JPH02303496A - 抗生物質ｐｂｊ―５，３６０複合体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、新規な抗生物質に関し、さらに詳しく１ま、
シュウトモナス（Ｐｓｅｕｄｏｓｏｎａｓ）　ｓｐ、　
Ｐ　Ｂ　Ｊ−５，３６０により産生される抗生物質ＰＢ
Ｊ−５，３６０ｍ合体に関するものである。

［従来技術と発明が解決すべき課題１ 抗生物質の抗細菌活性は個々の細菌によって異なる上、
しばしば耐性菌が出現して効果が低下することが知られ
ている。今日では、多剤耐性菌の出現が問題となってお
り、治療を効果的に行うためには新規で有効な抗生物質
の開発が望まれている。とりわけブドウ状球菌や溶血性
連鎖状球菌などのダラム陽性閑には抗生物質耐性菌が多
く、これらダラム陽性菌に対して高い活性を有する新規
な抗生物質が必要とされている。

［課題を解決する手段］ 本発明は、シュウトモナスｓｐ、ＰＢＪ−５，３６０（
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ、　Ｐ　Ｂ　Ｊ−５，３
６０）が産生ずる抗生物質ＰＢＪ−５，３６０複合体を
提供するものである。この抗生物質は、上記シュウトモ
ナスｓｐ、ＰＢＪ−５，３６０によって産生され、構造
式は不明であるが、加水分解によって後述のアミノ酸を
与えることからペプチド抗生物質と考えられる。この抗
生物質は上記シュウトモナスの菌株を培養することによ
り産生される物質であり、）Ｉ　Ｐ　１．　Ｃ（高速液
体クロマトグラフィー）によって数本のピークを与える
（第１図参ｊ１α）、極めて近似した同族体のｔａ＝体
として得られる。その抗菌活性は従来のダブトマイシン
（特開昭５５−９２３５３）やバンコマイシンと比較し
て、極めて強力であるが、個々の成分のｆｌｌｌｌｌに
はまだ成功していない。

本発明（ＤＰ　［３Ｊ　　５．３６０ＰＬＩ＃体ハ、＋
　ト’７ウム塩として以下の物理化学的特性を有する。

１）融点：２５０℃以上で分解 ２）元素構成：炭素約４４．７７％、水素約６゜９４％
、窒素約１２．２５％、ナトリウム約４．６５％ ３）分子量：約１，４００〜約１．６００４）外観；無
色粉末 ５）酸または塩基性：両性 ６）呈色層応等：ニンヒドリン反応、坂口反応およびｈ
呈色反応に陽性 ７）溶解性：　ｐＨ７以上またはｐＨ２以下の水、メタ
ノール、水飽和ブタ／−ル、ジメチルスルホ牛シト（Ｄ
ＭＳＯ）に可溶性 ８）加水分解によるアミノ酸生成物：ヒドロキンアスパ
ラギン酸、アスパラギン酸、セリン、ヒドロ牛ジインロ
イシン、グリシン、アラニンおよびアルギニン ９）赤外吸収スペクトル（臭化カリウム錠）：第２図参
照 １０）紫外吸収スペクトル（２ＯｎＭ　ＰＢＳ、ｐ！−
１７，０）：強い末端吸収 １１）　ｉｌ１層シリカゲルクロマトグラフィー二下記
のＲｒ値を示す。

溶媒　　−Ｒ「 ローブタノール。酢酸　水（４：Ｉ：２）　　　　　　
　　　　　　　０．２　５０−プロパノール：〔リジン
：酢酸：水（１５：１０：ｌ：１２）　　　０．６Ｏｎ
−１タノール上（ツ２１−ｎ℃＾敦乏ｌにχＪタ：６：
ｌ：４）　　　　　　ｏ、ｌｏ−上記の物性で表される
本発明の抗生物質Ｐ　Ｂ　Ｊ−５，３６０ｍ合体はイン
ビトロおよびインビボで優れた抗菌活性を有し、特にダ
ラム陽性菌に対して強力な作用を有することが分か・）
だ。

即ち、本発明の抗生物質は、インビトロにおいて、ダラ
ム陽性菌に対して０．００６〜０．０２５ｓａｇ／ｚＱ
で、ダラム陰性閑に対して１．５６〜２５紅ｇ／ｘ（ｌ
で活性を示す。また、インビボにおいても多剤ｉ４性菌
にＥ　Ｄ　ｓ。０　、１６１１９７に９と優れた効果を
示した（実験例２参照）。代表的な菌にλ・Ｉする最小
阻止濃度（ＭＩＣ）およびマウスにおけるＥＤｓ。を以
下の表１に示す。

人−１ ＶＣＭ−Ｐ：バンコマイシンＰ ］二記表１から分かるように、本発明のＰＩ３Ｊ−５、
３６０はバンコマイシンより優れた活性を示し、特にダ
ラム陽性閑に高活性を汀する。その作用機構は、細胞壁
合成阻害作用に基づ（と考えられる。

急性重性としては、マウスへの３００ｘ９／ｋｙオよび
５００１９／に９静脈内没与では、ｎ性死を認めなかっ
た。

本発明の抗生物質ｐｓＪ−５，３６０？１合体は前記の
ごとく同族体の複合体であると考えられるが、本明細書
では、実質上、上記の抗生物質活性および特性を示し、
シュウトモナスｓｐ、　Ｐ　Ｂ　Ｊ　−５．３６０によ
って産生される抗生物質の成分の複合体およびその塩を
便宜上、抗生物質ＰＢＪ−５，３６０Ｐｆ！合体と呼称
することとする。

本発明の抗生物質ＰＢＪ−５，３６０複合体は、ンユウ
ドモナス属の菌株７ユウドモナスｓｐ、　Ｐ　ＢＪ−５
，３６０を同化可能な炭素源、窒素源および無機塩類を
含有する培地中で常法通り好気的に液中培養することに
より得られる。なお、この菌は後述の実験例３記載の方
法で培養し、その形態学的所見、培養特性、生理学的お
よび生化学的性状等を基に、バーノーズ・マニュアル・
オブ・システマティック・ハタテリオロ／−（［３ｅｒ
ｇｅｙ’　ｓＭａｎｕａｌ　ｏｒ　５ｙｓｔｅ＊ａＬｉ
ｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）、第１巻（１９８４）
の記載を参照して総合的に判断し、上記菌株に帰属され
たものである。この菌株は、自然発生的に、または人為
的に変異する可能性があり、そのような変異体も、本発
明のＰＢＪ−５゜３６０１合体を産生ずる能力を保持し
ている限り、本発明の範囲内に包含されるものであるこ
とは、当業者には明らかである。従って、本発明は、新
規な抗生物質ＰＢＪ−５，３６０［合体を産生ずる、シ
ュウトモナスｓｐ、ＰＢＪ−５，３６０および、その抗
生物質ＰＢＪ−５，３６０複合体産生性の変異体を提供
するものである。シュウトモナスｓｐ、ＰＢＪ−５，３
６０は、茨城県つくば巾乗１−１３の工業技術院微生物
工学技術研究所に受託計号微工研菌寄第１０５７８号の
下で寄託されている（受託日；平成元年２月２７日）。

また、本発明はこのような菌株を培養することにより、
抗生物質ＰＢＪ−５，３６０？１合体を製造する方法を
も提供するものである。

培地組成、培地条件などは抗生物質の生産に一般に用い
られているものを用いるとよい。培地は原則として、炭
素源、窒素源、無機塩などを含む。

必要に応じて、ビタミン類、前駆物質などを加えてもよ
い。炭素源としては、例えば、グルコース、澱粉、デキ
ストリン、グリセリン、糖蜜、有機酸などが単独でまた
は混合物として用いられる。窒ｔ、＃とじては、例えば
、大豆粉、コーンスチープリカー、肉エキス、酵母工牛
ス、綿実粉、ペプトン、小麦胚芽、硫酸アンモニウム、
硝酸アンモニウムなどが単独または、混合物として用い
られる。

無機塩としては、例えば、炭酸カルシウム、塩化ナトリ
ウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸鋼、塩化
マンガン、硫酸亜鉛、塩化コバルト、各種リン酸塩など
があげられ、必要に応じて培地に添加する。本発明のシ
ュウトモナスｓｐ、　Ｐ　Ｂ　Ｊ−５，３６０を適当な
培地中で、温度２０〜３５℃、好ましくは２５〜２９℃
で約１〜７日間培養すると、充分量の抗生物質ＰＢＪ−
５，３６ＯＮ合体が培養物中に産生される。次いで、通
常の方法で培養物から生成物を分離し、所望により、精
製する。そのような方法は、全て当業者にとって周知で
ある。

本発明のＰＢＪ＝５，３６０慢合体は、インビトロおよ
びインビボで著しい活性を示し、種々の感染症、特にダ
ラム陽性の多剤耐性菌による感染症の治療に有用と考え
られる。

以下に実施例および実験例を挙げ、本発明を史に詳しく
説明する。

Ｗ何」− ■）発酵 ／コウドモナス属の菌株ＰＢＪ−５，３６０の細胞懸濁
液を坂ロフルペン内のデキストリン２０％、トマトペー
スト　１．０％、ドライイースト１０％組成の培地　１
００ｆｆ（に植菌し、２８℃で２日間振盪培養を行う。

次いで、これを種菌としてグルコース　１．０％、麦芽
エキス　１．０％、ドライイースト　１．０％、トマト
ペースト　０，２％組成の培地２５０Ｑを念む５００Ｑ
の発酵槽に２％（ｖ／ｖ）となるように植菌し、２８°
Ｃにおいて、撹拌数　１２　Ｏｒｐｍ、通気ｆｆ１ｏ、
５ｖｖ−で４日間発酵を行う。

２）単離 発酵液４５０ＱをｐＨ３，０に調整し、ＮａＣＲ６０に
９、ブタノール　ｔｉｏｃを加えて激しく撹拌する。静
置し、エマルシコンを念むブタノール層を分離し、ろ過
助剤／１イフロスーパーセル　１５＆９を加えてろ過し
、ブタ７−ル抽出Ｍ　８４ｔを得る。これにＥ　’Ａ　
（酢酸エチル）７２Ｑを加え、３％Ｎａ１ｌＣＯ３７０
（’、６０Ｑ、３００で逆抽出を行う。

得られた水層　１５０ｅをｐＨ３，０に、Ｗ、’ｌ　Ｉ
し、ＮａＣ（１２０ｋｇを加え、ブタノール３０＆で抽
出する。

ブタノール抽出Ｊｌｋを減圧濃縮し、アセトンを加えて
析出する沈澱を集め、ｆｉｌ粉末２６Ｌｉをｉ５る。ｅ
１１粉末２５９をｐｔ１８．０てＩ−［、Ｏに溶解し、
ＩＲＡ−４５８（Ｃρ−７のカラム　１．３Ｎ）に適用
して吸告させ、水洗した後、５％ＮａＣｆ！１５０Ｉｌ
〜１リン酸緩ｄｕｆｉ　ｐＨ８、０で溶出する。Ｅ、ｃ
ｏｌｉＬＳ−１を用いるアッセイプレートで抗菌力の測
定を行い、活性な分画　１７Ｑをｉυる。これをＣ１（
Ｐ−２０１）のカラム（２００ａｉ２）ニ吸首さｕ、１
０％アセトン／ｌ０５Ｍリン酸！！由液（ＰＢＳ）（ｐ
Ｈ８，０）３００酎で洗浄した後、Ｉ　Ｏ＋ａＭ　　Ｐ
　Ｂ　Ｓ　（ｐＨ８゜０）を念む１０％から８０％のア
セトノ溶液で５．０度勾配溶出法により溶出する。

主な活性分画を集め、ＣＨＰ−２０Ｐのカラム（１７０
峠）に眼前せしめ、５％アセト７３００ａｅで洗浄後、
５％から８０％の水性アセトンで濃度勾配溶出を行う。

主な活性分画を集め、濃縮後、凍結乾燥することにより
ＰＢＪ−５，３６０Ｆｍ合体の粉末７０ｕを得た。

３）精製 上記粉末４３１９を薄層クロマトグラフィーにより更に
精製した。即ち、ノリ力ゲルブレー）（Ｍｅｒｃｋ、　
　Ｓ　１ｌｉｃａ　ｇｅｌ　Ｇ　Ｆ、　　５００μ）６
枚に適用し、ＢｕＯＨ−ＡｃＯＨ−Ｈ−０（４：１：２
）で展開、ニンヒドリン反応および坂口反応陽性のゾー
ン（Ｒｒ約０２５）の部分を切り取り、６０％３ｑ、Ｍ
ｅＯｌｌ、ｐ＋１８．０で抽出する。抽出液をｐ　）（
７、５にしてＭｅＯＨを溜去し、Ｃｌ−Ｉ　Ｐ−２０Ｐ
カラム（２０謁Ｑ）に眼前させ、１０％アセトンで洗浄
後、５０％アセトンで溶出する。次いで、活性を示す溶
出ｌαをｔ虐縮した後、凍結乾燥し、Ｉ’ＢＪ−５゜３
６０　？ｔｉ合体のＮａ塩の無色粉末２７ｘｇを得た。

融点；２５０°Ｃ以上で分解する両性物質。

本発明のＰＢＪ−５，３６０？１合体くナトリウム塩）
の物理化学的特徴、イノビトロおよびインビボでの活性
を以下の実験例に示すごとくに検討した。

火狭例−土　物理化学的特性 実施例１で得たナトリウム塩の物理化学的特性を検討し
、以下の結果を得た。

■１元素分析 元素分析値（Ｎａ塩として） Ｃ二　４４．７７　、　ｔｌ：６．９４　、　Ｎ：＋２
．２５　、Ｎａ・４．６５（％） アミノ酸分析値からその分子用は１．／１００〜１、Ｃ
１００程度と推定される。

２、薄層クロマトグラフィー 薄層クロマトグラフィー（Ｔ１．０、ンリカゲルプレー
ト使用）では、バイオオートグラフィーおよび呈色反応
にニンヒドリン、坂［１，１，）による単一のスポット
を示した。以下に結果を示す。

溶媒　　　　　　　　　　　　Ｒｆ ｎ−ブタノール：酢酸・水（４：ｌ：２）　　　　　　
　　　　　　　　ｏ、２　５ｎ−１自パノール：１リジ
ン：酢酸・水（１５：１０：ｌ：１２）　　　ｏ、６０
に１タノール：Ｃリノン゛酢剰水（りと：６−１Ｈ覗−
一−−（と−１−Ｃ１３、呈色反応、溶解性。

ニンヒドリン反応、坂口反応およびＩ、呈色反応に陽性
、ｐＨ７以上またはｐｉ＋２以下の水、メタノール、水
飽和ブタノール、ジメチルスルホキシドに可溶性。

４、高速液体りａマドグラフィー １１ＰＬＣ測定は以下の条件で行った。

カラム：　Ｎｕｃｌｅｏｓｉ１５Ｃ＋ａ（４，６８Ｉ　
５０ｚｚ）溶媒・アセトニトリル〜５０＊Ｍ　Ｎａ５Ｏ
，を含む５０ｍ　ＰＢＳ、、ｐＨ７，５ （３８：６２） 流速：　ｌ　、　３５ｚＱ／ｓｉｎ チャートスピード：　Ｉ　、　Ｏｃｍ／　ｊｉｎＯＤ、
！。ｎ鋤でモニター。

数本のピークが現れ、数種の同族体の複合体であるこ七
を示した（第１図奮照）。

５、アミノ酸組成分析 以下の方法でＰＢＪ−５，３６０の酸加水分解し、アミ
ノ酸組成を分析した。

定沸点塩酸により、１１０℃で２０時間処理して加水分
解し、日立アミノ酸自動分析機８３５を用いて分析した
。

＋）ｆｉｔ＆（μａｏｌ／　ＲＷ）　：β−ヒドロ牛シ
ンアスパラギン酸Ｉ（ｙＡｓｐ）：０．４４、アスパラ
ギン酸（Ａｓｐ）：０．６０１セリン（Ｓｅｔ）　二〇
、　５３、β−ヒドロキシイソロイシフ　：　０．　Ｉ
　０（ａ）および０．１６（ｂ）、グリシン：０．６２
、アラニン：Ｏ，／ｌｏ、アルギニン（Ａｒｇ）　：　
０．２２、ＮＨｚ：０．４８（ａ）および（ｂ）　：β
−ヒドロキシイソロイシフのジアステレオアイソマーと
推察され、アミノ酸残基の酸加水分解によりかなり分解
されていると考えられる。

６、赤外吸収スペクトル・第２図９照。

７、紫外吸収スペ’ｙ　）ル（２０ｍＭ　ＰＢＳ、ｐＨ
７，０）：強い末端吸収。

実験例２　インビトロおよびインビボでの抗菌活性 １）インビトロ活性 実施例１で得た抗生物質ＰＢＪ−５，３６０のインビト
ロでの抗菌活性を寒天希釈法で検討した。

結果を表２に示す。

１２　　インビトロの抗菌活性 彼検微生物　　　　　　　　　　　Ｍ　Ｉ　Ｃ（ｓｃｇ
／　ｚ（１）ダラム陽性菌 Ｓ、アウレウス（Ｓ、＾ｔｌＲＥＵｓ）　ｌ’ＤＡ　Ｊ
Ｃ−１０，Ｏ２５Ｓ、　アウレウｘ（Ｓ、ＡｔＲＥＵＳ
’）　ＳＭＩ丁１１　　　　　０．０１２５３アウレウ
ス（Ｓ、ＡＵＲＥＵＳ）　５Ｒ７７０，０２５Ｓ、ｙウ
レウス（Ｓ、Ａｔ１ＲＥＵＳ）ＳＲ１４（Ｒ）　　　　
　０．０１２５Ｓ、ピオゲネス（Ｓ、　Ｐ１’０ＧＥｌ
ＩＥＳ）　Ｃ−２０３０，０１２５３、二、−４二、１
（Ｓ、ｐＨＥＵＭＯＮＩＡＥ）１’ＹＰＥＩ　　Ｏ，０
０６Ｅ、コリ（Ｅ、ｃｏｌｉ）　ＩＩ　　　　　　　　
　　　　　　　１　、５６Ｅ、）す（Ｅ、　ｃｏｌｉ）
　ＮＩＩＩＪ　ＪＣ−２６，２５Ｅ、コリ（Ｅ、　ｃｏ
ｌ　ｉ）　ＥＣ−１４６、２５１ミ、コリ（Ｅ、　ｃｏ
ｌ　ｉ）　ＳＲ３？７（Ｒ）　　　　　　　　　　　６
　、２５Ｅ、コリ（Ｅ、　ｃｏ目）ＳＩｉ７３（１？）
　　　　　　　　　　１２．５に、＝、−モ＝！（Ｋ、
ＰＮＦ、ｔｌＭＯＮＩＡＥ）ＳＲ１１，５６に、オｊｒ
／トカ（Ｋ、　０ＸＹＴＯＣＡ）　５Ｒ６９６６、２５
Ｐミ５　ヒ９　ス（Ｐ、ＭＩＲＡＢＩＬＩＳ）　ＰＲ−
４３，１３輩０モルガ＝　−（Ｍ、　ＭＯＲＧＡＮＩ　
Ｉ）　５ｌ１９　　　　　　６　、２５Ｐ６ブルがＩＪ
ス（Ｐ、ＶｔｌＬＧＡＲＩＳ）ＣＭ−３２９３，１３Ｐ
、ブルガ９　ス（Ｐ、　ｖｔｌＬＧＡＲｌｓ）　５Ｒ３
（Ｒ）　　　　　ｌ　２　、５Ｅ、クロアカニ（Ｅ、Ｃ
ＬＯＡＣＡＥ）　５Ｒ２３３６、２５ＥＪＯ７カ！　（
Ｅ、　ＣＬＯＡＣＡＥ）Ａ１３０４７　　　　　６．２
５Ｓ、　マｔレー１ｔスーｔｔンス（Ｓ、ＭＡＲＣＥＳ
ＣＥＮＳ）　Ａｌ３８ＢＤ　　Ｉ　２．５ｐ、ｚルキ／
−ザ（Ｐ、ＡＥＲＩＩＧＩＮＯ８Ａ）Ａ２５６１９　　
　１２．５Ｐ、エルギノーザ（Ｐ、＾ＥＲＵＧＩＮＯ３
＾）　５ＲＩＯ１２１２，５Ｐ、エルギノーザ（Ｐ、＾
ＥＩ？ｔｌＧｌ１１０ＳＡ）　５Ｒ２４１２，５接種菌
ｆｆｉ　：　ｌ　Ｏ’ｅｅｌ　Ｉｓ／　ｘＱ２）インビ
ボ活性 本発明の抗生物質複合体を用い、インビボの抗菌活性を
調べた。マウスを感染性の１［ｌ菌で腹腔的感染させ（
チャレンジ）、チャレンジの１および５時間後に被験物
質を皮下投与した。チャレンジから７日後の生１′？率
に基づいて、ＥＤ、。値を算出した。ＭＩＣ１ｉ寒天希
釈法によって求めた。結果を下記の表２に示す。表３か
ら分かるように、本発明の抗生物質複合体の治療効果は
、パンコマインンの１０〜２０倍である。

１３　　全身感染させたマウスにおけるＰＢＪ−５，３
６０およびＶＣＭ−Ｐの防御効果害慧Ｎ３　　ＰＢｔ−
５，３６０（Ｄｔｌｉｔ−的特性本発明のＰＢＪ−５，
３６０の菌学的諸性状は以下の通りである。なお、ＰＢ
Ｊ−５，３６０は、京都府下で採取した土壌試料より分
トした。

培養は原則として２８°Ｃで実施した。

Ａ　形態 ダラム陰性、桿菌であり、大きさは０．３〜０５（ｌｌ
）ｘＯ，８〜１．３（μ）である。一本以上の極限しに
より激しく運動する。

Ｂ　培養所見 １）肉汁培地における培養 菌体の生育は殆ど見られなかった。管底に灰白色半透明
の沈澱がごくわずかに生成した。

２）肉汁寒天穿刺培養 穿刺線に沿って糸状乃至は小乳頭状の生育を認めた。ガ
スの発生および色素の生成は見られなかった。表面に赤
味がかった薄い菌膜を形成したが、この菌膜は時間の経
過と共に、うす五色半透明となり症状の突起を所々に認
めた。好気性菌である。

３）肉汁寒天斜面培養 菌体の生育は決して早い方ではなく、２８°Ｃにおいて
は２［１１麦より開始（目に見える）された。

生ｆ↑は糸状で、菌膜はｔ透明、淡ピな色、隆起は扁平
でふつふつした外観を呈した。周縁は金縁であった。菌
膜の生育はその後良好となり、生育は糸状乃至は■χ状
で光沢を有し、Ｍ潤したやや赤味を帯びた半透明褐色の
菌膜になる。周縁は波状乃至は長波状である。ガスおよ
び色素の生成は認められなかった。

４）肉汁ゼラチン穿刺培養 培養は室温下（２２〜２５°Ｃ）で実施した。ゼラチン
を液化した。

５）肉汁寒天平板培地上での培養 菌体の生育は速くない。２８℃、２日後よりコロニーは
可視となった。コロニーは最初、小型、点状、褐色半透
明であり、周縁は金縁である。隆起については、コロニ
ーが小型過ぎて観察不可能であった。その後、コロニー
は生長し、点状乃至は円型を呈し、周縁は金縁、隆起は
扁平乃至は凸円状である。コロニーは半透明、茶褐色で
光沢を有する。ガスおよび可溶性色素の生成は、−切認
められなかった。

６）リドマスミルクにおける培養所ａ 酸を生成し、ペプトン化を行うが反応の開始は１４日以
後となるなど、反応はかなり遅い方である。ガスの発生
はなかった。表面に灰赤紫色の薄い菌膜を時として形成
する。上層は赤紫色半透明、下層は紫がかったベージュ
色で不透明である。沈澱はベージュ色に近い赤紫色であ
った。

Ｃ９生理学的および生化学的諸性状 １）カタラーゼテスト　陽性 ２）オキシダーゼテスト、陽性 ３）ＯＦ−テスト　陰性（アルカリ性を呈した）４）溶
血性テスト　陽性（弱い） ５）５°Ｃにおける生育能：陰性 ６）ＩＩ、Ｓの生成　陰性 ７）硝酸塩の還元能；陽性 ８）脱窒反応・陰性、但しＮ　２ｇａ８を発生しないが
、ＮＯ！−は還元する様であった。

９）クエ／酸の＋り用能：陰性（クリステン七）培地、
およびシモンズ培地） １０）ＮＡＣ寒天寒天上地上生育、陰性（生育不可能） Ｉｆ）インドールの生成　陰性 １２）　Ｖｏｇｅｓ−Ｐｒｏｓｋａｕｅｒ反応（フォー
ゲス０ブロスカウエル拳テスト）：陰性 １３）メチルレッドテスト・陰性 １４）アルギニンの加水分解能：陽性 １５）リジンの脱炭酸能：陽性 １６）オルニチンの脱炭酸能、陽性 １７）エスクリンの加水分解能　陰性 １８）　Ｄ　Ｎ　ａｓｅテスト　陰性 １９）澱粉の加水分解能、陰性 ２０）ＯＮＰＧテスト（３７℃で上長）：陰性２１）ア
／ルアミダーゼテスト：陰性 ２２）フォスファターゼテスト：陽性 ２３）キチンの加水分解能：陰性 ２４）シュークロースよりのし／ずンの生成能：ｗ２５
）糖類よりの酸およびガスの生成能・以下の１３種の糖
類から、酸およびガスを発生しない。糖類としては、グ
ルコース、フルクトース、ガラクトース、マン７−ス、
キンロース、アラビノース、マルトース、ラクトース、
ラムノース、／ニークロース、セロビオース、トレハロ
ース、マンニノトテある。

２６）菌体内におけるｐｏｌｙ−β−ヒドロキンブチレ
ートの蓄積コ陰性 ２７）炭素源の資化能：無機塩を含む培地上において、
単一の炭素源としてグルコース、および２ケト−グルコ
ン酸カルンウムを資化して、菌体を形成することができ
る。この場合、生育のための特定のビタミン類は、特に
要求する様には思われなかった。一方、Ｄ−（＋）−ト
レハロース、ＤＬ−アルギニン、ケラニオール、β−ア
ラニン、Ｌ−バリン、イノジットを資化しなかった。

２ｇ）　Ｇ＋Ｃｍｏｌｅ％（ＨＰＬＣ法）＋６０．４％
（Δ＋Ｔ　ｍｏｌｅ％は３９６％であった）以上の諸結
果より見て、不倒は好気性のグラム１１３性の桿菌であ
り、１本以上の極限毛を用いて液体培地中で活発なる運
動を行う。カタラーゼ陽性であって、オキシダーゼを有
する。ＯＦ−テストは陰性（アルカリ性を示す）であっ
た。これらの結果より見れば、不倒はンユウドモナス科
の中の／ニードモナス属に帰属されることは明らかであ
る。

シュウトモナス属について、バーノーズ・マニュアル・
オブ・ンステマティノク・バクテリオロジ−（Ｂｅｒｇ
ｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　５ｙｓｔｅＩＩｌａｔ
ｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）、第１巻（１９８４
）中に記載の菌体内ニｐ。

ＩＹ−β−ヒドロキンブチレート（ＰＨＢ）を蓄積しな
い菌慢合体について、上述の各性状を対比した所、一致
するものおよび近似のものを発見することはできなかっ
た。それ故、不倒はシュウトモナスの一新種とも考えら
れるが、アルギニンを加水分解し、リジンおよびオルニ
チンを脱炭素する点で、かなり変わったンユウドモナス
の一種といえる。そして、Ｇ＋Ｃｍｏｌｅ％も６０４％
とシュウトモナスの中では、低い方のグループに帰属せ
られる。以上の諸結果を見て、不倒を／ユウドモナスｓ
ｐ、ＰＢＪ−５，３６０と同定した。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の抗生物質ＰＢＪ−５，３６０のＩＩ　
Ｐ　Ｉ、Ｃにおけるクロマトグラムの模写図、第２図は
赤外吸収スペクトルの模写図。 特許出願人　塩野義製薬株式会社 代理人弁理上青山　葆（外２名） 第１　図 ＣＭ２３４５６７８９ｆＯ （分）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、シュウドモナスｓｐ．ＰＢＪ−５，３６０により産
   生され得る抗生物質であって、そのナトリウム塩が以下
   の性状を有することを特徴とする抗生物質ＰＢＪ−５，
   ３６０複合体またはその塩。 １）融点：２５０℃以上で分解 ２）元素構成：炭素約４４．７７％、水素約６．９４％
   、窒素約１２．２５％、ナトリウム約４．６５％ ３）分子量：約１，４００〜約１，６００ ４）外観：無色粉末 ５）酸または塩基性：両性 ６）呈色反応等：ニンヒドリン反応、坂口反応およびＩ
   ＿２呈色反応に陽性 ７）溶解性：ｐＨ７以上またはｐＨ２以下の水、メタノ
   ール、水飽和ブタノール、ジメチルスルホキシドに可溶
   性 ８）加水分解によるアミノ酸生成物：ヒドロキシアスパ
   ラギン酸、アスパラギン酸、セリン、ヒドロキシイソロ
   イシン、グリシン、アラニンおよびアルギニン ９）赤外吸収スペクトル（臭化カリウム錠）：第２図参
   照 １０）紫外吸収スペクトル（２０ｍＭＰＢＳ、ｐＨ７．
   ０）：強い末端吸収 １１）薄層シリカゲルクロマトグラフィー： ￥　　　　　溶媒　　　　　　　　　　　　　　　　　
   　　　　　　Ｒｒ￥ ｎ−ブタノール：酢酸：水（４：１：２）　　　　　　
   　　　　　　０．２５ ｎ−プロパノール：ピリジン：酢酸：水（１５：１０：
   １：１２）　０．６０ ￥ｎ−ブタノール：ピリジン：酢酸：水（１０：６：１
   ：４）　　　０．１０￥ ２、請求項１記載の抗生物質ＰＢＪ−５，３６ｏ複合体
   を産生するシュウドモナスｓｐ．ＰＢＪ−５，３６０ま
   たは、その抗生物質ＰＢＪ−５，３６０複合体産生性変
   異体。 ３、請求項２記載のシュウドモナスｓｐ．ＰＢＪ−５，
   ３６０またはその変異体を培養し、培養物から請求項２
   記載の抗生物質ＰＢＪ−５，３６０複合体を分離、回収
   することからなる抗生物質ＰＢＪ−５，３６０複合体の
   製造方法。