JPH02295480A - グルタチオン高含有酵母及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はサツ力ロミセス属に属する酵母より亜鉛イオン
耐性を獲得した変異株を好気的に培養し、該菌体中に蓄
量のグルタチオンを生成蓄積する酵母の製造方法及びグ
ルタチオン高含有酵母に関するものである。

グルタチオンは、肝臓機能回復作用や解毒作用などの生
理作用を有する。また、ごく味増強物質等として食品に
も利用される． 〔従来技術〕 グルタチオンの工業的製造法としては、合成法、及びバ
ン酵母・ビール酵母菌体からの抽出法が採用されている
。しかし、合成法によるときはＤＬ−グルタチオンが生
成する為生理的に有効なＬ一体の精製に複雑な工程を要
する。一方酵母菌体からの抽出法によるときは、所望の
Ｌ一体のみが得られる特徴がる。

酵母菌体からの抽出法によるグルクチオン生成において
は、亜鉛イオン制限下でグルタチオン生成蓄積量が著し
く増加したことが知られていた（特公昭５２−８３９７
号）。しかし、工業的には、培地由来の亜鉛イオン含量
が一定でない為に当該イオンの制御が難しく、グルタチ
オンの安定的な製造法が困難であった。

〔本発明が解決しようとする課題〕

本発明の目的は、グルタチオン生成培地中の亜鉛イオン
を制御することなく、このグルタチオンを発酵工業的に
安価かつ安定的に製造する方法に関するものである。

（課題を解決する為の手段〕 本発明者らは、亜鉛イオンの制限範囲を拡大すべくサ・
７カロミセス属に属する酵母の亜鉛耐性を有する変異株
及び突然変異により亜鉛耐性を有する変異株が培地や培
養条件による影響を大幅に改善し安定したグルタチオン
生成蓄積し得ることを見い出し、本発明を完成するに至
った。

すなわち、本発明は、グルタチオンを生産する能力を有
するサノ力ロミセス属の酵母より亜鉛イオン耐性を獲得
した変異株を培養し、グルタチオンを生成蓄積せしめる
ことを特徴とするグルタチオン高含有酵母の製造方法、
及び上記方法で製造されたグルタチオン高含有酵母に関
するものである。

以下に本発明を更に詳細に説明する。まずサソ力ロミセ
ス・セレビシエＡＪ−４　０　０　５　（　ＦＥＲＭＰ
−１８５９）を用いてこれを紫外線，エチルメタンスル
ホネートニト口ソグアニジン，Ｘ線等の突然変異剤によ
り変異させた酵母菌、または無変異の酵母菌を、ディフ
コ製バクトＹＭ寒天培地に亜鉛イオンとして２０〜１０
０ｐｐｍ含んだ培地で２６〜３０゜ｃ，　　２日間培養
し、生育した酵母菌を分離する。この際に使用する亜鉛
化合物としては、例えば硫酸亜鉛，酢酸亜鉛，塩化亜鉛
，乳酸亜鉛，燐酸亜鉛，ステアリン酸亜鉛等が用いられ
る。

本発明において使用する菌株は、サソカロミセス属酵母
で亜鉛イオン耐性を有する変異株のうち、親株に比して
蓄量のグルタチオン生成蓄積することができる変異株で
あり、例えばサソカロミセス・セレビシエＡ　Ｊ　−１
４６５２　　（ＦＥＲＭ　Ｐ−１０６９２）などがある
。

上記の如くグルタチオン生産能を有する微生物について
、亜鉛イオン含有量を第１表の如く変化せしめた培地で
培養したときの酵母の生育量を第１表に例示する。

第１表から明らかな如く、該菌Ａ　Ｊ−１４６５２は亜
鉛イオンに対して耐性であることが判る。

第　　１　　表 次に、前述したグルタチオン生産能を有する微生物につ
いて、亜鉛イオン含有量を第２表の如く変化せしめた培
地で培養したときの菌体抽出液のグルタチオン生成量を
第２表に例示する。第２表から明らかな如く、グルタチ
オンの生成量に関しても問題ないことが判る。

第２表 ？験条件：グルコース３％、ＫＩ１２Ｐ０．　　０．　
１　５％，ＭｇＳＯ４・７１１ｚ０　　０．　０　５％
，尿素０．３％，　　ＣａＣｊ２ｚ２１１■００．０５
％，ビオチン５０γ／ｌ，綜合アミノ酸０．２％及びビ
タミン混液１．Ｏｍ６／ｄｆｆを含有する培地をｐＨ６
．０に調整しその培地２０ｍｊ！を５００ｍｊ！振盪フ
ラスコに分注した后この培地に上記各菌株を接種し、３
０℃にて３０時間振盪培養した。生育は、培養ブロスを
２６倍希釈し平間式光電比色計を用いて５６２ｎｍにお
ける吸光度（ＯＤＳ６２）で測定される。

実験条件：グルコ−ス３％、κＩ１２ＰＯ４　　０．　
１　５　％，ＭｇＳＯ＜　　・７１ｈ８　　０．　０　
５％，尿素０．　３％，　　ＣａＣｌ，２Ｈ２０　　０
．　０　５％，ビオチン５０ｒ／ｌ，綜合アミノ酸０．
２％及びビタミン混液１．Ｏｍｌ／ｄ／を含有する培地
をｐＨ６．０に調整しこの培地２０ｍ７！を５００ｍｊ
２振盪フラスコに分注した后この培地に上記各菌株を接
種し、３０℃にて３０時間振盪培養した。菌体抽出液グ
ルタチオン生成量の測定は、液体クロマトグラフィーに
よる。

本発明を実施するには、上記の如く、特別に亜鉛イオン
含量を限定した培地を用いることなく、グルタチオン生
産能を有する微生物を通常の炭素源，窒素源および微生
物の必要とする無機並びに有機栄養素を含有する培地を
用いればよい。

用いられる炭素源としては、グルコース，フラクトース
，澱粉加水分解物．糖密等の［質，グリセロール，エタ
ノール等のアルコール、酢酸．クエン酸，α−ケトグル
タール酸等の有機酸、また菌株によっては炭化水素を用
いてもよい。

培養は通常ρ１｛４〜８、温度２５〜３５℃にて好気的
に培養する。得られたグルタチオン高含有酵母は、医薬
・食品・機能性食品等に使用しても良い。更にグルタチ
オンの単離は、必要に応じて行なうことができる。

グルタチオンの単離法は、常法を用いれば良い．例えば
、菌体を遠心分離により集め、菌体のグルタチオン熱水
抽出処理やクロマト処理等を用いて単離することができ
る。

以下、本発明を実施例により具体的に説明する。

〔実施例〕

グルコース３％、ＫＨｚＰＯ＜　　ｏ．　１　５％、Ｍ
ｇＳＯ．７ｎｚｏ　　Ｏ．　０　５％，尿素０．　３％
，　　Ｃａ（Ｊ’　ｚ　　’　２ｔｈＯＯ．０５％，ビ
オチン５０γ／１，綜合アミノ酸０．２％およびビタミ
ン混液１，ＯｍＡ／ｄｊ２よりなる種培地を調製し、Ｎ
ａＯＩＩにてｐｌ＋６．０に調整した後、５００ＩＩＩ
１振盪フラスコに５０Ｉｌｊ！宛分注した。

殺菌後、亜鉛イオン耐性を有しないＡ　Ｊ　−４００５
（ＦＥＲＭ　Ｐ−１８５９）、亜鉛イオン耐性を獲得し
たＡＪ−１４６５２　（ＦＥＲＭ　Ｐ−１０６９２）を
それぞれ接種し、３０℃にて２０時間振盪培養し、これ
を種菌液とした。この種菌液１５ｍｊ！を、グルコース
３％，ＫＩｂＰＯ４ｏ．　１　５％，　　ＭｇＳＯ．・
７１１２０　　０．０５％，ＣａＣ　ｌ　ｚ　・２ＨＪ
　Ｏ．０３％，　（ＮＨｔ）ｚｓＯ４　０．５％，ビオ
チン２０γ／ｌ，綜合アミノ酸０．２％，ビタミン混液
０．５　ｍ１／　ｄ　ｊｌ！，　ＦｅＳ０４１１１ｚｏ
　　Ｏ．０　０　１％，　ＭｎＳＯ　・４１１２０４　
０．００１％及び亜鉛イオン０．　２　ｐｐｍ又は８．
　３　ｐｐｍからなる本培養培地３００ｍｌに接種し、
通気Ｎ　Ｉ／４　　　Ｖ／Ｖ，ｍ　，撹拌数１　０　０
　０ｒｐｏ＋，３１℃にて２４時間培養した。培養中、
アンモニアガスを通してｐｌｌを５．０に制御した。こ
のときのグルタチオン生成量，菌体量等の結果を第３表
，第４表，第５表に示した。

第４表 第３表 第５表 〔発明の効果〕 本発明の亜鉛イオン耐性を有するサッヵロミセス属酵母
を用いれば、培地等に由来する亜鉛イオン含量の変動に
左右されることもなく安定的にグルタチオン高含有酵母
または著量のグルタチオンを取得できることが明らかで
ある。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）グルタチオンを生産する能力を有するサッカロミセ
   ス属の酵母より亜鉛イオン耐性を獲得した変異株を培養
   し、グルタチオンを生成蓄積せしめることを特徴とする
   グルタチオン高含有酵母の製造方法。 ２）請求項１記載の方法により製造されたグルタチオン
   高含有酵母。