JPH0247447B2 - Kohotaikanohikuiigmsoseibutsu - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、抗補体価の低い、従つて静脈注射が
可能なIgM組成物に関する。

人免疫グロブリン（Ig）のうち、特にIgGが各
種疾病の予防及び汎用され、著しい予防及び治療
効果をもたらしていることは衆知のことである。
ところで免疫グロブリンの生物活性はその種類に
よつて互に異つており、IgMは (i) 生体に対する抗原刺激によりIgGより先に生
成される。

(ii) 分子構造上５重合体で、抗原との結合値は10
（IgGは２）であり、そのため細菌、特にグラ
ム陰性菌に対して強い凝集活性を有す。

(iii) 溶菌活性、及びオプソニン活性はIgGのそれ
よりも強い、等の特質を有している。これらの
特質により、IgMは細菌感染症の治療には、
IgGよりむしろ適しているのではないかとも言
われている。このようなことからIgM（rich）
製剤が注目され開発検討がなされて、既に筋肉
注射用IgM製剤は実用段階に入つたものもあ
り、確かな治療効果が得られている。しかしな
がら筋肉注射に設定される為、大量投与による
急速な血中濃度の上昇に伴う速効性は望めず、
しかも注射局所の疼痛、吸収遅延、筋肉組織内
酵素分解による損失等は避け得ていない。

一方、IgMの静注化の試みもなされており、テ
イムナーらは、IgMが全蛋白量の約40％を占める
IgM（rich）製剤を製造し、これを細菌性敗血症
等の患者に静脈投与し症状の改善をみたことを報
告している（K.D.TympnerらMschr.
Kinderheilk、123、400−401（1975））。

しかしながら、IgMをそのまま静注すると、
IgGの場合と同様に製造工程中に生じるアグリゲ
ート（重合体）により、補体の急激な活性化が起
り、アナフイラキシー様副作用が惹起されると考
えられる。かかる副作用を減少する方法として
IgGの場合に知られている方法、即ち、IgGの抗
補体価の低減化のために採用される酵素処理、Ｓ
−アルキル化処理、スルホ化処理等は、全て、
IgMの強い凝集活性を発現する５重合体構造を破
壊することになり、本来IgMが有する抗体活性を
著しく減少させるという問題がある。

かかる問題点のために、IgG製剤における静注
可能IgG静剤の開発が免疫グロブリン療法の汎用
性及びその治療効果を飛躍的に上昇させたという
事実が示す如く、静脈投与による確かなメリツト
があるにもかかわらず、静注可能なIgM製剤の開
発は困難であり、現在まで実用化されていない。

本発明者らは、安全な静脈投与可能なIgM製剤
を開発すべく鋭意研究した結果、塩基性アミノ酸
を含有するIgM製剤（水溶液）は、人標準補体
（NHS；normal human serum）に対する抗補
体価が30％以下にまで低下し、静脈投与が可能と
なることを知見し本発明に到達した。

即ち、本発明は、IgMと塩基性アミノ酸とから
なる抗補体価の低いIgM組成物である。

本発明において用いられるIgMは、例えば、人
血のコーンのエタノール分画のフラクシヨン
（Ｆ−画分）から以下の如き方法で得られる。
フラクシヨンを塩化ナトリウム等の溶液で抽出
し、抽出液に硫酸アンモニウム等を加えて免疫グ
ロブリン画分を析出させ、遠心分離により粗IgM
画分として採取する。この粗IgM画分を、例え
ば、セフアロ−スゲルクロマトグラフイーにかけ
IgM組画分のみを採取する。この後、更に、ポリ
エチレングリコールによる析出やセフアロースゲ
ルクロマトグラフイー等の精製操作を組み合せて
もよい。

本発明において用いられる塩基性アミノ酸の具
体例としては、アルギニン、リジン、オルニチ
ン、ヒスチジンがある。アルギニンとリジンが好
ましい。

本発明の組成物は、IgM1重量部に対し塩基性
アミノ酸が0.1〜10重量部の範囲のものが好まし
い。組成物の調整法は何ら限定されるものではな
いが、精製されたIgM水溶液に所定濃度となる様
に塩基性アミノ酸を溶解するか、又は塩基性アミ
ノ酸の水溶液を混合するのが便利である。かくし
て得られた水溶液（通常は生理食塩水溶液）に、
例えば、可溶化剤、安定剤、等張化剤等を添加
し、あるいはその後凍結乾燥することによつて静
注用のIgM製剤が製造される。あるいは、また、
IgM製剤中の全蛋白量20重量％以上がIgMであれ
ば、IgM製剤としての特徴は十分に発揮されるの
で、残りの80重量％未満はIgM以外の免疫グロブ
リン成分（IgG、IgA等）からなる塩基性アミノ
酸を含有する静注用のIgM（rich）製剤を調製し
てもよい。

本発明のIgM組成物の抗体価は、IgMが本来有
している抗体価と実質的に変らない。

なお、本発明において、抗補体価の測定は、人
標準補体（NHS；normal human serum）に対
するものを、カバツトとマイヤーの方法
（Kabat、Mayer：Experimental
Immunochemisty225（1961））により行なつたも
のである。IgM組成物の２％溶液の抗補体価が30
％以下のものは、特に副作用の少ない静注用の製
剤とするものに適している。

以下、実施例により本発明を詳述する。実施例
中の％は特にことわらない限り重量基準である。

実施例 １ (1) コーンのエタノール分画法によるフランクシ
ヨンを0.45％塩化ナトリウム水溶液で抽出
し、その抽出液に硫酸アンモニウムを加え、硫
酸アンモニウム半飽和水溶液になる様にし、析
出したグロブリン画分を遠心分離により集め、
これを小量の純水に溶解し、粗IgM画分を得
た。

この粗IgM画分をセフアロース4Bでゲルろ
過し、第１図に示すクロマト図の斜線画分を
IgM画分として集め、これに５〜10％濃度とな
る様にポリエチレングリコール4000を添加し析
出してくる画分を遠心分離で集めた。これを少
量のリン酸ナトリウム緩衝化生理食塩水に溶解
し、セフアロース4Bでゲルろ過し前記と同様
にIgM画分を集め、更に硫安塩析で濃縮し、
0.5％ポリエチレングリコール4000を含むリン
酸ナトリウム緩衝化生理食塩水に対し透析し、
純度約90％の精製IgMを得た。

(2) 前記(1)で得られた２％濃度のIgMに、Ｌ−ア
ルギニンを２％になる様に溶解し、４℃で１時
間放置し、２％アルギニン添加Ig溶液（２％）
を調製した。

(3) 前記(2)で調製した２％アルギニン添加IgM溶
液の人標準補体に対する抗補体価を、カバツト
とマイヤー（Kabat and Mayer）法に準じ測
定した。即ち、人標準補体0.5mlに２％アルギ
ニン添加IgM力溶液0.5mlを加え、37℃で１時
間インキユベーシヨンし、氷冷後、ゲラチン加
ベロナール緩衝液で40倍に希釈し、インキユベ
ーシヨン後の補体価をカバツトとマイヤーの方
法で測定し抗補体価を求めた。

その結果、２％アルギニン添加IgMの抗補体
価は3.5％であつた。尚、アルギニンを添加し
なかつたIgMの抗補体価は42％であつた。

実施例 ２ 実施例１の(1)に記載した方法で得られた２％濃
度IgMに、Ｌ−アルギニンを１％および５％濃度
になる様に溶解し、４℃で１時間放置し、１％ア
ルギニン添加IgMおよび５％アルギニン添加IgM
を各々調製した。実施例１の(3)に記載した方法
で、各々のアルギニン添加IgM溶液の抗補体価を
測定した。その結果、１％アルギニン添加IgMの
抗補体価は15％で、５％アルギニン添加IgMの抗
補体価は１％であつた。

実施例 ３ 実施例１の(1)に記載した方法で得られた２％濃
度IgMにして、Ｌ−リジンを１％、２％、および
５％濃度になる様に溶解し、各々１％アルギニン
添加IgM、２％リジン添加IgM、および５％リジ
ン添加IgMを調製し、実施例１の(3)に記載した方
法で抗補体価を測定した。その結果、 抗補体価 １％リジン添加IgM …18％ ２％リジン添加IgM …５％ ５％リジン添加IgM …1.8％ リジンを添加しないIgM …41％ であつた。

【図面の簡単な説明】

第１図は、粗IgM画分のセフアロース4Bゲル
ろ過のクロマト図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ IgMと塩基性アミノ酸とからなる抗補体価の
   低いIgM組成物。 ２ IgM1重量部当り塩基性アミノ酸が0.1〜10重
   量部である、特許請求の範囲第１項記載の抗補体
   価の低いIgM組成物。 ３ 塩基性アミノ酸がアルギニン及び／又はリジ
   ンである、特許請求の範囲第１項記載の抗補体価
   の低いIgM組成物。