JPH02273196A - ラセミ化合物の生体触媒分割のエナンチオ選択性の改良法 - Google Patents
ラセミ化合物の生体触媒分割のエナンチオ選択性の改良法Info
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- JPH02273196A JPH02273196A JP5286090A JP5286090A JPH02273196A JP H02273196 A JPH02273196 A JP H02273196A JP 5286090 A JP5286090 A JP 5286090A JP 5286090 A JP5286090 A JP 5286090A JP H02273196 A JPH02273196 A JP H02273196A
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明はラセミ化合物の生体触媒動力学的分割のエナン
チオ選択性を改良するための概念に関する。より詳しく
は、この発明は低速反応鏡像異性体（エナンチオマー）
を含む反応のような競争生体触媒反応の１つを選択的に
阻害する阻害剤を使用し、それによって全体の生体触媒
分割プロセスのエナンチオ選択性を改良することに関す
る。
チオ選択性を改良するための概念に関する。より詳しく
は、この発明は低速反応鏡像異性体（エナンチオマー）
を含む反応のような競争生体触媒反応の１つを選択的に
阻害する阻害剤を使用し、それによって全体の生体触媒
分割プロセスのエナンチオ選択性を改良することに関す
る。
（従来の技術）
生体触媒（酵素、微生物、固定化細胞など）はアミノ酸
［ジー、シュミット−カスドナー及びビー、イーゲラ一
二バイオテ ノロジー、６ａ、ケー、キースリッヒ編、
フエルラーグ・ヘミ−１９８４、ｐ、３８８］ 、ラセ
ミアルコール［ブイ、クラスツバシュウ：同書、 ｐ、
９８］及びブドウ酸［シェルダンら：ステレオケミスト
ビテ・オブ・ベスチサイズ、イー、ジェー、アリエン
ス、ジエー、ジェー、ニス、パン・レンセン及びダブり
二一、ウェリング編、エルセビール、アムステルダム、
１９８８．ｐ、４０９］の分割用に広く使用されてきた
。しかしながら、多くの場合、生体触媒分割プロセスの
エナンチオ選択性はその生体触媒系がラセミ化合物の工
業的な分離に不適当であるほど低いか中程度である［シ
ー、チエ−。シー及びニス、エッチ、ウー：トピックス
・イン・ステレオケミストＩ−，３９゜１９８９１、さ
もなければ、適切な生体触媒を見つけ出すのに多数の生
体触媒のスクリーニングという退屈な仕事に頼らねばな
らなかった。
［ジー、シュミット−カスドナー及びビー、イーゲラ一
二バイオテ ノロジー、６ａ、ケー、キースリッヒ編、
フエルラーグ・ヘミ−１９８４、ｐ、３８８］ 、ラセ
ミアルコール［ブイ、クラスツバシュウ：同書、 ｐ、
９８］及びブドウ酸［シェルダンら：ステレオケミスト
ビテ・オブ・ベスチサイズ、イー、ジェー、アリエン
ス、ジエー、ジェー、ニス、パン・レンセン及びダブり
二一、ウェリング編、エルセビール、アムステルダム、
１９８８．ｐ、４０９］の分割用に広く使用されてきた
。しかしながら、多くの場合、生体触媒分割プロセスの
エナンチオ選択性はその生体触媒系がラセミ化合物の工
業的な分離に不適当であるほど低いか中程度である［シ
ー、チエ−。シー及びニス、エッチ、ウー：トピックス
・イン・ステレオケミストＩ−，３９゜１９８９１、さ
もなければ、適切な生体触媒を見つけ出すのに多数の生
体触媒のスクリーニングという退屈な仕事に頼らねばな
らなかった。
（発明が解決しようとする課題）
したがって、本発明の目的はエナンチオ選択性が低いか
中程度である生体触媒の有用性を拡大する生体触媒分割
プロセスのエナンチオ選択性を高める新しい方法を提供
することにある。
中程度である生体触媒の有用性を拡大する生体触媒分割
プロセスのエナンチオ選択性を高める新しい方法を提供
することにある。
（課題を解決するための手段）
エナンチオ選択性を改良する新しい方法が開発された。
新しい適切な生体触媒を得るための労力的なスクリーニ
ング作業は低減される。この発明の独特の特徴は競争反
応の１つ、好ましくは低速反応鏡像異性体を含む反応を
選択的に阻害できることの発見にある。
ング作業は低減される。この発明の独特の特徴は競争反
応の１つ、好ましくは低速反応鏡像異性体を含む反応を
選択的に阻害できることの発見にある。
１、の
正常な生体触媒分割プロセスは生体触媒の同じ部位につ
いて競争する高速及び低速鏡像異性体であるＡ及びＢを
含む、単純な３段階動力学的機構（１）では、反応は事
実上可逆的であり、生成物阻害がないと仮定して、 ２つの反応速度（Ｖ Ａ及びＶＳ）の比は定常状態動力
学によって次のように示すことができる。
いて競争する高速及び低速鏡像異性体であるＡ及びＢを
含む、単純な３段階動力学的機構（１）では、反応は事
実上可逆的であり、生成物阻害がないと仮定して、 ２つの反応速度（Ｖ Ａ及びＶＳ）の比は定常状態動力
学によって次のように示すことができる。
ｖＢ ｋｃａｔＢ”Ａ Ｂここにｋａａ％
＾、Ｋあ及びｋｃａｔａ％に、はそれぞれ高速及び低速
鏡像異性体の触媒定数及びミカエリス定数を示す。
＾、Ｋあ及びｋｃａｔａ％に、はそれぞれ高速及び低速
鏡像異性体の触媒定数及びミカエリス定数を示す。
方程式（２）を積分すると均一競争方程式３［シー、ニ
ス、チェノら：ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカ
ル・ソサイティ、１０２ （１９８２）７２９４］が得
られ、これは生体触媒による２つの競争鏡像異性体（Ａ
及びＢ）間の区別がＥ（特異性定数の比のに、、ｔ／Ｋ
）で表わされることを示す。
ス、チェノら：ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカ
ル・ソサイティ、１０２ （１９８２）７２９４］が得
られ、これは生体触媒による２つの競争鏡像異性体（Ａ
及びＢ）間の区別がＥ（特異性定数の比のに、、ｔ／Ｋ
）で表わされることを示す。
ｉｎ ［Ｂ／Ｂｏ］ ｋｏａｊ、／に８鏡像異
性体比Ｅはその生体触媒系の固有の性質であり、エナン
チオ選択性の指標である。これは転換度（ｃ）とともに
酵素及び基質の濃度に依存する。この定数Ｅは研究者が
種々の生体触媒系のエナンチオ選択性の比較をするのに
役立つ。
性体比Ｅはその生体触媒系の固有の性質であり、エナン
チオ選択性の指標である。これは転換度（ｃ）とともに
酵素及び基質の濃度に依存する。この定数Ｅは研究者が
種々の生体触媒系のエナンチオ選択性の比較をするのに
役立つ。
２、Ｅの ゛
方程式３は変数、転換度（Ｃ）、回収された基質画分の
鏡像異性体過剰率（１旦、）及び鏡像異性体比（Ｅ）に
関連させてより有用な形に容易に変換することができる
（方程式４）。
鏡像異性体過剰率（１旦、）及び鏡像異性体比（Ｅ）に
関連させてより有用な形に容易に変換することができる
（方程式４）。
ｌｎ［（１−ｃ）（１＋ ３）］
ここにｃ ：１− ［（Ａ ＋ Ｂ）／（Ａａ ＋ Ｂ
ｏｉｌ、肚、＝（Ｂ −Ａ）／（Ａ ＋ ８）であり、
＾。及びＢｏは初濃度を示す、これら変数のどれか２つ
を知れば第３の変数が決定できることは明らかである。
ｏｉｌ、肚、＝（Ｂ −Ａ）／（Ａ ＋ ８）であり、
＾。及びＢｏは初濃度を示す、これら変数のどれか２つ
を知れば第３の変数が決定できることは明らかである。
実験的に残留基質の鏡像異性体過剰率（虹、）及び生成
物画分（ｓｅｐ）を測定すれば次の関係式（方程式５）
を使用してＣを容易に計算することができる。
物画分（ｓｅｐ）を測定すれば次の関係式（方程式５）
を使用してＣを容易に計算することができる。
シ狛
ｅｅｓ及びＣの値を方程式４に代入することによりＥの
計算ができる［シー、ニス、チェンら＝２ヱーナル・オ
ブ・ザ・アメリカン・ケミカル・ソサ盃ヱ並、１０２
（１９８２）７２９４］。
計算ができる［シー、ニス、チェンら＝２ヱーナル・オ
ブ・ザ・アメリカン・ケミカル・ソサ盃ヱ並、１０２
（１９８２）７２９４］。
３、エナンチオ の
以下のＡ及びＢも競争する高速及び低速鏡像異性体であ
る。生体触媒によってＡは生成物Ｐに転換され、Ｂは生
成物Ｑに転換されろ、■は遊離酵素Ｅ及び酵素−基質コ
ンプレックスＥＡ及びＥＢとそれぞれコンプレックスＥ
Ｉ、ＥＡＩ及びＥＢＩを形成する非競争阻害剤である。
る。生体触媒によってＡは生成物Ｐに転換され、Ｂは生
成物Ｑに転換されろ、■は遊離酵素Ｅ及び酵素−基質コ
ンプレックスＥＡ及びＥＢとそれぞれコンプレックスＥ
Ｉ、ＥＡＩ及びＥＢＩを形成する非競争阻害剤である。
これらコンプレックス（ＥＡ、ＥＡＩ、ＥＢ及びＥＢＩ
）のすべてがそれぞれ生成物Ｐ及びＱに変形される。次
のスキームは阻害平衡を要約している：ＫＡＩ どの［Ｉ］においても、Ｐが形成される全体の速度はに
、［ＥＡ］＋βに、［ＥＡＩ］、ただしβ（１であり、
Ｑが形成される全体の速度はに、［ＥＢ］＋αｋｑ ［
ＥＢＩ］、ただしα（１である。平衡式から無限に高い
基質濃度［Ａ］及び［Ｂ］は必ずしもすべての酵素を［
ＥＡ］及び［ＥＢ］の形にするするものではないことが
示される。与えられたどの阻害剤濃度においても酵素の
一部は生産性の少ない［ＥＡＩ ］及び［ＥＢＩ］の形
で存在するであろう。
）のすべてがそれぞれ生成物Ｐ及びＱに変形される。次
のスキームは阻害平衡を要約している：ＫＡＩ どの［Ｉ］においても、Ｐが形成される全体の速度はに
、［ＥＡ］＋βに、［ＥＡＩ］、ただしβ（１であり、
Ｑが形成される全体の速度はに、［ＥＢ］＋αｋｑ ［
ＥＢＩ］、ただしα（１である。平衡式から無限に高い
基質濃度［Ａ］及び［Ｂ］は必ずしもすべての酵素を［
ＥＡ］及び［ＥＢ］の形にするするものではないことが
示される。与えられたどの阻害剤濃度においても酵素の
一部は生産性の少ない［ＥＡＩ ］及び［ＥＢＩ］の形
で存在するであろう。
最も簡単なに、＝に、、 冨Ｋ１ｍ 及びＫａ＝に
、・、Ｋ＊＝Ｋｓ・の場合区別プロセスは方程式６によ
って制御されることを示すことができる。
、・、Ｋ＊＝Ｋｓ・の場合区別プロセスは方程式６によ
って制御されることを示すことができる。
Ｉ ｎ （Ｂ／Ｂｏ ］ Ｋ ＋α１こ
のように方程式６は追加の因子（Ｋ、÷βＩ）／（Ｋ、
十αＩ）の存在によって古典的な方程式３と異る。
のように方程式６は追加の因子（Ｋ、÷βＩ）／（Ｋ、
十αＩ）の存在によって古典的な方程式３と異る。
β）αの時Ｅ値の増大が生じることは全く明らかである
。β＝１の場合、Ｐ形成（ＥＳ−−Ｐ＝ＥＳ Ｉ −−
Ｐ）の阻害は存在しない。この阻害の様式は部分的非競
争阻害と称することができる。
。β＝１の場合、Ｐ形成（ＥＳ−−Ｐ＝ＥＳ Ｉ −−
Ｐ）の阻害は存在しない。この阻害の様式は部分的非競
争阻害と称することができる。
単純な普通の部分的非競争阻害の説明はアイ、エッチ、
セゲル［エンザイム・カイ テ ラス。ウィリーーイン
ターサイエンス、ニューヨーク、１９７５゜ｐ、１６６
］を参照。
セゲル［エンザイム・カイ テ ラス。ウィリーーイン
ターサイエンス、ニューヨーク、１９７５゜ｐ、１６６
］を参照。
４、８の−六
おおまかには、本発明は光学的活性化合物を調製するた
めの生体触媒システムのエナンチオ選択性を改良する手
段として差別的阻害原理の使用を含んでなるものである
。この選択的阻害の効力な実証するため下記の２つのク
ラスの化合物をモデル基質としてそして細胞外微生物リ
パーゼを生体触媒として選んだ。しかしながら、この概
念は全般的なものでありそしてすべての生体触媒動力学
的分割プロセスに用いることができる。こうしてその特
に所望の生体触媒及び阻害剤と分割すべき当初のラセミ
基質とをマツチさせることのみが必要となる。
めの生体触媒システムのエナンチオ選択性を改良する手
段として差別的阻害原理の使用を含んでなるものである
。この選択的阻害の効力な実証するため下記の２つのク
ラスの化合物をモデル基質としてそして細胞外微生物リ
パーゼを生体触媒として選んだ。しかしながら、この概
念は全般的なものでありそしてすべての生体触媒動力学
的分割プロセスに用いることができる。こうしてその特
に所望の生体触媒及び阻害剤と分割すべき当初のラセミ
基質とをマツチさせることのみが必要となる。
より詳しくは、本発明の原理を適用することができるラ
セミ基質にはアミノ、ヒドロキシ及びハロ酸及びそれら
の誘導体が含まれる。典型的には本発明の方法によって
上記ラセミ化合物の２つの光学的活性立体異性体の１つ
を得ることが望ましい。
セミ基質にはアミノ、ヒドロキシ及びハロ酸及びそれら
の誘導体が含まれる。典型的には本発明の方法によって
上記ラセミ化合物の２つの光学的活性立体異性体の１つ
を得ることが望ましい。
上で既に述べた２種の基質について話を戻すと２−アリ
ールプロピオン酸は２つの不斉中心を含んでおり、それ
ゆえ２種の立体異性形、旦及び足形が存在する。しかし
ながら、２−アリールプロピオン酸の旦鏡像異性体の抗
炎症活性は一般にその旦鏡像異性体よりも大きい［ノン
−ステロイダル・アンチインフラマトリ−・ドラッグス
、ジェー、ジー、ロンパルジノ編、ジョン・ウィリー＆
サンズ、二ｌ−トク、１９８５．ｐ、３０３ ］、同
様に、２−アロイルプロピオン酸の足形は除草活性を有
しているが、足形は比較的不活性である［ステレオセレ
クテ ビテ ・オブ・ベスチサイズ。
ールプロピオン酸は２つの不斉中心を含んでおり、それ
ゆえ２種の立体異性形、旦及び足形が存在する。しかし
ながら、２−アリールプロピオン酸の旦鏡像異性体の抗
炎症活性は一般にその旦鏡像異性体よりも大きい［ノン
−ステロイダル・アンチインフラマトリ−・ドラッグス
、ジェー、ジー、ロンパルジノ編、ジョン・ウィリー＆
サンズ、二ｌ−トク、１９８５．ｐ、３０３ ］、同
様に、２−アロイルプロピオン酸の足形は除草活性を有
しているが、足形は比較的不活性である［ステレオセレ
クテ ビテ ・オブ・ベスチサイズ。
イー、ジェー、アリエンス、ジェー、ジェー、ニス、パ
ン・レンセン及びダブり二一、ウェリング編、エルセビ
ール、アムステルダム、１９８８゜ｐ、３９１．２種の
鏡像異性体を分割するための公知の化学的方法は複雑な
ものであり、高価な光学活性反応物、例えばメチルペン
チルアミンのようなキラル剤を化学量論的量よりも多い
量を必要とし、そして多くの場合満足な収率が得られず
、そのため工業的な用途には不適である。それゆえ、こ
れら２クラスの化合物の鏡像異性体の分割用の簡単で経
費のかからない方法が望まれている。
ン・レンセン及びダブり二一、ウェリング編、エルセビ
ール、アムステルダム、１９８８゜ｐ、３９１．２種の
鏡像異性体を分割するための公知の化学的方法は複雑な
ものであり、高価な光学活性反応物、例えばメチルペン
チルアミンのようなキラル剤を化学量論的量よりも多い
量を必要とし、そして多くの場合満足な収率が得られず
、そのため工業的な用途には不適である。それゆえ、こ
れら２クラスの化合物の鏡像異性体の分割用の簡単で経
費のかからない方法が望まれている。
したがって、上記の２種のモデル基質に対して本発明は
ラセミエステルを加水分解することができる生体触媒を
使用し、そして反応にキラルアミン阻害剤を添加するこ
とによってエナンチオ選択性を顕著に改良することにあ
る。より詳しくは、基質として（±）−２−アリールプ
ロピオン酸エステル、生体触媒としてカンデ ・シ１
ンドラ欠ヱ（Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ
）のリパーゼ、キラルアミン阻害剤としてデキストロメ
トルファンをそれぞれ使用することでエナンチオ選択性
（もしくはＥ値）が顕著に改良される。
ラセミエステルを加水分解することができる生体触媒を
使用し、そして反応にキラルアミン阻害剤を添加するこ
とによってエナンチオ選択性を顕著に改良することにあ
る。より詳しくは、基質として（±）−２−アリールプ
ロピオン酸エステル、生体触媒としてカンデ ・シ１
ンドラ欠ヱ（Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ
）のリパーゼ、キラルアミン阻害剤としてデキストロメ
トルファンをそれぞれ使用することでエナンチオ選択性
（もしくはＥ値）が顕著に改良される。
環との縮合基
（±）−２−アクロイルプロピオン酸エステルの場合、
Ｃ，シリンドラセアリバーゼはこのクラスの基質に対し
旦−立体化学的選択性を有し、キラルアミンの存在下で
動力学的分割はキラルアミンが旦−エステルの加水分解
を選択的に阻害するからよりエナンチオ選択性になる。
Ｃ，シリンドラセアリバーゼはこのクラスの基質に対し
旦−立体化学的選択性を有し、キラルアミンの存在下で
動力学的分割はキラルアミンが旦−エステルの加水分解
を選択的に阻害するからよりエナンチオ選択性になる。
このクラスの基質に対し旦−立体化学選択を有するＣ、
シ１ンドラセアリバーゼの場合、Ｅ値として表わされる
エナンチオ選択性は一般にキラルアミンめ存在下で旦−
エステルの加水分解を選択的に阻害することによって顕
著に強化される。
シ１ンドラセアリバーゼの場合、Ｅ値として表わされる
エナンチオ選択性は一般にキラルアミンめ存在下で旦−
エステルの加水分解を選択的に阻害することによって顕
著に強化される。
Ｒ＝ＣＨｓ ＣＨＩ 、Ｃ−Ｎ、アルキル（１−４炭素
原子） Ａｒ＝アリール又は置換アリール又は他の芳香族（＋）
キラル１ミン Ｒ５−Ａｒ＝アリー
ル又はハロゲン化アリール又は他の芳香族環との縮合基 Ｒ＝ＣＨ，ＣＨｓ ｃｉ、Ｃ−Ｎ、アルキル（１−４炭
素原子） キラルアミンとしてはデキストロメトルファン、レボメ
トルファン、キニジン、ブルリン、モルヒネ、キニーネ
、シンコニジン、シンコニン、アクリルアミン、フェニ
ルグリシノール、エフェドリン、アルファーメチルペン
チルアミン、ナフチルエチルアミン、フェニルエチルア
ミン及びストリキニーネのように多様のものを用いるこ
とができるが、特定のアミンの選択はその特定の基質構
造に依存し、適当な濃度が決定されねばならない。
原子） Ａｒ＝アリール又は置換アリール又は他の芳香族（＋）
キラル１ミン Ｒ５−Ａｒ＝アリー
ル又はハロゲン化アリール又は他の芳香族環との縮合基 Ｒ＝ＣＨ，ＣＨｓ ｃｉ、Ｃ−Ｎ、アルキル（１−４炭
素原子） キラルアミンとしてはデキストロメトルファン、レボメ
トルファン、キニジン、ブルリン、モルヒネ、キニーネ
、シンコニジン、シンコニン、アクリルアミン、フェニ
ルグリシノール、エフェドリン、アルファーメチルペン
チルアミン、ナフチルエチルアミン、フェニルエチルア
ミン及びストリキニーネのように多様のものを用いるこ
とができるが、特定のアミンの選択はその特定の基質構
造に依存し、適当な濃度が決定されねばならない。
例えば、キラルアミンの適切な濃度は標準的には０、Ｏ
ＯＩＭからＯ，ＩＭの範囲にあり、多（の場合０．ＯＩ
Ｍから０．０３Ｍが最適である。分割すべき（±）−２
−アリールプロピオン酸及び（±）−２−アロイルプロ
ピオン酸のエステルは従来の方法によって調製すること
ができる。［アイ、ティー、ハリソン及びニス、ハリソ
ン二二２ペンジウム・オブ・オルガニック・シンセテ
ツク・メソッズ、第８章、ジョン・ウィリー＆サンズ、
ニューヨーク、 １９７１． ｐ、 ２７１
参照］ 。
ＯＩＭからＯ，ＩＭの範囲にあり、多（の場合０．ＯＩ
Ｍから０．０３Ｍが最適である。分割すべき（±）−２
−アリールプロピオン酸及び（±）−２−アロイルプロ
ピオン酸のエステルは従来の方法によって調製すること
ができる。［アイ、ティー、ハリソン及びニス、ハリソ
ン二二２ペンジウム・オブ・オルガニック・シンセテ
ツク・メソッズ、第８章、ジョン・ウィリー＆サンズ、
ニューヨーク、 １９７１． ｐ、 ２７１
参照］ 。
キラルアミンは本発明のプロセスでの阻害剤として使用
するのに特に適しているけれども、その他の阻害剤とし
てはアミノ酸類及びそれらの誘導体、アルカロイド、ペ
プチド、ヘテロ環類及びアミノ糖類が含まれる。採用す
べき阻害剤の選択は分割すべきラセミ基質そのものに依
存する。
するのに特に適しているけれども、その他の阻害剤とし
てはアミノ酸類及びそれらの誘導体、アルカロイド、ペ
プチド、ヘテロ環類及びアミノ糖類が含まれる。採用す
べき阻害剤の選択は分割すべきラセミ基質そのものに依
存する。
この発明のプロセスによって使用することができる生体
触媒は微生物によって生産される水溶性のリパーゼのよ
うな酵素がある。カンタ ダ・シリンドラセアのリパー
ゼはこの発明の目的に特に適していることが立証された
。細胞外微生物リパーゼは周知であり、これらの多くは
商品として入手することができる［エム、イワイ及びワ
イ、ツジサカ、ｐ、４４３及びエム、スギウラ、ｐ、５
０５：リバーゼ、ビー、ポルゲストローム及びエイチ、
エル、ブロックマン編、エルセビール、ニューヨーク、
１９８４参照］０例えば、それらは工業的に脂肪のエス
テル交換反応に使用されており、油状の汚染除去のため
洗濯洗剤に取り入れられた。これら微生物リパーゼの自
然のままの微生物からのそれとを区別する１つの目立っ
た特徴は高基質濃度及び高生成物濃度に耐え得ることで
ある１例えば、顕著な基質及び生成物阻害は何ら知られ
ていない、それゆえ、これら酵素による加水分解反応は
高濃度（０，１−５Ｍ）において異常に高いエナンチオ
選択性で行うことができる。さらに、それらは上記の反
応条件下で両用することができるほど非常に安定である
。
触媒は微生物によって生産される水溶性のリパーゼのよ
うな酵素がある。カンタ ダ・シリンドラセアのリパー
ゼはこの発明の目的に特に適していることが立証された
。細胞外微生物リパーゼは周知であり、これらの多くは
商品として入手することができる［エム、イワイ及びワ
イ、ツジサカ、ｐ、４４３及びエム、スギウラ、ｐ、５
０５：リバーゼ、ビー、ポルゲストローム及びエイチ、
エル、ブロックマン編、エルセビール、ニューヨーク、
１９８４参照］０例えば、それらは工業的に脂肪のエス
テル交換反応に使用されており、油状の汚染除去のため
洗濯洗剤に取り入れられた。これら微生物リパーゼの自
然のままの微生物からのそれとを区別する１つの目立っ
た特徴は高基質濃度及び高生成物濃度に耐え得ることで
ある１例えば、顕著な基質及び生成物阻害は何ら知られ
ていない、それゆえ、これら酵素による加水分解反応は
高濃度（０，１−５Ｍ）において異常に高いエナンチオ
選択性で行うことができる。さらに、それらは上記の反
応条件下で両用することができるほど非常に安定である
。
本発明のプロセスに使用することできるその他の生体触
媒にはブタのすいリパーゼ、コレステロールエステラー
ゼ、ブタの肝臓エステラーゼ、及びムコール・ミニヘイ
（Ｍｕｃｏｒ ａ＋１ｅｈｅｉ）、工玉上ユカム・カン
ジエーム（Ｇｏｅｔｒｉｃｈｕｍ ｃａｎｄｉｕｍ）、
ＩＪ Ｖ−ブス・デレマー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｄｅｌ
ｅｍａｒ）、シュード％ ＋ ２ （Ｐｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ） １工（Ａ Ｋ ・アマノ）、Ｚスペルギルス
・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ） ｓ
２０モバクテナム・ビオラセウム（Ｃｈｒｏｍｏｂａ
ｃｔｅｎｕｍｖｉｏｌａｃｅｕｍ）などの生物体からの
リパーゼ、ズブチリシン、キモトリプシン、フィシン、
パパイン、ブロモレイン及び微生物プロテアーゼが含ま
れる。採用すべき生体触媒の選択は分割すべきラセミ基
質そのもの、その安定性及びその基質又は生成物の許容
濃度その他に依存する。
媒にはブタのすいリパーゼ、コレステロールエステラー
ゼ、ブタの肝臓エステラーゼ、及びムコール・ミニヘイ
（Ｍｕｃｏｒ ａ＋１ｅｈｅｉ）、工玉上ユカム・カン
ジエーム（Ｇｏｅｔｒｉｃｈｕｍ ｃａｎｄｉｕｍ）、
ＩＪ Ｖ−ブス・デレマー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｄｅｌ
ｅｍａｒ）、シュード％ ＋ ２ （Ｐｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ） １工（Ａ Ｋ ・アマノ）、Ｚスペルギルス
・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ） ｓ
２０モバクテナム・ビオラセウム（Ｃｈｒｏｍｏｂａ
ｃｔｅｎｕｍｖｉｏｌａｃｅｕｍ）などの生物体からの
リパーゼ、ズブチリシン、キモトリプシン、フィシン、
パパイン、ブロモレイン及び微生物プロテアーゼが含ま
れる。採用すべき生体触媒の選択は分割すべきラセミ基
質そのもの、その安定性及びその基質又は生成物の許容
濃度その他に依存する。
ラセミエステル基質は固体又は液体の形でエナンチオ選
択加水分解を行うためリパーゼを含有する適当な緩衝液
へ０．１−５Ｍの濃度で添加される。別に、基質は四塩
化炭素、シクロヘキサン、二硫化炭素又はヘキサンのよ
うな、酵素を変性させない限りの適当な有接溶媒に溶解
することができる。その上、基質はポリビニールアルコ
ール又はプロピレングリコールを使用することによって
乳化されることもできる。もちろん、ラセミエステル基
質をリパーゼと接触する温度及び圧力条件は当業者にと
って明らかなように相互依存的である。一般に、大気圧
下で、温度は約１０℃から約６０℃の範囲にすることが
できるが、好ましくは２０℃から４０℃の間であり、媒
体のｐＨは３から９の範囲にすることができるが、好ま
しくは６−８．５である。
択加水分解を行うためリパーゼを含有する適当な緩衝液
へ０．１−５Ｍの濃度で添加される。別に、基質は四塩
化炭素、シクロヘキサン、二硫化炭素又はヘキサンのよ
うな、酵素を変性させない限りの適当な有接溶媒に溶解
することができる。その上、基質はポリビニールアルコ
ール又はプロピレングリコールを使用することによって
乳化されることもできる。もちろん、ラセミエステル基
質をリパーゼと接触する温度及び圧力条件は当業者にと
って明らかなように相互依存的である。一般に、大気圧
下で、温度は約１０℃から約６０℃の範囲にすることが
できるが、好ましくは２０℃から４０℃の間であり、媒
体のｐＨは３から９の範囲にすることができるが、好ま
しくは６−８．５である。
エナンチオ選択性加水分解反応の継続時間は使用する酵
素の特異活性に応じて数時間から数日間に変動する。
素の特異活性に応じて数時間から数日間に変動する。
反応の終点で、光学的に活性な酸及びエステルは酢酸エ
チル、２塩化メチレン、ジエチルエーテルなどのような
水と混合しない有機溶媒の使用によって反応混合物から
抽出することができる。濃縮された有機抽出物は支持体
としてシリカゲルを使用したカラムクロマトグラフィー
法によってエステルと分離することができる。別に、微
分抽出によって酸をエステルから分離することができる
［キュー、エム、グら：テトラヘドロン・レターズ、２
７ （１９８６）１７６３］。
チル、２塩化メチレン、ジエチルエーテルなどのような
水と混合しない有機溶媒の使用によって反応混合物から
抽出することができる。濃縮された有機抽出物は支持体
としてシリカゲルを使用したカラムクロマトグラフィー
法によってエステルと分離することができる。別に、微
分抽出によって酸をエステルから分離することができる
［キュー、エム、グら：テトラヘドロン・レターズ、２
７ （１９８６）１７６３］。
Ａ、阻］Ｕ狂にロ、−−微生物すバーゼ（３０ｍｇ）を
ｐＨ８，０，０，２Ｍのリン酸塩緩衝液３ｍｌ中に、又
は第１表に示すように懸濁させた。その懸濁液に０．９
ｍｍｏｌの（±）−アリールプロピオン酸エステル又は
（±）−アロイルプロピオン酸エステルを添加した０反
応混合物は２４℃で撹拌し、反応の進行をＴＬＣ又はＨ
ＰＬＣで監視した。転化が３０％から５０％に達した時
ＩＮのＨＣＩでｐＨ２，０に酸性化することにより反応
を終結させ、次いで酢酸エチル（３ｍ４ｍｌ）で抽出し
た。有機相を無水Ｎａ１ＳＯ＋上で乾燥し、減圧下で乾
固させた。粗残留物をシリカゲルカラム（０，８ｍ１２
ｃｍ、フラッシュクロマトグラフィー用シリカゲル、平
均４０μｍ、ジェ、ティー、ベーカー・ケミカル社）で
のクロマトグラフィーにかけた。カラムをヘキサン−酢
酸エチル−酢酸（７：ｌ：０．１）からなる溶媒系で溶
出処理した。残留基質エステルを鏡像異性体過剰率（ｅ
ｅ−）の測定に直接利用し、生成物の駿はジアゾメタン
処理によりメチル化し、鏡像異性体過剰率（ｅｅＰ）を
キラルシフト試薬トリス［３−（ヘプタフルオロプロピ
ルヒドロキシメチレン） −（＋）−カンフォラト】−
ユウロピウム（ＩＩＩ）、Ｅｕ （ｈｆｃ）ｓの存在下
でＰＭＲ分析によって測定した。Ｅｕ （ｈｆｃ）−（
２００ＭＨｚ ＰＭＲ，ＣＤＣ１ｍ 、Ｅｕ （ｈｆ
ｃ）−の対エステルモル比的０．５）の存在下で、α−
ＣＨｓの二重線は２つのピークに割れた。
ｐＨ８，０，０，２Ｍのリン酸塩緩衝液３ｍｌ中に、又
は第１表に示すように懸濁させた。その懸濁液に０．９
ｍｍｏｌの（±）−アリールプロピオン酸エステル又は
（±）−アロイルプロピオン酸エステルを添加した０反
応混合物は２４℃で撹拌し、反応の進行をＴＬＣ又はＨ
ＰＬＣで監視した。転化が３０％から５０％に達した時
ＩＮのＨＣＩでｐＨ２，０に酸性化することにより反応
を終結させ、次いで酢酸エチル（３ｍ４ｍｌ）で抽出し
た。有機相を無水Ｎａ１ＳＯ＋上で乾燥し、減圧下で乾
固させた。粗残留物をシリカゲルカラム（０，８ｍ１２
ｃｍ、フラッシュクロマトグラフィー用シリカゲル、平
均４０μｍ、ジェ、ティー、ベーカー・ケミカル社）で
のクロマトグラフィーにかけた。カラムをヘキサン−酢
酸エチル−酢酸（７：ｌ：０．１）からなる溶媒系で溶
出処理した。残留基質エステルを鏡像異性体過剰率（ｅ
ｅ−）の測定に直接利用し、生成物の駿はジアゾメタン
処理によりメチル化し、鏡像異性体過剰率（ｅｅＰ）を
キラルシフト試薬トリス［３−（ヘプタフルオロプロピ
ルヒドロキシメチレン） −（＋）−カンフォラト】−
ユウロピウム（ＩＩＩ）、Ｅｕ （ｈｆｃ）ｓの存在下
でＰＭＲ分析によって測定した。Ｅｕ （ｈｆｃ）−（
２００ＭＨｚ ＰＭＲ，ＣＤＣ１ｍ 、Ｅｕ （ｈｆ
ｃ）−の対エステルモル比的０．５）の存在下で、α−
ＣＨｓの二重線は２つのピークに割れた。
−Ｃｏｗ ＣＨ，の−重線もまた２つのピークに割れた
。鏡像異性体過剰率（１旦）は大部分の場合はα−ＣＨ
，基の信号、２−（４−クロロフェノキシ）プロピオン
酸メチルの場合は−Ｃ０３ＣＨ，基の信号にそれぞれ基
き２つの鏡像異性体の面積比から算出した。
。鏡像異性体過剰率（１旦）は大部分の場合はα−ＣＨ
，基の信号、２−（４−クロロフェノキシ）プロピオン
酸メチルの場合は−Ｃ０３ＣＨ，基の信号にそれぞれ基
き２つの鏡像異性体の面積比から算出した。
Ｂ、阻１Ｊ叩轟Ｊ−−−阻害剤を含有する緩衝液を使用
した以外Ａと同じ操作であった。この目的のため、０．
０９ｍｍｏｌの阻害剤を０．２Ｍのリン酸塩緩衝液２．
５ｍｌ中に懸濁させた。ｐＨは０．２ＭのＮａＨｍ Ｐ
Ｏ４を用いｐＨ８，０又は表に示すように調整し、次に
０．２Ｍのリン酸塩緩衝液を用い全容量を３ｍｌに調整
した。
した以外Ａと同じ操作であった。この目的のため、０．
０９ｍｍｏｌの阻害剤を０．２Ｍのリン酸塩緩衝液２．
５ｍｌ中に懸濁させた。ｐＨは０．２ＭのＮａＨｍ Ｐ
Ｏ４を用いｐＨ８，０又は表に示すように調整し、次に
０．２Ｍのリン酸塩緩衝液を用い全容量を３ｍｌに調整
した。
下記の例はこの発明の概念を示すために提示するもので
あり、請求の範囲に示される範囲を何ら限定するもので
はない、この発明の概念はすべての生体触媒速度論分割
操作に適用できるものである。
あり、請求の範囲に示される範囲を何ら限定するもので
はない、この発明の概念はすべての生体触媒速度論分割
操作に適用できるものである。
旦−二例
２−フェニルプロピオン ロロエチルデキストロメト
ルファンー塩基なしく２４．４ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）
を０．２Ｍ、ｐＨ８，０のリン酸塩緩衝液２．５ｍｌ中
に懸濁させた。懸濁液のｐＨは０．２ＭＮａＨａ ＰＯ
４（約０．３ｍ１）を用いｐＨ８，０に調整し、次にｐ
Ｈ８，０のリン酸塩緩衝液を用い全容量を３ｍｌに調整
した８次にリパーゼ粉末（３０ｍｇ）（カンディダ・シ
リンドラセア、シグマ）を上記緩衝液に添加し、１分間
攪拌した。この懸濁液に（±）−２−フェニルプロピオ
ン酸クロロエチル１９１ｍｇ （０，９ｍｍｏ ｌ）を
添加し、反応混合物を２４℃で１２０時間撹拌（マグネ
チックスターラー）シた０次にＩＮのＨＣＩを用いｐＨ
２，０に酸性化することにより反応を終結させ、次いで
混合物を酢酸エチル（３ｍ４ｍｌ）で抽出した。有機抽
出物を無水Ｎａｇ ＳＯ４上で乾燥し、減圧下で乾固さ
せた。粗残留物をシリカゲル（平均粒子径４０μｍ、ジ
ェー、ティー、ベーカー・ケミカル社）カラム（０，８
ｘ １２ｃｍ）でのクロマトグラフィーにかけ、カラム
をヘキサン−酢酸エチル−酢酸（７：１：０．１）で溶
出処理した。画分３から５ （５ｍｌ／画分）を併合し
て純粋な残留基質を求め、それをキラルシフト試薬トリ
ス［３−（ヘプタフルオロプロピルヒドロキシメチレン
） −（＋）−カンフォラトコ−ユウロピウム（ＩＩＩ
）、Ｅｕ （ｈｆｃ）ｓの存在下でＰＭＲ分析（２００
ＭＨｚＰＭＲ，ＣＤＣｌ５ 、Ｅｕ （ｈｆＣ）Ｓの対
エステルモル比的０．４）によって分析した。α−ＣＨ
ｓの二重線は２つのピークに割れた。 −Ｃｏｔ ＣＨ
，の−重線もまた２つのピークに割れ、（Ｓ）−（＋）
−鏡像異性体のピークは（Ｒ）−（−）−鏡像異性体の
それよりもダウンフィールドであった。旦」、値はα−
ＣＨｓ基の信号の積分面積の比率から算出した。残留基
質の鏡像゛異性体過剰率（旦、）は０．３９であること
が判った０画分ｌＯから１４を併合して純粋な生成物酸
を得て、それをジアゾメタン処理によってそのメチル化
エステルに転換した。その鏡像異性体過剰率（ｅｅ、）
をＥｕ（ｈｆｃ）＊の存在下でＰＭＲ法を用いて同様に
測定した。結果は次の通りであった： ｅｅｓ ＝Ｑ、３９、ｅ ｅｐ ＝Ｑ、 ９８、Ｃ＝
０．２８、Ｅ）１００゜立体化学的優先は（Ｓ）−（＋
）−鏡像異性体であることが判った。
ルファンー塩基なしく２４．４ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）
を０．２Ｍ、ｐＨ８，０のリン酸塩緩衝液２．５ｍｌ中
に懸濁させた。懸濁液のｐＨは０．２ＭＮａＨａ ＰＯ
４（約０．３ｍ１）を用いｐＨ８，０に調整し、次にｐ
Ｈ８，０のリン酸塩緩衝液を用い全容量を３ｍｌに調整
した８次にリパーゼ粉末（３０ｍｇ）（カンディダ・シ
リンドラセア、シグマ）を上記緩衝液に添加し、１分間
攪拌した。この懸濁液に（±）−２−フェニルプロピオ
ン酸クロロエチル１９１ｍｇ （０，９ｍｍｏ ｌ）を
添加し、反応混合物を２４℃で１２０時間撹拌（マグネ
チックスターラー）シた０次にＩＮのＨＣＩを用いｐＨ
２，０に酸性化することにより反応を終結させ、次いで
混合物を酢酸エチル（３ｍ４ｍｌ）で抽出した。有機抽
出物を無水Ｎａｇ ＳＯ４上で乾燥し、減圧下で乾固さ
せた。粗残留物をシリカゲル（平均粒子径４０μｍ、ジ
ェー、ティー、ベーカー・ケミカル社）カラム（０，８
ｘ １２ｃｍ）でのクロマトグラフィーにかけ、カラム
をヘキサン−酢酸エチル−酢酸（７：１：０．１）で溶
出処理した。画分３から５ （５ｍｌ／画分）を併合し
て純粋な残留基質を求め、それをキラルシフト試薬トリ
ス［３−（ヘプタフルオロプロピルヒドロキシメチレン
） −（＋）−カンフォラトコ−ユウロピウム（ＩＩＩ
）、Ｅｕ （ｈｆｃ）ｓの存在下でＰＭＲ分析（２００
ＭＨｚＰＭＲ，ＣＤＣｌ５ 、Ｅｕ （ｈｆＣ）Ｓの対
エステルモル比的０．４）によって分析した。α−ＣＨ
ｓの二重線は２つのピークに割れた。 −Ｃｏｔ ＣＨ
，の−重線もまた２つのピークに割れ、（Ｓ）−（＋）
−鏡像異性体のピークは（Ｒ）−（−）−鏡像異性体の
それよりもダウンフィールドであった。旦」、値はα−
ＣＨｓ基の信号の積分面積の比率から算出した。残留基
質の鏡像゛異性体過剰率（旦、）は０．３９であること
が判った０画分ｌＯから１４を併合して純粋な生成物酸
を得て、それをジアゾメタン処理によってそのメチル化
エステルに転換した。その鏡像異性体過剰率（ｅｅ、）
をＥｕ（ｈｆｃ）＊の存在下でＰＭＲ法を用いて同様に
測定した。結果は次の通りであった： ｅｅｓ ＝Ｑ、３９、ｅ ｅｐ ＝Ｑ、 ９８、Ｃ＝
０．２８、Ｅ）１００゜立体化学的優先は（Ｓ）−（＋
）−鏡像異性体であることが判った。
阻害剤なしの類似実験を０．２Ｍのリン酸塩緩衝液（ｐ
Ｈ８，０）３ｍｌを使用した以外同じ実験条件を用いて
行った。このコントロール試料の結果はｅｅｓ ＝０．
８０、ｅｅｐ ＝０．６２、Ｃ＝０．５６、Ｅ＝１０で
あり、同じ（旦）（＋）−立体化学的優先が観察された
。この実験はデキストロメトルファンがカンディダ・シ
リンドラセアのリパーゼによる（旦）−（−）−２−フ
ェニルプロピオン酸クロロエチルの加水分解を優先的に
阻害し、それによって反応のエナンチオ選択性が１０倍
以上に高められたことを実証している０分析結果は第１
表に示す。
Ｈ８，０）３ｍｌを使用した以外同じ実験条件を用いて
行った。このコントロール試料の結果はｅｅｓ ＝０．
８０、ｅｅｐ ＝０．６２、Ｃ＝０．５６、Ｅ＝１０で
あり、同じ（旦）（＋）−立体化学的優先が観察された
。この実験はデキストロメトルファンがカンディダ・シ
リンドラセアのリパーゼによる（旦）−（−）−２−フ
ェニルプロピオン酸クロロエチルの加水分解を優先的に
阻害し、それによって反応のエナンチオ選択性が１０倍
以上に高められたことを実証している０分析結果は第１
表に示す。
例」。
２−２４−ジクロロフェノキシ
プロピオン“メチル
２− （２，４−ジクロロフェノキシ）プロピオン酸メ
チルをリン酸塩緩衝液中でカンディダ・シリンドラセア
のリパーゼにより触媒させてエナンチオ選択性なしくＥ
＝１）で加水分解した。
チルをリン酸塩緩衝液中でカンディダ・シリンドラセア
のリパーゼにより触媒させてエナンチオ選択性なしくＥ
＝１）で加水分解した。
デキストロメトルファン−塩基なしく２４．４ｍｇ、０
．９ｍｍｏｌ）を０゜２Ｍ、ｐＨ８，０のリン酸塩緩衝
液２．５ｍｌ中に懸濁させ、懸濁液のｐＨな０．２Ｍの
ＮａＨｚ ＰＯ−（０，３ｍ１）を用いｐＨ８，０に調
整し、ｐＨ８，０のリン酸塩緩衝液を用い全容量を３ｍ
ｌに調整した。リパーゼ粉末（３０ｍｇ）（カンディダ
・シリンドラセア、シグマ）を上記緩衝液に添加し、１
分間撹拌（マグネチックスクーラー）した、この懸濁液
に（±）−２−（２，４−ジクロロフェノキシ）プロピ
オン酸メチル２２４ｍｇ （０゜９ｍｍｏｌ）を添加し
た。混合物を２４℃で４２時間撹拌（マグネチックスク
ーラー）し、反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン−酢酸エチ
ル−酢酸、５：１：０．５）で監視した。転化が３０％
から５０％に達した時反応混合物をＩＮのＭＣＩ″ｔ’
ｐＨ２，０に酸性化し、次いで酢酸エチル（３Ｘ４ｍｌ
）で抽出した。有機抽出物を無水ＮａｚＳＯ１上で乾燥
し、減圧下で乾固させた。粗残留物をシリカゲルカラム
（０，８ｘ１２ｃｍ、フラッシュクロマトグラフィー用
シリカゲル、平均４０μｍ、ジュー。ティー、ベーカー
・ケミカル社）でのクロマトグラフィーにかけ、カラム
をヘキサン−酢酸エチル−酢酸（６：１：０．１）で溶
出処理した。純粋な残留基質エステルを含有する画分を
併合した。純粋な生成物酸もまた併合してジアゾメタン
での反応によってそのメチルエステルに転換した。残留
基質の鏡像異性体過剰率（旦」１．）及び生成物の同過
剰率（ｅｅ、）を再びキラルシフト試薬の存在下でのＰ
ＭＲ法（エステルに対するＥｕ （ｈｆｃ）ｓのモル比
０．８、ＣＤＣｌ ｌ中、２００ＭＨｚ ＰＭＲ）で
測定した。ａ −ＣＨｌの二重線は２つのピークに割れ
、（旦） −（＋）−鏡像異性体のピークは（旦）−（
−）−鏡像異性体のそれよりもダウンフィールドであっ
た。二値はα−ＣＨ，基の信号に基く２つの鏡像異性体
の積分面積の比率から算出した。結果は次の通りであっ
た： １旦ｓ ＝０．３８．ｅ旦、＝０．８７、Ｃ＝０．３０
、Ｅ＝２０゜ 鮭主ニュ 上記の一般操作に従い、記載の反応物による鏡像異性体
過剰率（１旦、及び１旦Ｐ）で表わした光学的純度を第
１表に示す。
．９ｍｍｏｌ）を０゜２Ｍ、ｐＨ８，０のリン酸塩緩衝
液２．５ｍｌ中に懸濁させ、懸濁液のｐＨな０．２Ｍの
ＮａＨｚ ＰＯ−（０，３ｍ１）を用いｐＨ８，０に調
整し、ｐＨ８，０のリン酸塩緩衝液を用い全容量を３ｍ
ｌに調整した。リパーゼ粉末（３０ｍｇ）（カンディダ
・シリンドラセア、シグマ）を上記緩衝液に添加し、１
分間撹拌（マグネチックスクーラー）した、この懸濁液
に（±）−２−（２，４−ジクロロフェノキシ）プロピ
オン酸メチル２２４ｍｇ （０゜９ｍｍｏｌ）を添加し
た。混合物を２４℃で４２時間撹拌（マグネチックスク
ーラー）し、反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン−酢酸エチ
ル−酢酸、５：１：０．５）で監視した。転化が３０％
から５０％に達した時反応混合物をＩＮのＭＣＩ″ｔ’
ｐＨ２，０に酸性化し、次いで酢酸エチル（３Ｘ４ｍｌ
）で抽出した。有機抽出物を無水ＮａｚＳＯ１上で乾燥
し、減圧下で乾固させた。粗残留物をシリカゲルカラム
（０，８ｘ１２ｃｍ、フラッシュクロマトグラフィー用
シリカゲル、平均４０μｍ、ジュー。ティー、ベーカー
・ケミカル社）でのクロマトグラフィーにかけ、カラム
をヘキサン−酢酸エチル−酢酸（６：１：０．１）で溶
出処理した。純粋な残留基質エステルを含有する画分を
併合した。純粋な生成物酸もまた併合してジアゾメタン
での反応によってそのメチルエステルに転換した。残留
基質の鏡像異性体過剰率（旦」１．）及び生成物の同過
剰率（ｅｅ、）を再びキラルシフト試薬の存在下でのＰ
ＭＲ法（エステルに対するＥｕ （ｈｆｃ）ｓのモル比
０．８、ＣＤＣｌ ｌ中、２００ＭＨｚ ＰＭＲ）で
測定した。ａ −ＣＨｌの二重線は２つのピークに割れ
、（旦） −（＋）−鏡像異性体のピークは（旦）−（
−）−鏡像異性体のそれよりもダウンフィールドであっ
た。二値はα−ＣＨ，基の信号に基く２つの鏡像異性体
の積分面積の比率から算出した。結果は次の通りであっ
た： １旦ｓ ＝０．３８．ｅ旦、＝０．８７、Ｃ＝０．３０
、Ｅ＝２０゜ 鮭主ニュ 上記の一般操作に従い、記載の反応物による鏡像異性体
過剰率（１旦、及び１旦Ｐ）で表わした光学的純度を第
１表に示す。
第１図は加水分解中に阻害剤としてデキストロメトルフ
ァンの使用による２−フェニルプロピオン酸クロロエチ
ルの（Ｓ）−（−）−鏡像異性体に対する選択性の向上
をグラフで示す。
ァンの使用による２−フェニルプロピオン酸クロロエチ
ルの（Ｓ）−（−）−鏡像異性体に対する選択性の向上
をグラフで示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、ラセミ化合物の鏡像異性体を生体触媒と反応させて
反応混合物を形成させる段階、 該生体触媒反応プロセスに阻害剤を添加して鏡像異性体
反応の一つを選択的に阻害する段階、の各段階を有して
なるラセミ化合物の生体触媒分割のエナンチオ選択性を
改良する方法。 ２、前記ラセミ化合物の鏡像異性体が高速反応鏡像異性
体及び低速反応鏡像異性体を含み、そして前記阻害剤が
前記低速反応鏡像異性体の反応を阻害する請求項１記載
の方法。 ３、前記反応混合物が光学的活性化合物を含む請求項１
記載の方法。 ４、前記光学的活性化合物がキラル非ラセミヒドロキシ
、アミノ、ハロ、エポキシ、アルキル酸及びそれらの誘
導体からなる群から選ばれる請求項３記載の方法。 ５、前記光学的活性化合物がアリールプロピオン酸及び
アロイルプロピオン酸からなる群から選ばれる請求項３
記載の方法。 ６、前記生体触媒反応プロセスが加水分解反応である請
求項１記載の方法。 ７、前記生体触媒が加水分解酵素である請求項６記載の
方法。 ８、前記加水分解酵素が細胞外微生物リパーゼである請
求項７記載の方法。 ９、阻害剤が部分的非競争エナンチオ選択性阻害剤であ
る請求項１記載の方法。 １０、阻害剤がキラルアミンである請求項９記載の方法
。 １１、前記キラルアミンがデキストロメトルフアン、レ
ボメトルファン、キニジン、キニーネ、シンコニン、ス
トリキニーネ、シンコニジン、ブルリン、モルヒネ、ナ
フチルエチルアミン、フェニルエチルアミン、フェニル
グリシノール、エフェドリン及びアルファーメチルベン
ジルアミンからなる群から選ばれる請求項１０記載の方
法。 １２、前記ラセミ化合物がアミノ、ヒドロキシ及びハロ
酸のエステル及びそれらの誘導体からなる群から選ばれ
るキラルラセミエステルである請求項１記載の方法。 １３、前記生体触媒が￥カンディダ・シリンドラセア￥
リパーゼ、ブタのすいリパーゼ、コレステロールエステ
ラーゼ、ブタの肝臓エステラーゼ、及び￥ムコール・ミ
エヘイ￥、￥ゴエトリカム・カンジューム￥、￥リゾー
プス・デレマー￥、￥シュードモナスｓｐ￥（ＡＫ・ア
マノ）、￥アスペルギルス・ニガー￥、￥クロモバクテ
ナム・ビオラセウム￥などの生物体からのリパーゼ、ズ
ブチリシン、キモトリプシン、フィシン、パパイン、ブ
ロモレイン及び微生物プロテアーゼからなる群から選ば
れる請求項１記載の方法。 １４、前記阻害剤がキラルアミン、アミノ酸とその誘導
体、アルカロイド、ペプチド、ヘテロ環及びアミノ糖か
らなる群から選ばれる請求項１記載の方法。 １５、ラセミエステルの鏡像異性体を生体触媒及び１つ
の鏡像異性体反応を選択的に阻害する阻害剤と反応させ
て光学的に活性な化合物と前記阻害された鏡像異性体と
を含有する反応混合物を形成させ、 反応混合物から光学的に活性な化合物を回収する 各段階を有してなるラセミ化合物の生体触媒分割のエナ
ンチオ選択性を改良する方法。 １６、回収段階が光学的に活性な化合物及び阻害された
鏡像異性体を水と混合しない溶媒で抽出して濃縮有機抽
出物を作り、その後抽出物から光学的に活性な化合物を
分離することからなる請求項１５記載の方法。 １７、前記光学的活性化合物がキラル非ラセミヒドロキ
シ、アミノ、ハロ、エポキシ、アルキル酸及びそれらの
誘導体からなる群から選ばれる請求項１７記載の方法。 １８、前記生体触媒が￥カンディダ・シリンドラセア￥
リパーゼ、ブタのすいリパーゼ、コレステロールエステ
ラーゼ、ブタの肝臓エステラーゼ及び￥ムコール・ミエ
ヘイ￥、￥ゴエトリカム・カンジューム￥、￥リゾープ
ス・デレマー￥、シュードモナスｓｐ￥（ＡＫ・アマノ
）、￥アスペルギルス・ニガー￥、￥クロモバクテナム
・ビオラセウム￥などの生物体からのリパーゼ、ズブチ
リシン、キモトリプシン、フィシン、パパイン、ブロモ
レイン及び微生物プロテアーゼからなる群から選ばれる
請求項１５記載の方法。 １９、前記阻害剤がキラルアミン、アミノ酸とその誘導
体、アルカロイド、ペプチド、ヘテロ環及びアミノ糖か
らなる群から選ばれる請求項１５記載の方法。 ２０、前記生体触媒反応プロセスが加水分解反応である
請求項１５記載の方法。 ２１、ラセミ化合物の鏡像異性体を生体触媒と反応させ
て反応混合物を形成させるとともに、反応混合物中で生
体触媒鏡像異性体反応の１つの反応を選択的に阻害する
阻害剤を添加するラセミ化合物生体触媒分割法。 ２２、回収段階が光学的に活性な化合物及び阻害された
鏡像異性体を水と混合しない溶媒で抽出して濃縮有機抽
出物を作り、その後抽出物から光学的に活性な化合物を
分離することからなる請求項２１記載の方法。 ２３、前記光学的活性化合物がキラル非ラセミヒドロキ
シ、アミノ、ハロ、エポキシ、アルキル酸及びそれらの
誘導体からなる群から選ばれる請求項２１記載の方法。 ２４、前記生体触媒が￥カンディダ・シリンドラセア￥
リパーゼ、ブタのすいリパーゼ、コレステロールエステ
ラーゼ、ブタの肝臓エステラーゼ及び￥ムコール・ミエ
ヘイ￥、￥ゴエトリカム・カンジューム￥、￥リゾープ
ス・デレマー￥、￥シュードモナスｓｐ￥（ＡＫ・アマ
ノ）、￥アスペルギルス・ニガー￥、￥クロモバクテナ
ム・ビオラセウム￥などの生物体からのリパーゼ、ズブ
チリシン、キモトリプシン、フィシン、パパイン、ブロ
モレイン及び微生物プロテアーゼからなる群から選ばれ
る請求項２１記載の方法。 ２５、前記阻害剤がキラルアミン、アミノ酸とその誘導
体、アルカロイド、ペプチド、ヘテロ環及びアミノ糖か
らなる群から選ばれる請求項２１記載の方法。 ２６、前記生体触媒反応プロセスが加水分解反応である
請求項２１記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US32041089A | 1989-03-08 | 1989-03-08 | |
| US320,410 | 1989-03-08 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02273196A true JPH02273196A (ja) | 1990-11-07 |
Family
ID=23246303
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5286090A Pending JPH02273196A (ja) | 1989-03-08 | 1990-03-06 | ラセミ化合物の生体触媒分割のエナンチオ選択性の改良法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0387068A1 (ja) |
| JP (1) | JPH02273196A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5686285A (en) * | 1993-04-22 | 1997-11-11 | Shionogi & Co., Ltd. | Norbornane type ester hydrolase |
Families Citing this family (2)
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|---|---|---|---|---|
| TW397866B (en) | 1993-07-14 | 2000-07-11 | Bristol Myers Squibb Co | Enzymatic processes for the resolution of enantiomeric mixtures of compounds useful as intermediates in the preparation of taxanes |
| PL334136A1 (en) * | 1996-12-13 | 2000-02-14 | Medeva Europ Ltd | Method of obtaining enantiomerically enriched methyl threophenidate |
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-
1990
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- 1990-03-08 EP EP90302497A patent/EP0387068A1/en not_active Withdrawn
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5686285A (en) * | 1993-04-22 | 1997-11-11 | Shionogi & Co., Ltd. | Norbornane type ester hydrolase |
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| Publication number | Publication date |
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| EP0387068A1 (en) | 1990-09-12 |
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