JPH0246034B2 - Pepuchidonoseizoho - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明はトリプトフアンを有するペプチドの製
造法に関する。 トリプトフアンを含有するペプチドを製造する
にあたつては数多くの好ましくない副反応が知ら
れている。例えば、Ｎ―アシルトリプトフアンは
トリフルオロ酢酸中でカルボリンを形成すること
がある。さらにアミノ基の保護基であるｔ―ブチ
ルオキシカルボニル基、ｐ―メトキシベンジルオ
キシカルボニル基などをトリフルオロ酢酸処理に
より、またＯ―ニトロフエニルスルフエニル基を
塩酸処理などにより除去する場合には、インドー
ル基がかなりの割合で、それぞれｔ―ブチル化、
ｐ―メトキシベンジル化およびＯ―ニトロフエニ
ルスルエニル化される。またペプチドの縮合反応
をアジド法で行う場合、トリプトフアンを含むペ
プチドではインドール基がニトロソ化される場合
がある。アミノ基の保護基を酸処理にて除去する
際の副反応を防ぐためには、エタンジオールやチ
オアニソールなどを添加することが行なわれてい
るが、いづれも完全な解決法にはなつていない。
またこれらの副反応を防ぐための総合的な対策と
してインドール基に保護基として、ホルミル基や
ベンジルオキシカルボニル基を導入する試みがな
された。しかし前者はその除去に、特に塩基処理
を必要とすること、また後者では保護基導入の操
作が繁雑であるためか広く利用されるに至つてい
ない。以上のような点を考慮し、本発明者らは、
インドール基への導入が簡単に行なえ、インドー
ル基に関する種々の副反応を防ぎ、かつ通常のペ
プチド合成における中間段階においては充分安定
であり、しかも合成の最終段階で簡単に除去でき
るスルホン型の保護基を種々検討して本発明を完
成したものである。 すなわち、本発明においては一般式 〔式中、R₁およびR₅は水素、メチルまたはメ
トキシを、R₂およびR₄は水素を、R₃はメチルま
たはメトキシをそれぞれあらわし、R₆は水素ま
たはα―アミノ基の保護基をあらわす。ただし、
R₁およびR₅が水素のときR₃はメチルまたはメト
キシを、R₁およびR₅がメチルのときR₃はメトキ
シを、R₁およびR₃がメトキシのときR₅は水素ま
たはメトキシをそれぞれあらわす。〕で示される
トリプトフアン誘導体およびその塩がペプチド製
造に際して用いられる。上記のように、本発明は
トリプトフアンを有するペプチドの製造にあた
り、トリプトフアンのインドール基を一般式 〔式中、R₁，R₂，R₃.R₄およびR₅は前記と同意
義を有する。〕で示される置換ベンゼンスルフオ
ニル基で保護して、ペプチド結合した後、該保護
基を酸で脱離せしめることからなるペプチドの製
造法、である。 一般式（）および（）における置換ベンゼ
ンスルフオニル基としては、ｐ―トルエンスルフ
オニル基、２，４―ジメトキシベンゼンスルフオ
ニル基、ｐ―メトキシベンゼンスルフオニル基、
２，４，６―トリメトキシベンゼンスルフオニル
基、４―メトキシ―２，６―ジメチルベンゼンス
ルフオニル基が挙げられる。 一般式（）のトリプトフアン誘導体は、一般
式（） 〔式中、R₆はα―アミノ基の保護基を、R₇は
カルボキシル基の保護基を表わす〕で示される化
合物と一般式（） 〔式中、Ｘはハロゲンを、R₁，R₂，R₃，R₄，
R₅は前記と同意義を表わす〕で示される化合物
を反応させることによつて得られる。一般式
（）の化合物はＬ体、Ｄ体あるいはラセミ体の
いずれであつてもよく、また一般式（）のＸと
しては塩素が特に好ましい。上記の反応は塩基の
存在下で行なわれ、この反応はたとえば約−10℃
〜＋50℃の範囲の適宜の温度で、溶媒（例、ジメ
チルホルムアミド、ジオキサン、テトラヒドロフ
ラン、ジクロルメタン）を使用して実施してもよ
い。一般式（）のアミノ基の保護基としては、
ｔ―ブトキシカルボニル、カルボベンゾキシ、ト
リチルなどが、またカルボキシル基の保護基とし
ては、ベンジル、低級アルキルエステルなどが挙
げられる。塩素としては、スルホンアミドを形成
する際に常套的に用いられる塩基（例、水素化ナ
トリウム、水酸化ナトリウム）を使用できる。ま
た場合によつては反応に相間移動触媒（例：ベン
ジルトリエチルアンモニウムクロリド、トリオク
チルメチルアンモニウムクロリド、セチルトリメ
チルアンモニウムクロリド）を加えると好結果が
得られる。 こうして得られたアミノ基、カルボキシル基、
およびインドール基が保護された一般式（）の
トリプトフアン誘導体は、所望により、公知の方
法（例、接触還元、トリフルオロ酢酸処理）で遊
離のアミノ基に変えることもでき、また公知の方
法（例、接触還元、トリフルオロ酢酸処理、アル
カリ加水分解）で遊離カルボキシル基に変えるこ
ともできる。さらにこの遊離カルボキシル基は公
知の手段で活性化（例、酸無水物、アジド、活性
エスステル）させることもできる。 一般式（）で示される化合物はトリプトフア
ンのインドール基が保護されたものであつて、ト
リプトフアンを有するペプチドの製造に有利に利
用しうる。 なお、上記アミノ基、カルボキシル基の保護、
活性化する公知手段、ペプチド合成の常套手段に
ついては、例えばM.Bodansky及びM.A.Ondetti
著、ペプチド・シンセシス（Peptide
Synthesis），Inter science，New York，1966
年；F.M.Finn及びK.Hofmann著ザ・プロテイン
ズ（The Proteins）、第２巻、H.Neurath，R.L.
Hill編集、Academic Press Inc.New York，
1976年；泉屋信夫他著“ペプチド合成”丸善(株)
1975年などに記載されている。 次に、ペプチド縮合後、一般式（）で示され
る置換ベンゼンスルフオニル基を酸によつて脱離
させる。脱離の方法としては、公知の酸処理方
法、たとえばフツ化水素やメタンスルフオン酸
で、またはチオアニソール等の存在下にトリフル
オロ酢酸で処理することにより除去できる。フツ
化水素を作用させる場合には、−20℃から室温
（最も普通には０℃）で１時間反応することによ
り、他の保護基と共に、インドール基に導入され
たこれらの置換ベンゼンスルフオニル基も除去さ
れ遊離のトリプトフアン含有ペプチドを与える。
この際、同時にエタンジオールやチオアニソー
ル、アニソールなどを添加しておくことが好まし
い。またトリフルオロ酢酸で除去する場合には、
チオアニソールを添加（トリフルオロ酢酸の５〜
50％）し、室温から50℃で２時間程度反応させる
のが好ましい。 本発明方法は、トリプトフアンを有するいかな
るペプチドの製造にも適用できる。例えば生理活
性ペプチドとして有用なACTH、アリテンシン、
ガストリン、ボンベシシン、セルレイン、カルシ
トニン、ガストリン、グルカゴン、ソマトスタチ
ンなどが挙げられる。 本発明のペプチドの製造法において、トリプト
フアンのインドール基を置換ベンゼンスルフオニ
ル基で保護するには、前記の一般式（）に置換
ベンゼンスルフオニル基を導入する方法と同様の
方法が採用しえ、この方法は次のような種々の特
長があり、有利である。 (1) 簡便な処理（フツ化水素など）で短時間に、
ほとんど定量的に該保護基を除去することがで
きる。 (2) 該保護基は特異的選択性を有し、ペプチド合
成の途中の工程で繁用される種々の条件、たと
えばアミノ基の保護基を除去する条件（例、ト
リフルオロ酢酸処理、接触還元）やカルボキシ
ル基の保護基を除去する条件（例、トリフルオ
ロ酢酸処理、接触還元、アルカリ加水分解）に
対し分解されぜずきわめて安定である。 (3) 液相法によるトリプトフアン含有ペプチドの
合成は勿論のこと固相法の場合にも同様に有利
に使用しうる。 (4) ペプチドを高純度、好収率で製造できる。 次に、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に
説明する。なお、本明細書において、アミノ酸、
ペプチド、保護基、活性基等に関し、
IUPACIUB Commission on Biological
Nomenclatureに基づく略号あるいは当該分野に
おける慣用略号で表示する場合がある。それらを
例示する。 Boc：ｔ―ブトキシカルボニル Aoc：ｔ―アミルオキシカルボニル Ｚ ：カルボベンゾキシ Tr：トリチル Tos：ｐ―トルエンスルホニル Tms：２，４，６―トリメトキシベンゼンス
ルフオニル Dmb：２，４―ジメトキシベンゼンスルフオ
ニル Mbs：ｐ―メトキシベンゼンスルフオニル HONb：Ｎ―ヒドロキシ―５―ノルボルネン
―２，３―ジカルボキシイミド ONb：HONbエステル OSu：Ｎ―ヒドロキシスクシンイミドエステル ONP：パラニトロフエニルエステル OBzl：ベンジルエステル DCC：ジシクロヘキシルカルボジイミド Lys：リジン Gly：グリシン Glu：グルタミン酸 Leu：ロイシン Trp：トリプトフアン Gln：グルタミン ASn：アスパラギン Met：メチオニン His：ヒスチジン Arg：アルギニン Val：バリン Ala：アラニン pGlu：ピログルタミン酸 実施例において、アミノ酸に関し、光学異性体
がありうる場合、特に明記しないかぎりＬ体を示
すものとする。また、４―メトキシ―２，６―ジ
メチルベンゼンスルフオニルはMdsと略記するこ
とがある。 参考例 １ Tr―Trp―OBzl（2.15ｇ，4mmol）をＮ，Ｎ―
ジメチルホルムアミド（以下DMFと略す）10ml
に溶かし、窒素ガス気流中、水素化ナトリウム
（鉱物油中含量50％、以下同じ、240mg、5mmol）
を加える。室温にて20分間反応したのち、ｐ―ト
ルエンスルホニルクロリド（950mg，5mmol）を
加える。室温で15時間反応させた後、酢酸エチル
（50ml）を加え１時間撹拌する。水（30ml）を注
意して加え、有機層を分液してとり、これを５％
炭酸水素ナトリウム水、水で洗浄する。硫酸ナト
リウムで乾燥したのち、酢酸エチルを留去する。
残留物をシリカゲル（15ｇ）のカラムクロマトグ
ラフイー（溶媒：トルエン）にて精製して、Tr
―Trp（Tos）OBzlを得る。収量1.70ｇ（61.5％）。
融点101―103℃。 〔α〕²⁴ _D＋47.6゜（ｃ＝0.5，DMF）。 元素分析 C₄₄H₃₉N₂O₄Sとして 計算値：Ｃ 76.54； Ｈ 5.55； Ｎ 4.06： Ｓ 4.65 実測値：Ｃ 76.51； Ｈ 5.55； Ｎ 3.51； Ｓ 4.67 参考例 ２ Tr―Trp（Tos）OBzl（1.3ｇ，1.88mmol）を80
％酢酸（20ml）に懸濁し、室温で１時間撹拌す
る。原料は溶け、トリフエニルメタノールが析出
するのでこれを去する。母液にパラジウム黒を
加えて室温で４時間接触還元をおこなう。触媒を
去し酢酸を留去する。残留物を水から再結晶し
て、Ｈ―Trp（Tos）―OHを得る。収量585mg
（86.9％）。融点227℃（分解）。 〔α〕²¹ _D―29.2゜（ｃ＝0.5、酢酸） 元素分析 C₁₈H₁₈N₂O₄S・1/2H₂Oとして 計算値：Ｃ 58.83； Ｈ 5.21； Ｎ 7.63； Ｓ 8.73 実測値：Ｃ 58.88； Ｈ 5.23； Ｎ 7.23； Ｓ 8.72 参考例 ３ Tr―Trp―OBzl（10.8ｇ，20mmol）、水素化ナ
トリウム（1.144ｇ，30mmol）およびｐ―メトキ
シベンゼンスルホニルクロリドから参考例１と同
様にしてTr―Trp（Mbs）―OBzlを得る。収量
14.2ｇ（100％）。融点94―96℃。 〔α〕²¹ _D＋43.1゜（ｃ＝0.5，DMF）。 元素分析 C₄₄H₃₉N₂O₅Sとして 計算値：Ｃ 74.71； Ｈ 5.56； Ｎ 3.96； Ｓ 4.58 実測値：Ｃ 75.01； Ｈ ５，35： Ｎ
3.93； Ｓ 4.05 参考例 ４ Tr―Trp（Mbs）―OBzl（14.2ｇ，20mmol）を
参考例２と同様に処理してＨ―Trp（MBS）―
OHを得る。収量6.64ｇ（88.7％）。融点218―220
℃ 〔α〕²⁴ _D−34.8゜（ｃ＝0.5、酢酸）。 元素分析 C₁₈H₁₈N₂O₅S・1/2H₂Oとして 計算値：Ｃ 56.38； Ｈ 5.00； Ｎ 7.31 実測値：Ｃ 56.43； Ｈ 4.92； Ｎ 7.07 参考例 ５ Boc―Trp―OBzl（789mg，2mmol）をジクロ
ルメタン（10ml）にとかし、セシルトリメチルア
ンモニウムクロリド（6.4mg，0.02mmol）と砕い
た水酸化ナトリウム（200mg，5mmol）を加え
る。ここに２，４―ジメトキシベンゼンスルホニ
ルクロリド（710mmol，3mmol）をジクロルメ
タン（３ml）に溶かした溶液を滴下する。その後
室温で30分反応させる。冷却して１規定塩酸を加
えてPH２とする。水（10ml）を加え、振とうした
のちジクロルメタン層を分取、同層を水洗し硫酸
ナトリウムで乾燥する。溶媒を留去してBoc―
Trp（Dmb）―OBzlを得る。これをエタノール
（10ml）に溶かし、氷冷下１規定水酸化ナトリウ
ム水溶液（2.2ml）を加え、室温で１時間反応さ
せる。エタノールを留去したのち、残留水溶液に
水（20ml）とエーテル（20ml）を加えて抽出す
る。水層を冷却し、ここに10％クエン酸水溶液を
加えてPH３とする。酢酸エチルで抽出、同層を水
洗し、硫酸ナトリウムで乾燥する。溶媒を留去
し、残留物に石油エーテルを加え、これを固化せ
しめる。Boc―Trp（Dmb）―OHを得る。収量
737mg（73％）。融点100℃（分解）。 〔α〕²² _D―9.43゜（ｃ＝0.5，DMF）。 元素分析 C₂₄H₂₈N₂O₈Sとして 計算値：Ｃ 57.13； Ｈ 5.59； Ｎ 5.55； Ｓ 6.36 実測値：Ｃ 57.56； Ｈ 5.86； Ｎ 5.30； Ｓ 6.28 参考例 ６ Boc―Trp―OBzl（5.92ｇ，15mmol）と２，
４，６―トリメトキシベンゼンスルホニルクロリ
ド（5.33ｇ，20mmol）を水酸化ナトリウム（1.5
ｇ，37.5mmol）とセチルトリメチルアンモニウ
ムクロリド（48mg，0.15mmol）の存在下にジク
ロルメタン（100ml）中で参考例５と同様に反応、
さらに水酸化ナトリウム水溶液で加水分解して、
Boc―Trp（Tms）―OHを得る。収量7.32ｇ
（91.2％）。融点82―84℃。 〔α〕²⁶ _D―15.4゜（ｃ＝0.5，DMF）。 元素分析 C₂₅H₃₀O₉N₂Sとして 計算値：Ｃ 56.17； Ｈ 5.66； Ｎ 5.24； Ｓ 6.00 実測値：Ｃ 56.37； Ｈ 5.85； Ｎ 4.91； Ｓ 6.07 参考例 ７ Boc―Trp―OBzl（789mg，2mmol）と４―メ
トキシ―２，６―ジメチルベンゼンスルホニルク
ロリド（702mg，3mmol）を水酸化ナトリウム
（200mg）、セシルトリメチルアンモニウムクロリ
ド（6.4mg，0.02mmol）の存在下にジクロルメタ
ン中で参考例５と同様に反応、さらに水酸化ナト
リウム水溶液で加水分解して、Boc―Trp（Mds）
―OHを得る。収量580mg（57.8％）。融点78―80
℃。 〔α〕²⁶ _D―21.2゜（ｃ＝05，DMF）。 元素分析 C₂₅H₃₀O₇N₂Sとして 計算値：Ｃ 59.74； Ｈ 6.02； Ｎ 5.58； Ｓ 6.38 実測値：Ｃ 59.83； Ｈ 6.17； Ｎ 5.16； Ｓ 6.08 試験例 当該保護トリプトフアン（0.1mmol）をエタン
ジチオール（0.5ml）とアニソール（0.1ml）の存
在下フツ化水素（１ml）で０℃、１時間処理す
る。フツ化水素を留去し、残留物を酢酸（15ml）
に溶かす。酢酸を留去したのち残留物を水（20
ml）に溶かして不溶物は去する。母液をエーテ
ルで抽出。水層を50mlにし、この溶液をアミノ酸
分析に付し生成したトリプトフアンの量を定量す
る。結果を表１に示す。

【表】 参考例 ８ Ｈ―Trp（Mbs）―OH（375mg，1mmol）をト
リエチルアミン（0.12ml，1.5mmol）と共に水
（２ml）に溶かし、ここに２―ｔ―ブチルオキシ
カルボニル―４，６―ジメチル―２―メルカプト
ピリミジン（290mg，1.2mmol）をジオキサン
（２ml）に溶かした溶液を加える。室温で15時間
撹拌したのち、水（10ml）とエーテル（５ml）を
加え抽出する。エーテル層を少量の５％炭酸水素
ナトリウム水溶液で抽出する。水層を合わせ、10
％クエン酸水溶液で酸性とする。酢酸エチル（20
ml）で抽出し、同層を水洗し、硫酸ナトリウムで
乾燥する。溶媒を留去し、残留物に石油エーテル
を加えて結晶化させる。Boc―Trp（Mbs）―OH
を得る。収量452mg（95.4％）。融点83―84℃。 〔α〕²³ _D―28.1゜（ｃ＝0.5，DMF）。 元素分析 C₂₃H₂₆N₂O₇Sとして 計算値：Ｃ 58.21； Ｈ 5.50； Ｎ 5.90； Ｓ 6.76 実測値：Ｃ 58.17； Ｈ 5.85； Ｎ 5.46； Ｓ 6.81 実施例 １ Boc―Trp（Mbs）―OH（712mg，1.5mmol）と
HONb（297mg，1.65mmol）をアセトニトリル
（10ml）に溶かし０℃に冷却する。ここにDCC
（340mg，1.65mmol）を加え、０℃で１時間、室
温で15時間反応させる。析出物を去し、母液に
Ｈ―Gly―OBzl ｐ―トルエンスルホン酸塩（557
mg，1.65mmol）とトリエチルアミン（0.23ml）
を加える。室温で５時間反応させ溶媒を留去す
る。残留物を酢酸エチル（20ml）に溶かし、５％
炭酸水素ナトリウム水溶液、１規定塩酸および水
で洗い硫酸ナトリウムで乾燥する。溶媒を留去
し、残留物を石油エーテルで固化し取してBoc
―Trp（Mbs）―Gly―OBzlを得る。収量850mg
（91.1％）。融点72〜74℃。 〔α〕²⁴ _D―15.0゜（ｃ＝0.5，DMF）。 元素分析 C₃₂H₃₅N₃O₈Sとして 計算値：Ｃ 61.82； Ｈ 5.67； Ｎ 6.76； Ｓ 5.16 実測値：Ｃ 62.34； Ｈ 5.74； Ｎ 6.81； Ｓ 4.60 実施例 ２ Boc―Trp（Mbs）―Gly―OBzl（622mg，
1mmol）をトリフルオロ酢酸（６ml）に溶かし、
室温で20分間反応させる。トリフルオロ酢酸を留
去し、残留物にエーテルを加え、これを固化さ
せ、取乾燥する。このトリフルオロ酢酸塩をＺ
―Gly―ONp（330mg，1mmol）とＮ―エチルモル
ホリン（0.13ml）と共にアセトニトリル（20ml）
に溶かし、15時間室温で反応させる。溶媒を留去
し、残留物を酢酸エチル（30ml）に溶かし、１規
定アンモニア水溶液、１規定塩酸および水で洗浄
し硫酸ナトリウムで乾燥する。溶媒を留去し、残
留物にエーテルを加えて結晶化させる。酢酸エチ
ルエーテルから再結晶して、Ｚ―Gly―Trp
（Mbs）―Gly―OBzlを得る。収量580mg（85.4
％）。融点130―131℃。 〔α〕²⁴ _D―7.1゜（ｃ＝0.5，DMF）。 元素分析 C₃₇H₃₆N₄O₉SSとして 計算値：Ｃ 62.34； Ｈ 5.09； Ｎ 7.86； Ｓ 4.50 実測値：Ｃ 62.24； Ｈ 5.02； Ｎ 7.85； Ｓ 4.78 実施例 ３ Ｚ―Gly―Trp（Mbs）―Gly―OBzl（340mg，
0.5mmol）をエタンジチオール（1.5ml）とアニ
ソール（1.5ml）存在下にフツ化水素（５ml）で
０℃、２時間処理する。フツ化水素を留去した
後、水（10ml）とエーテル（10ml）を加え不溶物
を去する。母液のエーテル層を除き、水層をさ
らに一度エーテルで洗浄する。水層をアンバーラ
イトIR―410（酢酸型；１×10cm）に通し、通過
液と洗液を合わせて留去する。残渣をセハデツク
スＧ―25を担体とする分配カラムクロマトグラフ
イー（カラムサイズ ４×15cm、溶媒：ｎ―ブタ
ノール―酢酸―水＝４：１：５）で精製する。目
的物の分画を集め溶媒を留去する。残留物にエタ
ノールとエーテルを加えて結晶化させてＨ―Gly
―Trp―Gly―OHを得る。収量98mg（61.6％）。
融点245―246℃（分解）。 〔α〕²¹ _D＋3.76゜（ｃ＝0.5、酢酸）。 元素分析 C₁₅H₁₈O₄N₄・1/2H₂O・1/2
CH₃COOHとして 計算値：Ｃ 53.77； Ｈ 5.92； Ｎ 15.68 実測値：Ｃ 53.48； Ｈ 5.88； Ｎ 15.15 実施例 ４ Boc―Trp（Tms）―OH（504mg，1mmol），Ｈ
―Gly―OBzl・ｐ―トルエンスルホン酸塩（371
mg，1mmol），HONb（228mg，1.2mmol）をトリ
エチルアミン（0.15ml）と共にアセトニトリル
（10ml）に溶かす。０℃でDCC（227mg，
1.1mmol）を加えて０℃で２時間、室温で15時間
反応させる。析出物を去した後、アセトニトリ
ルを留去する。残留物を酢酸エチル（20ml）に溶
溶かし、これを５％炭酸水素ナトリウム水溶液、
１規定塩酸、水で洗浄する。硫酸ナトリウムで乾
燥した後酢酸エチルを留去すると油状のBoc―
Trp（Tms）―Gly―OBzl（453mg，67％）が得ら
れる。これを実施例２と同様にトリフルオロ酢酸
で処理する。ここで得られたトリフルオロ酢酸塩
をアセトニトリル（10ml）に溶かし、Ｚ―Lys
（Ｚ）―Np（391mg，0.73mmol）とＮ―エチルモ
ルホリン（0.1ml）を加える。室温で48時間反応
させた後、溶媒を留去する。残留物を酢酸エチル
（30ml）に溶かし、これを１規定アンモニア水、
１規定塩酸および水で洗浄し、硫酸ナトリウムで
乾燥する。酢酸エチルを留去し、残留物を酢酸エ
チル―エーテルから結晶化させ取して、Ｚ―
Lys（Ｚ）―Trp（Tms）―Gly―OBzlを得る。収
量303mg（48.4％）。融点98―100℃。 〔α〕²⁶ _D―12.9゜（ｃ＝0.5，DMF）。 元素分析 C₅₁H₅₅N₅O₁₃Sとして 計算値：Ｃ 62.62； Ｈ 5.67； Ｎ 7.16； Ｓ 3.28 実測値：Ｃ 62.67； Ｈ 5.60； Ｎ 7.24； Ｓ 3.19 実施例 ５ Ｚ―Lys（Ｚ）―Trp（Tms）―Gly―OBzl（190
mg，0.2mmol）をエタンジチオール（0.8ml）と
アニソール（0.8ml）存在下にフツ化水素（５ml）
で０℃１時間処理する。実施例３と同様に後処理
およびセハデツクスＧ―25による精製を行なう。
目的物を含む分画を集め溶媒を留去する。残留物
を水から凍結乾燥してＨ―Lys―Trp―Gly―OH
を得る。収量80mg（88.9％）。 〔α〕²² _D＋31.4゜（ｃ＝0.5、５％酢酸）。アミノ酸分
析（４％メルカプトエタノール含有６規定塩酸に
て加水分解；以下同じ）：Lys1.00；Trp0.84；
Gly1.03。 元素分析 C₁₉H₂₇N₅O₄・CH₃COOH・4H₂Oと
して 計算値：Ｃ 48.36； Ｈ 7.54； Ｎ 13.43 実測値：Ｃ 47.98； Ｈ 7.23； Ｎ 13.26 実施例 ６ Boc―Trp（Mds）―OH（251mg，0.5mmol），
Ｈ―Gly―OBzl・ｐ―トルエンスルホン酸塩
（186mg，0.55mmol）およびHONb（114mg，
0.6mmol）をアセトニトリル（５ml）に溶かし０
℃でトリエチルアミン（0.08ml）とDCC（124mg，
0.6mmol）を加える。以後実施例例４と同様に後
処理して油状のBoc―Trp（Mds）―Gly―OBzl
（300mg，96.9％）を得る。このものを実施例４と
同様にトリフルオロ酢酸で処理し、次いでＮ―エ
チルモルホリン（0.07ml）存在下にＺ―Lys（Ｚ）
―ONp（268mg，0.5mmol）と反応させ、後処理
精製してＺ―Lys（Ｚ）―Trp（Mds）―Gly―
OBzlを得る。収量132mg（32％）。融点120℃。 〔α〕²⁶ _D−10.6゜（ｃ＝0.5，DMF）。 元素分析 C₅₁H₅₅N₅O₁₁Sとして 計算値：Ｃ 64.74； Ｈ 5.86； Ｎ 7.40； Ｓ 3.39 実測値：Ｃ 64.77； Ｈ 5.80； Ｎ 7.60； Ｓ 3.30 実施例 ７ Ｚ―Lys（Ｚ）―Trp（Mds）―Gly―OBzl（76
mg，0.08mmol）をエタンジチオール（0.32ml）
とアニソール（0.32ml）存在下にフツ化水素（３
ml）で０℃１時間処理する。以後実施例５と同様
に後処理、精製を行いＨ―Lys―Trp―Gly―OH
を得る。収量29mg（80.5％）。 〔α〕²² _D＋28.9゜（ｃ＝0.5、５％酢酸）。アミノ酸分
析：Lys1.00；Trp0.82；Gly1.01。 元素分析 C₁₉H₂₇N₅O₄・CH₃COOH・4H₂Oと
して 計算値：Ｃ 48.36； Ｈ 7.54； Ｎ 13.43 実測値：Ｃ 48.07； Ｈ 7.33； Ｎ 13.16 実施例 ８ Boc―Trp（Tms）―OH（2.94ｇ，5.5mmol）
とHONb（1.08mg，6mmol）をアセトニトリル
（10ml）に溶かし、０℃でDCC（1.24ｇ，6mmol）
を加える。０℃で１時間室温で15時間反応させて
活性エステルを調整する。他方Boc―Ala―Val
―Gly―OBzl（2.18ｇ，5mmol）をトリフルオロ
酢酸（15ml）に溶かし、室温で20分反応させる。
トリフルオロ酢酸を留去し、残留物にエーテルを
加えてこれを固化させ取、乾燥する。これをア
セトニトリル（20ml）に溶かし、トリエチルアミ
ン（0.7ml）で中和する。ここに先の不溶物を
去した活性エステルの溶液を加えて室温で15時間
反応させる。反応液に水（100ml）と酢酸エチル
（150ml）を加えて抽出する。有機層を５％炭酸水
素ナトリウム水溶液、１規定塩酸および水で順次
洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥する。溶媒を留去
し、残留物を酢酸エチル―エーテルから再結晶し
て、Boc―Trp（Tms）―Ala―Val―Gly―OBzl
を得る。収量3.50ｇ（82.2％）。融点115―117℃。 〔α〕²⁴ _D―6.74゜（ｃ＝0.5，DMF）。 元素分析 C₄₂H₅₃N₅O₁₂Sとして 計算値：Ｃ 59.21； Ｈ 6.27； Ｎ 8.22； Ｓ 3.76 実測値：Ｃ 59.36； Ｈ 6.45； Ｎ 8.14； Ｓ 3.70 実施例 ９ Boc―Trp（Tms）―Ala―Val―Gly―OBzl
（3.40ｇ，3.99mmol）を実施例８と同様にトリフ
ルオロ酢酸で処理する。得られたトリフルオロ酢
酸塩をDMF（10ml）に溶かし、トリエチルアミン
（0.66ml）とBoc―Gln―ONb（1.79ｇ，4.4mmol）
を加え、室温で15時間反応させる。実施例８と同
様に抽出精製し、メタノール―エーテルから２度
再結晶してBoc―Gln―Trp（Tms）―Ala―Val
―Gly―OBzlを得る。収量2.60ｇ（66.4％）。融点
210―211℃。 〔α〕²⁴ _D―7.73゜（ｃ＝0.5，DMF）。 元素分析 C₄₇H₆₁N₇O₁₄S・1/2H₂Oとして 計算値：Ｃ 57.07； Ｈ 6.32； Ｎ 9.91； Ｓ 3.24 実測値：Ｃ 57.08； Ｈ 6.23； Ｎ 9.98； Ｓ 3.10 実施例 10 Boc―Gln―Trp（Tms）―Ala―Val―Gly―
OBzl（2.54ｇ，2.59mmol）を実施例８と同様にト
リフルオロ酢酸で処理する。得られたトリフルオ
ロ酢酸塩をDMF（10ml）に溶かし、トリエチルア
ミン（0.44ml）とBoc―Asn―ONp（1.10ｇ，
3.12mmol）を加え、室温で48時間反応させる。
反応液にエーテル（50ml）を加え、生じた沈殿を
取する。これを熱アセトニトリルで洗い、Boc
―Asn―Gln―Trp（Tms）―Ala―Val―Gly―
OBzlを得る。収量2.70ｇ（95.4％）。融点236℃
（分解）。 〔α〕²⁴ _D―25.4゜（ｃ＝0.5，DMF）。 元素分析 C₅₁H₆₇O₁₆N₉Sとして 計算値：Ｃ 55.98； Ｈ 6.17； Ｎ
11.52； Ｓ 2.93 実測値：Ｃ 55.86； Ｈ 6.18； Ｎ
11.55； Ｓ 2.95 実施例 11 Boc―Asn―Gln―Trp（Tms）―Ala―Val―
Gly―OBzl（2.62ｇ，2.39mmol）をDMF（20ml）
に溶かし、パラジウム黒を触媒にして室温で４時
間接触還元を行なう。触媒を去し、DMFを留
去する。残留物に酢酸エチルを加えて結晶化させ
これを取する。Boc―Asn―Gln―Trp（Tms）
―Ala―Val―Gly―OHを得る。収量2.39ｇ
（99.6％）。融点220℃（分解）。 〔α〕²⁴ _D―24.7゜（ｃ＝0.5，DMF）。 元素分析 C₄₄H₆₁N₉O₁₆S・1/2H₂Oとして 計算値：Ｃ 52.16； Ｈ 6.17； Ｎ
12.44； Ｓ 3.17 実測値：Ｃ 52.24； Ｈ 6.22； Ｎ
12.54； Ｓ 3.55 実施例 12 Boc―Asn―Gln―Trp（Tms）―Ala―Val―
Gly―OH（2.01ｇ，2mmol）とHONb（432mg，
2.4mmol）をDMF（15ml）に溶かし、０℃でDCC
（618mg，3mmol）を加える。０℃で２時間、室
温で15時間反応させて活性エステルを調整する。
他方Boc―His―Leu―Met―NH₂（1.10ｇ，
2.2mmol）を実施例８と同様にトリフルオロ酢酸
処理する。このトリフルオロ酢酸塩を、不溶物を
去した上記活性エステルの母液に溶かし、トリ
エチルアミン（0.56ml，4mmol）を加える。室温
で３日間反応させる。反応液にエーテル（50ml）
を加え、沈殿を取する。これを85％アセトニト
リルから再沈殿する。Boc―Asn―Gln―Trp
（Tms）―Ala―Val―Gly―His―Leu―Met―
NH₂を得る。収量2.37ｇ（85.4％）。融点250℃
（分解）。 〔α〕²⁴ _D―18.1゜（ｃ＝0.5，DMF）。 元素分析 C₆₁H₈₉N₁₅O₁₈S₂・2H₂Oとして 計算値：Ｃ 51.57； Ｈ 6.60； Ｎ
14.79； Ｓ 4.51 実測値：Ｃ 51.54； Ｈ 6.41； Ｎ
14.27； Ｓ 4.45 実施例 13 Boc―Asn―Gln―Trp（Tms）―Ala―Val―
Gly―His―Leu―Met―NH₂（2.24ｇ，
1.62mmol）を実施例８と同様にトリフルオロ酢
酸処理する。得られたトリフルオロ酢酸塩をBoc
―Gly―ONb（653mg，1.94mmol）と共にDMF
（15ml）に溶かし、ここにトリエチルアミン0.46
ml，3.24mmol）を加える。室温で15時間反応さ
せた後、アセトニトリルを加えて生じた沈殿を
取する。これを85％アセトニトリルから再沈殿し
て、Boc―Gly―Asn―Gln―Trp（Tms）―Ala
―Val―Gly―Hi：―Leu―Met―NH₂を得る。
収量1.92ｇ（82.2％）。融点251℃（分解）。 〔α〕²⁴ _D―17.3゜（ｃ＝0.5，DMF）。 元素分析 C₆₃H₉₂N₁₆O₁₉S₂・3H₂Oとして 計算値：Ｃ 50.58； Ｈ 6.60； Ｎ
14.98； Ｓ 4.29 実測値：Ｃ 50.61； Ｈ 6.30； Ｎ
14.67； Ｓ 4.57 実施例 14 Boc―Gly―Asn―Gln―Trp（Tms）―Ala―
Val―Gly―His―Leu―Met―NH₂（1.90ｇ，
1.32mmol）を実施例８と同様にトリフルオロ酢
酸処理する。得られたトリフルオロ酢酸塩をBoc
―Leu―ONp（558mg，1.58mmmol）と共にDMF
（10ml）に溶かし、トリエチルアミン（0.37ml，
264mmol）を加える。室温で15時間反応させた
後、実施例13と同様に後処理し、精製して、Boc
―Leu―Gly―Asn―Gln―Trp（Tms）―Ala―
Val―Gly―His―Leu―Met―NH₂を得る。収量
1.78ｇ（86.7％）。融点254（分解）。 〔α〕²⁴ _D―23.6゜（ｃ＝0.5，DMF）。 元素分析 C₆₉H₁₀₃N₁₆O₁₉S₂・3H₂Oとして 計算値：Ｃ 51.50； Ｈ 6.87； Ｎ
14.80； Ｓ 3.99 実測値：Ｃ 51.73； Ｈ 6.64； Ｎ
14.58； Ｓ 4.08 実施例 15 Boc―Leu―Gly―Asn―Gln―Trp（Tms）―
Ala―Val―Gly―His―Leu―Met―NH₂（1.09
ｇ，0.7mmol）をトリフルオロ酢酸（10ml）で室
温20分間処理する。濃塩酸（0.3ml）を加えてか
らトリフルオロ酢酸を留去する。残留物にエーテ
ルを加え沈殿を取し、乾燥する。これをAoc―
Arg（Tos）―OH（372mg，0.84mmol），１―ヒド
ロキシベンゾトリアゾール（123mg，0.91mmol）
およびトリエチルアミン（0.2ml）と共にDMF
（５ml）に溶かす。０℃にて１―シクロヘキシル
―３―（２―モルホリノエチル）―カルボジイミ
ド メソ―ｐ―トルエンスルホネート（381mg，
0.84mmol）を加え、０℃で２時間、室温で48時
間反応させる。以後実施例13と同様に後処理精製
して、Aoc―Arg（Tos）―Leu―Gly―Asn―Gln
―Trp（Tms）―Ala―Val―Gly―His―Leu―
Met―NH₂を得る。収量942mg（70.0％）。融点
196―199℃（分解）。 〔α〕²⁴ _D―18.5゜（ｃ＝0.5，DMF）。 元素分析 C₈₃H₁₂₃N₂₁O₂₃S₃・H₂Oとして 計算値：Ｃ 52.53； Ｈ 6.64； Ｎ
15.50； Ｓ 5.07 実測値：Ｃ 52.37； Ｈ 6.69； Ｎ
15.09； Ｓ 5.37 実施例 16 Aoc―Arg（Tos）―Leu―Gly―Asn―Gln―
Trp（Tms）―Ala―val―Gly―His―Leu―Met
―NH₂（920mg，0.49mmol）を実施例８と同様に
トリフルオロ酢酸処理する。得られたトリフルオ
ロ酢酸塩をBoc―Gln―ONb（245mg，6mmol）お
よびトリエチルアミン（0.14ml）と共にDMF（10
ml）に溶かし室温で15時間反応させる。実施例13
と同様に後処理、精製してBoc―Gln―Arg
（Tos）―Leu―Gly―Asn―Gln―Trp（Tms）―
Ala―Val―Gly―His―Leu―Met―NH₂を得る。
収量670mg（68.6％）。融点245℃（分解）。 〔α〕²¹ _D―24.1゜（ｃ＝0.5，DMF）。 元素分析 C₈₇H₁₂₉N₂₃O₂₅S₃・2H₂Oとして 計算値：Ｃ 51.49； Ｈ 6.51； Ｎ
15.88； Ｓ 4.74 実測値：Ｃ 51.45； Ｈ 6.71； Ｎ
15.84； Ｓ 5.19 実施例 17 Boc―Gln―Ars（Tos）―Leu―Gly―Asn―
Gln―Trp（Tms）―Ala―Val―Gly―His―Leu
―Met―NH₂（650mg，0.326mmol）を実施例８と
同時にトリフルオロ酢酸処理する。得られたトリ
フルオロ酢酸塩をＺ―pGlu―ONb（139mg，
0.42mmol）およびＮ―エチルモルホリン（0.083
ml）と共にDMF（10ml）に溶かし室温で15時間反
応させる。以後実施例13と同様に後処理精製して
Ｚ―pGlu―Gln―Arg（Tos）―Leu―Gly―Asn
―Gln―Trp（Tms）―Ala―Val―Gly―His―
Leu―Met―NH₂を得る。収量540mg（77.5％）。
融点247℃（分解）。 〔α〕²⁴ _D―27.0゜（ｃ＝0.5，DMF）。 元素分析 C₉₅H₁₃₂N₂₄O₂₇S₃・4H₂Oとして 計算値：Ｃ 51.61； Ｈ 6.38； Ｎ
15.20； Ｓ 4.35 実測値：Ｃ 51.40； Ｈ 6.14； Ｎ
15.26； Ｓ 5.00 実施例 18 Ｚ―pGlu―Gln―Arg（Tos）―Leu―Gly―
Asn―Gln―Trp（Tms）―Ala―Val―Gly―His
―Leu―Met―NH₂（150mg，0.07mmol）をアニ
ソール（0.21ml）とエタンジチオール（0.21ml）
存在下にフツ化水素（３ml）で０℃１時間処理す
る。フツ化水素を留去し、残留物に水（20ml）と
エーテル（20ml）を加え不溶物を去する。母液
の水層を取りさらに１度エーテルで洗浄する。水
層をアンバーライトIR―410（酢酸型）のカラム
（１×10cm）に通じ、洗液も合わせて凍結乾燥す
る。得られた粗製物をハデツクス Ｇ―25を担体
とする分配カラムクロマトグラフイーで精製する
（カラムサイズ：1.5×45cm；溶媒、ｎ―ブタノー
ル；酢酸：水＝４：１：５）。純粋な目的物を含
む分画を集め溶媒を留去する。残留物を水から凍
結乾燥したpGlu―Glu―Arg―Leu―Gly―Asn―
Gln―Trp―Ala―Val―Gly―His―Leu―Met―
NH₂（ポンベシン）を得る。収量72mg（63.5％）。 〔α〕²² _D―53.5゜（ｃ＝0.55、５％酢酸）。アミノ酸
分析：His0.96；Arg1.01；Trp0.92；Asp1.06；
Glu3.23；Gly1.99；Ala1.00；Val0.93；
Met0.92；Leu1.96。 元素分析 C₇₁H₁₁₀N₂₄O₁₈S・2CH₃COOH・
3H₂Oとして 計算値：Ｃ 47.53； Ｈ 6.97； Ｎ
18.74； Ｓ 1.79 実測値：Ｃ 47.65； Ｈ 7.03； Ｎ 18.46； Ｓ 2.21

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ トリプトフアンを有するペプチドの製造にあ
   たり、トリプトフアンのインドール基を一般式 ［式中、R₁およびR₅は水素、メチルまたはメ
   トキシを、R₂およびR₄は水素を、R₃はメチル、
   またはメトキシをそれぞれあらわす。ただし、
   R₁およびR₅が水素のときR₃はメチルまたはメト
   キシを、R₁およびR₅がメチルのときR₃はメトキ
   シを、R₁およびR₃がメトキシのときR₅は水素ま
   たはメトキシをそれぞれあらわす。］で示される
   置換ベンゼンスルフオニル基で保護して、ペプチ
   ド結合した後、該保護基を酸で脱離せしめること
   を特徴とするペプチドの製造法。