JPH02250834A - 脱髄疾患治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 皮呈上二丑■光団 本発明は、糖脂質の１種であるラクトシルセラミド（ｌ
ａｃｔｏｓｙｌｃｅｒａｍｉｄｅ）を有効成分とする新
規な脱髄疾患治療剤に関する。

従米及歪 脱髄（ｄｅｍｙｅｌ　１ｎａｔｉｏｎ）疾患は、中枢神
経系の白質血管の周囲炎あるいは神経を包む髄鞘が一次
性に崩壊することに起因する疾患群で、多発性硬化症や
視神経背髄炎、急性汎発性脳背髄炎、惑染後脳背髄炎な
どの疾患が含まれている。これらの疾患は、神経系の崩
壊によって筋肉麻痺や感覚異常が発生し、ついには死に
至る。現在のところ治療方法も確立されておらず難病の
一つである。またこの神経系の崩壊には非化膿性の炎症
が原因であるとも言われている。

これらの脱髄性疾患の中でも特に多発性硬化症（ｍｕｌ
ｔｉｐｌｅ　５ｃｌｅｒｏｓｉｓ）は多発性病巣の発生
と増悪、寛解を繰返す特徴があり、増悪と寛解を繰返し
ながら病状が進行し、また発症数も他の脱髄性疾患に比
較して多く、治療方法の早急な開発が望まれている。

多発性硬化症は動物における実験的アレルギ性脳背髄炎
（ＥｘｐｅｒｉＩｌｅｎｔａｌ　Ａｌｌｅｒｇｉｃ　Ｅ
ｎｃｅｐｈａｌｏａ＋ｙｅｌｉｔｉｓｓ以下ＥＡＥとい
う）がヒトの病患モデルになるといわれている。特に、
脱髄病変については病理学的にも同一であるといわれて
いる（昭和５９年２月２５日ソフトサイエンス社発行、
京極方久編「難治疾患のモデルと動物実験」°第２７５
〜２９７頁参照）。

このような動物モデルを使用した実験の結果、サイクロ
スポリンのような免疫抑制剤が多発性硬化症の治療効果
を示すことが明らかとなり、脱髄性疾患の治療に光明を
与えることとなった。しかし、この種の免疫抑制剤は肝
障害、白血球減少等強い副作用を示し、副作用の少ない
脱髄性疾患の治療剤の開発が強く望まれている。

が　゛　しようとする 本発明者等は、多発性硬化症などの脱胞疾患についてＥ
ＡＥモデルを使用して研究を行った結果、ラクトシルセ
ラミドがＥＡＥの進行を抑制する効果を有することを見
出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明の課題は、ラクトシルセラミドを有効
成分とする新規な脱胞疾患の治療剤を提供することにあ
る。

さらに、ラクトシルセラミドは、牛乳などの食品中にも
広く含まれており、また生体内成分であって毒性を示さ
ず、したがって、本発明の課題は、副作用の少ない新規
な脱胞疾患治療剤を提供することにある。

なお、近年脂質生化学の研究の進歩により糖脂質の生理
的機能が次第に解明されつつある。例えば、特開昭５９
−２３１０２０号公報には脱シアリル化ガングリオシド
が器官移植における拒絶を抑制することが、また特開昭
６４−２２８９３号公報には、ラクトシル化合物が細胞
保護作用を有し、自家皮賓移植やガラクトサミン誘発激
痛性肝炎の防御効果を示すことが記載されているが、本
発明のラクトシルセラミドが脱胞疾患の治療乃至予防に
有効であることについては文献未載である。

光里■盪威 本発明において有効成分として用いられるラクトシルセ
ラミドは、別名サイトリピンＨ（ＣｙｉｏｌｉｐｉｎＨ
）といわれ、ウシ肺臓、ヒト腫瘍等の動物組織あるいは
牛乳中に含有されている。

一般式（Ｉ）で示される公知物質である。

式中Ｒ１は直鎖に炭素原子９〜２２個有する脂肪族基で
あって１個もしくは２個以上の二重結合及び／又は側鎖
メチル基及び／又は水酸基をもっていてもより、Ｒ２は
炭素原子１２〜３０個を有する飽和又は１個もしくは２
個以上の不飽和結合及び／又は水酸基を有する脂肪酸の
アシル基である。

そして、この化合物はスフィンゴ糖脂質の１種であって
、分子内には２個以上の不斉炭素原子が存在する。本発
明ではこれらの不斉炭素原子に基づく光学的異性体や立
体異性体も包含する。

本発明のラクトシルセラミドを工業的に人手するには、
牛乳からラクトシルセラミドを抽出してもよいし、また
化学合成によって得てもよい。

牛乳からの抽出は、牛乳からバターを製造するさいに副
産物として得られるバターミルク粉を原料とするとよい
。このバターミルク粉の蛋白質をプロテアーゼによって
酵素分解し、限外濾過によって濃縮し、有機溶媒によっ
てスフィンゴ糖脂質を抽出する。この抽出液を濃縮乾固
し、さらにアセトン可溶画分を得、この両分をシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーによって分離精製するとよ
い。この方法によるとバターミルク粉から効率よくラク
トシルセラミドを得ることができる。

また、化学的合成を行う場合には、特開昭６４２２８９
３号公報記載の方法に準じて行うとよい。すなわち、ヒ
ドロキシル基をアシル基で保護した三糖類のフルオロ体
をアジド化合物と反応させ、保護基を除去し、アジド基
を一級アミノ基に変換し、これをＮ−アシル化すること
によって得ることができる。

本発明におけるラクトシルセラミドは、そのまま脱胞疾
患治療剤として使用することができるし、また従来公知
の製剤成分と混合して散剤、錠剤、カプセル剤として使
用してもよい、さらに溶解補助剤等を加えて溶解乃至懸
濁し、必要に応じて凍結乾燥を行って注射剤として使用
することができる。

脱胞疾患に対して投与するときは、注射または経口的に
投与し、１日体重当り０．１〜４ａ＋ｇ／ｋｇを投与す
ると効果を生ずる。

ラクトシルセラミドは牛乳等の食品中に広く含有されて
おり、また、生体内物質のため毒性を示さない。

さらに参考例及び実施例を示して本発明の詳細な説明す
るが、本発明はこれらに限定されるものではない。

参考例 を原　とするラクトシルセラミドの バター製造時に得られるバターミルク粉２０ｋｇを水１
８０１に溶解し、枯草、菌プロテアーゼ０．５ｋｇを添
加してｐＨ７，６、温度４０℃で１５時間反応を行って
蛋白質を分解した。その後９０℃で１０分間加熱して酵
素を失活させ、ＤＤＳ社製ＧＲ−５ＩＰ濾過膜を装着し
た限外濾過装置（ＬＡＢ−２０型モジユール、ＤＤＳ社
製）を用いて温度４０℃、流量１５１／分、平均圧力０
．６ＭＰａで濾過し、中性スフィンゴ糖脂質を濃縮した
。濃縮終了後、濃縮液を回収し、凍結乾燥を行って粉末
１　、４００ｇを得た。この粉末１ｋｇにクロロホルム
−メタノール混液（２：　１）１０　Ｎを加え、室温で
３０分攪拌してスフィンゴ糖脂質を抽出した。

次いでこの抽出液を濃縮乾固した後、アセトン２１を加
え、室温で２０分間攪拌を行って中性脂質をアセトン中
に溶出させた。アセトン溶出画分を分離除去し、残渣を
クロロホルムに溶解した。このクロロホルム溶液をシリ
カゲルカラム（４Ｘ　６０ｃｍ）に流し、中性スフィン
ゴ糖脂質を吸着させた０次いでクロロホルム２Ｉｌで洗
浄した後クロロホルム−メタノール混液（９：１）２１
を流下してまずグルコシルセラミドを溶出させ、その後
クロロホルム−メタノール混液（８：　２）　２　ｔｔ
を流下してラクトシルセラミドを溶出させた。この溶出
したラクトシルセラミド画分をロータリーエバポレータ
で蒸発乾固して白色粉末３０ｇを得た。このようにして
得られたラクトシルセラミドの純度を薄層クロマトグラ
フィーを用いて測定したところ純度９０％以上であった
。

さらにこの画分を再度シリカゲルカラムにより精製した
ところラクトシルセラミドとして純度９５％以上を含む
ものが得られた０、この物質は一般式（１）の化合物で
あって、 Ｒ＋＝　　ＣＩＣｌ１ｚ（Ｃ）Ｉ＋ｔ’Ｃ）ｌ＝ＣＩ−
ＣＩ−１Ｈ Ｒ２怠　ＣＨ３（ＣＩ＋□）！。−ＣＯ−１ＣＩ！（Ｃ
１１□）□−ＣＯ−１及びＣＨ３（ＣＨｚ）ｚｔ−ＣＯ
−などのラクトシルセラミド化合物を含有するラクトシ
ルセラミド混合物である。本発明ではこれを実施例にお
いて使用した。

実施例１ １クトシルセラミド　　の　゛町ｌ） ラクトシルセラミドＩｇを乳ｔｌｌＯＱｇと混合し、打
錠器で打錠して錠剤とした。この錠剤は１錠当り、ラク
トシルセラミド１０ｍｇ含有し、経口的に投与される。

実施例２ ラクトシルセラミド　　の　　テ２） ラクトシルセラミド５ｇを、界面活性剤５０ｇと共に蒸
留水１１に溶解し、アンプルに２ｗｄづつ充填し加熱殺
菌を行ってアンプル剤とした。この製剤は１アンプル当
り、ラクトシルセラミドｌ抛ｇ含有し、注射剤として用
いられる。

実施例３ ラクトシルセラミドによるＥＡＥラットの汁脱胞疾患の
１種、多発性硬化症モデルであるＥＡＥラットの治療効
果を示す。

Ｌｅｗｉｓラフト（メス６適冷）を１群５匹とし、ＥＡ
Ｅ誘発の抗原として同系ラットの脳ホモジェネートをフ
ロイント完全アジュバント（デイフコ製）と同量混合し
たものを脳ホモシュネート８Ｇ＋＋＋ｇ換算となるよう
にラットの後肢足踏に免疫した。

免疫当日より１８日間第１表に示される薬剤を腹腔内に
投与し、毎日体重測定とＥＡＥ症状観察を行った。ＥＡ
Ｅの症状としては６段階評価した。

すなわち、０：異常なし、１：尾麻痺、２：尾麻痺を伴
う後肢衰弱、３：尾麻痺を伴う後肢麻痺、４：後肢麻痺
を伴う前肢衰弱、５：四肢麻痺または前瀕死として各症
状の累積症状度により効果を判定した。

ラクトシルセラミドの投与は、参考例で得られたラクト
シルセラミドを滅菌ずみの０．５％メチルセルロースナ
トリウム水溶液にＩｍｇ／−または４ｍｇ７ｘｉの濃度
になるように懸濁し、これを腹腔内に投与した。

比較対照としてＥＡＥラットに対し、治療効果を示すと
いわれているサイクロスポリンＡ　（ＣｓＡ。

サンド社製）及びサイクロロイシン（ＣＬ、シグマ社製
）をそれぞれ生理的食塩水に１０ｗｇ／−の濃度になる
ように溶解し、フィルター滅菌を行ってこれをＣｓＡの
場合はＥＡＥラフトに対し５ｍｇ／ｋｇ。

ＣＬの場合はｌｏｍｇ／ｋｇそれぞれ別個に投与した。

この結果を第１表に示す。

第１表に示すようにラクトシルセラミドは生理的食塩水
のみを用いた対照にくらべて有意にＥＡＥの発症を抑制
した。この結果、多発性硬化症の治療剤乃至予防剤とし
て有用に利用できることが判明した。また、サイクロロ
イシンやサイクロスポリン等より微量でＥＡＥの発症を
抑制しており、これらの薬剤が腎障害等の副作用がある
ことを考慮すると、少量で副作用がなく多発性硬化症を
治療乃至予防できることが判明した。

また同様に、ラクトシルセラミドとガングリオシドとの
ＥＡＥラットに対する治療効果を比較した。すなわち、
牛脳より得られるガングリオシド混合物、Ｇ、４１、Ｇ
ＤＩｍ、ｃｏ＋ｂ、Ｇ？８．を５ｍｇ／ｋｇ投与してＥ
ＡＥの発症を抑制するかどうか検討したが、ラクトシル
セラミドが示すような顕著なＥＡＥへの効果が認めらな
かった。

実施例４ ラクトシルセラミドの　体産生抑止　果ラクトシルセラ
ミドのＥＡＥ発症阻止機構について検討を行った。すな
わち、実施例３実験２に示した生理的食塩水、ラクトシ
ルセラミド４ｍｇ／ｋｇ１あるいはサイクロスポリンＡ
（ＣｓＡ）５＋ｍｇ／ｋｇを投与したラットに対し、１
４日０に５０％羊赤血球（ＳＲＢ　Ｃ）０．２ｄを腹腔
内に投与し、１８日日目各ラットから牌臓を摘出し、単
細胞浮遊液を無菌的に調節した。赤血球を溶血法により
除去した後、ＲＰＭ　ｌ−１６４０培地で洗浄し、２Ｘ
１０’個／−の細胞密度の細胞浮遊液を調製した。

ヤーン（Ｊｅｒｎｅ）の方法による羊赤血球に対するプ
ラーク形成細胞を数え、ＩｇＭ　Ｐ　Ｆ　Ｃ数とした。

その結果を第２表に示す、この結果からみて、ラクトシ
ルセラミドはＣｓＡとほぼ同等の抗体産生抑制活性をも
つことが確認され、その活性に基いてＥＡＥ発症阻止を
するものと考えられる。

第２表 ラクトシルセラミドの抗体産生糸に及ぼす効果生理的食
塩水 ラクトシルセラミド　　４　　　２９　　　　　１Ｂｓ
Ａ １１と１果 本発明によると、多発性硬化症などの脱髄性疾患の副作
用がな（安全な治療剤を提供することができ、脱髄性疾
患を予防乃至治療することができる。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）ラクトシルセラミド（ｌａｃｔｏｓｙｌｃｅｒａ
   ｍｉｄｅ）を有効成分とする脱髄疾患治療剤。
2. （２）ラクトシルセラミド（ｌａｃｔｏｓｙｌｃｅｒａ
   ｍｉｄｅ）が牛乳由来のものである請求項（１）記載の
   脱髄疾患治療剤。