JPH0227987A - Ｎ−アセチルグルコサミン（β１−４）ガラクトシルトランスフェラーゼをコードすするｃＤＮＡ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はＮ−アセチルグルコサミン（β１−４）ガラク
トシルトランスフェラーゼをコードするｃ　ＤＮＡに関
する。

〔発明の背景〕

はとんどの腫瘍マーカーは正常ではみられない特異構造
の糖鎖をもつか、正常では微量であるが腫瘍になると大
壷に産生される糖鎖構造である。

その構造を合成していくものは糖転移酵素であり、癌化
による腫瘍マーカーの出現は即ち、糖転移酵素の異常発
現によると考えられる。この蛋白は微量であるが故に精
製が困難であり、物質本体の解析が遅れている。これら
の問題の解決には酵素遺伝子を単離し、癌化との関係を
分子生物学的にアプローチすることが急務である。さら
に単離した遺伝子を発現系ベクターに組み換え、酵素蛋
白の活性標品が大量に得られれば、インビ）口（ｉｎｖ
ｉｔｒｏ）での糖鎖合成技術の開発の糸口になる。

〔発明の目的〕

本発明の目的は、糖転移酵素の１つであるＮ−アセチル
グルコサミン（β１−４）ガラクトシルトランスフェラ
ーゼ（以下β１−４ＧＴと略記する）をコードするｃＤ
ＮＡを提供することにある。

〔発明の構成〕

本発明は第１図に示す塩基配列のうち、３７６番目のＴ
から始まり、１１９７番目のＡで終わる塩基配列と８６
％以上の相同性を有するり、Ｎ　Ａを含むβ１−４ＧＴ
をコードするｃＤＮＡに関する。

本発明のｃＤＮＡの具体例としては以下のものがあるが
、これらに限定されない。

（ｉ）第１図に示す塩基配列のうち、３７６番目のＴか
ら始まり、１１９７番目の八で終わる塩基配列を有する
マウスβｌ−４ＧＴをコードするｃＤＮＡ。

（ｉｉ）第１図に示す塩基配列のうち、１番目のＡから
始まり、１１９７番目のＡで終わる塩基配列を有するマ
ウスβ１−４ＧＴをコードするｃＤＮＡ。

（ｉｉｉ　）第２図に示す塩基配列のうち、３７３番目
のＣから始まり、１１９４番目のＣで終わる塩基配列を
有するヒトβ１−４ＧＴをコードするｃＤＮＡ。

（ｉｖ）第２図に示す塩基配列のうち、１番目のＡから
始まり、１１９４番目のＣで終わる塩基配列を有するヒ
トβｌ−４ＧＴをコードするｃ　Ｄ　Ｎ　Ａ　。

以下に本発明のｃＤＮＡの製造法について説明する。

（１）マウスβ１−４ＧＴをコードするｃ　ＤＮＡマウ
スのβｌ−４ＧＴをコードするｃ　ＤＮＡは以下のよう
にして単離することができる。

マウステラトカルチノーマＦ９細胞は、イ、ンビトロ（
ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）で分化誘導可能な腫瘍細胞株であり
、分化段階に応じてβ１−４ＧＴの酵素活性が変化する
ことが知られている。まず第一段階としてβ９細胞株と
ｃＤＮＡバンクを、ウシβ１−４ＧＴ　　ｃＤＮＡをプ
ローブとして用いてスクリーニングする。β９　　ｃＤ
ＮＡバンクはβ９細胞をレチノイン酸にて分化を誘導し
３ｋｂ以上のｍＲＮＡを抽出精製し、λｇｔｌｌファー
ジに組み換えて作成できる。ウシβ１−４ＧＴのＯＲＦ
部分中の５ｓｔＩ−ＫｐｎＩフラグメントをプローブと
して、５０万個のλｇｔｌｌファージ組み換え体をスク
リーニングすることにより陽性ｃ　ＤＮＡクローンを得
ることができる。得られたｃＤＮＡクローンが全長ｃＤ
ＮＡでない場合には、上記で得られた一部に欠失部分の
有するｃＤＮＡクローンの５′末端からＳｍａｌのフラ
グメントをプローブとして作成し、同じＦ　９　ｃ　Ｄ
ＮＡバンクを再スクリーニングすることにより全長ｃＤ
ＮＡを単離することができる。全長ｃＤＮＡの全塩基配
列は常法（例えば５３％を用いたＭ１３法）により決定
できる。

（２）ヒトβ１−４ＧＴをコードするｃ　ＤＮＡウシβ
１−４ＧＴ　　ｃＤＮＡをプローブとして、ヒト胎盤由
来ｃＤＮＡバンクをスクリーニングし、得られる２５万
個のλｇｔｌ１組み換えファージからヒトβ１−４ＧＴ
の全長をコードするｃＤＮＡを得ることができる。

尚、第１図及び第２図にマウスβｌ−４ＧＴをコードす
るｃ　ＤＮＡ及びヒトβ１−４ＧＴをコードするｃＤＮ
Ａをそれぞれ示す。これらｃ　ＤＮＡ（マウスβ１−４
ＧＴをコードするｃ　ＤＮＡは１〜１１９７の全長ｃＤ
ＮＡ、ＤＮＡバンクＧＴをコードするｃＤＮＡは１〜１
１９４の全長ｃＤＮＡ）は、公知の発現系ベクターに組
み換えすることにより、β１−４ＧＴの活性標品を大量
に合成することが可能である。ただし、組み換えによる
β１−４ＧＴの活性標品の合成には上記全長ｃ、　Ｄ　
Ｎ　Ａの断片ｃＤＮＡを用いることもできる。例えば、
マウスβ１−４ＧＴをコードするｃＤＮＡの場合には、
３７６番目のＴから１１９７番目のＡまでのｃＤＮＡを
用いることによってもβ１−４ＧＴの活性標品を得るこ
とができる。同様にしてヒトβ１−４ＧＴをコードする
ｃ　ＤＮＡの場合には、３７３番目のＣから１１９４番
目のＣまでのｃＤＮＡを用いることによりβ１−４ＧＴ
の活性標品を得ることができる。

尚、断片ｃＤＮＡはプライマー伸長法、Ｂａ１３１　（
制限酵素）を用いる方法により得ることができる。

又、実施例に記載したように、マウスの全長ｃＤＮＡと
ヒトの全長ｃＤＮＡは、塩基配列で７５％の相同性を有
することから、第１図に示すマウスの１〜１１９７のｃ
ＤＮＡを塩基配列で７５％以上の相同性を有するｃＤＮ
Ａを前記のような発現系ベクターに組み換えることによ
って、β１−４ＧＴの活性標品を得ることができる。さ
らに、第１図に示すマウスの３７６〜１１ｇ７のｃＤＮ
Ａと第２図に示すヒトの３７３〜１１９４のｃＤＮＡと
は、８６％の相同性があり、第１図に示すマウスの３７
６〜１１９７のｃＤＮＡと８０％以上の相同性を有する
ｃＤＮＡを発現系ベクターに組み換えても、β１−４Ｇ
Ｔの活性標品を得ることができる。

本発明のβ１−４ＧＴをコードするｃＤＮＡはβ１−４
ＧＴの活性標品を提供する上で極めて有用であり、β１
−４ＧＴの活性標品を提供することにより糖鎖をインビ
トロで合成することが可能となる。

以下本発明を実施例によりさらに説明する。

実施例１ ヒトβ１−４０Ｔをコードする全長ｃＤＮＡの単離と全
塩基配列及び蛋白−次構造の決定ヒト胎盤より抽出され
たｐｏｌｙＡ　”ｍ　ＲＮ　Ａよりランダムプライマー
法によりｃ　ＤＮＡを０合成し、λｇｔｌｌファージ組
み込むことにより作成されたｃＤＮＡバンクを、ウシβ
１−４０ＴをコードするｃＤＮＡをプローブとして、ス
クリーニングした。ｃＤＮＡ内の蛋白コーディング部位
である５ｓｔＩ−ＫｐｎＩフラグメント（約０．９　ｋ
ｂ）を、”Ｐ　−ｄ　ＣＴ　Ｐにてランダムプライマー
法でラベルしプローブとした（第３図）。

ｃ　ＤＮＡバンク（λｇｔｌｌファージバンク）の２５
０．０ＯＯＰＦＵを宿主菌Ｂ、Ｃｏ１１　Ｙ１０８８に
３７℃、１５分間吸着させ、軟寒天（０，７％Ａｇａｒ
）　Ｌ　Ｂ培地に懸濁した。これを１０ＣＩＸ１４Ｃ１
１の角型シャーレのＬＢ培地１．０枚に均等にまいた。

３７℃、８時間培養してファージプラークを出現させた
。

１ＭＮａＣ１液にあらかじめ浸しさらに風乾しておいた
ニトロセルロースフィルター（以下ＮｃＦ）９Ｘ１３Ｃ
１ｌを、ファージプラーク平板にかぶせ３０秒放置する
ことによりファージをＮＣＦにうつしとった。さらに同
じ平板に２枚目のＮＣＦを１分間放置しファージをうつ
しとった。このようにスクリーニングはすべてデュプリ
ケートして行われた。

ＮＣＦをさらに０．５　Ｍ　　ＮａＨ，１，５Ｍ　Ｎａ
Ｃ１液にて５分間アルカリ処理を施こし、０．５Ｍ　Ｔ
ｒｉｓ−ＨＣ１ｐｆｌ？、５、■、５Ｍ　　ＮａＣ１液
にて中和した。風乾後、８０℃にてベーキングし、プレ
ハイブリダイゼーションをバッファー組成、ホルムアミ
ド５０％、ＳＤ３１％、デンハルト（口ｅｎｈａｒｄｔ
）液０．１％、デキストランサルフエイト５％、ポリＡ
０．０５％を使用して、４２℃で一昼夜行った。

ｃＤＮＡプローブの調整；ｐＵｃ１９ベクターにサブク
ローンした後、プラスミドとしてＣｓＣ１密度勾配によ
り超遠心機にて精製した。制限酵素で切断後、０．７％
低融点アガロースにて電気泳動分離し、目的のバンドを
切り出しプローブ用ＤＮＡとして精製した。約５０ｎＨ
のプローブＤＮＡをマルチランダムプライマーキット法
（アマ−ジャム社製）をもちいて３２ｐにて標識した。

上記プレハイブリダイゼーション用バッファーと同じ組
成の液にて標識プローブを稀釈してハイブリダイゼーシ
ョンを４２℃で一昼夜行った。最終的に５５℃、０、２
　Ｘ　５ＳＰＥのストリンゼンシーにてＮＣＦを洗浄後
、オートラジオグラフィーを行い、陽性のクローンを拾
った。２次、３次、４次スクリーニングとファージ数を
順にｌ／１０数に減らしていき、４次スクリーニングで
完全に単一クローンとした。

λｇｔｌｌファージのミニプレプ法：Ｙ１０８８宿主菌
を前夜よりＹＴ培地にておこしておく。菌液１−に、フ
ァージをＭ、０，１．　０．０３〜０．２の範囲で加え
、３７℃２０分吸着させた後、ＹＴ培地を１５−加えて
３７℃で１３〜１４時間振とう培養した。

遠心（３０００ｒｐｍ１５分）後、上清をとりＤＥ５２
を等量論え３０分間回転板にて混合する。遠心（３００
０ｒｐｍ１５分）、上清を取った。５ＭＮａＣβを１７
８容量、冷インプロパツールを２７／４０容徽加えて混
合し、−２０℃で２時間放置した。４℃にて遠心（３０
０Ｇｒｐｍ１５分）後、上清を揄て沈渣のファージを１
ｍｌの７０％エタノールに懸濁した後、エッペンドルフ
チューブにうつす。遠心（６０００ｒｐｍ　５分）後、
上清を檜で、沈渣を乾燥し４００μｌ１ＴＥバツフアー
に懸濁する。この後は、フェノール処理２回、フェノー
ル／クロロホルム処理を行いエタノール沈殿によりファ
ージＤＮＡを精製した。

ファージＤＮＡをＥＣｏＲＩで切断後、電気泳動にかけ
挿入された。ｃＤＮＡの結果を得た。さらにＳ　ａｃ　
Ｉ　％Ｋ　ｐｎ　Ｉ、ＳｍａＩなどの制限酵素を組みあ
わせてこの時点で大まかな制限酵素地図を作成した。こ
の電気泳動ゲルをナイロンフィルターにブロッティング
し、ウシｃＤＮＡを各部分とノ＼イブリダイズすること
により、１８個の各りＣ−ンの位置関係を確認した。そ
れぞれのクローンを天童培養によりＤＮＡをｍ製し、Ｅ
ｃｏＲｉで切断した後、このＥｃｏＲＩ断片をｐＵＣ１
９ベクターにすべてサブクローンした。

λｇｉｌｌファージよりｐＵｃ１９プラスミドへのサブ
クローニング；大景精製したファージＤＮＡをＥｃｏＲ
Ｉで切断後、ＬＭＰアガロース電気泳動にて分離し切り
出し精製した。ｐＵｃ１９プラスミドをＥＣ０ＲＩで切
断、ｃＤＮＡのＥｃｏＲＩフラグメントとｐＵｃＬ９の
ＤＮＡ量をモル数で合わせ、２０μ！容量にて１０単位
の７４　　’ＤＮＡリガーゼの存在下に１６℃−昼夜保
温した。前夜より宿主菌ＨＢＩＯＩをおこしておき、使
用２時間前にＬＢ培地にて２０倍稀釈し振とう培養する
。

その後、遠心３．００　Ｏｒｐｍ　１５分にて菌をおと
し上清を１７２量の５０ｍＭ冷ＣａＣ１ｘといれかえる
。さらに遠心後、上清を１７２０量の５０　ｍｌＪ　Ｃ
ａＣ１２に懸濁する。この菌液０．３　Ｗｄ２を前述の
ＤＮＡ液に加え混合後４０分間氷上に放置し、４２℃　
２分間急速に熱を加える。この菌液をＬＢ平板（５０μ
ｇ／ｍｌアンピシリン、Ｘ−ｇａｌ　２００　Ｄ　ｇ／
ｍｌ、ＩＰＴＧ１００μｇ　／　ｄを含む）上にコンラ
ージ棒にて均等にひろげ、−昼夜３７℃で培養、出現し
てくるコロニーのうち白色コロニーをひろった。確かに
ｃＤＮＡを挿入されたか否かを確認のために、標識ｃＤ
ＮＡをもちいてコロニーハイブリダイゼーションをも行
った。

ｐＵｃ１９にサブクローンされたｃＤＮＡを大量に得る
ために、各プラスミドクローンをもつ菌をそれぞれ１１
のＬＢ−アンピシリン培養液にて一昼夜培養し、アルカ
リ法にてプラスミドを精製した。各種制限酵素にて切断
し制限酵素地図を作成した（第４図）。この結果よりＭ
１３ファージに組み換えるプロトコールを検討し塩基配
列のシーフェンスを行った。

Ｍ１３ファージジデオキシ法による全塩基配列シークエ
ンス；Ｍ１３ファージのｍｐ１８及びｍｐ１９をもちい
た。各ＲＦ　　ＤＮＡを組み換えるべき制限酵素部位で
切断した。ｐＵｃ１９に組み込まれたｃＤＮＡを目的の
制限酵素部位で切断した。両者をモル比を合わせて混合
し、Ｔ４リガーゼにて１６℃−昼夜、結合反応を行った
。前述の様に、宿主菌ＪＭＩＯＩにトランスフェクショ
ンし、ソフトアガー及び指示菌ＪＭＩ　０１と混合し、
ＬＢ平板（Ｘ−ガル、ＩＰＴＧを含む）上に均一にひろ
げ、３７℃−昼夜培養した。

ＹＴ培養液５ｒ１１１に白プラークをひろいあげ、宿主
菌ＪＭＩ　０１を加え８時間振とう培養した。遠心（３
０００ｒｐｍ、ｉ５分）後、上清をとり６５℃、１５分
の熱処理を加えた。この５μｌをフィルターにとり、Ｍ
１３ファージに目的のｃＤＮＡが挿入されているかどう
か確かめるために、標識ｃＤＮＡにてハイブリダイズを
行った。その結果陽性に出たＭ１３ファージの上清のみ
をシーフェンスにもちいた。

上清１ｒｎ１に１５％ポリエチレンゲルコール２．５Ｍ
　ＮａＣβ液を２５０μｌ加え混合後、氷上に３０分放
置し、遠心（１５，００Ｏｒｐｍ、　１５分）する。

上清を先細のパスツールピペットにて完全に吸い出し、
沈渣のファージを風乾させる。フェノール処理、フェノ
ール／クロロホルム処理、クロロホルム処理後、エタノ
ール沈澱を２回行う。乾燥後に１０μｌのＴＥバッファ
ーにとかし、ｓｓＤＮＡとして４℃に保存した。

ｓｓＤ　Ｎ　Ａ　４　ｕ　１　、ＬＯ４ＪＪ　１　、ブ
ライ７−（０，５ｐｍｏｌ）　１　μｌ　、Ｔ　Ｍバッ
フｙ　　　（０，１Ｍ）リスＨＣｌｐＨ７５，０，１Ｍ
　ＭｇＣｌ　２＞　１μｌを混和し、７０℃、１０分加
熱し、少くとも３０分以上かけてゆっくりと室温にもど
す。遠心して壁面についている水滴を底におとす。２μ
ｍ（２０μＣｉ）の［”Ｓ〕−ｄ　ＡＴＰを加えポルテ
ックス後遠心し、氷上に置く。この間に、Ａ、Ｇ、Ｃ，
１’、それぞれの混合物を４μｍずつ分注しておく。最
初のサンプルに１　ｕｎｉｔ／μｌのクレノーフラッグ
メント（Ｋｌｅｎｏｗｆｒａｇｍｅｎｔ）　１　、！ｊ
　１を加えて軽く遠心後に、２．５〜３．０μβをＡ、
Ｇ、Ｃ，Ｔ混合物のそれぞれに加え軽く遠心で混合して
反応を開始する。室温で２０分間放置後、チエイス溶液
（ｃｈａｓｅ　５ｏｌｕｔｉｏｎ）１μβを加え軽く遠
心し、さらに室温で２０分間放置する。スピードバック
（Ｓｐａａｄ　ｖａｃ）を用いて完全に乾燥させる。５
μｌのストップ溶液　（Ｓｔｏｐｓｏｌｕｔｉｏｎ）を
加えボーテックス　（Ｖｏｒｔｅｘ）にてよく溶かす。

９０℃で２〜３分加熱後、素早く２．５μｌをｇｅｌに
アプライし電気泳動する。

シークエンスミ気泳動；以下の様に試薬を調整した。（
１）４０％アクリルアミドストック溶液；１９０ｇアク
リルアミド、１０ｇビスアクリルアミドにｄｄ　ＬＯを
加え５００ｄにする。（２）高塩ゲル溶液；５０ｇ尿素
、１０　ｇサッカロース、１５−４０％アクリルアミド
ストック溶液、２５ｒｎｌ　１０ｘＴＢＥ、ＢＰＢ粉末
を少々、以上にｄｄ’　）＋２０を加え、１００ｒｎｌ
にした後に、フィルター（０，４５ｕｍ）を通し、４℃
に保存、（３）低温ゲル溶液；２５０ｇ尿素、７５ｒｎ
１４０％アクリルアミドストック溶液、２５ｍｊ！１０
ｘＴＢＥ、以上にｄｄ　０２０を加え、５００−にした
後に、フィルター（０，４５μｍ）を通し４℃で保存。

ｇｅｌ　５ｉｚｅ３５０　Ｘ　４２５　Ｘ厚さ０．４　
ｍｍ　（Ｉ　Ｂ　Ｉ社製装置）のｇｅｌを作製した。（
１）　６５−の低温ゲル溶液に１２０μβの２５％過硫
酸アンモニウムと７０μＩＴＥＭＥＤを加える。　（２
）　１５　ｒｄ高温ゲル溶液に１６μｍ２５％過硫酸ア
ンモニウムと２０μＩＴＥＭＥＤを加える。まず１２〜
１３ＦＲ１の（１）を２５ｄのピペットで吸い上げ、続
いてω）を同量吸い上げる。４５℃に傾けたプレートの
端より静かに流し込む。さらに残りの（１］をプレート
の中央より流し込み、プレートをねかせコームを差し込
み、ゲル化するのを待つ。コームをぬき、前述のサンプ
ルをのせ電気泳動を７４Ｗで行った。泳動後、５％メタ
ノール７５％酢酸溶液に２０〜３０分間浸して尿素を除
く。ゲルを３ＭＭペーパーにうつしとりラップをかけて
８０℃で乾燥させた後、コダック社製ＸＡＲ−５フィル
ムに感光させた。

以上の方法を用いて、ヒトβ１−４ＧＴ　　ｃＤＮＡの
全塩基配列を決定した（第２図）。

実施例２ 造の決定 ウシβｌ−４ＧＴ　　ｃＤＮＡクローンの５ｓｔＩ−Ｋ
　ｐｎ　ＩフラグメントがＦ　９　ｃ　ＤＮＡバンクの
スクリーニングにプローブとして用いられた。方法につ
いては実施例１のヒトｃ　ＤＮＡバンクのスクリーニン
グとまったく同様である。

最初のスクリーニングで、５ＧＴ個のファージ数から３
個の陽性クローンを得た。前述の如く制限酵素地図を作
成した。このうち、２個は同じ地図を示し、長さもほと
んど同じであった（λｍＧＴ−１０と命名）が、１個ｐ
ｍＧ　Ｔ　−２は一部異なる地図を示した。前者のうち
最も長いクローンでも全長をコードしていないことが判
明したので、５′末端のＥｃｏＲＩ　−ＳｍａＩフラグ
メントを切り出し精製し、同じＦ９　　ｃＤＮＡバンク
を再スクリーニングした。５ＧＴ個のファージのうち、
４個の陽性クローンを得た後、型通り制限酵素地図の作
成、及び全長ｃＤＮＡであるヒトβ１−４　ＧＴｃ　Ｄ
　Ｎ　Ａの各部分とハイブリダイズを行い、全長をコー
ドすると思われるｃＤＮＡクローン（λｍＧＴ−５）の
塩基配列決定を行った（第１図）。

実施例２のマウス全長βｌ−４ＧＴ［クローン（ｐｍＧ
　Ｔ　−５）Ｅの塩基配列（１〜１１９７）を実施例１
のヒト全長β１−４ＧＴ　　ｃＤＮＡ　（１〜１１９４
）と比較した結果では、塩基配列で約７５％、アミノ酸
配列で約８３％の相同性があった。さらにＣ末端側２０
０個のアミノ酸はきわめて相同性が高く（約９０％）、
マウスβ１−４ＧＴの３７６〜１１９７の塩基配列とヒ
トβ１−４ＣＴの３７３〜１１９４の塩基配列とは約８
０％の相同性があった。

チョウ−７７ス−ｖ　：／　（Ｃｈｏｗ−Ｆａｓｍａｎ
）のプログラムを用いて蛋白二次構造を計算したが、相
同性の高い部分はα−ヘリックス、β−シートに富み、
逆に、低い部分は、いわゆるランダムコイル構造をとる
結果を得た。マウスβｌ−４ＧＴもやはりＮ末端に１８
個の疎水性アミノ酸よりなるアンカ一部をもち、開始コ
ドン、停止コドンともヒトｃＤＮＡと同じ位置にあった
が途中、ヒトと相同性の少ない部分に１個のアミノ酸の
インサージョンがあり、全アミノ酸敗４００個であり、
計算されるＭ、Ｗ、　　は４８ＫＤａである。このこと
からも、異種間のアミノ酸配列で相同性の低い部分は、
酵素の基質特異性、活性中心部位とは関係のない部位と
思われる（第５図）。

【図面の簡単な説明】

第１図はマウスβ１−４ＧＴをコードするｃＯＮＡの塩
基配列及びアミノ酸配列、第２図はヒトβ１−４０Ｔと
コードするｃＤＮＡの塩基配列及びアミノ酸配列、第３
図はウシβ１−４ＧＴｃＤＮＡの制限酵素地図、第４図
はヒトβ１−４ＧＴｃＤＮＡの制限酵素地図、第５図は
ヒト及びマウスβ１−４ＧＴのアミノ酸配列の相同性を
示す。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）第１図に示す塩基配列のうち、３７６番目のＴか
   ら始まり、１１９７番目のＡで終わる塩基配列と８６％
   以上の相同性を有するＤＮＡを含むＮ−アセチルグルコ
   サミン（β１−４）ガラクトシルトランスフェラーゼを
   コードするｃＤＮＡ。
2. （２）第１図に示す塩基配列のうち、１番目のＡから始
   まり、１１９７番目のＡで終わる塩基配列と７５％以上
   の相同性を有するＤＮＡを含むＮ−アセチルグルコサミ
   ン（β１−４）ガラクトシルトランスフェラーゼをコー
   ドするｃＤＮＡ。