。一般に、特異的バインディング
反応に関与する１以上のものが検出され得るように標識
される。すなわち、それが本来的に検出可能であるか、
または検出可能な成分（例えば、酵素、放射性同位体、
色原体または蛍光助剤）が何等かの方法でそれらに組み
込まれたものが選ばれる。

さらに、前述のような特異的バインディング生成物を検
出する上で、生成物を何等かの方法で不溶化して未反応
物質から分離することがしばしば必要となる。粒子、試
験管のような容器側面、薄いフィルムおよび当該技術分
野で既知の他の物質を含む各種不溶化手段が使用されて
きた。例えば、米国特許第４．６３２．９０１号（Ｖａ
ｌｋｉｒｓらに１９８６年１２月３０日付で発行）およ
び同第４．７２７．０１９号（Ｖａｌｋｉｒｓらに１９
８８年２月２３日付で発行）明細書の関連する記載にあ
るような幾つかのアッセイおよび診断装置では、リガン
ドに対する受容体が多孔質膜または多孔質フィルムに結
合されている。これらの膜またはフィルムは、得られる
複合体を不溶化すると共に濾過により複合化されなかっ
た物質から複合体を分離するために役立っている。ＰＣ
Ｔ国際公開第８７／０３６９０号（１９８７年６月１８
日付公開）公報もまた、イムノアッセイにおいて多孔質
濾過膜を使用し、流体をその膜を通過させることにより
不溶，化した免疫複合体を膜に捕えることを記載してい
る。この不溶化免疫試薬は、膜に取り込まれた後収容量
についてアッセイすることができる。

同様な固相膜系が、ヨーロッパ特許公開第２００．３８
１号（１９８６年１１月５日付公開）公報に記載されて
いる．受容体分子が結合されたマイクロスフェアーが多
孔質マトリックス中に固定されている。ストレブトコッ
カスＡ抗原用の同様な診断試験キットが約２年間市販さ
れてきた。

〔発明が解決しようとする課題〕

しかしながら、固定化試薬を用いて実施するアッセイは
、市場に非常に優れたアッセイを提供するものとしては
十分な感度および検出可能性に欠けている。

タンデム　アイコン　ストレプ（Ｔａｎｄｅｍ＠ｌｃｏ
ｎ＠Ｓｔｒｅｐ）　Ａ試験として約２年間ハイブリテク
社（Ｈｙｂｒｉｔｅｃｈ　Ｉｎｃ．）から市販されてき
たストレプトコッカスＡ測定用診断試験キットは、膜上
に塗布された粒状免疫試薬を有する．しかしながら、こ
の試験キットは、一般に低いコロニー数と遅いアッセイ
染料動力学を有し試料に対して低感度である短所を有す
る。

さらに、微孔質材に付着させた特異的バインディング試
薬は、使用前に製造、輸送および貯蔵のためにしばしば
必要となる長時間について十分な保存安定性に欠けるこ
とがわかってきた．製造後比較的速やかにこの試薬が使
用される場合には、安定性は重大な問題点とはならない
。しかしながら、製造現場から相当な距Ｎ（例えば、世
界の遠隔地または発展途上国）に輸送される診断試験装
置は、それが最終的に使用されるときに正確かつ高感度
の結果を保証するのに、数週間または数カ月間を通じて
、使用し得る冷蔵庫および室温保存安定性を有していな
ければならない．各種診断アッセイ、特にストレプトコ
ッカス属に属する菌に由来する抗原を検出するのに有用
な前述の製品は、産業界で大いに歓迎されるであろう． 〔課題を解決するための手段〕 前述の課題は、リガンドー受容体アッセイにおいて標的
リガンドの検出に使用するための水不溶性微孔質製品で
あって、少なくとも第一外面と第二対向外面を有し、そ
してこれらの外面の少なくとも一つに標的リガンドに対
する受容体分子が結合された水不溶性粒子を含む特異的
バインディング試薬を含み、かつ１以上の親水性、中性
または正荷電性ポリマーバインダーが添加された前記試
薬を含んでなる組成物を付着して有する微孔質材からな
る前記製品により解決され、著しく改良された保存安定
性が達成される。

さらに、Ａ．前述の水不溶性微孔質製品と標的リガンド
を含有することが予測される生物学的検体試料を接触さ
せて、前記標的リガンドと受容体分子との間で特異的バ
インディング複合体を形成する工程、ならびに Ｂ．前記検体における標的リガンドの存在を示すような
複合体の存在を検出する工程を含んでなる、生物学的検
体における標的リガンドの検出方法が提供される． またさらに、ａ．前述の水不溶性微孔質製品、および ｂ．検出可能な標識化受容体分子、を含んでなる標的リ
ガンドの検出に有用な診断試験キットも提供される． 本発明は、ヒトまたは動物宿主に由来する生物学的検体
における標的リガンドの存在を迅速に検出するのに使用
することができる。前述したように、このリガンドはそ
の場で特異的に反応して複合体を形成する対応の受容体
が存在するすべての化学的または生物学的な物質であり
得る．限定されるものでないが、代表的なりガンドとし
ては、蛋白質（例えば、酵素、抗体および抗原蛋白質な
らびにそれらの断片）、ペプチド、ポリペプチド、ヌク
レオチド、炭水化物、植物レクチン、毒素、ハプテン、
薬剤、ウィルス、カビおよび細菌ならびにそれらの構成
要素、さらに当業者に既知の他の物質が挙げられる．本
発明は、特にストレブトコッカス属に属する菌性（影工
印１匹μ遥ａｌ）　抗原、例えばストレプトコッカス属
に属する菌Ａ，Ｂ，ＣまたはＧグループ生物体から抽出
される炭水化物の検出に有用である。最も具体的には、
本発明によればストレプトコッカス属に属する菌性（旦
ｎ鄭』凄遥鮭）Ａ抗原が検出可能である。

限定されるものでないが、これらをアッセイすることが
できる生物学的試料としては、全血またはその成分（血
清もしくは血漿）、咽喉または口腔に由来する唾液また
は粘液、涙液、脊髄液、糞便、尿、膣分泌液、精液、ヒ
ト組織または器官の抽出物ならびにヒト乳汁が挙げられ
る．これらの検体は、適当な手段を使用して集めること
ができる。例えば、ストレプトコッカス属に属する菌性
（菌に由来する）抗原の検出では、一般に咽喉用綿棒が
アッセイされる。

本発明の特定の態様は、前述の水不溶性微孔質製品の使
用である．この製品は、第一および第二外面を有する微
孔質材から成る．その材料は、すべての化学的または生
物学的な反応に対して不活性であり、一般に、以下に記
載する試薬を付着するための十分な保全性およびアッセ
イに適する濾過のための多孔性を有する１以上の天然ま
たは合成材料から成る．限定されるものでないが、有用
な材料としては、天然もしくは合成ボリマー、焼結ガラ
ス、ガラスフィルターまたはポリマーフィルムもしくは
繊維、セラミック材、セルロース系材料、接着材もしく
はバインダー材と一緒に結合されるビーズから成る粒状
構造部材が挙げられる。

当業者は、多くの市販材料から容易に決定することがで
きるか、または本発明に有用な他のものを設計すること
ができる。特に有用な材料としては、特に、バル・コー
ポ（Ｐａｌｌ　Ｃｏｒｐ）から市販されているボリアミ
ド（特に、ナイロン）微孔質膜が挙げられる。

この微孔質材は、相互に対向する外面を少なくとも２つ
有する。一般的に、これらの対向面は、微孔質膜の上面
と底面である。これは、１以上の多孔質隣接層を有する
当該技術分野で既知の多層分析要素由来の製品を区別す
るものである。かがる要素は、一般に層内にすべての試
薬を有しており、外面には何も付着していない。

本発明の製品は、直ちに流体が排出されるのに十分な多
孔性を有し、アッセイ中に複合体化していない物質が競
合しないように設計される。このような複合化していな
い物質には、未複合化リガンド、受容体分子、細胞質破
壊賃および生物学的検体に由来するその他の非粒状性異
物が含まれる。

従って、微孔質材の細孔の大きさは、前記物質が孔質材
を通過し得るようなものでなければならない。さらに、
幾つかの試薬は製品の細孔に埋没してもよいが、一般的
な細孔サイズは、本アッセイで使用される粒状試薬の主
要部分を収容しないものである．実質的に、製品の外面
上にすべての試薬が存在するものが非常に好ましい。そ
れは必ずしも必要でないが、試薬は化学的または機械的
手段により幾分一緒に凝集されるか結合されるならば、
孔質材に簡単には入らなくなる。一般に、このことは、
平均細孔サイズが試薬の平均サイズ（例えば、球状の粒
子直径）５倍未満であることが必要である。好ましい膜
として平均細孔サイズは、約０．５〜約ｌＯ趨である． 場合により、本発明の微孔質材は、非特異的な相互作用
を減少するために蛋白質（例えば、特開昭６３　−　２
４３７５８号公報に記載されるようなカゼインまたはス
クシニル化カゼイ）を塗布するか、あるいは迅速濾過を
助長するため界面活性剤またはアッセイを促進し得る他
の任意の物質を塗布することができる． 本発明の特異的バインディング試薬（より詳細について
は以下に記載する）は、外部対向表面の１箇所以上に配
置される。試薬中の受容体が接触する検体中のリガンド
と反応し得るかぎり、すべての適当な方法で前記試薬を
付着することができる。一般に、製造および取り扱い中
の温和な機械る。さらに、試薬は、通常アッセイ中に微
孔質材から脱離しない。例えば、試薬は塗布、スポッテ
ィングまたは吹付けによって機械的に付着され、試薬粒
子間ならびに粒子と微孔質材との間で疎水性結合により
それらの上に保持することができる。

それはまた、適当な化学反応により共有結合してもよい
。

本発明では、試薬の保存安定性のために親水性、中性ま
たは正荷電バインダー物質を試薬に添加することが不可
欠であり、こうして特異的バインディング組成物が形成
する。しかしながら、この種のバインダー物質が微孔質
材に試薬を付着するか、または粒子間のバインディング
に寄与することまで要しないことを理解しなければなら
ない．さらに、バインダー物質は、バインダー物質を伴
なわないで使用される同一の試薬に比べ試薬の保存安定
性を相当上まわる改良を行う。一般に、親水性バインダ
ーは、試薬の特異的バインディング能または微孔質材の
多孔度のいずれかに著しい悪影響を及ぼさないであろう
量で存在する。バインダー物質の量は、一般に試薬の総
重量当たり２０％未満、好ましくは約１〜約ｌθ％であ
る。最も好ましい量は、約２．５〜約７．５％である。

一般的に、有用な親水性、中性または正荷電バインダー
には、少なくとも約２ケ月間、２０〜２５℃で相対湿度
３０〜５０％に試薬を置いた後、もとの試薬の少なくと
も８０％の安定性を持続するポリマーが含まれる。限定
されるものでないが、特に有用なバインダーとしては、
ビニルピロリドンポリマ、アクリルアミドポリマーなら
びに電荷が中性または正荷電である四級塩を含有するポ
リマーおよび当該技術分野で既知の他のポリマーが挙げ
られる．「電荷が中性」とは、ボリマーが全く電荷を有
しないか、または分子中の電荷が究極的にゼロとなる負
および正電荷の両方を有するものを意味する。ポリマー
は、ホモポリマーまたはコボリマーであってよく、単独
でまたは組み合わせで使用してもよい．アクリルアミド
ボリマーは、メタクリルアミドポリマーをも含むように
定義されている．代表的ボリマーをモノマーの重量比と
伴に次に列挙する；ポリ（アクリルアミド）、ポリ（メ
タクリルアミド）、コポリ　（アクリルアミド／Ｎ−ビ
ニル−２−ピロリドン）　（９０　：　１０）　、ポリ
（Ｎ−ビニル−２−ビロリドン）、コポリ（アクリルア
ミド／Ｎ−ビニル−２−ピロリドン）　（５０　：５０
）、コボリ（メタクリルアミド／４−ビニルーＮ−メチ
ルピリジニウムメトスルフエー｝）（７５：２５）、コ
ボリ（アクリルアミド／Ｎ−ビニルイミダゾール＞　（
９０　：　１０）　、コポリ（アクリルアミド／Ｎ−ビ
ニル−３−メチルイミダゾリウムメトスルフェート）（
９０　：　１０）　、コボリ（２−（Ｎ，Ｎ，Ｎ一トリ
メチルアンモニウム）エチルメタクリレートクロライド
／２−ヒドロキシエチルアクリレート）　　（９０　：
　１０）　、コポリ（２−（Ｎ．Ｎ．Ｎ−トリエチルア
ンモニウム）エチルアクリレートメトスルフェート／Ｎ
−ビニル−２−ビロリドン〕（５０　：　５０）　、コ
ポリ（ｌ，２−ジメチル−５−ビニルピリジニウムメト
スルフエート／アクリルアミド）　（５０　：　５０）
　、コボリ（３−メチルーＮ−ビニルイミダゾリウムメ
トスルフエート／Ｎ−ビニル−２−ピロリドン）（６０
：４０）、コポリ　（Ｎ−ビニル−３−メチルーイミダ
ゾリウムメトスルフエート／Ｎ−ビニル−２−ピロリド
ン）　（７５　：　２５）　、ボリ（２−（Ｎ，Ｎ．Ｎ
−トリメチルアンモニウム）エチルメタクリレートフル
ロライド〕、ポリ（ジメチルジアリルアンモニウム′ク
ロライド）およびコボリ（２−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−｝リメチ
ルアンモニウム）エチルメタクリレートクロライド／ア
クリルアミド）　　（５０：５０）　． 他の有用な正荷電ポリマーバインダーには、媒染剤が十
分な水溶性であるところの米国特許第４．０６９．０１
７号明細書記載の媒染剤を含む．十分な水溶性は、一般
に正荷電基を含むモノマーからなるボリマーを少なくと
も５０重量％有することにより供給される。

特に有用なバインダーとしては、四級アンモニウム塩を
含有するポリマー、ビニルビロリドンボリマーおよびア
クリルアミドボリマーが挙げられる。

最も好ましくは、本発明を実施するに際して使用される
試薬は、微孔質材内に埋没されるものが５％（試薬の重
量当たり）未満であることを意味する、実質的に微孔質
材の表面上に存在する。好ましくは、１重量％未満がそ
のように埋没される．「埋没される」とは、試薬粒子全
体が微孔質材の細孔内に存在することを意味する．この
ことは、試薬粒子が微孔質材外面における細孔またはそ
の外面付近の細孔に部分的に埋まり得ないことを意味す
るものでない．偶然には、微孔質材は、その細孔内に部
分的に埋った幾つかの試薬を有するかも知れないが、Ｐ
ＣＴ国際公開第８７／０３６９０号およびコーロッパ特
許公開第２００．３８１号公報に記載される多孔質製品
とは逆に試薬の訃コ１寥その内部に埋没されない． 試薬は、表面の不連続な１以上の帯域における材料表面
に付着することができ、各帯域は総表面積より小さいこ
とを意味する．また、試薬は表面全体に付着されてもよ
い．好ましくは、表面の中央帯域に試薬が付着される。

相違するバインダー物質を試薬保存安定性のために個々
の帯域で使用することができる． 本発明で使用される特異的バインディング試薬は、すべ
ての化学的および生物学的反応に不活性な水不溶性粒子
から成る。この粒子は、球状が好ましいが、構造や空間
的な配置は臨界的でない。

例えば、粒子は立方体、楕円体または繊維状の形状であ
ってもよい．一般に、粒子の最大寸法は、平均で約３趨
である．好ましくは、使用される球状粒子は直径約０．
Ｏｌ〜約５趨である．これらの粒子は、いずれかの天然
または合成水不溶性材料から調製することができる．ま
た、それらは、スタフィロコッカス・オーレウス（Ｓｔ
ａ　ｈ　ｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）またはトキ
ソプラズマ・ゴンジー（ハμｊｌｌＬ眩岐■）のような
固形粒状生物体であってもよい。しかしながら、好まし
《はこれらの粒子は、ガラス、セラミックス、磁性材、
天然もしくは合成ボリマー、珪藻土、蛋白質および当該
技術分野で既知の不活性な他の粒状物質から調製される
． その他どんな物質でも粒子として使用できるといえ、そ
れらの外面に受容体分子を付着するのに適するものでな
ければならない。いくつかの例を挙げるならば、他の粒
子が適当な付着のために適度の前処理を必要とするのに
反し、受容体分子が粒子上に簡単に吸着されることであ
る。受容体はまた、吸着または共有結合に適切な状態に
変性してもよい．当業者は、受容体を粒子に調和させる
のにいかなる必要な反応、前処理または架橋剤をどのよ
うに使用すべきか容易に理解するであろう。

幾つかの試薬は市販されている。

好ましい試薬は、ボリマー粒子に受容体分子を共有結合
するに際し、適当な反応性を有するボリマー粒子を使用
して調製される．受容体分子濃度は、粒子組成、そのサ
イズおよび受容体の種類に応じて変化してもよいが、ア
ッセイにおける十分な感度に対する十分な濃度が必要で
ある。受容体の共有結合は、リガンドの遊離アミン基ま
たはスルフヒドリル基と直接または間接（すなわち、蛋
白質またはアビジンービオチンのような結合を介して）
反応し得る表面反応性基を用いて一般に達成される。限
定されるものでないが、かかる反応性基には、カルボキ
シル基、エポキシ基、アルデヒド基、活性ハロゲン原子
、活性化２一置換エチルスルホニル基、ビニルスルホニ
ル基および当該技術分野で既知の基が含まれる。好まし
い態様についての以下の説明は、例示のためだけのもの
であり、限定することを意味しない。

特に有用なポリマー粒子は、一般に、０．０Ｉｎより大
きい平均粒子サイズを有する水不溶性ラテックス粒子で
ある。それらは、活性ハロゲン原子または活性化２一置
換エチルスルホニルもしくはビニルスルホニル基を少な
くとも１種有するエチレン系不飽和重合性モノマーｌ以
上から調製されるボリマーから成る。

活性ハロゲン原子を有する七ノマーとして゛は、とニル
クロロアセテート、ビニルブロモアセテー｝、４−　（
３−クロロプ口ピオンアミド）スチレン、Ｎ−（３−ク
ロロプロピオンアミド力ルボニル）アクリルアミド、４
−（クロロアセトアミド）スチレン、ハロアルキル化ビ
ニル芳香族（例エハ、クロロメチルスチレンまたはプロ
モメチルスチレン）、ハロアルキル非環式もしくはメタ
非環式エステル（例えば、クロロエチルメタクリレート
、３−クロロ−２−ヒドロキ，シプロビルメタクリレー
トおよび３−クロロプロピルアクリレート）、Ｎ−　（
３−クロロアセトアミドプロビル）メタクリルアミド、
Ｎ−（２−クロロアセトアミドエチル）メタクリレート
、４−クロロアセトアミドスチレン、４−クロロアセト
アミドメチルスチレン、Ｎ−　（３−（Ｎ’−クロロア
セチルウレイド）プ口ピル〕メタクリルアミド、Ｎ−　
（２−　（Ｎ’クロロアセチルウレイド）エチル〕メタ
クリルアミド、４−（Ｎ’−クロロアセチルウレイド）
スチレン、ｍおよびｐ　（Ｎ’−クロロアセチルウレイ
ドメチル）スチレン、Ｎ　（３−　（Ｎ’　−　（３−
クロロプロピオニル）ウレイド〕−プロビル｝メタクリ
ルアミド、４−（３−クロロプ口ピオンアミド）スチレ
ン、４−　（Ｎ’　−　（３−クロロプ口ピオニル）ウ
レイド〕スチレン、２−（３−クロロプロピオンアミド
）エチルメタクリレート、Ｎ−　（３−　（３−クロロ
プロピオンアミド）プロビル）メタクリルアミドおよび
当業者に既知の他の基が挙げられる．活性ハロゲン原子
が反応性基として使用される場合には、ハロアルキル化
ビニル芳香族、例えば、炭素原子１〜３個の活性ハロア
ルキル基を有するものが好ましい．クロロメチルスチレ
ンが最も好ましい． 好ましい活性化２一置換エチルスルホニルおよびビニル
スルホニルモノマーは、次式（１）で示される． なお、上式中、Ｒは、水素原子または置換もしくは未置
換アルキル基（一般に、炭素原子１〜６個であって、例
えばメチル基、エチル基、イソプロビル基もしくはヘキ
シル基）、好ましくは、Ｒは水素原子またはメチル基を
表している。

Ｒｌ　は、式−ＣＨ＝ＣＨＲ”または一ＧＨｚＣｌｌＪ
　テ示される基であって、該式中、Ｘは、求核性種によ
り置換されるかまたは塩基（例えば、ハロ、アセトキシ
、メチルスルホニルオキシのようなアルキルスルホニル
オキシ、Ｐ−｝リルスルホニルオキシのようなアリール
スルホニルオキシ、トリアルキルアンモニノ、例えば、
トリメチルアンモニノ塩もしくはピリジノ塩）で処理す
ることによりＨＸの状態で除去される脱離基を表し、好
ましくはＲｌは式−ＣＩｌ．ＣｌｌｔＸで示される基を
表している。

こ２で、活性化２一置換エチル基を有する基は、脱離基
Ｘの置換を損ねないどのような基により置換されていて
よい。

Ｒ″はミ水素原子、置換もしくは未置換アルキル基（一
般に、Ｒについて定義したような炭素原子１〜６個の基
）または置換もしくは未置換アリール基（一般に、核炭
素原子６〜１２個の、例えば、フエニル基、ナフチル基
、キシリル基もしくはトリル基）を表している． Ｌは、主鎖中に炭素原子１〜２０個およびヘテロ原子を
一般に有する置換もしくは未置換アルキレン基であるこ
とができる連結基を表している。この定義のアルキレン
基は、オキシ基、チオ基、−ＮＲ’　−　Ｃｉｆ式中、
Ｒ３は水素原子、炭素原子ｌ〜６個の置換もしくは未置
換アルキル基（例えば、メチル基、クロロメチル基もし
くは２−ヒドロキシエチル基）または炭素原子６〜１０
個の置換もしくは未置換アリール基（例えば、フエニル
基、ナフチル基もしくはキシリル基）〕、エステル（−
ＣＯＯ−）基、アミド（−ＣＯＮＨ−）基、ウリレン（
−ＮＨＣＮＨ−）基、スルホニル（−ＳＯ．−）基、カ
ーボネート基、スルホンアミド基、アゾ基、ホスホノ基
または他の類似の基により中断されるか、終結されるア
ルキレン基を包含する。代表的なアルキレン基としては
、メチレン基、エチレン基、イソブチレン基、ヘキサメ
チレン基、カルボニルオキシエチレンオキシカルボニル
エチレン基、メチレンビス（イミノカルボニル）エチレ
ン基、カルボニルオキシドデシレン力ルポニルオキシエ
チレン基、カルボニルイミノメチレンイミノ力ルポニル
イミノエチレン基、カルボニルイミノメチレンイミノ力
ルボニルエチレン基ならびに米国特許第４．１６１，４
０７号および同４，５４８．８７０号明細書に記載され
ているかまたは示唆される他の基が挙げられる． Ｌはまた、核炭素原子を一般に６〜１２個有する置換も
しくは未置換アリーレン基であってもよい．代表的なア
リーレン基としては、フェニレン、トリレン、ナフチレ
ンおよび前述の特許明細書に記載される他の基が挙げら
れる．また、この定義のしには、アルキレン基および前
述のアリーレン基のそれぞれ１個以上を組み合わせた二
価の基（例えば、アリーレンアルキレン、アルキレンア
リーレンアルキレンおよび当業者により容易に決定され
る他の基）、ならびにこれらの組み合わせ基が１以上の
アミド基もしくはエステル基により中断もしくは終結さ
れている基（例えば、カルボニルイミノアリーレンアル
キレン基）が含まれる．Ｌとしては、好ましく置換もし
くは未置換フェニレンアルキレン基〔例えば、１以上の
アルキル基（Ｒについて定義したような）、アルコキシ
ル基（一般に、炭素原子１〜６個の、例えばメトキシル
基、プロポキシル基もしくはブトキシル基）またはハロ
ゲン原子で置換されている〕、カルボニルイミノアリー
レンアルキレン基（ここで、アリーレン基およびアルキ
レン基は前述されている）、あるいはカルボニルイミノ
アルキレンイミノカルボニルアルキレン基（ここで、ア
ルキレン碁は前述されている）が挙げられる． 有用な代表的モノマーとしては、ｍおよびｐ−（２−ク
ロロエチルスルホニルメチル）スチレン、ｍおよびｐ−
（２−（ｐ−１リルスルホニルオキシ）エチルスルホニ
ルメチル〕スチレン、ｍおよびｐ−ビニルスルホニルメ
チルスチレン、Ｎ−（ｍおよびｐ　−　（２−クロロエ
チルスルホニルメチル）フエニル〕アクリルアミド、な
らびにＮ一（２−（２−クロロエチルスルホニル）エチ
ルホルムアミドメチル〕アクリルアミドが挙げられる。

最初に記載したモノマーが好ましい。

前述のモノマー１種以上を、単独または組み合わせで重
合させて、ホモボリマーまたはコボリマーを生成するこ
とができる。また別に、そして好ましくは、それらの１
種以上が他の１種以上のエチレン系不飽和重合性七ノマ
ーと共重合される。

一般にこれらのモノマーは、疎水性、分散性または他の
特徴のような多樺な好ましい性質を提供する。

代表的な有用ボリマーとしては、次の、ポリ（ｍおよび
ｐ−クロロメチルスチレン）、コボリ（スチレン／ｍお
よびＰ−クロロメチルスチレン／２−ヒドロキシエチル
アクリレート）（６７：３０：３、モル比）、コボリ（
スチレン／ｍおよびｐークロロエチルスルホニルメチル
スヂレン）（９５．５　：４．５、モル比）、コポリ｛
スチレン／Ｎ−（ｍおよびＰ−クロロエチルスルホニル
メチル）フエニル〕アクリルアミド｝　　（９９．３　
：　０．　７、モノレ比）、コボリ（ｍおよびｐ−クロ
ロメチルスチレン／メタクリル酸）　（９５．５　：　
５、９８：２および９９．８　：　０．　２、モル比）
コポリ（スチレン／ｍおよびｐ−クロロエチルスルホニ
ルメチルスチレン／メタクリノレ酸）（９３．５　：　
４．　５　：　２、モル比）コポリ｛スチレン／Ｎ−（
ｍおよびｐ−（２−クロロエチルスノレホニルメチル）
フエニル〕アクリルアミド／メタクリル酸）　　（９７
．３：　０．７　：　２、モル比）ならびにコボリ（ス
チレン／ｍおよびｐ−クロロメチルスチレン’）　（’
Ｔｏ　：　３０、モル比）が挙げられる．特異的バイン
ディング試薬を調製するに際して、受容体（例えば、ス
トレプトコツカス属に属する菌由来の抗原に対する抗体
）は、付着方法（吸着、共有結合または連結基の使用）
に応じて適当な条件下で前記粒子と一般に混合される。

従来技術の教示ならびにそれらに含まれる製造例を考慮
するならば、当業者は容易に適当な条件を設定し得るで
あろう．例えば、活性ハロゲン原子、活性化２一置換エ
チルスルホニル基またはビニルスルホニル基を有する前
述の好ましい粒子との結合については、受容体が粒子と
約２０ｍ〜約４０゜Ｃで２４時間まで一殼に混合される
．この粒子懸濁液は、一般に、約ｐＨ７〜１０に緩衝化
される。混合物中では、一般に、粒子が少なくとも約０
．２重量％存在し、受容体が少なくとも約１重量％（粒
子の総重量当たり）存在する． 試薬の調製において使用される受容体分子は、市場また
は既知の抽出、培養または免疫学的方法を使用して得る
ことができる．例えば、受容体が抗体の検出に使用され
る抗原物質である場合には、既知の技術を使用して生物
体または感染宿主のいずれかから抽出することができる
。受容体が抗体である場合には、それらはだいたい市販
されている。市販されていない場合には、モノクロナル
抗体を提供するためのハイブリドーマテクノロジーを含
む標準的な免疫化学的技術を使用してそれらを調製する
ことができる．生物学的または化学的物質の全体または
断片を、受容体分子として使用することができる。

本発明で使用される試薬は、検出可能に標識される。「
検出可能に標識される」とは、試薬が適当な手段および
装置または反応性組成物を使用して検出可能である成分
をそれと一緒に（粒子の一部としてか、または受容体分
子の一部として）有することを意味する．かかる標識と
しては、酵素、放射性同位元素、化学発光成分、色原体
、蛍光助剤、燐光成分、ビオチンもしくは検出可能な化
合物、酵素阻害剤もしくは活性化因子および当業者に既
知の他の物質が含まれる．「一緒に」とは、試薬の存在
が比例して存在する標識により直接的にまたは間接的に
検出可能となるように、標識が試薬に付着しその中に組
み込まれているか、あるいはその逆に試薬のすぐ近くに
存在していることを意味する．好まし《は、試薬は、標
識されておらず、後述するアッセイのごと《独自の標識
化受容体または標識化リガンドと一緒に使用される。

前述の試薬を含んでなる特異的バインディング組成物は
、前記のような外面にそれを付着するいずれかの適当な
方法により前記孔質材に適用することができる．適当な
溶媒（例えば、受容体に害を与えない水、緩衝液または
有機溶媒）中で、外面上にそれを塗布、堆積または単に
滴下することが好ましい．必ずしも必要でないが、一般
に組成物はアッセイの使用前に乾燥される。

本発明の水不溶性製品は、例えば、手で持った製品を通
して流体を容器に流し込むように望むならば、他の装置
または試験容器を伴うことなくアッセイで使用すること
ができる。しかしながら、試験装置の一部としてそれが
固定されるのが一般的である．米国特許第３．８２５．
４１０号、同３，８８８．６２９号、同３，９７０．４
２９号および同４，４４６．２３２号明細書に記載され
るものを含む多様な試験装置が当該技術分野で知られて
いる。特に有用な装置は、特願昭６３　−　２３４６９
２号および同６３　−　３１６５３７号明細書に記載さ
れている。

より具体的には、生物学的検体試料および適当な試薬を
それぞれに収容することができる１以上の試薬ウエルを
有する水不溶性シェルを含んでなる。

シェルは、ガラス、高分子材、セラミック、繊維材、セ
ルロース材および当該技術分野で既知の他の材料のごと
きいずれかの有用な水不溶性材料から調製することがで
きる． 好ましい態様では、試験装置が検体試験結果ならびに正
対照および負対照の結果を与えるように設計される３種
類の試験ウエルを有する。各試験ウエルは、それらの中
に取り付けられた微孔質製品を有し、そしてそれらの試
験ウエルの少なくとも一つはその中に取り付けられた本
発明の微孔質製品を有する．他の試験装置は、特開昭６
３　−　２２３５６３号公報に記載されている。

一般的に本発明の製品を記載してきたが、本発明の好ま
しい態様は、ストレプトコ・ノカスＡを検出するための
イムノアッセイで使用する水不溶性微孔質製品であって
、 上部外面と底部外面を有し、平均細孔サイズ約０．５〜
約１０ｊａを有する微孔質膜からなり、ならびにその上
部外面に平均直径約０．　１〜約１０趨を有し、そして
ストレブトコッカスＡ抗原に対する抗体が付着した水不
溶性ボリマー粒子を含む標識されていない特異的バイン
ディング試薬（この試薬は、四級塩を含有するモノマー
、ビニルビロリドンモノマーまたはアクリルアミドモノ
マーに由来する１以上の親水性ホモポリマーバインダー
またはコポリマーバインダーが添加されている）からな
る組成物をその上部外面に付着して有する製品である。

一般に、本発明の方法は、標的リガンドと前記試薬中の
受容体分子との間で特異的バインディング複合体を形成
するような方法で、標的リガンドを含有することが予測
される生物学的検体試料と本発明の製品を接触させるこ
とにより実施される。

この接触は、いずれかの適当な方法で行うことができる
が、一般に試験装置中に存在する本発明の製品に検体を
適用することが好ましい。

こうして形成された複合体が、次に、検体におけるリガ
ンドの存在を表示するような適当な方法で検出される．
検出は、実施されるアッセイの形成そして使用されるな
らば使用される標識の種類に左右され、適当な反応組成
物、装置および検出方法は周知である。試薬が適当に標
識されている場合には、検出は視覚を通じて、または適
当な分光光度測定もしくは放射活性測定装置を用いて行
ってもよい。

アッセイはまた、標識されたリガンドの測定量が試薬受
容体ならびに検体中のリガンドによる反応と認められる
競合的バインディングアッセイとして知られているもの
であってもよい。さらに、本発明の製品に付着した標識
された試薬と標識されていない試薬の両方をリガンドと
接触させることにより、それを間接的に測定することが
可能である。かかるアッセイの具体的な詳細は、当業者
の技術水準内のものとなっている。

本発明の方法の好ましい態様では、リガンドと前記試薬
の複合化ならびにリガンドと１以上の同一もし《は相違
する受容体（そのあるものは不溶化されており、そして
あるものは検出可能に標識されている）の複合化を伴う
。同一もしくは相違する受容体による複合化は、本発明
の製品上の試薬との複合化の前後または同時に起っても
よい。

例えば、リガンドは水溶性、検出可能に標識された（前
述のように）第二受容体ならびに本発明の試薬により複
合化されてもよい．一般に、これは当該技術分野でイム
ノメトリックまたは「サンドインチ」アッセイとして知
られている．標識としては前述のようなものでよいが、
好ましくは放射性同位元素または酵素、より好ましくは
酵素（例えば、ベルオキシダーゼ、アルカリホスファタ
ーゼ、グルコースオキシダーゼ、ウレアーゼまたはβ−
ガラクトシダーゼ）が挙げられる。受容体は、それらが
もう一つのものとりガンドの複合化を阻害しない限り、
同一もしくは相違するものであってよい． また、リガンドは第二の標識されていない受容体と複合
化した後、検出可能に標識された第三の受容体と複合化
することもできる．標識または他の有用な成分を付着す
ることが必要な状況下では、数種の受容体を使用するこ
とができる。

ストレプトコッカス属に属する菌性（菌に由来する）抗
原のアッセイに関する以下の好ましい態様は、例示を目
的とするものであって、限定を意味するものでない。

生物学的検体におけるストレプトコッカス属に属する菌
性の抗原の検出方法であって、Ａ．上部外面と底部外面
を有する微孔質膜を含んでなり、その上部外面に、スト
レプトコッカス属に属する菌性の抗原に対する抗体が付
着した水不溶性ボリマー粒子を含む標識されていない特
異的バインディング試薬（この試薬は、前述したような
１以上の親水性ホモポリマーバインダーまたはコポリマ
ーバインダーが添加されている）からなる組成物を付着
して有する水不溶性微孔質製品を、抽出されたストレプ
トコッカス属に属する菌性の抗原を含有することが予測
される生物学的検体試料と接触させ、ストレプトコッカ
ス属に属する菌性の抗原と前記抗体との間で特異的バイ
ンディング複合体を形成する工程、 Ｂ．工程Ａの接触の前後または同時に、標識された試薬
および標識されていない試薬の両者により前記抗原の標
識された特異的バインディング複合体が形成されるよう
に、その抗原に対する検出可能に標識された抗体をスト
レプトコッカス属に属する菌性の抗原と接触させる工程
、 Ｃ．工程Ｂの接触と同時にまたはその後、前記膜を通し
て複合化されていない物質を洗浄することにより複合化
されていない物質から標識された複合体を分離する工程
、ならびに Ｄ．検体におけるストレプトコッカス属に属する菌性の
抗原の存在の表示として前記標識された複合体を検出す
る工程、を含んでなる方法。

抽出されたストレプトコッカス属に属する菌性の抗原は
、ホット（ｈａ　ｔ　）ホルムアミド、ＨＣｌの存在下
におけるオートクレープ、各種酵素使用または亜硝酸の
誘発（ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）による手段を含むいずれ
かの適当な手段を用いて生物学的検体（例えば、咽頭綿
棒検体）から得られる。好ましい抽出手段は、特開昭６
３−２３１２６８号公報に記載されている。

次に、抽出された抗原を前述の微孔質製品と接触して抗
原一抗体複合体を形成する。室温における短時間インキ
ュベーションが複合体形成を促進するには望ましいが、
一般にそれは５分未満、好ましくは２分未満である。

ストレプトコッカス属に属する菌性の抗原に対する検出
可能に標識された抗体を使用して標識された複合体が形
成される。標識された抗体は、膜上の試薬と接触する前
後またはそれと同時に抗原と反応することができる。好
ましくは、それが接触した後に反応される。

複合化されていない物質から得られた複合体の分離は、
複合体形成と実質的に同時に生ずる。しかしながら、場
合によって、反応体と流体を短時間膜上に持続して複合
反応を完全にすることもできる。流体を排液することに
より、ほんの数秒で分離が行える。抗原の不溶性標識化
複合体および２以上の抗体が膜上に残存する。分離を促
進する必要がある場合には、１回以上の洗浄を行えばよ
い。

次に、標識された複合体が適当に検出される。

好まし《は、標識は酵素であり、適当な色素形成性組成
物を酵素およびその基質の存在下で添加し、色素（色原
体または蛍光助剤）を供給する。ベルオキシダーゼが好
ましい酵素標識であり、基質または基質生成反応体なら
びに色素形成反応体を含んでなる多くの適当な色素形成
性組成物が知られている。

好ましくは、色素形成性組成物には、過酸化水素とベル
オキシダーゼの存在下で色素を供給するロイコ染料（例
えば、米国特許第４．０８９．７４７号明細書に記載さ
れるようなトリアリールイミダゾールロイコ染料または
同４，６７０．３８５号明細書に記載され−るようなト
リアリールメタンロイコ染料）が含まれる。

不溶性複合体の存在下で色素が形成されたとき、それを
視覚的または分光光度測定装置を使用することにより評
価して、アッセイが検体における抗原の存在を表示する
場合を決定することができる．正および負対照試験の両
方を、検体試験と共に実施することが好ましいであろう
。目的の結果を与えるために各対照試験用として適当な
試薬を使用することができる。

本発明の診断試験キットは、本発明の製品ならびに標的
リガンドに対する検出可能に標識された受容体分子を含
む。これらのキット要素は、適当な手段でパッケージさ
れ、液体または固体試薬のバイアルまたはボトルおよび
本発明の製品（単独でまたは試験装置として）を区分し
て入れることができるある種のキャリャー中に収納する
ことができる。さらに、この方法を実施する上で有用な
次のものを１以上それに含めてより：色素形成性組成物
、抽出試薬（アッセイに先立ってリガンドを抽出しなけ
ればならない場合）、洗浄液、希釈剤、さらなる受容体
分子およびアッセイに使用することが当業者に既知の他
の試薬。試薬は、乾燥状または適当な溶液状で供給する
ことができる。

キットの非反応性要素として、説明書、混合容器、撹拌
器およびピペットなどを含めることができる。

以下の例は、本発明の実施例の代表的なものであるが、
本発明を限定することを意図しない。

〔材　料〕

抗ストレプトコッカスＡ−ベルオキシダーゼ接合体は、
市販されている免疫精製ラビットポリクロナル抗体およ
びＹｏｓｈｉｔａｋｅら、Ｅｕｒ．　Ｊ．　Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．，１０１，　３９５（１９７９）に記載された方
法によりＭｉｌｅｓＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ由来のワ
サビペルオキシダーゼを使用して調製した。この接合体
を緩衝液中にスクシニル化カゼインを含んでなる組成物
中で使用した。

ロイコ染料溶液は、２−（４−ヒドロキシー３，５−ジ
メトキシフェニル）　−４　．　５−ビス（４一メトキ
シフエニル）イミダゾールを用い以下のように調製した
。

リン酸ナトリウム緩衝液（５ミリモル濃度）中２０％の
ポリ　（ビニルピロリドン）？８液に固体ロイコ染料（
０．１％溶液調製を目的とする）を溶解した。次に、リ
ン酸ナトリウム溶液中過酸化水素（１０ミリモル濃度）
、４′−ヒドロキシアセトアニリド電子移動剤（０．７
ミリモル濃度）およびジエチレントリアミンペンタ酢酸
キレート剤（１０マイクロモル濃度）含有溶液に前記ロ
イコ染料溶液を添加し、最終濃度１％のポリ（ビニルビ
ロリドン）およびＯ．ＯＱ５％のロイコ染料を調製した
。

スクシニル化カゼインは、等重量のコハクＩ無水物とカ
ゼインを２５゜Ｃで４時間反応させて調製した後、透析
により生成物を精製した。

パル・コープ（Ｐａｉｌ　Ｃｏｒｐ．）から入手したＬ
ｏＰｒｏｄｙｎｅ　＠ナイロン微孔質膜を使い捨て試験
装置の壁に取り付け、Ｆｌｕｏｒａｄ　ＦＣ１３５界面
活性剤（０．０５ｇ／％）で前処理した。

例１　ストレプ　コ　カスＡ　　に　　るア　セーイー 本例は、生物学的検体中のストレプトコッカスＡ抗原を
検出する目的で本発明の方法における本発明の微孔質製
品の使用およびパインデイング試薬安定性の比較を示す
。

以下の特異的バインディング試薬を評価した。

本発明：試薬を、ポリ（アクリルアミド）バインダー（
５重量％）と混合した． 対照Ａ：試薬を、バインダーと一緒に使用しなかった． 対照Ｂ：試薬を、ウシ血清アルプミン（負荷電蛋白質、
０．１重量％）と組み合わせたポリ（アクリルアミド）
（５重量％）と混合した。

対照Ｃ：試薬を、ウシ血清アルブミン（０．１重量％）
のみと混合した。

ストレプトコッカスＡ抗原は、培養生物体を添加する前
に酸性共試薬（ａｃｉｄｉｃ　ｃｏｒｅａｇｅｎｔ）に
水性亜硝酸ナトリウムを混合する標準的亜硝酸抽出を使
用してグループＡストレップ培養物（Ｇｒｏｕｐ　Ａｓ
ｔｒｅｐ　ｃｕｌｔｕｒｅ）から得た。次に抽出流体に
過剰の緩衝剤を添加することにより中和した。グループ
Ａ炭水化物抗原は、酸性エタノールおよびアセトンを使
用し、上澄を廃棄し次いで０．８５％の生理食塩水にベ
レットを再懸濁することにより得た。ラムノースの濃度
は、ＤｉｓｃｈｅおよびＳｈａｔｔｌｅｓ，　Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ，Ｃｈｅｗ．　，　１７５，　　５９５〜６０３（
１９８４）　ノ方法ニヨリ測定された。この濃厚物を、
クエン酸（ＩＯｊ１１、１．２モル濃度）、亜硝酸ナト
リウム溶液（１２０ｍ、８モル濃度）および４−モルホ
リノプロパンスルホン酸緩衝液（１２０ＩＪ！、２モル
濃度、ｐｌｌ８）を含んでなる抽出試薬で再懸濁した。

前述の微孔質膜を、２つの使い捨て試験装置の各試験ウ
ェルに組み込んだ（すなわち、試験３通り行った）。コ
ポリ〔スチレン／ｍおよびｐ一（２−クロロエチルスル
ホニルメチル）スチレン］ビーズ〔グリシン緩衝液（０
．１モル濃度、ｐｌｌ８．５）中５重量％のボリ（アク
リルアミド）および０．０００５重量％の蛍光増白剤を
含有する固体１％の懸濁液２Ｉ〕から成る特異的バイン
ディング試薬分散体を、検体試験ウエルとして扱われる
試験ウエル中の膜中央帯域に添加した。

幾つかの使い捨て試験装置は、与えられた水準のストレ
プトコッカスＡ抗原による挙動について試験した。次に
、残りのものを加熱シール容器に入れ、相対湿度３０〜
５０％、３７゜Ｃで４週間維持する促進保存試験を行い
下記のアッセイを行った。

種々の特異的バインディング試薬を含有する各種使い捨
て装置に抗原試料（２００Ｉｌ１、炭水化物２０ｎｇ／
ｄを含有する）を添加し、排液した。４−モルホリノプ
ロパンスルホン酸緩衝液（０．１モル濃度、ｐＨ７．５
）中に接合体（９ｇ／Ｉｄ）とスクシニル化カゼイン（
０．５重量％）を含有する接合溶液（４０Ｉｌ１）を添
加し、次いでその装置を室温で２分間インキエベーショ
ンした。次に、排液した直後デシル硫酸塩（１８ｇ／ｌ
を含有する洗浄液（２４０ｍ）で２度膜を洗浄した。前
述のロイコ染料組成物を添加し、排液した後室温で２分
間その使い捨て装置を再度インキユベーションした。膜
上で得られる反射率濃度を測定し、標津的な手法により
透過濃度（Ｄア）に換算した。

アッセイの結果は以下のとおりであった。

本発明のアッセイは、４週間保存試験後、色素濃度がほ
んの４．９％の減少を示すにすぎなかった。

対照Ａは、色素濃度で２８％の減少を示したが、一方、
対照ＢとＣは、それぞれ１９％および７１％の減少を示
した。

この結果は、ポリ（アクリルアミド）と混合された本発
明の試薬組成物が、負荷電バインダーとの混合物として
使用された試薬に比し、相当改良された保存安定性を有
することを示す。対照Ｂのように少量のウシ血清アルブ
ミンでさえも著しい安定性の低下をもたらした。

低表面濃度の抗ストレプトコッカス抗体を伴うポリマー
粒子を含有する特異的パインデイング組成物を使用して
、例１の方法に従った。これらの粒子は、例１で使用し
た高濃度粒子に比し低い安定性を示すので本発明の安定
性改良を評価するためのより感度のよい指標を提供する
。

次の組成物を評価した。

例１：特異的バインディング試薬を、先の例に由来する
ポリ（アクリルアミド）と混合した。

例２：特異的バインディング試薬を、中性バインダーで
あるポリ（Ｎ−ビニル−２−ピロリドン）５重量％と混
合した。

例３：特異的バインディング試薬を、正荷電バインダー
であるコポリ（２−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニ
ウム）エチルメタクリレートクロライド／２−ヒドロキ
シエチルアクリレート〕（９０　Ｆ　１０重量比）５重
量％と混合した。

例４：特異的バインディング試薬を、正荷電バインダー
であるポリ（ジメチルジアリルアンモニウムクロライド
）５重量％と混合した。

対照Ａ：特異的バインディング試薬を、負荷電バインダ
ーであるポリ（スルホー１．１−ジメチルエチルアクリ
ルアミド）５重量％と混合した。

対照Ｂ；特異的バインディング試薬を、負荷電バインダ
ーであるポリ（アクリル酸）５重量％と混合した。

アッセイの結果は、３７゜Ｃで４週間維持した後次のよ
うな色素濃度の低下を示した。

例　　１　：　　　　　　１９％ 例２：９％ 例３：０％ 例４：９％ 対照Ａ：　　　　９９％０ 対照Ｂ：　　　　９９％８ ＊保存試験は３７゜Ｃで２週間以内に停止した．例ｌの
ポリ（アクリルアミド）は、対照の負荷電バインダーを
使用するものに比し、著しく改良された安定性を提供す
ることが理解できる。しかしながら、例２〜４は平均し
てより優れた安定性を提供した。

〔発明の効果〕

本発明は、生物学的検体における多様なりガンドを検出
するための迅速かつ正確な方法を提供する。特にこの方
法は、ストレプトコッカス属に属する菌性の抗原Ａのよ
うなストレプトコッカス属に属する菌性の抗原を検出す
るために有用である。

一般にこの方法は、ほんの数分間、例えば、必要があれ
ば抗原の抽出を含み約１０分未満で最も信頼のおける結
果を提供することができる。さらに、このアッセイは、
微孔質材の外面上に得られる検出可能な複合体が存在す
るので、低濃度のりガンドに対して高感度を示す。重要
な利点は、微孔質製品上の試薬について改良された保存
安定性を示すことである。

これらの利点は、外面に付着される粒子状の特異的バイ
ンディング試薬を有する微孔質製品であって、その試薬
に親水性中性または正荷電バインダー物質を添加されて
いる製品を使用することにより達成された。前記に示し
た比較の結果は、本発明により予期し得ない改良がなさ
れることを例証する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、リガンド−受容体アッセイにおいて標的リガンドの
   検出に使用するための水不溶性微孔質製品であって、少
   なくとも第一外面と第二対向外面を有し、そしてこれら
   の外面の少なくとも一つに標的リガンドに対する受容体
   分子が結合された水不溶性粒子を含む特異的バインディ
   ング試薬を含み、かつ１以上の親水性、中性または正荷
   電性ポリマーバインダーが添加された前記試薬を含んで
   なる組成物を付着して有する微孔質材からなる前記製品
   。 ２、Ａ、水不溶性微孔質製品であって、少なくとも第一
   外面と第二対向外面を有し、そしてこれらの外面の少な
   くとも一つに標的リガンドに対する受容体分子が結合さ
   れた水不溶性粒子を含む特異的バインディング試薬を含
   み、かつ１以上の親水性、中性または正荷電性ポリマー
   バインダーが添加された前記試薬を含んでなる組成物を
   付着して有する微孔質材からなる前記製品と、標的リガ
   ンドを含有することが予測される生物学的検体試料を接
   触させて、標的リガンドと受容体分子との間で特異的バ
   インディング複合体を形成する工程、ならびに Ｂ、検体における標的リガンドの存在を示すような前記
   複合体の存在を検出する工程、を含んでなる生物学的検
   体における標的リガンドの検出方法。 ３、Ａ、少なくとも第一外面と第二対向外面を有し、そ
   してこれらの外面の少なくとも一つに標的リガンドに対
   する受容体分子が結合された水不溶性粒子を含む標識さ
   れていない特異的バインディング試薬を含み、かつ１以
   上の親水性、中性または正荷電性ポリマーバインダーが
   添加された前記試薬を含んでなる組成物を付着して有す
   る微孔質材からなる水不溶性微孔質製品、ならびに Ｂ、検出可能に標識された受容体分子、を含んでなる標
   的リガンドの検出に役立つ診断試験キット。