JPH02295992A - リン脂質の精製方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 イ、産業上の利用分野 本発明はリン脂質の精製方法に関し、特に、ホスファチ
ジルイノシトール（以下、ＰＩと略すことがある。）を
含む粗製リン脂質より純度良くＰＩを安価にかつ収率良
く精製分離する方法に関するものである。

口、従来技術 ホスファチジン酸とイノシトールとのエステルであるホ
スファチジルイノシトール（ＰＩ）は医薬、化粧品、リ
ポソーム基材などの分野に利用されるものである。

従来、ＰＩが動物、植物、菌類に広く存在する事が知ら
れている。これらの起源から取出された粗製リン脂質に
は各種のリン脂質が混在して存在し、通常、ＰＩ濃度は
粗製リン脂質の数％〜１０％前後と低い。

粗製リン脂質からＰＩを分離精製するためにはこれ迄、
イオン交換樹脂、ケイ酸、アルミナカラムを用いたカラ
ムクロマト分離法が一般に行われている。しかし、この
方法は一度に少量のリン脂質しか処理出来ず、効率が悪
い。従って、この方法で精製され、研究試薬として現在
市販されているＰＩは極めて高価である。このため、本
来、天然に量的には多量のＰＩが存在しながら今日まだ
実用的に産業分野に供し得るには至っていない。

即ち、従来のカラムクロマト法によりＰＩの精製を行う
には、先ず、充填剤として用いるイオン交換樹脂、ケイ
酸、アルミナを活性化処理しなければならず、しかも、
充填剤に負荷しうる粗製リン脂質の量は、これまでの多
くの知験から充填剤乾燥重量当り精々１　／１００重量
程度に過ぎない。そして、吸着したリン脂質を溶出分離
精製するには、溶媒組成を複雑に変化させながら長時間
をかけて溶出しなければならず、工業的規模で考えた場
合、設備の大型化、処理効率の悪さから到底経済的な方
法とはなり得す、極めて大きな問題が解決されずに残さ
れている。

ハ１発明の目的 本発明の目的は、従来のカラムクロマト法とは異なり、
大量に、経済的に、短時間に、効率良くＰＩを精製分離
する工業的方法を提供することにある。

二６発明の構成及びその作用効果 即ち、本発明は、ホスファチジルイノシトールを含有づ
−る原料リン脂質からメタノールを用いて前記ホスファ
チジルイノシトールを特異的に抽出し、かつ回収するリ
ン脂質の精製方法に係るものである。

本発明者は、これまでに提案されているケイ酸、アルミ
ナ、イオン交換樹脂等を充填剤とするカラムクロマト法
によるＰＩ精製分離法について検討した結果、上述した
ようにカラムに負荷できるリン脂質量は極めて少なく、
効率の悪い方法である事が分かった。また、この方法の
別の欠点として、カラム溶出溶媒の一部に用いられる酢
酸や塩酸がその後の精製過程においてリン脂質の分解を
促進し、迅速に処理したとしても、得られる製品が低品
質化し易い等の問題のある事も分かった。これに対し、
本発明の方法によれば、カラムクロマト法とは異なり、
メタノールを抽出溶媒として用いることによって、意外
にも、リン脂質から極めて容易に大量のＰＩを精製分離
する事が出来るだけでなく、品質の低下を引き起こす事
なく分離精製できることが判明したのである。従って、
本発明の方法は経済的で工業的実用に供しうる方法であ
り、ＰＩの製造に大きな福音をもたらすものである。

本発明はＰＩ含有リン脂質からメタノールを用いてＰＩ
を特異的に抽出し、更にこの抽出液に必要に応じて、メ
タノール以外の溶媒を加え、若しくは濃縮、冷却してＰ
Ｉを特異的に沈澱させて分離回収するものである。本発
明は具体的には次の如くに実施されるのが望ましい。

即ち、ＰＩ含有リン脂質をメタノールを用いて抽出する
に際し、ＰＩを特異的に抽出し易くする為に、必要に応
じて次の様な前処理を行う事が望ましい。

前処理方法（１）： ＰＩ含有原料リン脂質をホスホリパーゼＤによって転移
反応させ、更にこの転移誘導リン脂質からＰＩを分離処
理すること。即ち、ホスファチジン酸転移能を有するホ
スホリパーゼＤを用いて、ＰＩ含有原料リン脂質と、転
移反応を可能にする受容体アルコール基とを転移反応す
る。この処理によって、ＰＩと溶媒溶解性が酷似するた
めにＰＩのメタノール抽出による精製効果を損なう原料
リン脂質成分、特にホスファチジルコリン（以下、ＰＣ
と略すことがある。）、ホスファチジルエタノールアミ
ン（以下、ＰＥと略すことがある。）を酵素変換により
、ＰＩとは異なる溶媒・溶解性のリン脂質誘導体に変換
したものを溶媒等を用いて分別処理した後、メタノール
を加えてＰＩを特異的に抽出する為の前処理方法。上記
のリン脂質誘導体はＰＣやＰＥに比べて溶媒に溶は易い
ので、抽出によってＰＩと分離可能である。

前処理方法（２）： ＰＩ含有原料リン脂質を前処理として吸着剤に吸着させ
ること。即ち、ＰＩ含有原料リン脂質を担体に吸着した
のち、メタノールを用いてＰＩを特異的に溶出させる為
の前処理方法。

上記の前処理方法（１）、（２）に加えて、リン脂質中
のＰＣはエタノールに溶解し易く、エタノールで十分処
理する事でもある程度原料リン脂質の前処理になりうる
。この処理だけでも、メタノールによる特異的ＰＩ油抽
出ある程度効果がみられるが、前記した前処理（１）、
（２）を行うことで更に精製効果を上げる事ができる。

また、上記した各前処理は、普通に入手しうるＰＩ含有
原料リン脂質からＰＩを効率良く精製する上で望ましい
予備操作であるが、これらの操作を行った場合に匹敵す
る同等程度の組成の原料リン脂質である場合には、上記
した前処理なしに直接メタノールを用いて抽出してもＰ
Ｉの精製分離効果を上げる事が出来る。

本発明で用いるＰＩ含有原料リン脂質としては、天然に
存在する植物、動物、微生物由来のリン脂質及びこれら
の硬化リン脂質が挙げられる。植物リン脂質の具体例と
しては例えば、大豆、菜種、綿実、コーン、アマニ、サ
フラワー、ひまわり、ピーナツ、米、麦芽、オリーブ等
に由来のリン脂質が例示できる。動物リン脂質の具体例
としては例えば、牛、豚、鼠等の脳、肝臓、魚類、オキ
アミ等に由来のリン脂質が例示できる。又、微生物とし
てはパン酵母等に由来のリン脂質が例示できる。これら
リン脂質の組成は大旨、ＰＣ，ＰＥを主体としてホスフ
ァチジン酸（ＰＡ）　、Ｐ　Ｉ、各種グリコホスホリビ
ッド等の如き１０種類前後のリン脂質を含有している場
合が多い。

前処理方法（１）で用いられるホスホリパーゼＤ（Ｐ　
Ｌ　−Ｄ）としては、微生物や植物、動物に由来のＰＬ
−Ｄが用いられてよい。微生物の生産するＰＬ−Ｄとし
て、アクチノマデューラ属としての例えば特開昭５８−
６７１８３に開示のＡｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ　５ｐｋ
３６２．微工研菌寄第６１３２号（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−
５１１）が例示できる。ノカルデイオプシス属として例
えば特公昭６３−６２１９５に開示のＮｏｃａｒｄｔｏ
ｐｓｉｓ　ｓｐ　Ｎｏ、７７９゜微工研菌寄第５１２号
（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−５１２）が例示できる。ストレプ
トマイセス属としては例えば特開昭５８−１５２４８１
に開示のＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　Ｓ　Ｐ。

ＡＡ　５８６．微工研菌寄第６１００号などの他、スト
レブトパーティシリューム属、キタザトスボラ属、ノカ
ルディヤ属、ミクロモノスポラ属等の放線菌の生産する
ＰＬ−Ｄを用いる事ができる。又、植物としては例えば
、キャベツ、はうれん草、ニンジン、カリフラワー、ピ
ーナツ、綿実等に存在するＰＬ−Ｄを例示として挙げる
事ができる。

前処理方法（１）において、原料リン脂質を転移反応さ
せる受容体アルコール化合物としては、転移反応を可能
にする限り何でも良いが、価格が安く、アルコール基へ
の転移率が高く、更に転移生成物の溶媒に対する性質が
ＰＩとは異なる転移物を生成するアルコール化合物がよ
り望ましい。そのような受容体アルコールとしては、１
級、２級のアルコール基を分子内に有する化合物に求め
る事が出来る。そのような中から例示として、例えば、
エタノール、ｎ−プロパツール、グリセロール、ソルビ
トール、フラクトース、グルコース、ポリエチレングリ
コール、セリン等の受容体アルコール化合物等を挙げる
事ができる。

転移反応においては、原料リン脂質と受容体アルコール
を適宜選択し、また反応溶媒は反応を阻害しない限り何
でも良いが、例えばエチルエーテルと水、又はジクロロ
メタンと水等を用いてＰＬ−Ｄの存在下に転移反応すれ
ば良い。転移反応において、原料リン脂質と受容体アル
コール化合物との転移反応条件は適宜選択して行えば良
く、特に制限はないが、例えば基質としては通常、リン
脂質：受容体アルコール＝１：（１〜１００×モル比）
、反応温度としては０〜５０°Ｃ，ＰＬ−Ｄとしては１
０〜１０００単位イリン脂質、反応時間６〜４８時間程
度の条件で反応すればよく、転移反応が達せられる限り
特に制限はない。

ＰＩ含有原料リン脂質に含まれるＰＣＳＰＥ以外のリン
脂質は現在知られるＰＬ−Ｄではほとんど転移反応基質
としては働かず、特にＰＩはほとんどそのままの状態で
残存する。転移生成物を含むリン脂質を分離回収した後
、転移生成物の溶解度とＰＩの溶解度のなるべく異なる
溶媒を用いてその一方を洗浄溶解して分別すれば良い。

その様な分別溶媒は分別効果のある溶媒である限り何で
も良いが、好ましい溶媒として例えばメタノール、エタ
ノール、プロパツール、イソプロパツール、ブタノール
等を例示できる。

前処理方法（２）で用いる担体としては、リン脂質を吸
着し、メタノールでＰＩを特異的に溶出でき活性炭等が
例示でき、有機性担体としては、例えばウレタン系樹脂
、アクリル系樹脂、スチレン系樹脂等の合成樹脂の他、
蛋白質、多糖類を例示できるが特にベントナイトが好ま
しい。

処理方法としては、リン脂質を溶媒、例えばエチルエー
テル、クロロホルムなどに約０．１〜５０％濃度に溶解
し、担体と混合、通過させる事で吸着できる。吸着した
リン脂質はそのまま若しくは溶媒除去後、メタノールを
用いてＰＩを特異的に溶出分離すればよい。

本発明において、ＰＩ抽出溶媒として用いるメタノール
は８０％以上、好ましくは９０％以上の純度のものであ
る事が望ましい。又、用いる量としては、特異的にＰＩ
精製分離ができる範囲であればよく、例えばリン脂質の
０．１〜１００００倍、好ましくは０．１〜１０００倍
を例示できる。抽出温度はリン脂質の融点、種類、濃度
、安定性等より決めれば良いが、普通は０〜６０°Ｃの
範囲で行う事が好ましい。

ＰＩ抽出溶液は濃縮してメタノール溶媒を除去して行き
、ＰＩ溶解度を下げて回収できる他、冷却して沈澱を析
出させるとか、ＰＩの溶解度を低下させる溶媒を添加し
てＰＩを沈澱させる事ができる。これらの操作により、
更に特異的にＰＩ濃度を高める事ができる。沈澱溶媒と
しては、目的が達せられる限りなんでも良いが、例えば
アセトン、イソプロパツール、ｔｅｒｔ−ブタノールな
どの溶媒を挙げる事ができる。

本発明の効果と利点は特に、前処理したリン脂質よりメ
タノールで特異的にＰＩを抽出分離し、濃縮、冷却、溶
媒沈澱等によりＰＩを特異的に分離精製するといった簡
単な方法であり、従来行っていたカラムクロマトでの精
製度を越える精製度と効率とで精製ＰＩを得ることがで
きることである６本発明は、カラムクロマト法とは異な
り、短時間に、品質を損なうおそれなく、回収率良く大
量にＰＩを分離精製することができ、工業的規模での実
施において、少ない設備費で済む事と併せて極めて高い
経済性の向上をもたらした。更に、本発明により、ＰＩ
の迅速な分離精製が極めて容易になった。精製したＰＩ
は医薬、化粧品、リポソーム基材等の新分野への利用が
できる。

ホ、実施例 以下、本発明を実施例、比較例をもって詳細に説明する
が、本発明はこれにより何等制限されるものではない。

尚、以下において、ホスホリパーゼＤの活性測定法とし
ては、特開昭６３−１２３３８９号公報記載の方法を用
いた。又、アクチノマデューラ属！！１３６２株および
ノカルデイオプシス属のホスホリパーゼＤは、特開昭５
９−１８７７９２号公報に記載された方法により培養及
び精製を行い、使用した。

さらに、ＰＩの純度は、イアトロスキャンにより求めた
。即ち、クロマロッドＳＩ［Ｉ（ヤトロン社製のシリカ
ゲルロッＦ″）にリン脂質の２％クロロホルム溶液１μ
ｌをスポットし、クロロホルム−メタノール−アンモニ
ア−水（５０：２０：０．４　　：　ＩＶ／Ｖ）を展開
溶媒として約１０ｃ１１展開し、イアトロスキャン（ヤ
トロン社製のイアトロスキャンＴＨ−１０）にかけ、ピ
ーク面積比からＰｌの純度を求めた。

ス】ｌ引り 大豆レシチンＳＬＰホワイト（ツルーレシチン工業社製
、ＰＩ含量８％）　　５００ｇ、ジエチルエーテル２５
００ｍ、グリセロールＩ（１００ｇ、　Ｎ　ａ　ＣＩ２
２００ｇ。

水２５００−にアクチノマデエーラ属のホスホリパーゼ
０２５０００単位を加え、３０°Ｃにて２４時間、転移
反応を行った。これによって、ＳＬＰホワイト中に含ま
れるホスファチジルコリン（ＰＣ）＆びホスファチジル
エタノールアミン（ＰＥ）をホスファチジルグリセロー
ル（ＰＧ）に変換した。反応後に静置し、ジエチルエー
テル層を分取し、これをエバポレーターにて濃縮乾固し
た後、２１のｎプロパツールを加え、５０°Ｃで１５分
攪拌し、しかる後、３０°Ｃに冷却して沈澱物を回収す
る操作を３回くり返してｎ−プロパツールに可溶のＰＧ
を除去し、沈澱物を減圧乾燥した。

こうして得られた前処理方法（１）のサンプル（前処理
サンプル（１））　　１００ｇをｌＯｌのメタノールに
懸濁し、３０℃にて２４時間、攪拌抽出を行った。抽出
液のＰＩ線純度５２％で、ＰＩの回収率は８１％であっ
た。沈澱物を遠心分離にて除去し、上清を５倍に′ａ縮
し、これにアセトン１０１を加え、生ずる沈澱物を回収
し、減圧乾燥し、精製ＰＩ−１を４０ｇ得た。この時の
ＰＩの純度は７５％で、原料のＳＬＰホワイトからのＰ
Ｉの回収率は７５％であった。

又、上記したと同様な方法により調製した前処理サンプ
ル（１）からのメタノール抽出液１０１を１０倍に濃縮
し、生ずる沈澱物を回収し、減圧乾燥し、精製ＰＩ−２
を３０ｇ得た。この時のＰＩの純度は７５％で、原料Ｓ
ＬＰホワイトからのＰＩの回収率は５７％であった。

さらに、上記したと同様な方法により調製した前処理サ
ンプル（１）からのメタノール抽出液１０ｆを５倍に濃
縮した後、−１５°Ｃに冷却し、２０時間放置し、生ず
る沈澱物を回収し、減圧乾燥し、精製ＰＩ−３を２９ｇ
得た。この時のＰＩの純度は７０％で、原料のＳＬＰホ
ワイトからのＰＩの回収率は５０％であった。

さらにまた、上記したと同様な方法により調製した前処
理サンプル（１）からのメタノール抽出液１０１を５倍
に濃縮した後、イソプロパツール３ｊ２を加え、生ずる
沈澱物を回収し、減圧乾燥し、精製ＰＩ−４を４０ｇ得
た。この時のＰＩ線純度７８％で、原料のＳＬＰホワイ
トからのＰＩの回収率は７８％であった。

これらの結果及び各段階でのリン脂質組成をまとめて第
１表に示した。

第１表 次に、上記の方法により得られた精製ＰＩ−１（純度７
５％）をＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）によ
りさらに精製した。すなわち、ＰＩｏ、１ｇをｌｌｌ１
１ノヘキサンーメタノール（２０：　Ｉ　Ｖ／Ｖ）に溶
解し、ＨＰＬＣのサンプルとした。カラムはラジアルパ
ックシリカ（８ＩＩＩＩ！！×１０ｃ１１、ウォーター
ズ社製）、溶媒はヘキサン−イソプロパノ−ルー水（８
：　７　：　０．８　Ｖ／Ｖ）、流速ＩＩｄ／ｌ１ｉｎ
テ、ピークの検出には２１４ｎａ＋のＵＶ検出器を用い
た。サンプルは５０μｌずつ２０回に分けて注入した。

ＰＩフラクションを分取し、濃縮乾固した時のＰＩの純
度は９７％で、ＰＩ回収率は７０％であった。

また、精製ＰＩの代わりに大豆レシチンＳ　Ｌ　Ｐホワ
イトを用いて上記と同様に行ったところ、Ｐ■線純度３
５％で、Ｐ１回収率は６５％となり、十分精製されなか
った。

実施■又 大豆レシチンＡ（日清製油社製、ＰＩ含量１３％）１０
０　ｇ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）４００を１
００ｇ、ジエチルエーテル５００１１Ｉｉ、ＮａＣｌ２
０ｇ。

水５００ｄにノカルデイオプシス属のホスホリパーゼ０
５０００単位を加え、３０゛Ｃにて２４時間、転移反応
を行い、ＬＰ−２０中に含まれるＰＣ及びＰＥをホスフ
ァチジルＰ　Ｅ　０４００に変換した。反応後に静置し
、二層分離を行い、ジエチルエーテル層を回収し、エバ
ポレーターにて濃縮乾固後、２５００ｄのイソプロパツ
ールを加え、イソプロパツールに可溶性であるホスファ
チジルＰＥＧ４００を除き、遠心分離により沈澱物を回
収した。

こうして得られた前処理サンプル（１）３３ｇにメタノ
ール３０００ｄを加え、３０°Ｃで２４時間、攪拌抽出
を行った。この抽出液のＰＩの純度は５０％、ＰＩの回
収率は８０％であった。沈澱物を遠心分離にて除去し、
上清を５倍に濃縮し、アセトン５００ｄを加え、生ずる
沈澱物を回収し、減圧乾燥し、精製Ｐ１１３ｇを得た。

この時のＰＩ線純度６５％で、原料ＬＰ−２０からのＰ
Ｉの回収率は６５％であった。又、各段階のリン脂質の
組成を第２表に示した。

第２表 大豆レシチン　　　１００ １３　１ｉ　　２３ 精製ｐｒ 大豆レシチンＬＰ−２０（日清製油社製、ＰＩ含量８％
）５ｇ、エタノール５ｇ、ジエチルエーテル２５Ｉ１１
、ＮａＣｊ！Ｉｇ、水２５戚にキャベツのホスホリパー
ゼＤ（ベーリンガー社製）５ｇを加え、３０°Ｃにて２
４時間転移反応を行い、ＬＰ−２０中に含まれるＰＣ及
びＰＲをホスファチジルエタノールに変換した。反応後
に静置し、二層分離を行い、ジエチルエーテルを分取し
、エバポレーターにて濃縮乾固後、１００ｄのエタノー
ルを加え、エタノールに可溶性であるホスファチジルエ
タノールを除き、遠心分離により沈澱物を回収した。

この沈澱物にメタノール２００ｒｎｌを加え、３０°Ｃ
で２４時間、攪拌抽出を行った。沈澱物を遠心分離にて
除去し、上清を５倍に濃縮し、アセトン５０ｄを加え、
生ずる沈澱物を回収し、減圧乾燥し、精製Ｐ１３７０■
を得た。この時のＰＩの純度は６５％で、原料ＬＰ−２
０からのＰＩの回収率は６０％であった。

夫隻阻土 大豆レシチンＳＬＰホワイト（ＰＩ含量８％）１０ｇを
１００戚のジエチルエーテルに溶解し、そこにベントナ
イト２０ｇを加え、３０°Ｃにて１日攪拌し、ベントナ
イトにリン脂質を吸着させた。減圧下でジエチルエーテ
ルを除去し、得られた前処理方法（２）による前処理サ
ンプル（２）に５００ｄのメタノールを加え、３０°Ｃ
１２４時間攪拌し、リン脂質を抽出した後、５倍に濃縮
し、５０ｍのアセトンを加え、生ずる沈澱物を回収し、
減圧乾燥し、精製Ｐ１１．１ｇを得た。この時のＰＩの
純度は６０％で、原料ＳＬＰホワイトからのＰＩの回収
率は８３％であった。

実施■工 大豆レシチンＳＬＰホワイト（ＰＩ含量８％）８５０ｇ
にエタノール８．５２を加え、３０°Ｃで２時間攪拌し
、ＳＬＰホワイト中に含まれるＰＣとＰＥの一部を除去
した後、減圧乾燥し、以後は実施例１と同様に転移反応
、ｎ−プロパツール精製、メタノール抽出、アセトン沈
澱によりＰＩを精製し、精製ＰＩ６１ｇを得た。精製Ｐ
Ｉの純度は７８％で、ＳＬＰホワイトからのＰＩの回収
率は７０％であった。

実藷拠旦 サフラワーレシチン（日清製油社製、ＰＩ含量１５％）
　　５００ｇを用いる以外は実施例１と同様に行い、サ
フラワーレシチンからの精製ＰＩ３６ｇを得た。この時
のＰＩの純度は８０％で、原料サフラワーレシチンから
のＰＩの回収率は６０％であった。

又、サフラワーレシチン５００ｇの代わりにアマニレシ
チン（日清製油社製、ＰＩ含量１０％）５００ｇを用い
て、上記と同様に行い、アマニレシチンからの精製ＰＩ
４４ｇを得た。この時のＰＩの純度は７０％で、原料ア
マニレシチンからのＰＩの回収率は６２％であった。

さらに、乾燥パン酵母からクロロホルム−メタ）−ル（
１：　Ｉ　Ｖ／Ｖ）　テ抽出したリン脂質（Ｐ１含量１
５％）１０ｇを用いて、］「のスケールで上記と同様に
行い、精製Ｐ１１．５ｇを得た。この時のＰＩの純度は
７０％で、原料リン脂質からのＰＩの回収率は７０％で
あった。

ｎ遺ユ 大豆レシチンＳＬＰホワイト（ＰＩ含量８％）５００　
ｇにエタノール５０１を加え、３０°Ｃにて２０時間攪
拌し、ＳＬＰホワイトからＰＣ及びＰＥを抽出し、残渣
を回収し、減圧上乾燥した。得られたリン脂質１１０ｇ
のＰＩ線純度３７％となり、上述の前処理サンプルと同
程度のリン脂質組成を有するリン脂質が得られた。

このリン脂質１１０ｇを１１２のメタノールに懸濁し、
３０°Ｃにて２４時間抽出を行った。抽出液のＰＩ線純
度５０％で、ＰＩの回収率は８０％であった。沈澱物を
遠心分離にて除去し、上清を５倍に濃縮し、アセトン１
０１を加え、生ずる沈澱物を回収し、減圧乾燥し、精製
ＰＩＪ６ｇを得た。この時のＰＩの純度は６０％で、原
料のＳＬＰホワイトからのＰＩの回収率は７０％であっ
た。

ｆｔＪＪｌ上 大豆レシチンＳＬＰホワイト（ＰＩ含量８％）Ｌｏｇに
メタノール１０００ｄを加え、３０°Ｃで２４時間攪拌
し、ＰＩの抽出を行った。この時、メタノール抽出液の
Ｐｒ純度は８％であった。抽出後、遠心分離し、上清を
５倍に濃縮した後、アセトン１２を加え、沈澱物を回収
し、ＰＩの純度とＰ１回収率を求めた。ＰＩの純度は３
０％、ＰＩの回収率は５０％が上限であり、前処理操作
を行わないと十分に精製効果が得られないことがわかっ
た。

ル較貰ｌ 実施例１と同様な方法により調整した前処理サンプル（
１）　１　ｇに各種溶媒１００ｄを加え、３０°Ｃにて
２４時間、攪拌抽出を行い、抽出液のＰＩ線純度調べた
。その結果を第３表に示した。

第３表 ＰＩ線純度％） 前処理サンプル（１）　　　　　３７ メタノール抽出液　　　　５２ エタノール抽出液　　　　２２ プロパツール抽出液　　　　　１５ イソプロパツール抽出液　　　　　　０アセトン抽出液
　　　　Ｏ 酢酸エチル抽出液　　　　３３ アセトニトリル抽出液　　　　　　０ クロロホルム抽出液　　　　　３７ 第３表の結果から、ＰＩの抽出にはメタノールだけが有
効であることが分かる。

止較勇ｌ ケイ酸（１１０℃で一夜活性化）４０ｇとセライト２０
ｇを混ぜ、クロロホルムに懸濁し、内径２．５ｃｍ、長
さ５０１のカラムに詰め、ケイ酸カラムクロマトグラフ
ィーを行った。即ち、大豆レシチン（ＳＬＰホワイト）
０．５ｇを５ｄのクロロホルムに溶解後、カラムにかけ
、クロロホルム−メタノール（４：　Ｉ　Ｖ／Ｖ）　１
０００−を流した後、ＰＩを溶出する為にクロロホルム
−メタノール（３：　２　Ｖ／Ｖ）２５０−を流し、Ｐ
Ｉを回収した。回収したＰＩの純度は４０％で、収量は
５０％であった。ＰＩの純度、回収率共に実施例１と比
べて良くなかった。

又、２０ｇのＤＥＡＥ−セルロースをｌＮ−ＨＣ４２３
００戚とＩ　Ｎ−Ｎａ　ＯＨ３００ｍで活性化した後、
中性になるまで水洗し、メタノールを加えて水分を除き
、減圧乾燥し、ＤＥＡＥ−セルロースを精製り、−ｋ。

精製ＤＥＡＥ−セルロース１５ｇニ１００ｍ１の酢酸を
加え、内径２．５ｃｍ、長さ３０Ｃ１１のカラムに詰め
、メタノール１，５１を流し、その後１．５尼のクロロ
ホルムを流し、ＤＥＡＥ−セルロースカラムを調整した
。次に、大豆レシチンＳＬＰホワイト０．２ｇを５ｄの
クロロホルムに溶解し、カラムにかけた後、５００戚の
クロロホルム、５０Ｍのクロロホルム−メタ／−ル（９
：　Ｉ　Ｖ／Ｖ）、５００ｄのクロロホルム−メタノー
ル（７：　３　Ｖ／Ｖ）を流した後、ＰＩを溶出するた
めに１５００ｄのクロロホルム−メタノール−アンモニ
ア−酢酸（４：１：０．１　　：０．０３）を流した。

溶出液のＰＩ線純度４０％で、ＰＩ回収率は６０％であ
った。これを減圧下で濃縮乾固し、ＰＩの純度を測定す
ると３０％となり、純度の低下がみられた。

代理人　　　弁理士　　逢坂　宏

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、ホスファチジルイノシトールを含有する原料リン脂
   質からメタノールを用いて前記ホスファチジルイノシト
   ールを特異的に抽出し、かつ回収するリン脂質の精製方
   法。