JPH0249732A

JPH0249732A - 抗催奇形性剤

Info

Publication number: JPH0249732A
Application number: JP63201093A
Authority: JP
Inventors: Mikio Matsuki; 松木　幹夫; Douichirou Nemoto; 根本　道一郎; Hideyuki Yamato; 英之大和; Takami Fujii; 藤井　孝美; Masanori Ubusawa; 生沢　政則; Takao Furusho; 古荘　孝雄; Chikao Yoshikumi; 吉汲　親雄
Original assignee: Kureha Corp
Current assignee: Kureha Corp
Priority date: 1988-08-12
Filing date: 1988-08-12
Publication date: 1990-02-20
Also published as: JPH054375B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明は担子菌類（３ａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ　）
に属する菌より得られる蛋白多糖体を主成分とする抗催
奇形性剤に係る。

［従来の技術］奇形は生まれながらに認められる形態的及び機能的異常
をいい、患者は一体型い不利な条件を背負って生ぎなけ
ればならず、これらの症状を運命的なものとしてあきら
めることが多かった。したがって、その特定の原因或は
成立条件が今なお完全に明らかにされていない。

本願でいう奇形は外形及び内臓の形態的異常と機能的異
常、細胞の形態的及び機能的異常、染色体異常等分子レ
ベルでの異常を含めた遺伝性疾患等が含まれる。そして
これらに有効な抑制剤のないのが現状である。従って、
安全にして有効な抗、催奇形性剤の提供が切望されてい
る。

本出願人により担子菌に属する菌より得られた蛋白多糖
類及びその薬剤に関する数多くの発明［英国特許１３３
１５１３　（＝特公昭５５−３６３）　、英国特許１５
８１３１５　（−特公昭５６−４６４８１＞　、米国特
許４０５１３１４　（−特公昭５５−３６３）　、米国
特許４２０２８８５（−特公昭５６−２８１！ｉ２）　
、米国特許４２８９６８８（＝特公昭５５−２３２７Ｌ
）　、米国特許４２７１１５１（＝・特公昭５５−２３
２７１）　、米国特許４２０２９６９（＝特公昭５６−
１４２７４）　、米国特許４２２９５７０（＝特公昭５
６−１４２７５）　、米国時ｒ＋４１４０５７８（−特
公昭５６−１４２７６）　、米国特許４２３７２３３（
特公昭５５−１７９０及び特公昭５５〜４３９３）、米
国特許４２８８５５５　（＝特公昭５５−７２２８）、
米ｌ特許４１６２９３９　（−特公昭５５−３２３５５
　）、米国特許４１５９２２５　（−特公昭５５−１１
３１８及び特公昭６Ｏ−４１５９１）　、米国特許４２
６８５０５（＝特公昭５６−３９２８８　）及び米（ｌ
特許４６６３４３８（−特公昭５９−３２４８０）が提
案されている。

本発明者等の安全で有効な抗催奇形性剤を提供すべく鋭
意研究の結果、担子菌類に属する菌より得られる蛋白多
糖体が安全で抗催奇形性作用を有することを見出し、こ
の知見に填づいて本発明を完成するに至った。

［問題点を解決する為の手段］本発明の抗催奇形性剤の活性成分である蛋白多糖体（以
下本物質と略称する）は担子菌類に属する菌より得られ
る。

本発明において用いられる菌は、今関六也、本郷次雄両
氏の共著である原色日本菌類図＠（保育礼服）、伊東誠
也著日本菌類誌（１！賢堂版）に準拠するものである。

担子菌類ならいずれの菌でもよいがカワラタケ属、マン
ネンタケ属、エノキタケ属、キクラゲ属に属する菌が好
ましい。特にカワラタケ属に属する菌が好ましい。

カワラタケ属としては、カワラタケ、アラゲカワラタケ
、ニクウスバタケ、１ナカズキカワラタケ、ヤキフタケ
、ハラカワラタケ、ミノタケ及びミダレアミタケが挙げ
られ、マンネンタケ属としては、７ンネンタケ、マゴジ
ャクシ、シマネンネンタケ、ツカノマンネンタケ及びエ
ビタケが挙げられ、エノキタケ属としては、エフ４：タ
ケが挙げられ、キクラゲ属としては、キクラゲ、アラゲ
キクラゲ及びヒダキクラゲが挙げられる。

本物質はキノコの子実体、人工培養菌糸体及び又はその
培養培地の水系溶媒による抽出物である。

担子菌類から人工培養菌糸体を得るには母菌を培地に接
種して適温にて培養を行う事により得られる。

通常は液体培地を用いる方が取扱い及び生産性の面から
して好ましいものである。

培養のための培地組成としては、通常の培養に用いられ
る処方である。

子実体、菌糸体及び培養培地から蛋白多糖体を得る方法
としては公知の方法、例えば、特公昭５１−３６３２２
、特公昭５６−１４２７４、特公昭５６−１４２７６及
び特公昭５６−３９２８８に記載されている方法が適用
される。

蛋白多糖体を得る方法を次に詳述する。

子実体又は培養によって得られた人工培養の菌糸体及び
／又は培養培地を抽出処理する。この際乾燥処理を行っ
て保存しておいて適宜用いても良い。又抽出工程に先立
って細かく切断する事は、抽出効率を高める上から好ま
しいものである。

抽出は水系溶媒で行う。水系溶媒とは水又は水に可溶な
有機溶媒、酸、塩基のいずれかを少量、例えば１０％程
度以下それらを含有する水溶液から選択される１種又は
２種以上の組合ゼよりなるものである。抽出液は不溶部
分等を除去後次のｆｌｉ製処理工程に移される。

精製処理工程とは、塩析、透析、限外濾過、逆滲透処理
、ゲル濾過、有機溶媒による沈澱処理などの１種又は２
種以上の方法により行なう。工業的には加圧による膜分
離法である限外濾過法、逆滲透処理法の単独又は組合せ
が特に好ましい。又場合により塩析工程侵これらの処理
を行ってもよい。

上記精製処理された物質は噴霧乾燥、凍結乾燥などで水
分を除去し、製品化する。

本物質は、フェノール硫酸反応及びローリイーフォーリ
ン法による呈色反応で陽性を示す。元素分析の結果、炭
素２０〜５５％、水素３〜９％、窒素Ｏ％を超え乃至１
６％未満を成分として含有する。

本物質の糖成分は少なくともグルコース、ガラクトース
、マンノースを含み、蛋白成分としては少なくともアス
パラギン酸、グルタミン酸、リジンを含有する。

本物質のｐＨは６．０〜７゜５を示し、その赤外線吸収
スペクトルを測定すると、３６００〜３２００ｃ＃＋−
’付近に水Ｍ塞の吸収及び１７００〜１６００ｃ＃ｒ−
１付近にはアミド基に由来する吸収を認めることが出来
る。

本物質は水系溶媒に可溶で、有機溶媒に不溶である。水
系溶媒としては水又は水を主体として水に可溶のアルコ
ール、酸、塩基等を含むものであり、有機溶媒はクロロ
ホルム、ベンゼン、エーテル等を言う。

本物質は白色又は褐色で分子ｊはゲル濾過クロマｌルブ
ラフィーによる平均分子量が１×１０　〜１×１０　で
ある。

ラッ１へ（容量系）４〜５週令、体重１００〜１５００
のものを用い、本物質をｉｏｏｏｍ（＋／ｌ（ｇ経口投
与し、７日間観察を行ったが全匹生存していた。従って
本物質はその毒性が極めて低く且つ副作用も殆んど生起
しないなど安全な物質である。

本物質は抗催奇形性作用を有する。ここでいう催奇形性
は形態異常並びに機能異常を含むが、形態及び機能異常
が出生後明らかになるものであっても成因が出生前に求
められれば本願の催奇形性に含まれる。

催奇形性は外形及び内臓の形態異常と機能異常、細胞の
形態異常と機能異常、染色体異常等分子レベルでの異常
が明らかにされているもの又はそれが明らかにされてい
ないものをも含めた遺伝性疾患がこれに含まれる。

これらの催奇形性の成因の第１は特定の遺伝要因による
もの、第２は環境の要因によるもの、更に第３は要因第
１及び要因第２の複合及び相互作用によるものがある。

特に環境要因では物理的要因として電離放射線、化学的
要因としての化学物質、例えば５−アザシチジン、クロ
ラムブシル等があげられる。生物学的要因としてトキソ
プラズマや風疹ウィルス等があげられる。

本物質が環境要因である化学的要因及び物理的要因によ
り生ずる催奇形性の抗発現に自効であることを認めた。

本物質を抗催奇形性剤として用いる場合、任意の剤形に
することが出来る。又投与も各経路で行なうことが出来
る。

本発明の抗催奇形性剤は人間及び動物に経口的又は非経
口的に投与されるが、経口投与が好ましい。

本物質の経口投与量は体重１　Ｋｇ、１日当り１０・〜
１０００ｍｇ、好ましくは２０〜６００１ｇを１回から
３回に分けて投与する。非経口投与量は体？　Ｉ　Ｋｇ
、１日当り０．１〜５００　ｍｇ、好ましくはｌｌｌ１
ｇ〜２５０ｍｇテある。

［発明の効果１本物質は環境要因である化学的要因又は物理的要因によ
り生ずる催奇形性の発現に対して抑制する効果を有する
。例えば、化学的要因としての化学療法剤による妊娠マ
ウス又はラットに対する催奇形性の発現を、又物理的要
因としての放射線の催奇形性の発現するｗＡ場の妊娠マ
ウス照射による催奇形性の発現を実験奇形学的手法に従
い胎仔の観察、更に化学療法剤による妊娠マウスに対す
る催奇形性の発現を行ｖＪ機能奇形学的手法に従い、出
産仔の観察の結果、本物質が形態異常及び機能異常の発
現を抑制する。

以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発
明はこれら実施例に限定されるものでばない。

１１五ユマンネンタケ（ＣＭ−３５９株、微工研菌奇第６０６０
号）乾燥菌体１００ｇを細片化し、容量３１のステンレ
ス製タンクに入れ２０００ｄの水を加えて攪拌しつつ温
度を９０〜９５℃に保った。３時間抽出したのち、室温
まで冷却した。

抽出スラリーを遠心分離機により抽出液と残渣とに分離
した。更に残渣に０．５Ｎ　−Ｎ　ａ　ＯＨ２０００ｄ
を加えて９０〜９５℃にて３時間抽出したのち、室温ま
で冷却し、２Ｎ−ＨＣρでｐＨを７．０に調整後、遠心
分離し抽出液と残漬に分離した。

抽出液を集め、減圧濃縮装置により４００ｄまで濃縮し
、更に限外濾過（［）　ｏｗ　　Ｃｈ（３ｍｉＣａｌ　
Ｇ　０゜１−Ｉ　Ｆ　Ｄ　）により低分子量物を除去し
たのち凍結乾燥し、１３．４ｇの乾燥物を得た。

支ｉ亘ｌエノキタケ（ＣＭ−６０１株、微工研菌奇第３０４５号
）乾燥菌体１００ｇを細片化し、容１ｉ３Ｊｌのステン
レス製タンクに入れ２０００ａｅの水を加えて攪拌しつ
つ温度を９０〜９５℃に保った。３時間抽出したのち、
Ｖ温まで冷却した。

抽出スラリーを遠心分離機により抽出液と残渣とに分離
した。更に残漬に１０００−の水を加えて９０〜９５℃
にて３時間抽出したのち、室温まで冷却し、遠心分離し
抽出液と残漬に分離した。

抽出液を集め、減圧濃縮ｇｉ胃により４００ｍ１まで濃
縮し、限外濾過（［）ｏｗ　　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃ。

ＨＦＤ）ｌ、、更に凍結乾燥により乾燥し、２１ｇの乾
燥物を得た。

支［１ユキクラゲ（ＣＭ−８８６株、微工研菌奇第１７６３号）
乾燥菌体１００　Ｑを細片化し、容１ｉのステンレス製
タンクに入れ２０００ｄの水を加えて攪拌しつつ温度を
９０〜９５℃に保った。３時間抽出したのら、室温まで
冷却した。

抽出スラリーを遠心分１１１！ｆｉにより抽出液と残渣
とに分離した。更に残渣に０．５Ｎ−Ｎ　ａ　ＯＨ２０
００ｄを加えて９０〜９５℃にて３時間抽出したのら、
室温まで冷部し、２　Ｎ−ＨＣρでｐＨを７．０に調整
後、遠心分離し抽出液と残渣に分離した。

抽出液を集め、減圧濃縮装置により４００ｄまで濃縮し
、限外濾過（［）ｏｗ　　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃ０ＨＦ
Ｄ＞により低分子量物質を除去したのち凍結乾燥を行い
、１５．８ｇの乾燥物を得た。

友ＬＬ４カワラタケ（ＣＭ−１０１株、微工研菌寄第２４１２号
）乾燥菌体１００ｅＪを細片化し、容１３Ｎのステンレ
ス製タンクに入れ１８００ｍの水を加えて攪拌しつつ温
度を９３〜９８℃に保った。３時間抽出したのち、室温
まで冷却した。

抽出スラリーを遠心分！１機により抽出液と残渣とに分
離した。更に残漬に０．４Ｎ　−Ｎ　ａ　ＯＨ２０００
−を加えて９０〜９５℃にて３時間抽出したのち、空温
マチ冷Ｅｆｔ　Ｌ、、２Ｎ−）−ｔｃｆＩＦ　ｐＨＨＩ
３ｏニ調整後、遠心分離し抽出液と残渣に分離した。

抽出液を集め、減圧濃縮装置により４００ｍまで濃縮し
、限外濾過（Ｄｏｗ　　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、。

１−Ｉ　Ｆ　Ｄ　）により低分子量物質を除去したのち
凍結乾燥を行い、１９１Ｑの乾燥物を得た。

実施例１〜４で得られた本物質の物理化学的性質を表−
１にまとめて示した。表−１において、フェノール硫酸
呈色反応は糖類の存在を示し、ローリイーフォーリン法
はペプチド結合の存在を示している。分子働については
ゲル濾過法によって平均分子檄を求めた。

夫ＪＪＬ旦化学療法剤である５−アザシチジン投与によるラット胎
仔の指踵異常発生に対する本物質（Ｎα４）の効果。

催奇形性作用を有する化学療法剤である５−アザシチジ
ンを生理食塩水に溶解し０．６％生理食塩水溶液とし、
０．６１１（１／に９の用徂で１群１５匹の妊娠１３日
目のラットに腹腔内に１回投与し、同時に本物質（Ｎｏ
、４）ｉｏ％生理食塩水溶液をそれぞれ５０ｍｇ／Ｋｇ
、　１００ｕ　／に９又は２００！ｌ（１／Ｋｙ量皮下
に投与した。実験奇形学的手法に従って生存胎仔平均体
重及び指針異常について観察した。指跣異常率は胎仔数
に対する指誼異常匹数の割合（％）で示した。

更に比較として５−アザシチジン及び本物質（ｋ４　）
のいずれも投与しない群、５−アザシチジン０．６Ｉ１
ｇ　７Ｋｇのみ投与群及び本物質（Ｎｏ４）２００＋１
１（１７Ｋｇのみ投与群についても観察した。結果を表
−２に示した。

上記結果から本物質（Ｎｏ、　４　＞　５０ｍａ／　Ｋ
ｙ以上の投与群は５−７ザシチジン０．６ｍｇ／ｋｇ単
独投与群に比して用量依存的に指誼異常の減少を認めた
。特に本物質（Ｎｎ４）の２００１ｎ（ＩＩ／ｌ（ｇ投
与群では指？止異常発現の急激な減少を認めた。なお、
生存胎仔の平均体重は５−アザシチジンの単独投与群、
本物質（順４）及び５−アザシチジン併用投与群とも差
が認められなかった。

以上の如く本物質（順４）は化学的要因による形態異常
の抑制剤として極めてｈ用であることが判明した。

災】日１旦化学療法剤であるクロラムブチル投与によるマウス胎仔
の尾、肢９体重等に対する本物質（Ｎα４）の効果。

催奇形性作用を有する化学療法剤であるクロラムブチル
をゴマ油に溶解し６％溶液とし、６１１１０／に９の用
量を妊娠１０日口のマウスに胃ゾンデ針にて１回経口投
与し、同時に本物質（Ｎα４）の１０％生理食塩水溶液
を２００ｆｆｌ（１／に９の用量で皮下に投与し、実験
奇形学的手法に従って胎仔の尾の短少、曲尾、四肢の短
少乏指等を観察した。比較としてクロラムブチル６１１
１（＋／ｌ（９単独投与群及び無投与群について観察し
た。異常発生率は胎仔数に対する該部位における異常発
現画数の割合（％）で示ず。

りＯラムブシル単独投与群では尾、四肢で異常発現率が
それぞれ７９．８％、１００％であったのに比べ、本物
質（Ｎｎ４）及びクロラムアシル併用投与群では尾又は
四肢での異常発現率はそれぞれ７０．５％、９５．２％
とどちらの部位においても異常発現の減少が認められた
。

支１１ユ放射線照射に対し発生する胎仔異常発現に対する本物質
（Ｎα１）の効果。

妊娠マウス１群３９匹の２群に放射線２００　Ｒを１回
照射し、１群には同時に本物］（ＮＱｌ）の生理食塩水
溶液１０％を２００　ｍＱ／Ｋｇの用量で皮下に投与し
、更に６００１ｇ、”＊ｇの用量で１０日間連日経口投
与を行い、実験奇形学的手法に従い胎仔の短尾９曲尾１
口蓋裂等の奇形の発現率（％）を求めた。

放射線のみ照射群では、奇形発現率は８２％であったが
、本物質（Ｎ０１）の投与群での奇形発現率は４８％で
あった。

以上の如く本物質（ＮＱＩ）の物理的要因による形態異
常発現の抑制効果を認めた。

災ＩＪＬ旦化学療法剤であるクロラムブチル投与によるマウス出産
仔の歩行機能異常に対する本物質（Ｎａ２又はに３）の
効果。

催奇形性作用を有する化学療法剤であるクロラムブチル
をゴマ油に溶解し６％溶液とし、６ｎ＋ａ／Ｋｇの用量
で１群８２匹の妊娠１０日口のマウスに胃ゾンデ釦にて
１口軽口投与し、同時に本物質（Ｎα２又はＮａ３）の
１０％生理食塩水溶液を２００ｍｇ　７Ｋｇの用量で皮
下に投与し、行動機能奇形学的手法に従って出産仔を観
察した。比較としてクロラムブチル６ｍ（１／Ｋｇ単独
投与群及び無投与群について観察した。

クロラムアシル単独投与群では歩行機能異常の発現率が
７６５％であったが、本物質（Ｎα２）及びクロラムア
シル併用投与群では歩行機能異常の発現率は５８．１％
であった。

本物質（Ｎｏ、３）及びクロラムアシル併用投与群での
歩行機能異常の発現率は５９，２％であった。

無投与群では歩行機能異常の発現率は０％であった。

Ｘｉｔ旦圧力式自動充ＶＡ機を用い、０号硬カプセルに本物質（
ｋ４）を３３０ｍｇ充填し、カプセルを作製した。

手続補正書特許庁長官　古　１）文　毅　毀１、事件の表示昭和６３年特許願第２０１０９３号２、発明の名称抗催奇形性剤３、補正をする考事件との関係

Claims

【特許請求の範囲】

（１）担子菌類に属する菌より得られる蛋白多糖体を有
効成分とする抗催奇形性剤。
（２）蛋白多糖体がフェノール硫酸呈色反応及びローリ
ィーフォーリン法による呈色反応が陽性を示し、元素分
析が炭素２０〜５５％、水素３〜９％、窒素０％を超え
乃至１６％未満であり、赤外線吸収スペクトルで３６０
０〜３２００ｃｍ＾−＾１及び１７００〜１６００ｃｍ
＾−＾１に吸収が認められ、水に可溶でクロロホルム、
ベンゼン、エーテルに不要であり、ゲル濾過クロマトグ
ラフィーによる平均分子量が１×１０＾４〜１×１０＾
６であることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の
抗催奇形性剤。
（３）催奇形性が形態異常である特許請求の範囲第（１
）項又は第（２）項記載の抗催奇形性剤。
（４）催奇形性が機能異常である特許請求の範囲第（１
）項又は第（２）項記載の抗催奇形性剤。
（５）担子菌がカワラタケ属、マンネンタケ属、エノキ
タケ属、キクラゲ属に属する菌より選ばれたものである
特許請求の範囲第（１）項記載の抗催奇形性剤。
（６）担子菌類がカワラタケ属に属する菌より選ばれた
ものである特許請求の範囲第（１）項記載の抗催奇形性
剤。