JPH0248577A - テトラヒドロ葉酸類の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は５．１０−メテニル−（６Ｒ）−テトラヒドロ
葉酸〔以下、５．１Ｏ−ＣＨ−（６Ｒ）−Ｔｌ（Ｆと略
記する〕、種々の生物学的に活性のあるテトラヒドロ葉
酸塩類、中でも５−ホルミル−（６Ｓ）−葉酸〔以下、
５−Ｃ）１０−　（６Ｓ）−ＴＨＦと略記する〕の製造
方法及び５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸〔以
下、５−Ｍｅ−（６Ｓ）−ＴＨＦと略記する〕並びにそ
の塩類、中でも生理学的受容性の良好なカルシウム塩、
マグネシウム塩、ナトリウム塩及びカリウム塩に関する
。

上記の（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸塩類〔すなわち（６
Ｓ）−５，６，７，８−テトラヒド口ブ〆テロイドーし
一グルタミネート〕は葉酸の充分に安定な、生物学的に
安定な天然の形態である（葉酸補助因子）。

５−ＣＨＯ−（６Ｓ）　ＴＨＦはいわゆるシトロボルム
因子（すなわち微生物Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ　Ｃｉｔ
ｒｏｖｏｒｕｍの発育因子）である。

生物体の中で５−ＣＩＩＯ−（６Ｓ）−ＴＨＦは５．１
０−メチレン−（６Ｒ）−ＴＨＦを経て５−Ｍｅ−（６
Ｓ）−ＴＨＦに変換される。

テトラヒドロ葉酸塩は二つの非対称中心を有している。

このものを葉酸（Ｎ−（プテロイル）−Ｌ−グルタミン
酸〕から合成する際にそのグルタミン酸残基中に含まれ
るキラール炭素原子はＬ型で存在するが、一方そのプテ
ロイル残基の５，６位置の２型詰合の水素化によって生
ずる６位置ｃ以下Ｃ（６）と略記する〕のキラール炭素
原子はラセミ型〔以下（６Ｒ，Ｓ）と表わす〕で存在す
る。従って合成されたテトラヒドロ葉酸塩は常にそれら
二つのジアステレオマーの１：１の混合物よりなる。

天然由来のもの、例えば肝臓中においてはそれらテトラ
ヒドロ葉酸塩は一方のジアステレオマーの形でのみ存在
し、その際５−ＣＨＯ−ＴＨＦは５−ＣＨＯ（６Ｓ）−
ＴＨＦとして、そして５−Ｍｅ−ＴＨＦは５−Ｍｅ−（
６Ｓ）　−ＴＨＦとして存在する。天然のテトラヒドロ
葉酸のＣ（６）のところの絶対的な形はＪ、Ｃ，Ｆｏｎ
ｔｅｃｉ　ｌ　ｌａ−Ｃａｍｐｓ等；　Ｊ、　八ｍｅｒ
、　　Ｃｈｅｍ、　　Ｓｏｃ、　　１０１　　（２０）
、６１４１５（１９７９）によればいわゆる遂次法則に
従い表わしてＳで示され、そして天然の５．１０−メチ
レン−テトラヒドロ葉酸及び５．１０−メテニル−テト
ラヒドロ葉酸のＣ（６）の所のそれはＲで表わされる（
Ｒ，Ｋａｌｂｅｒｍａｔｔｅｍ等；　Ｈｅ１ｖ、　Ｃｈ
ｉｍ、　Ａｃｔａ　　６４（８）、　２６２７（１９８
１）の脚註４〕。

５−ＣＨＯ−（６Ｒ，５）−ＴＩＩＰ　（すなわち葉酸
）はそのカルシウム塩の形（Ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ）で
巨赤芽球性葉酸欠乏−貧血症の処理用薬剤として、葉酸
拮抗体、中でも癌治療及び乾唐及びリュウマチ関節炎の
ような自己免疫症の処置におけるアミノプテリン、メト
トレキセート及びフルオロウラシルの受容性増強用の解
毒剤として（Ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ　Ｒｅ５ｃｕｅ）更
にはまた化学療法における例えばトリメトプリム−スル
ファメトキサゾールのような特定の駆虫剤の受容性の増
強のために用いられる。

カルシウム−メチル−（６Ｒ，Ｓ）−テトラヒドロ葉酸
塩も同様の用途に用いられる。

５−Ｃ１（０−（６Ｒ，５）−ＴＲＩ’を投与した後で
このジアステレオマー混合物の（６Ｓ）部分は迅速に５
−　Ｍｅ−（６Ｓ）　−ＴＩＩＦに転換され、一方その
（６Ｒ）部分は代謝されない。

（Ｊ、Ａ、Ｓｔｒａｗ等；　Ｃａｎｃｅｒ、　Ｒｅ５ｅ
ａｒｃｈ　　４４．３１１４−３１１９（１９８４）　
）。

加えて５−ＣＨＯ−（６Ｒ）−Ｔ肝はＣ１−転移を引起
す種々の酵素のいくつかを阻害し、また従ってテトラヒ
ドロ葉酸塩の生物学的作用を阻害する（Ｒ，Ｔ、Ｌｅａ
ｒｙ等；　Ｂ’＃ｈｅｍ、　Ｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃ
ｏｍｍｕｎ、　　５６＋４８４（１９７３）、Ｔ、Ｆ、
　５ｃｏｔｔ等；同文献５４．５２３（１９６４）　、
Ｇ、に、Ｓｍｉｔｈ等；　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、
　２０．４０３４（１９８１））　＠従って（６Ｒ，Ｓ
）−テトラヒドロ葉酸の代りに（６Ｓ）−テトラヒドロ
葉酸塩を使用することは必らずや治療学的な種々の利点
をも示すはずである。

〔発明が解決する問題点〕

従ってこれまで用いられてきたそれぞれその（６Ｓ）型
と（６Ｒ）型とを含んでいるジアステレオマーの混合物
を天然の（６Ｓ）のものと置き換えるという要求が存在
する。

これまで（６Ｒ，Ｓ）−テトラヒドロ葉酸を分離するた
め、及びこれらを非対称的に合成し且つその生理学的に
活性の型のものを分離するための多数の試みがなされて
きた。

Ｄ、　Ｃｏ５ｕｌｉｃｈ等（Ｊ、　Ａｍｅｒ、Ｃｈｅｍ
、　５ｏｃ７４，４２１５１６（１９５２入米国特許第
２．６８８．０１８号公報（１９５４年８月３１日）〕
は５−ＣＩＩＯ−（６Ｒ，５）−ＴＨＦのアルカリ土類
塩、ようとした（Ｊ、　Ｃ，Ｆｏｎｔｅｃｉｌｌａ、　
Ｃａｍｐｓ等のＪ、　Ａｍｅｒ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ
　１０１．６１１４（１９７９）をも、参照〕。

それらり、　Ｃｏ５ｕｌｉｃｈ等によって開示された条
件のもとでは所望の分離を実現することはできない。

例えば５−ＣＨＯ−（６Ｒ，５）−ＴＨＦのカルシウム
塩をｐｔ＋　７−８において水から結晶させる際に常に
６Ｒ，Ｓ型が得られ、これはキラールＨＰＬＣカラムで
のクロマトグラフィ分析により、また光学的旋光によっ
て定量的に検出ことができる。

この場合に５−ＣＨＯ〜（６Ｒ，５）−ＴＩＰの純粋な
カルシウム塩を結晶化に用いるかまたは粗性のカルシウ
ム塩を結晶化に用いるかは重要ではなく、常に（６Ｒ８
）型のものが得られる。５−Ｃ）１０−　（６Ｒ，５）
−ＴＩのアルカリ土類塩の過飽和溶液に真性の５−ＣＩ
Ｏ〜（６Ｓ）−ＴＨＦのアルカリ土類塩の種子結晶を入
れたとしても（６Ｓ）型の分離や濃縮には達することが
できない。

ジアステレオマ一対の分離はまたクロマトグラフィによ
っても試みられた。（Ｊ、　Ｆｅｅｎｅｙ等；Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ２０．１８３７（１９８１））　、更
にまた（６Ｓ）型異性体はジヒドロ葉酸塩還元酵素の存
在のもとてのジヒドロ葉酸塩類の立体特異的還元によっ
て作られた。（Ｊ、　Ｒｅｅｓ等；　Ｔｅｔｒａｈｅｄ
ｒｏｎ　４２．１１７（１９８６））　　。

Ｌ、　Ｒｅｅｓ等は雑誌Ｊ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　
Ｃｏｍｍｕｎ、１９８７＋４７０及びヨーロッパ特許Ｅ
ＰＡ２−０．２６６、０４２号において（６Ｒ、５）−
Ｔ）ＩＦの分離法の一つを記述しており、これによれば
５−ＣＩＩＯ−（６Ｓ）　−ＴＩ及び５−ＣＨＯ−（６
Ｒ）−ＴＨＦを僅かな量で作り出すことができた。この
方法は（６Ｒ，５）−ＴＩ（Ｆを例えば（−）−メンチ
ルクロロホニミエートと反応させてジアステレオマーの
５−（−）−メンチルオキシカルボニル−テトラヒドロ
葉酸に変え、このものをｎ−ブタノールにより繰り返し
処理することによって分離し、その得られたジアステレ
オマーを蟻酸と酢酸との混合物中のしゆう化水素の飽和
溶液と共に加温し、その際加水分解の後に５ホルミル−
（６Ｓ）−ＴＩＩＦ及び同一（６Ｒ）−ＴＩＩＦが形成
され、そして最後にこれらをカルシウム塩として分離す
る。

この方法は回りくど（て困難であり、そしてそのキラー
ル試薬の製造のために毒性の高いホスゲンを使用する必
要がある。その上にその出発物質である（６Ｒ，５）−
ＴＨＦは非常に不安定である。そのキラール性補助基を
Ａ　ｃ　Ｏ［１中でＨＢｒにより５０°Ｃ以下において
分解する際にグルタミン酸の一部が分解し、そして困難
にしか分離することができないような種々の副生成物が
生ずる。このような方法によって作られた（６Ｓ）葉酸
は非常に高価であり、従ってこれを（Ｒ，Ｓ）−テトラ
ヒドロ葉酸塩の代りに用いることは全く考えられない。

今日まで（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸塩の工業的に実用
化できる回収方法は全く知られていない。従って依然と
して５−ＣＨＯ−及び５−Ｍｅ−（６Ｓ）−ＴＩＩＦを
製造する工業的に利用可能な簡単な方法を見つけ出すと
いう課題が存在している。

５−ＣＨＯ−及び５−Ｍｅ−（６Ｒ，５）−ＴＨＦは公
知のように葉酸から製造することができる。蟻酸による
ホルミル化によって１０−ホルミル−葉酸（以下１Ｏ−
ＣＨＯ−ＦＡと略記する）が形成される。このものは次
に接触的に１０−ホルミル−テトラヒドロ葉酸（１０−
ＣＨＯ−ＴＨＦ）に加水分解することができる。このも
のから脱水により５，１０−メテニル−テトラヒドロ葉
酸（下記１式のもの、　５．１Ｏ−ＣＩｌ−ＴＨＦ、す
なわち無水のロイコボリン）を得ることができる： この弐においてｘ〜は例えばＣ）ｌ−またはＢｒ−のよ
うな任意のアニオンの当量を表わす。上記式ｌ塩の形で
存在することもできる。この形のものからアニオン交換
によって対応する分子内塩も得ることができる（この場
合に上記１式においてＸ−は存在せずＣ００ＨＯ代りに
ＣＯＯ−となる）。上記式１の化合物から所望のテトラ
ヒドロ葉酸塩は容易に製造することができる。加水分解
（ホルミル転移）によって５−ホルミル−テトラヒドロ
葉酸（５−ＣＨＯ−ＴＨＦ）が得られ、このものはカル
シウム塩（口ｘｅ　　イコボリン）として分離すること
ができる。〔ス（１）　　イス特許筒３０５．５７４　
（シアナミド社）〕。硼水素化ナトリウムによる還元に
よって５−メチル−テトラヒドロ葉酸（５−Ｍｅ−ＴＨ
ＦすなわちＭｅ葉酸）が得られ、このものはカルシウム
塩またはマグネシウム塩として分離することができる。

〔スイス特許筒６４９．５５０号（ニブロバ社）〕。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者等は（６Ｒ，Ｓ）の型の上記式１の化合物また
はその塩類の溶液の分別結晶によって（６Ｒ）の上記式
１の化合物またはこのものの酸付加塩〔すなわち省略記
号式でＣ５，１Ｏ−ＣＩ−（６Ｒ）−ＴＨＦ）　”Ｘ−
）ＩＸの化合物〕またはこのものの分子内塩を次のよう
な態様で、すわち（６Ｒ）型の上記式１式の化合物の結
晶化物の含有量が９０％以上になるような態様で結晶化
させることができることを見出した。

（６Ｒ）型の上記１弐の化合物はそれ自身所望のテトラ
ヒドロ葉酸塩の製造によ（適しており、このものから加
水分解によって５−ＣＩ（Ｏ−（６Ｓ）−ＴＨＦが、そ
して還元によって５−Ｍｅ−（６Ｓ）−ＴＩ（Ｆが得ら
れる。

すなわち重要なことはジアステレオマの分離が一段階で
実施されることである。

このような分離を達成できたことはＲｅｅｓ等によって
（Ｊ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　Ｃｏｍｍｕｎ、１９８
７．４７０）この分離を可能にするためにはそのＴＨＦ
分子の中にもう一つの追加的なキラール中心を導入し、
従って著しい複雑性を伴ったということが報告されてい
るために驚くべきことである。

従って本発明の対象は５，１０−メテニル−（６Ｒ）−
テトラヒドロ葉酸５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒド
ロ葉酸及び／又は５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ
葉酸並びにそれらの塩を製造する方法において、５．１
０−メテニル−（６Ｒ，Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、この
ものの分子内塩及び／又はこのものの強酸との塩を分別
結晶によってジアステレオマー分離させ、そしてその所
望の場合にはその得られた５、　１０−メテニル−（６
Ｒ）−テトラヒドロ葉酸を加水分解剤による処理により
５−ホルミル−６−テトラヒドロ葉酸に、または還元剤
により５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸に、及
び／又は得られた遊離の酸を塩基による処理によって塩
にすることを特徴浜する方法である。

本発明に従うジアステレオマー分離は好ましくは少なく
とも一つ以上の極性溶剤からの分別結晶によって行われ
る。

〔作用〕

極性溶剤としては例えば低級脂肪族カルボン酸類、中で
も蟻酸及び酢酸、例えばホルムアミド、ジメチルホルム
アミド、ジメチルアセトアミド、１−メチル−ピロリド
ン、２−ピペリジノン、４−ホルミル−モルホリン、■
−ホルミルー　ピロリドン、１ホルミル−ピペリジンの
ような液状水溶性アミド類、テトラメチル尿素、例えば
ジメチルスルホキシド、ジメチルスルホンまたはスルホ
ラン（テトラメチルスルホン）のようなスルホキシドま
たは硝酸、燐酸のような水性鉱酸類のような濃水性強酸
類、あるいは例えばしゅう酸、マレイン酸、トリクロル
酢酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、ベンゾー
ルスルホン酸、トルオールスルホン酸、カンファースル
ホン酸のような有機強酸類の←溶液があげられる。蟻酸
が好ましい。しかしながら上記した種々の溶剤の混合物
、中でも濃厚水性鉱酸、例えば濃塩酸及び結晶化剤とし
て少量の水を使用することも可能である。この場合に水
の量をその濃厚水性鉱酸のそれとほぼ近似させるかまた
は全（等しくした場合には（５，１０−（６Ｒ，５）−
ＴＩＩＦ）“Ｘ−・）ＩＸが生成し、すなわち分離は全
（行われない。好ましい溶剤は蟻酸であり、そして結晶
化剤は水性強酸用でも薄い塩酸、臭化水素酸、硫酸また
スルホン酸または硝酸である。水性強酸の代りに結晶化
剤として酢酸を使用することも可能である。

最終生成物として一般に前記１式の５，１０−メテニル
−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸塩の対応する酸Ｈχの酸
付加塩が得られる。例えば溶剤としての蟻酸中の（６Ｒ
，Ｓ）型の前記１弐の化合物（Ｘ＝ＣＩ）の塩酸付加塩
の濃厚溶液に水性濃塩酸（結晶化剤として）を加えた場
合には（６Ｒ）型の前記１式の化合物は省略記号式で（
５，１Ｏ−ＣＨ−（６Ｒ）−ＴＨＦ）　ＣＩ　−ＨＣＩ
の塩化物塩酸付加塩の形で約９０％の（６Ｒ）の部分を
含んで晶出する。この（６Ｒ）の部分は例えば蟻酸／塩
酸から更に何度も再結晶することによって更に上昇させ
ることができる。

水素酸塩＝　（Ｘ＝Ｂｒ）が得られる。

上記の溶剤と結晶化剤との量の割合及び酸の濃度は広い
範囲内で変化することができる。好ましくは５，１〇−
柘’ｉＲ，５）−Ｔ）ＩＰの濃度は１０ないし４０重量
％であり、溶剤と結晶化剤との割合は１０：１から１：
１までであるのがよい。結晶化剤中の酸の濃度はＯない
し１２Ｎであることができる。比較的多量の結晶化剤を
用いた場合には一般に分離効果が低い場合により高い収
量を得ることができ、これに対して少ない量の結晶化剤
を使用した場合には分離効果が良好になり、その際いず
れにしても収量は低下する。所望の目的、その都度使用
する出発物質ことができる。

（５，１Ｏ−Ｃ１ｌ−（６Ｒ，５）−ＴＨＦ）　　Ｘ−
ＨＸの型の酸付加塩から出発した場合には蟻酸のような
溶剤から水の晶 添加のもとに、または結消化剤を添加することに晶 よりあるいはまた結鼠化剤を“添加すること無しに別 分裂結晶によッテ（５，１Ｏ−ＴＨ−（６Ｒ）−ＴＨＦ
）　　Ｘｌ（Ｘ）形成のもとにディアステレオマーの分
離を達成すのジアステレオマーである（６Ｆ）化合物は
濾液の中に濃縮される。例えば５．１Ｏ−ＴＨ−（６Ｒ
，５）−ＴＨＦの分子内塩を蟻酸／水から結晶化させる
か、または〔５゜ルスルホキシドから結合比させるよう
な特別な湯中から分離することができる。

本発明の特に好ましい実施形態の一つは、葉酸の、１０
−ホルミル葉酸にホルミル化し、そして次に接触的に水
和し且つ脱水することにより得られる蟻酸溶液は（６Ｒ
，Ｓ）の前記１式の化合物をその場で含ん・でいるが、
これに例えば塩酸のような水性強酸を加えることよりな
り、これによってその（６Ｒ）　−ジアステレオマーは
（５，１Ｏ−ＣＨ−（６Ｒ）−ＴＨＦ）　　Ｘ−ＨＸ０
式の酸付加塩の形、例えば対応する塩化物−塩酸付加塩
の形で結晶化させることができる。この方法によって（
６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸塩、中でも５−ＣＨＯ−（６
Ｓ）−ＴＨＦ及び５−Ｍｅ−（６Ｓ）−Ｔ肝を極めて簡
単に且つ特に経済的に入手することができるようになっ
た。

生理学的受容性の良好な塩としては先ず第一にカルシウ
ム塩、マグネシウム塩、ナトリウム塩及びカリウム塩が
あげられる。マグネシラｌ、塩はカルシウム塩と比べて
一般に高い水溶性によって優れている。これはその使用
に際して投与量の広い許容範囲を与える。

５、１Ｏ−ＣＩ（−（６Ｒ）−ＴＨＦまたはその酸付加
塩から、その−緒に含まれている（６Ｓ）型のものを完
全に除去することは必要でない。加水分解または還元に
よって５−ＣＨＯ−（６Ｓ）−ＴＨＦあるいは５−Ｍｅ
−（６Ｓ）−ＴＨＦに変える場合及びそれらを分離する
際にその都度この不純ジアステレオマーの残りは除かれ
る。

〔実施例〕

拠」 カルシウム−５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉
酸塩 １．１５．１０−メテニル−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉
酸〔すなわち無水型ロイコポリン；　（６Ｒ，Ｓ）の前
記１弐の化合物〕の分別結晶 ２１の蟻酸の中に１０００ｇの（５，１０−メテニル＝
（６Ｒ，Ｓ）−テトラヒドロ葉酸〕塩化啓物・塩酸付加
塩２水和物〔すなわち　５．１Ｏ−ＣＨ−（６Ｒ，５）
−ＴＨＦＣｌ　−１（Ｃ１・２）１２０）を含む３５℃
の溶液に２Ｎの塩酸３００ｍ１を加え、ゆっくりと２０
℃に冷却させて結晶化させる。数時間の後にその晶出し
た生成物を濾過分離して２Ｎの塩酸で洗滌する。（５−
１０−Ｃｔｌ−（６Ｒ）−Ｔ）ＩＰ）　−Ｃ１−）１ｃ
Ｉのキラールカラム（Ｒｅｓｏｌｖｏｓｉｌ−ＢＳＡ−
７）を用いた肝ＬＣにより測定したジアステレオマー含
有１９１．５％を有する（６Ｒ）型の１式の化合物が得
られる。

［α］　２５　　＝　＋３５°（ＤＭＳＯ／２Ｎ　ＢＣ
Ｉ中でＣ＝１）１．２・カルシウム５−ホルミル−（６
Ｓ）−テトラヒドロ葉酸への転換（ホルミル転移） 上記１．１に従い得られた結晶化物１２０ｇを苛性ソー
ダ水溶液中に溶解し、ｐＨ５，５ないし６．５において
数時間弱く煮沸し、冷却し、そして過剰量の塩化カルシ
ウムを加える。析出した５−ＣＨＯ−（６Ｓ）−ＴＨＦ
のカルシウム塩を水から再結晶する。カルシウム５−ホ
ルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸・５ｕｚｏが得ら
れる。Ｃａ−５−ＣＨＯ−（６Ｓ）−ＴＩＩＦの含有量
はキラールカラムを用いてＨＰＬＣで測定して９９％以
上である。

〔α）２２＝−１５（無水のＣａ塩について；水中でＣ
＝　１．５％） ■」 ５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸及びカルシウ
ム５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸２．１その
場で得られた（６Ｒ，Ｓ）型の前記１式の化合物の分別
結晶 蟻酸中での１０−ホルミル−葉酸の接触水素化によって
得られた溶液を蒸発させて３０−３５％の濃度に濃縮す
る。この濃縮物の１重量部に３５℃において約０．４重
量部の濃塩酸（３５％濃度）を加える。

室温に冷却し５−１０℃において一夜静置し、析出した
結晶を濾過分離し、そしてこれを氷冷した僅かな量の塩
酸とアセトンとで洗滌する。（６Ｒ）の含有割合が９０
％の（５，ｔｏ−Ｃｔｌ−（６Ｒ）−Ｔｌ（Ｐ）　−Ｃ
Ｉ　　・１１Ｃ１が得られる。

２．２粗製の（５，１Ｏ−Ｃ１ｌ−（６Ｒ）−ＴＨＦ）
　−ＣＩ　　−ＢＣＩの再結晶 上記２．１に従い得られた結晶化物１．２ｋｇを３５℃
において３ｊ２の蟻酸に溶解し、これに２Ｎ塩酸４５〇
−を加え、ゆっくりと室温まで冷却し、そして０−５℃
において数時間保つ。生じた結晶を濾過分離し、稀塩酸
及びアセトンで洗滌する。（６Ｒ）の含有量９８％を含
む（５，１Ｏ−Ｃｔｌ−（６Ｒ）−ＴＨＦ）　−ＣＩ　
　・ｌｌＣｌ・２Ｈ２０が得られる。

２．３５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸（すな
わち５−Ｍｅ−（６Ｓ）−ＴＨＦ　） 上記２．２に従い得られた（５．１Ｏ−Ｃｔｌ−（６Ｒ
）　−ＴＩＩＰ）−ＣＩ　　−ＨＣｌ−２ＨｚＯの３０
ｇを、２５ｇの硼水素化ナトリウムと３．４ｇのトリス
を３００ｆｆｉｌの水に溶解した溶液の中に投入して一
晩攪拌する。得られた溶液を塩酸でｐＨ４まで酸性化し
、その際５−Ｍｅ−（６Ｓ）−ＴＨＦが２水和物として
析出する。これを濾過分離して水で洗滌する。

２．４カルシウム−５〜メチル−（６Ｓ）−テトラヒド
ロ葉酸 上記２．３に従い得られた５４ｅ−（６Ｓ）−ＴＨＦ　
　・２ＨｚＯの半分をできるだけ少量の稀苛性ソーダ水
に溶解し、この溶液を活性炭及び濾過助剤で処理し、濾
過し、そして過剰量の塩化カルシウムを加える。

生じたカルシウム−５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒド
ロ葉酸５水和物がゆっくりと析出する。０〜３℃におい
て結晶化させた後にその生成物を濾過分離し、そして水
から再結晶させる。

〔α）”＝＋４０　　（無水化合物について；水中でＣ
・１．５％） これと同じ化合物は前記例１．１に従い得られた［５，
１Ｏ−ＣＩ−（６Ｒ）−ＴＨＦ）　−ＣＩ　　−１１ｃ
Ｉを上記例２．３／２．４に従い更に反応させた場合に
も得られる。

引 マグネシウム−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸前
記例２．３に従い得られた５−Ｍｅ−（６Ｓ）−ＴＩ（
Ｆの半分を必要最小量の２Ｎ苛性ソーダ液にゆっくりと
溶解させ、そして過剰量の塩化マグネシウムを加える。

エタノールを加えることによってマグネシウム塩を晶出
させる。この新規化合物は良好な水溶性を示す。

氾 ［５，１Ｏ−ＣＨ−（６Ｒ）−ＴＩＩＰ）　ＣＩ・ＨＣ
ｌ４．１蟻酸からの［５，１Ｏ−Ｃ１１−（６Ｒ，５）
−ＴＩＩＦ］　ＣＩ　−ＨＣＩの分別結晶 （５，１Ｏ−Ｃ１１−（６１１，５）−ＴＩ（ｌ”ｌ　
Ｃ１−ＨＣｌ　　・２Ｈ２０の２５ｇを３５℃に暖めた
５０ｍ１の蟻酸の中に溶解し、０℃に冷却し、そして前
記２．２に従い得られた生成物の痕跡量を種結晶として
投入する。数時間の後にその得られた（５．１Ｏ−ＣＨ
−（６Ｒ）　−ＴＨＰ）　ＣＩ　−ＨＣＩを濾過分離す
る。（６Ｒ）の含有量は７９％である。もう−度再結晶
することによってこの（６Ｒ）の割合は９０％以上に上
昇する。

４．２水を加えることによる（５．１Ｏ−ＣＩ−（６Ｒ
）−ＴＨＦ）ＣＩ・ＨＣＩの選択的結晶化 （５，１Ｏ−ＣＨ−（６Ｒ，５）−ＴＨＦ）　ＣＩ・Ｈ
ＣＩ　　・２Ｈ２０の２５ｇを３５℃において５０−の
蟻酸中に溶解し、これに５−の水を加え、０℃まで冷却
し、そして真正の（６Ｒ）異性体を種結晶として投入す
る。−夜装置した後にその得られた（５，１Ｏ−ＣＨ−
（６Ｒ）−ＴＨＦ）　ＣＩ・ＩＩｃＩを濾過分離する。

（６Ｒ）の含有割合は８６．５％である。

４．３水性塩酸からの（５，１Ｏ−ＣＨ−（６Ｒ）・Ｔ
ＨＦ　）の選択的結晶化 （５，１０−Ｃ１１−（６Ｒ，５）−ＴＨＦ　）　ＣＩ
　−ＨＣＩ　　・２Ｈ２０のＬｏｇを５０℃において９
０ｍ１の濃塩酸中に溶解し、ｌＱｍｊ’の水を加え、そ
して同時に真正化合物を種結晶として投入する。（５，
１Ｏ−ＣＨ−（６Ｒ）・ＴＩＩＰ　）　ＨＣＩ　　・２
１１□０が晶出する。（６Ｒ）の含有割合は８７％であ
る。

開」 ５、１Ｏ−ＣＩ−（６Ｒ，５）−ＴＩ（Ｆの分子内塩及
びこの５．１Ｏ−ＣＨ−（６Ｒ，５）−ＴＨＦの強酸と
の塩並びに［５，１Ｏ−ＣＨ−（６Ｓ）−ＴＨＦ）　Ｂ
ｒ−）ＩＢｒの製造５．１　５．１Ｏ−Ｃ１ｌ−（６Ｒ
，５）−Ｔ）ＩＰの分子内塩（５，１Ｏ−ＣＩ−（６Ｒ
，５）−ＴＨＦ）　ＣＩ　−ＨＣＩ　の２００ｇを１０
１００Ｏの蟻酸の中に溶解した溶液を１１００ｍｌのア
ニオン交換樹脂（ＴＲＡ−６８）の充填されたカラムを
通して流す。流出液を減圧のもとに蒸発濃縮させる。残
渣を蟻酸の中に溶解し、そして偽の溶液をいくつかの部
分量に分ける。この溶液の一部にはエタノールを加え、
その際分子内塩が晶出する。このものは黄色に着色して
結晶化する。このものは、蟻酸を除いて種々の有機溶剤
、及び種々の極性溶剤の中に極めて難溶性である。５．
１Ｏ−ＣＢ−（６Ｒ，Ｓ）　−ＴＨＦの分子内塩はまた
前記例２．１に従いその場で得られた５、　１Ｏ−ＣＨ
−（６Ｒ，５）−ＴＨＦの濃厚溶液を例えばエタノール
のような低級アルコールまたは例えばメチルプロピルケ
トンのようなケトン類の添加によって結晶化させること
により得ることも可能である。

５．２　５．１Ｏ−ＣＨ−（６Ｒ，５）−ＴＨＦの強酸
類との塩上記５．１に従い得られた溶液をい（つかの部
分に分けた各部分量に蟻酸中で所望の酸の過剰量を加え
、そしてエタノールの添加によって沈殿させる。得られ
た塩を濾過分離する。

この方法によって下記のものが得られる；（５，１Ｏ−
Ｃｔｌ−（６Ｒ，５）−ＴＨＩ’）　　Ｂｒ−）ＩＢｒ
（５，１Ｏ−ＣＨ−（６Ｒ，５）−ＴＩＰ）　［・ｌ１
１（５，１Ｏ−ＣＩ（−（６Ｒ，５）−Ｔｌ（Ｆ）−燐
酸塩（５，１Ｏ−Ｃ）ｌ−（６Ｒ，５）−ＴＨＦ）−硝
酸塩［５，１Ｏ−ＣＨ−（６Ｒ，５）−ＴＨＦ）−蓚酸
塩（５，１Ｏ−ＣＨ−（６Ｒ，５）−Ｔ）ＩＰ）−マレ
イン酸塩（５，１Ｏ−ＣＨ−（６Ｒ，５）−ＴＨＦ）　
−１−ルオールー４−スルホン酸塩 （５，１Ｏ−ＣＩ−（６Ｒ，５）−Ｔ）ＩＦ）−ベンゾ
ールスルホン酸塩 （５，１Ｏ−Ｃｔｌ−（６Ｒ，Ｓ”）−ＴＨＦ）−メタ
ンスルホン酸塩（５，１Ｏ−ＣＨ−（６Ｒ，５）−ＴＨ
Ｆ）　−）リクロロ酢酸塩（５，１Ｏ−Ｃｔｌ−（６Ｒ
，Ｓ）〜ＴＷＦ〕−１−リフルオロ酢酸塩５．３　　（
５，１Ｏ−ＣＨ−（６Ｒ，Ｓ）　−ＴＨＦ）　Ｂｒ−ｔ
ｌＢｒ（５，１Ｏ−Ｃ）Ｉ−（６Ｒ，５）−ＴＨＦ）の
分子内塩２０ｇを３Ｏｍｆの蟻酸の中に溶解した溶液に
計算量よりも若干多い６Ｍ水性臭化水素酸を加え、そし
て２０−２５℃において攪拌する。若干時間の後に（５
，１０−メチミル−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸〕臭化
物−臭化水素付加塩が晶出する。（６Ｒ）の含有割合は
８５％である。

（５，１Ｏ−ＣＩ−（６Ｒ，Ｓ）　−ＴＨＦ）　Ｂｒ　
・ＨＢｒを蟻酸中に溶解してこれに２Ｎの臭化水素酸を
加えるかまたはそのラセミ型の臭化物−臭化水素酸付加
塩を少量のジメチルスルホキシド（Ｉｇ当り約４ｍ１）
　から分別結晶させた場合にも（５，１Ｏ−ＣＩ−（６
Ｒ）　−ＴＨＦ）、　Ｂｒ−ＨＢｒが得られる。

ハロゲン化水素酸、硝酸、硫酸及びスルホン酸る。例え
ばマレイン酸のような中程度の酸との塩類の場合には塩
として１当量の酸しか結合していない。

廻」 （５，１Ｏ−ＣＩ−（６Ｒ）−ＴＨＦ）　　−Ｊ・ＩＩ
Ｊこの化合物は上記例５と同様にして作られる。

（５，１Ｏ−Ｃ１ｌ−（６Ｒ）−ＴＩＩＦ）−燐酸塩例
５に従い作られた（５．１Ｏ−ＣＩ−（ＯＲ，５）−Ｔ
ＨＦ）　−燐酸塩３０ｇを５０℃において８９ｍ１のジ
メチルスルホキシドに溶解させ、そして室温において数
時間攪拌する。比較的長時間の後に（５，１Ｏ−ＣＨ−
（６Ｒ）−ＴＨＦ）燐酸塩が晶出するがこれを濾過分離
して乾燥させる。６Ｒ異性体の含有量７０％（ＩＩＰＬ
Ｃによる）。

Ｃ５，１０−Ｃ旧（６Ｒ）−ＴＨＥ）−燐酸塩はまた、
セラミ型燐酸塩のＩｌ！ｌ酸中の溶液に少量の２Ｍ水性
燐酸を加えた場合にも得られる。

炎」 （５，１Ｏ−Ｃ１ｌ−（６Ｒ）−ＴＨＦ）−マレイン酸
塩（５，１Ｏ−ＣＨ−（６Ｒ，５）−ＴｔｌＦ）　−７
レイ７酸塩３０ｇを５０℃において１２５ｍ１の１−メ
チル−２−ピロリドンの中に溶解し、そして次に室温に
おいて撹拌する。

長時間の後に晶出した（５．１Ｏ−ＣＩ＋−（６Ｒ）−
ＴＩＩＦ）−マレイン酸塩を濾過分離する。Ｒ型の含有
量は７８％である。

貫」 （５，１Ｏ−Ｃ）ｌ−（６Ｒ）−ＴＨＦ）　−）ルオー
ルースルホン酸塩 （５，１Ｏ−Ｃ）ｌ−（６Ｒ，５）−ＴＨＦ）　−）ル
オールー４−スルホン酸塩の１５ｇを４０−５０℃にお
いて２８ｒｎｌの蟻酸中に溶解し、これに１００艷の水
を加え、次いで室温において攪拌する。晶出したＩ：５
．１Ｏ−ＣＨ−（６Ｒ）−ＴＩ（Ｆ）トルオ−ルー４−
スルホン酸塩を濾過分離する。

６Ｒ型の含有量８５％（ＩＩＰＬｃによる）。

（５，１Ｏ−ＣＨ−（６Ｒ）−ＴＨＦ）　−）ルオール
ー４−スルホン酸塩はまたそのＲ，Ｓ型化合物を１−メ
チル−２−ピロリドン（Ｉｇ当り４〜６ｍ１）またはジ
メチルアセトアミドあるいはジメチルスルホキシド（共
に１ｇ当り約２〜３ｍ１）から再結晶させた場合にも得
られる。

汎用 （５，１Ｏ−Ｃ１１−（６Ｒ）−ＴＩＩＦ）　−）リク
ロロ酢酸塩５０ｍ１のジメチルスルホキシド中にＬｏｇ
の（５，１Ｏ−Ｃ）ｌ−（６Ｒ，５）−ＴＩＩＦ　）　
−トリクロロ酢酸塩を溶解した溶液を数時間攪拌し、次
いで濾過する。濾過残渣は極めて大部分が（５，１Ｏ−
ＣＨ−（６Ｓ）−ＴＨＦ）　−１−リクロロ酢酸塩より
なっている。濾液に水またはエタノールを加えると（５
，１Ｏ−ＣＩ−（６Ｒ）−ＴＨＦ）　−トリクロロ酢酸
塩が析出する。６Ｒ型の割合は７０％である（ＨＰＬＣ
による）。

開旦 ５、．１Ｏ−ＣＨ−（６Ｓ）−ＴＩ（Ｆ及び５．１Ｏ−
ＣＨ−（６Ｒ）−ＴＩ（Ｆの各分子内塩 ５、１Ｏ−ＣＨ−（６Ｒ，５）−ＴＨＦの分子内塩Ｌｏ
ｇを２０ｒｎｌの蟻酸の中に溶解した溶液に５０ｍｊ！
の水を加えて２０’ｃにおいて１７時間加熱する。析出
した結晶を濾過分離する。このものは主として５．１Ｏ
−ＣＨ−（６Ｓ）−ＴＨＦ（７）分子内塩よりなってい
る。その６Ｓ型の含有量は７３％である。この操作を繰
り返すことによって６ｓ型の含有割合が９０％に上昇す
る。母液にアセトンを加えると第２の結晶化物が析出す
る。これを濾過分離して調べたところこのものは７５％
まで５．１Ｏ−ＣＩ（６Ｒ）−ＴＨＦの分子内塩よりな
っている。

訛 （５，１Ｏ−ＣＩ−（６Ｒ）−ＴＨＦ）　Ｃ１−１１ｃ
Ｉ２００−の蟻酸中に５．１Ｏ−Ｃ１ｌ−（６Ｒ，５）
−ＴＨＦの分子内塩１００ｇを溶解した溶液に５００＋
ｄの水を加えて２０時間攪拌する。

析出した５、　１Ｏ−Ｃ）ｌ−（６Ｓ）−Ｔ）ＩＰの分
子内塩を濾過分離する。濾液に強酸を加えるか、又はＨ
ＣＩガスを濾液中に導入する。ゆっくりと生じた析出物
は（５，１Ｏ−ＣＨ−（６Ｒ）−ＴＨＦ）　ＣＩ・ＩＩ
ｃＩ　　・２Ｈ２０よりなり、このものの６Ｒ型の含有
割合は９５％である。

例１３ないし１８ 上記例５ないし例１２に記載したと同様な方法で下記の
ものを作ることができる。

（５，１Ｏ−Ｃ１ｌ−（６Ｒ）−ＴＩＩＦ）−硝酸塩（
例１３）（５，１Ｏ−ＣＨ−（６Ｒ）−ＴＨＦ）−硫酸
塩（例１４）（５，１Ｏ−ＣＨ−（６Ｒ）−ＴＨＦ）−
蓚酸塩（例１５）［５，１Ｏ−Ｃ）Ｉ−（６Ｒ）−ＴＨ
Ｆ）−メタンスルホン酸塩（例１６） ［５，１Ｏ−ＣＨ−（６Ｒ）−ＴＨＦ）−ベンゾールス
ルホン酸塩（例１７）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）５，１０−メテニル−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸
   、５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸及び／又
   は５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸並びにこれ
   らの塩を製造する方法において、５，１０−メテニル−
   （６Ｒ，Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、このものの分子内塩
   及び／又はこのものの強酸との塩を分別結晶化によって
   ジアステレオマ−分離させ、そして所望の場合にはその
   得られた５，１０−メテニル−（６Ｒ）−テトラヒドロ
   葉酸を加水分解剤による処理により５−ホルミル−（６
   Ｓ）−テトラヒドロ葉酸に、又は還元剤による処理によ
   り５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸に変え、及
   び／又は得られた遊離の酸を塩基による処理によって塩
   にすることを特徴とする、上記方法。 ２）ジアステレオマーの分離を少なくとも１つ以上の極
   性溶剤の中で分別結晶によって行う、請求項１記載の方
   法。 ３）分裂結晶のために溶剤として極性有機溶剤を、そし
   て結晶化剤として水性鉱酸を用いるか、または溶剤とし
   て水性濃厚鉱酸を、そして結晶化剤として水を使用する
   、請求項１または２記載の方法。 ４）溶剤として蟻酸を、そして結晶化剤として強酸の水
   性溶液を用いる、請求項１、２または３記載の方法。 ５）請求項１、２、３または４に従い製造された、５，
   １０−メテニル−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸を５−ホ
   ルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸の加水分解による
   製造のために使用する方法。 ６）請求項１、２、３または４に従い製造された５，１
   ０−メテニル−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸を、還元に
   よる５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸の製造の
   ために使用する方法。 ７）請求項１、２、３または４に従い製造された、５，
   １０−メテニル−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸及びその
   塩類。 ８）請求項１、２、３または４に従い製造された、５−
   ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸及びその塩類。 ９）請求項１、２、３または４に従い製造された、５−
   メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸及びその塩類。 １０）５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸のカル
   シウム塩。 １１）５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸のマグ
   ネシウム塩。 １２）５，１０−メテニル−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉
   酸分子内塩並びに５，１０−メテニル−（６Ｒ）−テト
   ラヒドロ葉酸の燐酸塩、硝酸塩、硫酸塩、トルオールス
   ルホン酸塩、ベンゾールスルホン酸塩、メタンスルホン
   酸塩、しゅう酸塩、マレイン酸塩及びトリクロロ酢酸塩
   。