JPH02273195A - ヒト多型性上皮ムチンと反応するモノクローナル抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、ムチン糖蛋白質上のエピトープを認識するモ
ノクローナル抗体、この様なモノクローナル抗体を生産
するハイブリドーマ、これらのモノクローナル抗体の使
用、並びに該エピトープ及び免疫的に関連するペプチド
配列を含有するワクチンに関する。

〔従来の技術〕

悪性上皮細胞及び非−悪性上皮細胞は、かなりの分子量
多型性＜ｐｏｌｙｍｏｒｐｈ　ｉｓｍ）を示す糖蛋白質
であるムチン（ｍｕｃｉｎ）を分泌する。

ヒト多型性上皮ムチン（）ＩＰＥＭ−さらにＰＡＳ−０
゜ＰＥＭ、　ＥＭＡ及び）ＩＮＦＧＭとしても知られて
いる）は２０個のアミノ酸から成る単位（第１図）の纒
列（ｔａｎｄｅｍ）反復を含んで成ることがすでに報告
されている。集団中の個体間の反復数の多様性がＨＰＥ
Ｍ糖蛋白質のサイズ多型性を理由付けている。

上皮腺癌、例えば悪性の乳癌、卵巣癌、結腸癌、膵臓癌
又は他の腺組織の癌に覆った個体においては、腫瘍細胞
により前記のムチンが多量に分泌される。これらのムチ
ンは非−悪性上皮細胞により正常に生産されるムチンに
相当し、あるいは部分的にのみグリコジル化されている
場合がある異常なムチンである。この様な条件下で生産
されるムチンの量は、正常な非−悪性（ｎｏｎｔｕｍｏ
ｕｒｉｇｅｎｉｃ）上皮細胞により生産されそれを大き
く超える。

〔本発明の説明〕

本発明者らは、全く驚くべきことに、）ＩＰＥＭの各反
復配列のＣ−末端の５個のアミノ酸の連続する配列が、
ＩＩＰＥＭに対して向けられた特定のモノクローナル抗
体により検出されるエピトープを構成していることを見
出した。このエピトープは上皮腺癌により発現されそし
て分泌されるムチン上に存在し、そしてそれ故にこの領
域に対して向けられたモノクローナル抗体を使用して上
皮腺癌を検出することができる。

本発明の１つの観点に従えば、ＩＩ　Ｐ　Ｅ　Ｍの縦列
反復の配列ＡＬＡ　ＰＲＯＡＳＰ　ＴＩＩＲＡＲＧ（Ａ
ＰＤＴＲ）に特異的なモノクローナル抗体が提供される
。悪性上皮組織及び非−悪性上皮組織の両者により生産
されるムチン中に存在するこのエピトープは本発明のモ
ノクローナル抗体により特異的に結合される。このモツ
クローナル抗体は、ムチン分子それ自体中のこのエピト
ープのみならずその断片中のエピトープ及びそのアミノ
酸変形体をも認識することができる。確かに、このモノ
クローナル抗体はこのエピトープをそれを挟む蛋白質配
列とは無関係に認識することができる。すなわち、この
エピトープを含む５個以上のアミノ酸の短いペプチドが
本発明のモノクローナル抗体に結合することができる。

同様に、このエピトープは、エピトープそれ自体のアミ
ノ酸配列以外の一次アミノ酸配列についてムチン分子と
は異る蛋白質分子中にある場合、本発明の抗体により認
識されることができる。

エピトープのアミノ酸配列を変えることにより、本発明
者らは、この発明のモノクローナル抗体が次の配列； Ａ’　ＰＤ’　Ｔ’　Ｒ （式中、Ａ′はＡ、Ｐ又はＳであり； Ｄ′はＤ又はＮであり；そして Ｔ′は任意のアミノ酸である） に結合し得ることを見出した。

本明細書を通じて標準的１文字アミノ酸コードを使用す
る。便利のためこのコードを第２図に示す。

上記に基き、本発明のモノクローナル抗体はペプチド又
は蛋白質中のエピトープ＾５ＰＤＲ又はＡ’　ＰＤ’　
Ｔ’　Ｒ（式中、記号の意味は前記の通りである）に特
異的に結合することができ、エピトープを含むペプチド
又は蛋白質は、例えばＸＡＳＰＤＲＸ又はＸ＾’　ＰＤ
’　Ｔ’　ＲＸで表わすことができ、ここでＸは１〜ｌ
Ｘｌ０’個のアミノ酸であって同一でもよ（、又は蛋白
質分子中に存在する任意の既知Ｌ−アミノ酸の組み合わ
せであることができる。

本発明のモノクローナル抗体は、すでに検討したように
、悪性上皮細胞及び非−悪性上皮細胞の両者、例えば結
腸、卵巣、肺、乳房、又は他の分泌組織からの細胞によ
り生産されるムチンと反応する。これは、異状に加工（
ｐｒｏｃｅｓｓ）された腫瘍ムチン又は合成的に脱グリ
コジル化されたムチンとのみ反応するオーストラリア特
許出願Ｎα１１０３９／８８に記載されているモノクロ
ーナル抗体とは対照的である。これらの抗体は、本発明
の抗体と比較した場合低い親和性を有し、上皮腺癌によ
り多量に生産される正常ムチンを認識しないか又は弱く
認識するだけである。

本発明のモノクローナル抗体は、肝ＥＭ分子の特定の免
疫原領域に対して向けられているらしいので有利である
。本発明のモノクローナル抗体の由来、すなわちそれが
由来する種は重要ではない。

むしろ、本発明の抗体は、前記のごとく、エピトープ及
びその変異体に特異的に結合しなければなラナイ。従っ
て、本発明のモノクローナル抗体は薩歯動物、ウサギ、
ウマ、ヒツジ、ロバもしくはヒトに由来することができ
、又はこれらのバイブリドであることができる。

モノクローナル抗体は、Ｇｏｄｉｎｇ　（Ｍｏｎｏｃｌ
ｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　：　Ｐｒ１ｎｃｉｐａ
ｌｓ　ａｎｄ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　：第２版、アカデミ
ツク・プレス（１９８６）　）により記載されているよ
うな常用のそしてよく知られている方法に従って製造す
ることができ、この文献の記載を引用により本明細書に
組み入れる。要約すれば、本発明のモノクローナル抗体
は、）ＩＰＥＭ、又は脱グリコジル化もしアセチル化の
ごとき化学的手段により変形されたＨＰＥＭ、あるいは
エピトープＡＰＤＴＰを含有するこれらのペプチド断片
により動物を免疫感作することにより製造することがで
きる。これらのペプチドは合成することができそして場
合によってはキャリヤー蛋白質、例えばキーホールリン
ペット・ヘモシアニンに接合せしめることができ、そし
て免疫原として使用することができる。

これに続き、免疫感作された動物から免疫感作されたリ
ンパ系細胞（例えば、牌１１１Ｊンパ球）を得、このリ
ンパ系細胞を不滅化された細胞〔例えば、骨髄腫細胞又
は異骨髄腫（ｈｅｔｅｒｏｍｙｅｌｏｍａ）細胞］と融
合せしめることにより培養において無限に増殖すること
ができるバイブリド細胞を生成せしめ、そして次にバイ
ブリド細胞をスクリーニングすることにより注目のエピ
トープと反応するモノクローナル抗体を生産するバイブ
リド細胞を同定する。

便宜上本発明者らは、ＨＰＥＭの２０個のアミノ酸から
成る配列２個のアミノ酸１〜２４に相当するペブチド上
でハイブリドーマの上清を日常的にスクリーニングした
。

開山動物、特にマウスにおけるハイブリドーマの製造法
が非常によく確立された方法であり、そして好ましい。

安定な闇歯動物のハイブリドーマは選択された特性を有
する抗体の無限の供給源を提供する。しかしながら、本
発明が藁歯動物のモノクローナル抗体に限定されるもの
ではない。

所望により、俗歯動物又は他の動物の抗体を、Ｒｉｅｃ
ｈｍａｎｎ　ら（Ｎａｔｕｒｅ、　Ｖｏｌ、３２２．１
９８８年３月２４日、３２３−３２７頁）の方法に従っ
てヒト化（ｈｕｍａｎｉｚｅ）することができる。この
文献の記載を引用によりこの明細書に組み入れる。これ
らの方法によれば、組換ＤＮＡ法を用いて、ヒト抗体重
鎮及び軽鎖可変ドメインからの６個の超可変領域を回出
動物抗体からの超可変領域により置き換えることができ
る。再生された嶋ト抗体は、もとの超可変領域の存在に
基くもとの抗体の親和性を有するが、ヒト抗体の他のす
べての特性を有するであろう。

この明細書において使用する場合、「抗体」なる語は前
記のエピトープのための結合部位を有する抗体の断片、
例えばＦ　（ａｂ）　”断片及び単一免疫グロブリン可
変ドメイン（Ｗａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ、Ｖｏｌ、３４
１１９８９年１０月１２日、５４４−５４６頁に記載さ
れているような）を包含することが意図される。この文
献の記載もまた、引用によりこの明細書に組み入れる。

本発明の抗体は任意のアイソタイプのもの、例えばＩｇ
ｌ’ｌ又はＩｇＧであることができる。

本発明のモノクローナル抗体は検出可能なラベル又はレ
ポーター（ｒｅｐｏｒ　ｔｅｒ）基、例えば放射性同位
元素、酵素、金属、蛍光物質（ｆ　１　ｕｏｒｏｐｈｏ
ｒｅ）、又は他の直接的もしくは間接的に検出可能なラ
ベルによりラベルすることができる。酵素的に検出可能
なラベルの例にはパーオキシダーゼ及びウレアーゼが含
まれる。放射性同位元素の例にはｌＩ２５及び（ＩＮ、
並びにセシウム、テクネチウム及びインジウムの同位元
素が含まれる。蛍光物質の例にはフルオロレッセイン及
びローダミンが含まれる。レポーター基は抗体に直接に
接合せしめることもでき、又は静電的相互作用もしくは
他の相互作用により抗体と会合せしめることができる。

レポーター基に抗体を接合せしめ又はレポーター基によ
り抗体をラベル化する方法は当業界においてよく知られ
ており、そして例えばＧｏｄｉｎｇ　（前掲）により記
載されている。

レポーター基によりラベルされたモノクローナル抗体は
、生物学的サンプル中のＨＰＥＭの例えばイムノアッセ
イによる検出、切片の組織染色、又はＸ−線のごとき検
出手段もしくは他のイメージング方法を用いる腫瘍の位
置決定もしくは可視化のために使用することができる。

本発明の他の観点に従えば、ヒト多型性上皮ムチンの縦
列反復配列のアミノ酸配列ＡＳＰＤＲに特異的に結合す
るモノクローナル抗体を生産するハイブリドーマが提供
される。

ハイブリドーマ細胞系は当業界においてよく知られてい
る方法に従って製造される。すでに記載したように、Ｈ
ＰＥＭ又はエピトープＡＰＤＴＲを含有するそのペプチ
ド配列により動物を免疫感作する。

次に５、免疫感作されたリンパ系細胞、特に肺臓リンパ
球を不滅化細胞（好ましくは骨髄腫細胞）と融合せしめ
、そして生ずる不滅ハイブリドーマは培養において維持
する。次に、バイブリドーマにより生産されるモノクロ
ーナル抗体をエピトープＡＰＤＴＰへの結合について試
験する。これは、例えば、ポリエチレンピン又は他の支
持体上でこのエピトープ又はこのエピトープを含有する
ペプチド配列を合成することにより行うことができる。

次に、固定化されたペプチドへの結合を、例えばパーオ
キシダーゼによりラベルされた抗−抗体を用いるＥＬＩ
ＳＡにより検出することができる。次に、問題のエピト
ープを結合する抗体を選択しそして増幅する。ハイブリ
ドーマは、適切な増殖支持媒体の存在下での組織培養に
おいて増殖せしめることができ、この媒体の組成は、当
業界においてよく知られているように、特に親細胞系の
性質に依存するであろう。ハイブリドーマはまた動物中
で、特に腹腔中で増殖させることもできる。次に、目的
のモノクローナル抗体を収得し、そして例えばＧｏｄｉ
ｎｇ　（前掲）により記載されているようなよく知られ
た方法により精製することができる。

本発明のハイブリドーマ細胞系は、前に記載したような
目的とするモノクローナル抗体を分泌する連続的で且つ
安定な細胞系である。ハイブリドーマの親細胞系は同一
の種又は異る種に由来することができ、これらの種は例
えばマウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ヒト、ブタ
、ウマ、ヒツジ又はヤギから選択することができる。本
発明の特に好ましいハイブリドーマはハイブリドーマｃ
Ｂｃ１゜ｃＢＣ２及びｃＢＣ３により代表され、そして
これらはそれぞれ抗体ＢＣ１，ＢＣ２及びＢＣ３を生産
する。

本発明の他の観点に従えば、ＨＰＥＭの検出方法が提供
され、この方法は生物学的サンプルを前記の抗体と接触
せしめ、そして次に抗体の結合を検出及び／又は定量す
ることを含んで成る。

生物学的サンプルは血清、血漿、乳、尿、便、腹水、組
繊抽出物、細胞及び細胞上清から選択することができる
。

モノクローナル抗体をレポーター基によりラベルして抗
体の結合を検出及び／又は定量することができるように
することができる。このような薬剤には抗−抗体が包含
され、これはレポーター基又は他の薬剤、例えばスタフ
イルコツカス・アウＬ／’７ス（Ｓｔａ　ｈ　１ｏｃｏ
ｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）のプロティンＡによりラベル
することができる。

上記の方法によれば上皮腺癌例えば乳癌又は子宮癌を検
出することができる。癌状態はＨＰＥＭのレベルの上昇
により示される。

測定方法は、抗体を支持体に結合せしめ、疑われる抗原
を含有するサンプルを支持体に添加し、そして次に第二
のラベルされているか又は未ラベルの抗体を添加してＨ
ＰＥ？ｉの存在を検出する。あるいは、Ｉ（ＰＥＭを検
出する方法は、 （ｉ）生物学的サンプルをエピトープＡＰＤＴＰに結合
するモノクローナル抗体と接触せしめ；（ｉｉ）段階（
ｉ）のモノクローナル抗体と反応するペプチド配列を固
定化している支持体に段階（ｉ）の混合物を添加し；そ
して （ｉｉｉ）次に、抗体の結合を検出及び／又は定量する
：ことを含んで成る。

腫瘍細胞と会合したＩＩＰＥＭは、ｌ！Ｓ■又はインジ
ウムのごときレポーター基によりラベルされた抗体を患
者に注射し、そして次に例えばシンチレーションカメラ
又は他のイメージング技法を用いて抗体の結合を検出す
ることにより検出することができる。

本発明の他の観点においては、エピトープ八ＰＤＴＰ又
はエピトープＳ’　Ａ’　ＰＤ’　Ｔ’　Ｒｉ（式中、
Ｓ′はＡ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、に、Ｐ又はＳであり； Ａ′はＡ、Ｐ又はＳであり； Ｄ′はＤ又はＮであり；そして Ｔ′は蛋白質又はペプチド中に天然に存在する任意のア
ミノ酸である）、あるいは（Ｓ’　Ａ’　ＰＤ’Ｔ’　
Ｒ）　’　　、　　（ＡＰＤＴＩ？　）　１′及び（Ｓ
ＡＰＤＴＲ）　’　　（式中ｎは１〜１×１０ｈである
）で表わされる前記エピトープの多数コピーを含有する
又はそれらから成る合成非天然ペプチド又は蛋白質が提
供される。

この様なペプチド又は蛋白質はＩＩ　Ｐ　Ｅ　Ｍ分子の
エピトープＡＰＤＴＲに対して向けられた抗体と結合す
ることができる。

上に定義したペプチド又は蛋白質は腺癌の治療のための
ワクチンとして使用することができる。

これに関して、ＨＰＥＭＰＥ中のエピトープＡＰＤＴＲ
及びおそらく他の配列はマスクされておらず又は免疫系
に利用されることができる。すなわち癌状態において免
疫原性である。従って、前記のペプチド／蛋白質による
免疫感作の後に生産される抗体及びＴ−細胞はそれぞれ
細胞性機構及び液性機械を介してこれらの発現されたエ
ピトープと会合した腫瘍細胞の破壊を生じさせることが
できる。

本発明の合成ペプチドは特に、ｐ２１−２４．　ｐ２０
−２４゜ｐｉ９−２４．　ｐｉ８−２４．　ｐｉ７−２
４．　ｐｉ６−２４．　ｐｉ５−２４．　ｐ１４２４、
　　ｐｉ４−２３．　　ｐｉ−１５，ｐｉ３−３２．　
　ＴＳＡｐｌ−２４，Ａｐｌ−１５゜ｐｉ３−２３、及
びＣｐ１３−３２（式中、’ＰＪの後の数値はＨＰＥＭ
のアミノ酸反復配列２個のアミノ酸１−４０に関する）
から選択される。

エピトープＡＰＤＴＲに対して向けられた抗体に結合す
る能力を維持していることを条件として、前記のペプチ
ド配列にアミノ酸の欠失、置換又は挿人を加えて変更し
たペプチドも本発明のペプチドの範囲に含まれる。

本発明の他の観点において、前記のペプチドを医薬とし
て許容されるキャリヤー又は賦形剤と組み合わせて含ん
で成る腺癌に対するワクチンが提供される。キャリヤー
及び賦形剤には、塩溶液、アルブミン、デキストロース
、並びに当業界においてよく知られており、そして例え
ばＲｅｍｍＲｅｍｍ１ｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃ
ａｌ　５ｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｕ、Ｓ、ＰｈａｒｌＩ
ｌａｃｏｐｅｉａ（１９８４）　；マーク・パブリッシ
ング・カンパニーイーストン、ＰＡに記載されている他
のキャリヤーが含まれる。引用によりこの文献の記載を
本明細書に組み入れる。

上記のペプチドは補助配列、例えばＰＰＤもしくはＭＯ
Ｐ　、又はキャリヤー分子、例えばジフテリアもしくは
破傷風のトキソイドと接合又は会合せしめることができ
る。

ワクチンは特に、次の配列二 （Ｓ’　　Ａ’　ＰＤ’　　Ｔ’　　Ｒ）’　　−Ｙ（
ＳＡＰＤＴＲ）　−Ｙ （ＡＰＤＴＰ　）　”−Ｙｌ又は （ＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳＡＰ
ＤＴＲ）　’（式中、ｎは１〜１×１０ｈであり、Ｙは
補助配列又はキャリヤー分子であり、そしてＳ’、Ａ’
Ｄ′及びＴ′は前記の通りである） から選ばれた配列のペプチド又は蛋白質を含んで成る。

本発明の他の観点において、前記のＩＩ　Ｐ　Ｅ　Ｈの
エピトープＡＰＤＴＲと反応するモノクローナル抗体を
単独で又は医薬として許容されるキャリヤー又は賦形剤
と組合わせて含んで成る腺癌の治療のための療法組成物
が提供される。モノクローナル抗体は好ましくはヒト由
来のもの又はヒト化されたものである。すなわち、抗体
はヒト定常領域及び可変領域、並びにネズミ又はラット
のごとき他の種由来の超可表領域を含有する。このモノ
クローナル抗体は、細胞毒性剤、例えばりシンの細胞毒
性サブユニット、又は破傷風トキソイド、又は細胞毒性
剤、例えばメルフアラン（ｍｅｌｐｈａｌａｎ）　、プ
レオマイシン（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ）　、アンドリアマ
イシン（ａｎｄｒｉａｍｙｃｉｎ）　、ｎ−アセチルメ
ルフアラン、シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）　、
ダウノルビシン（ｄａｕｎｏ−ｒｕｂｉｃｉｎ）、アク
チノマイシン（ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）　、５−フル
オロウラシル、メソトレキセート（ｍｅｔｈｏｔ。

ｒｅｘａｔｅ）　、シクロホスファミド、並びにこれら
の塩及び誘導体と接合又は会合せしめることができる。

本発明を、図に言及しながら実施例により説明する。

第１図は、ＨＰＥＨの２０個のアミノ酸から成る反復単
位を示し； 第２図は、Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ、　Ｂｉｏｃｈｅａｓｔ
ｒｙ、第２版、Ｗｏｒｔｈ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ　Ｉ
ｎｃ、、　１９７Ｂから採用した常用の一文字アミノ酸
コードを示し；そして第３図は、モノクローナル抗体Ｂ
ＣＩ　（Ａ）及びＢＣ２（Ｂ）により認識される５ＡＰ
ＤＴＨの１換分析の「平均親応答Ｊ　（ｍｅａｎ　ｐａ
ｒｅｎｔ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ）の％を示す。２０個のＥ
ＬＩＳＡ値の各ブロックは、棒の下の単文字コードによ
り特定される単一アミノ酸置換を含有するペプチドにつ
いての結果を示す。５ＡＰＤＴＲ中の置換の位置を星印
により示す。親配列の６コピーについてのＥＬＩＳＡ値
を平均し、そして置換類似体について得られた値との比
較のための１００％として用いる。

司ユニ号 ＰＰＤ−精製された蛋白質誘導体 ＢＣＧ−バシルス・カルメツチーブニリン（ｂａｃｉｌ
ｌｕｓｃａｌｍｅｔｔｅ−ｇｕｅｒｉｎ） ＭＤＰ−ムラミルジ−ペプチド ＨＭＦＧＭ−人乳脂肪球ムチン ＰＢＳ−リン酸緩衝液 ＰｖＣ−ポリ塩化ビニル ■ １．０　　せ杢すαＬが法 １．１．　　量！慕」讐 ＨＭＦＧＭ（人乳脂肪球膜）を、Ｊａｒｕｓｃｈ　ら（
Ｊ、Ｃｅ１ｌ。

Ｂｉｏｌ、７３　：　２２３−２４１）によりすでに記
載されているようにして新鮮な人乳から単離した。次に
、生成した粗膜をベックマンＬ８−７０超遠心分離機を
用いる１０．０ＯＯＸ　ｇ、１．５時間４°Ｃでの遠心
分離により集めた。ベレットを０．３Ｍシュークロース
、７０ｍＭＫＣｊ２　、２ｍＭ　ＭｇＣｊ２．を含む１
０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−１１Ｃ１緩衝液（ｐＨ７，４）中に
再懸濁しそして一７０°Ｃにて貯蔵した。乳ムチンから
〇一連結された炭水化物を除去するため、分子をトリフ
ルオロメタンスルホン酸（ＴＦＭＳＡ）を１時間２０゛
Ｃにて処理して十分にストリップされたムチンを調製し
た。乳癌細胞系ＺＲ７５からの細胞表面膜をすでに記載
されている（Ｂｒ、Ｊ。

Ｓｕｒｇ、７５　：　８１１−８１７）ようにして調製
した。

１．２．且旦Ｖ分扼 モノクローナル抗体の抗−１（ＭＦＧ活性をｌ（ＭＦＧ
ｌ’ｌ結合アッセイにおいて測定した。粗ＨＭＰＧＭ又
はｐｉ−２４ペプチドを９６ウエルの柔軟性ＰｖＣプレ
ート（コスタ−）に炭酸緩衝液（ｐＨ９，６）中２５ｘ
／ｄにおいて３７°Ｃにて１時間コートした。非−特異
的結合部位を１％ＢＳＡ　（ウシ血清アルブミン）によ
り３７°Ｃにて１時間ブロックし、そしてプレートをＰ
ＢＳ（ｐＨ７，４０）　　、　、０．５％トウィーン２
０により洗浄した。精製された抗体（０，１５Ｉｇ／ｒ
ｄ−２０，００Ｉｇ／ｍ）を固相抗原と３７°Ｃにて２
時間反応せしめ、そして過剰の抗体を除去した後、西洋
ワサビ・パーオキシダーゼに接合したヒツジ抗−マウス
免疫グロブリン（アメルシャム）を添加し、そして３７
°Ｃにて２時間インキュベートした。プレートを再び洗
浄し、そして０．１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ４）中０．
０３％八ＢＴＳ（２，２−オキシノ−ジー〔３−エチル
ベンズチアプリンスルホネート）　”）　１０．０２％
Ｈ２０□を用いて発色せしめ、そして吸光度を４０５ｎ
＋ｍにて酵素イムノアッセイプレートリーダー（Ｔｉｔ
ｅｒｔｅｋ　Ｍｕｌｔｉｓ−ｃａｎ　ＭＣ）を用いて読
取った。組織培養の上清の形の抗体の脱グリコジル化さ
れたＨＭＦＧＭとの反応性を、脱グリコジル化されたＨ
ＭＦＧＭがコートされたウェルを用いて同様にして測定
した。

ピンに固定化されたペプチドに対するＥＬＩＳＡを次の
様にして行った。ピンに固定化されたペプチドを、１％
オバルブミン、１％ウシ血清アルブミン、０．１％トウ
ィーン２０．８　ＰＢＳ（ｐＨ７，２＞　　中及び０．
０５％ナトリウムアジドを含む２００１１１の緩衝液を
収容するミクロタイタープレート中で１時間（室温にて
撹拌しながら）コートした。次に、ピンを一夜４°Ｃに
て、同じ緩衝液中ウェル当り１５０ｍの抗体中でインキ
ュベートした。ＰＢＳ／　）ウィーン２０中室温にて撹
拌しながら洗浄（４Ｘ１０分間）した後、ピンを室温に
て１時間、ＰＢＳ／　）ウィーン２０中西洋ワサビ・パ
ーオキシダーゼによりラベルされたヒツジ抗−マウス免
疫グロブリン（１：４００）をウェル当り１５０Ｉｉ収
容するミクロタイタープレート中でインキュベートした
。次に、ピンをＰＢＳ／トウィーン２０で激しく撹拌し
ながら室温にて洗浄し、そして暗中室温にて、緩衝液１
００威当り０．０４ｒｄの）ＩｚＯｚを含有する０、１
Ｍリン酸塩０．０８Ｍクエン酸塩緩衝液中基質０，０５
％ＡＢＴＳ　（２、２−アジノージ−（３−エチルベン
ズチアゾリンスルホンスルホネート〕　（アマルシャム
、英国）をウェル当り　１５０！Ｊ１収容するミクロタ
イタープレート中でインキュベートした。プレートが十
分に色を有するように見えた時ピンを除去することによ
りインキュベーションを停止し、この後各ウェルから５
０Ｉを他のミクロタイタープレートに移し、そして吸光
度をただちに４０５ｍｍにてＴｉｔｅｒｔｅｋ　Ｍｕｌ
ｔｉｓｃａｎＭＣプレートリーダーを用いて読み取った
。

乳癌細胞系に由来するムチンへの精製された抗体（２，
２鱈／−〜３００．０可／戚の結合を２７５膜結合アッ
セイにより測定した。ＺＲ７５膜をＰＶＣプレート上に
コートしそして乾燥し、そしてＩＩ　Ｍ　Ｆ　Ｇ　Ｍ結
合アッセイと同様にして直接エリザを行った。血清サン
プル中のＭＳＡ活性を競争酵素イムノアッセイにより測
定し、この場合ＭＳＡを含有するＺＲ７５膜調製物への
モノクローナル抗体３Ｅ１．２の結合を阻害するために
血清を使用した。結合を阻害するこれらの能力を阻害単
位として１〜１０．０Ｏ０１，Ｕ、のスケールで表現し
た。乳癌を有する患者は３００〜１０．０００！、ｔｌ
、のレベルを有する傾向があり、そして正常個体は低い
レベル（＜３００１．０．）を存する。

１．３．　　イムノパーオキシダーゼ ホルマリン固定された組織の切片に対するイムノパーオ
キシダーゼ染色を５ｔａｃｋｅｒ　　（Ｊ、Ｎａｔｌ。

Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔ、７５　：　８０１−８１１（
１９８５）　）の方法に従って行った。染色を、染色さ
れた細胞の％：０％（０）、＜２５％（１）、２５−５
０％（２）、５０−７５％（３Ｌ＞７５％（４）、及び
染色強度により評価した。

院から得た。染色の基準は容認された定義に従った（Ｂ
ｅａ　ｔｈｒｓ　　ら、八ｍｅｒｉｃａｎ　Ｊｏｉｎｔ
　Ｃｏｍｍ１ｔｔｅｅ　ｏｎＳｔａｇｉｎｇ　Ｍａｎｕ
ａｌ　ｆｏｒ　Ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ
　、第２版、フィラデルフィア：リツビンコット（１９
８３））　。

工状血清は、赤十字血液銀行（オーストラリア、メルボ
ルン）の見かけ上健康な血液提供者から得た。血清サン
プル及び乳は一７０°Ｃにて凍結して保存した。

ミクロタイタープレートを０．５Ｍ炭酸緩衝液（ｐｉ（
９，６）中の種々のモノクローナル抗体（１００ＪＪ１
／ウエル）でコートし、そしてウェルを２％ウシ血清ア
ルブミン及び２％正常マウス血清の溶液でブロックした
。血清サンプルを緩衝液（ＰＢＳｌｏ、０５％トウィー
ン２０）中に１：４で稀釈し、そして４°Ｃにて４時間
にわたり加えた。次にプレートを洗浄し、そして１２５
■−ラベル化抗体を２．５Ｘ１０’〜３．　ＯＸ　１０
’ｃｐｍ１５０ｍ　／ウェル（１４０〜１８０　ｍｇ／
ウェルに相当する）で４°Ｃにて４時間加え、次にプレ
ートを洗浄し、そして各ウェルの放射能を測定した。高
ＭＳＡ　（ＨＰＥＭ分子と関連する、乳癌と関連する抗
原）レベル（＞１０，０ＯＯｒ、ｕ、）を有する転換乳
癌を有する患者からの血清サンプルの参照プールを用い
て得た換算曲線と比較することにより、放射能カウント
をユニットに転換した。血清中の抗原のレベルを、それ
ぞれＢＣ３／ＢＣ２試験について１００ユニツト（平均
±ＳＤ）及びＢＣ３／３Ｅ１．２試験について８０ユニ
ツト（平均±２ＳＤ）の抗原レベルが仮に与えられた正
常個体からの血清のパネルとの放射能カウントの比較に
より血清中の抗原レベルを与えた。

１．６．　　祭ｊ６Ｌ工ｐヒ狗葭 ペプチドは標準的マニフィールド固相法（Ｈｏｄ−ｇｅ
ｓ、　Ｒ，Ｓ、及びＭａｒｒｉｆｉｅｌｄ、　Ｒ，Ｂ、
（１９７５）Ｂｉｏｃｈｅｍ。

６５：２４１）に基いてアプライド・バイオシステムス
・モデル４３０＾自動ペプチド合成機（フォスター。

シティ−１ＣＡ、米国）を用いて調製した。トリフルオ
ロ酢酸による脱保護、ジイソプロピルエチルアミンによ
る中和及びあらかじめ形成されたアミノ酸対称無水物を
介してのジシクロへキシルカルボジイミドを用いるカッ
プリングによる段階法により鎖の組立てを行った。Ｂｏ
ｃ及びＡｏｃアミノ酸誘導体及びポリスチレン樹脂は日
本、蛋白質研究所から購入した。工程をアニリン反応に
よりモニターシ（Ｓａｓｒｉｎ　ら、１９８１　、　Ａ
ｎａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ　１１７）そしてペプチドを無
水トリフルオロメタンスルホン酸により開裂せしめた。

粗ペプチド（ｐｌ−２４，ｐｉ−１５゜ｐｉ６−２４）
を逆相高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）　（ウ
ォーターズ・アソシエーション、ミルフォールド、ＭＡ
、米国）により、０．１％トリフルオロ酢酸−水−アセ
トニトリル勾配及びＣ８−アクアボールＲｐ−３００カ
ラム（ブラウンリー、米国）を用いて情調した。合成ペ
プチドｐｉ−２４，ｐｉ−１５、及びｐｉ６−２４は分
析用逆相１１ＰＬｃ及びアミノ酸配列分析により判定し
た場合的９０％の純度であった。ペプチドは、２０個の
アミノ酸から成る反復２個から成るペプチドｐｌ−４０
中の位置番号により、又は個々のアミノ酸とそれに続く
ペプチド名称との組合せにより命名されている。幾つか
の短いペプチド、すなわちｐ２１−２４．　ｐ２０−２
４．　ｐｌ９−２４．　ｐｌＢ−２４，ｐ１７２４、　
ｐｌ５−２４．　ｐｌ４−２４．　ｐｌ４−２３、及び
Ｐへ十ｐｉ−１５は精製しなかった。対照として無関係
のペプチド７４Ｎ１　（マウスＣＤ４のアミノ末端に相
当する）を用いた。ペプチドは１−２４アミノ酸ペプチ
ド中のそれらの位置に従って命名されている（第２表）
。

１．７．　　ポリエチレンビンを　いるペプチド人市販
のキット（ケンブリッジ・リサーチ・バイオケミカルス
、ケンブリッジ、英国）を用いてペプチドを合成した。

合成は８×１２配置の固体ポリエチレンピン上で、フル
オレニルメチルオキシカルホニル（Ｆｍｏｃ）　−Ｌ−
アミノ酸のペンタフルオロフェニル（ｐｆｐ）活性エス
テルを用いて行った。この例外はセリン及びスレオニン
であり、この場合ｐｒｐを（ＯＤｈｂｔ）で置き換えた
。使用した側鎖保護基は、システィンのためにトリチル
、アスパラギン酸及びグルタミン酸のためにも一ブトキ
シ、ヒスチジン及びリジンのためにｔｅｒ　ｔ−ブトキ
シカルボニル、アルギニンのために４−メトキシ−２゜
３．５−トリメチル、そしてセリン、スレオニン及びチ
ロシンのためにｔｅｒｔ−ブチルであった。ヘキサメチ
レンジアミン及びアクリル酸を介して照射されたポリエ
チレンにあらかじめ結合されたＦｍｏｃβ−アラニン残
基をピンに供給した。合成の最初の段階として、このＦ
ｍｏｃ保護基を、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）　（
ペプチド・シンセシス・ブレース、オースベプ、オース
トラリア）中２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジン（アプライド
・バイオシステムス、フォスターシティ−１Ｃ＾）を用
いる穏和な塩基性開裂により除去した。使用した他のす
べての化合物質は分析グレード以上のものであり、そし
てさらに精製することなく使用した。脱保護及び洗浄に
続き、適切なＦｍｏｃ−アミノ酸エステルを、３０ｍＭ
　１−ヒドロキシベンゾトリアゾールを含有するＤＭＦ
中に３０ｍＭの濃度に溶解することによって活性化した
。この溶液のアリコート（１００ｍ）をすぐにポリエチ
レントレーに分配した。アミノ酸のカップリングを室温
にて１８時間行った。ヘキサペプチドが合成されるまで
脱保護及びカップリング段階を行った。次に、各ペプチ
ドのＮ−末端を、ＤＭＦ　：無水酢酸ニジイソプロピル
エチルアミン（５：　２　：　Ｉ　　Ｖ／Ｖ／Ｖ）との
反応によりアセチル化し、そして最後に側鎖の脱保護及
び中和を、トリフルオロ酢酸：フェノール：エタンジチ
オール（９５：２５：　２．５　　Ｖ／Ｗ／Ｖ）及びこ
れに続くジクロロメタン：ジイソプロビルエチルアミン
（９５：５　　Ｖ／Ｖ）中での洗浄により行った。

ピンをメタノール中で１８時間洗浄し、そして真空乾燥
した。

各８×１２ピンチブロツク上での好結果の合成を、陽性
及び陰性対照ピンの合成、並びに製造者によりその上で
対照ペプチドが合成されたピンに対する試験モノクロー
ナル抗体との対照ビンの反応性の比較により免疫化学的
に決定した。各場合において、合成された対照ピンは製
造者により与えられたものと同じ反応性を示した。

最初の使用に先立って、及びすべての再使用の前に、ピ
ンを分解工程にかけて結合している抗体を除去した。ピ
ンを、６０°Ｃにあらかじめ加温された１　トドシル硫
酸ナトリウム、０．１％　２−メルカプトエタノール、
０．１Ｍオルトリン酸二水素ナトリウムの緩衝液中で３
０分間音波処理し、そして熱蒸留水及び沸騰メタノール
により洗浄した。

１．８．　　ＢＳＡ−ペプチド　人　のペプチドを、グ
ルタルアルデヒドカップリング法（Ｂｒｉａｎら、１９
８５　、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｍｅｔｈｏｄｓ　７
８　：　５９６９）の変法を用いてウシ血清アルブミン
（ＢＳＡ）に接合させた。１　ｍｌのペプチド（１■／
ｄ）及び０、１蔵の２％ＢＳＡを０．５蔵の０．２５％
グルタルアルデヒドと、周囲温度において６時間混合し
、そしてこの混合物をＰＢＳに対して４°Ｃにて一夜透
析した。

１．９．　　入　ペプチ　への　　の　人合成ペプチド
又はＢＳＡ−ペプチド接合体を９６ウエル柔軟性ＰＶＣ
プレート（コスタ−）に、０．０５Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ
９，６）中２０ｎ／ｍｌにて、３７°Ｃで２時間コート
した。ＰＢＳ−０，０５％トウィーン２０により洗浄し
た後、精製したモノクローナル抗体を各ウェルに２倍稀
釈（１５０ｘ／　ＩＩｎｌ−７５ｎ／ｍｅ）で添加し、
そして周囲温度にてインキュベートした。２時間後、プ
レートを十分に洗浄し、そして西洋ワサビパーオキシダ
ーゼによりラベルされたヒツジ抗−マウス免疫グロブリ
ンをプレートに加え、そして周囲温度にて１時間インキ
ュベートした。プレートを洗浄し、そして０．０２％Ｈ
，０□を含有する０、１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＦ＋４）
中０．０３％八ＢＴＳ（２゜２−アジドージ（３−エチ
ル−ベンズチアプリンスルホンスルホネートの添加によ
り、結合した抗体を検出した。Ｔｉｔｅｒｔｅｋ　Ｍｕ
ｌｔｉｓｋａｎ　ＭＣを有して４０５ｎｍにて吸収を測
定した。陽性対照としてＩＩＭＦＧＭを１０■／戚にて
プレートにコートした。

抗体をペプチドの稀釈物（０，４ｘｘｏ−’　−０，８
ｎＭ）と又はＨＭＦＧ　（０，４ｔｒｇ／ｍｌ　−８０
ＯＮｇ／ｄ）と室温にて１時間インキュベートし、そし
て次に１０ｘｒ／ｄのＨＭＦＧによりコートされたプレ
ートに添加することにより、ペプチドを液相で試験した
（競争アッセイ又は阻害アッセイ）。ＩＩ　Ｍ　Ｆ　Ｇ
への抗体の結合の阻害を、西洋ワサビパーオキシダーゼ
でラベルされたヒツジ抗−マウス免疫グロブリンにより
定量した。

１．１０．　　　　　の２ＩＫａ） １１ＭＦＧ又はペプチドｐｉ−２４への結合についての
モノクローナル抗体ＢＣＩ及びＢＣ２の親和性をラジオ
イムノアッセイ法により決定した。ＨＭＦＧ又はｐｉ−
２４を用いてコートされたＰＶＣ９６ウエルプレート中
で１２５１で放射能ラベルされた抗体ＢＣＩ及びＢＣ２
の逐次稀釈物により測定を行った。抗体結合のカウント
７分をガンマ−カウンター（ＬＫＢ　Ｗａｌｌａｃ　１
２６０、フィンランド）において測定した。Ｋａを計算
するため、Ｓｃａ　ｔｃｈａｒｄの方法を用いた。

１．１１．五−生 クラス−特異的ウサギ抗血清（セロレック、イングラン
ド）を用いてオークテルロニー・ゲル免疫拡散法により
抗体クラスの分析を行った。モノクローナル抗体を腹水
から精製した。ＩｇＧ抗体はプロティンＡ−セファロー
ス（ファルマシア社、ビス力タウエイ、１１．Ｊ）によ
り、そしてＩｇＭ抗体は３３％飽和硫酸アンモニウムに
よる沈澱及びリン酸緩衝液（ＰＢＳ）　（ｐＨ７，４）
に対する４°Ｃでの透析により精製した。本発明書にお
いて言及するモノクローナル抗体には、−次乳癌に対し
て生じた３Ｅ１．２（Ｓｌａｃｋｅｒら、１９８５＋　
Ｊ、Ｎａｔｌ、Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔ、　７５　：８
０１−８１１）結腸癌と反応する５Ｃ１（ＩｇＭ）、及
びＲＣＣｌ、　Ｍｒ９５．ＯＯＯの抗原と反応するＩｇ
Ｇ２ａ　（Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、１９８３、　ＪＮＣｌ
、　７０　：　４０９−４１９）が含まれた。

２．０．　　モノクローナル　　の　１　び（ＣＢＡＸ
ＢＡＬＢ／　Ｃ）　Ｆ　Ｉマウス（＃ｉ性、８週令）を
完全ソロインドアジュバント中に乳化した２０ＯＮの）
ＩＭＧＨの３〜６週間の間隔で３回の腹腔内注射により
免疫感作し、そして融合の３日前に２００ＩＩｇのＩＩ
ＮＦＧＭ及び１００ｐ７の人乳により腹腔内に追加免疫
した。肺臓を摘出し、そして０．８３％ＮＨＡＣｆｆｉ
中でほぐして赤血球を除去し、そして懸濁液をデカント
し、そして２００Ｘｇにて５分間遠心分離し、そしてペ
レットを２回無血清ＤＭＥＭ中で洗浄した。肺細胞（４
Ｘ１０’）を２．１０’の洗浄されたＭＳ−１骨髄腫細
胞と混合し、そして２００Ｘｇにて５分間遠心分離し、
そして上清を廃棄した。次に、ペレットを０、８　ｄの
５０％（Ｗ／Ｖ）ポリエチレングリコール（Ｍｒ　１，
５００　　；　ＢＤｆｌケミカルス、プール、イングラ
ンド）中に再懸濁し、３７°Ｃにて１分間インキュベー
トし、そして２００Ｘｇにて５分間遠心分離し、次に上
清を除去し、そしてペレットを、フィーダー細胞として
ＢＩＯ，Ａ様の胸腺細胞を含有し１０％ＦＣ５を含むＤ
ＭＥＭ中に３０ｄ　七なるように再懸濁した。

上清を２８８個のウェル（３枚のマイクロタイタープレ
ート；コーク・ラボラトリーズ、シンガポール）に分配
した。ＨＡＴ　（シグマ・ケミカル社、セントルイス、
Ｍｏ、）を補給した新鮮なりＭＥＭを１゜２．４．７及
び９日目に添加した。１００日目すべてのウェルを抗体
産生について個別にスクリーニングした。

組織培養上清をＥＬＩＳＡ試験を用いてＨＭＦＧＭに対
する抗体についてスクリーニングした。次に、陽性ハイ
ブリドーマをクローン化し、そして限界稀釈法により再
クローン化し、そして次にブリスタンニよりプライムさ
れた（ＣＢＡＸＢＡＬＢ／　ｃ　）　Ｆ　ｔ　”ウスに
おいて腹水腫瘍として増殖せしめた。セクション１．１
１．に記載したようにして、腹水からモノクローナル抗
体を精製した。得られたバイブリドクローンから、３種
類の抗体、すなわちＢＣＩ（１ｇＧ３）、　ＢＣ２（Ｉ
ｇＧ１）及びＢＣ３（ＩｇＭ）が、ＥＬＩＳＡにより決
定する場合の免疫原（）ＩＭＦＧＭ）との強い反応性及
びＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　Ａｃｔｉｖａｔｅｌ　Ｃ
ｅ１ｌ　５ｏｒｔｅｒ　５ａｎ（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃ
ｋｉｎｓｏｎ、　Ｍｏｕｎｔａｉｎ　Ｖｉｅｗ、　ＣＡ
、米国）（Ｔｅｈら、１９８Ｂ、　Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ
、Ｍｅｔｈｏｄｓ　１１０　：　１０１−１０９）によ
る、リンパ球又は顆粒球となんらの反応性を示さないこ
とに基き選択した。次に、これらの抗体を、乳癌、正常
乳房及び良性乳房腫瘍のホルマリン固定されパラフィン
封入された切片に対してスクリーニングした。モノクロ
ーナル抗体ＢＣＩ　、　ＢＣ２及びＢＣ３はそれぞれハ
イブリドーマｃＢｃ１．ｃＢｃ２及研究所病理学部、メ
ルボルン大学、パークビル３０５２、ビクトリア、オー
ストラリア（ＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｒｅ　ｆｏｒ　
Ｃａｎｃｅｒ　ａｎｄ　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｎｔｉｏ
ｎ　ａｔ　ｔｈｅＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐａｔ
ｈｏｌｏｇｙ、　Ｔｈｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ
Ｍｅｌｂｏｕｒｎｅ、　Ｐａｒｋｖｉｌｌｅ　３０５２
．　Ｖｉｃｔｏｒｉａ）に寄託された。

２．１０組員立布 筒１表は、前記３種類の抗体と種々の腫瘍との反応性を
示す。抗体ＢＣＩ、　ＢＣ２及びＢＣ３により検出され
る抗原はホルマリン固定及びパラフィン封入に耐えた。

試験した４４の乳癌の内４２／４４　、４０／４４及び
４３／４４がそれぞれ抗体ＢＣＩ、　ＢＣ２及びＢＣ３
について陽性であった。乳癌（浸潤したもの及びその場
でのもの）は膜及び細胞質の両者並びにある場合には発
光（ｌｕｍｉｎａｌ）膜染色及び末梢亢進（図示してな
い）を示した。多くの場合（〜７ｏ％）、染色された癌
細胞の％は〉７５％であり、そして染色強度は強かった
。これに対して、ＢＣＩ、　ＢＣ２及びＢＣ３は豚房及
び管における正常孔上皮細胞の先端膜（ａｐｉｃａｌ　
ｍｅｍｂｒａｎｅ）と弱く反応した。他の正常組織とは
不均一な反応性が存在したが、一般に正常細胞との反応
性は弱かった。特に、結合組織、筋肉又はリンパ腺との
反応性を示すものは存在せず、前記抗体はイムノリンボ
シンチグラフィー（ｉ　ｍｍｕｎｏ　ｌ　ｙｍｐｈｏｓ
ｃ　ｉｎ　ｔ　ｉｇｒａｐｈｙ）において潜在的に有用
である。しかしながら、幾つかの正常上皮組織、特に膵
臓、腎臓及び肺において非常に弱い反応性が検出された
。

ＢＣｌ、　ＢＣ２及びＢＣ３と反応する抗原の細胞分布
を、３つの一次浸潤管乳癌及び対応する転移病変におい
て検討した。−次病変と対応する転移病変との間に染色
された癌細胞の％及び染色強度の差異が存在し、腫瘍塊
間の抗原の不均一性と一致した。１つの腫瘍における染
色された癌細胞の比率及び染色強度はまた抗体の間でも
異った。

抗体がムチンを認識することを確認するため、ＨＭＦＧ
Ｍ及びＺＲ７５膜（ＨＰＥＭを含有しない細胞膜調製物
）の調製物を用いるＥＬＩＳＡ実験において、及び多発
性（ｄｉｓｓｅｍｉｎａｆｅｄ）乳癌を有する患者血清
を用いるイムノブロア）実験において試験した。抗体は
、異る由来のムチン調製物に結合するその能力において
相互に異が、これらはすべて高分子量（２３０，０００
〜３３０，０００）の分子を認識することが見出された
。これらの分子は血清中に存在し、抗体３Ｅ１．２によ
り認識されるものと少なくとも部分的に同時泳動した。

さらに、より小さい分子量の種（Ｍｒ　〜１１０，００
０）も）ＩＮＦＧＭにおいて抗体ＢＣＩ、　ＢＣ２及び
ＢＣ３により検出された。３Ｂ１．２が授乳中の乳房に
よりプロセスされた無傷のムチン０１ＭＦＧＭ）と反応
せず、そして血清中の類似の高分子量の分子と反応する
点において、抗体ＢＣＩ、　ＢＣ２及びＢＣ３により認
識されるエピトープは抗体３Ｅ１．２により認識される
それと異るから、これらと乳ムチンコアー蛋白質との反
応性を試験するのが適当である。

〇−結合オリゴサッカライドを除去するため、蛋白質コ
アーを損傷することなくムチンから糖を除去するのに有
効であることが示されているＴＦＭＳＡ　（Ｅｄｇｅら
、１９８１．　Ａｎａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、１１８　：
　１３１−１３７）によりＨＭＦＧＭを処理した。室温
にて１時間の処理の後、高分子量バンドが消失し、−一
〜７０，０００のポリペプチドバンドが生じた。ＢＣＩ
、　ＢＣ２及びＢＣ３は免疫原として無傷のムチン（乳
脂防球から）を用いて得られたものであるにもかかわら
ず、これらの抗体は炭水化物が除去されたムチンと強く
反応した。これに対して、抗体３Ｅ１．２はグリコジル
化されたＨＭＦＧＭ又は脱グリコジル化されたＨＭＦＧ
Ｈのいずれとも反応しないか又は弱く反応するに過ぎな
かった。これらの知見は、ＢＣＩＢＣ２及びＢＣ３がコ
アー蛋白質のエピトープに結合することを示唆している
。

）ＩＰＥＨの第一の反復の２０個のアミノ酸と次の反復
の４個のアミノ酸をｐｌ−２４として第２表に示す。長
さの異るペプチドを合成し〔第２表〕、そして無関係の
ペプチドＴ４Ｎ１　（陰性対照）も対照として含めた。

これらのペプチドへの抗体の結合を固相直接結合アッセ
イにおいて試験した。抗体ＢＣＩ、　ＢＣ２及びＢＣ３
と合成ペプチドとの陽性及び陰性の反応を示した。

直接結合アッセイにおいて、３種類の抗体（ＢＣＩ。

ＢＣ２及びＢＣ３）はｐｌ−２４及びｐｌ４−２４　（
右側の１１−　ｍａｒペプチド”ＡＦＩＧＶＴＳＡＰＤ
ＴＲ”）に結合したが左側の１５−ｍｅｒ（’　ＰＤＴ
ＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡ）ｌ　”　）には結合しなかっ
た。さらに、ｐｌ５−２４　（右側の１０−ｍｅｒ）　
と反応した。ＰＤＴＲがこれらのペプチドの両者に共有
されており、そして一方は反応性であり、他方は反応性
でなく、この４−ｍｅｒ自体は反応性エピトープではな
いと予想された。しかしながら、反復ペプチド中のＰＤ
ＴＲに隣接するアミノ酸（アラニン）である可能性があ
り、このためＮ−末端アミノ酸としてＡを有するｐｌ−
１５（すなわち、Ａ＋ｐｌ−１５）を再度合成した。１
個のアミノ酸の付加が、今まで非−反応性であったｐｌ
−１５を反応性にするのに十分であり、ＡＰＤＴＲが抗
体反応性エピトープであることが示された。これに基き
、Ｎ−末端に１個のアミノ酸を加えることにより異る６
個の短いペプチドを合成した（ＰＤＴＲ−＋ｐ１６−２
４．　９−ｍａｒ）　、これらはいずれも直接結合アッ
セイにおいて反応しなかった。

従って、＾ＰＤＴＰは、それが他のアミノ酸に隣接した
場合に反応性エピトープであるようであった。但し、こ
れらのアミノ酸の性質及びどちらに付くかは重要ではな
いようであった。このことは、少なくとも固相において
ペプチドのコンホーメーションは隣接するペプチドを必
要とすることを示唆したので、これに基きペプチドをキ
ャリヤー蛋白質（ＢＳＡ）に付加した。これらの反応を
直接結合アッセイにおいて決定し、そしてすべてのペプ
チドを液相競争アッセイにおいても試験した。

第２表には記載されていないが、幾つかの他の抗−ＨＭ
ＦＧ抗体（ＣＣ−２，ＣＣ−３，ＣＣ−４，２８４及び
４１．３）並びに結腸癌に対するモノクローナル抗体（
ＸＰＸ−１，ＬＸ−４゜ＳＭＡ−１，１７Ｃ４１−１及
びＧＪＴ−１３）はこれらのペプチドと反応しなかった
。おそらくこれらは炭水化物依存性エピトープ又は前記
線状ペプチド中では現われない三次構造を有するエピト
ープと反応するであろう。

いずれの抗体も「対照」であるＣＤ４ペプチド（７４Ｎ
１）とは反応しなかった。

２．５．　　　　　入ア　セイ　び　　　人ア　セイに
、応 ＨＰＥＭのアミノ酸配列に基（種々の合成ペプチド及び
その変形体を合成し、そして直接結合アッセイ及び阻害
アッセイにおける抗体ＢＣＩ、　ＢＣ２及びＢＣ３との
結合について試験した。結果を第３表に示す。

第３表から明らかなように、ＡＰＤＴＲは液相競争（阻
害）ＥＬＩＳ＾アッセイにおいてＩＩＭＰＧＭへのＢＣ
Ｉ、　ＢＣ２及びＢＣ３の結合を阻害したがｐｉ−２４
より弱かった。

アミノ酸５個の類似体はいずれもＩＩＭＦＧＭへの結合
を阻害しなかった。エピトープがペプチドの中央に存在
するｐｌ３−３２のペプチド（これは疎水性領域に相当
する）においては、ｐｌ−２４に比べて増加した抗体結
合が観察された。

類似体Ａｐｌ−１５，Ａｐｌ−２４，ＴＳＡｐｌ−２４
及びＣ−ｐＢ−３２はいずれも抗体ＢＣＩ、　ＢＣ２及
びＢＣ３への強い結合を示し、これはｐｉ−２４への結
合により強かった。これらのペプチドは１つのペプチド
中に２個のエピトープを含有することも予想されるから
この結合は単純に反応が２倍強くなったことを示すもの
ではない。ＴＳＡ　ｐｔ−２４はＡ−１−２４よりも２
倍以上強＜　ＴＳＡ−ｐｉ−２４と反応した。この結果
は、ｐｉ−２４へのＴＳＡの付加により全体ペプチドコ
ンホーメーションが反応のためにより適当であるように
変化することを示唆している。このことは、この明細書
に記載するエピトープ八ＰＤＴＰ又はその変形体に対応
するアミノ酸配列か反復しているペプチドを合成するこ
とにより抗原性を有意に増強することを可能にする。こ
れらの知見は非常に重要である。なぜなら、免疫原性の
高いペプチド／蛋白質を製造することができ、次にこれ
を腺癌の診断及び／又は治療において使用することがで
きるからである。ペプチドＣ−ｐ１３−３２のＮ−末端
におけるシスティンの存在は、ダイマー、トリマー等の
形成、又は他の環の形成を介してペプチドの反応性を増
強することができる。

すべてのペプチドのＢＳＡ−ペプチド接合体（ｃｏｎｊ
ｕｇａｔｅ）を調製し、そして直接結合アッセイにおい
て試験した（第２図）。この結果は、八ＰＤＴＲが反応
性エピトープであるが、しがしＰＤＴＲ又は左側の１−
１５はエピトープでない（但し、ＢＣＩについては弱い
反応性が観察されたが、示してない）ことを確認した。

すなわち、この結果が示すところによれば、ＢＳＡ−ｐ
２１−２４．　ＢＳＡ−ｐｉ−１５及びＢＳＡ−Ｔ４Ｎ
１はなお非反応性であったが、ＢＳＡ−ｐ２０−２４．
　ＢＳＡ−ｐｉ９−２４．８ＳＡ−ｐ１８−２４、　Ｂ
ＳＡ−ｐｉ７−２４及びＢＳＡ−ｐｉ６−２４は陽性で
あった。なお、これらは非接合ペプチドとしては非反応
性であった。さらに、ＢＳＡ−ペプチド接合体であるＢ
ＳＡｐ１５−２４．　ＢＳ＾−ｐｉ４−２４、及びＢＳ
Ａ−ｐｉ−２４は両アッセイにおいて陽性であった。３
種類の抗体のすべてが５−ｍａｒであるＡＰＤＴＲと反
応することが明らかであった。

２．７．顧浄ターと１１ 液中でのペプチドのコンホーメーションは固相中でのそ
れと異る可能性があるので、溶液中（直接結合アッセイ
において前記したような固相においてではなく）でのペ
プチドの反応を競争阻害アッセイにより試験した。これ
らの研究においては、可溶性ペプチドを、ＨＭＦＧの結
合を阻害するそれらの能力について試験した。結果を第
２図に「■害試験」として示す。阻害試験の結果はペプ
チド接合体への直接結合により得られた結果に大いに匹
敵する。しかしながら、５−ｍａｒ　（ｐ２０−２４八
ＰＤＴＲ）又は６−ｍｅｒ　（ｐｉ９−２４５ＡＰＤＴ
Ｒ）によってはＢＣ３の阻害が起こらないことが注目さ
れた。ＩｇＭであるＢＣ３はより小さいＩｇＧ抗体に比
べて溶液中で小さいペプチドにより効果的に阻害されな
いのであろう。

２．８．　　ピン上の人　ペプチドへの　　の　人セク
ション１．７．で記載したように、ポリエチレンピン上
でペプチドを合成した。

ビンに結合したペプチドＡＰＤＴＲは抗体ＢＣＩＢＣ２
及びＢＣ３により特異的に結合された。ペプチドＰＤＴ
Ｒ及びＴＳＡＰＤＴＲもポリエチレンピン上で合成した
。抗体はＰＤＴＲと反応しなかったがＴＳＡＰＤＴＰと
非常に強く反応した。これらの結果は、ＡＰＤＴＲがＢ
ＣＩ、　ＢＣ２及びＢＣ３により認識されるエピトープ
であることを確認するものである。

エピトープＡＰＤＴＲ中のアミノ酸のいずれかを、抗体
結合を破壊することなく変えることができるか否かを決
定するため、６−ｍｅｒ　５ＡＰＤＴＲを、各位置を２
０種類すべてのアミノ酸で変えて合成した。

すなわち、１２０種類のペプチドをポリエチレンピン上
で合成し、そして抗体結合を検出した。結果を第３Ａ図
及び第３Ｂ図に示す。

第３Ａ図はＢＣＩを用いるＥＬＩＳＡアッセイにおける
置換の結果を示す。残基Ｒ及びＲを他のいずれのアミノ
酸で置換してもペプチドへの結合が実際上完全に失われ
るので、明らかに、これらの残基は抗体結合のために必
須である。同様に、残基りは、関連アミノ酸Ｎによる場
合を除き、はとんど完全に置換不能である。Ｓ残基は実
質上すべてのアミノ酸により完全に置換可能であり、八
ＰＤＴＰが最小エピトープであることの更なる確認を与
える。

ＡはＰ＋Ｓによる限定された置換可能性を示し、他方Ｔ
は非常に高度な置換可能性を示す。Ｔはグリコジル化部
位であろうから、このアミノ酸それ自体はエピトープに
寄与しない可能性がある。

第３Ｂ図はＢＣ２についての同じＥＬＩＳ＾の結果を示
す、ＢＣＩのそれに非常に類似した結果が得られた。完
全に置換不能の残基はＰ及びＲであった。

Ａ及びＤは限定された置換可能性を示した。Ｓ及びＴに
ついては比較的普遍的な置換可能性が示されたが、後者
については幾つかの顕著な例外があった。

第３図に示される結果は、エピトープＳ’　Ａ’ＰＤ’
　Ｔ’　Ｒ（式中、Ｓ′はＡ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ。

Ｋ、Ｐ又はＳであり；Ａ′はＡ、Ｐ又はＳであり；Ｄ′
はＤ又はＮであり；そしてＴ′はペプチド又は蛋白質中
に存在する天然の任意のアミノ酸である）が、天然エピ
トープＡＰＤＴＲよりも強く抗体に結合することを示し
ている。この結果は非常に重要である。なぜなら、これ
らの配列又はその反復を含むか又はこれらから成るペプ
チド／蛋白質は１１ＰＥＭの検出のためのアッセイにお
いて、又は当業界においてよく知られているように適当
なキャリヤーもしくはアジュバントとの組合わせにおい
てワクチンとして使用することができるからである。

３．０．坑潜」」野刀Ｗ刑比 ヒトＩＩＰＥＨのエピトープＡＳＰＤＲに対して反応性
のモノクローナル抗体は反復して生産することができる
。これは、セクション２．ｏ、の方法による融合を反復
して行うことにより証明された。次に、ハイブリドーマ
を、セクション１．２．の方法によりポリエチレンピン
に結合したペプチドＡＰＤＴＰに対してスクリーニング
することにより抗体生産について試験した。エピトープ
ＡＰＤＴＲと反応する抗体を分泌するハイブリドーマが
反復して検出された。

例えば、１回の融合において、スクリーニングされた１
３６個のハイブリドーマの内、５個のハイブリドーマが
エピトープＡＰＤＴＲと反応する抗体を生産した。

血清中の同じ分子上のモノクローナル抗体（ＢＣＩ。

ＢＣ２，ＢＣ３及び３Ｅ１．２）規定エピトープの同時
発現を確認するために二重決定基イムノアッセイを用い
た。血清試験においてＢＣ抗体が３Ｅ１．２を補完する
か否か（ＭＳＡアッセイ−ＭＳＡ抗原は乳癌と関連し、
そしてこの様な状況の患者の血清中で検出可能である。

抗原はＨＰ　Ｅ　Ｍであり、そして抗体３８１．２によ
り検出される）を決定することは興味あることであった
。第４表に示すようにＩＺＪ−ラベル化ＢＣＩ、　ＢＣ
２，ＢＣ３及び３Ｂ１．２抗体は、ＢＣ３抗体がコート
されそして多発性乳癌を有する患者の血清が添加された
ウェルに結合し、ＢＣＩ、　ＢＣ２及び３Ｂ１．２抗体
により規定されるエピトープの幾つか又はすべてが、血
清中のＢＣ３抗原分子と少なくとも比例してＢＣ３によ
り規定されるエピトープと同時発現されることが示され
る。

乳癌患者及び正常対象者からの血清に対する予備試験か
ら、すべての抗体が転移乳癌を有する幾つかの患者にお
いて上昇した血清抗原レベルを検出するようであったが
、その精度は抗体間で異った。　　ＢＣ３／ＢＣ２及び
ＢＣ３／３Ｅ１．２（いずれの場合も抗原捕捉のために
ＢＣ３抗体を使用）は最良の結果を与え、転移乳癌を有
する患者からの血清のそれぞれ８７％及び８１％におい
て上昇した抗原レベルを与えた。ＢＣ３７ＢＣ２試験（
８７％）又はＢＣ３／３Ｂ１．２試験（８１％）の感度
はＭＳＡ試験のそれより低がったが、しかし正常対象に
おける特異性は匹敵した（第５表）。

ＭＳＡ試験によって陰性とされた２個の腫瘍患者血清（
転移癌）の両者がＢＣ３／３Ｅ１．２又はＢＣ３／ＢＣ
２試験において陽性であった。従って、ＭＳＡ試験とＢ
Ｃ３／ＢＣ２又はＢＣ３／３Ｅ１．２試験との組合せに
より多発性乳癌の患者の１００％が陽性と判断され、特
異性の低下は伴わなかった（第３表）。従って、ＢＣ３
／ＢＣ２アッセイ及びＢＣ３／３Ｅ１．２アツセイは、
多発性乳癌を有する患者においてＭＳ＾試験に比べて陽
性の検出は少なかったが、再試験はＭＳＡ試験の補完の
点で有用であると考えられる。

３．２．　８ＣＩ　　びＢＣ２の ＨＭＦＧ及びペプチドｐｉ−２４ニ対するＢＣＩ及びＢ
Ｃ２の親和性を試験した。ＢＣ２（Ｋａ　１．７　Ｘｌ
０１０）はＢＣＩ（Ｋａ　１．３　ＸＩＯ’）に比べて
ＨＭＦＧに対して約１０倍高い親和性を示した。ペプチ
ドｐｉ−２４に対して類似の結合が起った（約３倍；　
ＢＣＩ：　Ｋａ　８．　ＯＸＩＯ’；ＢＣ２Ｋａ　２．
５　Ｘｌ０９）。ｐｉ−２４ペプチドに対するＢＣＩ及
びＢＣ２の親和性はｌ（ＭＦＧに対するより低かった。

ＢＣ３はｒｇＭであるためこの抗体の親和性は測定しな
かった。

】ユ」Ｌ−表 二重霜定基イムノアノセイを用いての、ＢＣ３により　
定される分子上のエピトープ発現の分析抗体でコートｌ
！ＩＩ−抗体の結合（ｃｐｓ）°３（１掃間 ４ＸＩＯ” ２ＸＩＯ” ９Ｘ１０” ５Ｘ１０” （ｂ　）　ＰＢＳｌｏ、０５％トウィーン２０゜男−」
■−表 乳癌を有する患者及び正常対象者における血清試験の比
較其７し↓討２酩ｌえ・、・ ｆＪ−ス至二乏ｌ／Ｎ”’ ＭＳＡ（３Ｅ１．２）　　　　　　３　／６６　（５％
）　　　３７／３９　（９４％）ＢＣ３／ＢＣ２４／６
６　（６％）　　　３４／３８　（８７％）ＢＣ３／３
Ｂ１．２　　　　　２　／２５　（８％＞　　　１７／
２１　（８１％）ＭＳ＾及びＲＣ３／１ｌｃ２　　　３
　／６６　（５％）　　　３９／３９　（１００％）い
てそれぞれ３００１．Ｕ、、１００ユニツト及び８０　
　ユニットのカットオフレベルを用いた。各アッセイに
おいて抗原レベルの定量化のために便宜上のユニットを
使用した。

（ｂ）ステージ決定の規準はＢｅａｈｒｓら（１８）の
報告に行う。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＨＰＥ？ｌの２０個のアミノ酸から成る反復
単位を示す。 第２図は、Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ、　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ　、第２版、Ｗｏｒｔｈ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ
　Ｉｎｃ、、　１９７８から採用した常用アミノ酸 アミノ酸記号 ３文字記号 １文字記号 （Ｂ）により認識される５ＡＰＤＴＲのＮ換分析の「親
扉列に対する％の平均Ｊ　（ｍｅａｎ　ｐａｒｅｎｔ　
ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を示す、２０個のＥＬＩＳＡ値の各
ブロックは、棒の下の単文字コードにより特定される単
一アミノ酸置換を含有するペプチドについての結果を示
す。 ＳＡＰ［１ＴＩｌｌ中の置換の位置を星印により示す、
ａ配列の６コピーについてのＥＬＩＳＡ値を平均し、そ
して置換ｎ４Ｑ体について得られた値との比較のための
１００％として用いる。 ＧＪＡ及び／又はＧｔＬＪ イソロイシン

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ヒト多型性上皮ムチン（ＨＰＥＭ）の反復配列のア
   ミノ酸配列Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ（
   ＡＰＤＴＲ）に特異的に結合するモノクローナル抗体。 ２、悪性上皮細胞及び非−悪性上皮細胞の両者により生
   産されるムチンにさらに結合する請求項１に記載のモノ
   クローナル抗体。 ３、次のアミノ酸配列： ＸＡ′ＰＤ′Ｔ′ＲＸ （式中、 Ａ′はＡ、Ｐ又はＳであり； Ｄ′はＤ又はＮであり； Ｔ′は任意のアミノ酸であり； Ｘは１〜１×１０＾４個のアミノ酸であって、これらは
   同一でもよく、又は蛋白質分子中に存在する任意の既知
   Ｌ−アミノ酸の組合せであってもよい）に特異的に結合
   するモノクローナル抗体。 ４、ペプチド又は蛋白質中のエピトープＡＰＤＴＲ又は
   Ａ′ＰＤ′Ｔ′Ｒ（式中、Ａ′Ｄ′及びＴ′は請求項３
   に定義した通りである）に特異的に結合するモノクロー
   ナル抗体。 ５、前記アミノ酸配列が次の配列： ｐ２１−２４、ｐ２０−２４、ｐ１９−２４、ｐ１７−
   ２４、ｐ１６−２４、ｐ１５−２４、ｐ１４−２４、ｐ
   １４−２３、ｐ１４−３２、ｐ１−１５、ＴＳＡｐ１−
   ２４、ｐ１３−３２、Ｃｐ１３−３２、Ａｐ１−１５（
   式中、「ｐ」に続く数値はＨＰＥＭのアミノ酸反復配列
   ２個のアミノ酸１−４０に関する）から選択されたもの
   である請求項３に記載のモノクローナル抗体。 ６、齧歯動物、ウサギ、ウマ、ヒツジ、ロバ又はヒトに
   由来する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体。 ７、齧歯動物がマウスである、請求項１〜６のいずれか
   １項に記載の抗体。 ８、齧歯動物由来の抗原結合領域及びヒト由来の定常領
   域を有する齧歯動物／ヒト抗体である、請求項１〜７の
   いずれか１項に記載の抗体。 ９、請求項１〜８のいずれか１項に記載の抗体の抗原結
   合断片。 １０、レポーター基によりラベルされている、請求項１
   〜９のいずれか１項に記載の抗体。 １１、前記レポーター基が放射性同位元素、酵素、金属
   又は蛍光物質である、請求項１０に記載の抗体。 １２、細胞毒性剤又は悪性剤（ｔｕｍｏｕｒｉｇｅｎｉ
   ｃ　ａｇｅｎｔ）と連結、接合又は会合している、請求
   項１〜１１項のいずれか１項に記載の抗体。 １３、請求項１〜９項のいずれか１項に記載の抗体を分
   泌するハイブリドーマ細胞系。 １４、齧歯動物、ウサギ、ウマ、ヒツジ、ロバ又はヒト
   に由来する、請求項１３に記載のハイブリドーマ細胞系
   。 １５、異る種の細胞間のハイブリドである、請求項１３
   に記載のハイブリドーマ細胞系。 １６、生物学的サンプルを請求項１〜１２項のいずれか
   １項に記載のモノクローナル抗体と接触せしめ、そして
   次に抗体の結合を検出及び／又は定量することを特徴と
   するＨＰＥＭの検出方法。 １７、生物学的サンプル中のＨＰＥＭを検出する方法で
   あって、 （ｉ）生物学的サンプルを請求項１〜１１項のいずれか
   １項に記載のモノクローナル抗体と接触せしめ； （ｉｉ）段階（ｉ）のモノクローナル抗体と反応するペ
   プチド配列を固定化している支持体に段階（ｉ）の混合
   物を添加し；そして （ｉｉｉ）次に、抗体の結合を検出及び／又は定量する
   ；段階を含んで成る方法。 １８、前記ペプチド配列に結合する前記モノクローナル
   抗体に結合し、且つレポーター基を担持している抗−抗
   体により抗体の結合を検出する、請求項１７に記載の方
   法。 １９、前記生物学的サンプルが血清、血漿、乳、尿、便
   、腹水、組織抽出物、細胞及び細胞上清から選択された
   ものである請求項１６又は１７に記載の方法。 ２０、請求項１０に記載のモノクローナル抗体を対象に
   注射し、そして次に組織に結合した抗体を検出手段を用
   いて検出することを特徴とする腫瘍の生体内検出法。 ２１、エピトープＡＰＤＴＲもしくはＳ′Ａ′ＰＤ′Ｔ
   ′Ｒ、又はこれらの複数コピー（式中、Ｓ′はＡ、Ｄ、
   Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｋ、Ｓ又はＰであり；Ａ′はＡ、Ｐ又はＳ
   であり；Ｄ′はＤ又はＮであり；そしてＴ′はペプチド
   又は蛋白質中に存在する任意のアミノ酸である）を含有
   する合成非天然ペプチド又は蛋白質。 ２２、次のアミノ酸配列：ｐ２１−２４、ｐ２０−４２
   、ｐ１９−２４、ｐ１８−２４、ｐ１７−２４、ｐ１６
   −２４、ｐ１５−２４、ｐ１４−２４、ｐ１−１５、Ｔ
   ＳＡｐ１−２０、Ａｐ１−２０、ｐ１３−３２、Ｃｐ１
   ３−３２（式中、ｐはＨＰＥＭの２０アミノ酸反復２個
   のアミノ酸に関する）から選択された合成非天然ペプチ
   ド又は蛋白質。 ２３、次の配列： 〔Ｓ′Ａ′ＰＤ′Ｔ′Ｒ〕＾ｎ 〔ＡＰＤＴＲ〕＾ｍ又は 〔ＳＡＰＤＴＲ〕＾ｎ （式中、Ｘは任意のアミノ酸を表わし、ｎは１〜１×１
   ０＾６を表わし、そしてＳ′、Ａ′、Ｄ′及びＴ′は請
   求項２１において定義した通りである）から選択された
   配列を有する、請求項２１に記載の合成非天然ペプチド
   又は蛋白質。 ２４、請求項２１〜２３のいずれか１項に記載のペプチ
   ドを医薬として許容されるキャリヤーもしくは賦形剤及
   び／又は助剤と組合わせて含んで成るワクチン。 ２５、ヒト多型性上皮ムチン（ＨＰＥＭ）のエピトープ
   ＡＰＤＴＲに特異的に結合するＴ−細胞及び抗体を惹起
   することができるペプチド又は蛋白質を、医薬として許
   容されるキャリヤーもしくは賦形剤及び／又は助剤と組
   み合わせて含んで成る上皮腺癌治療用ワクチン。 ２６、前記ペプチド又は蛋白質が次の配列：〔Ｓ′Ａ′
   ＰＤ′Ｔ′Ｒ〕＾ｎ−Ｙ 〔ＳＡＰＤＴＲ〕＾ｎ−Ｙ 〔ＡＰＤＴＲ〕＿１＾ｎ−Ｙ、又は 〔ＴＳ′ＡＰＤＴ′ＰＲＡＰＧＳＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳ
   ′ＡＰＤＴ′Ｒ〕＾ｎ（式中、ｎは１〜１×１０＾６で
   あり、Ｙは補助配列又はキャリヤー分子であり、そして
   Ｓ′、Ａ′、Ｄ′及びＴ′は請求項２１において定義し
   た通りである） から選択された配列を有するものである、請求項２５に
   記載のワクチン。 ２７、前記補助配列がＰＰＤ、ＢＣＧもしくはＭＰＤ又
   はこれらの類似体から選択されたものである、請求項２
   ６に記載のワクチン。 ２８、前記キャリヤー分子が蛋白質である請求項２５又
   は２６に記載のワクチン。 ２９、前記キャリヤーがジフテリア又は破傷風のトキソ
   イドである、請求項２８に記載のワクチン。 ３０、請求項１〜１１項のいずれか１項に記載のモノク
   ローナル抗体を単独で又は医薬として許容されるキャリ
   ヤーもしくは賦形剤と組合わせて含んで成る腺癌治療用
   療法組成物。 ３１、前記モノクローナル抗体がヒト抗体、又は他の種
   からの超可変領域を含むヒト化（ｈｕｍａｎｉｚｅｄ）
   抗体である、請求項３０に記載の療法組成物。 ３２、前記モノクローナル抗体が細胞毒性剤と接合又は
   会合している、請求項３０又は３１に記載の療法組成物
   。 ３３、前記細胞毒性剤が、リシンの細胞毒性サブユニッ
   ト、又は破傷風トキソイドもしくは他の細胞毒性ペプチ
   ドもしくは蛋白質；あるいはメルファラン（ｍｅｌｐｈ
   ａｌａｎ）、ｎ−アセチルメルファラン、アンドリアマ
   イシン（ａｎｄｒｉａｍｙｃｉｎ）、ブレオマイシン（
   ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ）、シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔ
   ｉｎ）、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）
   、アクチノマイシン（ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、シク
   ロホスファミド（ｃｙｃｌｏ−ｐｈａｓｐｈａｍｉｄｅ
   ）、５−フルオロウラシル、メソトレキセート（ｍｅｔ
   ｈｏｔｒｅｘａｔｅ）から選ばれた細胞毒性剤；及びこ
   れらの誘導体又は塩、から選択されたものである、請求
   項３２に記載の療法剤。