JPH0247475B2 - - Google Patents

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JPH0247475B2
JPH0247475B2 JP56026035A JP2603581A JPH0247475B2 JP H0247475 B2 JPH0247475 B2 JP H0247475B2 JP 56026035 A JP56026035 A JP 56026035A JP 2603581 A JP2603581 A JP 2603581A JP H0247475 B2 JPH0247475 B2 JP H0247475B2
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JP
Japan
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nitro
represents hydrogen
carboxy
lactamase
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JP56026035A
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JPS56133294A (en
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Buruumubatsuha Yurugen
Shindoraa Peteru
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Hoechst AG
Original Assignee
Hoechst AG
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Publication date
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Publication of JPH0247475B2 publication Critical patent/JPH0247475B2/ja
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/978—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
    • G01N2333/986—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5) acting on amide bonds in cyclic amides (3.5.2), e.g. beta-lactamase (penicillinase, 3.5.2.6), creatinine amidohydrolase (creatininase, EC 3.5.2.10), N-methylhydantoinase (3.5.2.6)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2415/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving penicillins or cephalosporins

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Description

【発明の詳細な説明】
細菌感染の化学療法にβ−ラクタム抗生物質を
用いることは、β−ラクタマーゼ〔ペニシリン−
（セフアロスポリン）−β−ラクタム−アミドヒド
ロラーゼ、EC3526〕を産生するβ−ラクタム抵
抗性病原菌の出現により制約されている。この酵
素はβ−ラクタム環のＣ−Ｎ結合を分解させ、そ
れにより使用されるβ−ラクタム抗生性質が失わ
れていく。β−ラクタム抗生物質を用いる細菌感
染の治療に際して所望の治療効果を確保するため
には、臨床的な単離物がβ−ラクタマーゼを産生
するか否かについて治療開始前に確実な認識が存
在していなければならない。β−ラクタマーゼの
検出が陽性と出たなら、β−ラクタマーゼ抵抗性
のβ−ラクタム抗生物質を用いるかあるいは臨床
的に使用しうる別の抗生物質の使用が好ましい。 β−ラクタマーゼ産生性病原菌の検出には一連
の操作法が記載されている（「J.Pharmacol.」第
15巻第81〜91頁（1963）参照〕。しかしながら従
来示されている方法はすべて完全には満足できる
ものではない。何故ならばそれらは臨床および診
断目的に特に適した比色定量試験に関する限りす
べて指示薬（ヨード／澱粉、ヒドロキシアミン、
PH指示薬）の添加を必要とするからである。 指示薬と結合された試験物を用いるβ−ラクタ
マーゼ検出と対照的に、色原体β−ラクタマーゼ
基質はこの酵素によるβ−ラクタム環の開裂が直
接スペクトルの可視領域における色の変化を生ず
るという利点を有する。O′Callaghan氏他
〔「Antimicrob.Agents and Chemother.」第１巻
第283〜288頁（1972）〕によりかかる色原体β−
ラクタマーゼ基質（化合物87／312）が記載され
ている。しかしながら著者の報告によればこの化
合物の溶液の色の深色団移動はβ−ラクタマーゼ
の存在下にのみでなく、血清、動物組識、蛋白
質、乳、システイン、グルタチオン、メルカプト
エタノールおよび２，３−ジメルカプトプロパノ
ール−１の添加後にも非特異的な様式で出現す
る。それゆえに化合物87／312の使用は臨床的な
単離物の誤つた陽性判定を招来しうる。 それゆえ本発明の目的は、淡黄色から強い黄橙
色への光学的に良好に視認しうる色の深化により
β−ラクタマーゼの存在を示しそして上述の添加
物に対して安定であるような新規な色原体セフア
ロスポリンにある。β−ラクタマーゼの検出はβ
−ラクタマーゼ産生性病原菌の完全な細胞を用い
てもまたこの細菌から標準的方法を用いて単離さ
れる酵素を用いても同様に良好に行われうる。純
粋な検出をこえて、本発明による化合物はまた単
離されたβ−ラクタマーゼの特異的活性の測定に
非常に良く適している。 本発明による化合物はグラム陰性細菌からのす
べてのβ−ラクタマーゼにより先に示されるよう
な色の深化を伴なつて分解される。それらは特に
臨床的に興味のある細菌、例えば大腸菌PTEM、ク
レブシエラ・アエロゲネス（Klebsiella
aerogenes）1082E、緑膿菌18SH、エンテロバク
ター・クロアカエ（Enterbacter cloacae）P99
およびバクテロイデス・フラギリス
（Bacteroides fragilis）620からのβ−ラクタマ
ーゼである。本発明による化合物は同様にグラム
陽性細菌例えば黄色葡萄球菌R85からのβ−ラク
タマーゼにより分解される。 本発明の化合物を用いるβ−ラクタマーゼ活性
の検出は直接、すなわち指示薬と結合した試験物
を用いずして行われる。何故ならば、本発明の対
象との上述の関連において存在する発色団置換基
がβ−ラクタム環の開裂と同時に定量的に除去さ
れ、これが直接先に言及された色の変動を生ずる
からである。 今や驚ろくべきことに、本発明による化合物
が、87／312型のβ−ラクタマーゼ基質と反対に、
β−ラクタマーゼの活性にとつてまたは細菌の生
存能力にとつて適当である水溶液中においてしか
し特に中性のPH範囲において、−180℃〜＋60℃の
温度範囲で加水分解的崩壊に対して非常に安定で
あることが確認された。最終的に調製された溶液
の保管は、好ましくはその溶液がほとんど無限に
安定である−20℃で行われるが、中性に緩衝され
た溶液は冷蔵庫温度およびその上室温でその使用
可能性が害されることなく長時間保火管されう
る。 更に本発明による化合物は血清、蛋白質、乳、
システイン、グルタチオン、メルカプトエタノー
ルおよび２，３−ジメルカプトプロパノール−１
（ジメルカプロール）の影響に対して完全に安定
であることが証明され、それにより87／312型の
β−ラクタマーゼ基質に対するもう一つの予期さ
れなかつた優越性が得られる。 従つて本発明の対象は一般式 を有する3′−位に色原基を有するセフアロスポリ
ンにある。ここで上式中、R1は水素、
【式】又は
【式】を表わし、そしてＸは式 （式中、R2はニトロを表わし、そしてR3は水素
又はカルボキシを表わす）を有する基を表わす。 上記の式を有する残基Ｘにおいて、R2は特に
硫黄に対してｐ−あるいはｏ−位にあるニトロ基
を表わす。Ｘの特に好ましい意味はｐ−ニトロフ
エニルチオ、ｏ−ニトロフエニルチオ、ｍ−カル
ボキシ−ｐ−ニトロフエニルチオおよびｐ−カル
ボキシ−ｏ−ニトロフエニルチオである。 本発明の対象はさらに、式 （式中、Ｚはホルミルオキシ、アセトキシ、アセ
トアセトキシあるいはアミノカルボニルオキシで
あり、そしてR1は前述の意味を有する）を有す
る化合物を式Ｈ−Ｘ（式中Ｘは前述の意味を有す
る）を有する化合物と反応させそしてR1が水素
を意味する場合は、必要に応じ
【式】又は
【式】あるいはこれらの反応 性誘導体と反応せしめることを特徴とする、一般
式を有するセフアロスポリンの製法である。 本発明による方法の実施に必要な出発物質は文
献上既知であるかあるいは文献上既知の方法によ
り調製されうる。 化合物と式Ｈ−Ｘを有する化合物との反応は
好ましくは水性媒質中で行われ、その際、反応に
関与している成分の溶解度を改良するためになか
んずくメタノール、エタノール、イソプロパノー
ル、アセトニトリル、アセトン、ジメチルホルム
アミド、ジメチルアセトアミド、テトラヒドロフ
ランあるいはジオキサンのような水混和性有機溶
媒が添加されうる。 式Ｈ−Ｘを有する化合物はまた塩例えばアルカ
リあるいはアルカリ土類塩、特にナトリウムもし
くはカリウム塩、あるいは場合により置換されて
いてもよいアンモニウム陽イオンとの塩の形で使
用されうる。 反応成分は任意の割合で、しかしながらなかん
ずく１〜約５までのモル比で反応される。 反応の温度は限定的でないがしかしながらなか
んずく約20〜80℃である。反応混合物を所望され
る反応温度で沸騰する有機の、水溶性もしくは水
不溶性の溶媒中に加えることが好ましい。それに
より反応温度が一定に保持される。 反応の間、反応混合物のPH値は酸または塩基の
添加により約５〜８の範囲、なかんずく6.5〜7.5
の範囲に保持される。 別の実施形態においては、式（式中、R1は
水素を表わし、そしてＸは前記の意味を有する）
を有するセフアロスポリンを
【式】又は
【式】あるいはこれらの活性 化された誘導体とそれ自体既知の方法で反応させ
ることにより、本発明化合物を製造することがで
きる。 活性化された誘導体としは特に年ハロゲン化物
なかんずく塩化物および臭化物、さらに無水物お
よび混合無水物、アジドおよび活性化エステルな
かんずくｐ−ニトロフエノール、２，４−ジニト
ロフエノール、メチレンシアンヒドリン、Ｎ−ヒ
ドロキシコハク酸イミドおよびＮ−ヒドロキシフ
タルイミドとのエステル特に好ましくは１−ヒド
ロキシベンゾトリアゾールおよび６−クロル−１
−Ｈ−ヒドロキシベンゾトリアゾールとのエステ
ルが適している。混合無水物としては特に低級ア
ルカン酸例えば酢酸との混合無水物が適当であり
そして特に好ましくは例えばトリクロル酢酸、ピ
バリン酸あるいはシアン酢酸のような置換酢酸と
の混合無水物である。しかしまた特に適当なの
は、例えば式を有するカルボン酸とクロルぎ酸
ベンジルエステル、−ｐ−ニトロベンジルエステ
ル、−イソブチルエステル、−エチルエステルある
いは−アリルエステルとの反応により得られる炭
酸半エステルとの混合無水物である。活性化され
た誘導体は単離された物質として反応されてもよ
いし、またはそのままでも反応されうる。一般に
セフエム誘導体（式中R1は水素を表わす）と
カルボン酸もしくはその活性化誘導体との反応
は不活性溶媒の存在下に行われる。特になかんず
くメチレンクロリドおよびクロロホルムのような
塩素化炭化水素、例えばジエチルエーテル、ジイ
ソプロピルエーテルおよびなかんずくテトラヒド
ロフランおよびジオキサンのようなエーテル、な
かんずくアセトンおよびブタノンのようなケト
ン、なかんずくジメチルホルムアミドおよびジメ
チルアセトアミドのようなアミドあるいは水が適
している。また前記溶媒の混合物を使用すること
も好ましい。これはセフエム化合物（式中R1
は水素を表わす）をその場で得られるカルボン酸
の活性化誘導体と反応させる場合にしばしばそう
である。 セフエム化合物（式中R1は水素を表わす）
と前述のカルボン酸またはその活性化誘導体との
反応は約−50℃〜約＋80℃、なかんずく−20℃〜
＋50℃、しかしながら特に好ましくは−20℃〜室
温の温度範囲に行われる。 反応時間は反応剤、温度および溶媒または溶媒
混合物の如何によるもので通常15分ないし約72時
間である。 カルボン酸の活性化誘導体と式（式中R1は
水素を表わす）を有するセフエム化合物との反応
はなかんずくPH７以上のアルカリ性媒質中で行わ
れる。これには反応混合物に、なかんずく炭酸カ
リウムあるいはナトリウム、重炭酸カリウムある
いはナトリウム、水酸化カリウムあるいはナトリ
ウム、ピリジンあるいは、例えばトリエチルアミ
ン、Ｎ−メチルモルホリン、エチルジイソプロピ
ルアミンのようなトリアルキルアミン、あるいは
カリウム第三ブチレートのような塩基を加える。 式を有する本発明による化合物は、反応終了
後添加されている有機溶媒を留去し、例えば式Ｈ
−Ｘを有する未反応の出発成分を除去するために
水相を酢酸エステルあるいは他の適当な溶媒を用
いて抽出しそして次に水相をPH２〜４なかんずく
PH３に酸性化してその際化合物を析出させそし
てそれを例えば過により分離することにより単
離されうる。 本発明による化合物を単離するためのもう一つ
の実施形態は水相をPH２〜４なかんずくPH３でな
かんずく酢酸エステルのような水非混和性溶媒を
用いて抽出することである。抽出液を真空下に濃
縮したのち、反応生成物が溶解し難い有機溶媒例
えばエーテルあるいは石油エーテルを添加するこ
とにより反応生成物を析出させる さらにもう一つの実施態様においては式を有
する反応生成物はまたPH４より高いPH値で直接反
応バツチからなかんずく酢酸エステルのような水
非混和性有機溶媒中に抽出されうる。以後の処理
は前記のようにしてなされる。 β−ラクタマーゼの一般的な検出に特に好まし
い７−β−チエン−２−イル−アセトアミド−３
−〔（４−ニトロ−３−カルボキシフエニル）−チ
オメチル〕−３−セフエム−４−カルボン酸は緩
衝された溶液（PH7.3）中で弱く黄色に着色して
いる（λnax344nｍ）。β−ラクタマーゼ例えばエ
ンテロバクター・クロアカエP99からの酵素との
反応の後にｐ−ニトロチオフエノラートに特徴的
な黄色（λnax405nｍ）が生ずる。色の強度は当然
溶液のPH値の如何によるものでそしてPH8.0でそ
の最大に達する。しかしながら正常の測定にはPH
値7.3で充分である。基質および反応生成物の最
大の顕著な吸光差は415nｍにある。この好まし
い化合物の同様の反応はまたその他のβ−ラクタ
マーゼ、例えば大腸菌RTEM、クレブシエラ・ア
エロゲネス1082E、緑膿菌18SH、バクテロイデ
ス・フラギリス620および黄色葡萄球菌R85から
のβ−ラクタマーゼについても行われる。他の本
発明による色原体セフアロスポリンはβ−ラクタ
マーゼとの反応に際して相当する色の変化を生ず
る。 本発明による化合物は、例えば中性に緩衝され
ている色原体セフアロスポリンの水溶液に直接単
離されているβ−ラクタマーゼあるいはβ−ラク
タマーゼ産生性病原菌の細胞懸濁液を加えると、
その際使用される色原体セフアロスポリンの適当
な濃度を選択することにより特徴的な色の発現が
観察され、それによりβ−ラクタマーゼの検出に
使用される。 あるいはまた集落（コロニー）残渣の形にある
得られる臨床的な単離物を予め適当になかんずく
本発明による化合物の水溶液を用いて濡らした紙
でつくつた湿潤試験片あるいはその他の適当な担
体物質例えば吸収性の合成物質、デキストランあ
るいは他の天然重合体上に塗布する。ここでもま
たβ−ラクタマーゼ陽性の試料は短時間内で特徴
的な色の変化を示す。 更にまた本発明による化合物は例えばカラムク
ロマトグラフフイー分離法に際してβ−ラクタマ
ーゼ−ピークの位置を確認するためにβ−ラクタ
マーゼの精製に際して使用されうる。本発明によ
る化合物のもう一つの好ましい使用は適当なβ−
ラクタマーゼと本発明による化合物との反応を完
全もしくは部分的に妨害するβ−ラクタマーゼ抑
神制剤例えばクラブラン酸の測定のための酵素力
学的研究にある。 以下実施例によつて本発明を説明するが、これ
らの実施例は本発明を限定するものではない。 実施例 １ ７−β−チエン−２−イル−アセトアミド−３
−〔（４−ニトロフエニル）−チオメチル〕−３−
セフエム−４−カルボン酸 ｐ−ニトロチオフエノール２ｇを７−チエン−
２−イル−アセトアミト−セフアロスポラン酸ナ
トリウム塩4.2ｇとアセトン／水（１：１）120ml
中でPH6.5〜7.2および64℃で２時間撹拌する。さ
らに0.5ｇのｐ−ニトロチオフエノールを添加し
たのちさらに２時間撹拌する。室温まで冷却した
のち2N塩酸を用いてPH7.0に調整し、酢酸エステ
ルを用いて２回抽出し、酢酸エステル残分を水相
から回転蒸発器で除去しそして水相を０℃で2N
塩酸を用いてPH2.0に酸性化する。淡黄色沈殿が
生じ、これを吸引過しそし真空下に五酸化燐で
乾燥する。標記化合物3.2ｇが得られる。 NMR（DMSO−d6）： δ＝6.9〜7.5ppm（チエニル、3H） δ＝4.2ppm（ｓ、2H、CH2−CO） δ＝9.0ppm（ｄ、1H、CONH） δ＝5.6ppm（ｑ、1H、Ｃ−７−Ｈ） δ＝5.1ppm（ｄ、1H、Ｃ−６−Ｈ） δ＝3.8ppm（ｓ、2H、Ｃ−２−CH2） 3.6（AB、2H、CH2−Ｓ） δ＝7.5ppm（4H、ｐ−ジ置換−フエニル） 8.1 実施例 ２ ７−β−フエニルアセトアミド−３−〔（４−ニ
トロ−３−カルボキシ−フエニル）−チオメチ
ル〕−３−セフエム−４−カルボン酸 ７−フエニルアセトアミド−セフアロスポラン
酸1.95ｇを窒素気流下に水100ml中で重炭酸ナト
リウムを添加することによりPH7.0で溶解させる。
これに水12ml中の５−メルカプト−２−ニトロ−
安息香酸ジナトリウム塩6.2モルからなる溶液を
滴下する。この混合物をPH6.5〜7.2で室温で１時
間続いて60℃で４時間撹拌する。さらに水中の
3.8モルの５−メルカプト−２−ニトロ−安息香
酸ジナトリウム塩を添加したのちさらに５時間60
℃で撹拌し、冷却し、PH5.0に調整しそして各100
mlずつの酢酸エステルを用いて３回撹拌する。水
相から酢酸エステルの残分を除去しそして氷浴中
でPH2.0に酸性化する。沈殿を分離しそして40℃
において五酸化燐上で真空下に乾燥する。標記化
合物2.6ｇが得られる。m.p.98〜110℃（分解）。 NMR（DMSO−d6）： δ＝9.1〜9.0ppm（ｄ、1H、CONH） δ＝8.1〜7.0ppm（ｍ、3H、芳香族性プロトン） δ＝7.4ppm（ｓ、5H、フエニル） δ＝5.7ppm（ｑ、1H、Ｃ−７−Ｈ） δ＝5.2ppm（ｄ、1H、Ｃ−６−Ｈ） δ＝4.4ppm（ｓ、2H、CH2−Ｓ） δ＝3.5ppm（ｓ、4H、CH2COおよびＣ−２−
CH2） 実施例 ３ ７−β−チエン−２−イル−アセトアミド−３
−〔（４−ニトロ−３−カルボキシフエニル）−
チオメチル〕−３−セフエム−４−カルボン酸 ７−チエン−２−イル−アセトアミド−セフア
ロスポラン酸ナトリウム塩16.7ｇを水650ml中に
溶解させそして窒素気流下に撹拌する。水100ml
中の５−メルカプト−２−ニトロ−安息香酸ジナ
トリウム塩50ミリモルをゆつくり滴下する。その
際PHは7.0に保持される。PH6.9〜7.1で６時間60℃
に加温しそして次に冷蔵庫中に放置する。PHを
5.0となしそしてこの溶液を各200mlずつの酢酸エ
ステルを用いて３回抽出する。水相から酢酸エス
テルの残分を除去し、０℃に冷却しそして2N塩
酸を用いてPH2.0に酸性化する。沈殿を五酸化燐
で乾燥する。標記化合物22ｇが得られる。m.p.99
〜104℃（分解）。 NMR（DMSO−d6）： δ＝9.0〜9.2ppm（ｄ、1H、CONH） δ＝7.1〜8.1ppm（ｍ、芳香族性プロトン） δ＝6.8〜7.0ppm（ｍ、2H、チエニル3H＋4H） δ＝5.6ppm（ｑ、1H、Ｃ−７−Ｈ） δ＝5.1ppm（ｄ、1H、Ｃ−６−Ｈ） δ＝4.3ppm（ｓ、2H、CH2−Ｓ） δ＝4.8ppm（ｓ、2H、CH2CO δ＝4.5ppm（AB、2H、Ｃ−２−CH2） 実施例 ４ ７−β−アミノ−３−〔（４−ニトロ−３−カル
ボキシ−フエニル）−チオメチル〕−３−セフエ
ム−４−カルボン酸 ７−アミノ−セフアロスポラン酸2.2ｇを窒素
気流下に水150ml中に重炭酸ナトリウムを用いて
PH7.0で溶解せしめる。水20ml中の５−メルカプ
ト−２−ニトロ−安息香酸ジナトリウム塩10ミリ
モルをPH6.8〜7.3で滴下する。室温で１時間そし
て60℃で６時間撹拌する。その際PHは6.8〜7.0に
保持される。これを室温まで冷却させ、2N塩酸
を用いてPH5.0となしそして各50mlずつの酢酸エ
ステルを用いて３回抽出する。水相から酢酸エス
テルの残分を除去し、０℃に冷却しそしてPH2.0
に酸性化する。これを吸引過しそして沈乾燥す
る。収量は標記化合物2.4ｇである。m.p.230℃
（分解）。 NMR（DMSO−d6）： δ＝8.1〜7.5ppm（ｍ、芳香族性プロトン） δ＝5.1ppm（ｄ、1H、Ｃ−７−Ｈ） δ＝4.8ppm（ｄ、1H、Ｃ−６−Ｈ） δ＝4.3ppm（ｄ、2H、CH2−Ｓ） δ＝3.6ppm（AB、2H、Ｃ−２−CH2） 実施例 ５ ７−β−フエニルアセトアミド−３−〔（４−ニ
トロ−３−カルボキシ−フエニル）−チオメチ
ル〕−３−セフエム−４−カルボン酸 ７−アミノ−３−〔（４−ニトロ−３−カルボキ
シ−フエニル）−チオメチル〕−３−セフエム−４
−カルボン酸822mgを水200ml中で重炭酸ナトリウ
ム500mgを用いて溶液となし、アセトン20mlを加
えそして氷浴中で０〜５℃に冷却する。撹拌下に
アセトン５ml中の塩化フエナセチル350mgを滴下
する。30分間撹拌後にアセトン２ml中の塩化フエ
ナセチル50mgをさらに加える。30分後アセトンを
除去しそして水相を2N塩酸を用いてPH2.0に酸性
化する。沈殿を集め、水洗しそして乾燥する。標
記化合物750mgが得られ、これは実施例２により
得られる化合物と物理的性質が同一である。 実施例 ６ ７−β−チエン−２−イル−アセトアミド−３
−〔（４−ニトロ−３−カルボキシ−フエニル）
−チオメチル〕−３−セフエム−４−カルボン
酸 塩化フエナセチルの代りに合計415mgのチエン
−２−イル−アセルクロリドを使用して実施例５
の記載に従い操作する。標記化合物670mgが単離
され、これは実施例３により得られる化合物と物
理的性質が同一である。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式 を有するセフアロスポリン〔ここで上式中、R1
    は水素、【式】又は 【式】を表わし、そしてＸは式 （式中、R2はニトロを表わし、そしてR3は水素
    又はカルボキシを表わす）を有する基を表わす〕。 ２ 式 （式中、Ｚはホルミルオキシ、アセトキシ、アセ
    トアセトキシあるいはアミノカルボニルオキシで
    あり、そしてR1は水素、【式】 又は【式】を表わす）の化合物 を式Ｈ−Ｘ 〔式中Ｘは式 （式中、R2はニトロを表わし、そしてR3は水素
    又はカルボキシを表わす）を有する基を表わす〕
    の化合物と反応させ、そしてR1が水素を意味す
    る場合は、必要に応じ【式】 又は【式】あるいはこれらの 反応性誘導体と反応せしめることを特徴とする、
    一般式 （式中R1及びＸは前記の意味を有する）を有す
    るセフアロスポリンの製造方法。 ３ 式Ｈ−Ｘ〔式中Ｘは式 （式中、R2はニトロを表わし、そしてR3は水素
    又はカルボキシを表わす）を有する基を表わす〕
    を有する化合物をその塩の形で用いる特許請求の
    範囲第２項に記載の方法。 ４ 一般式 〔式中、R1は水素、【式】又は 【式】を表わし、そしてＸは式 （式中、R2はニトロを表わし、そしてR3は水素
    又はカルボキシを表わす）を有する基を表わす〕
    を有する色原体セフアロスポリンを溶液中にかも
    しくは担体物質上に包含することを特徴とするβ
    −ラクタマーゼ検出用製剤。 ５ 担体物質が紙（試験片）あるいはその他の適
    当な物質である特許請求の範囲第４項に記載の製
    剤。
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