JPH022390A - 新規なヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子 - Google Patents
新規なヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子Info
- Publication number
- JPH022390A JPH022390A JP63050871A JP5087188A JPH022390A JP H022390 A JPH022390 A JP H022390A JP 63050871 A JP63050871 A JP 63050871A JP 5087188 A JP5087188 A JP 5087188A JP H022390 A JPH022390 A JP H022390A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amino acid
- acid sequence
- macrophage colony
- coli
- granulocyte macrophage
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
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- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、医薬として有用な新規な構造を有するヒト顆
粒球マクロファージコロニー刺激因子（以下、ヒト顆粒
球マクロファージコロニーＩＩ＋ 激因子をＧＭ−Ｃ３
Ｆと略称する）に関する。
粒球マクロファージコロニー刺激因子（以下、ヒト顆粒
球マクロファージコロニーＩＩ＋ 激因子をＧＭ−Ｃ３
Ｆと略称する）に関する。
（従来の技術および課題を解決するための手段〕ＧＭ−
Ｃ３Ｆは骨職を刺激して、感染防御、免疫などに重要な
役割を果たす顆粒球マクロファージなど白血球の分化・
増殖を促進するサイト力インの一種であり、その−次構
造はすでに報告されている。（Ｇｏｒｄｏｎ Ｇ、 Ｗ
ｏｎｇ ｅｔ、ａ＋、、 ５ｃｉｅｎｃｅ２２８＋ ８
１０−８１５．（１９８５）；Ａｎｔｏｎｙ ｗ、 Ｂ
ｕｒｇｅｓｓ ｅｔ、ａ＋、。
Ｃ３Ｆは骨職を刺激して、感染防御、免疫などに重要な
役割を果たす顆粒球マクロファージなど白血球の分化・
増殖を促進するサイト力インの一種であり、その−次構
造はすでに報告されている。（Ｇｏｒｄｏｎ Ｇ、 Ｗ
ｏｎｇ ｅｔ、ａ＋、、 ５ｃｉｅｎｃｅ２２８＋ ８
１０−８１５．（１９８５）；Ａｎｔｏｎｙ ｗ、 Ｂ
ｕｒｇｅｓｓ ｅｔ、ａ＋、。
Ｂｌｏｏｄ、 ６９４３−５０１９８７）本発明者らは
、遺伝子組換え法により形質転換した大腸菌の菌体内に
産生させたＧＭ−Ｃ３Ｆを単離し、回収するにあたり、
大腸菌内ではＧＭＣ３Ｆが不活性な凝集体として得られ
るため、適当な条件で可溶化還元して直鎖状のＧＭ−Ｃ
Ｓ Ｆとして単離し、これを酸化して２組のジスルフィ
ド結合を有する活性なＧＭ−Ｃ３Ｆを導く過程において
、すでに報告されているものとは異なる新規なＧＭ−Ｃ
３Ｆが得られることを見出し、本発明を完成した。
、遺伝子組換え法により形質転換した大腸菌の菌体内に
産生させたＧＭ−Ｃ３Ｆを単離し、回収するにあたり、
大腸菌内ではＧＭＣ３Ｆが不活性な凝集体として得られ
るため、適当な条件で可溶化還元して直鎖状のＧＭ−Ｃ
Ｓ Ｆとして単離し、これを酸化して２組のジスルフィ
ド結合を有する活性なＧＭ−Ｃ３Ｆを導く過程において
、すでに報告されているものとは異なる新規なＧＭ−Ｃ
３Ｆが得られることを見出し、本発明を完成した。
本発明のＧ Ｍ −ＣＳ Ｆは、第１図記載のアミノ酸
配列（第１番目から第１２８番目まで）で特定されるＮ
末端にメチオニン残基が先行したＧＭ−Ｃ３ＦのＮ末端
からアミノ酸が７個（Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｐｒ。
配列（第１番目から第１２８番目まで）で特定されるＮ
末端にメチオニン残基が先行したＧＭ−Ｃ３ＦのＮ末端
からアミノ酸が７個（Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｐｒ。
Ａｌａ−Ａｒｇ−５ｅｒ−Ｐｒｏ）除去された、第１図
記載のアミノ酸配列の第８番目から第１２８番目のアミ
ノ酸配列で特定される新規なＧＭ−Ｃ３Ｆである。
記載のアミノ酸配列の第８番目から第１２８番目のアミ
ノ酸配列で特定される新規なＧＭ−Ｃ３Ｆである。
Ｃ以下、本明細書では第１図記載のアミノ酸配列（第１
番目から第１２８番目まで）で特定されるＮ末端にメチ
オニン残基が先行したＧＭ−Ｃ３ＦをＡ型とし、Ａ型Ｇ
Ｍ−Ｃ３ＦのＮ末端からアミノ酸が７個除去された本発
明のＧＭ−Ｃ３ＦをＢ型とする） 本発明のＧＭ−Ｃ３Ｆ Ｂ型は、以下に記す方法によ
り得られる。
番目から第１２８番目まで）で特定されるＮ末端にメチ
オニン残基が先行したＧＭ−Ｃ３ＦをＡ型とし、Ａ型Ｇ
Ｍ−Ｃ３ＦのＮ末端からアミノ酸が７個除去された本発
明のＧＭ−Ｃ３ＦをＢ型とする） 本発明のＧＭ−Ｃ３Ｆ Ｂ型は、以下に記す方法によ
り得られる。
第１図記載のＧＭ−Ｃ３ＦをコードするＧＭ−ＣＳＦ遺
伝子を常法により単離し、これを発現する組換え大腸菌
を常法により作成する。
伝子を常法により単離し、これを発現する組換え大腸菌
を常法により作成する。
好ましくはヒト白血病細胞０９３７株（ＡＴＣＣＣＲＬ
１５９３）由来のヒトＧＭ−Ｃ３Ｆ遺伝子を有する
プラスミドによって大腸菌に一１２株由来のＳＧ ９
３６株を形質転換し、得られた大腸菌をＬブロス培地等
の適当な培地で常法に従い培養し、ＧＭ−Ｃ３Ｆを産生
させる（ＰＣ？出願ＷＯ３７１０２０６０参照）。ＧＭ
−Ｃ３Ｆは不溶性の凝集体として宿主内に蓄積される。
１５９３）由来のヒトＧＭ−Ｃ３Ｆ遺伝子を有する
プラスミドによって大腸菌に一１２株由来のＳＧ ９
３６株を形質転換し、得られた大腸菌をＬブロス培地等
の適当な培地で常法に従い培養し、ＧＭ−Ｃ３Ｆを産生
させる（ＰＣ？出願ＷＯ３７１０２０６０参照）。ＧＭ
−Ｃ３Ｆは不溶性の凝集体として宿主内に蓄積される。
遠心分離等により培養した菌体を集め、適当な手段（例
えば超音波処理、フレンチプレス処理など）を用いて菌
体を破砕して、遠心分離によって不溶性の凝集体をとり
出す。この凝集体を適当な可溶化剤（例えば高濃度のグ
アニジン塩酸又は尿素）及び、分子内及び分子間に存在
すると思われるジスルフィド結合を切断するための還元
剤（例えば２−メルカプトエタノール）を用いて可溶化
する。還元体として含まれるＣＭ−Ｃ３Ｆをゲルろ過ク
ロマトグラフィーなどの手段によって一次精製する。凝
集体をとり出す段階で０ＭＣ３Ｆに夾雑している宿主由
来のタンパク質や核酸、また、細胞膜成分などのうち可
溶性成分およびＣＭＣ５Ｆと分子量の異なる夾雑成分を
上記の操作により除く。このとき、ＧＭ−Ｃ３Ｆ還元体
の純度は次の再生工程に支障の無い程度に低いことが望
ましく、好ましくは、２０〜５０％程度の純度とする。
えば超音波処理、フレンチプレス処理など）を用いて菌
体を破砕して、遠心分離によって不溶性の凝集体をとり
出す。この凝集体を適当な可溶化剤（例えば高濃度のグ
アニジン塩酸又は尿素）及び、分子内及び分子間に存在
すると思われるジスルフィド結合を切断するための還元
剤（例えば２−メルカプトエタノール）を用いて可溶化
する。還元体として含まれるＣＭ−Ｃ３Ｆをゲルろ過ク
ロマトグラフィーなどの手段によって一次精製する。凝
集体をとり出す段階で０ＭＣ３Ｆに夾雑している宿主由
来のタンパク質や核酸、また、細胞膜成分などのうち可
溶性成分およびＣＭＣ５Ｆと分子量の異なる夾雑成分を
上記の操作により除く。このとき、ＧＭ−Ｃ３Ｆ還元体
の純度は次の再生工程に支障の無い程度に低いことが望
ましく、好ましくは、２０〜５０％程度の純度とする。
このようにして得られたＧＭ−Ｃ３Ｆの還元体は適当な
酸化還元系（例えばグルタチオン又はシスティンの酸化
型及び還元型の混合物）を有する溶液中で２ｍのジスル
フィド結合を形成させ、活性なＧＭ−ＣＳＦを再生させ
る。再生後、ＧＭ−Ｃ３Ｆ濃度が低い時には限外ろか等
の方法により０．１ｍｇ／ＩＲ１以上、より好ましくは
０．５ｍｇ／ｍ以上の濃度に濃縮する。この再生溶液に
は、−次槽製によって除き得なかった宿主由来物質の他
、酸化還元剤、キレート剤等の夾雑物が存在するので、
ゲルろ過クロマトグラフィーか、あるいはイオン交換高
速液体クロマトグラフィーを用いて該夾雑物を除去する
。・このようにして得られたＧＭ−Ｃ３ＦＡ型、Ｂ型の
混合物を逆相高速液体クロマトグラフィーにかけ、分離
する。各ＧＭ−Ｃ３Ｆ活性画分を分取し、さらに精製し
、ＧＭ−Ｃ３Ｆの構造を検定することにより、目的のＧ
Ｍ−Ｃ３ＦＢ型を得ることができる。以上の各操作によ
り得られたＧＭ−Ｃ３Ｆ Ｂ型はＡ型より高い好中球
生存維持活性およびハムスター骨髄細胞コロニー形成活
性などの生物活性を有することが認められた。
酸化還元系（例えばグルタチオン又はシスティンの酸化
型及び還元型の混合物）を有する溶液中で２ｍのジスル
フィド結合を形成させ、活性なＧＭ−ＣＳＦを再生させ
る。再生後、ＧＭ−Ｃ３Ｆ濃度が低い時には限外ろか等
の方法により０．１ｍｇ／ＩＲ１以上、より好ましくは
０．５ｍｇ／ｍ以上の濃度に濃縮する。この再生溶液に
は、−次槽製によって除き得なかった宿主由来物質の他
、酸化還元剤、キレート剤等の夾雑物が存在するので、
ゲルろ過クロマトグラフィーか、あるいはイオン交換高
速液体クロマトグラフィーを用いて該夾雑物を除去する
。・このようにして得られたＧＭ−Ｃ３ＦＡ型、Ｂ型の
混合物を逆相高速液体クロマトグラフィーにかけ、分離
する。各ＧＭ−Ｃ３Ｆ活性画分を分取し、さらに精製し
、ＧＭ−Ｃ３Ｆの構造を検定することにより、目的のＧ
Ｍ−Ｃ３ＦＢ型を得ることができる。以上の各操作によ
り得られたＧＭ−Ｃ３Ｆ Ｂ型はＡ型より高い好中球
生存維持活性およびハムスター骨髄細胞コロニー形成活
性などの生物活性を有することが認められた。
以下実施例により、この発明をさらに詳しく説明する。
ス斯Ｉ津１
ヒト白血病細胞０９３７株 （Ａ Ｔ ＣＣＣＲＬ
１５９３）由来のｈＧＭ−Ｃ３Ｆ遺伝子を有するプラス
ミドによって 大腸菌に一１２株由来のＳＧ９３６株（
ＡＴＣＣ３９２６４）を形質転換し、得られた大腸菌（
ＤＳＭ３４７４）（ＰＣＴ出願賀０８７１０２０６０に
記載の公知菌株）を用いて、アンピシリン、カナマイシ
ンを含むしプロス培地で１４時間、３０’Ｃで培養し、
次に４２°Ｃに温度をあげて誘導をかけ、さらに３時間
焙養した。培養後に、菌体を超音波破砕により破壊し、
１２、ＯＯＯｒｐｍで３０分間遠心分離してペレット化
した。
１５９３）由来のｈＧＭ−Ｃ３Ｆ遺伝子を有するプラス
ミドによって 大腸菌に一１２株由来のＳＧ９３６株（
ＡＴＣＣ３９２６４）を形質転換し、得られた大腸菌（
ＤＳＭ３４７４）（ＰＣＴ出願賀０８７１０２０６０に
記載の公知菌株）を用いて、アンピシリン、カナマイシ
ンを含むしプロス培地で１４時間、３０’Ｃで培養し、
次に４２°Ｃに温度をあげて誘導をかけ、さらに３時間
焙養した。培養後に、菌体を超音波破砕により破壊し、
１２、ＯＯＯｒｐｍで３０分間遠心分離してペレット化
した。
得られたペレットをＯ，１Ｍ Ｔｒｉ−１１（：１（ｐ
ｆｌ ７．５）で洗浄後、６Ｍグアニジン塩酸及びＩ（
１ｍＭ ２−メルカプトエタノールを含む０．１Ｍ
Ｔｒｉ−１１ＣＩ（ｐＨ７，５）を用いて可溶化し、次
いでセファクリル５２００スーパーフアインカラム （
商標：ファルマシア社製）（２，６ｃｍ Ｘ ９４ｃｏ
＋、 ５００ａｄ樹脂）にかけて４°Ｃでゲルろ過クロ
マトグラフィーを行った。）吉川したＣＭＣ３Ｆ含有溶
液の総蛋白量中のＧＭ−Ｃ３Ｆ純度は４７％であった。
ｆｌ ７．５）で洗浄後、６Ｍグアニジン塩酸及びＩ（
１ｍＭ ２−メルカプトエタノールを含む０．１Ｍ
Ｔｒｉ−１１ＣＩ（ｐＨ７，５）を用いて可溶化し、次
いでセファクリル５２００スーパーフアインカラム （
商標：ファルマシア社製）（２，６ｃｍ Ｘ ９４ｃｏ
＋、 ５００ａｄ樹脂）にかけて４°Ｃでゲルろ過クロ
マトグラフィーを行った。）吉川したＣＭＣ３Ｆ含有溶
液の総蛋白量中のＧＭ−Ｃ３Ｆ純度は４７％であった。
さらにこの画分を４１システィン０．４ｍＭシスチンを
含む０．１Ｍ Ｔｒｉ−ＨＣＩ（ｐｔｌ ７．５）で４
°Ｃ５１２時間透析を行い、さらに新しいバッファー溶
液で４”Ｃ１１晩透析を行って、酸化型ＧＭ−Ｃ３Ｆを
含む再生溶液を得た。この溶液中のＧＭ−Ｃ２Ｆ４度は
０．０５ｍｇ／ ｍｌ であったので、再生溶液を１
２．０００ｒｐ−で３０分間遠心分離後、上清を限外ろ
かにより０．４ｍｇ７ｍ１に濃縮した。 得られた濃縮
液をセファデックスＧ−１００（商標；ファルマシア社
製） （２，６ｃｎ＋Ｘ９４ｃｍ、５００ｍ樹脂）にか
けてゲルろ過クロマトグラフィーを行い、溶出したＧＭ
−Ｃ３Ｆ含有溶液を、再度、限外ろかにより１．０ ｍ
ｇ／ ｍｌに濃縮した。
含む０．１Ｍ Ｔｒｉ−ＨＣＩ（ｐｔｌ ７．５）で４
°Ｃ５１２時間透析を行い、さらに新しいバッファー溶
液で４”Ｃ１１晩透析を行って、酸化型ＧＭ−Ｃ３Ｆを
含む再生溶液を得た。この溶液中のＧＭ−Ｃ２Ｆ４度は
０．０５ｍｇ／ ｍｌ であったので、再生溶液を１
２．０００ｒｐ−で３０分間遠心分離後、上清を限外ろ
かにより０．４ｍｇ７ｍ１に濃縮した。 得られた濃縮
液をセファデックスＧ−１００（商標；ファルマシア社
製） （２，６ｃｎ＋Ｘ９４ｃｍ、５００ｍ樹脂）にか
けてゲルろ過クロマトグラフィーを行い、溶出したＧＭ
−Ｃ３Ｆ含有溶液を、再度、限外ろかにより１．０ ｍ
ｇ／ ｍｌに濃縮した。
このようにして得られた、ＧＭ−Ｃ３Ｆとして１．８８
ｍｇを含む溶液を下記条件によりＨＰＬＣを用いて精製
を行った。
ｍｇを含む溶液を下記条件によりＨＰＬＣを用いて精製
を行った。
カラム：スミパックス ＯＤＳ Ａ−２１３（１０ｍ
ｍ Ｘ ２５０ｍ翔）（住友化学製）移動相：Ａ液０．
１２％トリフルオロ酢酸水溶液Ｂ液 水 溶出条件ニ一定の割合（Ａ液 ４３％、Ｂ液５７％）で
？８出させる。
ｍ Ｘ ２５０ｍ翔）（住友化学製）移動相：Ａ液０．
１２％トリフルオロ酢酸水溶液Ｂ液 水 溶出条件ニ一定の割合（Ａ液 ４３％、Ｂ液５７％）で
？８出させる。
流量：３ｍｆｌ／ｍｉｎ
カラム温度：室温
検出器：紫外線吸収計（測定波長２３０ｎｍ）保持時間
ｊ（１，Ｍ−Ｃ３Ｆ Ａ型 １７分Ｃ，Ｍ−Ｃ３Ｆ
Ｂ型 ２１分 分取したＧＭ−Ｃ３Ｆ Ａ型 Ｂ型の各成分をＢｒａ
ｄｆｏｒｄらの方法（Ｂｒａｄｆｏｒｄ、 Ｍ、 ｅｔ
、ａｌ、、 Ａｎａｌ。
ｊ（１，Ｍ−Ｃ３Ｆ Ａ型 １７分Ｃ，Ｍ−Ｃ３Ｆ
Ｂ型 ２１分 分取したＧＭ−Ｃ３Ｆ Ａ型 Ｂ型の各成分をＢｒａ
ｄｆｏｒｄらの方法（Ｂｒａｄｆｏｒｄ、 Ｍ、 ｅｔ
、ａｌ、、 Ａｎａｌ。
Ｂｉｏｃｈｅｍ、ユ２２４８（１９７６））によりタン
パク量を測定した結果、ＧＭ−Ｃ３Ｆ Ａ型０．５４
ｍｇ、 Ｇ Ｍ −Ｃ３Ｆ Ｃ型０．４ｈｇを得た
。
パク量を測定した結果、ＧＭ−Ｃ３Ｆ Ａ型０．５４
ｍｇ、 Ｇ Ｍ −Ｃ３Ｆ Ｃ型０．４ｈｇを得た
。
ＧＭ−Ｃ３Ｆの粗製品の高速液体クロマトグラムを第２
図に示す。
図に示す。
尖血班主
実施例１で得たＧＭ−Ｃ３Ｆ Ｂ型について気相アミ
ノ酸シークエンサーを用いてＮ末端アミノ酸配列を分析
した。その結果、ＧＭ−Ｃ３Ｆ Ｂ型はＡ型のＮ末端
アミノ酸が７個（Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｐｒ。
ノ酸シークエンサーを用いてＮ末端アミノ酸配列を分析
した。その結果、ＧＭ−Ｃ３Ｆ Ｂ型はＡ型のＮ末端
アミノ酸が７個（Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｐｒ。
Ａｌａ−Ａｒｇ−５ｅｒ−Ｐｒｏ）欠失したものである
ことが判明した。
ことが判明した。
実藷且Ｊ
ハムスター骨髄細胞のコロニー形成活性試験方法
ハムスター大腿骨を無菌的に摘出し、２％牛脂児血清含
有ａ−ＭＥＭ培養液（Ｓｔａｎｎｅｒｓ＋Ｃ，Ｐ、、ｅ
ｔ。
有ａ−ＭＥＭ培養液（Ｓｔａｎｎｅｒｓ＋Ｃ，Ｐ、、ｅ
ｔ。
ａｌ、、Ｎａｔｕｒｅ Ｎｅｗ Ｂｉｏｌｏｇｙ、２３
０：５２（１９７２） （Ｆｌｏｗ社製））を注入し、
骨髄細胞を洗い出した。この細胞をピペッティングでば
らばらにし、３分間静置する。細胞浮遊液をとり、同じ
培養液で洗浄した後、４０％牛脂児血清含有α−ＭＥＭ
培養液でｌＸｌ０／ｍ１の細胞濃度に調製する。この骨
髄細胞浮遊液および２％牛脂児血清含有α−ＭＥＭ培養
液で段階的に希釈したヒトＧＭ−Ｃ３Ｆをウェルに１０
０Ｉｌずつ入れて、３７°Ｃ，５％−酸化炭素の条件下
で培養する。培養４２時間後にα−ＭＥＭ培養液で４０
μｃｉ／ｘｉ！に調製したトリチウム標識チミジンを２
５μｌずつ各ウェルに添加しさらに６時間培養後、細胞
に取り込まれた放射活性を測定する。
０：５２（１９７２） （Ｆｌｏｗ社製））を注入し、
骨髄細胞を洗い出した。この細胞をピペッティングでば
らばらにし、３分間静置する。細胞浮遊液をとり、同じ
培養液で洗浄した後、４０％牛脂児血清含有α−ＭＥＭ
培養液でｌＸｌ０／ｍ１の細胞濃度に調製する。この骨
髄細胞浮遊液および２％牛脂児血清含有α−ＭＥＭ培養
液で段階的に希釈したヒトＧＭ−Ｃ３Ｆをウェルに１０
０Ｉｌずつ入れて、３７°Ｃ，５％−酸化炭素の条件下
で培養する。培養４２時間後にα−ＭＥＭ培養液で４０
μｃｉ／ｘｉ！に調製したトリチウム標識チミジンを２
５μｌずつ各ウェルに添加しさらに６時間培養後、細胞
に取り込まれた放射活性を測定する。
ＣＣＶ／ＣＣ）／２のトリチウム標識チミジン取り込み
を誘導するＧＭ−Ｃ３Ｆ量を５０単位／ｒｄと定義して
ＣＭ−Ｃ３ＦＯ比活性を求めた。但し、Ｃｖは最大トリ
チウム標識チミジン取り込み量ＣＣはＧＭ−Ｃ３Ｆ非存
在下に取り込まれたトリチウム標識チミジン量を表わす
。
を誘導するＧＭ−Ｃ３Ｆ量を５０単位／ｒｄと定義して
ＣＭ−Ｃ３ＦＯ比活性を求めた。但し、Ｃｖは最大トリ
チウム標識チミジン取り込み量ＣＣはＧＭ−Ｃ３Ｆ非存
在下に取り込まれたトリチウム標識チミジン量を表わす
。
試験結果 表１
表１の結果から、ＧＭ−Ｃ３Ｆ Ｂ型はＧＭ−Ｃ３Ｆ
Ａ型と同様、ハムスター骨髄細胞コロニー形成活性
を有することが認められた。
Ａ型と同様、ハムスター骨髄細胞コロニー形成活性
を有することが認められた。
第１図は組み換え大腸菌由来のＧＭ−Ｃ３Ｆのアミノ酸
配列を示す。 但し、Ａ：アラニン、Ｃニジスティン、Ｄ＝アスパラギ
ン酸、Ｅ：グルタミン酸、Ｆ：フェニルアラニン、Ｇニ
ゲリシン、Ｈ：ヒスチジン、１：イソロイシン、Ｋ：リ
ジン、Ｌ：ロイシン、Ｍ：メチオニン、Ｎ：アスパラギ
ン、Ｐニブロリン、Ｑ：グルタミン、Ｒ：アルギニン、
Ｓ：セリン、Ｔ：スレオニン、ｖ：バリン、ｗニトリブ
トファン、Ｙ二チロシンを各々表す。 第２図は実施例にて用いた粗製品ＧＭ−Ｃ３Ｆの高速液
体クロマトグラムを示す。 第１図 Ｍ Ａ Ｐ Ａ ＲＳ Ｐ Ｓ Ｐ
Ｓ Ｔ Ｑ Ｐ Ｗ Ｅ Ｈｌ ２
３ ４ ５ ６ ７ ８ ９］０１１ １２
１３１４１５＋６Ｖ Ｎ Ａ ｒ Ｑ Ｅ’
Ａ ＲＲＬ Ｌ Ｎ Ｌ Ｓ Ｒ１７
１８１９２０２１２２２３２４２５２６２７２ｇ ２
９ ３０ ３１ＤＴＡＡＥＭＮＥＴＶＥＶ Ｉ
５Ｅ３２ ３３ ３４ ３５ ３６ ３７ ３８ ３９
４０ ４＋ ４２ ４３ ４４ ４５ ４６ＭＦＤ
ＬＱＥＰＴＣＬＱＴＲＬＥ ４７ ４８ ４９ ＥＯ５１５２５３５４５５５６５
７５８５９６０６１し ＹＫＱＧＬＲＧＳＬＴＫＬＫ
Ｇ ＰＬＴＭＩＡＳＨＹＫＱＨＣＰＰ ＴＰＥＴＳＣＡＴＱ Ｉ ＩＴＦＥＳ９２ ９３
９４ ９：ｌ ９６ ９７ ９８ ９９１００１０
１１０２１０３１０４１０５１０６ＦＫＥＮＬＫＤＦＬ
ＬＶ Ｉ ＰＦＤ１０７１０８１０９１１０１
１＋ １１２１１３１１４１１５１１６１１７１１８
１１９１２０１２１−Ｓ−Ｓ−結合 ５５番目と９７
７番目！スティン８９番目と１２２５目のンスティン
配列を示す。 但し、Ａ：アラニン、Ｃニジスティン、Ｄ＝アスパラギ
ン酸、Ｅ：グルタミン酸、Ｆ：フェニルアラニン、Ｇニ
ゲリシン、Ｈ：ヒスチジン、１：イソロイシン、Ｋ：リ
ジン、Ｌ：ロイシン、Ｍ：メチオニン、Ｎ：アスパラギ
ン、Ｐニブロリン、Ｑ：グルタミン、Ｒ：アルギニン、
Ｓ：セリン、Ｔ：スレオニン、ｖ：バリン、ｗニトリブ
トファン、Ｙ二チロシンを各々表す。 第２図は実施例にて用いた粗製品ＧＭ−Ｃ３Ｆの高速液
体クロマトグラムを示す。 第１図 Ｍ Ａ Ｐ Ａ ＲＳ Ｐ Ｓ Ｐ
Ｓ Ｔ Ｑ Ｐ Ｗ Ｅ Ｈｌ ２
３ ４ ５ ６ ７ ８ ９］０１１ １２
１３１４１５＋６Ｖ Ｎ Ａ ｒ Ｑ Ｅ’
Ａ ＲＲＬ Ｌ Ｎ Ｌ Ｓ Ｒ１７
１８１９２０２１２２２３２４２５２６２７２ｇ ２
９ ３０ ３１ＤＴＡＡＥＭＮＥＴＶＥＶ Ｉ
５Ｅ３２ ３３ ３４ ３５ ３６ ３７ ３８ ３９
４０ ４＋ ４２ ４３ ４４ ４５ ４６ＭＦＤ
ＬＱＥＰＴＣＬＱＴＲＬＥ ４７ ４８ ４９ ＥＯ５１５２５３５４５５５６５
７５８５９６０６１し ＹＫＱＧＬＲＧＳＬＴＫＬＫ
Ｇ ＰＬＴＭＩＡＳＨＹＫＱＨＣＰＰ ＴＰＥＴＳＣＡＴＱ Ｉ ＩＴＦＥＳ９２ ９３
９４ ９：ｌ ９６ ９７ ９８ ９９１００１０
１１０２１０３１０４１０５１０６ＦＫＥＮＬＫＤＦＬ
ＬＶ Ｉ ＰＦＤ１０７１０８１０９１１０１
１＋ １１２１１３１１４１１５１１６１１７１１８
１１９１２０１２１−Ｓ−Ｓ−結合 ５５番目と９７
７番目！スティン８９番目と１２２５目のンスティン
Claims (1)
- 第１図記載のアミノ酸配列の第８番目から第１２８番目
のアミノ酸配列で特定されるヒト顆粒球マクロファージ
コロニー刺激因子ポリペプチド
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63050871A JPH022390A (ja) | 1988-02-23 | 1988-03-03 | 新規なヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4163388 | 1988-02-23 | ||
| JP63-41633 | 1988-02-23 | ||
| JP63050871A JPH022390A (ja) | 1988-02-23 | 1988-03-03 | 新規なヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH022390A true JPH022390A (ja) | 1990-01-08 |
Family
ID=26381278
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63050871A Pending JPH022390A (ja) | 1988-02-23 | 1988-03-03 | 新規なヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH022390A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997012054A1 (fr) * | 1995-09-28 | 1997-04-03 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | Lymphokine chemotactique neutrophile, medicament et necessaire de diagnostic de la granulopenie hypersensible aux medicaments la contenant |
| US6911204B2 (en) | 2000-08-11 | 2005-06-28 | Favrille, Inc. | Method and composition for altering a B cell mediated pathology |
| US7726941B2 (en) | 2004-07-30 | 2010-06-01 | Vestas Wind Systems A/S | Methods of handling wind turbine blades and mounting said blades on a wind turbine, system and gripping unit for handling a wind turbine blade |
-
1988
- 1988-03-03 JP JP63050871A patent/JPH022390A/ja active Pending
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997012054A1 (fr) * | 1995-09-28 | 1997-04-03 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | Lymphokine chemotactique neutrophile, medicament et necessaire de diagnostic de la granulopenie hypersensible aux medicaments la contenant |
| US6911204B2 (en) | 2000-08-11 | 2005-06-28 | Favrille, Inc. | Method and composition for altering a B cell mediated pathology |
| US8114404B2 (en) | 2000-08-11 | 2012-02-14 | Mmrglobal, Inc. | Method and composition for altering a B cell mediated pathology |
| US8133486B2 (en) | 2000-08-11 | 2012-03-13 | Mmrglobal, Inc. | Method and composition for altering a B cell mediated pathology |
| US8637638B2 (en) | 2000-08-11 | 2014-01-28 | Mmrglobal, Inc. | Method and composition for altering a B cell mediated pathology |
| US7726941B2 (en) | 2004-07-30 | 2010-06-01 | Vestas Wind Systems A/S | Methods of handling wind turbine blades and mounting said blades on a wind turbine, system and gripping unit for handling a wind turbine blade |
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