JPH0245498A - グラム陽性菌に作用するペプチド分子 - Google Patents
グラム陽性菌に作用するペプチド分子Info
- Publication number
- JPH0245498A JPH0245498A JP1162507A JP16250789A JPH0245498A JP H0245498 A JPH0245498 A JP H0245498A JP 1162507 A JP1162507 A JP 1162507A JP 16250789 A JP16250789 A JP 16250789A JP H0245498 A JPH0245498 A JP H0245498A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- molecules
- molecule according
- peptide
- molecule
- against gram
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/43504—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
- C07K14/43563—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from insects
- C07K14/43577—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from insects from flies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Food Preservation Except Freezing, Refrigeration, And Drying (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ヒＩ・医薬、獣医薬、植物消毒及び食品産業
の分野に係る。本発明の目的は、グラム陽性菌に作用す
るペプチド分子を提供することである。
の分野に係る。本発明の目的は、グラム陽性菌に作用す
るペプチド分子を提供することである。
昆虫が極めて有効な免疫反応を有し得ることは古くから
知られている０例えば、無菌処置に関して殆ど配慮する
ことなく昆虫にいかなる外科的切開処置を施しても敗血
症を引き起こすおそれは全くない、その理由は、昆虫の
免疫応答によって短時間、即ち約４〜６時間以内に概し
て広い作用スペクトルを有する複数の抗菌性ペプチドが
産生されるからである。
知られている０例えば、無菌処置に関して殆ど配慮する
ことなく昆虫にいかなる外科的切開処置を施しても敗血
症を引き起こすおそれは全くない、その理由は、昆虫の
免疫応答によって短時間、即ち約４〜６時間以内に概し
て広い作用スペクトルを有する複数の抗菌性ペプチドが
産生されるからである。
例えば、鱗翅類からは、免疫応答中に誘発される２種類
の抗菌性ペプチド、即ちセクロビン（ｃｅ−ｃｒｏｐｉ
ｎｅ）及びアタシン（ａｔｔａｃｉｎｅ）が単離されそ
のに極めて類似しまたセクロビンとは凹著に異なる３つ
の分子が単離されその特性が決定された。これらの分子
は、傷害後数時間以内に前記昆虫によりン て合成されｒ全く新しい抗生物質である。これらの３つ
の分子はジブテリシン（ｄｉｐｔｅｒｉｃｉｎｅ）＾、
Ｂ及びＣなる名称で知られており、グラム陰性菌に属す
る細菌に対して広い作用スペクトルをもつ９にの塩基性
抗菌ペプチドである（例えばジブテリシン＾の分子量は
８６２１ダルトンである）、この研究の結果は特に、Ｅ
ｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙｖｏｌ、１７１． ｐｐ、１７〜２２（１
９８８）に発表されている。この文献は、双翅類Ｉ’ｈ
ｏｒｍｉａ ｔｅｒｒａｎｏｖａｅの幼虫から分子を合
成することを主題とする。同様の研究を主題とした刊行
物として、１９８６年７月１５日のＣＯＭＰＴＥＳＲＥ
ＮＤＵＳ ＤＥ Ｌ’＾ＣＡＤＥＭＩＥ ＤＥＳ ５Ｃ
ＩＥＮＣＥＳ ＰＡＲＩＳ、 ｖｏｌ。
の抗菌性ペプチド、即ちセクロビン（ｃｅ−ｃｒｏｐｉ
ｎｅ）及びアタシン（ａｔｔａｃｉｎｅ）が単離されそ
のに極めて類似しまたセクロビンとは凹著に異なる３つ
の分子が単離されその特性が決定された。これらの分子
は、傷害後数時間以内に前記昆虫によりン て合成されｒ全く新しい抗生物質である。これらの３つ
の分子はジブテリシン（ｄｉｐｔｅｒｉｃｉｎｅ）＾、
Ｂ及びＣなる名称で知られており、グラム陰性菌に属す
る細菌に対して広い作用スペクトルをもつ９にの塩基性
抗菌ペプチドである（例えばジブテリシン＾の分子量は
８６２１ダルトンである）、この研究の結果は特に、Ｅ
ｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙｖｏｌ、１７１． ｐｐ、１７〜２２（１
９８８）に発表されている。この文献は、双翅類Ｉ’ｈ
ｏｒｍｉａ ｔｅｒｒａｎｏｖａｅの幼虫から分子を合
成することを主題とする。同様の研究を主題とした刊行
物として、１９８６年７月１５日のＣＯＭＰＴＥＳＲＥ
ＮＤＵＳ ＤＥ Ｌ’＾ＣＡＤＥＭＩＥ ＤＥＳ ５Ｃ
ＩＥＮＣＥＳ ＰＡＲＩＳ、 ｖｏｌ。
３０３ ｎｏ、５ ”５ＥＲＩＥ ｍ ５ＣＩＥ
ＮＣＥＳ ＤＥ Ｌ＾ＶＩＥ”、 ｐｐ。
ＮＣＥＳ ＤＥ Ｌ＾ＶＩＥ”、 ｐｐ。
１５５〜１６０に所収の＾ｃａｄｅｍｉｅ ｄｅｓ ５
ｃｉｅｎｃｅｓ：Ｅ、 ＫＥＰＰＩ等の論文、［免疫学
−昆虫における抗菌性防御メカニズムの研究−双翅類Ｐ
ｈｏｒｍｉａ ｔｅｒｒａｎｏｖａｅの血リンパ液中の
抗菌性ペプチドの単離（ＩＭＭＵＮＯＬＯＧ ＩＥＲｅ
ｃｈｅｒｃｈｅｓ ｓｕｒ ｌｅｓ ｍｅｃａｎｉｓｍ
ｅｓ ｄｅ ｄｅｆｅｎｓｅ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉ
ｅｎｎｅ ｃｈｅｚ ｌｅｓ １ｎｓｅｃｔｅｓ；ｉｓ
ｏｌｅｍｅｎｔ ｄｅｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｔｉｂ
ａｃｔｅｒｉｅｎｓ ｄａｎｓ ｌ’ｈｅｍｏｌｙ
ａｍｐｈｅ ｄｕＤｉｐＬｅｒｅ Ｐｈｏｒｍｉａ
ｔｅｒｒａｎｏｖａｅ）」、及び、ＢＩＯＬＯＧＩＣＡ
Ｌ ＡＢＳＴＲＡＣＴＳ、 ｖｏｌ、８１． ｎ
ｏ、１１，１９８６． ｐｐ、八Ｂ−５５４。
ｃｉｅｎｃｅｓ：Ｅ、 ＫＥＰＰＩ等の論文、［免疫学
−昆虫における抗菌性防御メカニズムの研究−双翅類Ｐ
ｈｏｒｍｉａ ｔｅｒｒａｎｏｖａｅの血リンパ液中の
抗菌性ペプチドの単離（ＩＭＭＵＮＯＬＯＧ ＩＥＲｅ
ｃｈｅｒｃｈｅｓ ｓｕｒ ｌｅｓ ｍｅｃａｎｉｓｍ
ｅｓ ｄｅ ｄｅｆｅｎｓｅ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉ
ｅｎｎｅ ｃｈｅｚ ｌｅｓ １ｎｓｅｃｔｅｓ；ｉｓ
ｏｌｅｍｅｎｔ ｄｅｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｔｉｂ
ａｃｔｅｒｉｅｎｓ ｄａｎｓ ｌ’ｈｅｍｏｌｙ
ａｍｐｈｅ ｄｕＤｉｐＬｅｒｅ Ｐｈｏｒｍｉａ
ｔｅｒｒａｎｏｖａｅ）」、及び、ＢＩＯＬＯＧＩＣＡ
Ｌ ＡＢＳＴＲＡＣＴＳ、 ｖｏｌ、８１． ｎ
ｏ、１１，１９８６． ｐｐ、八Ｂ−５５４。
ｎｏ、１０２７１Ｚ、Ｐｈ１ｌａｄｅｌｐｈｉａ、Ｐｈ
、、ＵＳに所収のＥ、ＫＥＰＰＩ等の論文、「双翅類Ｐ
ｈｏｒｍｉａ Ｌｅｒｒａｎｏｖａｅの血リンパ液中で
誘発される抗菌性タンパク質−１つのタンパク質の精製
及びその可能な起源（Ｉｎｄｕｃｅｄ ａｎｔｉ−ｂａ
ｃｔｅｒｉａｌ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈ
ｅｍｏｌｙｍｐｈ ｏｆ ＰｈｏｒｍｉａＬｅｒｒａｎ
ｏｖａｅ（Ｄｉｐｔｅｒａ）：Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏ
ｎ ａｎｄ ｐｏｓｓｉｂｌｅｏｒｉｇｉｎ ｏｆ ｔ
ｈｅ ｏｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ）」、及び、ｌＮ５ＥＣ
Ｔ ＢＩＯＣＩＩＥＭ １６（２） 、３９５〜４０２
１９８６に所収の論文がある。
、、ＵＳに所収のＥ、ＫＥＰＰＩ等の論文、「双翅類Ｐ
ｈｏｒｍｉａ Ｌｅｒｒａｎｏｖａｅの血リンパ液中で
誘発される抗菌性タンパク質−１つのタンパク質の精製
及びその可能な起源（Ｉｎｄｕｃｅｄ ａｎｔｉ−ｂａ
ｃｔｅｒｉａｌ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈ
ｅｍｏｌｙｍｐｈ ｏｆ ＰｈｏｒｍｉａＬｅｒｒａｎ
ｏｖａｅ（Ｄｉｐｔｅｒａ）：Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏ
ｎ ａｎｄ ｐｏｓｓｉｂｌｅｏｒｉｇｉｎ ｏｆ ｔ
ｈｅ ｏｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ）」、及び、ｌＮ５ＥＣ
Ｔ ＢＩＯＣＩＩＥＭ １６（２） 、３９５〜４０２
１９８６に所収の論文がある。
しかしなから、これらの新規な分子は精製された状態で
グラム陽性菌に対する活性を全くもたないかまたは掻く
微弱にしかもたない。ジブテリシンは対数増殖期の細菌
を死滅させ、ジブテリシンの作用の結果として溶菌が生
じる。
グラム陽性菌に対する活性を全くもたないかまたは掻く
微弱にしかもたない。ジブテリシンは対数増殖期の細菌
を死滅させ、ジブテリシンの作用の結果として溶菌が生
じる。
上記の文献は、アミノ酸解析によってシスティンのない
ペプチド配列が推定されること、及び得られた分子が分
子量約９０００ダルトンを有することを記載している。
ペプチド配列が推定されること、及び得られた分子が分
子量約９０００ダルトンを有することを記載している。
これらのペプチド分子はグラム陰性菌のみに抗菌活性を
有する。
有する。
本発明の目的はグラム陽性菌に対して作用するペプチド
分子を提供することである。
分子を提供することである。
本発明の分子は、免疫された昆虫Ｐｈｏｒｍｉａ ｔｅ
ｒｒａｎｏｖａｅの幼虫によって合成され３つのジスル
フィド架橋に関与している６つのシスティンを含む４０
個のアミノ酸から成る塩基性ペプチドであると定義する
ことができ、グラム陽性菌に対する抗菌活性を有する。
ｒｒａｎｏｖａｅの幼虫によって合成され３つのジスル
フィド架橋に関与している６つのシスティンを含む４０
個のアミノ酸から成る塩基性ペプチドであると定義する
ことができ、グラム陽性菌に対する抗菌活性を有する。
以下の記載から本発明がより十分に理解されよう。以下
の記載では本発明の好ましい実施例を添付の概略図に基
づいて非限定的に説明する。
の記載では本発明の好ましい実施例を添付の概略図に基
づいて非限定的に説明する。
本発明の新規なペプチド分子を以下の手順で単離しその
特性を決定する。
特性を決定する。
ＳｆＡ菌培養物、例えば対数増殖期のエンテロバクタ−
争クロアカニ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃ
ａｅ）の培養物で予め汚染した針で穿刺して双翅類Ｐｈ
ｏｒｍ ｉ ａｔｅｒｒａｎｏｖａｅの３期の幼虫に傷
をつけ免疫プロセスを開始させる。２４時間後、クチク
ラ層を切開して血液を採取し、４℃、３６００（ｈで２
０分間遠心して血球を除去する。得られた上清に酢酸を
加え１００°Ｃで４分間加熱する。沈降した熱不安定性
タンパク質を遠心後、ｐＨ６，８の４０ｍＭの酢酸アン
モニウムバッファで平衡させたカチオン交換クロマ１〜
グラフイーカラムに上清を導入する。同じバッファでカ
ラムを洗い、固定されたタンパク質をモル濃度４０ｍＭ
〜５００ｎ＋Ｈの酢酸アンモニウム溶液の直線勾配で溶
出する。この公知手順を用いると、細菌を播種した寒天
またはガラクタン上の拡散試験によってミクロコツカス
・ルテウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ １ｕｔｅｕｓ）
に対して活性のペプチドを単離し得る。添叶の第１図は
対応する分離のグラフを示す。このグラフでは左側の縦
軸に抗菌活性をｍｍ（拡散直径）で示し、右側の縦軸に
バッファ濃度を１０””ｍＭで示し、横軸にバッファ容
量を１０− ”ｚｅで示す。
争クロアカニ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃ
ａｅ）の培養物で予め汚染した針で穿刺して双翅類Ｐｈ
ｏｒｍ ｉ ａｔｅｒｒａｎｏｖａｅの３期の幼虫に傷
をつけ免疫プロセスを開始させる。２４時間後、クチク
ラ層を切開して血液を採取し、４℃、３６００（ｈで２
０分間遠心して血球を除去する。得られた上清に酢酸を
加え１００°Ｃで４分間加熱する。沈降した熱不安定性
タンパク質を遠心後、ｐＨ６，８の４０ｍＭの酢酸アン
モニウムバッファで平衡させたカチオン交換クロマ１〜
グラフイーカラムに上清を導入する。同じバッファでカ
ラムを洗い、固定されたタンパク質をモル濃度４０ｍＭ
〜５００ｎ＋Ｈの酢酸アンモニウム溶液の直線勾配で溶
出する。この公知手順を用いると、細菌を播種した寒天
またはガラクタン上の拡散試験によってミクロコツカス
・ルテウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ １ｕｔｅｕｓ）
に対して活性のペプチドを単離し得る。添叶の第１図は
対応する分離のグラフを示す。このグラフでは左側の縦
軸に抗菌活性をｍｍ（拡散直径）で示し、右側の縦軸に
バッファ濃度を１０””ｍＭで示し、横軸にバッファ容
量を１０− ”ｚｅで示す。
次に、得られた分子を商品名Ｓｅｐ Ｐａｃｋ Ｃｌ８
Ｗａｔｅｒｓとして公知のカートリッジで濾過し、Ｂａ
ｋｅｒ−Ｂｏｎｄ Ｃ１８１／ＩＰ型の公知のカラムで
逆相高性能液体クロマトグラフィー（通常は逆相１１Ｐ
Ｌｃと指称される）にかけアセトニトリル直線勾配で溶
出することによって精製する。添付の第２図及び第３図
は、本発明の２つの分子の精製の進行を保持時間（横軸
）及びアセトニトリルの濃度の変化と共に示すグラフで
ある。
Ｗａｔｅｒｓとして公知のカートリッジで濾過し、Ｂａ
ｋｅｒ−Ｂｏｎｄ Ｃ１８１／ＩＰ型の公知のカラムで
逆相高性能液体クロマトグラフィー（通常は逆相１１Ｐ
Ｌｃと指称される）にかけアセトニトリル直線勾配で溶
出することによって精製する。添付の第２図及び第３図
は、本発明の２つの分子の精製の進行を保持時間（横軸
）及びアセトニトリルの濃度の変化と共に示すグラフで
ある。
前記方法によって、第１図から第３図のビークＡ及びＢ
によって示される抗Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ Ｉｕｔｅ
ｕｓタンパク質が純粋な形態で得られる。
によって示される抗Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ Ｉｕｔｅ
ｕｓタンパク質が純粋な形態で得られる。
本発明の１つの特徴によれば、分子は以下のペプチド配
列、 １ １０ ２０
３０＊ ４０ＡＴＣＤＬＬＳＧＴＧ
［Ｎ１１ＳＡＣＡＡＨＣＬＬＲＧＮＲＧＧＹＣＮＧＫ
ＧＶＣＶＣＲＮ （八）を有する。
列、 １ １０ ２０
３０＊ ４０ＡＴＣＤＬＬＳＧＴＧ
［Ｎ１１ＳＡＣＡＡＨＣＬＬＲＧＮＲＧＧＹＣＮＧＫ
ＧＶＣＶＣＲＮ （八）を有する。
本発明の別の特徴によれば、分子は以下のペプチド配列
１ １０ ２０
３０ ＊ ４０ΔＴＣＤＬＬＳＧ
ＴＧ ＩＮＨＳＡＣ＾＾ＨＣＬＬＲＧＮＲＧＧＹＣＮ
ＲＫＧＶＣＶＣＲＮ （Ｂ）を有する。
３０ ＊ ４０ΔＴＣＤＬＬＳＧ
ＴＧ ＩＮＨＳＡＣ＾＾ＨＣＬＬＲＧＮＲＧＧＹＣＮ
ＲＫＧＶＣＶＣＲＮ （Ｂ）を有する。
前記ペプチド配列の特徴は、相同の位置に６つのシステ
ィンが存在し、木を付した残基３２以外のすべての残基
が等しいことである。第１の分子では残基３２がグリシ
ンで第２の分子では残基３２がアルギニンである。この
置換によってカチオン交換クロマトグラフィーにおける
分子（＾）と（Ｂ）の挙動の違いが説明できる。即ち後
者の分子（Ｂ）はアルギニン残基を有するので正電荷が
より大きい。添付の第１図のビークＡ及びＢは、前記の
第１分子及び第２分子に夫々対応する。
ィンが存在し、木を付した残基３２以外のすべての残基
が等しいことである。第１の分子では残基３２がグリシ
ンで第２の分子では残基３２がアルギニンである。この
置換によってカチオン交換クロマトグラフィーにおける
分子（＾）と（Ｂ）の挙動の違いが説明できる。即ち後
者の分子（Ｂ）はアルギニン残基を有するので正電荷が
より大きい。添付の第１図のビークＡ及びＢは、前記の
第１分子及び第２分子に夫々対応する。
算）分子量とを比較すると、分子（＾）では測定値４０
６０．２２ダルトンで予想値４０６０．２１ダルトンで
あり、分子（Ｂ）では測定値４１５９．１６ダルトンで
予想値４１５９．３５ダルトンであった。測定値は６つ
のシスティンの酸化形に対応する。即ち確定された一次
構造から計算された分子構造に比較して質量単位が６つ
少ない。このことは３つのシスティン架橋が形成されて
いることを示す。分子（＾）のモノアイントーブの質量
は予想値４０５７．８１ダルトンに対して測定値４０５
７．９０ダルトンであった。
６０．２２ダルトンで予想値４０６０．２１ダルトンで
あり、分子（Ｂ）では測定値４１５９．１６ダルトンで
予想値４１５９．３５ダルトンであった。測定値は６つ
のシスティンの酸化形に対応する。即ち確定された一次
構造から計算された分子構造に比較して質量単位が６つ
少ない。このことは３つのシスティン架橋が形成されて
いることを示す。分子（＾）のモノアイントーブの質量
は予想値４０５７．８１ダルトンに対して測定値４０５
７．９０ダルトンであった。
寒天またはガラクタン上の播種テストによってように十
分に低い分解能（Ｒ＝１０００）を使用する正の高速原
子衝撃（ＦＡＢ）モードの質量分析計で行なった。これ
らの条件下に測定された分子量と予想（計に対しテスト
当たり８００ｎｙの割合の分子（＾）の抗菌スペクトル
を作成した。
分に低い分解能（Ｒ＝１０００）を使用する正の高速原
子衝撃（ＦＡＢ）モードの質量分析計で行なった。これ
らの条件下に測定された分子量と予想（計に対しテスト
当たり８００ｎｙの割合の分子（＾）の抗菌スペクトル
を作成した。
１、ミクロコツカスリレテラス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕ
ｓ １ｕｔｅｕｓ）２、巨大菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ＋
＊ｅｇａｔｅｒｉｕｍ）３、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
５ｕｂｔｉｌｉｓ）Ｓ３株４、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌ
ｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ）ｔ４ｏ２０１株５．枯草菌（
Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ）６６３３株６、
枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ）０８１
２２株７、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉ
ｓ）ＱＢ９３５株８ 、 Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒ
ｉｎｇｉｅｎｓｉｓ菌ＳＣ株９、 Ｂａｃｉｌｌｕｓ
Ｌｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ菌Ｒｉｆ’株１０、 Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ菌５３１３
７株１１、黄色ブドウ球菌（ＳＬａｐｈｙｌｏｃｏｃｃ
ｕｓ ａｕｒｅｕｓ）１２、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃ
ｈｉａ ｃｏｌｉ）０３１株１３、大腸菌（Ｅｓｃｈｅ
ｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）８２８１０１１株１４、大腸
菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｔ＋ｉａ ｃｏｌｉ）７６２４株
１５、エンテロバクタ−・クロアカニ（Ｅｎ ｔｅｒｏ
ｂａｃ ｔｅｒｃ Ｉｏａｃａｅ）β１２株 １６、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉ
ｎｏｓａ）。
ｓ １ｕｔｅｕｓ）２、巨大菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ＋
＊ｅｇａｔｅｒｉｕｍ）３、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
５ｕｂｔｉｌｉｓ）Ｓ３株４、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌ
ｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ）ｔ４ｏ２０１株５．枯草菌（
Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ）６６３３株６、
枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ）０８１
２２株７、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉ
ｓ）ＱＢ９３５株８ 、 Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒ
ｉｎｇｉｅｎｓｉｓ菌ＳＣ株９、 Ｂａｃｉｌｌｕｓ
Ｌｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ菌Ｒｉｆ’株１０、 Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ菌５３１３
７株１１、黄色ブドウ球菌（ＳＬａｐｈｙｌｏｃｏｃｃ
ｕｓ ａｕｒｅｕｓ）１２、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃ
ｈｉａ ｃｏｌｉ）０３１株１３、大腸菌（Ｅｓｃｈｅ
ｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）８２８１０１１株１４、大腸
菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｔ＋ｉａ ｃｏｌｉ）７６２４株
１５、エンテロバクタ−・クロアカニ（Ｅｎ ｔｅｒｏ
ｂａｃ ｔｅｒｃ Ｉｏａｃａｅ）β１２株 １６、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉ
ｎｏｓａ）。
得られた抗菌スペクトルを添付の第４図に示す。
第４図によれば、本発明分子は、ミクロコツカス・ルテ
ウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ １ｕｔｅｕｓ）及び巨
大菌（Ｂａ−ｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａＬｅｒｉｕ＋＊）
のごときグラム陽性菌に対して極めて活性であり、枯草
菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ及び黄色ブドウ
球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）
のごときその他のグラム陰性菌に対してもある程度活性
であるが、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ
）、エンテロバクタ−・クロアカニ（ＥｎＬｅｒｏｂａ
ｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ）及び緑膿菌（Ｐｓｅｕ−ｄ
ｏｓｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）のごときグラム
陰性菌に対しては活性でない。
ウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ １ｕｔｅｕｓ）及び巨
大菌（Ｂａ−ｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａＬｅｒｉｕ＋＊）
のごときグラム陽性菌に対して極めて活性であり、枯草
菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ５ｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ及び黄色ブドウ
球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）
のごときその他のグラム陰性菌に対してもある程度活性
であるが、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ
）、エンテロバクタ−・クロアカニ（ＥｎＬｅｒｏｂａ
ｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ）及び緑膿菌（Ｐｓｅｕ−ｄ
ｏｓｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）のごときグラム
陰性菌に対しては活性でない。
本発明の新規なペプチド分子は医薬を得るために有利に
利用でき、かかる医薬は抗菌剤として使用するのが有利
である。
利用でき、かかる医薬は抗菌剤として使用するのが有利
である。
本発明の別の特徴によれば、新規なペプチド分子はグラ
ム陰性菌に対して殺菌作用を有する。この特徴は、一連
のｉｎ ｖｉｔｒｏテストによって証明された６本発明
分子の主な標的は細菌の細胞質膜である。これらの分子
は殺菌性であるが溶菌性ではない。
ム陰性菌に対して殺菌作用を有する。この特徴は、一連
のｉｎ ｖｉｔｒｏテストによって証明された６本発明
分子の主な標的は細菌の細胞質膜である。これらの分子
は殺菌性であるが溶菌性ではない。
（昆虫名Ｐｈｏｒｍｉａ ｔｅｒｒａｎｏｖａｅにちな
んで）フォルミシン（ｐｈｏｒｍｉｃｉｎｅ）と命名す
るのが好ましい本発明の分子は、グラム陰性菌に特異的
な作用スペクトルをもつ比較的小さいサイズの新規な抗
生物質である。これらの分子の特に有利な用途は食品産
業、植物消毒、ヒト医薬及び獣医薬の分野にある。
んで）フォルミシン（ｐｈｏｒｍｉｃｉｎｅ）と命名す
るのが好ましい本発明の分子は、グラム陰性菌に特異的
な作用スペクトルをもつ比較的小さいサイズの新規な抗
生物質である。これらの分子の特に有利な用途は食品産
業、植物消毒、ヒト医薬及び獣医薬の分野にある。
昆虫から誘発され得る抗菌性ペプチドとして農業食品の
分野で特に有利である。
分野で特に有利である。
本発明のペプチド分子の遺伝子はクローニングすること
も可能であり、遺伝子（または相補的ＤＮ＾）を酵母も
しくはバキュロウィルスのごとき複数の発現系に導入す
るかまたは発酵装置において量産し得る。また、新規な
抗菌特性をもつ突然変異体を単離するための突然変異誘
発プロセスにおいてこれらの分子を使用してもよい。ま
た、病原体に対する植物の耐性を増加するために、これ
らの分子をコードする遺伝・子を植物に導入してもよい
。
も可能であり、遺伝子（または相補的ＤＮ＾）を酵母も
しくはバキュロウィルスのごとき複数の発現系に導入す
るかまたは発酵装置において量産し得る。また、新規な
抗菌特性をもつ突然変異体を単離するための突然変異誘
発プロセスにおいてこれらの分子を使用してもよい。ま
た、病原体に対する植物の耐性を増加するために、これ
らの分子をコードする遺伝・子を植物に導入してもよい
。
本発明のペプチド分子は更に、グラム陰性菌に作用する
セクロピン及びジブテリシンの使用に基づくバイオテク
ノロジー戦略に不可欠な補完要素を構成する。更に、サ
イズが小さく、熱処理及び酸性条件に対して耐性をもつ
こともバイオテクノロジーに極めて有利である。更に、
これらの新規な分子は、食品産業の分野で製造中にはグ
ラム陰性菌汚染防止剤として作用し製造後には防腐剤と
して作用し得る。植物消毒の分野では、常用の化学物賞
の代わりに１吏用され得る。
セクロピン及びジブテリシンの使用に基づくバイオテク
ノロジー戦略に不可欠な補完要素を構成する。更に、サ
イズが小さく、熱処理及び酸性条件に対して耐性をもつ
こともバイオテクノロジーに極めて有利である。更に、
これらの新規な分子は、食品産業の分野で製造中にはグ
ラム陰性菌汚染防止剤として作用し製造後には防腐剤と
して作用し得る。植物消毒の分野では、常用の化学物賞
の代わりに１吏用され得る。
農業食品産業及び製薬産業に特有の要件に適応させるた
めに遺伝子の突然変異誘発後に類似体を選択する場合、
これらの類似体は、製品中にときたま存在する有害な細
菌汚染を防止するために食品業界で常用の酵母菌株また
は乳酸菌株に混入され得る。
めに遺伝子の突然変異誘発後に類似体を選択する場合、
これらの類似体は、製品中にときたま存在する有害な細
菌汚染を防止するために食品業界で常用の酵母菌株また
は乳酸菌株に混入され得る。
植物消毒の分野においては、有効なペプチドを産生する
突然変異体に対応する遺伝子を、選択された植物のゲノ
ムに任意に組み込んで細菌起源の病気に対する耐性を植
物に与えることが可能である。
突然変異体に対応する遺伝子を、選択された植物のゲノ
ムに任意に組み込んで細菌起源の病気に対する耐性を植
物に与えることが可能である。
勿論本発明は本文に記載の参考例及び用途に限定されな
い、記載の参考例及び用途以外の用途並びに記載の参考
例及び用途の変形が本発明の範囲内で可能である。
い、記載の参考例及び用途以外の用途並びに記載の参考
例及び用途の変形が本発明の範囲内で可能である。
第１図は、免疫されたＰｈｏｒｍｉａ ｔｃｒｒａｎｏ
ｖａｅの幼虫によって合成された抗Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃ
ｕｓ １ｕｔｅｕｓ活性をもつタンパク質のカチオン交
換クロマトグラフィー分離を示すグラフ、第２図及び第
３図は、逆相高性能液体クロマｌ−グラフィーによる２
つのペプチド分子の精製を示すグラフ、第４図は本発明
分子の抗菌スペクトルである。
ｖａｅの幼虫によって合成された抗Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃ
ｕｓ １ｕｔｅｕｓ活性をもつタンパク質のカチオン交
換クロマトグラフィー分離を示すグラフ、第２図及び第
３図は、逆相高性能液体クロマｌ−グラフィーによる２
つのペプチド分子の精製を示すグラフ、第４図は本発明
分子の抗菌スペクトルである。
Claims (9)
- （１）免疫された昆虫Ｐｈｏｒｍｉａｔｅｒｒａｎｏｖ
ａｅの幼虫によって合成され３つのジスルフィド架橋で
結合された６つのシステインを含む４０個のアミノ酸か
ら成る塩基性ペプチドであり、グラム陽性菌に対する抗
菌活性を有することを特徴とするペプチド分子。 - （２）以下のペプチド配列 【遺伝子配列があります】（Ａ） を有することを特徴とする請求項１に記載の分子。
- （３）以下のペプチド配列 【遺伝子配列があります】（Ｂ） を有することを特徴とする請求項１に記載の分子。
- （４）医薬を得るための請求項１から３のいずれか一項
に記載の分子の使用。 - （５）植物を消毒処理する物質を得るための請求項１か
ら３のいずれか一項に記載の分子の使用。 - （６）抗菌剤としての請求項１から３のいずれか一項に
記載の分子の使用。 - （７）グラム陽性菌に対する抗菌剤としての請求項１か
ら３のいずれか一項に記載の分子の使用。 - （８）殺菌剤としての請求項１から３のいずれか一項に
記載の分子の使用。 - （９）食品産業の分野におけるグラム陽性菌に対する抗
菌剤としての請求項１から３のいずれか一項に記載の分
子の使用。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8808892A FR2633296B1 (fr) | 1988-06-24 | 1988-06-24 | Molecules peptidiques a action sur les germes a gram positif |
| FR8808892 | 1988-06-24 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0245498A true JPH0245498A (ja) | 1990-02-15 |
Family
ID=9367955
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1162507A Pending JPH0245498A (ja) | 1988-06-24 | 1989-06-23 | グラム陽性菌に作用するペプチド分子 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0349451B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0245498A (ja) |
| AT (1) | ATE86260T1 (ja) |
| AU (1) | AU620410B2 (ja) |
| DE (1) | DE68905097T2 (ja) |
| DK (1) | DK313089A (ja) |
| FR (1) | FR2633296B1 (ja) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2646437B1 (fr) * | 1989-04-28 | 1991-08-30 | Transgene Sa | Nouvelles sequences d'adn, leur application en tant que sequence codant pour un peptide signal pour la secretion de proteines matures par des levures recombinantes, cassettes d'expression, levures transformees et procede de preparation de proteines correspondant |
| JPH04330096A (ja) * | 1990-06-15 | 1992-11-18 | Toray Ind Inc | 生理活性ポリペプチド、その製造方法および抗菌剤 |
| FR2700338B1 (fr) * | 1993-01-11 | 1995-03-31 | Transgene Sa | Nouvelle séquence pro permettant la secrétion de protéines hétérologues à partir d'une cellule de levure. |
| ES2157261T3 (es) | 1993-06-29 | 2001-08-16 | Transgene Sa | Familia de peptidos denominados xenoninas. |
| US5889148A (en) * | 1995-07-06 | 1999-03-30 | Mogam Biotechnology Research Institute | Antibiotic peptides |
| FR2796072B1 (fr) * | 1999-07-08 | 2003-09-19 | Centre Nat Rech Scient | Peptides anti-microbiens de mollusques |
| EP1174027A1 (en) * | 2000-07-17 | 2002-01-23 | HOM Consultancy B.V. | Uses of antimicrobial peptides |
-
1988
- 1988-06-24 FR FR8808892A patent/FR2633296B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-06-21 EP EP89440058A patent/EP0349451B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1989-06-21 DE DE8989440058T patent/DE68905097T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-06-21 AT AT89440058T patent/ATE86260T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-06-23 DK DK313089A patent/DK313089A/da not_active Application Discontinuation
- 1989-06-23 AU AU36748/89A patent/AU620410B2/en not_active Ceased
- 1989-06-23 JP JP1162507A patent/JPH0245498A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE86260T1 (de) | 1993-03-15 |
| DE68905097T2 (de) | 1993-09-09 |
| DE68905097D1 (de) | 1993-04-08 |
| AU620410B2 (en) | 1992-02-20 |
| EP0349451B1 (fr) | 1993-03-03 |
| EP0349451A1 (fr) | 1990-01-03 |
| FR2633296B1 (fr) | 1991-11-15 |
| DK313089A (da) | 1989-12-25 |
| FR2633296A1 (fr) | 1989-12-29 |
| DK313089D0 (da) | 1989-06-23 |
| AU3674889A (en) | 1990-01-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Shai et al. | Diastereomers of cytolysins, a novel class of potent antibacterial peptides | |
| Bíliková et al. | Isolation of a peptide fraction from honeybee royal jelly as a potential antifoulbrood factor | |
| Chou et al. | Design and synthesis of cationic antimicrobial peptides with improved activity and selectivity against Vibrio spp. | |
| Hoffmann et al. | Insect immunity: Galleria mellonella and other Lepidoptera have cecropia-P9-like factors active against gram negative bacteria | |
| Cociancich et al. | Novel inducible antibacterial peptides from a hemipteran insect, the sap-sucking bug Pyrrhocoris apterus | |
| DE69431654T2 (de) | Antimikrobielles peptid aus rinderneutrophilen | |
| AU729228B2 (en) | Insecticidal protein toxins from photorhabdus | |
| DE69932281T2 (de) | Antimikrobiell wirkendes Peptid | |
| Huberman et al. | Antibacterial properties of whole body extracts and haemolymph of Lucilia sericata maggots | |
| Pedron et al. | Novel designed VmCT1 analogs with increased antimicrobial activity | |
| Leite et al. | Phylloseptins: a novel class of anti-bacterial and anti-protozoan peptides from the Phyllomedusa genus | |
| JP2002539820A (ja) | 植物の病気を制御するためのＢａｃｉｌｌｕｓｐｕｍｉｌｕｓ菌株 | |
| CN102369210A (zh) | 抗菌肽 | |
| CN101801995A (zh) | 抗菌肽 | |
| Zhang et al. | Pleurocidin congeners demonstrate activity against Streptococcus and low toxicity on gingival fibroblasts | |
| Ando et al. | Inhibitory effect of sarcotoxin IIA, an antibacterial protein of Sarcophaga peregrina, on growth of Escherichia coli | |
| DE60034879T2 (de) | Lantibiotikum | |
| TWI403330B (zh) | 低血球溶解性之抗微生物胜肽、醫藥組成物及其用途 | |
| CN110317247B (zh) | 一种抗口腔致病菌多肽及应用 | |
| Gálvez et al. | Purification, characterization, and lytic activity against Naegleria fowleri of two amoebicins produced by Bacillus licheniformis A12 | |
| AU620410B2 (en) | Peptide molecules with activity against gram positive microorganisms | |
| Alkotaini et al. | Isolation and identification of a new intracellular antimicrobial peptide produced by Paenibacillus alvei AN5 | |
| CN110272472B (zh) | 一种抗牙龈卟啉单胞菌及具核酸杆菌多肽及应用 | |
| US7052874B2 (en) | Detection of antibacterial activity in excretory secretory product of adult Trichuris suis | |
| WO2016184855A1 (en) | New amino acid sequences with microbicidal activity derived from naja atra cardiotoxin 1 (ctx-1) |