JPH02306977A - 酸性多環式エーテル抗生物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、式： ［式中、Ｍ　ｅ　＝　ＣＩ−１３かつＰｒ−ＣＨ３ＣＨ
２ＣＨ２であり、さらに示した絶対的立体化学配置を有
する］ を有する新規な酸性多環式エーテル抗生物質；その医薬
上許容しうる陽イオン塩；家禽、牛もしくは豚のための
前記抗生物質を含む栄養飼料組成物、家禽における抗コ
クシジウム剤として、または豚赤痢の処置もしくは予防
に、或いは牛もしくは豚における成長促進剤としてのそ
の使用；その光酵製造方法；並びに前記発酵法にて前記
抗生物質を産生させるストレプトミセスＳｐ、微生物に
関するものである。

モネンシンの同族体である化合物＜Ｉ＞は、酸性多環式
エーテル群の抗生物質の新規な種類である。この種類は
、モネンシン（Ｔｈｅ　Ｈｅｒｃｋ　Ｉｎｄｅｘ。

１０ｔｈ　Ｅｄ、、　Ｈｅｒｃｋ　ａｎｄ　Ｃｏ１．　
Ｉｎｃ、、　Ｒａｔ＋ｖａｙ。

Ｎ１．、１９８３．　ｎｏｎｏｇｒａｐｈ　ｎｏ、６１
００）の他に、たとえばニゲリシン（前出、［ｌｏｎｏ
ｇｒａｐｈ　ｎｏ、６３９０）、ナラジン（前出、ｌｏ
ｎｏｇｒａｐｈ　ｎｏ、６２７１）、ラサロシド（前出
、ｎｏｎｏｏｒａｐｈ　ｎｏ、５２０４）およびサリノ
マイシン（前出、ｍｏｎｏｇｒａｐｈ　ｎｏ、８１９３
）のような周知の薬剤を包含する。この主題はＷｅｓｔ
ｌｅｙ、　”Ｐｏ１ｙｅｔｈｅｒＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃ
ｓ　　”　　、　　Ａｄｖ、　　Ａｐｐｌ、　　Ｈｉｃ
ｒｏｂｉｏｌ、、　　ｖｏｌ。

２２、　ｐｐ、１７７−２２３（１９７７）で検討され
ている。これら化合物は一般に、制コクシジウム剤、飼
料添加物−成長促進剤、および／または豚赤痢に対し有
用な薬剤として知られている。

ストレプトミセスｓｐ、　ＡＴＣＣ５３８６２の培養物
は、水性培地中で好気的条件下に発酵させると、新規な
酸性多環式エーテル抗生物質、すなわち上記式（Ｉ）を
有する化合物を産生ずる。

本発明は、式（Ｉ＞の前記化合物、その医薬上許容しつ
る陽イオン塩、並びに前記ストレプトミセスｓｐ、　Ａ
ＴＣＣ５３８６２を資化性炭素源と窒素源とからなる水
性栄養培地にて回収可能量の前記式（Ｉ＞の化合物が生
成されるまで好ましくは深部好気性条件下で発酵させる
ことからなる製造方法にも向けられる。抗コクシジウム
剤として、或いは豚赤痢の予防もしくは治療に、或いは
成長促進剤として使用するためには、化合物（Ｉ）は必
らずしも発酵培地から分離する必要はなくかつ実質的に
純粋な形態で単離する必要もなく、菌糸（発酵培地のｅ
過によって回収される）混合された沈澱形態、或いは全
発゛酵培地の噴霧乾燥もしくは凍結乾燥により得られる
固体にて粗製状で使用される。

前記医薬上許容しつる陽イオン塩は限定はしないがナト
リウム塩、カリウム塩、カルシウム塩。

アンモニア塩、Ｎ、Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン
塩、トメチルグルカミン塩（メグルミン）およびジェタ
ノールアミン塩を包含する。好適な陽イオン塩はカリウ
ム塩およびナトリウム塩である。

さらに本発明は、牛もしくは豚の成長を促進しかつ／ま
たはその飼料利用率を向上させる或いは豚における赤痢
を予防もしくは治療するのに有効な量の、式＜Ｉ＞の化
合物からなる牛もしくは豚の栄！ｌ飼料組成物；並びに
家禽におけるコクシジウム感染を抑制するのに有効な示
の、式（Ｉ）の化合物からなる家禽用の栄養飼料組成物
にも向けられる。

さらに本発明は、豚もしくは牛における成長を促進しか
つ／または飼料利用効率を増大させる方法にも向けられ
、この方法は前記豚もしくは牛に式（Ｉ）の化合物の成
長促進量または詞料利用率促進伍の式（Ｉ）の化合物を
特に栄罹躬料組成物として投与することを特徴とし、さ
らに豚における赤痢の予防もしくは治療に有効なωの式
（Ｉ）の化合物を前記豚に投与することからなる豚の赤
痢の予防もしくは治療方法にも向けられ、さらに式（Ｉ
）の化合物の抗コクシジウム上有効偵を特に栄￥１飼料
組成物の形態で前記家禽に投与することからなる家禽に
おけるコクシジウム感染の抑制方法にも向けられる。

最後に、本発明は、資化性炭素源および窒素源からなる
水性栄養培地にて発酵に際し回収しうる伍で式（Ｉ＞の
化合物を産生じつるストレプトミセスｓｐ、　ＡＴＣＣ
５’１８６２の生物学上糾砕な培養物にも向けられ、こ
の培養物は凍結乾燥型をも包含する。

本発明の式（Ｉ）を有する多環式エーテル抗生物質を産
生しうる培養物はストレプトミセスＳｐ。

と命名され、かつメリーランド州、ロックビル在、アメ
リカン・タイプ・カルチセー・コレクションに受託番号
ＡＴＣＣ５３８６２におけるタイプカルチャーとしてブ
タベスト条約にしたがい寄託されている。

この培養物は、特許付与があれば不可逆的かつ制限もし
くは条件なしに第三者に分譲可能とされている。上記寄
託礪関におけるこの培養物の寄託の永久性および第三者
によるその容易な入手性は、特許がル２められた際に特
許の有効期間にわたって与えられる。

この新規な培養物はカナダ国オンタリオ州、アルンブラ
イヤにて採取された土壌試料から得られ、かつファイザ
ー・インコーポレーション社のカルチャー・コレクショ
ンにＮ　７６５−２１として同定されている。その説明
および分類はり、Ｈ，Ｈｕａｎｇ博士によって与えられ
た。この培養物はアクチノミセタレス（Ａｃｔｉｎｏｌ
ｙｃｅｔａｌｅｓ）の狭い菌糸と、胞子連鎖を発生する
気菌糸と、非断片化基質菌糸とを有することが判明した
。さらに、全菌体分析の結果は、これがストレプトミセ
ス属に属することを示す。

微生物のスラント培養物をＡＴＣＣ１７２ブロスに移植
し、かつ２８℃にて振どう器上で４日間増殖させた。次
いで、これを２０分間遠心分離し、無菌蒸留水で３回洗
浄し、かつ一般的にアクチノミセタレス（＾ｃｔ　ｒｎ
ｏｎｙｃｅｔａ　１ｅｓ）の種類を同定するために用い
られるＰｉ地に移植した。

培養物を２８℃に保温し、かつ結果を種々異なる時間で
測定したが、最も一般的には１４日間でα１足した。着
色については一般的用語で説明したが、正確な色はカラ
ー・ハーモニー・マニュアル、第４版からの色チップと
比較して決定した。全菌体アミノ酸および糖の分析方法
はＢｅｋｅｒ等、Ａｐｐｌ。

Ｈｉｃｒｏｂｉｏｌ、、　ｖｏｌ、１２．　ｐｐ、４２
１−４２３（１９６４）および１ｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ
、　　Ｊ、　　ｔａｂ、　　Ｃｌ１ｎ、　　Ｈｅｄ、、
　　ｖｏｌ、７１゜ｐｌ）、９３４−９４４（１９６８
）にそれぞれ記載された方法である。ストレプトミセス
・フロキュラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｎｙｃｅｓ　　ｆｌｏ
ｃｃｕｌｕｓ　）　ＡＴＣＣ２５４５３を比較の目的で
使用した。

培養物は次のように同定された： 培地、ジフコ社）：増殖良好、黄色〜黄褐色（２ｎｃ、
　３　ｉｃ＞　、白色気菌糸を有する：やや隆起、皺；
リバース、黄色（２ｎｃ）：可溶性色素黄褐色〈３Ｉｃ
）。

オートミール寒天　（ＩＳＰ　　＃３培地、ジフコ社）
：増殖中庸〜良好、クリーム（２Ｃａ）、白色気菌糸あ
り；僅かに隆起；平滑；リバース、クリーム−淡黄色（
２ｃａ、　２ｅａ）　；可溶性色素クリーム（２Ｃａ）
。

無Ｉ塩−澱粉寒天　（ＩＳＰ　　＃４培地、ジフコ社）
：増殖良好、白色〜黄色（２ａａ、　２ｉｃ）　：平板
〜隆起、平滑〜僅かに皺、白色気菌糸あり：リバース黄
色（２ｃ＋ａ、　２ｉｃ）　：可溶性色素クリーム（２
Ｃａ）。

グリセリン−アスパラギン寒天　（ＩＳＰ＃５培地、ジ
フフ社）；増殖貧弱〜中庸、クリーム（２ｃａ）、平板
、平滑もしくは分離されたコロニーとして出現；気菌糸
散在、白色；リバースクリーム（２Ｃａｌ可溶性色素な
し。

増殖中庸、クリーム−淡黄色（２ｃａ、　２ｅａ）　：
平板〜僅かに隆起、平滑、白色気菌糸あり：リバース表
面と同じ；可溶性色素なし。

グルコース−アスパラギン寒天　（前出培地＃２）：増
殖中庸〜良好、クリーム−黄色（２ｃａ。

？ａ）：僅か〜中庸の隆起、平滑〜皺、気菌糸なしもし
くは散在、白色；リバース淡黄色（２Ｃａｍ可溶性色素
クリーム（２Ｃａ）。

ゴートンおよびスミスのチロシン寒天　（ゴートンおよ
びスミス、Ｊ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、　６９：１４
７−７５０゜１９５５）　：増殖中庸、クリーム（２ｃ
ａ）、平板〜僅かに隆起、平滑、気菌糸なし：リバース
淡黄色（２ｅａ）；可溶性色素黄色（２ａａ）。

カゼイン寒天　（ゴートンおよびミス、同上）：増殖中
庸〜良好、クリーム（２Ｃａ）、やや隆起、平滑〜僅か
に皺、気菌糸なし：リバース淡黄色＜２１３３）；黄色
（２ｇａ）可溶性色素あり。

ベネット寒天　（ワックスマン、前出。培地３０゜ｐ、
３３１）　：増殖良好、黄色〜暗黄色（２ｉｃ、　２（
Ｉｃ）　：僅か〜中庸の隆起、平滑〜皺；、気菌糸散在
、白色；リバース黄色（２ａａ、　２ｉｃ）　：可溶性
色素黄色（２ｉｃ＞。

エマーソン寒天　（同上、培地＃２８．第３３１頁）：
Ｊｔｌ殖良好、クリーム、黄褐色〜褐色（２ｃａ。

３ｉｃ、　３ｉｅ）　：中庸の隆起、皺、気菌糸なし、
リバース黄色（２ｑａ、　２１ｃ）　：可溶性色素、黄
褐色（３１ｃ）。

栄養寒天　（同上培地＃１４．第３３頁）：増殖中庸、
クリーム＜２Ｃａ）、ｉＷい、平滑、気菌糸なし：リバ
ース、クリーム−淡黄色（２ｃａ、　２ｅａ）　：可溶
性色素なし。

ゼラチン寒天　（ゴートンおよびミーム、Ｊ、　Ｂａｃ
ｔｅｒｉｏｌ、　７３．１５−２７．１９５７）　：増
殖良好、クリーム＜２Ｃａ）、やや隆起、平滑であるが
縁部に皺：気菌糸なし；リバースクリーム（２ｃａ）；
可溶性色素なし。

澱粉寒天　（同上）：増殖良好、クリーム−淡黄色（２
ｃａ、　２ｅａ）　、やや隆起、皺、気菌糸なし；リバ
ース淡黄色（２Ｃａｌ可溶性色素なし。

馬鈴薯・人参寒天　（Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ、　ｔａ
ｂ、　Ｃｌ１ｎ。

Ｈｅｄ、、　７１．９３４−９４４．１９６８．ただし
３０９の馬鈴薯と２．５ｇの人参と２０９の寒天とのみ
を使用する）：増殖中庸、クリーム（２Ｃａ）、白色気
菌糸あり：平板、平滑〜僅かに粒状、リバース無色〜ク
リーム（２ｃａ）；可溶性色素なし。

水道水寒天　（２％）：増殖貧弱へ・中庸、クリーム（
２ｃａ）、平板〜深部、平滑：気菌糸なし〜散在、白色
：リバース無色〜クリーム（２ｃａ）：可溶性色素なし
。

形態的′＃徴　：　ＩＳＰ培地９（炭水化物利用培地）
十蔗糖にて培養の１４日後に形態観察を行なった：白色
シリーズにおける胞子物質；セクション・レクチフレキ
シブル（Ｓｅｃｔｉｏｎ　Ｒｅｃｔｉｆｌｅｙ：１ｂｌ
ｅｓ）もしくはセクション・スパイラル（Ｓｅｃｔｉｏ
ｎＳｐｉｒａｌｅｓ）における胞子連鎖、湾曲、鉤状、
ループ状または３回転までの開放螺旋、或いは先端にお
ける不規則物として配置；胞子連ｆＡ１本当り１０〜３
０（２）の胞子；単軸分校した胞子体；胞子楕円〜円筒
状、１．２−２．０（−２，２）ｘｏ、８−１．０（−
１，１）鎖；平滑、走査型電子顕＠鏡により観察。

生化学的特徴　：メラニン生成せず；硫化水素生成；ゼ
ラチン液化；澱粉加水分解；デキストロース硝酸塩にて
硝酸塩から亜硝酸塩まで還元されるが、有機硝酸塩では
還元されない；貧弱な増殖およびジ鳳ンセンのセルロー
スブロスにて分解なし；レビンおよびシエーンラインの
セルロースブロスにて増殖および分解なし：ミルクにて
凝集および清澄；カゼイン消化陽性；チロシン消化陰性
。

炭化水素利用性ニゲルコース、アラビノース、フラクト
ース、マニトール、ラムノース、シュークロース、キシ
ロース、イノシトールおよびラフィノースは全て利用さ
れる。

温度関係　： ２１　　℃　　　２８　　℃　　　３７　　℃　　　４
５℃国秀な増殖　優秀な増殖　良好な増殖　増殖なしノ
ビメリン酸とグルコースとマンノースとを含有した。

培養物Ｎ７６５−２１は白色の胞子、陰性のメラニン反
応および湾曲型、鉤型、ループ型または３回までの開放
螺旋型における平滑胞子を特徴とする。

基質菌子はクリーム、淡黄色〜黄色であった。クリーム
、黄色もしくは黄褐色の色調以外には明確な可溶性色素
は生産されなかった。培養物はグルコース、アラビノー
ス、フラクトース、イノシトール、マニトール、ラフィ
ノース、ラムノース。

シュークロースおよびキシロースを利用した。全菌体加
水分解物は、［Ｌ−ジアミノピメリン酸の存在と診断性
糖の不在を示す。

上記種類のストレプトミセスと比較して、培養物８７６
５−２１は　Ｓ、　ｐｓｅｕｄｏｑｒｉｓｅｏｌｕｓ　
。

Ｓ、　５ＣＩｅｒＯｔｉａｌｔｌＳおよびＳ、　ｆｌｏ
ｃｃｕｌｕｓに関連する。これはシュークロースおよび
ラフィノースの利用性においてＳ、　　ｓｅｕｄｏｇｒ
ｉｓｅｏｌｕｓとは相違する。さらに、歇密な胞子連鎖
でなく菌核およびその開放連鎖を形成しない点において Ｓ、　５ｃｌｅｒｏｔｉａｌｕｓとは相違する。

培養物８７６５−２１とＳ、　ｆｔｏｃｃｕｌｕｓ＾Ｔ
ＣＣ２５４５３とを対比すると、両省は互いに形態学的
、培養学的および生化学的に類似する。しかしながら、
培養物８７６５−２１は陽性の澱粉加水分解、右目硝酸
塩を還元しないこと、ジエンセンのセルロースブロスに
おける良好でなく貧弱な増殖、ミルクをペプトン化しな
いこと、４５℃にて増殖しないこと、およびラムロース
の利用性が疑わしくなく陽性であることにおいてＳ、　
ｆｌｏｃｃｕｌｕｓとは相違する。

使用した培地の殆んどにつき、培養物Ｎ７６５−２１は
全くまたは殆んど気菌糸を生産しないのに対し、Ｓ、　
ｆｌｏｃｃｕｌｕｓは５富な気菌糸を生産した。培養物
Ｎ７６５−２１の基質菌糸にはエマーソン寒天にて黄色
であり、かつカゼイン寒天およびチロシン寒天にて淡黄
色であるが、Ｓ、　ｆｌｏｃｃｕｌｕｓのそれはエマー
ソン寒天にて暗褐色、カゼイン寒天にて黄褐色かつチロ
シン寒天にて褐色である。

る種の培地にて暗色、たとえばエマーソン寒天およびチ
ロシン寒天にて暗褐色であるが、カゼイン寒天にて暗褐
色であった。

上記データに基づき、培養物Ｎ７６５−２１は５ｔｒｅ
ｐｔｏｎｙｃｅＪ！の一員であると考えられ、５ｔｒｅ
ｐｔｏｉｙｃｅｓ　ｓｐ、と命名した。これは、受託番
号へＴＣＣ５３８６２としてアメリカン・タイプ・カル
チャー・コレクションに寄託されている。

本発明の抗生物質化合物（丁）は本発明による５ｔｒ６
１Ｄｔ０１ＶＣｅＳ　Ｓｐ、によって容易に産生され、
その際約２４〜約３６℃にて深部条件下で撹拌および通
気しながら、たとえば蔗糖、ｉｌｌ粉、グリセリンのよ
うな炭水化物源：たとえば大豆ミール、カザミノ酸、酵
母抽出物のような有機窒素物質；たとえば穀類可溶物、
魚粉、綿実粉のような成長物質：たとえば鉄、コバルト
、銅、亜鉛などの微量元素を含有する無Ｒ塩；並びに緩
衝剤としての炭酸もしくはｙＪＡＭカルシウム、よりな
る培地にて増殖させる。増殖が完了した後、抗生物質は
全ブロスをたとえばｎ−ブタノール、メチルイソブチル
ケトンもしくはりｏｐホルムのような有機溶剤で４．０
〜８．０の範囲のｐＨにて抽出し；沈澱した抗生物質を
含有する菌糸を戸別し、かつｔ液を捨て、或いは単に全
プロスを噴霧乾燥もしくは凍結乾燥することにより容易
に回収される。或いは、菌糸または全乾燥ブロスを前記
有ｌ１１溶液の１種で抽出する。

精製された抗生物質化合物は所望ならば標準的な濃縮法
、塩もしくは遊離酸の形成法、クロマトグラフィー法、
沈澱および／または結晶化など下記実施例の方法によっ
て有機抽出物から単頭される。

この発酵を行なう通常の方法においては、先ず最初に５
ｔｒｅｐｔｏｌｙｃｅｓ　ｓｐ、ＡＴＣＣ５３８６２が
接種されているスラントもしくはルークス壜から適する
培地上で増殖している植物性細胞を掻取って接種物とす
る。得られた植物性細胞を、次いで同じく適する増殖培
地を含有した振どうフラスコもしくは接種タンクに接種
すべく用いる。或いは、接種タンクには振どうフラスコ
から接種する。適当な増殖期間（一般に振どうフラスコ
においては１２０〜１４４時間、および接種タンクにお
いては１６８〜１９６時間）の後、同じく適する増殖培
地を含有する発酊槽に無菌条件下で振どうフラスコもし
くは接種タンクからの植物性ブロスを接穂する。増殖（
一般に約１２０〜１９６時間）の完了後、抗生物質化合
物を粗製もしくは純粋型で所望に応じ回収し、これは一
般に上記した方法のいずれかにより、或いは下記に例示
する特定方法によって行なわれる。

式（Ｉ）の化合物は標準法によりインビトＯの抗菌活性
につき試験され、そのＷＡ１種もしくはそれ以上の微生
物に対する最小阻止濃度（ＭＩＣ）（ｐ！ｉ／ａｅ）を
測定する。この種の方法の１つはＩｎｔｅｒｎａｔｉｏ
ｎａｌ　Ｃｏ１１ａｂｏｒａｔｉｖｅ　５ｔｕｄｙ　ｏ
ｎ＾ｎｔｉｂｉｏｔｉｃ　　５ｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　
　Ｔｅ５ｔｉｎｏ　　（Ｅｒｉｃｃｓｏ口５ｅｃｔｉｏ
ｎ　Ｂ：６４−１３８　［１９７１］により推奨された
ものであって、脳・心臓潅流（ＢＨ！　）寒天および接
種複製ｇ、置を用いる。１晩の増殖チューブを標準接種
物として使用すべり１００倍希釈する（約０．００２ｄ
における２０．０００〜１００，０００　ｉｌ！Ｉの菌
体を寒天表面上にｉｔ置する。２０ｍ１の８旧寒天／皿
１枚）。試験化合物における１２個の２倍希釈物を用い
、試験薬剤の初期ｉ１１度を２００履／威とする。プレ
ートを１８時間後に３７℃で測定する際には、単一コロ
ニーを無視する。試験微生物の感受性（ＭＩＧ＞を、肉
眼により判定して増殖の完全阻止を発生しうる最低化合
物濃度として認める。他の多環式エーテル抗生物質と同
村に、式（Ｉ）の本発明による化合物は典型的にはグラ
ム陽性抗菌活性を示すと共に、ＴｒｅｐＯｎｅｌｌａ　
　ｈｖｏｄｖｓｅｎｔｅｒｉａｅに対する活性（豚赤痢
の作用剤）を示し、それらを第（Ｉ）表に示す。

第　　　　■　　　表 へ９１ユｉ　　　Ｉ）ＹＯｇ６！ｎｅｓ　　　　　　　
１４ＤＯＯ２０，３９未満ＴｒｅｐＯｎ１３１１ａ　　
　ｈｙｏｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ　　９４ＡＯＯ７０，
３９未満式（Ｉ）の化合物およびその塩の雛におけるコ
クシジウム感染に対する作用データを、次の方法によっ
て得た。３〜５羽の１０日令の病原を持たない白色レグ
ホーンコツケレル雛の群に、化合物（Ｉ＞またはそのナ
トリウムおよび／またはカリウム塩を均一分散させて含
有するマツシュ餌を与えた。この餌で２４時間装いた後
、６雛に試験されるＥｉｒａｅｒｉａの特定菌秤の卵母
細胞を経口接種した。

他の群の３〜５羽１０日令雛には、化合物（Ｉ）もしく
はその塩を含まない同様なマツシュ餌を給餌した。これ
らにも２４時間後に感染させ、かつ感染比較として用い
た。さらに、３〜５羽の１０日日令上りなる他の群には
、抗生物質を含まない同じマツシュ餌を給餌し、かつコ
クシジウムを感染させなかった。これは正常な比較とし
て作用する。処理の結果をユ、　ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ
の場合には５日後に評価し、かつ他の全ての微生物につ
いては６日後に評価した。

抗コクシジウム活性を測定するために用いる基準は、Ｅ
、　ｔｅｎｅｌｌａについてはＪ、　Ｅ、　ｔｙｎｃｈ
。

”Ａ　Ｎｅｗ　Ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｐｒ１ｌ
ａｒｙ　Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆＡｎｔｉｃｏｃｃ
ｉｄｉａｌ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ”　、　Ａｎ、　　Ｊ、
　Ｖｅｔ　。

Ｒｅｓ　、、２２．３２４−３２６．１９６１にしたが
いＯ〜４の病巣尺度により、また他の様類についてはＪ
、Ｊｏｈｎｓｏｎ　　ａｎｄ　Ｉｔ４．Ｈ，Ｒｅ１ｄ、
”＾ｎｔ　１ｃｏｃｃ　ｉｄ　ｉａ　ＩＤｒｕｇｓ、　
Ｌｅｓｉｏｎ　Ｓｃｏｒｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ
　ｉｎ　Ｂａｔｔｅｒｙａｎｄ　Ｆｌｏｏｒ　Ｐｅｎ　
Ｅｘｐｅｒｉｎｅｎｔｓ　ｉｎ　Ｃｈｉｃｋｓ　”　、
　Ｅｘｐ　。

Ｐａｒａｓｉｔ、、２８．３０−３６．１９７０により
考案された尺度システムの改変によりＯ〜３の尺度とし
た。それぞれ処置された群の病巣尺度を、感染比較の病
巣尺度により割輝して活性を測定する。この試験におい
て、化合物（Ｉ）およびその陽イオン塩は、Ｅｉ１１６
ｉｒｉａ　　’ｔ１３ｎｅｌｌａ　、　　’Ｅ、　ａｃ
ｅｒｖｕｌｉｎａ。

Ｅ、　ｂｒｕｎｅｔｔｉおよびＥ、　ｎｅｃａｔｒｉｘ
の家禽における感染に対し、約２０〜１００　ｐｐｌの
レベルで雛のマツシュ餌に混入した際に優秀な活性を示
した。たとえば、感受性Ｅ、　ｔｅｎｅｌｌａに対し、
式（Ｉ）の化合物は５０　ｐｐｎ程度の低い投与量にて
１００％の病巣抑制を示した。

さらに、本発明による式（Ｕ）の化合物は一般に、たと
えばハミル等による上記米国特許第４．５８２，８２２
号にあるような、ニカルバチン、　４．４’−ジニトロ
力ルバニリードもしくはナフタレンアミンのような成る
種の他の公知抗コクシジウム剤と組合せても有用である
。

家禽におけるコクシジウム症の予防もしくは抑制には、
本発明の化合物を家禽に対し適当なキャリヤにて経口投
与する。便利には、薬物を単に飲料水または家禽餌に混
入して、この薬剤の治療投与量を飲料水もしくは家禽餌
と共に摂取させる。

薬剤を飲料水中に好ましくは液体ａ厚物として直接計ｆ
ｆｉすることができ、或いは餌にそのまま、或いはプレ
ミックスもしくは濃厚物として直接に添加することもで
きる。キャリヤ中の治療剤のプレミックスもしくはａ厚
物は、試料中に薬剤を混入する目的で一般的に用いられ
る。治療剤は実質的に純粋な形態（たとえば遊離酸もし
くは医薬上許容しうるその塩）とすることができ、或い
はたとえば湿潤もしくは乾燥菌糸もしくは乾燥全ブ０ス
のような検定された粗製型とすることができる。

適するキャリヤは所望に応じ液体もしくは固体であり、
たとえば水、各種のミール、たとえば大豆油ミール、亜
麻仁油ミール、コーンコブミールおよびたとえば家禽餌
に一般的に用いられるような無機物ミックスである。特
に効果的なキャリヤは家禽団自身、すなわち少量割合の
家禽餌である。

キャリヤは、プレミックスを配合する最終間における活
性物質の均一分配を容易化させる。これは、本発明によ
る薬剤が高活性で中色しか必要とされないので重要であ
る。化合物はプレミックス中に充分配合され、かつその
後に餌にすることが重要である。この面において、薬剤
をたとえば大豆油。

いは揮発性弁別溶剤に分配させもしくは溶解させ、次い
でキャリヤと配合させることができる。濃厚物における
活性物質の割合は広範囲で変化しうろことが了解されよ
う。何故なら、最終間における薬剤の伍は、適する割合
のプレミックスを餌と配合して所望レベルの治療剤を得
ることにより調整しうるからである。

高能力の濃厚物は、飼料製造業者により、たとえば大豆
油ミールおよび上記したようなその他のミールなどの蛋
白質キャリヤと配合して家禽に直接給餌するのに適した
濃厚補充物を作成される。

この場合、家禽は通常の食餌を取ることができる。

或いは、この種の濃厚補充物を家禽６料に直接添加して
、栄養学上バランスのとれた治療上有効レベルの１梯も
しくはそれ以上の本発明による化合物を含有した仕上餌
を作成する。混合物は、たとえば二重シェルブレンダー
のような標準法により充分配合して均質性を砿保する。

家禽に使用するには、上記化合物の使用レベルは神々異
なるＩＩ！境の下で変化する。成長期には、すなわち雛
については最初の５〜１２週間に際し、連続した低レベ
ルの薬剤投与が効果的な予防手段である。＆ｖ認された
感染の治療には、それより高いレベルが感染を克服する
のに必要である。飼料における化合物（１）の使用レベ
ルは、一般に約２０〜１００　ｐｐｌ、好ましくは約３
０〜６０　ｐｐｎの範囲である。飲料水で投与する場合
、そのレベルは餌の平均−日消費旦と平均の水の一日消
費吊との重量化をファクターとして、同じ１日の薬剤投
与量を与えるレベルである。

式（Ｉ）の化合物およびその塩により豚もしくは牛にお
ける成長促進および／または餌料用効率が増大する状況
は、試験群の動物に種々のレベルの化合物（Ｉ）もしく
は塩を餌として給餌することにより直接に測定すること
ができる。或いは、英国特許第１，１９７，８２６号公
報は餌における抗生物質を評価するためのインビトロの
反勇胃法を詳述している。

豚み痢の予防もしくは治療または牛もしくは豚における
成長促進および／または飼料利用効率の増大に使用する
には、式（Ｔ）の化合物またはその塩を好ましくは飼料
添加剤として投与する。家禽飼料の製造につき上記した
と全く同様な方法により作成された餌は、治療剤を均一
分散させた餌の製造と同じ注意を要する。牛もしくは豚
の餌における化合物（Ｉ＞の使用レベルは、一般に約２
０〜１００　ｐｐｎの範囲である。反易胃動物において
、式（Ｉ）の化合物は反部胃袋に保持される塊として経
口投与することができ、治療剤をほぼ一定速度で長時間
にわたり（ｌことえば４〜８週間にわたり）放出させ、
飼料における上記１日投与伍に等しい投与量を与えるこ
とができ、すなわち：平均１日投与Ｆｌ　（ｔｒ＋９）
　＝　（２Ｏ−１ｏｏ）ｐｐｎ　ｘ　平均１日餌消費（
Ｋｙ　）。

この種の調節放出間の例はカージナルに係る米国特許第
４，６０１，８９３号に記載されている。

以下、実施例により本発明をさらに説明する。

しかしながら、本発明はこれら特定の実施例のみに限定
されないことを了解すべきである。

実施例１ Ｓｔｒｅｐｔｏｒａｙｃｅｓ　ｓｏ、　　ＡＴＣＣ５３
ａ６２の発酵ナトリウム塩としての化合物（Ｉ）の単離
スラントもしくはルークス壜における固体培地にＡＴＣ
Ｃ５３８６２培養物を接種することにより、ストレプト
ミセスＳｐ、を増殖させた。その際には次の組成で作成
された＾ＴＣＣ培地Ｎｏ、１７２を用いた。

ｇ／ρ グルコース　　　　　　　　　　　　　１０可溶性澱粉
　　　　　　　　　　　　　２０酵母抽出物　　　　　
　　　　　　　　５力ゼイン酵素加水分解物　　　　　
　　　５炭酸カルシウム　　　　　　　　　　　１蒸溜
水、　１ｏｏｏ威まで； ｐＨ７，０、ＫＯＨニ、Ｊ：、ル：　”４天添加　　　
２゜その間、次の培地のいずれかを用いて振どうフラス
コを作成した： Ｃ’　　　　　ｇ＃！　　　　　ＪＤＹＴＴ　　　　ｓ
／ｘセレロース　　　　１０　　　　　　セレロース　
　　　１０大　豆　粉　　　　　１０　　　　　　　コ
ーンスターチ　　　　　５コ　−　ン　　　　　５　　
　　　　コーンスターブリガ−５発酵固体 コーンスターチ　　　１０　　　　　　　カゼイン酵素
　　　　　　５塩化ナトリウム　　　５　　　　　　　
加水分解物塩化コバルト　　　０．００２　　　　　ｍ
化コバルト　　　　　　０．００２炭酸カルシウム　　
　１　　　　　　炭Ｍカルシウム　　　　　３培ｊ［！
ｉ　１００ｉを３００ｄの振とうフラスコに分配し、か
つ１２０℃および１５　ｐｓｉにて３０分間滅菌した。

冷却後、培地に上記ストレプトミセスｓｐ、スラントＪ
ａ張物から掻取られた植物性菌体懸濁物を接秤した。こ
れらフラスコを１．５〜２．５インチの変位と毎分１５
０〜２００サイクル（ＣＰ　ｔｖｌ　）とを有する振ど
う器上にて２８℃で５〜７日間にわたり振とうした。

その間、５１の発酵槽を作成し、これは上記Ｃ′もしく
は１．ｆＤＹＴＴ培地または次の培地の１梯を３２含有
する； Ｕ　Ｋ　１−２　　　　　　　　　　　　　９　／　１
セレＯ−ス　　　　　　　４５ 大　　　　豆　　　　粉　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　１０コーンスチーブリカ　　　　　　　　　
１０塩化コバルト　　　　　　　　　０．００２硫酸マ
グネシウム　　　　　　　　　　　０．１０炭酸カルシ
ウム　　　　　　　　　　　　３硫酸マンガン　　　　
　　　　　　０．１０硫酸第二鉄　　　　　　　０．１
０ 消泡剤（ポリプロピレングリコール、Ｐ２Ｏ００。

１０重但％の酸化エチレンを含有する、１ｄ）を添加し
、槽を密封しかっ　１２０’Ｃおよび１５　ｐｓｉにて
４５分間殺菌した。次いで、冷却された光酵槽に１本の
振どうフラスコ（約３％接種）をＩｌｌし、３０’Ｃに
て１２０〜１６８時間にわたり光酵させ、その際に毎分
１７００回転（ＲＰＭ）で撹拌すると共に液体容積の単
位当り毎分１容積の空気の通気速度とした。

発酵が完了したＦ（抗生物質ディスク分析対Ｂ、　５ｕ
ｂｔｉｌｉｓ　ＡＴＣＣ６６３３に基ツク）、発ｉＷ８
停止させかつ珪藻土により自然ｐＨにて濾過した。を過
ケーキをメタノール中にスラリー化させ、減圧８１棉し
、２〜３倍容積の水で希釈し、次いで１７３〜１／２容
積のメチルイソブチルケトンもしくはｎ−ブタノールの
いずれかで２回抽出した。溶剤層を吸引もしくは遠心分
離により水相がら分離し、減圧下で噴ｎ濃縮して式（１
）の抗生物質を租製望にて粘性油として得た。

ブロスおよびその後の回収流の生物活性を、を用いて追
跡した。ブロスおよび回収流における成分は、溶出剤と
して酢酸エチルを用いるアナルテク・シリカゲルＧＦプ
レートを用いて可視化させることができる。展開された
プレートにワニリン試薬（１タノール７５−および８５
％ｙＩ４酸２５ｄにおける３ｇのワニリン）を噴霧し、
かつ８０℃まで加熱した。式（Ｉ）の抗生物質が橙褐色
スポットとして表われた。さらに、展開した口Ｃプレー
トも２゜３．５−トリフェニル−２日−テトラゾリウム
クロライド・−水塩が添加されている。ｓ、　ａｕｒｅ
ｕｓもしくはＢ、　５ｕｂｔｉｌｉｓのいずれかを接種
した寒天を重ねて３１℃で１６時間培養し、抗生物質を
可視化させることができる（桃色背景に対し白色スポッ
ト）。

第２の光重において、約１８０ｆｌの発酵ブロスを含有
する６０個のジャーフッメンタ−を１７２容積のメチル
イソブチルケトンでの抽出により回収し、溶剤の抽出お
よび濃縮によって分離し、３１．６ｇを得た。固体をク
ロロホルム、次いで０．５％、１％および最終的に２％
のＣＨＣｊ３中のＣＨ３０）−４で濃度勾配溶出させる
シリカゲルにてクロマトグラフにかけた。活性は、酢酸
エチルで展開させるシリカゲルプレートを用いかつ活性
留分をワニリン試薬により８０℃にて可視化させるｔｉ
ｃによって追跡した。イオン透過担体は橙褐色結合とし
て出現する。活性フラクションの濃縮は６．９３の油状
物を与え、これを温ジエチルエーテルから結晶化させて
２．６２ｇの結晶化合物（Ｉ＞を得た。ｆｆＪ液の再処
理により、さらに０．５５９の同じ生成物を得た。

実施例２ 人足発酵 大型発酵槽における天吊発酵を、０．７ｊ！のＣ′もし
くはＪＤＴＹＹ培地を含有する振どうフラスコの作成に
よって行なった。振どうフラスコ接種物ヲ２８℃にて５
〜７日間にわたり発酵させ、かつこれを用いて４０００
　ＪのＴＤＹＴＴ培地を含有する６０００１の光醇槽に
接種した。約１２の接種物をタンクに用いた。７〜１０
日間進行させた後の発酵物を収穫した。

全ブロスを１６００ｊ！のメチルイソブチルケトンによ
り自然ｐＨにて抽出し、かつドラパール分＠ｌｌ器で層
を分離させた。有は抽出物を先ず最初に減圧パンにより
、次いでサイクロン蒸留器および回転蒸光器により減圧
濃縮して８２の油状物を得た。

この油状物を、ヘキサンにスラリー化させたカラム級の
シリカゲルでクロマトグラフにかけた。カラムを酢酸エ
チルで展開させた。上記方法を用いるｔｔｃにより確認
された生成物含有留分を合し、ト 賓ツビングし、かつ残留物を酢酸エチルに溶解し、活性
炭で処理し、かつ濾過した。Ｐ液を希Ｈ３Ｐｏ４と共に
振とうし、次いで二塩基性燐酸ナトリウム緩衝液と共に
振とうしてナトリウム塩を生成させ、Ｎａ、Ｓ０４で脱
水し、濃縮しかつ２４．４９の式（Ｉ）の化合物をナト
リウム塩としてヘプタンの添加により結晶化させた。

口ｃ　Ｒｆ　０．４　（１０：１、ＣＨＣｆｆ　　　：
　ＣＨ３０Ｈ）、０Ｊ５（酢酸エチル）。

Ｃ１３ｎｌｒ　［ＣＤ　ＣＤ　３における化学シフト（
ａｐｌ）、括弧内は水素の個数である］　：　　１８１
．２”（０）　、　１１０．０（０）、　１０６．９（
０）、　９８．３”　Ｔｏ）　、　８５．８”（１）　
、　８５．３（０）　、　８５．２（１）　、　８３．
０’　（１）　、　８２．０（１）　、　７６．４”　
（１）　−、７４，４（１）　、　７０．６（１）　、
　６８．３１（１）　、　６４．９’　（２）　、　５
７．９［３）　、　５６．９（３）　、　４５．０’（
１）　、　４０；６（２）　、　３９．２’　（２）　
、　３７．４（１）　、　３６．グ（１）　、　３５．
６（２）　、　３４．８　　ｆｌ）　、　３４．４＋１
１　、３３．グ（２）　、　３３．２’　＋２）　、　
３１．８’　（１）　、　３０．０（２）　。

２７．４’　（３）　、　２７．２（２）　、　１７．
０（２）　、　１６．８’　（３）　。

１６．０”　（３）　、　　１４．７＋３）　、　１４
．５’　（３）　、　　１１．０’　（３）および１０
．ビ（３）。

廖モ枦ｔンは同一の化学シフトを示すと共にさらに１０
７．０（０）、　８５．２（０）　、　８４．９（１）
　、　８２．５（１）　。

７４．５（１）、７０．４（１）、５７．８（３）、３
７．５（１）、３５．７（２）　、　３４．３（１）　
、　２９．８（２）　、　２７．３（２）および８．１
（３）にもピークを有する。

式（１）の化合物の構造は、Ｘ線結晶解析によって証明
された。

Σ１タレ＼、　７７４１′−゛イン毎−４？し１フ゛゛
′ト代理人弁理士　船　　山　　　武 ′丁わ２ネ山ｉ１己７・−４＜ｉｊ式）１．１何の表示
　　゛１ｉ成２年特訂願第１１５３２９号２、発明の名
称　　酸性多環式エーテル坑生物質３、補正をＪ６省 ４Ｔｌ’ｉどの関係　特許？Ｊシ腑入 名　（り卜　　　　ファイザー・インコーホレイテッド
ｌ＋　、代　理　人　　　東京都ＶＩｉ１区新宿１１Ｆ
１１番１４号　山田ビル（郵便番号１６０）電話（０３
）　　３５４−Ｊ１６２３（６２００）　　　弁理士　
　川　口　酋　雄（ばか２名） ５、補１ＥｆＮ令の日付　平成２年５月２９日６、補正
の対象　　　明ｔａｇ８ ７、補正の内容 ＋１）ｊｌＴ明に浄円した適正な明細方を別紙のとＪ３
り補正する、。

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. （１）式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （ I ） ［式中、Ｍｅ＝ＣＨ＿３かつＰｒ＝ＣＨ＿３ＣＨ＿２Ｃ
   Ｈ＿２である］ を有する化合物、またはその医薬上許容しうる陽イオン
   塩。
2. （２）ナトリウム塩としての請求項１記載の化合物。
3. （３）ストレプトミセスｓｐ．ＡＴＣＣ５３８６２を、
   深部好気性条件下に資化性炭素源および窒素源からなる
   水性栄養培地にて回収可能量の請求項１記載の化合物が
   生成されるまで発酵させることを特徴とする前記化合物
   の製造方法。
4. （４）化合物を発酵培地から分離する請求項３記載の方
   法。
5. （５）沈澱した形態における化合物を、発酵培地のろ過
   により菌糸からなる混合物として回収する請求項３記載
   の方法。
6. （６）化合物を、全発酵酵培地の噴霧乾燥もしくは凍結
   乾燥により粗製型で回収する請求項３記載の方法。
7. （７）豚における赤痢の予防もしくは治療、または牛も
   しくは豚の成長を促進させかつ／またはその飼料利用率
   を向上させるのに有効な量の請求項１記載の化合物を含
   むことを特徴とする牛もしくは豚のための栄養飼料組成
   物。
8. （８）豚もしくは牛の成長促進量または飼料利用効率促
   進量の請求項１記載の化合物を栄養飼料組成物の形態で
   投与することを特徴とする豚もしくは牛における成長の
   促進および／または飼料利用効率の増大方法。
9. （９）家禽におけるコクシジウム感染を抑制するのに有
   効な量の請求項１記載の化合物を含むことを特徴とする
   家禽用の栄養飼料組成物。
10. （１０）資化性炭素源および窒素源を含む水性栄養培地
    にて発酵させた際に回収可能量にて請求項１記載の化合
    物を産生しうることを特徴とするストレプトミセスｓｐ
    ．ＡＴＣＣ５３８６２の生物学上純粋な培養物。