JPH02286023A

JPH02286023A - 稚魚用飼料としての生物の培養方法

Info

Publication number: JPH02286023A
Application number: JP1107411A
Authority: JP
Inventors: Kazuyoshi Yazawa; 一良矢澤; Kazuo Watabe; 渡部　和郎; Sei Kondo; 近藤　聖
Original assignee: Sagami Chemical Research Institute
Current assignee: Sagami Chemical Research Institute
Priority date: 1989-04-28
Filing date: 1989-04-28
Publication date: 1990-11-26

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、エイコサペンタエン酸（以下ＥＰＡと称す）
を餌とする、稚魚用飼料である生物の培養方法に関する
。

〔従来の技缶〕

従来から稚魚の飼料としては、シオミズツボワムシ（以
下単にワムシという）が存用であることが知られている
。このワムシは、海産クロレラを培養し、これをエサと
して得られるものである（特開昭６１−７４５５０公報
）。

近年、このワムシ中に含まれるＥＰＡ　（エイコサペン
タエン酸）が稚魚の成長に必須の因子であることが明ら
かにされたが、ＥＰＡはワムシに本来含まれているもの
ではなく、海産クロレラに含まれるＥＰＡが食物連鎖に
より蓄積されたものである。

上記の理由からＥＰＡを含有するワムシを用いる稚魚用
飼料の製造方法は一層、有用なものとなっているが、こ
のような海産クロレラを用いる方法で稚魚の飼料を作る
ためにはいくつもの広大な培養池を準備する必要があり
、また増殖に極めて長時間を必要とし、手間のかかるも
のであった。

このように、広大な土地を必要とする海産クロレラの培
養はおのずと限界がある。そこでこれを解決するために
、最近ではパン酵母に魚油又は魚油肝油（ＥＰＡ含量７
〜１５％）を混合したものをワムシのエサとして使用さ
れるようになったが、この方法では海産クロレラをエサ
としたワムシの場合に比べると稚魚の生育が劣るという
欠点がある。また、このような混合物は高度不飽和脂肪
酸を多く含むために、非常に酸化され易く、保存に当た
り凍結などの手間が必要である。さらに、パン酵母に付
着した魚油が培養池中で酸化して、水が劣化し異臭を放
つなどの重大な問題があった。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明の目的は、と述したような従来の稚魚用銅ｔ」の
製造法が有していた欠点を払拭し、ＥＰＡを含む稚魚用
飼料を季節によらず安定して供給でき、さらにＥＰＡ高
含有の稚魚用飼料としての生物を効率よ＜！！Ｉｎでき
る方法を提供することにある。

〔問題を解決するための手段〕

本発明者らは、上記の目的を達成すべく種々の研究の結
果、本発明に係わるＥＰＡ産生細ｖＩｉをワムシ、アル
テミア、原虫動物等の生物に高効率に取り込ませること
により、ＥＰＡ高含有稚魚用飼料としての生物を培養で
きることを見出した。

本発明は、かかる知見に基づいて完成されたもので、Ｅ
ＰＡ産生ＩＩ菌を取り込ませた稚魚用飼料としてのワム
シ、アルテミア、原虫動物等の生物を墳１！する方法で
ある。さらに、本発明は従来の海産クロレラやパン酵母
を用いろ方法を併用することもできる。

〔具体的な説明〕

（１）　　ＢＰＡ＠生細菌Ｅ　Ｐ　Ａ産生細菌とは、特にＩ属などを限定するもの
ではなく、ＥＰＡを菌体内もり、＜は菌体外に分泌する
１ｊ菌であればいずれを使用してもよく、通常シェード
モナス（Ｐｓｅｕｄｏａｏｎａｓ）　属、アルテしＩモ
ナス（紅旦■柱憇■属又はシーワネラ（Ｓｈｏｗａｎｅ
ｌ　ｌａ）属などに分頬される海洋微生物を用いる。

上記のシェードモナス、仕μ捷亘Ｖ週４４）灰に属する
微生物の例としてシェードモナス・ビニートリファシコ
、ンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　　肋±１島劇旦駐）
ＳＣｎｅ−２７３８（微工研菌寄第ＦＨＴセＭＰ−り１
１４）を挙げることができる。アルテロモナス（Ａｌｔ
ｅｒｏｍｏｎａｓ）　Ｅｒａに属する微生物の例として
、アルテロモナス・ビュートリフプシエ二Ｉス（ＡＩＬ
ｅｒｏｍｏｎａｉ　　ｕｔｒａｆａｃｌｅｎｓ）　　Ｓ
　ＣＩＩ　Ｃ−６３７０（徽工研菌寄第Ｆ　Ｅ　ｒ（Ｍ
　Ｐ・−１０６８４）及びアルＩＡＭ−１２６４１を挙
げることができる。シーワネラ套加猟ａｎｅｌｌ吐属に
属する微生物の例として、シーワネラ・ピユートリファ
シェンス（Ｓｈｅｗａｎｓｌ　ＩａＷｒ！！Ｌ！Ｊ１１
）　Ｓ　ＣＲＣ−２８７４（微工研菌寄第ＦＥＲＭＰ−
９１５９）を挙げることができる。

これらの菌株のなかで最も効率よ＜Ｅｌ）八を歳り込ま
せる事のできろ菌株であるアルテロモナス・ピユートリ
ファシェンス（Ａｌ　ｔｅｒｏｓｏｎａｓ　　匹紅畦払
ハＵ）ＳＣＲＣ−６３７０は次のような菌学的諸性質を
有する。

観察項目ａ）形態＋１）　　細胞の形大きさ伏）　多形性の有無（３１ｉｉ動性の有無短かん薗１、ＯＸ　２．０μｍ無有鞭毛の着生状態（４）胞子のを無（５）ダラム染色（６）抗酸性単極上無陰性陰性ｂ）各培地に於ける生育状態ｌ　肉汁寒天平板培養（２５℃、２日間）イ）コロニー
形状（直径）１．０〜１．５鶴口）コロニーの形　　　
　　　　円　形ハ）コロニーの表面の形状　　　平　滑
部）コロニーの隆起状態　　　　台　状ホ）コロニーの
周縁　　　　　　金　縁へ）コロニーの色別　　　　　
　淡黄色ト）コロニーの透明度　　　　　半透明チ）コ
ロニーの光沢　　　　　　光　沢り）可溶性色素の生成
　　　　　無２　肉汁寒天斜面培ｔ（２５℃、２日間）生育の良否　
　　　　　　　良　好コロニーの光沢　　　　　　光　沢肉汁液体培地（２５℃、２日間）表面の生ｓｒ　　　　　　　　　ｓ濁度　　　　　　　　　　　濁　る沈澱　　　　　粉状ガス発生　　　　　　　　　無肉汁ゼラチン（２５℃、２日間）ゼラチン液化　　　　　　　液　化リドマスミルク　　　　　　還　元（凝固・液化はしない）Ｃ）生理学的性質硝酸塩の還元脱　窒Ｒ ■Ｐインドール生成硫化水素の生成＋７　デンプンの加水分解８　クエン酸利用イ）Ｋｏｓｅｒ口）Ｃｈｒｌａｔａｎｓａｎ９　硝酸塩の利用１０　色素生成イ）Ｋｉｎｇ　　Ａ　　培地口）Ｋｌｎｇ　　Ｂ　　量会地１１　ウレアーゼ１２　オキシダーゼ１３　カタラーゼ１４　生育の範囲イ）ｐＨ口）温度１５　　Ｍ素に対する態度１６　０−Ｆ　　テスト（グルコース）１７　　ｍ類か
ら酸及びガス生成＋１）　Ｌ−アラビノース＋６〜１１５℃〜３０℃ 好気性（支））Ｄ−キシロース（３）Ｄ−グルコース（４）Ｄ−マンノース（５）Ｄ−フラクトース（６）Ｄ−ガラクトース（７）麦芽糖（８）シｇ糖（９）乳　糖 αΦトレハロース αΩＤΩソービット亜り−マンニット αｌイノシフト０旬グリセリン（５）デンプン（但しガスの生成　全項目−）ｄ）その他の諸性質ＳＳ寒天培地での生育マツコンキー寒天培地での生育＋６．５％ＮａＣ１耐塩性ＤＮａｓｅオルニチンの分解アルギニンの分解Ｇ、＋Ｃ含量ゼラチンの分解４５．５％以上のような諸性質から、本菌株５ＣＲＣ−６３７０は
下記の大きな特徴を持つ。

■　ダラム陰性 ■　運動性を持つ ■　非胞子形成の好気性桿菌 ■　Ｏ−Ｆテスト陰性 ■　カタラーゼ、オキシダーゼ陽性 ■　ウレアーゼ陰性 ■　ゼラチン、ＤＮＡ分解能を持つ ■　グルコースからの酸度性（＋）、ガス産性（−）９
　　Ｇ＋Ｃ含量４５．５％このような諸性質を有する本菌株５ＣＲＣ−６３７０株
の分類学的な位置は、バージイズ・マニュアル・オプ・
ディタミナティブ・バクテリオロジ−（Ｂｅｒｇａｙ″
ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｓｔｅｒｍｌｎａｔｉｖｅ
Ｂａｃｔａｒｌｏｌｏｇｙ）第８版、１９７４年、及び
バージイズ・マニュアル・オプ・システマテインク・バ
クテリオロジー（Ｂａｒｇｅｙ’ａ　Ｍａｎｕａｌ　ｏ
ｆ　ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）
第１＠、３４３〜３５２頁、１９８４年の分類基準、さ
らにマニュアル・オブ・クリニカル・マイクロバイオロ
ジー（Ｍａｎｕａｌ　ｏｆＣＩｌｎｉｃａｌ　Ｍｉｃｒ
ｏｂｌｏｌｏｇｙ）第３版、１９８０年及びジャーナル
・オプ・ゼネラル・マイクロバイオロジー（Ｊｏｕｒｎ
ａｌ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｍｌｃｒｏｂｉｏｌｏｇ
ｙ）　　１２９　。

３０５７−３０７４　（１９８３）等の文献に従って、
アルテロモナス・ビニ−トリファシェンス（＾Ｉｔｓｒ
ｏｍｏｎａｓ　　助力！ｂ劇！懸）と同定した。

以上、自然界から分離したこの菌株について詳細に記載
したが、この菌に変異を生じさせて一層ＥＰＡ産性能の
高い菌株を得ることも出来る。

この発明の菌株は、常法に従うて保存することが出来、
例えば寒天スラント培地上で、又は凍結乾燥法により保
存することが出来る。寒天スラント培地としては、アル
テロモナス属細菌の保存に常用されている培地を使用す
ることができる。また、凍結乾燥保存も常法に従って行
うことができる。

（２）ＥＰＡ産生菌の製造方法前記の微生物を培養して本発明のＥＰＡ産生細菌を製造
しようとする場合、基礎栄養培地として、この発明の微
生物が増殖しうるちのであればいずれを使用してもよい
。

この培地は、窒素源として例えば酵母エキス、ペプトン
、肉エキス、等の１種類又は複数種類を含有する。又は
この培地には必要に応じて炭素源として各種の糖を加え
ることができる。

培養は固体培地又は液体培地のいずれを用いても良いが
、目的とするＥＰＡ産生菌を多量に得る為には、液体培
地を用い、静置もしくは振盪培地、通気・撹拌培養等に
より好気条件下で培養を行うのが好ましい、培養温度は
菌が生育する温度範囲であればいずれの温度でも良く、
好ましくは５〜３０℃であり、より好ましくは１５〜２
５℃である。ｐＨは６〜９、好ましくは７〜８の範囲で
ある。培養時間は採取し得る量のＥＰＡ産生菌が生産さ
れる時間を選べば良く、好ましくは８〜４８時間である
。

このようにして得られたＥＰＡ生産菌は、生きたまま湿
菌体として、また凍結乾燥菌体として使用可能であり、
さらに死菌体としても使用可能である。そしてこれらの
面体を例えば稚魚としての生物の培養槽に添加し、又こ
れらの生物を稚魚の生育槽に加えることにより、稚魚の
生長に利用することができる。稚魚飼料としての生物は
ＥＰＡ産生細菌をエサとすることができ、又稚魚の食餌
となるができるものならばいずれでもよいが、例えばシ
オミズツボワムシ、アルテミア、原虫動物、ミジンコ、
オキアミ、チグリオバス、コペボーダなどを挙げること
ができる。

〔発明の効果〕

本発明によれば、ワムシを用いる従来の稚魚用飼料の製
造法に見られた欠点が解決され、ＥＰＡを含む稚魚用飼
料のワムシ等の生物を、ＥＰＡ産生産生型ｌ添加培地り
培養して得ることが可能である。

好気的に培養して得られた歯体を集菌後凍結乾爆に付し
た。

このようにして稠整された乾燥菌体５０■を、パン酵母
２　Ｘ　１０　’ｃｅｌｌｓ／ｅ＋！を含むワムシ培養
液に添加し、２４時間後にワムシを培養液から取り上げ
、塩酸メタノールで脂質をメチルエステルにして抽出し
た。また、ＥＰＡ産生細菌を添加する前のワムシについ
ても同様に脂質を抽出した。各々の脂肪酸組成をガスク
ロマトグラフで調べ、表１の結果を得た。

実施例１ＥＰＡ産生菌であるアルテロモナス・ビニ−トリファシ
ェンス（Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ　　ｕｔｒｅｆａｃｉ
ｅｎｓ）ＳＣＲＣ−６３７０（微工研菌寄第ＦＥＲＭＰ
−１０６８４）をペプトン１％、酵母エキス０．５％を
含有した海水培地（ｐＨ７，０）１０ｊ！で２４時間表
−１このように本発明のＥＰＡ酸生細菌をワムシ培地に添加
することによって、ワムシ中にＥＰＡを高含量に取り込
ませることができた。

実施例２ＥＰＡ酸生菌であるアルテロモナス・ビュートリファシ
ェンス（Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ　　匹江鮭駐昆竺）Ｓ
ＣＲＣ−６３７０（微工研菌寄第ＦＥＲＭＰ１０６８４
）をペプトン１９４、酵母エキス０．５％を含有した海
水培地（ｐＨ７，０）１０ｊ’で、２４時間好気的に培
養して得られた菌体を集菌した。

このようにして得られた湿菌体１００■をパン酵母２　
Ｘ　１０　’ｃｅｌｌｓ／ｍｌを含むワムシ培養液に添
加し、２４時間後にワムシを培養液から取り上げ、塩酸
メタノールで脂質をメチルエステルにして抽出した。ま
た、ＥＰＡ酸生細菌を添加する前のワムシについても同
様に脂質を抽出した。さらに従来ワムシの栄養強化に用
いられている前述の魚油又は魚油肝油を混合した酵母で
培養したりムシについても同様に脂質を抽出した。各々
の脂質中のＥＰＡ量をガスクロマトグラフで調べ、ワム
シ１個体当たりのＥＰＡ蓄積量について表２の結果を得
た。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）稚魚用飼料としての生物を培養するに当たり、そ
の生物のエサとしてエイコサペンタエン酸産生細菌の生
菌又は死菌を与えることを特徴とする当該生物の培養方
法。
（２）エイコサペンタエン酸産生細菌がシュードモナス
￥（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）￥属、アルテロモナス￥
（Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ）￥属、又はシーワネラ￥（
Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ）￥属に属する細菌である請求項
（１）記載の培養方法。
（３）生物がシオミズツボワムシ、アルテミア又は原虫
動物である請求項（１）記載の培養方法。