JPH02303481A - カンゾウ根茎細胞の培養方法 - Google Patents
カンゾウ根茎細胞の培養方法Info
- Publication number
- JPH02303481A JPH02303481A JP1123640A JP12364089A JPH02303481A JP H02303481 A JPH02303481 A JP H02303481A JP 1123640 A JP1123640 A JP 1123640A JP 12364089 A JP12364089 A JP 12364089A JP H02303481 A JPH02303481 A JP H02303481A
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- Japan
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- licorice
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、カンゾウ根茎細胞の培養方法に係り、特にカ
ンゾウ根茎の細胞増殖効率を増大させるのに好適な培養
方法に関する。
ンゾウ根茎の細胞増殖効率を増大させるのに好適な培養
方法に関する。
植物の細胞培養(カルス培養を含む)において細菌の大
量生産や植物の有用な二次代謝物の生産を目的とした、
培地組成、培養環境の最適化に関する研究がなされてい
る0例えば、ミシマサイコの葉および茎のカルスをオー
キシン濃度を変化させることにより再分化し、天然と同
一のサイコサポニンを生産する方法(生薬学雑誌:2B
<2>。
量生産や植物の有用な二次代謝物の生産を目的とした、
培地組成、培養環境の最適化に関する研究がなされてい
る0例えば、ミシマサイコの葉および茎のカルスをオー
キシン濃度を変化させることにより再分化し、天然と同
一のサイコサポニンを生産する方法(生薬学雑誌:2B
<2>。
152〜160)、また、薬用にんじんの組織培養物を
糖類のバランスを調整し、硝酸アンモニウムを除去した
MS培地で培養することにより、天然と同一のサポニン
を多量に含有するにんじんを生産する方法(特公昭63
−21470号公報)が報告されている。
糖類のバランスを調整し、硝酸アンモニウムを除去した
MS培地で培養することにより、天然と同一のサポニン
を多量に含有するにんじんを生産する方法(特公昭63
−21470号公報)が報告されている。
一方、カンデラは根茎に含有する有効成分のグリチルリ
チンが解毒、消炎薬として世界各国で用いられる他、甘
味料、みそ、圧油に用いられるなど食用にも使用する頻
度が高いが、国内栽培はほとんどなされず、大量輸入に
たよっている。カンデラの細胞培養はナンキンカンゾウ (Glycyrrhlza ehlnata)
の細胞をアルギン酸カルシウムビーズに固定化するこ
とにより、エキナチンを高レベルで長期間生産させる方
法(発酵と工業:vo145 No、12)が報告さ
れている。しかし、グリチルリチンを含有するスペイン
カンゾウ(Glycyrrhizaglabra)、
やウラルカンゾウ (Glycyrrhiza uralensis)の
細胞培養は見られない。
チンが解毒、消炎薬として世界各国で用いられる他、甘
味料、みそ、圧油に用いられるなど食用にも使用する頻
度が高いが、国内栽培はほとんどなされず、大量輸入に
たよっている。カンデラの細胞培養はナンキンカンゾウ (Glycyrrhlza ehlnata)
の細胞をアルギン酸カルシウムビーズに固定化するこ
とにより、エキナチンを高レベルで長期間生産させる方
法(発酵と工業:vo145 No、12)が報告さ
れている。しかし、グリチルリチンを含有するスペイン
カンゾウ(Glycyrrhizaglabra)、
やウラルカンゾウ (Glycyrrhiza uralensis)の
細胞培養は見られない。
C発明が解決しようとする課題〕
上記のように従来、グリチルリチンを含むカンゾウ根茎
細胞の培養については明らかにされておらず、細胞培養
の増殖効率に問題があった。
細胞の培養については明らかにされておらず、細胞培養
の増殖効率に問題があった。
本発明の目的は、グリチルリチンを含むカンデラの根茎
細胞を効率よく増殖させる培養方法を提供することにあ
る。
細胞を効率よく増殖させる培養方法を提供することにあ
る。
Ct!4Bを解決するための手段〕
上記した目的は、予め使用する基本培地組成を最適化す
ると共に重金属のNiを微量成分として添加する方法、
及び予め使用する基本培地にグリチルリチンと共にサイ
トカイニン種ホルモンとしてのベンジルアデニンを添加
する方法によって達成される。
ると共に重金属のNiを微量成分として添加する方法、
及び予め使用する基本培地にグリチルリチンと共にサイ
トカイニン種ホルモンとしてのベンジルアデニンを添加
する方法によって達成される。
上記した基本培地には、シ!ItU、塩酸チアミン。
塩酸ピリドキシン、ニコチン酸、myo−イノシトール
及びグリシンを含む培地が使用される。このような基本
培地として、Murashige−Skoog(MS)
培地、特にシー5t1120.000ppm、塩酸チア
ミン0.1p p m、塩酸ピリドキシン0.lppm
、ニコチン酸0.5p pm、 my 。
及びグリシンを含む培地が使用される。このような基本
培地として、Murashige−Skoog(MS)
培地、特にシー5t1120.000ppm、塩酸チア
ミン0.1p p m、塩酸ピリドキシン0.lppm
、ニコチン酸0.5p pm、 my 。
−イノシトール1100pp、グリシン3ppmを含む
培地が好適である。
培地が好適である。
本発明は、上記の基本培地に対し、重金属のNiを微量
成分として添加した培地が使用される力(培地中におけ
るNl添加量は、0.O1〜IOQPpmが好ましい。
成分として添加した培地が使用される力(培地中におけ
るNl添加量は、0.O1〜IOQPpmが好ましい。
植物体内では生体を維持する酵素反応が数多く起こって
いるが、その多くの酵素触媒反応に微量金属が必須であ
る。すなわち微量金属は酵素タンパク賞と結合し、金属
酵素を形成する。現在、植物の育成に対する金属必須成
分として、Mg、Zn、Fe等が知られているが、培養
細胞に対しても同様な必須性を考え、まずカンデラの根
茎に含まれている微量元素の分析を行った0分析方法は
、蛍光X線分析によって乾燥甘草根茎中の元素を分析し
たものである。この結果、第1表に示すように含有金属
として、Ni、Sr、Br、Zr。
いるが、その多くの酵素触媒反応に微量金属が必須であ
る。すなわち微量金属は酵素タンパク賞と結合し、金属
酵素を形成する。現在、植物の育成に対する金属必須成
分として、Mg、Zn、Fe等が知られているが、培養
細胞に対しても同様な必須性を考え、まずカンデラの根
茎に含まれている微量元素の分析を行った0分析方法は
、蛍光X線分析によって乾燥甘草根茎中の元素を分析し
たものである。この結果、第1表に示すように含有金属
として、Ni、Sr、Br、Zr。
Ca、Fe等が見い出された。CaとFeについてはM
S培地中の成分であるため、Ni、Sr、Br、Zrに
着眼し、これらの含有金属につき、細胞増殖効率につい
て種々検討した結果、Niを単独で用いる場合、最も効
果的であることが判明した。
S培地中の成分であるため、Ni、Sr、Br、Zrに
着眼し、これらの含有金属につき、細胞増殖効率につい
て種々検討した結果、Niを単独で用いる場合、最も効
果的であることが判明した。
第 1 表
++ 0〜 1.000 c p
s十++ :1,000〜5.000 c p
s++++ : 5.000〜10.000
c p S+++++: 10,00Qcp
s以上次に本発明は、予め使用される基本培地にグリチ
ルリチンとサイカイニン種ホルモンとしてのベンジルア
デニンとを添加することによってもカンゾウ根茎の細胞
の増殖効率に効果的である。
s十++ :1,000〜5.000 c p
s++++ : 5.000〜10.000
c p S+++++: 10,00Qcp
s以上次に本発明は、予め使用される基本培地にグリチ
ルリチンとサイカイニン種ホルモンとしてのベンジルア
デニンとを添加することによってもカンゾウ根茎の細胞
の増殖効率に効果的である。
すなわち、ベンジルアデニンと共にカンゾウ細胞二次代
謝物のグリチルリチンを添加することにより、細胞内取
り込みが起こり、二次代謝を刺激し、細胞分裂を促進す
るものと考えられる。基本培地に対しては、微量成分と
してのN1と共にグリチルリチンを併用することも可能
である。
謝物のグリチルリチンを添加することにより、細胞内取
り込みが起こり、二次代謝を刺激し、細胞分裂を促進す
るものと考えられる。基本培地に対しては、微量成分と
してのN1と共にグリチルリチンを併用することも可能
である。
また、基本培地に対し、微量成分としてのNlと二次代
謝促進物質としてのグリチルリチンを添加すると共に成
長ホルモンオーキシンとして2゜4−ジクロロフヱノキ
シ酢酸、サイトカイニンとしてカイネチン又はベンジル
アデニンを添加することによって増殖効率がより向上す
る。
謝促進物質としてのグリチルリチンを添加すると共に成
長ホルモンオーキシンとして2゜4−ジクロロフヱノキ
シ酢酸、サイトカイニンとしてカイネチン又はベンジル
アデニンを添加することによって増殖効率がより向上す
る。
以上のように本発明によれば、カンゾウ根茎細胞の培養
において、微量金属としてのNi又は二次代謝促進物質
としてのグリチルリチン及びサイトカイニン種ホルモン
としてのベンジルアデニンを含む培地を用いることによ
って、細胞伸長、細胞分裂を促進させ、カルスの増殖効
率を増大させることかできる。
において、微量金属としてのNi又は二次代謝促進物質
としてのグリチルリチン及びサイトカイニン種ホルモン
としてのベンジルアデニンを含む培地を用いることによ
って、細胞伸長、細胞分裂を促進させ、カルスの増殖効
率を増大させることかできる。
実施例 1
ηに希釈したMS培地で、シ!Im20.000 pp
m2塩酸チアミン0.1p p m、塩酸ピリドキシン
0.1p p m、ニコチン酸0.5p pm、 my
o −イノシトール1100pp、グリシン3ppm
。
m2塩酸チアミン0.1p p m、塩酸ピリドキシン
0.1p p m、ニコチン酸0.5p pm、 my
o −イノシトール1100pp、グリシン3ppm
。
ジェルライト1%を含むものを基本固体培地とし、これ
に植物成長ホルモンとして2.4−ジクロロフェノキシ
酢酸とカイネチンを各lppmずつ添加した固体培地で
、継代したカンゾウ根茎カルス約0.1gをサンプルと
して使用した。上記と同様の基本固体培地に、植物成長
ホルモンとして2゜4−ジクロロフェノキシ酢酸とカイ
ネチンを各0゜5ppm添加し、これに微量金属としτ
N1をO1ippm加えり培地に、サンプルのカンゾウ
根茎カルスを着床して培養した結果を第1図のAに示す
、Nl添加の培養開始後20日日の増殖倍率は4.15
倍であった。
に植物成長ホルモンとして2.4−ジクロロフェノキシ
酢酸とカイネチンを各lppmずつ添加した固体培地で
、継代したカンゾウ根茎カルス約0.1gをサンプルと
して使用した。上記と同様の基本固体培地に、植物成長
ホルモンとして2゜4−ジクロロフェノキシ酢酸とカイ
ネチンを各0゜5ppm添加し、これに微量金属としτ
N1をO1ippm加えり培地に、サンプルのカンゾウ
根茎カルスを着床して培養した結果を第1図のAに示す
、Nl添加の培養開始後20日日の増殖倍率は4.15
倍であった。
比較例 1
実施例1と同様にして継代したカルスを、実施例1と同
様の培地で微量金属N+を含まないものに着床し培養し
た結果を第1図のBに示す、培養開始後20日日の増殖
倍率は3645倍であった。
様の培地で微量金属N+を含まないものに着床し培養し
た結果を第1図のBに示す、培養開始後20日日の増殖
倍率は3645倍であった。
実施例 2
実施例1と同様にして継代したカルスを、実施例1と同
様の基本固体培地に植物成長ホルモンとして2.4−ジ
クロロフェノキシ酢酸とベンジルアデニン各o 、5p
p m、さらにvllit金属のNiを0 、lp
p m加えた培地に着床して培養した結果を、第1図の
Cに示す、Ni添加の培養開始後20日日の増殖倍率は
4.50であった。
様の基本固体培地に植物成長ホルモンとして2.4−ジ
クロロフェノキシ酢酸とベンジルアデニン各o 、5p
p m、さらにvllit金属のNiを0 、lp
p m加えた培地に着床して培養した結果を、第1図の
Cに示す、Ni添加の培養開始後20日日の増殖倍率は
4.50であった。
比較例 2
実施例1と同様にして継代したカルスを、実施例2と同
様の培地で微量金属N1を含まないものに着床し、培養
した結果を、第1図のDに示す。
様の培地で微量金属N1を含まないものに着床し、培養
した結果を、第1図のDに示す。
培養開始後20日日の増殖倍率は3,95倍である。
実施例 3
実施例1と同様にして継代したカルスを、同様の基本固
体培地に植物成長ホルモンとして2.4−ジクロロフェ
ノキシ酢酸とベンジルアデニン各0゜5ppm、さらに
グリチルリチン0.01%を加えた培地に着床して培養
した結果を、第2図のEに示す、培養開始後40日口の
増殖倍率は6.20倍であった。
体培地に植物成長ホルモンとして2.4−ジクロロフェ
ノキシ酢酸とベンジルアデニン各0゜5ppm、さらに
グリチルリチン0.01%を加えた培地に着床して培養
した結果を、第2図のEに示す、培養開始後40日口の
増殖倍率は6.20倍であった。
比較例 3
実施例1と同様にして継代したカルスを、実施例3と同
様の培地でグリチルリチンを含まないものに着床して培
養した結果を第2図のFに示す。
様の培地でグリチルリチンを含まないものに着床して培
養した結果を第2図のFに示す。
培養開始後40日口の増殖倍率は6.20倍であった。
比較例 4
実施例1と同様にして継代したカルスを、同様の基本固
体培地に植物成長ホルモンとして2,4−ジクロロフェ
ノキシ酢酸とカイネチン各0.5ppm、さらにグリチ
ルリチン0.01%を加えた培地に着床して培養した結
果を、第2図のGに示す。
体培地に植物成長ホルモンとして2,4−ジクロロフェ
ノキシ酢酸とカイネチン各0.5ppm、さらにグリチ
ルリチン0.01%を加えた培地に着床して培養した結
果を、第2図のGに示す。
培養開始後40日口の増殖倍率は6.07倍であった。
上記のように、カンゾウ根茎カルスを培養する際、培地
に微量金属としてNiを添加するか、あるいは二次代謝
促進物質としてのグリチルリチンとサイトカイニン種ホ
ルモンとしてベンジルアデニンとを添加することによっ
て、カルスの増殖倍率を1.2〜1.3倍に大きくする
ことができる。これについて、微量金属Nlが植物体内
の種々の酵素反応を促進すること、またグリチルリチン
が、植物細胞の二次代謝に刺激を与え、且つ、2つの細
胞増殖促進因子と、オーキシン種、サイトカイニン種ホ
ルモンとしてのベンジルアデニンとの相乗作用があるこ
とが考えられる。
に微量金属としてNiを添加するか、あるいは二次代謝
促進物質としてのグリチルリチンとサイトカイニン種ホ
ルモンとしてベンジルアデニンとを添加することによっ
て、カルスの増殖倍率を1.2〜1.3倍に大きくする
ことができる。これについて、微量金属Nlが植物体内
の種々の酵素反応を促進すること、またグリチルリチン
が、植物細胞の二次代謝に刺激を与え、且つ、2つの細
胞増殖促進因子と、オーキシン種、サイトカイニン種ホ
ルモンとしてのベンジルアデニンとの相乗作用があるこ
とが考えられる。
第1図は各種ホルモンを含有する培地に対する微量金属
Niの添加の有無による増殖率を示すは第2図はサイト
カイニン種ホルモンを含有する培地に対するグリチルリ
チンの添加の有無による増殖率を示す図である。
Niの添加の有無による増殖率を示すは第2図はサイト
カイニン種ホルモンを含有する培地に対するグリチルリ
チンの添加の有無による増殖率を示す図である。
Claims (7)
- (1)ショ糖、塩酸チアミン、塩酸ピリドキシン、ニコ
チン酸、myo−イノシトール及びグリシンを含む基本
培地に微量金属としてNiを添加した培地を使用するこ
とを特徴とするカンゾウ根茎細胞の培養方法。 - (2)前記培地に植物成長ホルモンのオーキシンとして
2,4−ジクロロフェノキシ酢酸、サイトカイニンとし
てカイネチン又はベンジルアデニンを添加することを特
徴とする請求項(1)記載のカンゾウ根茎細胞の培養方
法。 - (3)前記基本培地がMurashige−Skoog
(MS)培地であることを特徴とする請求項(1)記載
のカンゾウ根茎細胞の培養方法。 - (4)前記基本培地が(MS)培地を1/2に希釈した
ものからなることを特徴とする請求項(1)記載のカン
ゾウ根茎細胞の培養方法。 - (5)ショ糖、塩酸チアミン、塩酸ピリドキシン、ニコ
チン酸、myo−イノシトール及びグリシンを含む基本
培地にグリチルリチンと、サイトカイニン種ホルモンと
してのベンジルアデニンとを添加した培地を使用するこ
とを特徴とするのカンゾウ根茎細胞の培養方法。 - (6)前記基本培地がMurashige−Skoog
(MS)培地であることを特徴とする請求項(5)記載
のカンゾウ根茎細胞の培養方法。 - (7)前記基本培地に、植物成長ホルモンのオーキシン
として2,4−ジクロロフェノキシ酢酸を添加すること
を特徴とする請求項(5)記載のカンゾウ根茎細胞の培
養方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1123640A JPH02303481A (ja) | 1989-05-17 | 1989-05-17 | カンゾウ根茎細胞の培養方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1123640A JPH02303481A (ja) | 1989-05-17 | 1989-05-17 | カンゾウ根茎細胞の培養方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02303481A true JPH02303481A (ja) | 1990-12-17 |
Family
ID=14865595
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1123640A Pending JPH02303481A (ja) | 1989-05-17 | 1989-05-17 | カンゾウ根茎細胞の培養方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH02303481A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2012115261A (ja) * | 2010-11-09 | 2012-06-21 | National Institute Of Biomedical Innovation | カンゾウ属植物株及びカンゾウ属植物増殖方法 |
-
1989
- 1989-05-17 JP JP1123640A patent/JPH02303481A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2012115261A (ja) * | 2010-11-09 | 2012-06-21 | National Institute Of Biomedical Innovation | カンゾウ属植物株及びカンゾウ属植物増殖方法 |
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