JPH02289253A - 天然物質中の外被のないウイルスの不活性化用組成物及びその製造方法 - Google Patents
天然物質中の外被のないウイルスの不活性化用組成物及びその製造方法Info
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- JPH02289253A JPH02289253A JP2000366A JP36690A JPH02289253A JP H02289253 A JPH02289253 A JP H02289253A JP 2000366 A JP2000366 A JP 2000366A JP 36690 A JP36690 A JP 36690A JP H02289253 A JPH02289253 A JP H02289253A
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- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
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- A61L2/16—Disinfection or sterilisation of materials or objects, in general; Accessories therefor using chemical substances
- A61L2/18—Liquid substances
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、ウィルスが被膜されているか（ｃｏａｔｅｄ
）いないかにかかわらず、無ウィルス天然物質を製造す
るための方法に関する。
）いないかにかかわらず、無ウィルス天然物質を製造す
るための方法に関する。
周知のようにクロロホルム又はフレオンのようなハロゲ
ン化炭化水素を使用する脂質抽出は、被膜を破壊するこ
とにより被膜された（ｃｏａｔｅｄ）ウィルスを不活性
化する（ヨーロッパ特許第０１１１５４９号）。被膜さ
れていないウィルスは、従来、多くの有機溶媒に耐性で
あると考えられており、したがって、例えば臓器抽出物
及びホールモン製造のような人について非経口的に使用
する天然物質などの生物由来の物質の汚染源となる。
ン化炭化水素を使用する脂質抽出は、被膜を破壊するこ
とにより被膜された（ｃｏａｔｅｄ）ウィルスを不活性
化する（ヨーロッパ特許第０１１１５４９号）。被膜さ
れていないウィルスは、従来、多くの有機溶媒に耐性で
あると考えられており、したがって、例えば臓器抽出物
及びホールモン製造のような人について非経口的に使用
する天然物質などの生物由来の物質の汚染源となる。
ブライ（Ｅ、 Ｇ、 Ｂｌｉｇｈ）及びダイヤ−（Ｗ、
Ｊ、 Ｄｙｅｒ）は、クロロホルム、メタノール及び
水の混合物を使用して脂質抽出を行う方法を述べている
（ｃｆ、 Ｃａｎ。
Ｊ、 Ｄｙｅｒ）は、クロロホルム、メタノール及び
水の混合物を使用して脂質抽出を行う方法を述べている
（ｃｆ、 Ｃａｎ。
Ｊ、バイオケム（Ｂｉｏｃｈｅｍ）、フィシオル（Ｐｈ
ｙｓｉｏｌ）Ｖｏｌ、３７． ９１１〜９１７頁（１９
５９） ）。組織に含まれろ水と単一相混合物を生成す
るクロロホルム及びメタノールの混合物と組織が均一化
されるならば最適条件の脂質抽出が達成される。次いで
、このホモシュネートは水及び／又はクロロホルムによ
って希釈することができ、これにより二相系が形成され
、このうちクロロホルム相は脂質を含み、メタノール／
水相は非脂質物質を含む。この研究の報告には、ウィル
ス、特に被膜されていないウィルスの不活性化について
何も記載されていない。
ｙｓｉｏｌ）Ｖｏｌ、３７． ９１１〜９１７頁（１９
５９） ）。組織に含まれろ水と単一相混合物を生成す
るクロロホルム及びメタノールの混合物と組織が均一化
されるならば最適条件の脂質抽出が達成される。次いで
、このホモシュネートは水及び／又はクロロホルムによ
って希釈することができ、これにより二相系が形成され
、このうちクロロホルム相は脂質を含み、メタノール／
水相は非脂質物質を含む。この研究の報告には、ウィル
ス、特に被膜されていないウィルスの不活性化について
何も記載されていない。
驚くべきことに、次の所見が見い出された。つまり、ク
ロロホルムのようなハロゲンを含む脂肪族炭化水素及び
メタノールのようなアルコールに対して耐性を有する被
膜されていないウィルスが、ハロゲンを含む脂肪族炭化
水素及び炭素数が６までのアルコールより成る混合物に
よって死滅され、又は不活性化されることである。好ま
しくは、クロロホルム及びエタノール及び／又はプロパ
ノール及び／又はブタノールの水を加え又は加えない混
合物、特にクロロホルムとメタノールの混合物がこの目
的のために好適であることが立証されている。メタノー
ル／クロロホルム／水の混合物が、好ましくは３相を形
成した場合において、特に秀れた結果が得られた。
ロロホルムのようなハロゲンを含む脂肪族炭化水素及び
メタノールのようなアルコールに対して耐性を有する被
膜されていないウィルスが、ハロゲンを含む脂肪族炭化
水素及び炭素数が６までのアルコールより成る混合物に
よって死滅され、又は不活性化されることである。好ま
しくは、クロロホルム及びエタノール及び／又はプロパ
ノール及び／又はブタノールの水を加え又は加えない混
合物、特にクロロホルムとメタノールの混合物がこの目
的のために好適であることが立証されている。メタノー
ル／クロロホルム／水の混合物が、好ましくは３相を形
成した場合において、特に秀れた結果が得られた。
ハロゲンを含む脂肪族炭化水素の例には、１゜２−ジク
ロロエタン、１，１−ジクロロブタン、１．１．１−１
リクロロエタン及びトリクロロエチレンが含まれるが、
特にクロロホルムが優れており、一方アルコールの例に
はエタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−
ブタノール、ｎ−ヘキサノールが含まれるが特にメタノ
ールか優れている。次に三相が得られるならば、水を加
えることが特に有用である。
ロロエタン、１，１−ジクロロブタン、１．１．１−１
リクロロエタン及びトリクロロエチレンが含まれるが、
特にクロロホルムが優れており、一方アルコールの例に
はエタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−
ブタノール、ｎ−ヘキサノールが含まれるが特にメタノ
ールか優れている。次に三相が得られるならば、水を加
えることが特に有用である。
一般にウィルスは、ハロゲンを含む脂肪族溶媒及びアル
コール、任意的に水より成る混合物、例えば、水又は生
理食塩水、クロロホルム又はメタノールから成る混合物
中において又はとともに問題の基体又は材料を均質化し
、又は溶解し、又は単に処理することにより不活性化さ
せ又は死滅させ゛ることができ、該混合物は一り０℃〜
１０℃程度の低温で約１〜３時間貯蔵したものである。
コール、任意的に水より成る混合物、例えば、水又は生
理食塩水、クロロホルム又はメタノールから成る混合物
中において又はとともに問題の基体又は材料を均質化し
、又は溶解し、又は単に処理することにより不活性化さ
せ又は死滅させ゛ることができ、該混合物は一り０℃〜
１０℃程度の低温で約１〜３時間貯蔵したものである。
特に有効なのは、生理食塩ｌ容量部、クロロホルム１、
１容量部及びメタノール２．２容量部からなる均一相中
において該材料を処理又は溶解し、例えば２時間の処理
時間経過後、さらに生理食塩水１容１部及びクロロホル
ム１． Ｉ容量部を加えることである。その後、分離に
より２相となる。これらの水相又は有機相において、被
膜され又は被膜されないウィルスであるなしに関係なく
、いかなるウィルス活性も検出されなかった。
１容量部及びメタノール２．２容量部からなる均一相中
において該材料を処理又は溶解し、例えば２時間の処理
時間経過後、さらに生理食塩水１容１部及びクロロホル
ム１． Ｉ容量部を加えることである。その後、分離に
より２相となる。これらの水相又は有機相において、被
膜され又は被膜されないウィルスであるなしに関係なく
、いかなるウィルス活性も検出されなかった。
このように発見された無ウィルス天然物質の製造方法は
、人又は動物に使用することができるすべての天然の原
料の処理に使用することができる。
、人又は動物に使用することができるすべての天然の原
料の処理に使用することができる。
当該方法は脂質抽出材料のみならず、例えば水相にもウ
ィルス活性がないことから、単に溶媒耐性の物質にも使
用することができる。
ィルス活性がないことから、単に溶媒耐性の物質にも使
用することができる。
本発明ｊこ係る方法の適用性を実施例により具体的に示
す。この実施例は界面活性物質５Ｆ−Ｒ１１に関するも
のであって、獣医によって切除された健康な牛の肺を洗
浄しそれにより、例えばクロロホルムのような有機溶媒
と組み合せた生理食塩水により肺胞を洗浄することによ
り調製したものである。５Ｆ−ＲＩＩはリン脂質（約９
０重量％）、コレステロール（約３重量％）、グリセラ
イド（約４重量％）、脂肪酸（約０．３重量％）及びタ
イプＢ及びＣの界面活性物質と結合したタンパク質（約
１重量％）から成る混合物である。
す。この実施例は界面活性物質５Ｆ−Ｒ１１に関するも
のであって、獣医によって切除された健康な牛の肺を洗
浄しそれにより、例えばクロロホルムのような有機溶媒
と組み合せた生理食塩水により肺胞を洗浄することによ
り調製したものである。５Ｆ−ＲＩＩはリン脂質（約９
０重量％）、コレステロール（約３重量％）、グリセラ
イド（約４重量％）、脂肪酸（約０．３重量％）及びタ
イプＢ及びＣの界面活性物質と結合したタンパク質（約
１重量％）から成る混合物である。
般に牛の肺は牛特異性ウィルスによって汚染されていな
いが、全く汚染されないものではない。し。
いが、全く汚染されないものではない。し。
かじながら、本発明に係る方法の有効性を試験できるよ
うにするために、被膜された試験用ウィルス（この場合
、牛ヘルペスウイルスータイプエ、これをＢＨＶＩと略
称する。）及び被膜されていない試験用ウィルス（この
場合、Ｉｎ５ｔｉＬｕｔｅ ｏｆ１／ｌｒｏｌｏｇｙ
ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｆａｃ
ｕｌＬｙ 、ジエツセン（Ｇｉｅｓｓｅｎ）大学のＬＣ
Ｒ−４種、ＥＣＢＯウィルス）が、分離試験で遠心分離
により得られた粗製の界面活性物質に加えた。これらの
試験用ウィルスは多くの牛に存在する被膜されたウイル
スの代表例であり、また牛に比較的稀に見い出される被
膜されていないウィルスの代表例である。
うにするために、被膜された試験用ウィルス（この場合
、牛ヘルペスウイルスータイプエ、これをＢＨＶＩと略
称する。）及び被膜されていない試験用ウィルス（この
場合、Ｉｎ５ｔｉＬｕｔｅ ｏｆ１／ｌｒｏｌｏｇｙ
ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｆａｃ
ｕｌＬｙ 、ジエツセン（Ｇｉｅｓｓｅｎ）大学のＬＣ
Ｒ−４種、ＥＣＢＯウィルス）が、分離試験で遠心分離
により得られた粗製の界面活性物質に加えた。これらの
試験用ウィルスは多くの牛に存在する被膜されたウイル
スの代表例であり、また牛に比較的稀に見い出される被
膜されていないウィルスの代表例である。
牛の群れは、例えば、牛呼吸器合胞体性ウィルス（パラ
ミクソウィルス）、感染性牛鼻気管炎（ヘルペスウィル
ス）、バラインフルエンザ（パラミクソウィルス）、並
びに牛白血病性貧血（レトロウィルス）、口蹄疫（ピコ
ルナウィルス）又は狂犬病（ラブドウィルス）に感染さ
れていることがある。界面活性物質の汚染を調べるため
には、すべての感染可能性のあるウィルスについて検査
しなければならない。これはほとんど不可能なので、試
料として使用する選ばれた試験用ウィルスを処置前に試
験材料に加え、次いで本発明に係る方法により不活性化
した後、再びウィルス活性を試験した。
ミクソウィルス）、感染性牛鼻気管炎（ヘルペスウィル
ス）、バラインフルエンザ（パラミクソウィルス）、並
びに牛白血病性貧血（レトロウィルス）、口蹄疫（ピコ
ルナウィルス）又は狂犬病（ラブドウィルス）に感染さ
れていることがある。界面活性物質の汚染を調べるため
には、すべての感染可能性のあるウィルスについて検査
しなければならない。これはほとんど不可能なので、試
料として使用する選ばれた試験用ウィルスを処置前に試
験材料に加え、次いで本発明に係る方法により不活性化
した後、再びウィルス活性を試験した。
使用された試験用ウィルス：
ａ）牛の群に存在する被膜されたＤＮＡウィルスｂ）
被膜されていないＲＮＡウィルスすでに述べたように、
使用されたＤＮＡウィルスはＢＨＶＩ（又１；ＬＩＪ３
Ｒ−ＩＰＶ）’ｙイルスであって、リポタンパク被膜を
有し、クロロホルム及びエーテルの存在下では不安定で
あり、完全に牛由来であって、子牛の群に広まっている
ものである。ピリオン（成熟ウィルス粒子）の直重は１
５０〜１８０ｎｍであり、滅菌濾過で除去することはで
きない。
被膜されていないＲＮＡウィルスすでに述べたように、
使用されたＤＮＡウィルスはＢＨＶＩ（又１；ＬＩＪ３
Ｒ−ＩＰＶ）’ｙイルスであって、リポタンパク被膜を
有し、クロロホルム及びエーテルの存在下では不安定で
あり、完全に牛由来であって、子牛の群に広まっている
ものである。ピリオン（成熟ウィルス粒子）の直重は１
５０〜１８０ｎｍであり、滅菌濾過で除去することはで
きない。
また使用されたＲＮＡウィルスは前記のＥＣＢＯウィル
スで、化学殺菌試験の見地からＤＶＧ （ドイツ獣医学
協会）の公式試験種として選ばれたものであって、属は
エンテロウィルス属、科（ｆａｍｉ ｌｙ）はピコルナ
ウィルス科、単鎖ＲＮＡウィルスで被膜はなく立体カプ
シド（ｃｕｂｉｃ ｃａｐｓｉｄ）であって、クロロホ
ルムの存在下で安定な直径２４〜３０ｎｍのものである
。
スで、化学殺菌試験の見地からＤＶＧ （ドイツ獣医学
協会）の公式試験種として選ばれたものであって、属は
エンテロウィルス属、科（ｆａｍｉ ｌｙ）はピコルナ
ウィルス科、単鎖ＲＮＡウィルスで被膜はなく立体カプ
シド（ｃｕｂｉｃ ｃａｐｓｉｄ）であって、クロロホ
ルムの存在下で安定な直径２４〜３０ｎｍのものである
。
試験用ウィルスはｌ Ｏ’ＴＣＩＤｓｏ／ｍｊ’ （Ｂ
ＨＶ−１）又は１０＠”ＴＣＩＤｓｏ／ｍ１の培養上清
として得られたものを使用した（ＴＣＩＤｓ。は組織培
養におけるウィルスの感染量であって、細胞の５０％が
ウィルス感染していることを意味する。）。濾紙は使用
前に加熱減菌した。
ＨＶ−１）又は１０＠”ＴＣＩＤｓｏ／ｍ１の培養上清
として得られたものを使用した（ＴＣＩＤｓ。は組織培
養におけるウィルスの感染量であって、細胞の５０％が
ウィルス感染していることを意味する。）。濾紙は使用
前に加熱減菌した。
確認試験（実施例２）は、両試験用ウィルスの調製と分
けかつ並行して行なわれた。調製過程の計画は、試験用
ウィルスの添加及び試料の取り出しを牛の肺を洗浄し、
粗製界面活性物質を製造することとの関連において、実
施例１に示した。
けかつ並行して行なわれた。調製過程の計画は、試験用
ウィルスの添加及び試料の取り出しを牛の肺を洗浄し、
粗製界面活性物質を製造することとの関連において、実
施例１に示した。
実施例１
陽性のコントロールとして、ウィルス培養上清を生理食
塩水（９ｇ／ｌ）と１：１で混合した（試料１）。０．
２２μｍの濾紙で濾過した後、試料１ａを取った。この
試料を実際に試験される汚染された出発材料に入れた。
塩水（９ｇ／ｌ）と１：１で混合した（試料１）。０．
２２μｍの濾紙で濾過した後、試料１ａを取った。この
試料を実際に試験される汚染された出発材料に入れた。
これは、もとの界面活性物質の粒子が細菌よりも大きく
、その結果濾紙をつまらせてしまうためもとの界面活性
物質は滅菌濾過できないからである。
、その結果濾紙をつまらせてしまうためもとの界面活性
物質は滅菌濾過できないからである。
粗製界面活性物質は遠心分離によって生柿の洗液から得
られる。得られた湿性ペレットは界面活性物質の他に細
胞残渣及び細菌を含む。この点に関し、湿性界面活性物
質ペレット２３ｍｊ！が製造過程から得られ、このペレ
ットをウィルスを含む培養上清２ａｍｎ中で懸濁した。
られる。得られた湿性ペレットは界面活性物質の他に細
胞残渣及び細菌を含む。この点に関し、湿性界面活性物
質ペレット２３ｍｊ！が製造過程から得られ、このペレ
ットをウィルスを含む培養上清２ａｍｎ中で懸濁した。
この汚染された界面活性物質懸濁液を、ブライ及びダイ
ア（Ｂｌｉｇｈ ａｎｄ Ｄｙｅｒ）の方法により抽出
した。この抽出を行うため、クロロホルム５０．６ｍｌ
及びメタノール１０１．２ｍｊ＋を加え、均一化した有
機物−水混合相を作り、好ましくは−１０〜−２０°Ｃ
の冷所において２時間貯蔵した。形成されたタンパク質
沈殿を遠心分離により除いた。
ア（Ｂｌｉｇｈ ａｎｄ Ｄｙｅｒ）の方法により抽出
した。この抽出を行うため、クロロホルム５０．６ｍｌ
及びメタノール１０１．２ｍｊ＋を加え、均一化した有
機物−水混合相を作り、好ましくは−１０〜−２０°Ｃ
の冷所において２時間貯蔵した。形成されたタンパク質
沈殿を遠心分離により除いた。
生理食塩水（９ｇ／Ｉり４６ｍｊ’及びクロロホルム５
０．６ｍｆを加えた後、相分離が生じた。水相を分は取
って、０．２２μｍ膜濾紙を通して滅菌濾過した（試料
２）。有機相も同様に０．２２μｍ濾紙を通して滅菌濾
過した。該溶媒を真空中（ｉｎｖａｃｕｏ） １０℃で
蒸留して取り除き、脂質を常温で乾燥した。蒸留水０．
９５ｍ１を乾燥脂質５０ｍｇに加えた。約１０分間農産
することにより、約１． ＯＯＯｎｍの小胞サイズを有
する脂質体が得られた（試料３）。若干の脂質体試料に
出力２０ｗａｔＬの超音波（ブロンソン ソニフィア１
ミクロチップ、（Ｂｒａｎｓｏｎ ５ｏｎｉｆｉｅｒ
、Ｍｉｃｒｏｔｉｐ） ）を４分間当て衝撃を加えた。
０．６ｍｆを加えた後、相分離が生じた。水相を分は取
って、０．２２μｍ膜濾紙を通して滅菌濾過した（試料
２）。有機相も同様に０．２２μｍ濾紙を通して滅菌濾
過した。該溶媒を真空中（ｉｎｖａｃｕｏ） １０℃で
蒸留して取り除き、脂質を常温で乾燥した。蒸留水０．
９５ｍ１を乾燥脂質５０ｍｇに加えた。約１０分間農産
することにより、約１． ＯＯＯｎｍの小胞サイズを有
する脂質体が得られた（試料３）。若干の脂質体試料に
出力２０ｗａｔＬの超音波（ブロンソン ソニフィア１
ミクロチップ、（Ｂｒａｎｓｏｎ ５ｏｎｉｆｉｅｒ
、Ｍｉｃｒｏｔｉｐ） ）を４分間当て衝撃を加えた。
測定値 ２００ｎｍの小胞体が形成された（試料４）。
実施例２
発見されたウィルス破壊の原理を確認するため、個別的
な方法の効果を十分に研究した。
な方法の効果を十分に研究した。
ウィルス（ＥＣＢＯウィルス）を含む培養上清４＋＋＋
４７を生理食塩水（９ｇ／ｆ）４ｍＩ！と混合し、滅菌
濾過した（試料１）。
４７を生理食塩水（９ｇ／ｆ）４ｍＩ！と混合し、滅菌
濾過した（試料１）。
ウィルス（ＥＣＢＯウィルス）懸濁液５−をクロロホル
ム１ｍｊ７と農産した。水相は分別され、滅菌濾過され
た（試料２）。
ム１ｍｊ７と農産した。水相は分別され、滅菌濾過され
た（試料２）。
ウィルス（ＥＣＢＯウィルス）懸濁液５＋ｏｆをメタノ
ール０．５ｍｊ！と混合し、滅菌濾過した（試料３）。
ール０．５ｍｊ！と混合し、滅菌濾過した（試料３）。
ウィルス（ＥＣＢＯウィルス）懸濁液５ｍｆをメタノー
ル１１ａ＋Ａ及びクロロホルム５．５ｍｌと混合して均
一相を作った。生理食塩水（９ｇ／ｌ）５ｍｌとクロロ
ホルム５．５ｍｌを加えることにより相分離させた。水
相を滅菌濾過した（試料４）。
ル１１ａ＋Ａ及びクロロホルム５．５ｍｌと混合して均
一相を作った。生理食塩水（９ｇ／ｌ）５ｍｌとクロロ
ホルム５．５ｍｌを加えることにより相分離させた。水
相を滅菌濾過した（試料４）。
５Ｆ−Ｒ１１脂質ｉｇをウィルス（ＥＣＢＯウィルス）
！！！Ｉ濁液とメタノール１１ｍＡ及びクロロホルム５
．５ｍｌとの混合液に溶かした。生理食塩水（９ｇ／ｊ
’）５ｍｌ＋及びクロロホルム５．５ ｍｌを加えた後
、相分離が起った。水相を分別し、滅菌濾過した（試料
５）。
！！！Ｉ濁液とメタノール１１ｍＡ及びクロロホルム５
．５ｍｌとの混合液に溶かした。生理食塩水（９ｇ／ｊ
’）５ｍｌ＋及びクロロホルム５．５ ｍｌを加えた後
、相分離が起った。水相を分別し、滅菌濾過した（試料
５）。
すべての試料を、吸収法及び培養培地に接種することに
よりＭＤＢＫ細胞培養（ナディン及びバーバイ、ホビン
キドニイ（Ｎａｄｉｎ ａｎｄＤａｄｉｎ、Ｂｏｂｉｎ
Ｋｉｄｎｅｙ） ＡＴＣＣ−ＣＣＬ ２２）により調
べた。すべての試料（１（ｌａ）は除く）は、それらの
細胞毒特性を明らかにするため数回の亜継代接種をした
後、ＢＨＶＩ又はＥＣＢＯウィルス特異性変化について
のみ試験を行なった。
よりＭＤＢＫ細胞培養（ナディン及びバーバイ、ホビン
キドニイ（Ｎａｄｉｎ ａｎｄＤａｄｉｎ、Ｂｏｂｉｎ
Ｋｉｄｎｅｙ） ＡＴＣＣ−ＣＣＬ ２２）により調
べた。すべての試料（１（ｌａ）は除く）は、それらの
細胞毒特性を明らかにするため数回の亜継代接種をした
後、ＢＨＶＩ又はＥＣＢＯウィルス特異性変化について
のみ試験を行なった。
粗製の界面活性物質材料を培養上清（１０５及び１０
＠ＳＴ ＣＩ Ｄ ｈａ／ｍＡ’ ）と１：ｌで混合す
ることにより、出発材料の高度な汚染をシュミレートし
た。使用したウィルスについての試験の限度は約１０Ｔ
ｃＩＤｓ。／ｍｌであった。被膜されたＢＨＶ−１ウイ
ルス又は被膜されていないＥＣＢＯウィルスは実施例１
に従ってわずかに試料１及び１ａにおいて検出すること
ができた。試料３及び４（実施例１）においては、試験
用ウィルスは検出されず、この両試料は時間の異なる製
造方法からの除去をシュミテートしたものである。実施
例１の研究はブライ及びダイヤ−の抽出方法においてさ
え加えられたウィルスを不活性化し又は除去することを
示している。試験用ウィルスは水相（試料２）又は有機
相からの乾燥塊（試料３及び４）からも検出されなかっ
た。
＠ＳＴ ＣＩ Ｄ ｈａ／ｍＡ’ ）と１：ｌで混合す
ることにより、出発材料の高度な汚染をシュミレートし
た。使用したウィルスについての試験の限度は約１０Ｔ
ｃＩＤｓ。／ｍｌであった。被膜されたＢＨＶ−１ウイ
ルス又は被膜されていないＥＣＢＯウィルスは実施例１
に従ってわずかに試料１及び１ａにおいて検出すること
ができた。試料３及び４（実施例１）においては、試験
用ウィルスは検出されず、この両試料は時間の異なる製
造方法からの除去をシュミテートしたものである。実施
例１の研究はブライ及びダイヤ−の抽出方法においてさ
え加えられたウィルスを不活性化し又は除去することを
示している。試験用ウィルスは水相（試料２）又は有機
相からの乾燥塊（試料３及び４）からも検出されなかっ
た。
このような発見は、被膜されクロロホルム感受性のＢＨ
Ｖ−１の場合は予想されたが、被膜されていないＥＣＢ
Ｏウィルスに関しては予知できるものではなかった。
Ｖ−１の場合は予想されたが、被膜されていないＥＣＢ
Ｏウィルスに関しては予知できるものではなかった。
ウィルスを不活性化するステップを指摘し、確認するた
めに、クロロホルム、メタノール、メタノール／クロロ
ホルム／生理食塩水及びクロロホルム／メタノール／生
理食塩水５Ｆ−ＲＩＬにＥＣＢＯウィルスを実施例２に
従ρて混合した。ＥＣＢＯウィルスの細胞病原性効果が
、陽性コントロール及びクロロホルム又はメタノールと
混合した試料（試料１〜３）において検出された。他方
、試料４及び５はＭＤＢＫ細胞培養においてウィルス特
有の効果は見られなかった。
めに、クロロホルム、メタノール、メタノール／クロロ
ホルム／生理食塩水及びクロロホルム／メタノール／生
理食塩水５Ｆ−ＲＩＬにＥＣＢＯウィルスを実施例２に
従ρて混合した。ＥＣＢＯウィルスの細胞病原性効果が
、陽性コントロール及びクロロホルム又はメタノールと
混合した試料（試料１〜３）において検出された。他方
、試料４及び５はＭＤＢＫ細胞培養においてウィルス特
有の効果は見られなかった。
この結果は、有機溶媒であるクロロホルム又はメタノー
ルそれ自体でＥＣＢＯウィルスを不活性化することはな
く、またそれは試験結果に影響を与えるものでもない。
ルそれ自体でＥＣＢＯウィルスを不活性化することはな
く、またそれは試験結果に影響を与えるものでもない。
クロロホルム及びメタノールの作用のみ（この場合、均
一な有機−水混合相において）被膜のない試験用ウィル
スを不活性化させる。
一な有機−水混合相において）被膜のない試験用ウィル
スを不活性化させる。
この試験モデルによって明らかにされるように、本発明
に係る方法は、一般にウィルスを死滅させ又は不活性化
させるために好適であ一す、特に有機物製造における被
膜されていないウィルスに対し好適である。
に係る方法は、一般にウィルスを死滅させ又は不活性化
させるために好適であ一す、特に有機物製造における被
膜されていないウィルスに対し好適である。
Claims (6)
- （１）ハロゲンを含む脂肪族炭化水素及び炭素数６まで
のアルコールの混合物によって処理することを特徴とす
る、特に原料が被膜されていないウィルスを含む場合の
、無ウィルス天然物質の製造方法。 - （２）クロロホルム及びメタノール及び／又はエタノー
ル及び／又はプロパノール及び／又はブタノールの混合
物を使用する請求項（１）記載の方法。 - （３）メタノール−クロロホルム混合物を使用する請求
項（１）又は（２）記載の方法。 - （４）使用する混合物にさらに水を加える請求項（１）
〜（３）のいずれか１項に記載の方法。 - （５）クロロホルム、メタノール及び水からなる三相を
使用する請求項（４）記載の方法。 - （６）水の代りに生理食塩水を使用する請求項（４）又
は（５）記載の方法。
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| DE3900350A DE3900350A1 (de) | 1989-01-07 | 1989-01-07 | Verfahren zur herstellung virusfreier naturstoffe |
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|---|---|
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|---|---|
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