JPH0227979A - 多重リボン微生物セルロース - Google Patents
多重リボン微生物セルロースInfo
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- JPH0227979A JPH0227979A JP17106788A JP17106788A JPH0227979A JP H0227979 A JPH0227979 A JP H0227979A JP 17106788 A JP17106788 A JP 17106788A JP 17106788 A JP17106788 A JP 17106788A JP H0227979 A JPH0227979 A JP H0227979A
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Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、成る種のセルロース生産性微生物が、多重セ
ルロースリボン（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｃｅｌｌｕｌｏｓ
ｅ ｒｉｂｂｏｎｓ）を含んで成るセルロースリボン束
（ｃｅｌｌｕｌｏｓｅｒｉｂｂｏｎ−ｂｕｎｄｌｅｓ）
を生じるようにセルロースを合成しそして押し出すとい
う観察に関する。セルロースは成る種の微生物によって
生産されることは長く知られてきた。大抵の微生物によ
り生産されるセルロースは一般にセルロースリボンのネ
ットワークであることが見出だされる。セルロースリボ
ンは多数のセルロースミクロフィブリルから成り、ミク
ロフィブリルの数は微生物の寸法及びタイプに依存して
いる。各ミクロフィブリルは約４０のグルカン鎖を含み
そして３つのセルロース１０チオフイブリルから形成さ
れると思われるが、各プロテオフィブリルは各微生物セ
ルロース合成部位で生成された１０−１５のグルカン鎖
のクラスターにより形成されていると考えられる。微生
物表面に少なくとも部分的に位置したセルロース合成部
位は直線状に整列している。
ルロースリボン（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｃｅｌｌｕｌｏｓ
ｅ ｒｉｂｂｏｎｓ）を含んで成るセルロースリボン束
（ｃｅｌｌｕｌｏｓｅｒｉｂｂｏｎ−ｂｕｎｄｌｅｓ）
を生じるようにセルロースを合成しそして押し出すとい
う観察に関する。セルロースは成る種の微生物によって
生産されることは長く知られてきた。大抵の微生物によ
り生産されるセルロースは一般にセルロースリボンのネ
ットワークであることが見出だされる。セルロースリボ
ンは多数のセルロースミクロフィブリルから成り、ミク
ロフィブリルの数は微生物の寸法及びタイプに依存して
いる。各ミクロフィブリルは約４０のグルカン鎖を含み
そして３つのセルロース１０チオフイブリルから形成さ
れると思われるが、各プロテオフィブリルは各微生物セ
ルロース合成部位で生成された１０−１５のグルカン鎖
のクラスターにより形成されていると考えられる。微生
物表面に少なくとも部分的に位置したセルロース合成部
位は直線状に整列している。
本発明は、特定の種類のセルロース生産性微生物、特に
原核微生物の生物学的に純粋な培養物より成る。このセ
ルロース生産性微生物は、炭素、窒素及び無機物質の同
化可能なソースを含有する水性普通培地（ａｑｕｅｏｕ
ｓ ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｍｅｄｉｕｍ）での増殖中又は
炭素及び無機物質の同化可能なソースを含有する水性普
通培地での休止期（ｒｅｓｔｉｎｇ ｐｈａｓｅ）に、
セルロースリボン押出の方向を繰り返し逆転することが
できる。セルロースリボン押出の方向のこの逆転は、先
に付着した（ｅａｒｌｉｅｒ ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ）セ
ルロースリボンの長さに沿って第１方向に次いで第２方
向に少なくとも周期的にセルロース生産性微生物がシャ
ットリング（ｓｈｕｔｔｌｉｎｇ） して、先に付着し
ていたセルロースリボンに他のセルロースリボンを加え
そして少なくとも２つの逆平行セルロースリボン（ａｎ
ｔｉｐａｒａｌｌｅｌ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｒｉｂｂ
ｏｎＳ）の幅を持ったセルロースリボン束を生成させる
ことをもたらす。
原核微生物の生物学的に純粋な培養物より成る。このセ
ルロース生産性微生物は、炭素、窒素及び無機物質の同
化可能なソースを含有する水性普通培地（ａｑｕｅｏｕ
ｓ ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｍｅｄｉｕｍ）での増殖中又は
炭素及び無機物質の同化可能なソースを含有する水性普
通培地での休止期（ｒｅｓｔｉｎｇ ｐｈａｓｅ）に、
セルロースリボン押出の方向を繰り返し逆転することが
できる。セルロースリボン押出の方向のこの逆転は、先
に付着した（ｅａｒｌｉｅｒ ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ）セ
ルロースリボンの長さに沿って第１方向に次いで第２方
向に少なくとも周期的にセルロース生産性微生物がシャ
ットリング（ｓｈｕｔｔｌｉｎｇ） して、先に付着し
ていたセルロースリボンに他のセルロースリボンを加え
そして少なくとも２つの逆平行セルロースリボン（ａｎ
ｔｉｐａｒａｌｌｅｌ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｒｉｂｂ
ｏｎＳ）の幅を持ったセルロースリボン束を生成させる
ことをもたらす。
本発明のセルロース生産性微生物はアセトバクター属（
＾ｅｅｔｏｂ覗ｃｔｅｒ）、アグロバクテリウム属（＾
ｇｒｏｂａｅｔｅｒｉｕｍ）、リゾビウム属（Ｒｈｉｚ
ｏｂｉｕｓ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｗｏｎ
ａｓ）又はアルカリゲネス（＾Ｉｃａｌｉｇｅｎｅｓ）
属であることができ、好ましくはアセトバクター属であ
り、更に好ましくはアセトバクター・キシリヌム（＾ｃ
ｅｔｏｂａｅｔｅｒ ｘｙｌｉｎｕｍ）種である。アセ
トバクター・キシリヌムめ好酸しい株はＮＱ５、Ｈ１Ａ
、Ｈ１Ｂ、Ｈ１Ｃ、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ２Ｏ，Ｈ５Ｄ、
Ｈ２Ｏ，Ｈ８Ｏ，）！８Ｇ、Ｈ１４Ｂ、Ｈ１５Ａ及びＨ
ｌ ５Ｂ株である。最も好ましい株であるアセトバクタ
ー・キシリヌムＮＱＳ株は、メリーランド州、ロックビ
レのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（
＾ｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕ１ｔｕｒｅ Ｃｏ１
１ｅｅｔｉｏｎ）に１９８７年１月２７日に寄託番号Ａ
ＴＣＣ５３５８２として寄託された。
＾ｅｅｔｏｂ覗ｃｔｅｒ）、アグロバクテリウム属（＾
ｇｒｏｂａｅｔｅｒｉｕｍ）、リゾビウム属（Ｒｈｉｚ
ｏｂｉｕｓ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｗｏｎ
ａｓ）又はアルカリゲネス（＾Ｉｃａｌｉｇｅｎｅｓ）
属であることができ、好ましくはアセトバクター属であ
り、更に好ましくはアセトバクター・キシリヌム（＾ｃ
ｅｔｏｂａｅｔｅｒ ｘｙｌｉｎｕｍ）種である。アセ
トバクター・キシリヌムめ好酸しい株はＮＱ５、Ｈ１Ａ
、Ｈ１Ｂ、Ｈ１Ｃ、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ２Ｏ，Ｈ５Ｄ、
Ｈ２Ｏ，Ｈ８Ｏ，）！８Ｇ、Ｈ１４Ｂ、Ｈ１５Ａ及びＨ
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ー・キシリヌムＮＱＳ株は、メリーランド州、ロックビ
レのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（
＾ｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕ１ｔｕｒｅ Ｃｏ１
１ｅｅｔｉｏｎ）に１９８７年１月２７日に寄託番号Ａ
ＴＣＣ５３５８２として寄託された。
本発明のセルロース生産性微生物により生産されるセル
ロースリボン束は、第１の方向と反対の方向に進行して
いるβ−１，４結合と交互する第１の方向に進行してい
るβ−１，４結合を持った逆平行セルロースリボンを含
んで成るとして特徴付けることができる。この交互する
構造は、先に付着したセルロースリボンに沿って移動し
そして隣接する先に付着していたセルロースリボンに水
素結合する新しいセルロースリボンを付着させる微生物
からのセルロースリボン押出の方向の逆転から生じる。
ロースリボン束は、第１の方向と反対の方向に進行して
いるβ−１，４結合と交互する第１の方向に進行してい
るβ−１，４結合を持った逆平行セルロースリボンを含
んで成るとして特徴付けることができる。この交互する
構造は、先に付着したセルロースリボンに沿って移動し
そして隣接する先に付着していたセルロースリボンに水
素結合する新しいセルロースリボンを付着させる微生物
からのセルロースリボン押出の方向の逆転から生じる。
本発明のセルロースは、好ましくは、約３乃至約７のｐ
Ｈを持った水性普通培地で約２０℃乃至約４０℃の温度
で好気的に培養されたセルロース生産性微生物により生
産される。
Ｈを持った水性普通培地で約２０℃乃至約４０℃の温度
で好気的に培養されたセルロース生産性微生物により生
産される。
本発明は、高められた構造強度を持った微生物セルロー
スを得るための方法を含む１本発明の培養物によって生
産される多重セルロースリボンを含んで成るセルロース
リボン束は、対応する量の個々のランダムに分散したセ
ルロースリボン（ｓｉｎｇｌｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄ
ｉｓｐｅｒｓｅｄ ｅｅｌｌｕｌｏｓｅ ｒｉｂｂｏｎ
ｓ）より強い、この方法には、炭素及び無機塩（増殖が
望まれる場合には窒素も）の同化可能なソースを含んで
成る普通培地が関与する。培地は、この培地中でのイン
キュベーションの間、セルロースリボン押出の方向の繰
り返し逆転を行うことができるセルロース生産性微生物
の生物学的に純粋な培養物を接種した後インキュベーシ
ョンされる。上述の如きこのような押出方向の逆転は、
１つ又はそれより多くの先に押し出されたセルロースリ
ボンの長さに沿って先ず１つの方向に次いで他の方向に
少なくとも周期的にセルロース生産性微生物のシャット
リングをもたらして、先に押し出されたセルロースリボ
ンに他のセルロースリボンを付加させる。このプロセス
は、シャットリングを起こさない微生物（ｎｏｎ−ｓｈ
ｕｔｔｌｉＢ ＋ｓｉｅｒｏｏｒｇａｎｉｓｓ＋）によ
り生産されるセルロースリボン束より強いセルロースリ
ボン束を生成する。これらのリボン束は、少なくとも２
、好ましくは３又はそれより多くのセルロースリボンの
幅を有する。このようにして生成したセルロースは、所
望により使用するため又は更に処理するために篤めるこ
とができる。
スを得るための方法を含む１本発明の培養物によって生
産される多重セルロースリボンを含んで成るセルロース
リボン束は、対応する量の個々のランダムに分散したセ
ルロースリボン（ｓｉｎｇｌｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄ
ｉｓｐｅｒｓｅｄ ｅｅｌｌｕｌｏｓｅ ｒｉｂｂｏｎ
ｓ）より強い、この方法には、炭素及び無機塩（増殖が
望まれる場合には窒素も）の同化可能なソースを含んで
成る普通培地が関与する。培地は、この培地中でのイン
キュベーションの間、セルロースリボン押出の方向の繰
り返し逆転を行うことができるセルロース生産性微生物
の生物学的に純粋な培養物を接種した後インキュベーシ
ョンされる。上述の如きこのような押出方向の逆転は、
１つ又はそれより多くの先に押し出されたセルロースリ
ボンの長さに沿って先ず１つの方向に次いで他の方向に
少なくとも周期的にセルロース生産性微生物のシャット
リングをもたらして、先に押し出されたセルロースリボ
ンに他のセルロースリボンを付加させる。このプロセス
は、シャットリングを起こさない微生物（ｎｏｎ−ｓｈ
ｕｔｔｌｉＢ ＋ｓｉｅｒｏｏｒｇａｎｉｓｓ＋）によ
り生産されるセルロースリボン束より強いセルロースリ
ボン束を生成する。これらのリボン束は、少なくとも２
、好ましくは３又はそれより多くのセルロースリボンの
幅を有する。このようにして生成したセルロースは、所
望により使用するため又は更に処理するために篤めるこ
とができる。
上述の微生物及び条件を使用して、上述の交互する逆平
行配向のセルロースリボンを有するセルロースリボン束
を含んで成るこの生成物セルロースを形成することがで
きる。これらの逆平行リボン整列は、セルロース■構造
を暗示するグルカン鎖の相互関係をもたらす、かくして
逆転型セルロース生産性微生物のこのセルロース生成物
はセルロース！及びセルロースＨの多形であることがで
きる。逆平行リボン整列は、相互に作用するグルコース
単位の各対について１つの追加のリボン間水素結合をも
たらすであろう０束内のリボンのより多くの数と共に、
この追加の水素結合は、観察される見掛けの物理的強度
がより大であることと合致している。
行配向のセルロースリボンを有するセルロースリボン束
を含んで成るこの生成物セルロースを形成することがで
きる。これらの逆平行リボン整列は、セルロース■構造
を暗示するグルカン鎖の相互関係をもたらす、かくして
逆転型セルロース生産性微生物のこのセルロース生成物
はセルロース！及びセルロースＨの多形であることがで
きる。逆平行リボン整列は、相互に作用するグルコース
単位の各対について１つの追加のリボン間水素結合をも
たらすであろう０束内のリボンのより多くの数と共に、
この追加の水素結合は、観察される見掛けの物理的強度
がより大であることと合致している。
本発明は、炭素、無機物質の同化可能なソース及び細胞
増殖が望まれる場合には窒素の同化可能なソースも含む
水性普通培地中での発酵中、セルロース生産性微生物が
多重逆平行リボンのセルロースリボン束を生成するよう
なセルロースリボン押出の方向の周期的な逆転を行うセ
ルロース生産性微生物を同定する方法も含む、これらの
方法は、本発明の他の方法において単離及び使用するた
めにこのようなセルロース生産性微生物を選ぶのに使用
することができる。
増殖が望まれる場合には窒素の同化可能なソースも含む
水性普通培地中での発酵中、セルロース生産性微生物が
多重逆平行リボンのセルロースリボン束を生成するよう
なセルロースリボン押出の方向の周期的な逆転を行うセ
ルロース生産性微生物を同定する方法も含む、これらの
方法は、本発明の他の方法において単離及び使用するた
めにこのようなセルロース生産性微生物を選ぶのに使用
することができる。
１つの同定方法は、１）炭素、窒素及び無機物質（窒素
はセルロースを合成する細胞を増殖させるるのではない
場合には随意である）の同化可能なソースを含有する無
菌の水性普通培地を調製し、２）上記培地にセルロース
生産性微生物を加え、３）光学顕微鏡及び暗視野により
時間差ビデオ顕微鏡検査法（ｔｉｍｅ−ｌａｐｓｅ ｖ
ｉｄｅｏ ｍ１ｅｒｏｓｃｏｐｙ）の条件下に前記接種
された培地の試料中のセルロース生産性微生物の顕微鏡
像を記録し、この記録されたセルロース生産性微生物は
セルロースの合成及び押出の最中であり、そして４）連
続的に形成した像の検査により、セルロース生産性微生
物が先に付着したセルロースリボンの長さに沿って第１
の方向に次いで第２の方向に少なくとも周期的にシャッ
トリングして前記光に付着したセルロースにリボンに他
のセルロースリボンを加えて、多重セルロースリボン、
例えば少なくとも２つの逆平行セルロースリボン又は少
なくとも３つのセルロースリボンを含んで成るセルロー
スリボン束を生成するかどうかを決定することより成る
。記録される速度より高速度での時間差像の検査は上記
のセルロース生産性微生物シャットリングの容易な可視
化を可能とする。普通培地中でのインキュベーション中
、セルロースリボン押出の方向を逆転させることができ
ないセルロース生産性微生物は通常は、個々のセルロー
スリボンを生成しそして先に押し出されたセルロースリ
ボンに沿って前後にシャットリングすることは観察され
ない。
はセルロースを合成する細胞を増殖させるるのではない
場合には随意である）の同化可能なソースを含有する無
菌の水性普通培地を調製し、２）上記培地にセルロース
生産性微生物を加え、３）光学顕微鏡及び暗視野により
時間差ビデオ顕微鏡検査法（ｔｉｍｅ−ｌａｐｓｅ ｖ
ｉｄｅｏ ｍ１ｅｒｏｓｃｏｐｙ）の条件下に前記接種
された培地の試料中のセルロース生産性微生物の顕微鏡
像を記録し、この記録されたセルロース生産性微生物は
セルロースの合成及び押出の最中であり、そして４）連
続的に形成した像の検査により、セルロース生産性微生
物が先に付着したセルロースリボンの長さに沿って第１
の方向に次いで第２の方向に少なくとも周期的にシャッ
トリングして前記光に付着したセルロースにリボンに他
のセルロースリボンを加えて、多重セルロースリボン、
例えば少なくとも２つの逆平行セルロースリボン又は少
なくとも３つのセルロースリボンを含んで成るセルロー
スリボン束を生成するかどうかを決定することより成る
。記録される速度より高速度での時間差像の検査は上記
のセルロース生産性微生物シャットリングの容易な可視
化を可能とする。普通培地中でのインキュベーション中
、セルロースリボン押出の方向を逆転させることができ
ないセルロース生産性微生物は通常は、個々のセルロー
スリボンを生成しそして先に押し出されたセルロースリ
ボンに沿って前後にシャットリングすることは観察され
ない。
第２の同定方法は、セルロース生産性微生物のセルロー
ス生成物の電子顕微鏡検査法を含む、ｌｌ査下のセルロ
ース生産性微生物を第１の方法で述べた工程１）及び２
）で処理する。生成物セルロースを含有する培地の試料
を取り出しそして１子閉微鏡用のグリッドの一ヒに置く
、グリッド上の試料を屹燥しそして好ましくは酢酸ウラ
ニルの如きネガティブ染色により染色する０次いで染色
した試料を透過型電子顕微鏡検査法に付しそして好まし
くは１０，０００乃至２０．０００倍の倍率の電子顕微
鏡写真を得る。電子顕微鏡写真は、セルロースリボン押
出の方向を繰り返し逆転させるセルロース生産性微生物
からの多重リボンセルロースを明らかに示す、セルロー
ス押出の方向を周期的樟逆転させることができないセル
ロース生産性微生物は、個々のセルロースリボンのアセ
ンブリーを生じさせるが、時には多重リボン束が観察さ
れることがある。非逆転生物からの多重セルロースリボ
ン束は、それらが見出だされる場合には、逆平行整列で
はなくてむしろ平行整列を有する。
ス生成物の電子顕微鏡検査法を含む、ｌｌ査下のセルロ
ース生産性微生物を第１の方法で述べた工程１）及び２
）で処理する。生成物セルロースを含有する培地の試料
を取り出しそして１子閉微鏡用のグリッドの一ヒに置く
、グリッド上の試料を屹燥しそして好ましくは酢酸ウラ
ニルの如きネガティブ染色により染色する０次いで染色
した試料を透過型電子顕微鏡検査法に付しそして好まし
くは１０，０００乃至２０．０００倍の倍率の電子顕微
鏡写真を得る。電子顕微鏡写真は、セルロースリボン押
出の方向を繰り返し逆転させるセルロース生産性微生物
からの多重リボンセルロースを明らかに示す、セルロー
ス押出の方向を周期的樟逆転させることができないセル
ロース生産性微生物は、個々のセルロースリボンのアセ
ンブリーを生じさせるが、時には多重リボン束が観察さ
れることがある。非逆転生物からの多重セルロースリボ
ン束は、それらが見出だされる場合には、逆平行整列で
はなくてむしろ平行整列を有する。
シャットリングを起こさないセルロース生産性微生物は
平行な束を散発的に生成することがあるけれども、普通
培地中でのインキュベーション中セルロースリボン束の
方向を繰り返し逆転させることができるセルロース生産
性微生物のみが、少なくとも２つ又はそれより多くのセ
ルロースリボンを含んで成るセルロースリボン束を特徴
的に且つ一貫して生産することができる。これらの後者
のリボン束は上述の逆平行により更に特徴付けることが
できる。生成物セルロースは、存在する逆平行リボン間
整列の故にセルロースＩとセルロース■との多形である
と思われる。
平行な束を散発的に生成することがあるけれども、普通
培地中でのインキュベーション中セルロースリボン束の
方向を繰り返し逆転させることができるセルロース生産
性微生物のみが、少なくとも２つ又はそれより多くのセ
ルロースリボンを含んで成るセルロースリボン束を特徴
的に且つ一貫して生産することができる。これらの後者
のリボン束は上述の逆平行により更に特徴付けることが
できる。生成物セルロースは、存在する逆平行リボン間
整列の故にセルロースＩとセルロース■との多形である
と思われる。
本発明においては、上述の方法は、セルロース生産性ア
セトバクター・キシリヌム菌株の多数の株に適用された
。逆転をせずそして典型的に低い強度の微生物セルロー
スを生産することが観察された菌株には、ＡＴＣＣ２３
７６９、ＨＩＡ、Ｆ（６Ａ、）ｆ７Ｂ、）１９Ｄ及びＨ
ＩＯＣが包含される。
セトバクター・キシリヌム菌株の多数の株に適用された
。逆転をせずそして典型的に低い強度の微生物セルロー
スを生産することが観察された菌株には、ＡＴＣＣ２３
７６９、ＨＩＡ、Ｆ（６Ａ、）ｆ７Ｂ、）１９Ｄ及びＨ
ＩＯＣが包含される。
逆転を行うことができそして構造的により強いセルロー
スを生産することができる菌株にはＮＱ５、Ｈ１Ａ、Ｈ
１Ｂ、Ｈ１Ｃ、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ２Ｏ，Ｈ５Ｄ、Ｈ６
Ｏ，Ｈ２Ｏ，Ｈ８Ｇ、Ｈ１４Ｂ、Ｈ１５Ａ及びＨ１５Ｂ
が包含される。
スを生産することができる菌株にはＮＱ５、Ｈ１Ａ、Ｈ
１Ｂ、Ｈ１Ｃ、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ２Ｏ，Ｈ５Ｄ、Ｈ６
Ｏ，Ｈ２Ｏ，Ｈ８Ｇ、Ｈ１４Ｂ、Ｈ１５Ａ及びＨ１５Ｂ
が包含される。
第１図は、方向の繰り返し逆転においてそのシャットリ
ング中に先に付着したセルロースリボンに沿ってセルロ
ースリボンを加えるセルロース生産性微生物の時間差ビ
デオテープ（フレーム１−１２）から取った一連の写真
を示す０倍率は約３゜０００倍でありそしてセルロース
生産の速度は約１ミクロン／分である。
ング中に先に付着したセルロースリボンに沿ってセルロ
ースリボンを加えるセルロース生産性微生物の時間差ビ
デオテープ（フレーム１−１２）から取った一連の写真
を示す０倍率は約３゜０００倍でありそしてセルロース
生産の速度は約１ミクロン／分である。
第２図（Ａ及びＢ）は、先に形成されたリボンと関連し
ていない個々のセルロースリボンを押し出すセルロース
生産性微生物により典型的に形成されたセルロースリボ
ンの電子顕微鏡写真を示す。
ていない個々のセルロースリボンを押し出すセルロース
生産性微生物により典型的に形成されたセルロースリボ
ンの電子顕微鏡写真を示す。
第３図（Ａ及びＢ）は、セルロース押出の方向を逆転し
そしてセルロースリボン束を形成することができるセル
ロース生産性微生物からのセルロースリボンの電子顕微
鏡写真を示す。
そしてセルロースリボン束を形成することができるセル
ロース生産性微生物からのセルロースリボンの電子顕微
鏡写真を示す。
セルロース生産性微生物がセルロースリボンを押出しそ
して押し出されたセルロースリボンが固定された物体に
結合させることにより固定化されると、連続した押出は
微生物の運動をもたらす。
して押し出されたセルロースリボンが固定された物体に
結合させることにより固定化されると、連続した押出は
微生物の運動をもたらす。
成る種のセルロース生産性微生物は、先に付着した物質
に付着する新たに合成されたセルロースを押し出しなが
ら、１つ又はそれより多くの先（こ付着したセルロース
リボンに平行に移動することができることが本発明者に
より見出だされた。この現象は、特にセルロース生産性
微生物が先に付着しリボンに沿ってのその移動方向を周
期的に逆転することができる場合に、多重リボンセルロ
ースリボン束を生じさせる。
に付着する新たに合成されたセルロースを押し出しなが
ら、１つ又はそれより多くの先（こ付着したセルロース
リボンに平行に移動することができることが本発明者に
より見出だされた。この現象は、特にセルロース生産性
微生物が先に付着しリボンに沿ってのその移動方向を周
期的に逆転することができる場合に、多重リボンセルロ
ースリボン束を生じさせる。
成る種のセルロース生産性微生物により特徴的に生産さ
れた多重セルロースリボン束は、例えば酢酸ウラニルで
染色しそして電子顕微鏡検査法による可視化により観察
することができる。そのように可視化されたリボン束は
ぎっしりと詰まった（ｔｉｇｈｔｌｙ ｐａｃｋｅｄ）
線状に整列したセルロースリボンより成る。
れた多重セルロースリボン束は、例えば酢酸ウラニルで
染色しそして電子顕微鏡検査法による可視化により観察
することができる。そのように可視化されたリボン束は
ぎっしりと詰まった（ｔｉｇｈｔｌｙ ｐａｃｋｅｄ）
線状に整列したセルロースリボンより成る。
本発明に有用なセルロース生産性微生物には、アセトバ
クター属、リゾビウム属、アグロバクテリウム属、シュ
ードモナス属及びアルカリ土類金属が包含される［ブラ
ウン等、ジャーナル・オブアプライド・ポリマー・サイ
エンス・アプライド・ボ！Ｊ？−−シ７ポジウム・（１
９８３）Ｖ、３７．３３−７８頁（Ｂｒｏｗｎ ｅｔ
ａｌ、 Ｊ、＾ｐｐｌｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｅｒ ５ｅ
ｉｅｎｓｅ Ａｐｐｌ、 Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｙ
ｍｐ、 （１９８３） Ｖ 、 ３７ｐｐ、 ３
３−７８）〕、このようなセルロース生産性微生物の増
殖及びセルロースの合成は、炭素、窒素及び無機物質の
同化可能なソースを含んで成る普通培地中で一般に行な
われる。セルロース合成は、同化可能な炭素源を含んで
成る普通培地中で進行させることができる。培地は、好
ましくは約３゜５乃至約７．０のＰＨを有しそして接種
されると、好気的条件下に約２０℃乃至約３５℃の好ま
しい温度でインキュベーションされる。微生物セルロー
スにより合成繊維を被覆するためのアセトバクター・キ
シリヌムの使用は、ブラウンに対して発行された米国特
許第４，３７８，４３１号に開示されており、この開示
はここに明瞭により加入する。
クター属、リゾビウム属、アグロバクテリウム属、シュ
ードモナス属及びアルカリ土類金属が包含される［ブラ
ウン等、ジャーナル・オブアプライド・ポリマー・サイ
エンス・アプライド・ボ！Ｊ？−−シ７ポジウム・（１
９８３）Ｖ、３７．３３−７８頁（Ｂｒｏｗｎ ｅｔ
ａｌ、 Ｊ、＾ｐｐｌｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｅｒ ５ｅ
ｉｅｎｓｅ Ａｐｐｌ、 Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｙ
ｍｐ、 （１９８３） Ｖ 、 ３７ｐｐ、 ３
３−７８）〕、このようなセルロース生産性微生物の増
殖及びセルロースの合成は、炭素、窒素及び無機物質の
同化可能なソースを含んで成る普通培地中で一般に行な
われる。セルロース合成は、同化可能な炭素源を含んで
成る普通培地中で進行させることができる。培地は、好
ましくは約３゜５乃至約７．０のＰＨを有しそして接種
されると、好気的条件下に約２０℃乃至約３５℃の好ま
しい温度でインキュベーションされる。微生物セルロー
スにより合成繊維を被覆するためのアセトバクター・キ
シリヌムの使用は、ブラウンに対して発行された米国特
許第４，３７８，４３１号に開示されており、この開示
はここに明瞭により加入する。
セルロース生産性微生物、特にアセトバクター・キシリ
ヌムの多くの変種が存在しておりそして例えば湿り気の
ある森の如き自然の環境に実質的に至る所に存在する。
ヌムの多くの変種が存在しておりそして例えば湿り気の
ある森の如き自然の環境に実質的に至る所に存在する。
セルロース生産性微生物の培養のための典型的な好適な
普通培地は、約２０ｇ／Ｉのグルコース、５ｇ／ｌのペ
プトン、５ｇ／ｌの酵母エキス、２゜７ｇ／ｌの無水二
塩基性リン酸ナトリウム及び１゜１５ｇ／ｆのクエン酸
−水和物を含んで成るシュラム−へストリン培地（Ｓｃ
ｈｒａｍｍ ＆Ｒｅ５ｔｒｉｎ ｍｅｄｉｕ−）［シュ
ラム等、ジャーナル・オブ・ジェネラル・マイクロバイ
オロジー、第１１巻、１２３−１２９頁、１９５４ （
Ｓｃｈｒａｍｍ ｅｔ ａｌ、、 Ｊ、 Ｇｅｎｅｒ
ａｌ Ｍｉｅｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、 Ｖｏｌ、 １１．
ｐｐ、 １２３−１２９．１９５４）］ 。
普通培地は、約２０ｇ／Ｉのグルコース、５ｇ／ｌのペ
プトン、５ｇ／ｌの酵母エキス、２゜７ｇ／ｌの無水二
塩基性リン酸ナトリウム及び１゜１５ｇ／ｆのクエン酸
−水和物を含んで成るシュラム−へストリン培地（Ｓｃ
ｈｒａｍｍ ＆Ｒｅ５ｔｒｉｎ ｍｅｄｉｕ−）［シュ
ラム等、ジャーナル・オブ・ジェネラル・マイクロバイ
オロジー、第１１巻、１２３−１２９頁、１９５４ （
Ｓｃｈｒａｍｍ ｅｔ ａｌ、、 Ｊ、 Ｇｅｎｅｒ
ａｌ Ｍｉｅｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、 Ｖｏｌ、 １１．
ｐｐ、 １２３−１２９．１９５４）］ 。
培地のｐＨは好ましくは酸の添加により約ｐＨ３゜５乃
至約ｐＨ５，５に調節される。他の好適な普通培地は、
約８容量％の酢、５容量％のエタノール及び４重量％の
麦芽汁を含んで成る。約３乃至約７のｐＨを持った多様
な普通培地のいずれでも、本発明の実施に好適である［
下記のバーギー（Ｂｅｒｇｅｙ）＊照）］、このような
好適な普通培地は、好ましくは、バーギーズ・マニュア
ル・オブ・システマティック・バクテリオロジー、第１
巻（Ｂｅｒｇｅｙ ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ ５ｙｓ
ｔｅｓ＋ｍｔｉｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ
−１、）［編者、エヌ・アール・クリーブ、２６８−２
７４頁、ウィリアムス・アンド・ウィルキンス、メリー
ランド州、パルチモア、１９８４ （ｅｄ、 Ｎ、Ｒ。
至約ｐＨ５，５に調節される。他の好適な普通培地は、
約８容量％の酢、５容量％のエタノール及び４重量％の
麦芽汁を含んで成る。約３乃至約７のｐＨを持った多様
な普通培地のいずれでも、本発明の実施に好適である［
下記のバーギー（Ｂｅｒｇｅｙ）＊照）］、このような
好適な普通培地は、好ましくは、バーギーズ・マニュア
ル・オブ・システマティック・バクテリオロジー、第１
巻（Ｂｅｒｇｅｙ ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ ５ｙｓ
ｔｅｓ＋ｍｔｉｅ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ
−１、）［編者、エヌ・アール・クリーブ、２６８−２
７４頁、ウィリアムス・アンド・ウィルキンス、メリー
ランド州、パルチモア、１９８４ （ｅｄ、 Ｎ、Ｒ。
Ｋｒｉｅｇ、 ｐｐ、 ２６Ｂ−２７４，Ｉｌｉｌ
ｌｉａｍｓ ａｎｄ ｌ１ｉｌｋｉｎｓ、 Ｂａ
ｌｔｉｍｏｒｅ、 Ｍｄ、 １９８４）］に従えば、以
前は、アセトバクター・アセチ・亜種・キシリヌム（＾
ｃｅｔｏｂａｅｔｅｒ ａｅｅｔ＋、５ｕｂｓｐｅａｉ
ｅｓ ｘｙｌｉｎｕｍ ）として分類されていたセルロ
ース合成性アセトバクター菌株は現在ではアセトバクタ
ー・バスチュリアヌス（＾Ｃｅｔｏｂａｅｔｅｒ Ｐａ
５ｔｅｕｒｉａｎｕｓ）及びアセトバクタ＋０ハンセニ
ー（＾ａｅｔｏｂａｅｔｅｒ ｂａｎｓｅｎｉｉ）の亜
種として分類される６本発明で使用されるアセトバクタ
ー・キシリヌムの菌株はアセトバクター・アセチ、アセ
トバクター・バスチュリアヌス又はアセトバクター・ハ
ンセニーのキシリヌム亜種と同義であることができる。
ｌｉａｍｓ ａｎｄ ｌ１ｉｌｋｉｎｓ、 Ｂａ
ｌｔｉｍｏｒｅ、 Ｍｄ、 １９８４）］に従えば、以
前は、アセトバクター・アセチ・亜種・キシリヌム（＾
ｃｅｔｏｂａｅｔｅｒ ａｅｅｔ＋、５ｕｂｓｐｅａｉ
ｅｓ ｘｙｌｉｎｕｍ ）として分類されていたセルロ
ース合成性アセトバクター菌株は現在ではアセトバクタ
ー・バスチュリアヌス（＾Ｃｅｔｏｂａｅｔｅｒ Ｐａ
５ｔｅｕｒｉａｎｕｓ）及びアセトバクタ＋０ハンセニ
ー（＾ａｅｔｏｂａｅｔｅｒ ｂａｎｓｅｎｉｉ）の亜
種として分類される６本発明で使用されるアセトバクタ
ー・キシリヌムの菌株はアセトバクター・アセチ、アセ
トバクター・バスチュリアヌス又はアセトバクター・ハ
ンセニーのキシリヌム亜種と同義であることができる。
下記実施例は、最近知られた本発明を実施する最善の方
式を提供しそして当業者が特許請求の範囲に記載の発明
を実施するのを更に十分に可能とすることを意図する。
式を提供しそして当業者が特許請求の範囲に記載の発明
を実施するのを更に十分に可能とすることを意図する。
これらの実施例は、真に例示的でありそして好ましい方
法で好ましいセルロース生産性微生物の使用を説明する
１例えば、他のセルロース生産性微生物及び他の培養条
件で実施例のそれらを代替することができる。特許請求
の範囲は特許請求の範囲で特定的に述べられていない限
りこれらの実施例の特定の内容に限定されない。
法で好ましいセルロース生産性微生物の使用を説明する
１例えば、他のセルロース生産性微生物及び他の培養条
件で実施例のそれらを代替することができる。特許請求
の範囲は特許請求の範囲で特定的に述べられていない限
りこれらの実施例の特定の内容に限定されない。
アセトバクター・キシリヌム、ＮＱＳ株（米国メリーラ
ンド州２０８５２、ロックビレ、１２３０１パークラン
ド・ドライブ、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレ
クション、に寄託された）の試料を成る量のシュラム／
ベストリン普通培地に接種しそして２８℃で１−３日間
好気的に培養した。
ンド州２０８５２、ロックビレ、１２３０１パークラン
ド・ドライブ、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレ
クション、に寄託された）の試料を成る量のシュラム／
ベストリン普通培地に接種しそして２８℃で１−３日間
好気的に培養した。
一般に、固定培養（ｓｔａｎｄｉＢ ｃｕｌｔｕｒｅｓ
）がうまく行く、得られるセルロースの菌膜（ｐｅｌｌ
ｉｃｌｅ）を迅速に振とうさせそして濁った細胞の懸濁
液を菌膜から解放し、新たなシュラム／ベストリン培地
に入れた。新しい菌膜が数時間以内に合成された。
）がうまく行く、得られるセルロースの菌膜（ｐｅｌｌ
ｉｃｌｅ）を迅速に振とうさせそして濁った細胞の懸濁
液を菌膜から解放し、新たなシュラム／ベストリン培地
に入れた。新しい菌膜が数時間以内に合成された。
必須ではないけれども、この方法は、細光の大部分がセ
ルロース合成において活性であることを確実にする。こ
のようにして形成された新しい菌膜を穏やかに振とうし
そして細胞の懸濁液を顕微鏡スライド上の培養培地（こ
の場合に、シュラム／ベストリン）の小滴に入れた。カ
バースリップを加えた。
ルロース合成において活性であることを確実にする。こ
のようにして形成された新しい菌膜を穏やかに振とうし
そして細胞の懸濁液を顕微鏡スライド上の培養培地（こ
の場合に、シュラム／ベストリン）の小滴に入れた。カ
バースリップを加えた。
顕微鏡検査法のなめに、ツァイスユニバーサル顕微鏡（
Ｚｅｉｓｓ Ｌｌｎｉｖｅｒｓａｌ Ｍｉｃｒｏｓｃｏ
ｐｅ）を使用しそして暗視野光学機器を使用した。アセ
トバクター及びそのセルロースの生産の非破壊検査のた
めに、暗視野条件を使用するのが必須である。これは浸
漬油を有する顕微鏡スライドに光学的にカップリングし
た限外コンデンサを使用することにより達成されそして
４０倍油浸平面アポクロマート対物レンズによりこの対
物レンズにおける開き（ａｐｅｒｔｕｒｅ）で観察され
た。観察のためにタングステン−ハロゲン光源を使用し
そしてディジニュービランＮＣ−６５ＳＩＴ管）Ｄａｇ
ｅ Ｎｅｗｖｉａａｎ ＮＣ−６５５ＩＴ−ｔｕｂ
ｅ） （シリコン増強ターゲット）カメラを使用して像
を見た。ソニーＴＶＯ−９０００時間差ビデオテープレ
コーダー（Ｓｏｎｙ ＴＷＯ−９０００Ｔｉｍｅ Ｌａ
ｐｓｅＶｉｄｅｏ Ｔａｐｅ Ｒｅｅｏｒｄｅｒ）を使
用した。決定的テハないけれども、時間差条件が使用さ
れたとき再生モードにおいて逆転がより容易に観察され
るので、時間差ビデオ記録装置を使用するのが好ましい
。
Ｚｅｉｓｓ Ｌｌｎｉｖｅｒｓａｌ Ｍｉｃｒｏｓｃｏ
ｐｅ）を使用しそして暗視野光学機器を使用した。アセ
トバクター及びそのセルロースの生産の非破壊検査のた
めに、暗視野条件を使用するのが必須である。これは浸
漬油を有する顕微鏡スライドに光学的にカップリングし
た限外コンデンサを使用することにより達成されそして
４０倍油浸平面アポクロマート対物レンズによりこの対
物レンズにおける開き（ａｐｅｒｔｕｒｅ）で観察され
た。観察のためにタングステン−ハロゲン光源を使用し
そしてディジニュービランＮＣ−６５ＳＩＴ管）Ｄａｇ
ｅ Ｎｅｗｖｉａａｎ ＮＣ−６５５ＩＴ−ｔｕｂ
ｅ） （シリコン増強ターゲット）カメラを使用して像
を見た。ソニーＴＶＯ−９０００時間差ビデオテープレ
コーダー（Ｓｏｎｙ ＴＷＯ−９０００Ｔｉｍｅ Ｌａ
ｐｓｅＶｉｄｅｏ Ｔａｐｅ Ｒｅｅｏｒｄｅｒ）を使
用した。決定的テハないけれども、時間差条件が使用さ
れたとき再生モードにおいて逆転がより容易に観察され
るので、時間差ビデオ記録装置を使用するのが好ましい
。
ビデオ記録装置は、写真がビデオ製作の種々のセグメン
トのＴＶモニターから作られうるように、シングルフレ
ーム容量を有するべきである。タイムデータ発生器は必
須ではないが好ましいものでありそして事象を証拠書類
で証明するのを助ける。
トのＴＶモニターから作られうるように、シングルフレ
ーム容量を有するべきである。タイムデータ発生器は必
須ではないが好ましいものでありそして事象を証拠書類
で証明するのを助ける。
第１図に示された時間差ビデオシーケンスを製作するた
めに、上記の条件及び装置を使用しそしてビデオテープ
レコーダーを１−４８時間の経過速度（ｌａｐｓｅ ５
ｐｅｅｄ）に設定した。第１図を再生するために、更に
フレームショットをモニターからコダックトリＸフィｌ
レム（Ｋｏｄａｋ Ｔｒｉ−Ｘ ｆｉｌｍ）番こ撮影し
そして再生されたシーンを選択した。
めに、上記の条件及び装置を使用しそしてビデオテープ
レコーダーを１−４８時間の経過速度（ｌａｐｓｅ ５
ｐｅｅｄ）に設定した。第１図を再生するために、更に
フレームショットをモニターからコダックトリＸフィｌ
レム（Ｋｏｄａｋ Ｔｒｉ−Ｘ ｆｉｌｍ）番こ撮影し
そして再生されたシーンを選択した。
第１図は、３９．９分の全経過時間を表す１２のシング
ルフレームサンプル（１−１２）から成る。最初の３つ
のフレームにおいては、１つの細飄が左から右に進んで
いるセルロースリボンを合成している。フレーム４−６
においては、リボン合成の方向は逆転されそして細胞は
右から左に移動している。フレーム４と比敦対照してフ
レーム６のセルロースリボン束による光散乱の改善に留
意されたい、追加のリボンが先に合成されたリボンに隣
接して置かれており（ｌａｙ ｄｏｗｎ）そしてこの余
分の塊（曽ａ８３）は光をより多く散乱する。フレーム
７は、フレーム１が捕えられて２１．８分の後の丁度逆
転の時点で撮られた。フレーム８及び９においては、細
胞は左から右に移動している。フレーム９のリボン束を
フレーム３のそれと比較されたい、微生物による２回の
シャットリング通過（ｔｗｏ ｓｈｕｔｔｌｉｎｇ ｐ
ａｓｓｅｓ）は、フレーム３に示されたリボン塊（ｒｉ
ｂｂｏｎ ｍａｓｓ）と比較してリボン塊の光散乱容量
を増加させるのに十分なセルロースを加えている。フレ
ーム１０は、丁度逆転の終わりにおける、合成期にはい
る３１．８分である。フレーム１１及び１２は、最終シ
ーンにおける右から左に移動している細胞を示す、細胞
の右のセルロース塊が、フレーム９に示されたリボンの
上に更にもう１つのリボンを追加的に置かれた後、左の
セルロースより多くの光を散乱していることに留意され
たい、すべてのシーンにおいて、静止した粒子は参照と
して円で囲まれている。各国の頂部から底部に進むシー
ンにおいて追加のバクテリアの逆転にも留意されたい、
フレーム７及び１０からのデータはほぼ１０分の逆転サ
イクルを示唆している。全倍率は約３．０００倍であっ
た。アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションか
らのアセトバクター・キシリヌム園株２３７６９をこれ
らの条件下に研究すると、セルロースリボン押出の逆転
は観察されなかった。
ルフレームサンプル（１−１２）から成る。最初の３つ
のフレームにおいては、１つの細飄が左から右に進んで
いるセルロースリボンを合成している。フレーム４−６
においては、リボン合成の方向は逆転されそして細胞は
右から左に移動している。フレーム４と比敦対照してフ
レーム６のセルロースリボン束による光散乱の改善に留
意されたい、追加のリボンが先に合成されたリボンに隣
接して置かれており（ｌａｙ ｄｏｗｎ）そしてこの余
分の塊（曽ａ８３）は光をより多く散乱する。フレーム
７は、フレーム１が捕えられて２１．８分の後の丁度逆
転の時点で撮られた。フレーム８及び９においては、細
胞は左から右に移動している。フレーム９のリボン束を
フレーム３のそれと比較されたい、微生物による２回の
シャットリング通過（ｔｗｏ ｓｈｕｔｔｌｉｎｇ ｐ
ａｓｓｅｓ）は、フレーム３に示されたリボン塊（ｒｉ
ｂｂｏｎ ｍａｓｓ）と比較してリボン塊の光散乱容量
を増加させるのに十分なセルロースを加えている。フレ
ーム１０は、丁度逆転の終わりにおける、合成期にはい
る３１．８分である。フレーム１１及び１２は、最終シ
ーンにおける右から左に移動している細胞を示す、細胞
の右のセルロース塊が、フレーム９に示されたリボンの
上に更にもう１つのリボンを追加的に置かれた後、左の
セルロースより多くの光を散乱していることに留意され
たい、すべてのシーンにおいて、静止した粒子は参照と
して円で囲まれている。各国の頂部から底部に進むシー
ンにおいて追加のバクテリアの逆転にも留意されたい、
フレーム７及び１０からのデータはほぼ１０分の逆転サ
イクルを示唆している。全倍率は約３．０００倍であっ
た。アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションか
らのアセトバクター・キシリヌム園株２３７６９をこれ
らの条件下に研究すると、セルロースリボン押出の逆転
は観察されなかった。
メリーランド州、ロックビレのアメリカン・タイプ・カ
ルチャー・コレクションからのアセトバクター・キシリ
ヌム菌株２３７６９を、菌株ＮＱ５について実施例１に
記載した如くして培養してセルロースを生産した。この
バクテリアに２−３０分の範囲の種々の時間セルロース
を生産させた。
ルチャー・コレクションからのアセトバクター・キシリ
ヌム菌株２３７６９を、菌株ＮＱ５について実施例１に
記載した如くして培養してセルロースを生産した。この
バクテリアに２−３０分の範囲の種々の時間セルロース
を生産させた。
規定されたインキュベーション期間の後、ホルムバール
で被覆された３００メツシユ電子顕微鏡グリツドを表を
下にして液体の表面に至らしめ、そうすると、バクテリ
アとセルロースを含む液滴はホルムバール表面に移され
た。過剰の溶液をホワットマン＃１ろ紙で吸い取りそし
て乾燥の前に酢酸ウラニルの２％水性溶液で迅速に置換
した。これをホワットマン＃１ろ紙で吸い取りそしてフ
ィリップス４２０透過型電子顕微鏡（アインドーベン、
オランダ）で検査する前にグリッドを乾燥させた。
で被覆された３００メツシユ電子顕微鏡グリツドを表を
下にして液体の表面に至らしめ、そうすると、バクテリ
アとセルロースを含む液滴はホルムバール表面に移され
た。過剰の溶液をホワットマン＃１ろ紙で吸い取りそし
て乾燥の前に酢酸ウラニルの２％水性溶液で迅速に置換
した。これをホワットマン＃１ろ紙で吸い取りそしてフ
ィリップス４２０透過型電子顕微鏡（アインドーベン、
オランダ）で検査する前にグリッドを乾燥させた。
上記の特定の方法をアセトバクターに適用したが、電子
顕微鏡検査法のための一般的なネガティブ染色プレバレ
ージョンのいずれも、又示された構造を解像することが
できる透過型電子顕微鏡のいずれもうまく行くであろう
、走査型電子顕微鏡検査法は、セルロース構造の保存の
ために特殊な乾燥技術が必要なため好ましい方法ではな
い、これらの顕微鏡検査法は透過型電子顕微鏡検査法の
熟達者又は熟練者であれば誰でも行うことができる。
顕微鏡検査法のための一般的なネガティブ染色プレバレ
ージョンのいずれも、又示された構造を解像することが
できる透過型電子顕微鏡のいずれもうまく行くであろう
、走査型電子顕微鏡検査法は、セルロース構造の保存の
ために特殊な乾燥技術が必要なため好ましい方法ではな
い、これらの顕微鏡検査法は透過型電子顕微鏡検査法の
熟達者又は熟練者であれば誰でも行うことができる。
第２Ａ図及び第２Ｂ図は、これらの操作から得られる電
子顕微鏡写真を示す、第２Ａ図に見られるとおり、セル
ロースリボンはリボン束に集合していないで、ランダム
に分布した個々のセルロースリボンである。このセルロ
ース配置は、先に付着したセルロースリボンに沿って移
動することができずそして方向を逆転してセルロースリ
ボン束を形成することができないセルロース生産性微生
物から得られたセルロース菌膜の明白な物理的性質と合
致していた。第２Ａ図の矢印は、多分生物からのセルロ
ースミクロフィブリルがセルロースリボンに結晶化しな
いことから生じる無定形セルロースの部分を示す。
子顕微鏡写真を示す、第２Ａ図に見られるとおり、セル
ロースリボンはリボン束に集合していないで、ランダム
に分布した個々のセルロースリボンである。このセルロ
ース配置は、先に付着したセルロースリボンに沿って移
動することができずそして方向を逆転してセルロースリ
ボン束を形成することができないセルロース生産性微生
物から得られたセルロース菌膜の明白な物理的性質と合
致していた。第２Ａ図の矢印は、多分生物からのセルロ
ースミクロフィブリルがセルロースリボンに結晶化しな
いことから生じる無定形セルロースの部分を示す。
第２Ｂ図は、セルロースリボンを押し出している４つの
細胞を示す、これらの細胞は対をなしており、これは多
分新しい二分裂（ｒｅｃｅｎｔ ｂｉｎａｒｙ ｆｉｓ
ｓｉｏｎｓ）の結果でありそして各対のリボンは絡み合
って平行なセルロースリボンの二重体を形成する。
細胞を示す、これらの細胞は対をなしており、これは多
分新しい二分裂（ｒｅｃｅｎｔ ｂｉｎａｒｙ ｆｉｓ
ｓｉｏｎｓ）の結果でありそして各対のリボンは絡み合
って平行なセルロースリボンの二重体を形成する。
本発明の最初に同定された菌株である、アセトバクター
・キシリヌム菌株ＮＱ５ （ＡＴＣＣ５３５８２）を培
養しそして同様に処理した。第３Ａ図及び第３Ｂ図は、
得られる電子顕微鏡写真を示す、第３（−Ａ及びＢ）ｒ
Ｍに示された如く、多重セルロースリボンのリボン束が
存在している。このようなリボン束の構造は、セルロー
ス押出の路を周期的に逆転してセルロースリボンの逆平
行格子を形成することができるセルロース生産性微生物
により生産されたより密でより耐久性の菌膜に合致して
いる。第３Ａ図においては、特に厚いセルロース束（矢
印により示された構造参照）が多数の短い逆転（ｍａｎ
ｉｆｏｌｄ ５ｈｏｒｔ ｒｅｖｅｒｓａｌｓ）から生
じる。第３Ｂ図は約１０より少ないリボンを含んで成る
長いセルロース束を示す。
・キシリヌム菌株ＮＱ５ （ＡＴＣＣ５３５８２）を培
養しそして同様に処理した。第３Ａ図及び第３Ｂ図は、
得られる電子顕微鏡写真を示す、第３（−Ａ及びＢ）ｒ
Ｍに示された如く、多重セルロースリボンのリボン束が
存在している。このようなリボン束の構造は、セルロー
ス押出の路を周期的に逆転してセルロースリボンの逆平
行格子を形成することができるセルロース生産性微生物
により生産されたより密でより耐久性の菌膜に合致して
いる。第３Ａ図においては、特に厚いセルロース束（矢
印により示された構造参照）が多数の短い逆転（ｍａｎ
ｉｆｏｌｄ ５ｈｏｒｔ ｒｅｖｅｒｓａｌｓ）から生
じる。第３Ｂ図は約１０より少ないリボンを含んで成る
長いセルロース束を示す。
押出方向の逆転は、関与したセルロースリボンの１８０
°の方向転換を生じさせる。この激烈な物理的変化はセ
ルロースリボン又はミクロフィブリルの結晶化度の有限
の破壊点（ｆｉｎｉｔｅ ｐｏｉｎｔ ｏｆｂｒｅａｋ
ｊｏｗｎ）を生じる番こちがいない。
°の方向転換を生じさせる。この激烈な物理的変化はセ
ルロースリボン又はミクロフィブリルの結晶化度の有限
の破壊点（ｆｉｎｉｔｅ ｐｏｉｎｔ ｏｆｂｒｅａｋ
ｊｏｗｎ）を生じる番こちがいない。
アセトバクター・キシリヌム菌株ＮＱ５は更に１本の円
形プラスミドを持っていることにより特徴付けられる。
形プラスミドを持っていることにより特徴付けられる。
アガロースゲルでの電気泳動移動に基づいて決定して、
このプラスミドは約４５キロベース乃至５５キロベース
の寸法である。
このプラスミドは約４５キロベース乃至５５キロベース
の寸法である。
アセトバクター・キシリヌム菌株ＮＱ５のような逆転性
セルロース生産性微生物により合成されたセルロースは
、非逆転性菌株により生産されたそれよりも強く且つ相
当耐久性であるセルロース菌膜を生じさせる。この耐久
性は、増加した引張強度及び剪断強度により証明される
。このようなセルロースは、高い複屈折も示し、これは
−次赤色補償板及び直交偏光子及び検光子を使用する偏
光顕微鏡検査法により容易に可視化される。
セルロース生産性微生物により合成されたセルロースは
、非逆転性菌株により生産されたそれよりも強く且つ相
当耐久性であるセルロース菌膜を生じさせる。この耐久
性は、増加した引張強度及び剪断強度により証明される
。このようなセルロースは、高い複屈折も示し、これは
−次赤色補償板及び直交偏光子及び検光子を使用する偏
光顕微鏡検査法により容易に可視化される。
特許請求の範囲に記載の本発明の概念及び範囲から逸脱
することなく本明細書に記載の普通培地、工程及び方法
のような種々の要素の変更を生物及び装置において行う
ことができる。
することなく本明細書に記載の普通培地、工程及び方法
のような種々の要素の変更を生物及び装置において行う
ことができる。
本発明の主なる特徴及び態様は以下のとおりである。
１、炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含む
水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化可
能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロース
生産性微生物が先に付着したセルロースリボンの長さに
沿って第１の方向に次いで第２の方向に少なくとも周期
的にシャットリングして前記先に付着したセルロースリ
ボンに他のセルロースリボンを加えそして少なくとも２
つの逆平行セルロースリボンを含んで成るセルロースリ
ボン束を生成するようなセルロースリボン押出の方向の
逆転を行うことができるセルロース生産性微生物の生物
学的に純粋な培養物。
水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化可
能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロース
生産性微生物が先に付着したセルロースリボンの長さに
沿って第１の方向に次いで第２の方向に少なくとも周期
的にシャットリングして前記先に付着したセルロースリ
ボンに他のセルロースリボンを加えそして少なくとも２
つの逆平行セルロースリボンを含んで成るセルロースリ
ボン束を生成するようなセルロースリボン押出の方向の
逆転を行うことができるセルロース生産性微生物の生物
学的に純粋な培養物。
２、セルロース生産性微生物が原核生物である上記１に
記載の生物学的に純粋な培養物。
記載の生物学的に純粋な培養物。
３、セルロース生産性微生物がアセトバクター属、アグ
ロバクテリウム属、リゾビウム属、シュードモナス属又
はアルカリ土類金属である上記１に記載の生物学的に純
粋な培養物。
ロバクテリウム属、リゾビウム属、シュードモナス属又
はアルカリ土類金属である上記１に記載の生物学的に純
粋な培養物。
４、炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含む
水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化可
能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロース
生産性微生物が先は付着したセルロースリボンの長さに
沿って第１の方向に次いで第２の方向に少なくとも周期
的にシャットリングして前記先に付着したセルロースリ
ボンに他のセルロースリボンを加えそして少なくとも２
つの逆平行セルロースリボンを含んで成るセルロースリ
ボン束を生成するようなセルロースリボン押出の方向の
逆転を行うことができる、アセトバクター属のセルロー
ス生産性微生物の生物学的に純粋な培養物。
水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化可
能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロース
生産性微生物が先は付着したセルロースリボンの長さに
沿って第１の方向に次いで第２の方向に少なくとも周期
的にシャットリングして前記先に付着したセルロースリ
ボンに他のセルロースリボンを加えそして少なくとも２
つの逆平行セルロースリボンを含んで成るセルロースリ
ボン束を生成するようなセルロースリボン押出の方向の
逆転を行うことができる、アセトバクター属のセルロー
ス生産性微生物の生物学的に純粋な培養物。
５、炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含む
水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化可
能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロース
生産性微生物が先に付着したセルロースリボンの長さに
沿って第１の方向に次いで第２の方向に少なくとも周期
的にシャットリングして前記先に付着したセルロースリ
ボンに他のセルロースリボンを加えそして少なくとも３
つのセルロースリボンを含んで成るセルロースリボン束
を生成するようなセルロースリボン押出の方向の逆転を
行うことができる、アセトバクター・アセチ、アセトバ
クター・ハンセニイ又はアセトバクター・バスチュリア
ヌスの参種であるセルロース生産性微生物の生物学的に
純粋な培養物。
水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化可
能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロース
生産性微生物が先に付着したセルロースリボンの長さに
沿って第１の方向に次いで第２の方向に少なくとも周期
的にシャットリングして前記先に付着したセルロースリ
ボンに他のセルロースリボンを加えそして少なくとも３
つのセルロースリボンを含んで成るセルロースリボン束
を生成するようなセルロースリボン押出の方向の逆転を
行うことができる、アセトバクター・アセチ、アセトバ
クター・ハンセニイ又はアセトバクター・バスチュリア
ヌスの参種であるセルロース生産性微生物の生物学的に
純粋な培養物。
６、炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含む
水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化可
能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロース
生産性微生物が先に付着したセルロースリボンの長さに
沿って第１の方向に次いで第２の方向に少なくとも周期
的にシャットリングして前記先に付着したセルロースリ
ボンに他のセルロースリボンを加えそして少なくとも２
つの逆平行セルロースリボンを含んで成るセルロースリ
ボン束を生成するようなセルロースリボン押出の方向の
逆転を行うことができるセルロース生産性微生物であっ
て、アセトバクター・キシリヌム菌株Ｈ１Ａ、Ｈ１Ｂ、
Ｈ１Ｃ、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ５Ｏ，Ｈ５Ｄ、Ｈ２Ｏ，Ｈ
８Ｏ，Ｈ２Ｃ。
水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化可
能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロース
生産性微生物が先に付着したセルロースリボンの長さに
沿って第１の方向に次いで第２の方向に少なくとも周期
的にシャットリングして前記先に付着したセルロースリ
ボンに他のセルロースリボンを加えそして少なくとも２
つの逆平行セルロースリボンを含んで成るセルロースリ
ボン束を生成するようなセルロースリボン押出の方向の
逆転を行うことができるセルロース生産性微生物であっ
て、アセトバクター・キシリヌム菌株Ｈ１Ａ、Ｈ１Ｂ、
Ｈ１Ｃ、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ５Ｏ，Ｈ５Ｄ、Ｈ２Ｏ，Ｈ
８Ｏ，Ｈ２Ｃ。
Ｈ１４Ｂ、Ｈ１５Ａ又はＨ１５Ｂであるセルロース生産
性微生物の生物学的に純粋な培養物。
性微生物の生物学的に純粋な培養物。
７゜炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含む
水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化可
能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロース
生産性微生物が先に付着したセルロースリボンの長さに
沿って第１の方向に次いで第２の方向に少なくとも周期
的にシャトリングして前記先に付着したセルロースリボ
ンに他のセルロースリボンを加えそして少なくとも２つ
の逆平行セルロースリボンを含んで成るセルロースリボ
ン束を生成するようなセルロースリボン押出の方向の逆
転を行うことができるセルロース生産性微生物であって
、メリーランド州、ロックビレのアメリカン・タイプ・
カルチャー・コレクションに寄託された寄託番号ＡＴＣ
Ｃ５３５８２を持ったアセトバクター・キシリヌム菌株
ＮＱ５であるセルロース生産性微生物の生物学的に純粋
な培養物。
水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化可
能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロース
生産性微生物が先に付着したセルロースリボンの長さに
沿って第１の方向に次いで第２の方向に少なくとも周期
的にシャトリングして前記先に付着したセルロースリボ
ンに他のセルロースリボンを加えそして少なくとも２つ
の逆平行セルロースリボンを含んで成るセルロースリボ
ン束を生成するようなセルロースリボン押出の方向の逆
転を行うことができるセルロース生産性微生物であって
、メリーランド州、ロックビレのアメリカン・タイプ・
カルチャー・コレクションに寄託された寄託番号ＡＴＣ
Ｃ５３５８２を持ったアセトバクター・キシリヌム菌株
ＮＱ５であるセルロース生産性微生物の生物学的に純粋
な培養物。
８、セルロースリボン束が逆平行セルロースリボンを含
んで成りそして逆平行セルロースリボンが第２の方向に
進むβ−１，４結合を持ったセルロースリボンと交互す
る第１方向に進むβ−１゜４結合を持つことを特徴とす
る、上記５に記載の生物学的に純粋な培養物。
んで成りそして逆平行セルロースリボンが第２の方向に
進むβ−１，４結合を持ったセルロースリボンと交互す
る第１方向に進むβ−１゜４結合を持つことを特徴とす
る、上記５に記載の生物学的に純粋な培養物。
９．セルロースリボン束が少なくとも３つのセルロース
リボンを含んで成ることを特徴とする上記１乃至７のい
ずれかに記載の生物学的に純粋な培養物。
リボンを含んで成ることを特徴とする上記１乃至７のい
ずれかに記載の生物学的に純粋な培養物。
１０、炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含
む水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化
可能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロー
ス生産性微生物が先に付着したセルロースリボンの長さ
に沿って第１の方向に次いで第２の方向に少なくとも周
期的にシャトリングして前記先に付着したセルロースリ
ボンに他のセルロースリボンを加えそして少なくとも２
つの逆平行セルロースリボンを含んで成るセルロースリ
ボン束を生成するようなセルロースリボン押出の方向の
逆転を行うことができるセルロース生産性微生物の生物
学的に純粋な培養物により生成されるセルロース。
む水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化
可能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロー
ス生産性微生物が先に付着したセルロースリボンの長さ
に沿って第１の方向に次いで第２の方向に少なくとも周
期的にシャトリングして前記先に付着したセルロースリ
ボンに他のセルロースリボンを加えそして少なくとも２
つの逆平行セルロースリボンを含んで成るセルロースリ
ボン束を生成するようなセルロースリボン押出の方向の
逆転を行うことができるセルロース生産性微生物の生物
学的に純粋な培養物により生成されるセルロース。
１１、セルロース生産性微生物がアセトバクター属、ア
グロバクテリウム属、リゾビウム属、シュードモナス属
又はアルカリ土類金属である上記１０に記載のセルロー
ス。
グロバクテリウム属、リゾビウム属、シュードモナス属
又はアルカリ土類金属である上記１０に記載のセルロー
ス。
１２、セルロース生産性微生物がアセトバクター属であ
る上記１０に記載のセルロース。
る上記１０に記載のセルロース。
１３、セルロース生産性微生物がアセトバクター・アセ
チ、アセトバクター・ハンセニイ又はアセトバクター・
バスチュリアヌスの亜種である上記１０に記載のセルロ
ース。
チ、アセトバクター・ハンセニイ又はアセトバクター・
バスチュリアヌスの亜種である上記１０に記載のセルロ
ース。
１４、セルロース生産性微生物がアセトバクター・キシ
リヌム菌株Ｈ１Ａ、Ｈ１Ｂ、Ｈ１Ｃ、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、
Ｈ５Ｃ，Ｈ５Ｄ、Ｈ６Ｃ，Ｈ８Ｃ１Ｈ３Ｇ、）１１４Ｂ
％Ｈ１５Ａ又はＨ１５Ｂである上記１０に記載のセルロ
ース。
リヌム菌株Ｈ１Ａ、Ｈ１Ｂ、Ｈ１Ｃ、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、
Ｈ５Ｃ，Ｈ５Ｄ、Ｈ６Ｃ，Ｈ８Ｃ１Ｈ３Ｇ、）１１４Ｂ
％Ｈ１５Ａ又はＨ１５Ｂである上記１０に記載のセルロ
ース。
１５、セルロース生産性微生物がメリーランド州、ロッ
クビレのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクショ
ンに寄託された寄託番号ＡＴＣＣ５３５８２を持ったア
セトバクター・キシリヌム菌株ＮＱ５である上記１０に
記載のセルロース。
クビレのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクショ
ンに寄託された寄託番号ＡＴＣＣ５３５８２を持ったア
セトバクター・キシリヌム菌株ＮＱ５である上記１０に
記載のセルロース。
１６、炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含
む水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化
可能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロー
ス生産性微生物が先に付着したセルロースリボンの長さ
に沿って第１の方向に次いで第２の方向に少なくとも周
期的にシャットリングして前記先に付着したセルロース
リボンに他のセルロースリボンを加えそして少なくとも
３つの逆平行セルロースリボンを含んで成るセルロース
リボン束を生成するようなセルロースリボン押出の方向
の逆転を行なうことができるセルロース生産性微生物の
生物学的に純粋な培養物により生成されるセルロース。
む水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化
可能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロー
ス生産性微生物が先に付着したセルロースリボンの長さ
に沿って第１の方向に次いで第２の方向に少なくとも周
期的にシャットリングして前記先に付着したセルロース
リボンに他のセルロースリボンを加えそして少なくとも
３つの逆平行セルロースリボンを含んで成るセルロース
リボン束を生成するようなセルロースリボン押出の方向
の逆転を行なうことができるセルロース生産性微生物の
生物学的に純粋な培養物により生成されるセルロース。
１７、セルロースリボン束が、第１の方向と反対の方向
に進むβ−１，４結合を持ったセルロースリボンと交互
する第１方向に進むβ−１，４結合を持つセルロースリ
ボンを含んで成ることを特徴とする、上記１６に記載の
セルロース。
に進むβ−１，４結合を持ったセルロースリボンと交互
する第１方向に進むβ−１，４結合を持つセルロースリ
ボンを含んで成ることを特徴とする、上記１６に記載の
セルロース。
１８、水性普通培地が約３乃至約７のＰＨを有する上記
１０乃至１６のいずれかに記載のセルロース。
１０乃至１６のいずれかに記載のセルロース。
１つ、増殖期又は休止期が約２０’Ｃ乃至約４゜℃の温
度にある上記１０乃至１６のいずれかに記載のセルロー
ス。
度にある上記１０乃至１６のいずれかに記載のセルロー
ス。
２０、増殖期又は休止期が好気性である上記１０乃至１
６のいずれかに記載のセルロース。
６のいずれかに記載のセルロース。
２１、セルロースリボン束が少なくとも３つのセルロー
スリボンを含んで成る上記１ｏ乃至１６のいずれかに記
載のセルロース。
スリボンを含んで成る上記１ｏ乃至１６のいずれかに記
載のセルロース。
２２、セルロースがセルロース１及びセルロースＨの多
形であると定義される上記１ｏ又は１６に記載のセルロ
ース。
形であると定義される上記１ｏ又は１６に記載のセルロ
ース。
２３、炭素及び無機塩の同化可能なソースを含んで成る
接種された普通培地を好気的にインキュベーションし、
この接種された普通培地は、前記普通培地でのインキュ
ベーション中に、セルロース生産性微生物が先に付着し
たセルロースリボンの長さに沿って第１の方向に次いで
第２の方向に少なくとも周期的にシャットリングして前
記先に付着したセルロースリボンに他のセルロースリボ
ンを加えそして少なくとも２つの逆平行セルロースリボ
ンを含んで成るセルロースリボン束を生成するようなセ
ルロースリボン押出の方向の逆転を行うセルロース生産
性微生物の生物学的に純粋な培養物を添加したものを含
み、そして 生産されたセルロースを集めることを特徴とする、優れ
た構造的強度を持った微生物セルロースを得る方法。
接種された普通培地を好気的にインキュベーションし、
この接種された普通培地は、前記普通培地でのインキュ
ベーション中に、セルロース生産性微生物が先に付着し
たセルロースリボンの長さに沿って第１の方向に次いで
第２の方向に少なくとも周期的にシャットリングして前
記先に付着したセルロースリボンに他のセルロースリボ
ンを加えそして少なくとも２つの逆平行セルロースリボ
ンを含んで成るセルロースリボン束を生成するようなセ
ルロースリボン押出の方向の逆転を行うセルロース生産
性微生物の生物学的に純粋な培養物を添加したものを含
み、そして 生産されたセルロースを集めることを特徴とする、優れ
た構造的強度を持った微生物セルロースを得る方法。
２４、前記接種された普通培地が、炭素、窒素及び無機
物質の同化可能なソースを含んで成る上記２２に記載の
方法。
物質の同化可能なソースを含んで成る上記２２に記載の
方法。
２５、セルロース生産性微生物がアセトバクター属、ア
グロバクテリウム属、リゾビウム属、シュードモナス属
又はアルカリ土類金属である上記２３又は２４に記載の
方法。
グロバクテリウム属、リゾビウム属、シュードモナス属
又はアルカリ土類金属である上記２３又は２４に記載の
方法。
２６、セルロース生産性微生物がアセトバクター属であ
る上記２３又は２４に記載の方法。
る上記２３又は２４に記載の方法。
２７、セルロース生産性微生物がアセトバクター・アセ
チ、アセトバクター・ハンセニイ又はアセトバクター・
バスチュリアヌスの亜種である上記２３又は２４に記載
の方法。
チ、アセトバクター・ハンセニイ又はアセトバクター・
バスチュリアヌスの亜種である上記２３又は２４に記載
の方法。
２８、セルロース生産性微生物がアセトバクター・キシ
リヌム菌株Ｈ１Ａ、Ｈ１Ｂ、Ｈ１Ｃ、Ｈ２Ａ、Ｈ２ＢＳ
Ｈ５Ｃ，Ｈ５Ｄ、Ｈ６Ｃ，Ｈ８Ｃ。
リヌム菌株Ｈ１Ａ、Ｈ１Ｂ、Ｈ１Ｃ、Ｈ２Ａ、Ｈ２ＢＳ
Ｈ５Ｃ，Ｈ５Ｄ、Ｈ６Ｃ，Ｈ８Ｃ。
Ｈ２Ｏ，Ｈ１４Ｂ、Ｈ１５Ａ又はＨ１５Ｂである上記２
３又は２４に記載の方法。
３又は２４に記載の方法。
２９、セルロース生産性微生物がメリーランド州、ロッ
クビレのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクショ
ンに寄託された寄託番号ＡＴＣＣ５３５８２を持ったア
セトバクター・キシリヌム菌株ＮＱ５である上記２３又
は２４に記載の方法。
クビレのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクショ
ンに寄託された寄託番号ＡＴＣＣ５３５８２を持ったア
セトバクター・キシリヌム菌株ＮＱ５である上記２３又
は２４に記載の方法。
３０、逆平行セルロースリボンが、第１の方向と反対の
方向に進むβ−１，４結合を持ったセルロースリボンと
交互する第１方向に進むβ−１゜４結合を持つを特徴と
する、上記２３又は２４に記載の方法。
方向に進むβ−１，４結合を持ったセルロースリボンと
交互する第１方向に進むβ−１゜４結合を持つを特徴と
する、上記２３又は２４に記載の方法。
３１、炭素及び無機塩の同化可能なソースを含んで成る
接種された普通培地を好気的にインキュベーションし、
この接種された普通培地は、前記普通培地でのインキュ
ベーション中に、セルロース生産性微生物が先に付着し
たセルロースリボンの長さに沿って第１の方向番二次い
で第２の方向に少なくとも周期的にシャットリングして
前記光に付着したセルロースリボンに他のセルロースリ
ボンを加え、そして少なくとも３つのセルロースリボン
を含んで成るセルロースリボン束を生成するようなセル
ロースリボン押出の方向の逆転を行うセルロース生産性
微生物の生物学的に純粋な培養物を添加したものを含み
、そして 生産されたセルロースを集めることを特徴とする、優れ
た構造的強度を持った微生物セルロースを得る方法。
接種された普通培地を好気的にインキュベーションし、
この接種された普通培地は、前記普通培地でのインキュ
ベーション中に、セルロース生産性微生物が先に付着し
たセルロースリボンの長さに沿って第１の方向番二次い
で第２の方向に少なくとも周期的にシャットリングして
前記光に付着したセルロースリボンに他のセルロースリ
ボンを加え、そして少なくとも３つのセルロースリボン
を含んで成るセルロースリボン束を生成するようなセル
ロースリボン押出の方向の逆転を行うセルロース生産性
微生物の生物学的に純粋な培養物を添加したものを含み
、そして 生産されたセルロースを集めることを特徴とする、優れ
た構造的強度を持った微生物セルロースを得る方法。
３２、前記接種された普通培地が、炭素、窒素及び無機
物質の同化可能なソースを含んで成る上記３１に記載の
方法。
物質の同化可能なソースを含んで成る上記３１に記載の
方法。
３３、セルロースリボン束が、第１の方向と反対の方向
に進むβ−１，４結合を持ったセルロースリボンと交互
する第１方向に進むβ−１，４結合を持つセルロースリ
ボンを含んで成ることを特徴とし、このセルロースリボ
ン束は少なくとも３つのセルロースリボンを含んで成る
上記３１又は３２に記載の方法。
に進むβ−１，４結合を持ったセルロースリボンと交互
する第１方向に進むβ−１，４結合を持つセルロースリ
ボンを含んで成ることを特徴とし、このセルロースリボ
ン束は少なくとも３つのセルロースリボンを含んで成る
上記３１又は３２に記載の方法。
３４、炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含
む水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化
可能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロー
ス生産性微生物が多重セルロースリボンを含んで成るセ
ルロースリボン束を生成するようなセルロースリボン押
出の方向の周期的な逆転を行うことができるセルロース
生産性微生物を選択するに当たり、 炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含む無菌
の水性普通増殖培地又は炭素及び無機物質の同化可能な
ソースを含む無菌の水性休止培地を調製し、 前記増殖培地又は休止培地にセルロース生産性微生物を
加えて混合物を生成させ、 時間差顕微鏡検査法の条件下に前記混合物の試料中の、
セルロースを合成しそして押し出しているセルロース生
産性微生物の像を記録し、前記セルロース生産性微生物
が先に付着したセルロースリボンの長さに沿って第１の
方向に次いで第２の方向に少なくとも周期的にシャット
リングして前記光に付着したセルロースリボンに他のセ
ルロースリボンを加えそして少なくとも３つのセルロー
スリボンの幅を持ったセルロースリボン束を生成するこ
とを、前記像の検査により決定することを特徴とする方
法。
む水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化
可能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロー
ス生産性微生物が多重セルロースリボンを含んで成るセ
ルロースリボン束を生成するようなセルロースリボン押
出の方向の周期的な逆転を行うことができるセルロース
生産性微生物を選択するに当たり、 炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含む無菌
の水性普通増殖培地又は炭素及び無機物質の同化可能な
ソースを含む無菌の水性休止培地を調製し、 前記増殖培地又は休止培地にセルロース生産性微生物を
加えて混合物を生成させ、 時間差顕微鏡検査法の条件下に前記混合物の試料中の、
セルロースを合成しそして押し出しているセルロース生
産性微生物の像を記録し、前記セルロース生産性微生物
が先に付着したセルロースリボンの長さに沿って第１の
方向に次いで第２の方向に少なくとも周期的にシャット
リングして前記光に付着したセルロースリボンに他のセ
ルロースリボンを加えそして少なくとも３つのセルロー
スリボンの幅を持ったセルロースリボン束を生成するこ
とを、前記像の検査により決定することを特徴とする方
法。
３５、前記像の検査は、この像をそれらの記録のシーケ
ンスでしかし記録される速度よりも速い速度で、表示す
ることを含んで成る上記３４に記載の方法。
ンスでしかし記録される速度よりも速い速度で、表示す
ることを含んで成る上記３４に記載の方法。
３６、炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含
む水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化
可能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロー
ス生産性微生物が多重リボンを含んで成るセルロースリ
ボン束を生成するようなセルロースリボン押出の方向の
周期的な逆転を行うことができるセルロース生産性微生
物を選択するに当たり、 炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含む無菌
の水性普通増殖培地又は炭素及び無機物質の同化可能な
ソースを含む無菌の水性体止培地を調製し、 前記増殖培地又は休止培地にセルロース生産性微生物を
加えて混合物を生成させ、 前記微生物により生産された混合物からセルロースの試
料を得、 このセルロースを電子顕微鏡検査法染料によりネガティ
ブに染色し、 染色したセルロースの電子顕微鏡写真を得、そして 前記電子顕微鏡写真において多重セルロースリボンを含
んで成るセルロースリボン束の存在を視覚により決定す
ることを特徴とする方法。
む水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化
可能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロー
ス生産性微生物が多重リボンを含んで成るセルロースリ
ボン束を生成するようなセルロースリボン押出の方向の
周期的な逆転を行うことができるセルロース生産性微生
物を選択するに当たり、 炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含む無菌
の水性普通増殖培地又は炭素及び無機物質の同化可能な
ソースを含む無菌の水性体止培地を調製し、 前記増殖培地又は休止培地にセルロース生産性微生物を
加えて混合物を生成させ、 前記微生物により生産された混合物からセルロースの試
料を得、 このセルロースを電子顕微鏡検査法染料によりネガティ
ブに染色し、 染色したセルロースの電子顕微鏡写真を得、そして 前記電子顕微鏡写真において多重セルロースリボンを含
んで成るセルロースリボン束の存在を視覚により決定す
ることを特徴とする方法。
３７、電子顕微鏡検査法染料が酢酸ウラニルである上記
３６に記載の方法。
３６に記載の方法。
３８、セルロースリボン束が少なくとも３つのセルロー
スリボンを含んで成る上記３６に記載の方法。
スリボンを含んで成る上記３６に記載の方法。
３９、セルロースリボン束がセルロース■及びセルロー
ス■の多形を含んで成る上記３６に記載の方法。
ス■の多形を含んで成る上記３６に記載の方法。
４０、炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含
む水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化
可能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロー
ス生産性微生物が多重セルロースリボンを含んで成るセ
ルロースリボン束を生成するようなセルロースリボン押
出の方向の周期的な逆転を行うことができるセルロース
生産性微生物を選択するに当たり、 炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含む無菌
の水性普通培地又は炭素及び無機物質の同化可能なソー
スを含む無菌の水性普通培地を調製し、 前記培地にセルロース生産性微生物を加えて混合物を生
成させ、 前記混合物中に生成した微生物セルロースの試料を得、 前記セルロース試料を偏光顕微鏡検査法に付し、そして
、 多重セルロースリボンを含んで成るセルロースリボン束
の高い複屈折特性を視覚により決定することを特徴とす
る方法。
む水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化
可能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロー
ス生産性微生物が多重セルロースリボンを含んで成るセ
ルロースリボン束を生成するようなセルロースリボン押
出の方向の周期的な逆転を行うことができるセルロース
生産性微生物を選択するに当たり、 炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含む無菌
の水性普通培地又は炭素及び無機物質の同化可能なソー
スを含む無菌の水性普通培地を調製し、 前記培地にセルロース生産性微生物を加えて混合物を生
成させ、 前記混合物中に生成した微生物セルロースの試料を得、 前記セルロース試料を偏光顕微鏡検査法に付し、そして
、 多重セルロースリボンを含んで成るセルロースリボン束
の高い複屈折特性を視覚により決定することを特徴とす
る方法。
第１図、第２ａ図、第２ｂ図、第３ａ図及び第３ｂ図は
セルロース生産性微生物及び該微生物から生産されたセ
ルロースについての、生物の形態及び繊維の形状を示す
図面代用写真である。 特許出願人 ボード・オブ・リージエンッ・ザ・ユニバ
ーシティ・オブ・テキサス・ ＦｉＧ、 １ ＦｉＧ、２ｂ ＦｉＧ、 ２ ＦＩＧ、 ３
セルロース生産性微生物及び該微生物から生産されたセ
ルロースについての、生物の形態及び繊維の形状を示す
図面代用写真である。 特許出願人 ボード・オブ・リージエンッ・ザ・ユニバ
ーシティ・オブ・テキサス・ ＦｉＧ、 １ ＦｉＧ、２ｂ ＦｉＧ、 ２ ＦＩＧ、 ３
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含む
水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化可
能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロース
生産性微生物が先に付着したセルロースリボンの長さに
沿つて第１の方向に次いで第２の方向に少なくとも周期
的にシャットリングして前記先に付着したセルロースリ
ボンに他のセルロースリボンを加えそして少なくとも２
つの逆平行セルロースリボンを含んで成るセルロースリ
ボン束を生成するようなセルロースリボン押出の方向の
逆転を行うことができるセルロース生産性微生物の生物
学的に純粋な培養物。 ２、炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含む
水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化可
能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロース
生産性微生物が先に付着したセルロースリボンの長さに
沿って第１の方向に次いで第２の方向に少なくとも周期
的にシャットリングして前記先に付着したセルロースリ
ボンに他のセルロースリボンを加えそして少なくとも２
つの逆平行セルロースリボンを含んで成るセルロースリ
ボン束を生成するようなセルロースリボン押出の方向の
逆転を行うことができる、アセトバクター属のセルロー
ス生産性微生物の生物学的に純粋な培養物。 ３、炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含む
水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化可
能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロース
生産性微生物が先に付着したセルロースリボンの長さに
沿って第１の方向に次いで第２の方向に少なくとも周期
的にシャットリングして前記先に付着したセルロースリ
ボンに他のセルロースリボンを加えそして少なくとも３
つのセルロースリボンを含んで成るセルロースリボン束
を生成するようなセルロースリボン押出の方向の逆転を
行うことができる、アセトバクター・アセチ、アセトバ
クター・ハンセニイ又はアセトバクター・バスチュリア
ヌスの亜種であるセルロース生産性微生物の生物学的に
純粋な培養物。 ４、炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含む
水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化可
能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロース
生産性微生物が先に付着したセルロースリボンの長さに
沿って第１の方向に次いで第２の方向に少なくとも周期
的にシャットリングして前記先に付着したセルロースリ
ボンに他のセルロースリボンを加えそして少なくとも２
つの逆平行セルロースリボンを含んで成るセルロースリ
ボン束を生成するようなセルロースリボン押出の方向の
逆転を行うことができるセルロース生産性微生物であっ
て、アセトバクター・キシリヌム菌株Ｈ１Ａ、Ｈ１Ｂ、
Ｈ１Ｃ、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ５Ｃ、Ｈ５Ｄ、Ｈ６Ｃ、Ｈ
８Ｃ、Ｈ８Ｇ、Ｈ１４Ｂ、Ｈ１５Ａ又はＨ１５Ｂである
セルロース生産性微生物の生物学的に純粋な培養物。 ５、炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含む
水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化可
能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロース
生産性微生物が先に付着したセルロースリボンの長さに
沿って第１の方向に次いで第２の方向に少なくとも周期
的にシャットリングして前記先に付着したセルロースリ
ボンに他のセルロースリボンを加えそして少なくとも２
つの逆平行セルロースリボンを含んで成るセルロースリ
ボン束を生成するようなセルロースリボン押出の方向の
逆転を行うことができるセルロース生産性微生物であっ
て、メリーランド州、ロックビレのアメリカン・タイプ
・カルチャー・コレクションに寄託された寄託番号ＡＴ
ＣＣ５３５８２を持ったアセトバクター・キシリヌム菌
株ＮＱ５であるセルロース生産性微生物の生物学的に純
粋な培養物。 ６、炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含む
水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化可
能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロース
生産性微生物が先に付着したセルロースリボンの長さに
沿って第１の方向に次いで第２の方向に少なくとも周期
的にシャットリングして前記先に付着したセルロースリ
ボンに他のセルロースリボンを加えそして少なくとも２
つの逆平行セルロースリボンを含んで成るセルロースリ
ボン束を生成するようなセルロースリボン押出の方向の
逆転を行うことができるセルロース生産性微生物の生物
学的に純粋な培養物により生成されるセルロース。 ７、炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含む
水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化可
能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロース
生産性微生物が先に付着したセルロースリボンの長さに
沿って第１の方向に次いで第２の方向に少なくとも周期
的にシャットリングして前記先に付着したセルロースリ
ボンに他のセルロースリボンを加えそして少なくとも３
つの逆平行セルロースリボンを含んで成るセルロースリ
ボン束を生成するようなセルロースリボン押出の方向を
逆転することができるセルロース生産性微生物の生物学
的に純粋な培養物により生成されるセルロース。 ８、炭素及び無機塩の同化可能なソースを含んで成る接
種された普通培地を好気的にインキュベーションし、こ
の接種された普通培地は、前記普通培地でのインキュベ
ーション中に、セルロース生産性微生物が先に付着した
セルロースリボンの長さに沿って第１の方向に次いで第
２の方向に少なくとも周期的にシャットリングして前記
先に付着したセルロースリボンに他のセルロースリボン
を加えそして少なくとも２つの逆平行セルロースリボン
を含んで成るセルロースリボン束を生成するようなセル
ロースリボン押出の方向の逆転を行うセルロース生産性
微生物の生物学的に純粋な培養物を添加したものを含み
、そして 生産されたセルロースを集めることを特徴とする、優れ
た構造的強度を持った微生物セルロースを得る方法。 ９、炭素及び無機塩の同化可能なソースを含んで成る接
種された普通培地を好気的にインキュベーションし、こ
の接種された普通培地は、前記普通培地でのインキュベ
ーション中に、セルロース生産性微生物が先に付着した
セルロースリボンの長さに沿って第１の方向に次いで第
２の方向に少なくとも周期的にシャットリングして前記
先に付着したセルロースリボンに他のセルロースリボン
を加え、そして少なくとも３つのセルロースリボンを含
んで成るセルロースリボン束を生成するようなセルロー
スリボン押出の方向の逆転を行うセルロース生産性微生
物の生物学的に純粋な培養物を添加したものを含み、そ
して 生産されたセルロースを集めることを特徴とする、優れ
た構造的強度を持った微生物セルロースを得る方法。 １０、炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含
む水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化
可能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロー
ス生産性微生物が多重セルロースリボンを含んで成るセ
ルロースリボン束を生成するようなセルロースリボン押
出の方向の周期的な逆転を行うことができるセルロース
生産性微生物を選択するに当たり、 炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含む無菌
の水性普通増殖培地又は炭素及び無機物質の同化可能な
ソースを含む無菌の水性休止培地を調製し、 前記増殖培地又は休止培地にセルロース生産性微生物を
加えて混合物を生成させ、 時間差顕微鏡検査法の条件下に前記温合物の試料中の、
セルロースを合成しそして押し出しているセルロース生
産性微生物の像を記録し、 前記セルロース生産性微生物が先に付着したセルロース
リボンの長さに沿って第１の方向に次いで第２の方向に
少なくとも周期的にシャットリングして前記先に付着し
たセルロースリボンに他のセルロースリボンを加えそし
て少なくとも３つのセルロースリボンの幅を持ったセル
ロースリボン束を生成することを、前記像の検査により
決定することを特徴とする方法。 １１、炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含
む水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化
可能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロー
ス生産性微生物が多重リボンを含んで成るセルロースリ
ボン束を生成するようなセルロースリボン押出の方向の
周期的な逆転を行うことができるセルロース生産性微生
物を選択するに当たり、 炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含む無菌
の水性普通増殖培地又は炭素及び無機物質の同化可能な
ソースを含む無菌の水性休止培地を調製し、 前記増殖培地又は休止培地にセルロース生産性微生物を
加えて混合物を生成させ、 前記微生物により生産された混合物からセルロースの試
料を得、 このセルロースを電子顕微鏡検査法染料によりネガティ
ブに染色し、 染色したセルロースの電子顕微鏡写真を得、そして 前記電子顕微鏡写真において多重セルロースリボンを含
んで成るセルロースリボン束の存在を視覚により決定す
ることを特徴とする方法。 １２、炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含
む水性普通培地で増殖中に又は炭素及び無機物質の同化
可能なソースを含む水性普通培地で休止期に、セルロー
ス生産性微生物が多重セルロースリボンを含んで成るセ
ルロースリボン束を生成するようなセルロースリボン押
出の方向の周期的な逆転を行うことができるセルロース
生産性微生物を選択するに当たり、 炭素、窒素及び無機物質の同化可能なソースを含む無菌
の水性普通培地又は炭素及び無機物質の同化可能なソー
スを含む無菌の水性普通培地を調製し、 前記培地にセルロース生産性微生物を加えて混合物を生
成させ、 前記混合物中に生成した微生物セルロースの試料を得、 前記セルロース試料を偏光顕微鏡検査法に付し、そして
、 多重セルロースリボンを含んで成るセルロースリボン束
の高い複屈折特性を視覚により決定することを特徴とす
る方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17106788A JPH0227979A (ja) | 1988-07-11 | 1988-07-11 | 多重リボン微生物セルロース |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17106788A JPH0227979A (ja) | 1988-07-11 | 1988-07-11 | 多重リボン微生物セルロース |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0227979A true JPH0227979A (ja) | 1990-01-30 |
Family
ID=15916432
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17106788A Pending JPH0227979A (ja) | 1988-07-11 | 1988-07-11 | 多重リボン微生物セルロース |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0227979A (ja) |
-
1988
- 1988-07-11 JP JP17106788A patent/JPH0227979A/ja active Pending
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