JPH0257196A - 安定化された発色増強試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明はフォーゲス・プロスカラエル試験に用いる安定
化された発色増強試薬に関する。

フォーゲス・プロスカラエル試験は細菌がグルコースを
発酵して中性の終末産物であるアセチルメチルカルビノ
ール（アセトイン）を産生ずる能力を検定する試験であ
り、微生物の生化学的性状検査のひとつとして病原菌の
同定の際に実施される。

［先行技術およびその問題点］ フォーゲス・プロスカラエル試験は、培地で培養した試
験菌にフォーゲス・プロスカラエル試薬をかけることに
よって行なわれ、かけた試薬溶液が桃赤色に呈色する場
合は陽性（アセトインが存在）、黄色あるいは無色（試
薬の色と同じ）の場合は陰性とされる。フォーゲス・プ
ロスカラエル試薬は一般的にはα−ナフトールをエタノ
ールに５〜６％（ｗ／ｖ）濃度に溶かした発色増強試薬
と、４０％（Ｗ／Ｖ）の水酸化カリウム（またはナトリ
ウム）水溶液の酸化試薬からなる。ところが、上記発色
増強試薬はα−ナフトールの安定性が悪いため室温で保
存すると経時的に褐色に着色し、呈色の判定が困難とな
り誤判定の原因となった。そのため発色増強試薬は冷蔵
する必要があり、長期間の保存は避けなければならなか
った。

［問題点を解決するための手段］ 本発明はフォーゲス・プロスカラエル試験に用いられる
安定化された発色増強試薬を提供することを目的とする
。

上記目的を達成するため、本発明の発色増強試薬は、α
−ナフトールを含むアルコール溶液に鉱酸を添加してな
る。鉱酸としてはリン酸、塩酸、硫酸等が用いられるが
特にリン酸または塩酸が好ましい。鉱酸の添加量はα−
ナフトール１モルに対して約０．１４〜６モル当量が適
当である。

アルコール溶液中のα−ナフトールは２〜１０％（Ｖ／
Ｖ）とするのが適当であり、好ましくは４〜７％（ｖ／
ｖ）である。

本発明の発色増強試薬は、常法に従ってエタノール等の
アルコールに計算量のα−ナフトールおよび鉱酸を加え
ることによって容易に調製される。

次に実施例および試験例を示して本発明をさらに具体的
に説明する。

実施例　１ 下記表１の組成物をエタノールに加えて溶解し、発色増
強試薬（Ａ）〜（Ｄ）を得た。また、比較のために鉱酸
を添加しない発色増強試薬（Ｅ）を得た。

表 上記発色増強試薬（Ａ）〜（Ｅ）を３０℃で３ケ月間保
存し、着色の有無を調べた結果、Ｅは褐色に着色したが
（Ａ）〜（Ｄ）は着色しなかった。

試験例　１ 下記組成の培地を調整し、オートクレーブ滅菌した。多
穴プレードの各ウェルに５ｏμＱずつ分注し、２５℃で
乾燥した。

（培　　地） ペ　　ブ　　ト　　ン　　　　　　　　　　　　　　　
７．０ｇグルコース　　　　　　５．０ｇ リン酸二カリウム　　　　　　　　５．０ｇ蒸　　留　
　水　　　　　　　　　　　１．０００ｍ１次に、寒天
培地上で各種細菌を３７℃で１８〜２０時間培養し、滅
菌蒸留水にｌＸＩＯ３個／ｍｌとなるように懸濁し、各
ウェルに５０μｇずつ接種し、３７℃１８〜２０時間培
養した。培養後、８０℃３ケ月間保存した（Ａ）〜（Ｅ
）の各発色増強試薬を各ウェルに５０μｇずつ分注しさ
らに酸化試薬として４０％（Ｖ／Ｖ）水酸化カリウムを
各ウェルに５０μΩずつ添加し呈色の有無を判定した。

対照として、実施直前に調整した発色試薬〔５％（ν／
Ｖ）α−ナフトール−エタノール溶液〕を用いた。

結果を表２に示す。

（以下余白） 上記の結果から明らかなように本発明の発色増強試薬（
Ａ）〜（Ｄ）は３ケ月３０℃で保存したにもかかわらず
着色せず、新鮮な発色増強試薬と同じ判定結果を与えた
のに対して、鉱酸を添加しなかった発色増強試薬（Ｅ）
は着色し、誤まった判定結果を与えた。

実施例　２ ５％（Ｖ／Ｖ）α−ナフトールのエタノール溶液にリン
酸０．０８６８Ｍ（Ｆ）　、０．０４９８Ｍ（Ｇ）　、
０．０３８６Ｍ（Ｈ）を加えた発色増強試薬（Ｐ）〜（
Ｈ）を調製した。上記のリン酸対α−ナフトールのモル
比はそれぞれ１：４，１ニアおよび１：９であった。上
記の各発色増強試薬（Ｐ）〜（ＩＩ）を３０℃で３ケ月
保存したところ（Ｐ）および（Ｇ）は着色しなかったが
（Ｈ）は僅かに着色した。

実施例　３ ペプトン７．０ｇ、グルコース５．Ｏｇ、リン酸二カリ
ウム５．０ｇ、蒸留水１０１００Ｏの組成の培地を調整
し、オートクレーブ滅菌した。多穴プレート各ウェルに
５０μＱずつ分注し、２５℃で乾燥した。次に寒天培地
上で、エンテロバクタ−・アエロジェネス（ＲＴＭＤ　
０５０２００）を３７℃で１８〜２０時間培養し、滅菌
蒸留水にＩ　Ｘ　１０８個／　ｍｌとなるように懸濁し
、各ウェルに５０μσずつ接種し、３７℃１８〜２０時
間培養した。別に、塩酸を２．０８Ｍ（＋）　、　３．
４７Ｍ（ハ加えた５％（Ｗ／Ｖ）α−ナフトール（エタ
ノール溶液）（１）および（Ｊ）を調整した。上記の塩
酸対α−ナフトールのモル比はそれぞれ６　：　１　（
１）および１０：１（Ｊ）であった。培養したプレート
に各発色増強試薬（＋）および（Ｊ）を各ウェル５０μ
ｇずつ分注し、さらに酸化試薬として４０％（Ｗ／Ｖ）
水酸化カリウムを５０μｑずつ添加し、呈色を判定した
ところ、発色増強試薬（１）を用いた場合は陽性、（」
）を用いた場合は弱い陽性であった。

以上の試験結果から本発明における好ましい鉱酸の使用
量は、α−ナフトール１モルに対して０．１４〜６モル
当量であることが明らかである。

［発明の効果］ α−ナフトールを含むエタノール溶液に鉱酸を添加して
なる本発明の発色増強試薬は、室温で長期間保存しても
着色せず、また添加した鉱酸が呈色反応を阻げることも
ないのでフォーゲス−プロスカラエル試験に用いた場合
に呈色の判定を容易にし、正しい菌の同定を可能にする
。このように、本発明は室温で長期間保存可能な発色増
強試薬を提供するものである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）α−ナフトールを含むアルコール溶液に鉱酸を添加
   してなる安定化された発色増強試薬。 ２）鉱酸がリン酸または塩酸である請求項１に記載の発
   色増強試薬。 ３）鉱酸の添加量がα−ナフトール１モルに対して０．
   １４〜６モルである請求項１または２に記載の発色増強
   試薬。