JPH025895A - 胎児のトリソミ２１ダウン症候群等を検知する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ この発明は母親の体液中のＳＯＤ−１（過酸化物分子変
位補酵素）の濃度から双生児、自然流産、早産あるいは
胎児における潜在性のダウン症候群（トリミソ２１）等
の異常を検知する方法に関する。また、この発明はＳＯ
Ｄ−１の濃度に加えて次のような複数の物質の濃度から
胎児における潜在性のダウン症候群を予検する方法に関
する。

１１　ＳＯＤ−１と、 ヘモグロビン ２）ＳＯＤ−１と、 ヒト絨毛膜ゴナドトロピン（ｈＣＧ）　、非共役エスト
リオール及びアルファフェトプロティン（Ａ　Ｆ　Ｐ　
）のうちの１つ又は複数３）ＳＯＤ−１と、 ヘモグロビンと、 ｈＣＧ、非共役エストリオール及びＡＦＰのうらの１つ
又は複数 なお、ダウン症候群の検知においては、母親の年齢、胎
児の大腿骨の長さ等の因子も有用である。

［従来の技術］ トリソミ２１（すなわら２１番目の染色体が１つ多い）
は、ダウン症候群の全症例の９５％を占めている。この
病気は最も一般的に見られる遺伝的欠陥の１つであり、
８００件の出生につき約１件の割合で発生する。この症
候群にかかつていると患者は特異な顔貌を有し、また精
神遅滞を伴い、少なくとも３０％が生まれつき心臓疾患
を有する。

トリソミ２１は、後期において相同染色体が分離せず、
不分離が生じて１つの一染色体性娘核と三染色体性娘核
が生じる時に形成される。染色体が正常な女性における
不分離の頻度は、年齢に関係する。２０才から３０才の
間の女性に対しては、発生率は約１０００人の出生に対
し０．３人の割合から約１０００人の出生に対し２人の
割合までリニアに増大する。しかし、３０才を越えると
、発生率は一年に約３０％の割合で指数関数的に増大す
る。また、３５才以上の女性は、トリソミ２１ダウン症
候群にかかった子供全体の３５％を出生する。

２０才以下の女性についてもまた、年齢が下がるにつれ
てトリソミ２１ダウン症候群の発生が増大する。従って
、１５才の女性は３０才から３５才の間の女性とほぼ同
じ位ダウン症候群の子供を生む確率を有する。

３０才以下の女性が、トリソミ２１ダウン症候群にかか
った２番目の子供を生む危険性は１．４％である。この
女性が３０才を過ぎてから有する危険は、その年齢の女
性が有する危険率プラス１％である。

また、トリソミ２１ダウン症候群を生じる不分離は、男
性においても起こる。男性における不分離は、この症候
群にかかった子供のうち２０％から２５％の割合を占め
ている。５５才以上の父親が、ダ「シン症候群の子供を
持つ危険は母親の年齢に補正した場合に予想される危険
の約２倍である。

胎児における遺伝的欠陥（！〜リソミ２１を含む）は、
出生の前に羊水診断を通じて検知する紀とができる。羊
水診断においては、妊娠期間の１５ｉ目と１６週０との
間に羊水腔から１０〜２０−の羊水が扱き取られる。次
に、羊水細胞が約２週間の間、組織培養で培養される。

そして細胞は染色され、染色体を数えることににってト
リソミ２１のような遺伝的な異常が識別される。

しかし、細胞Ｉ８養は熟練を要する労働集約型の時間の
かかるプロセスであるため高価であり、１２００ドルも
掛かることがしばしばである。また、異物が入ると培養
は容易に破壊される。このため、Ｉｔ胞培養の前に羊水
中に含まれる遺伝的標識形質（胎児における欠陥が存在
Ｊ−ることを承りタンパク質）をスクリーニングするこ
とがしばしば行なわれる。もしスクリーニングの結果が
陽性であれば、欠陥の存在を確認するために■胞培養を
行なうことができる。もしスクリーニングの結果が陰性
であれば、高価な培養を先送りにできる。今１］では、
はとんどの妊娠した女性が羊水を抜き取って、遺伝的標
識形質であるフルファフ１１−プロティン（”ＡＦＰ”
）のスクリーニングを行なうようにアドバイスされるた
め、スクリーニングはありふれたものとなっている。

ＡＦＰが高いレベルにあることは、無脳症や二分を椎の
ような開放性の神経管欠陥（ｏｐｅｎｎｅｕｒａｌ　ｔ
ｕｂｅ　ｄｅｆｅｃｔｓ）や他の胎児異常の存在を意味
する。しかしながら、ＡＦＰのみをモニタする方法はト
リソミ２１に対するスクリーニングテスト（予検法）と
しては信頼性に欠ける。

トリソミ２１に対する現在のスクリーニングテストは不
十分である。さらに、もつと正確な細胞培養法を行なう
には費用が掛かるため、患者はしばしばこのテス１−を
先送りにする。トリソミ２１が発生する煩度を考えると
、トリソミ２１の存在をより正確に示す標識形質（及び
この標識形質に駐づくスクリーニングテスト）の開発が
望まれる。

これは、特に高い危険性を有するグループに属する女性
に対して望まれるところである。

１９８１年までに、トリソミ２１の患者は赤血球溶解質
中のＳＯＤ−１の濃度が増大するということが認識され
ていた。これについては、ビー・シー・デル・ビラーノ
（Ｂ、Ｃ，Ｄｅｌ　Ｖｉｌｌａｎｏ　）及びジエー・ニ
ー・ティッシュフィールド （Ｊ、Ａ、Ｔｉ５ｃｈｆｉｅｌｄ）が“イムノアッセイ
・メソッズ（Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ　Ｍｅｔｈｏｄｓ
　）　”　、　３６６−６７（１９８１）に発表した論
文「ラジオイムノアッセイによるヒトのキュプロジンク
ＳＯＤ−１の定量及びその有用性（Ｑｕａｎｔｉｔａｔ
ｉｏｎ　ｏｒ　ＨｕｍａｎＣｕｐｒｏｚｉｎｃ　ＳＯＤ
−１ｂｙ　ｌｌａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ　ａｎ
ｄ　ＩｔｓＰｏｓｓｉｂｌｅ　５１ｇｎ１ｆｉｃａｎｃ
ｅ　ｉｎ口１ｓｅａｓｅ）　Ｊに記載されている。しか
し、この論文には、胎児のトリソミ２１に対するスクリ
ーニングテストとして母親の体液中のＳＯＤ−１を検出
することは提案されていない。著者はこの発見が正常な
新陳代謝にＪｊけるＳＯＤ−１の役割に光用を与えるこ
とのできること、あるいは過剰のＳＯＤ−１を有するこ
との結果について述べているにすぎない。著者らはまた
、さらに実験を行なうことによってＳ　ＯＤルベルを遅
滞の度合と関係づけることができるのであろうことを述
べている。

１９８５年の研究では、トリソミ２１の胎児においては
繊維芽細胞、羊水細胞、及び羊水中におけるＳＯＤ−１
の濃度が増大するかどうかが研究された。これについて
は、エム・ニー・ベイ１−マン（Ｈ，＾、Ｂａｔｅｍａ
ｎ　）　、エム・ジーφマティ（Ｈ，Ｇ、Ｈａｔｔｅｉ
）　、ニー　−７ブレツト（Ａ、Ａｂｒｅｔ　）、エム
・ガムレ（Ｈ，Ｇａｎ＋ｅｒｒｅ）及びジエー・エフ・
マティ（Ｊ、　ｒ、Ｈａｔｔｅｉ　）が“アクタ・ポエ
デイアトル・スカンド（Ａｃｔａ　Ｐｏｅｄｉａｔｒ、
５ｃａｎｄ、）　”　、　７４　：６９７−７００　（
１９８５）に発表した［トリツト２１の胎児の羊水、羊
膜ｌｌＩ胞及び繊維芽細胞の免疫反応性Ｓ　ＯＤ　−１
（Ｉｍｍｕｎｏｒｃａｃｔｉｖｅ　ＳＯロー１ｉｎ　Ａ
ＩＩ＋ｎ１ｏｊｉｃ　Ｆｌｕｉｄ、Ａａ＋ｎ１ｏｔｉｃ
　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄＦｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ　ｆｒｏ
ｍ　Ｔｒｉｓｏ＋Ｉｖ２１　Ｆｅｔｕｓ　）　Ｊに記載
されている。著名は羊水中のＳＯＤ−ルベルと胎児にお
ける１−リソミ２１との間に関係を確立することは不可
能であると結論づけている（同６９９参照）。従って、
Ｌｕ親の体液中のＳＯＤ−ルベルの高いことと胎児のト
リツト２１との間に相関関係が見出されるならば、従来
の結論は根底から覆されることになる。

また、従来の技術においては、ｆｆｌ親の体液中のＳＯ
Ｄ−１やヘモグロビンの濃度を検出することがトリツト
２１に対するスクリーニングテストとして利用できると
いう示唆は全くない。ざらに、従来の技術において４．
Ｌ、母親の体液中のＳＯＤ１やヘモグロビンの濃度、及
び１１０Ｇ１非共役エストリオール及びＡＦＰのうら一
つ又は複数の濃度を検出することがトリツト２１に対す
るスクリニングテストとじて利用できることら全く示唆
されていない。

現在までに、双生児、自然流産あるいは早産といった異
常に対するスクリーニングテストは開発されていない。

このようなテストが開発されれば、上記のような異常を
前６つて検知できるため、両親や医師にとっては都合が
よい。

〔発明の概要１ この発明は奸媒した女性の体液にＪ３けるＳ　０１）１
ｉ１ｍ度の増大を検出して双生児及び／あるいは自然流
産あるいは早産の可能性が高いことを児つけ出すための
スクリーニングテスト、あるいは細胞外体液中における
ＳＯＤ−濃度を検出して胎児のトリソミ２１ダウン症候
群を児つけ出すためのスクリーニングテストに関する。

この発明はまた、妊娠女性の血清中のＳＯＤ−１１濃度
、あるいはＳＯＤ−１とヘモグロビンの両方の濃度が増
大していることに基づいて胎児のトリソミ２１ダウン症
候群を検知する方法に関する。この発明はさらに妊娠女
性の血清、巾のＳＯＤ−１、あるいはＳＯＤ−１とヘモ
グロビンの両方における濃度の増大、及び以下のうちの
１つあるいは幾つか、すなわらｈｃＧｆ１度の増大、非
共役エストリオールレベルの低下、及びＡ　Ｆ　Ｐレベ
ルの低下のうちの１つあるいは幾つかに基づいて胎児の
トリソミ２１ダウン症候群を検知する方法に関する。

ＳＯＤ−１、あるいはＳＯＤ−１とヘモグロビンに対す
るスクリーニングを行なうには、前述したような胎児の
状態に対して陽性あるいは陰性ということがわかってい
る体液サンプルについてまずアッセイを実施する。次に
、最小閾値濃度を任意に設定する。最小閾値Ｉ　Ｉｆは
大部分の陽性サンプルがその値よりも大きく、また大品
分の陰性サンプルがその値よりも下の値をもつような濃
度のことであるが、この濃度は調節することができる。

最小閾値濃度の値を上げることによって誤って陽性と判
定されるサンプル数を減らすことができるが、この場合
には誤って陰性と判定されるサンプル数が増える。逆に
最小閾値濃度の値を下げると、誤って陰性と判定される
サンプル数は減るが、誤って陽性と判定されるサンプル
数は増えてしまう。

次に未知のサンプルに対してヘモグロビン及び／あるい
はＳＯＤ−１のアッセイが行なわれ、指標（ｉｎｄｉｃ
ａｔｏｒ）が閾値以上かどうか判定される。

レベルが高い場合には、陽性であることを示している。

こうしてスクリーニングテス１−は比較的迅速かつ簡単
に実施することができる。胎児のダウン症候群を調べて
いる時にテスト結果がＳＯＤ−１のレベル（あ・るいは
ＳＯＤ−１とヘモグロビンのレベル）が閾値以上である
ことをホしている場合には、次にその結果を確めるため
に核型分析（ｋａｒＶＯｔＶＩ）ｉｎ（１）を行なうこ
とができる。

ｈＣＧレベル、非共役ニス１〜リオールレベル、あるい
はＡＦＰレベルを検出する場合にも本質的に同じテクニ
ックを用いることができる。仮にｈＣＧレベルが高かっ
たり、あるいは非共役エストリオールレベルもしくはＡ
ＦＰレベルが低かったりした場合には、ヘモグロビンレ
ベルあるいはＳＯＤ　−ルベルのどちらかあるいは両方
とも増大していると考えなければならない。これらの指
標のいくつか、あるいはすべてを合せたものが陽性の結
果を示している場合には、胎児のトリツト２１の検知精
度はヘモグロビン及び／あるいはＳＯＤ−１のみをモニ
タしている時よりも高いであろう。

また、！１１賑している女性の年齢や胎児の大腿骨長等
のパラメータをモニタすることが望ましい。

胎児のトリソミ２１ダウン症候群のこうした徴候によっ
てもまたトリソミ２１の検知精度は高められる。

トリツト２１に対するスクリーニングテストは妊娠期間
中の比較的早い時期、おそらく第９週１頃に実施可能で
あると思われる。ＳＯＤ−１（及びヘモグロビン）のレ
ベルはこの時期には十分に高くなっており、トリソミ２
１検知のための信頼できる指標として機能する。ｈＣＧ
を決定因子に付は加えた場合には、スクリーニングテス
ｌ−の時１す１を第８週日まで早めることが可能であろ
う。トリソミ２１胎児を身ごもったほとｌνどの母親に
ついては、第８週日までにはｈＣＧレベルが十分高いレ
ベルに達すると考えられている。

この発明は妊娠女性の体液中に存在するＳＯＤ１ｍ度の
増大を検出することによって、精神病、慢性関節リウマ
チ、あるいはアルコール中高になり易い素因を有する名
のスクリーニングテストを行なったり、これも２１番染
色体に関係することが知られているアルツハイマ病とＳ
ＯＤ−ルベルとの関連付番ノを行なったりすることに関
する。

［実施例］ 一般的手法 この発明は妊娠女性の体液中に含まれるＳＯＤ−濃度の
増大を検出することによって、双生児及び／あるいは自
然流産あるいは早産の可能性が高いことを見い出すため
のスクリーニングテストを行なったり、妊娠女性の細胞
外体液中に含まれるＳＯＤ−１濃度を検出することによ
って胎児のトリソミ２１ダウン症候群のスクリーニング
テストを行なったりすることに関する。この発明はまた
、妊娠女性の血清中のＳＯＤ−１あるいはＳＯＤ−１と
ヘモグロビンの両方の濃度の増大から胎児の１−リソミ
２１ダウン症候群を検知することに関する。この発明は
さらに、妊娠女性の血清中のＳＯＤ−１あるいはＳＯＤ
−１とヘモグロビンの両方の濃度の増大、及びｈｃＧ１
１ｉ１度の増大、非共役Ｌストリオール濃度の低下、及
びＡ　Ｆ　Ｐ　ｉｌ’Ｊ度の低下のうらの１つあるいは
複数から胎児がトリソミ２１ダウン症候群である可能性
の高いことを検知する方法に関する。ダウン症候群を検
知するうえで、妊娠女性の年齢や胎児の大腿骨艮等のパ
ラメータも有用である。

濃度は、任意に選ばれた閾値を越えた時あるいは下まわ
った時に、それぞれ通常よりも大きいとか小さいとか判
断される。閾１ｉｆｉ　ｃｉ度は大部分の陽性サンプル
が陽性を示し、大部分の陰性サンプルが陰性を示すよう
な濃度に設定される。しかし、この閾値濃度は調節する
ことができる。閾値濃度を変えることによって、にって
陽性と判定されるサンプルの数を減らすことはできるが
、この場合には誤って陰性と判定されるサンプル数が増
える。

また、誤って陰性と判定されるサンプル数が減るように
閾値濃度を変えることもできるが、この場合には誤って
陽性と判定されるサンプル数が増える。選択された特定
の閾値はアラレイが実施されるサンプル（すなわら、血
清あるいは羊水）のタイプ及びサンプルが採取された女
性の妊娠期間に応じて変わる。

閾値濃度を設定するのではなくて、特定の年齢の妊婦の
体液中に含まれるＳＯＤ−ｉ、ヘモグロビン、ｈＣＧ１
非共役ニストリＡ−ル、及びＡＦＰの特定の強度に対し
て、胎児がダウン症候群である確率を分析することもで
きる。この分析は多段の統計解析によって行なわれる。

最終的にこの分析によって特定の妊婦年齢に対してＳＯ
Ｄ−１、ヘモグロビン、ｈＣＧ、非共役エストリオール
、及びＡＦＰの特定の強度に対する胎児の１〜リソミ２
１ダウン が生成される。この手続の詳細については以下で説明す
るし、クツクル（Ｃｕｃｋｌｅ）らの“女性がダウン症
候群に係わる妊娠をしている危険性を年齢と血清アルフ
ァフェトプロティンレベルを用いて評価する方法（Ｅｓ
ｔｉｍａｔｉｎｇ　ａ　Ｗａｓａｎ”ｓ　Ｒ１５ｋ　ｏ
ｒｌｌａｖｉｎｇ　　ａ　　Ｐｒａｇｒａｎｃｙ　　Ａ
ｓ５ｏｃｉａｔｅｄ　　ｗ目ｈ　ロｏｗｎ’ｓＳｙｎｄ
ｒｏｍｅ　Ｕｓｉｎｏ　ｈｅｒ　Ａｑｅ　ａｎｄ　Ｓｅ
ｒｕｍＡＩｐｌ＋ａ−Ｆｃｔｏｐｒｏｔｅｉｎ　Ｌｅｖ
ｅｌ）　”　、ブリティッシュ・ジ１？−ナル・オブ・
オブステトリクス・アンド・シナ１１０ジ（Ｂｒｉｔｉ
ｓｈ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　０ｂｓｔｅｔｒｉｃｓａ
ｎｄ　ｃｙｎａｅｃｏ＋ｏｇｙ、）　　、　第９４巻、
　　３８７−４０２　（１９８７年５月）、及びワルド
（Ｗａｌｄ）らの゛°妊娠早期にお（）るダウン症候群
に対する妊婦血清のスクリーニング（Ｍａｔｅｒｎａｌ
　Ｓｅｒｕｍ　Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｆｏｒ　Ｄｏｗｎ
’ｓＳｙｎｄｒｏｍｅ　ｉｎ　ＥａｒｌｙＰｒｃｇｎａ
ｎｃｙ）”　、ブリティッシュ・メディカル・ジャーナ
ル（Ｂｒｉｔｉｓｈ　ＭｅｄｉｃａｌＪＯＬｌｒｎａｌ
）　、第２９７号、　　８８３−８８７　（１９８８年
１０月８日）　（以下、゛ワルド■”と記す）。

ＳＯＤ−１、ヘモグロビン、ｈＣＧ、非共役エストリオ
ール、及びＡＦＰの定量は、標準的なアッセイ法の任意
のものを用いて、モノクローナル抗体アッセイあるいは
ボリクＯ−ル抗体アッセイのどららかによって行なうこ
とができる。例えばエンザエムリンクトイムノアツセイ
（ＩＩ：ｎｚｙｍｅＬｉｎｋｅｄ　Ｉ−ｍｕｎａｓｓａ
ｙ）　（“ＥＬＩＳＡ”）やラジオイムノアッセイ（“
ＲＩＡ”）、あるいはルミネッセンスアッセイを用いる
ことができる。これらのアッセイはすべてシングルある
いはタンデム（ＴＭ）抗体タイプであり、固相あるいは
液相で実施が可能である。ルミネッセンスアッセイの一
般的な説明については、メソッズ・イン・エンザイモロ
ジイ（Ｈｅｊｈｏｄｓ　ｉｎ　ＥｎｚｙＩＩｌｏｌｏｇ
ｙ）パートＣ第７４巻を、固相ＲＩＡ及び固相ＥＬＩＳ
Ａの一般的な説明については、ティー・イー・ケルドツ
ト（Ｔ、Ｅ、に０ｅｒｄｔｅ）とティー・イーφパトラ
−（Ｊ、［。

ＢｔｌｔｌＯｒ）のジャーナルφオブ・イムノロジカル
φメソッズ（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｒ　Ｉ＋＋ｖ＋ｕｎｏ
ｌｏｇｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ）第８３巻、　　２８
３−２９９　（１９８５）を、またタンデム（ＴＭ）タ
イプアッセイの一般的な説明については米国特許用４，
３７６、１１０号を参照のこと。

ポリクローナル抗体は多数の異なったエピトープと結合
する種々の抗体として定義するのが最もよい。ポリクロ
ーナル抗体は多数のホストアニマルを特定の免疫原で免
疫化し、その後各々から血清を採取することによって産
生される。血清は種々の抗原、すなわち検査中の免疫原
に対する抗体の他にその動物が曝された抗原すべてに対
する抗体を含んでいる。

免疫原に対して最も大きな特異性と親和性を有するポリ
クローナル抗体を産生する動物から採取された血清が、
アッセイに用いるために選択される。この選択は例えば
ＲＩＡ、イムノフルオレッセンスアッセイ、ウェスタン
プロットアナリシス（１４ｅｓｔｅｒｎ　Ｂｌｏｔ　ａ
ｎａｌｙｓｉｓ）　、Ｅ　Ｌ　Ｉ　Ｓ　Ａ　、あるいは
組織化学染色のにうな数多くの標準アッセイ法によって
行なうことができる。

ポリクロ−プル抗体と違って、モノクローナル抗体は特
定の１つの１ビトープと結合する。モノクロ−プル抗体
は、すべて単一の融合細胞からクローン発生されたハイ
ブリドーマ細胞によって産生される。クローンはすべて
親と同一のものであり、従って同じクローンのハイブリ
ドーマは同じエピトープと結合する同一の抗体を産生ず
る。

モノクローナル抗体を産生ずる方法はケーラー（にｏｅ
ｈｌｅｒ）とミルスタイン（Ｈｉ　１ｓｔｅｉｎ）によ
って始めて報告された。ミルスタイン他、２５６ネイチ
ｗ　（Ｎａｔｕｒｅ）、　４９５−９７　（１９７５）
　、及びケーラー他、６．ユーロ・ティー・イムツル（
Ｅｕｒ　Ｊ。

１Ｉａｕｎｏｌ）、　５１１−１９　（１９７６）を参
照のこと。−般的な方法についていえば、ホストアニマ
ル（通常はマウス）を免疫化してから殺す。次にＢａ１
ｌｌｌｌが普通は肺臓あるいは他のリンパ組織から取出
される。取出されたＢｔＩａｌｌｌは骨ｗａｎと融合さ
れてハイブリドーマを形成する。免疫化する抗原に対す
る抗体を産生ずるハイブリドーマが、他のハイブリドー
マ及び細胞から単離される。選択されたハイブリドーマ
は次に所望のモノクローナル抗体を産生ずるために使用
される。

モノクローナル抗体はポリクローナル抗体と比べて幾つ
かの利点を有する。主な利点はモノクローナル抗体はす
べて特定のエピトープと結合すること、従ってより特異
的であることである。しかし、ポリクローナル抗体はア
ッセイにおいてしばしばモノクローナル抗体と同等に機
能することに注意しなｉノればいけない。モノクローナ
ル抗体の他の利点は大間のモノクローナル抗体をたやす
く産生できることである。ハイブリドーマは骨ｖｉ細胞
と融合されているため適切に保存されれば本質的には不
死であり、はとんど際限なく再生することが可能である
。

モノクローナル抗体は、数多く存在する従来の方法によ
って産生ずることができる。−殻内にはホス］−アニマ
ル（通常【よマウスである）を免疫化した後、ボス１〜
アニマルを殺し、肺臓から取出したＢ細胞を骨髄細胞と
融合させる。融合はポリエチレングリコール４０００の
ような融合物質（ｆｕｓｉｏｎ　ｒｃａｇｅｎｔ）を用
いて行なう。融合によって生じたハイブリドーマは次に
再懸濁され、９６個のウェルを有するプレートに移され
て成長が行なわれる。

免疫化、融合、及びスクリーニングステップ、そして上
述した抗体産生の方法に対しては、多くの変形が可能で
ある。まず、ホストアニマルとしてはマウス以外のもの
を使用することができる。

また、血液や組織を抜取って試験管内（ｉｎ　ｖｉｔｒ
ｏ）での免疫化を行ない、ヒトのハイブリドーマを形成
１−ることもできる。

また、ボリエヂレングリコール４０００以外の試薬を融
合に用いることもできる。さらに、この発明にＪ３ける
ような化学的な融合のかわりに電気的な融合を行なうこ
としできる。このテクニックは十分に確立されている。

融合のかわりに、例えばエプスタインバーウィルス（ｔ
：ｐｓｔｅｉｎ　Ｂａｒｒν＋ｒｕｓ）を用いてＢ細胞
を変換してＢｍ胞を不死にすることもできる。（Ｂ細胞
の変換方法については、アール・エイチ・ケネッ１−（
にｃｎｎｅｔｔ、Ｒ，ｌＩ、）他線「モノクローナル抗
体」　（プレナムプレス（Ｐｌｃｎｕｎ＋　Ｐｒｅｓｓ
）、Ｎ、Ｙ、１９８０．ＰＰ１９−３３）の中のブイ・
アール・ヅラース−Ｐ　（Ｚｕｒａｗｓｋｉ、Ｖ、ＩＬ
　）らによる′“予め決められた特異性を有する抗体を
合成する人体細胞系の連続増殖（Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ
ｌｙＰｒｏｌｉｆｃｒａｔｉｎｇ　ｌｌｕｍａｎ　Ｃｅ
１ｌ　Ｌｉｎｅｓ　ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｉｎｇＡｎｔｉ
ｂｏｄｙ　ｏｒ　Ｐｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　５ｐｅ
ｃｉｆｉｃｉｔｙ）”を参照のこと。） この発明においては、ＳＯＤ−１に対するモノクローナ
ル抗体を産生したハイブリドーマは一連のスクリーニン
グ手続によって単離した。まず、９６個のつ［ルを右す
るプレー１−中において、クローンを多く含む１り１ル
から上澄を取出す。Ｓ０１〕−１に対する抗体を産生ず
るクローンを含むつ１ルは、放射線標識されたＳＯＤ−
１を各ウェルに加え、結合した吊を測定することによっ
て決定される。単離は、例えばＥＬＩＳＡ、イムノフル
オレッセンスアッセイ、ウェスタンプロットアナリシス
、あるいは免疫組織化学染色等の種々のテクニックを用
いて行なうことができる。唯−考虞しな【ノればならな
いのは、この手続ではＳＯＤ１に対して特異性を有する
モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを選ぶと
いうことである。

選ばれた細胞を次に制限希釈し、成長させてからＲＩＡ
手続によって特異性、敏感性、及び親和性に対する特性
化を行なった。

ティー・ボーラマン（Ｔ、　ＰＯｒｔＳｌｌａｎｎｌら
は“′ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体を用
いたＣｌ／Ｚｎ過酸化物分子変位補酵素の迅速かつ高感
度なエンザエムイムノアッセイ（Ａ　Ｒａｐｉｄ　ａｎ
ｄＳｅｎｓｉｔｉｖｅ　［：ｎｚｙｍｅ　Ｉｍｍｕｎｏ
ａｓｓａｙ　ｆｏｒ　Ｃｕ／Ｚｎ５ｕｐｅｒｏｘｉｄａ
　Ｄｉｓｍｕｔａｓｅ　ｗｉｔｈ　Ｐｏ１ｙｃｌｏｎａ
ｌ　ａｎｄＨ，ｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉ
ｅｓ）　”　　（クリ二カ・ケミ力・アクタ（Ｃ１ｉｎ
ｉｃａ　Ｃ１ｉｎｉｃａ　Ａｃｔａ）、第１７１巻、１
−１０）という本の中で、モノクローナル抗体及びポリ
クローナル抗体に基づ＜ＳＯＤ−１に対するアッセイに
ついて占いている。これらの方法すまた、この発明によ
るＳＯＤ−１検出に用いることができる。

胎児のトリソミ２１の検知に用いることのできるヘモグ
ロビンに対するポリクローナル抗体やモノクローナル抗
体も、上述したのと本質的に同じテクニックを用いて産
生ずることができる。

ｈＣＧに対するモノクローナル抗体については、エム・
エイチ、・ボガート（Ｈ，Ｉｌ、Ｂｏａａｒｔ）らの“
胎児が染色体異常を有する妊娠における妊婦血清絨毛膜
ゴブドトロピンレベルの異常（＾ｂｎｏｒｍａ１Ｍａｔ
ｅｒｎａｌ　５ｅｒｕａ＋　Ｃｈｏｒｉｏｎｉｃ　Ｇｏ
ｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ　Ｌｅｖｅｌｓｉｎ　　Ｐｒｅｇ
ｎａｎｃｉｅｓ　　ｖｉｔｈ　　Ｆｅｔａｌ　　Ｃｈｒ
ｏｍｏｓｏｍｅＡｂｎＯｒｌｌａｌｉｔｉｅＳ）”（プ
リネータルーダイアクノシス（Ｐｒｅｎａｔａｌ　Ｄｉ
ａｇｒｏｓｉｓ）、　　６２３−６３０　＜　１９８７
　）　）に記述がある。ボガートらが使用したモノクロ
ーナル抗体は木質的には２つのタイプから成る。すなわ
ち、アルファーＬＩ　ＣＧを検出するものと、完全な（
ｉｎｔａｃｔ）ｔｌＣＧとフリーなベーターＨＣＧの両
方を検出するものである。ｈＣＧレベル（ＭＯＭ）の上
昇を検出するために後者の抗体を用いた時には、抗アル
ファーｌ−１ＣＧ抗体に対するよりもトリソミ２１胎児
との相関は大きかった（閾値として２．５Ｍ　ＯＭを用
いている）。これらの結果から、フリーなベータートＩ
ｃＧ及び完全なｈＣＧに対する抗体は実際には完全なｈ
ＣＧ上のベーターエピトープに結合していると考えられ
ている。完全なｈＣＧ上のアルファーエピトープはなぎ
か反応に寄与しないようであり、これが抗アルファーＨ
ＣＧがトリソミ２１を高い信頼性で検知できない理由で
あろう。

非共役エストリオールは、ワルド（Ｗａｌｄ）らによる
゛ダウン症候群の出生前スクリーニングテストとしての
妊婦血清の非共役エストリオール（Ｍａｔｅｒｎａｌ　
５ｅｒｕ＋＋＋　Ｕｎｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ　０ｅｓｔ
ｒｉｏｌ　ａｓ　ａｎ＾ｎｔｅｎａｔａｌ　Ｓｃｒｅｅ
ｎｉｎｇ　Ｔｅ５ｔ　ｆｏｒ　Ｄｏｗｎ’ｓＳｙｎｄｒ
ｏｍｅ）　’″　（ブリティッシュ・ジャーナル・オプ
・オプステトリクス・アンド・ジブエコ０シイ。

３３４−４１　（１９８８年４月）、以下゛ワルドＩ　
ＩＩと記す）の中に書かれている方法でアッセイを行な
うことができる。すなわち、直接非抽出ラジオイムノア
ッセイ（アメルレックス・エストリオール−ＲＩ　Ａキ
ット（Ａｍｅｒｌｅｘ　ｏｅｓｔｒｉｏｌ　Ｒ１−Ａ　
ｋｉｔ）、アメルシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）　）を用
いて行なうことができる。妊婦血清のＡ　Ｆ　Ｐ　ｂ、
ワルド■に記載されているテクニック、すなわちイムノ
ラジオメトリックアッセイ（ブーツ・セルチック・ダイ
アグノスティクス・リミテッド（Ｂｏｏｔｓ−Ｃａ　ｌ
　Ｉ　ｔｅｃｈＯｉａＱｎＯ３ｔｉＣ３ｔｔｄ、）によ
って７ツセイを行なうことができる。ワルド■は中央値
の倍数（ＭＯＭ）でＡＦＰ及び非共役エストリオールの
レベルを表わしている。

所望のモノクローナル抗体及びポリクローナル抗体が単
離された後、最終段階としてそれらを使って検査中の抗
原に対するアッセイを行なう。５００−１とへ［グロビ
ンの両方の濃度を検出するにはＲＩ　Ａを使用した。ボ
ガートらはｈＣＧレベルの検出にＲＩＡを用いた。前述
したように、非共役ニストリオール及びＡＦＰに対する
アッセイは周知のものである。

ＲＩＡはいわゆる“コンペティティブ （ＣＯｌｌｌｐｅＬｉｔｉＶＯ）　”アッセイであり、
標識された抗原と標識されていない抗原が抗体を含む上
澄に加えられ、化合物が沈澱させられる。非標識抗原は
抗体結合領域から標識抗原のいくらかを置換させる。置
換の程度は結合した標識抗原のｍ、あるいはフリーの標
識抗原を測定することによって決定される。

ａ！度が既知である一連の非ＪＩＡ識抗原サンプルを一
定量の抗原と共に加え、各サンプルを加えたあとに生じ
る結合した（あるいは置換した）標識抗原の遣を測定す
ることによって、標識抗原対濃度の標準曲線が得られる
。ｍ　＋ｉが未知である非標識抗原サンプルを結合した
標識抗原のシステムに加え、結合した（あるいは置換し
た）標識抗原を測定すると、標準曲線を利用することに
よってそのシステムの濃度を決定することができる。こ
こで強調しておかなければならないことは、コンペディ
ティブアッセイあるいはＲＩＡ以外の前述した他の任意
のアッセイ法を用いても、ポリクローナル抗体（あるい
はモノクローナル抗体）によってＳＯＤ−１あるいはヘ
モグロビンの濃度を決定できるという点である。

以下で、抗体を産生ずる方法及びこの発明のアッセイ法
の例について詳しく説明する。

モノクローナル杭　の産生及び選択 ｍ　電文１：免疫を調べるために、生後４〜６週間の８
匹の８訂Ｂ／Ｃマウスを選んだ。ＳＯＤ−１を通常の食
塩水（００ｇ％）で希釈し、注射器に出し入れしてフロ
イント完全アジュバント内で乳化した。最終的な溶液は
１００μｇに対し１００〜２００μ９のＳＯＤ−１を含
んでいる。１００μｇの溶液を各マウスの異なる部分に
皮肉注入した。同じ濃度かつ同じ吊のＳＯＤ−１を効能
促進剤として４〜６週後に投与した。しかし、この時の
ＳＯＤ−１は７０インド不完全アジユバン（・内で乳化
されたものである。

効能促進剤を投与してから４〜６週後に同じ量かつ同じ
濃度の’ＳＯＤ−１（通常の食塩水に混合されたもの）
を肺臓内注入して再度免疫化した。

４日１９、マウスを殺し、融合を行なうためにその肺臓
を取り出した。

（２）融合によるパイブリドーマの形　：肺臓から肺臓
細胞の単体細胞懸濁液（ｓｉｎｇｌｅ　ｅｅｌｓｕｓｐ
ｅｎｓｉｏｎｓ　）を用意した。肺臓組織はＤＭＥＭ中
、すなわちイーグル基礎培地のデュルベッコス変形（Ｄ
ｕｌｂｅｃｃｏｓ　Ｈｏｄｉｆｉｃａ口ｏｎ）中におい
て希釈し、１０００ｇの遠心分離門に１０分間か１ノだ
。

上澄を取除いて培地中に維持されたＳ　ｐ２１０骨髄１
Ｉｆｉ細胞を細胞ペレットに加え再墾濁した。

結果として１ワられる懸濁液を１０分間１０００りで遠
心し、上澄を取除いた。次に、１−のポリエチレングリ
コール４０００を、２０ｄのＤＭＥＭと共に、１０分以
上にわたって徐々に加えた。

融合した細胞を遠心分離し、上澄を取除いた。

Ｉ胞は１００ｄのＤＭＥＭで再懸濁し、１００μｍのア
リコートを加えリンプロプレートの９６個のウェル各々
に入れた。このようにして１０枚のプレートを用意した
。融合産生物は、プレート内で２週間成長させた。ハイ
ブリドーマ産生手続についての説明は以下を参照。ケー
・フラーキ（Ｋ、Ｆｌｕｒｋｅｙ　）　、エム・ビー・
ボルガ（Ｈ，Ｂ、Ｂｏｌｇｅｒ）　、及びデイ−・ニス
・リンジンカム（Ｄ、Ｓ、Ｌｉｎｔ旧ｎｃｕｒａ）が″
゛ジエーニューロイムツル（Ｊ、Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎ
ｏｌ、　　）　”　　１１５−１２７（１９８５）に発
表した論文［セロトニンおよびドーパミン配位子に対す
る抗血清およびモノクローナル抗体の形成とその特性（
Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄＣｈａｒａｃｔｅｒｉ
ｓｔｉｃｓ　ｏｒ　Ａｎｔｉｓｅｒａ　ａｎｄ　Ｈｏｎ
ｏｃｌｏｎａ八ｎｔｉｂｏｄｉへｓ　　ｔｏ　　Ｓｅｒ
ｏｔｏｎｅｒｇｉｃ　　ａｎｄ　　Ｄｏｐａｉｉｎｅｒ
ｇｉｃＬｉｇａｎｄｓ）に記載されている。

（３）１スクリーニン　プロヒス：第１スクリニングプ
ロセスはＳＯＤ−１抗体を産生ずるクローンをウェルか
らとり出すためのものである。

１００μｇのハイブリドーマ上澄（このうちの幾らかは
Ｓ　Ｑ　Ｌ’）　−１抗体を含んでいるはずである）は
９６個のウェルを有するポリ塩化ビニールプレートへ移
した。プレー１〜は予め０．０５　ｇｉｇ　／　ａｅの
濃度のＡ７ギの抗マウスｌ　Ｑ　Ｇ　（ｇｏａｔ　ａｎ
ｔｉ　１ｏｔｌｓｅ　ＩＱＧ）（これはマイルズ・ラボ
ラトリーズ（Ｈｉｌｅｓ　１ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）
から購入することができる）でコーティングされている
。次に、プレートを３７℃で２時間培養した。プレート
を洗浄した後１２５　、　、識ＳＯＤ−１（ビラーノと
ティッシュフィールドの前掲の文献３６３に記述されて
いる方法で標識される）を加えた。標識ＳＯＤ−１は１
００μρにつきＪ３よそ５０００力ウント／分（ＣＰＭ
）になるまでホウＭ塩！２！衝液、０，１％［３ＳＡ中
で希釈した。

３７℃で２時間培養した後、プレートを２度洗浄した模
、ホラ１−ニクロム線でウェルを切断し、プラスチック
デユープに移してガンマ分光にかけた。

最も大きなＣＰＭを示したウェルに対応する］Ｊンブル
、従って最も多く抗体を産生ずる細胞を次に制限希釈し
、再びスクリーニングしてただ一つのクローンのみが存
在することを確かめた。細胞は次にもっと大きなプレー
トで成長させた。

成長の後、１．０００．０００〜３．０００．０００個
の細胞を」週間前にブリスタンを与えられたマウスの腹
膜腔に注入した。８〜１０日後に腹膜腔から液を抜き取
り、腹水を採集した。ｐ１１８．２〜８．４で０．１％
ＢＳＡのホウ酸塩緩ｍ液によって希釈することにより、
種々の力価（ｔｉｔｒｅ　）の腹水を作った。ＳＯＤ−
１の３０〜５０％結合（以下説明するＲＩＡ法ににって
測定される）を有する力価がＲＩＡスクリーニング手続
によってさらに評価を行なうだめに選ばれた。

（４）第２スクリーニングプロセス（ＲＩＡスクリーニ
ングプロセス　：ＲＩＡスクリーニング手続は、抗体の
８００−１に体する特異性、敏感度及び親和力を特性化
するために行なう。選択された力価を有する１００μｍ
の腹水を種々の濃１１を有する１００μｇのＳＯＤ−１
及び１００μｍの２５．０ＯＯＣＰ　Ｍを示す　　ｉ標
識ＳＯＤ−１と共にボリエヂレンチューブに加え、室温
で４時間培養した。１：１に希釈されたヤギの抗マウス
ＩｑＧをポリニブレンゲリコール６０００に加え、チュ
ーブを振った後、１５分間培養する。チューブは２５０
０ｇで１５分聞達心した。上澄は取除いてベレットを放
射能評価した。

この第２スクリーニングプロセスは、３０　ｎＯ／−の
標識されていないＳＯＤ−１が然るべき時間（４時間が
最適であると考えられる）の侵に、抗体の結合箇所から
ＭＡａｌＩされたＳＯＤ−１を十分置換させたかどうか
を決定するためのものである。

言い換えれば、この過程は標識された抗原よりも標識さ
れていない抗原に対してより大きな親和力を有するモノ
クローナル抗体を選択するためのものである。これを行
なうために、ベレット中の最終のＣＰＭを参照用のベレ
ットにおけるカウントと比較する。参照用のベレットは
、上述したのと同様にヤギの抗マウスＩａＧ、抗体及び
　　！標識ＳＯＤ−１を沈澱させて作られるが、Ｆ！識
されていないＳＯＤ−１が存在しない点が異なる。参照
用のものよりもずっと低いＣＰＭを示した抗体サンプル
（従って標識されていないＳＯＤ−１の結合が非常に多
いもの）を羊水中におけるＳＯＤ−ルベル測定に使用す
るために選んだ。ＲＩＡスクリーニングプロ廿スの説明
についてはケー・エフ・ミラー（にＪ、Ｈｉｌｌｅｒ）
　、デイ−・ジエー・ボルト（Ｄ、Ｊ、ＢＯＩｔ）　、
及びアール・ニー・ゴールズビイ（Ｒ，Ａ、Ｇｏｌｄｓ
ｂｙ　）が５９．”ジエー・イムツル・メソッズ（Ｊ、
　Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｈｅｔｈｏｄｓ）”、　　２７７−
２８０（１９８３）に発表した論文「放射性物質で標識
した抗原および免疫吸着剤を使用したハイブリドーマの
培養上澄液の迅速液相スクリーニング法（Ａ　Ｒａｐｉ
ｄ　　５ｏｌｕｔｉｏｎ−Ｐｈａｓｅ　Ｓｃｒｅｅｎｉ
ｎｇ　　ｙｅｃｈｎｔｑｕｅｆｏｒ　ｔｌｖｂｒｉｄｏ
ｌａ　　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　５ｕＤｅｒｎａｔａｎｔＳ　
　１ａｉｎ。

１１ａｄｉｏｌａｂｅｌｌｅｄ　　Ａｎｔｉｇｅｎ　ａ
ｎｄ　　ａ　５ｏｌｉｄ−ＰｈａｓｅＩｎ＋ｍｕｎｏａ
ｄｓｏｒｂａｎｔ　）　Ｊに記載されている。

結果的には、随意の感度のモノクローナル抗体は得られ
なかった。それにもかかわらず、得られたモノクローナ
ル抗体は羊水中あるいは母親の体液中にお６ノるＳＯＤ
−ルベルを正確に測定するため機能を果すことを強調し
なければならない。

ただし、この機能はＥＬＩＳＡ等の拮抗テストを行なっ
た場合に発揮される。しかしながら、未標識ＳＯＤ−ｉ
に対・して高い親和力を有するポリクローナル抗体は以
下に述べるような手法によって１ｕられた。これらの抗
体はＳＯＤ−１テストに供された。

これらのテストが実施されたため、さらに実験を行なう
ことにより、拮抗テストにおいて機能を発揮し得る高親
和性のモノクローナル抗体が単離された。これらのモノ
クローナル抗体は基本的には上記と同様な方法によって
単離された。そして、これらのモノクローナル抗体はア
メリカ式のカルチャーコレクション（Ｃｕｌｔｕｒｅ　
Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ）における堆積物上に置かれた（
アクセスＮ（ＩＩＩＢ−９９３７）。

ポリクローナル抗体の産生と選択 （１）笈反上二８匹のＢＡＬＢ／Ｃマウスを本頑的には
モノクローナルに対して説明したのと同じ手続によって
免疫化する。ただ１つの相異点は最後の肺臓内注入を行
なわないことである。

効能促進剤を投与して１０〜１２日後に、各マウスから
血液を扱取って遠心分離し、血清を採集した。次に、ポ
リクローナル抗体を含むこの血清は、本質的には前述し
たＲＩＡスクリーニングプロセスと同じプロセスによっ
てスクリーニングされる。

（２）ＲＩＡスクリーニン　：各マウスから採集された
血清は９１１８．２〜８．４．０．１％ＢＳＡのホウ酸
塩緩衝液で希釈し、数種類の力価のものを作った。次に
、ＳＯＤ−１の３０〜５０％結合を有する力価（ＲＩＡ
法によって測定される）を選択した。８匹のマウスのう
ちの２匹から、１：１００Ｏの力価の血清を選択した。

これらの力価は３０ｎｇ／ｌｅの標識されていないＳＯ
Ｄ−１が４時間のうちに抗体の結合箇所から標識された
８００−１を十分に置換させたかどうかを決定するため
にチエツクされる。結果は満足すべきものであり、これ
らの力価は羊水中のＳＯＤ−１濃度を測定するために使
用できるように思われる。

ポリク［１−フルに対してはモノクローナルに対するよ
りも多く血清が必要とされるため、商用に用いるｍのポ
リクローナルを産生ずるには、マウスよりも大きな動物
が必要である。上述したポリクローナルの免疫と選択手
続は、例えば山羊のようなもっと大きな動物においてら
同じようにして行なうことができる。

ラジオイムノアッセイにおけるポリクローナルの使用例 羊水中におけるＳＯＤ−ルベルの測定は、選択された１
：１０００ボリクローナル力価とＲＩＡを使用して行な
われる。ＲＩＡは本質的にはＲＩＡスクリーニング手続
について上述したのと同様にして行なわれる。しかし、
今度は幾種類かの既知のＳＯＤ−１ａ度が１：１０００
ポリクローナル力価及び標識されたＳＯＤ−１と混合さ
れる。

ヤギの抗マウスＩＱＧを加えた後、ベレットを放射能評
価した。既知のＳＯＤ−ｉｎ度のサンプルを用いて、未
知の液体り゛ンプルにおけるＳＯＤ１濃度を測定するた
めに使用される標準曲線を１１にとができる。この手続
を以下でさらに詳しく説明する。

（１）チエツク手続 適正な結合を確保するために、システムをチエツクする
必要がある。標識されたＳＯＤ−１をチューブに加えて
較正された平均ＣＰＭを計算する（この値は以下“トー
タル″で示される）。

すべての値を計算するにあたっては、試験するチューブ
を２本用意する。両方のチューブのＣＰＭの平均を計棹
し、非特異結合カウント（あるいはバックグラウンドカ
ウント）を平均ＣＰＭから引いて較正された平均ＣＰＭ
を算出する。次に他のチューブにＳＯＤ−１、抗体、及
びヤギの抗マウスＩｑＧを加え、ベレットの較正された
平均ＣＰＭを計口する（この値は以下“ＢＯ″で示され
る）。Ｂ　ｏ　／　ｔ−一タル×１００は３５％±３％
になるはずである。今の場合、３４．８％であることが
わかった。

また、システムは非特異結合カウントが通常の範囲内で
あることを確かめるためにチエツクされる。アッセイは
すべて標識されていないＳＯＤ−１で行なわれ、ベレッ
トの較正された平均ＣＰＭを計鈴する。この値は゛ブラ
ンク°′で表わされる。

ブランク／　ｌ−一タル×１００は１０％以下になるは
ずである。今の場合には６．８％であることがわかった
。

（２）ＲＩＡ手続 次に、３０　ｎｇ／　ｒｄから２５００ｎＱ／ｍｌの範
囲に及ぶ既知のＳＯＤ−１１濃度を含む７種類の標準に
対し、ＲＩＡを行なった。７つのベレットの較正された
平均ＣＰＭを計算しくこの埴は以下゛Ｂ　ＩＩで示され
る）、Ｂ／Ｂｏを各サンプルの濃度に対してプロットし
、標準曲線を得た。この標準曲線を第１図に示す。

次に、トリソミ２１に対して陰性であるということがわ
かっている胎児の羊水から７１種の異なるサンプル、及
び陽性であることがわかっている１５種のサンプルに対
しＲＩＡを実施した。サンプルはすべて１：１に希釈し
た。なお、これら８６種のサンプルのうちの６０種は妊
娠１３週〜２０週の妊婦から採取したものである。また
、他の２５種のサンプルについては被検菌の妊娠期間は
明らかでないが、少なくとも１２週以降のものである。

残りの１種は妊ｔＦｉ２８Ｎの妊婦から採取したもので
ある。標準曲線を用いることによって、得られたＢ／Ｂ
Ｏ値を関係づけ、羊水中のＳＯＤ１の濃度（ｎＭＩｄ）
を決定した。それぞれの結果を棒グラフで表わしたもの
を第２図及び第３図に示す。

（３）　級」 陰性であることがわかっている７１のサンプルのうち、
たったの９個（すなわも１３％）が３１４μｇ／ｄ（こ
の３１４ｎａ／ＩＲ１という値は、羊水中のトリソミ２
１を示すための閾値レベルとして選ばれた）以上のＳＯ
Ｄ−ルベルを示した。つまり、陰性であることがわかっ
ているサンプルの８７％が閾値以下であった。一方、陽
性であることがわかっている１５のサンプルのうち、た
った１個（すなわら７％）が３１４ｎｌＪ／ｄ以下のＳ
ＯＤ−ルベルを示した。つまり、陽性であることがわか
っている１１ンプルの９３％が閾値レベル以上であった
。なお、羊水中のトリソミ２１の検出のための閾値とし
て３１４μｇ／ｄという値が選ばれたのは、この３１４
μｇ／Ｉｎｌという値において疑陽性及び疑陰性が最も
少なくなるためである。上記結果より、この□テストが
核型分析を要する患者の検知のためのスクリーニング手
続］−として適していることがわかる。

被検者の年齢は２０才から４２才までである。

被検者の年齢がトリソミ２１のインジケータ（指標）と
してのテストの信頼性あるいは閾値に影響を及ぼすとは
考えられない。

ＳＯＤ−１に対する妊婦血清のスクリーニング正常な胎
児を身ごもっている母１！（少なくとら妊娠１２週週日
ある妊婦）１７６人から採取した血清と、トリミソ２１
を有する胎児を身ごもっている母親２１人から採取した
血清に対して、ＲＩＡ法を用いて同様のスクリーニング
手続を行なった。妊娠期間はすべて１５週から１８週の
間であった。トリミソ２１の胎児を身ご６つだ母親の年
齢は、すべて３５才と４３才の間であった。羊水ではな
くて血清を用いてスクリーニングを行なったため、閾値
を変える必要があった。

既知の陽性サンプルのうち、７１％が１０５ｒ＋ｏ／−
以上のＳＯＤ−ルベルを示し、゛疑陰性″すなわらこの
レベルを下まわったのは２９％にすぎなかった。陰性サ
ンプルのうち、８５％が１０５　ｎｏ／　ａｄ！以下で
あり、゛疑陽性″すなわちこのレベルを上まわったのは
わずか１５％であった。疑陽性及び疑陰性が１０５ｎｏ
／ｄにおいて最も少なかったため、このＩＩ　ＩＪｉを
最小間＋ｆｉａ度として選択した。閾値は羊水の場合と
は異なってくるが、妊婦の血清中にＪ３けるＳＯＤ−ル
ベルの上昇もまたトリミソ２１の存在を示す信頼度の高
い指標であることがわかる。

目的に合わせて閾値濃度を調整することが可能である。

閾値濃度をまず１１５０Ｍｄに上げ、そして次に１２５
０（＋／Ｉｎｌに上げると、疑陽性はそれぞれ１０％及
び８％に低下する。しかし、閾値を大きくしたこれら２
つの場合とも、疑陰性は４２％まで増大し、そのテスト
は胎児のトリミソ２１に対する指標としての信頼度が低
下する。こうした結果にもかかわらず、テストの精度を
さらに高めるために閾値はいくらか調節される。

ＳＯＤ−１及びヘモグロビンのスクリーニングＳＯＤ−
１濃度がテストされた血清サンプルは、ヘモグロビン濃
度についてもテストされた。次にＳＯＤ−１１ｆ１度と
ヘモグロビン濃度は、胎児のトリミソ２１に対する指標
としての性能が、両方を一緒にした場合や、別々の場合
について調べられた。

ヘモグロビン濃度は、ポリクローナル抗体Ｒ１へを用い
て測定された。このＲＩＡにおいては、スクリーニング
ステップを行なった後、０．１％ＢＳＡ／ＰＢＳ（０，
１０８）中の標識されていないヘモグロビン濃度が２．
１０．５０，５００．２５００μｇ／−であるサンプル
を用いて標準曲線が作成された。

力ｆｉｌ　：　２００のウサギのポリクローナル抗体（
アキュレート・ケミカル・アンド・サイエンティフィッ
ク・コーポレーション（ＡＣＣｕｒａｔｆ３Ｃｈｅｍｉ
ｃａｌ　ａｎｄ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ｃｏｒｐ、）
から購入されたもの）１００μｍと、３０，０ＯＯＣＰ
　Ｍを示す　　Ｉ標識ヘモグロビン（ヴイラーノとティ
ッシュフィールドによる前掲書の３６３頁に記載されて
いる方法で標識されている）１００μｇとを含む試験管
に各サンプル２５μｇを加えた。サンプルを加えた後、
試験管を室温で２時間培養し、ヤギの抗ウサギ１ａＧ及
びポリエチレングリコールで沈澱し、遠心分離にかけて
上澄を取り、ＣＰＭをモニタした。ＳＯＤ−１を対象と
するＲＩＡに対して前述したように、すべての試ｗＡ管
は２本ずつ対に用意し、調節されたＣＰＭを６１ｑした
。

次にこの手続によって作成された標準曲線を用いて、上
述したＲＩＡ手続により未知の妊婦血清サンプル中のヘ
モグロビン濃度を決定した。しかし、ヘモグロビン濃度
は、任意のアッセイあるいはマイクログラム程度の濃度
を定量できるだけの感度を有する任意のテクニックを用
いても測定することができる。

結果をモニタした後、ヘモグロビンに対しては８５μｑ
／ｄの閾値濃度を、またＳＯＤ−１に対しては１１３Ｂ
／ｄの閾値ｍ度を選んだ。１７６の既知陰性サンプルの
うら、これらのレベルを上まわったのはたった５％であ
った。これは、ＳＯＤ１濃度のみをモニタした時に得ら
れた疑陽性の割合である１５％より隔分小さくなってい
る。

前述した閾値を用いた場合、疑陽性も若干減少した。Ｓ
ＯＤ−１のみをモニタした時には、陽性のサンプルの２
９％が疑陽性であったのに対し、へｔグロビンとＳＯＤ
−１の両方をモニタした時には疑陽性は２６％を若干上
まわる程度であった。

これらの結果は、血清中のＳＯＤ−１濃度とヘモグロビ
ン濃度の両方を測定することが、ＳＯＤ１ｉ１ｍ度のみ
をモニタするよりも信頼性の高いテストになることを示
してい゛る。

ボガードらによる前掲書に記載されている方法を用いて
、妊婦の血清（あるいは他の体液）に対しｈＣＧのスク
リーニングを行なうことができる。

抗体としては、前述したフリーなベーターｈＣＧと完全
なり　ＣＧの両方に結合するらのが使用される。最小ｈ
ＣＧレベルとして（それを越した場合には高いと判断さ
れる’）　　２．５Ｍ　ＯＭを採用すると、このスクリ
ーニングはＳＯＤ−１及び／あるいはヘモグロビンスク
リーニングテストの結果を改善することができる。ｈＣ
Ｇスクリーニングは、ＳＯＤ−１スクリーニングテスト
及び／あるいはヘモグロビンスクリーニングテストとい
っしょに用いることができる。ｈＣＧの他にＳＯＤ−１
の濃度、あるいはＳＯＤ−１とヘモグロビンの両方の濃
度が増大した場合には、ｌ・リミソ２１を有する胎児で
ある確率の高いことを示している。このようにｈＣＧレ
ベルのモニタを行なうと、ＳＯＤ−１のみ、あるいはＳ
ＯＤ−１とヘモグロビンの両方をモニタした場合に得ら
れる“疑陽性”をおそらく減少させられるであろう。

一ニング ワルド■に記述されており、その分野の技術者によく知
られているテクニックを用いて、血清中の非共役エスト
リオール及びＡＦＰに対するアッセイを行なう。陽性で
あることがわかっているいくつかのサンプルと、陰性で
あることがわかっているいくつかのサンプルとから成る
一連の血清サンプルに対してアッセイを行なう。これら
の結果と、ｈＣＧ、ＳＯＤ−１、ヘモグロビンに対する
アッセイから得られた結果に基づいて表を作成する。表
は、妊婦の年齢や、ＡＦＰ、非共役エストリオール、及
びｈＣＧの濃度などの変量を個々に考慮した場合や、そ
れらを様々に組合わせた場合について、種々の゛検知率
″（結果が陽性であるダウン症候群妊娠の割合）に対す
る疑陽性率（結果が陽性を示した健全な妊娠の割合）の
門係を示している。

ワルド■の方法には、妊婦の年齢や、ＡＦＰ、非共役エ
ストリオール、及びｈＣＧから成る変量の多段解析が含
まれている。統■解析を行なうことによって最終的に前
述したような表が得られる。

第２表は年齢と前述した変量に対する疑陽竹率（％）を
示している（第２表参照）。

第２表に示されている結果を１ｑるには、まず１５才か
ら５０才までの妊婦の各年齢に対してダウン症候群の推
定危険率を決定する。８つの調査結果を組合わせて各年
齢に対する推定危険率を得たが、その方法についてはク
ツクル（Ｃｕｃｋｌｅ）らの゛女性がダウン症候群に係
わる妊娠をしている危険性を年齢と血清アルファフェト
プロティンレベルを用いて評価する方法″、アプリィシ
ュ・ジャーナル・オブ・オブステトリクス・アンド・ジ
ナエコロン。第９４巻、　　３８７−４０２　（１９８
７年５月）（以後゛タックルら″と記す）に詳しく記載
されている。！！！ｉＱ１に言えば、クツクルらは各調
査から１１られた個々の推定危険率に対して対数スケー
ルで重み付き平均をとっている。この場合、各々の重み
付けは分散の逆数に比例するように行なわれている。各
年齢における推定危険率のランダム誤差を少なくするた
めに、タックルらは、ラムソン（Ｌａｍｓｏｎ）とフッ
ク（ｌｌｏｏｋ）（１９８１）によって提案された定数
に年齢の指数関数を加えたモデルを用いて、年齢に対す
るダウン症候群の出生確率の回帰分析を行なった。これ
についてはタックルらの３８８頁を参照のこと。

与えられた年齢と、ＡＦＰレベルに対するダウン症候群
の危険率を推定するために、クツクルらは特定の年齢に
対する確率（ダウン症候群を有する妊９１Ａ：健全な妊
娠）の左辺に確度比（ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ　ｒａｔｉ
ｏ）として知られるファクタを掛けた。この確度比は、
与えられたＡＦＰレベルに対するダウン症候群妊娠の割
合を、同じＡＦＰレベルに対する健全な妊娠の割合で割
ったものである。クツクルらは調査しているダウン症候
群妊娠が１，０００以下の場合に対して、この比を推定
する方法についてｊホへている。３８８−８９頁を参照
のこと。

クツクルらは、つぎに個々の女性がダウン症候群の胎児
を身ごもっていることを示す６つの異なる危険レベルを
任意に割り当てた。

その後、クツクルらは妊婦の年齢で特定されたＡＦＰカ
ットオフレベルを決めた。このカッ１〜オフレベルは、
各カットオフレベルに等しいＡＦＰ値をもつ個々の女性
がダウン症候群である危険率が、１　：１００，１　：
１５０．１　：２００．１　：３００、及び１：３５０
のうらのどれかになるように決められた。各危険率に対
するＡＦＰカッ１〜オフレベルは、年齢で特定された危
険率から特定の危険率を求めるのに必要な確度比を８１
算することによって決められた（例えば仮に年齢で特定
された危険が１　：３７５である時、危険率１：２００
に対するＩＵ比は３７５／２００である）。確度比を用
いてクツクルの付録１　（４００頁）に示されている方
程式を解き、ＡＦＰカットオフレベルを決定することが
できる。

クツクルらはまた、ダウン症候群の各危険率レベルにお
ける検知率と疑陽性率を推定する方法を提供している。

しかし、上ｊホしたＡにＰカットオフレベルをいった／
Ｖ段設定れば、こうした率はデータを調べることにより
推定を行なわずに知ることができる。

ワルドＩにおいては、妊婦の年齢及びＡＦＰレベルをモ
ニタする以外に、非共役エストリオールもモニタされて
いる。本質的には、検知率と疑陽性率を測定するために
クツクルらの方法が用いられてきた。しかし、非共役エ
ストリオールに対する長期間のバッチアッセイ間の分散
（Ｉｏｎｇ−ｔｅｒｎ＋ｂｅｔｗｅｅｎ　ｂａｔｃｈ　
ａｓｓａｙ　ｖａｒｔａｎｃｅ）に対して補正を加えた
。また、３つの変量に対する検知率と疑陽性率はクツク
ルらが用いたような１ＡＮ４分布ではなくて、適合ガウ
ス分布を用いて評価した。以下の第１表は、３つの変数
すべてを用いた時の疑陽性率及び検知率を示している。

第１表 年齢、ＡＦＰ、及び 非共役ニストリメール ５５　　　　　　　　９、１ ５０　　　　　　　　７、０ ４５　　　　　　　　５、３ ３５　　　　　　　　２、８ ３０　　　　　　　　１．９ ２５　　　　　　　　１．２ ２０　　　　　　　　０、７ ワルド■には変１１ｈｃＧに対するスクリーニング段階
が加えられている。ｈＣＧスクリーニングは、イムノラ
ジオメトリックアッセイ（第１次国際較正様本（ｆｉｒ
ｓｔ　１ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　ｒｅｆｅｒｅｎｃ
ｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）で較正されたＭＡＩＡ−ク
ローンキット（セロノ（ＳＯｒＯｎＯ）によって製造さ
れている））を用いて行なった。長期間バッチアッセイ
分散を推定し、その模妊婦血清ｈＣＧの測定分散推定値
に加えて通常用いられる標準偏差の准定伍を算出した。

ワルド■では次にｈＣＧｌＡＦＰ、及び非共役ニス１〜
すＡ−ルの種々の組合わせと妊婦の年齢とを用いて検知
率と擬陽性率をＪ１算している。結果は第２表に示され
ている。

（次ページに続く。） 第２表 ＡＦＰ　　　Ｕ、０．　　　ｈＣＧ １４　　９．５ １１　　　　γ、２ ８．８　５．４ ６１３．９ ５．０　２．８ ３．７　１．９ ２．５　１．２ １．６　０．８ ＡＦＰ　　ＡＦＰ　　Ｕ、Ｏ，、ＡＦＰ、Ｕ、０．。

Ｕ、Ｏ，ｈＣＧ　　ｈｃＧ　　　　ｈｃＧ８．８　８．
１ ６．７　６．０ ５．０４゜４ ３．７　３．２ ２．７　２．３ １．９１６ １．３　１．０ ０．８　０．７ ０．５　０．４ ＊妊婦の年齢及び生化学テストの結果から推定されたダ
ウン症候群の危険率が高い時に、結果は陽性と判定され
る。

＊＊Ｕ、Ｏ，は非共役エストリオールを表わす。

この発明においては妊婦の年齢と抗原であるｈＣＧ、非
共役エストリオール、及びＡＦＰのうちの１つあるいは
その組合わせに対し、検知率と擬陽性率を決定するため
にワルド■及びワルド■の方法を用いている。しかし、
どの場合にもＳＯＤ１とヘモグロビン、あるいはＳＯＤ
−１が変数として付は加えられている。

“検知率対“擬陽性率″の表は上述したようにして作成
する。この表は２１　Ｊｌｌｌｌ（ｃｏｌｕｎ＋ｎ）を
有する（第２表のＩｌｌ数の３倍）。各欄は、ＳＯＤ−
１、あるいはＳＯＤ−１及びヘモグロビンと、抗原であ
るｈＣＧ、非共役エストリオール、及びＡＦＰの１つ又
は複数との異なる組合わせを表わしている。変量（ＳＯ
Ｄ−１、ヘモグロビン、ｈＣＧ、非共役エストリオール
、及びＡＦＰ）のすべて、あるいはほとんど全部を組合
わせた場合には、ワルド■において得られたものよりず
っとよい検知率及び擬陽性率がこれらの欄では得られる
はずである。

上述したように、妊婦血清中の８００−１のみを用いる
と検知率７１％のとき、１０１０５ｎのカットオフレベ
ルにおいては“疑陽性″は１５％であった。妊婦血清中
のＳＯＤ−１とヘモグロビンの両方をモニタした時、ヘ
モグロビンに対しては８５μ９／ｒｄのカットオフレベ
ルを、またＳＯＤ−１に対しては１１３ｎｏ／−のカッ
トメフレベルを用いると、検知率７４％に対して疑陽性
はたった５％であった。これに比べ、ＡＦＰ、ｈＣＧ。

及び非共役エストリオールという３つの変量をモニタし
た場合にｔよ、７０％の検知率に対して擬陽性率は８．
６％であった。前述したＳＯＤ−ルベル及びヘモグロビ
ンレベルをワルド■でモニタされている３つの変量に対
する多変化解析に加えると、検知率は増大し擬陽性率は
減少するはずである。これらの変量を組み合わせれば、
胎児のダウン症候群に対する１００％信頼できる非常に
有効なスクリーニングテストになるはずである。

ワルド■ではまた、血清スクリーニングテストの補助テ
クニックとして、超音波スクリーニングによる胎児大腿
骨長を測定する方法を考えている。

このスクリーニングによって、上述したスクリーニング
テストの結果はさらに改善されるであろう。

双子を身ごもり自然流産した二人の母親から採取した羊
水に対しアッセイを行なった。これらのサンプルは、Ｓ
ＯＤ−ルベルが３７７ｎＱ／ｄ！及び４１２０ｇ／Ｉ１
１であった。これらのレベル値は、ダウン症候群に対す
る閾値３１４　ｎｇ／ｍｌよりもずっと高い。このこと
は、体液中のＳＯＤ−ルベルが高ければ、双生児及び／
あるいは自然流産の可能性が高いことを示している。し
かし、双生児あるいは自然流産と関連のあることがわか
ったＳＯＤ−ルベルの上昇は、上述したように、胎児の
トリミソ２１を示すこともある。ＳＯＤ−ルベルの上界
との関連が不確かなことから、ＳＯＤ−ルベルが高い母
親に対しては核型分析を実施し、トリミソ２１に対する
Ｒ柊的なテストを行なうことが好ましい。

早産の可能性を検知するＳＯＤ−１スクリー二Ｚグ 早産であった胎児を身ごもっていた母親から採取した血
清に対してもＳＯＤ−１アツセイを行なった。

通常の血清中におけるＳＯＤ−ルベルはかなり高い。こ
れは赤血球の中にＳＯＤ−１が含まれており、ＳＯＤ−
ｉが赤血球から血清中に入るからである。従って、血清
中のＳＯＤ−ルベルは、サンプル中に存在する赤血球の
数ににって大きく変化する。赤血球から出るＳＯＤ−１
の影響を補正するために、これも赤血球に含まれている
ヘモグロビンの濃度（μグ／　ｔｒｒｉ　）をＳＯＤ−
１の濃度（ｎＭ　ａｅ　）で割る操作を行なった。

正常な胎児を身ごもっている＆ｉ親から採取した血清が
ｌ／１．ｉ島の比を示したのに対して、早産だった胎児
を身ごもっていた母親から採取した血清は１／２．７の
比を示した。このことは、血清中のＳＯＤ−ルベルの上
界が早産の可能性が高いことを示す指標となることを示
している。再度繰返すことになるが、ＳＯＤ−ルベルの
上昇は胎児のトリミソ２１を示していることもあるため
、ＳＯＤ−１濃度の高い母親すべてに対して核型分析を
行なうことが重要である。

上述した実施例は単に説明のためのものであり、発明を
制限するものではない。従って、この発明によるトリソ
ミ２１ダウン症候群の検出方法は発明の精神及び範囲を
逸脱しない限りいかなる形によっても実現することが可
能である。

【図面の簡単な説明】

図面はこの発明の実施例を示し、第１図は標準曲線を示
す図、第２図は陰性サンプル中のＳＯＤ−１ｉ１度の測
定結果を示す図、第３図は陽性サンプルのＳＯＤ−ｉｎ
度の測定結果を示す図である。 出願人　　　モノクローネテイクス・ インターナシコナル・ インコーホレーテッド

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）妊婦の細胞外体液中のＳＯＤ−１濃度を測定する
   段階と、前記ＳＯＤ−１濃度が妊娠期間が同一の女性に
   対して設定された特定の閾値を越えているかどうか決定
   する段階とを有する胎児のトリソミ２１を検知する方法
   。 （２）前記細胞外体液が妊婦の血清であり、妊娠期間が
   １２週〜２０週の範囲にある女性に対してＳＯＤ−１濃
   度が１１３ｎｇ／ｍｌを越えた時にテスト結果が陽性と
   なる特許請求の範囲第１項記載の胎児のトリソミ２１を
   検知する方法。 （３）前記細胞外体液が羊水であり、ＳＯＤ−１濃度が
   ３１４ｎｇ／ｍｌより大きい時にテスト結果が陽性とな
   る特許請求の範囲１項記載の胎児のトリソミ２１を検知
   する方法。（４）妊婦の血清中におけるＳＯＤ−１濃度
   及びヘモグロビン濃度を測定する段階と、前記濃度の両
   方が同じ妊娠期間にある女性に対して設定された特定の
   各閾値を越えているかどうか判定する段階とを有する胎
   児のトリソミ２１を検知する方法。 （５）妊娠期間が１２週〜２０週である女性に対するＳ
   ＯＤ−１の閾値が１１３ｎｇ／ｍｌであり、ヘモグロビ
   ンの閾値が８５μｇ／ｍｌである特許請求の範囲第４項
   記載の胎児のトリソミ２１を検知する方法。 （６）決定因子である人の絨毛膜ゴナドトロピン（ｈＣ
   Ｇ）、非共役エストリオール及びアルフアフエトプロテ
   インの１つあるいは複数の濃度を測定する段階と、ｈＣ
   Ｇ濃度が年齢及び妊娠期間が同一の女性に対する中央値
   より大きいかどうか、また非共役エストリオル及びアル
   フアフエトプロテイン濃度が年齢及び妊娠期間が同一の
   女牲に対する中央値より低いかどうか判定する段階とを
   さらに有する特許請求の範囲第４項記載の胎児のトリソ
   ミ２１を検知する方法。 （７）妊婦の体液中におけるＳＯＤ−１濃度を測定する
   段階と、このＳＯＤ−１濃度が妊娠期間が同一の正常な
   胎児に対する特定の閾値より大きいかどうかを判定する
   段階とを有する自然流産、早産、あるいは双生児の可能
   性が高いことを検知する方法。 （８）前記体液が羊水あるいは血清である特許請求の範
   囲第７項記載の自然流産、早産、あるいは双生児の可能
   性が高いことを検知する方法。 （９）前記体液が羊水であり、自然流産あるいは双生児
   の可能性が高いことの検知が対象とされ、ＳＯＤ−１に
   対する最小閾値濃度が約３１４ｎｇ／ｍｌである特許請
   求の範囲第７項記載の自然流産、早産、あるいは双生児
   の可能性が高いことを検知する方法。 （１０）前記体液が血清であり、早産の検知が対象とさ
   れ、血清中のヘモグロビン濃度（μｇ／ｍｌ）とＳＯＤ
   −１濃度（ｎｇ／ｍｌ）の比が１／１．１３より小さい
   特許請求の範囲第９項記載の自然流産、早産、あるいは
   双生児の可能性が高いことを検知する方法。（１１）Ｓ
   ＯＤ−１濃度がアッセイの対象とされ、アッセイがモノ
   クローナル抗体あるいはポリクローナル抗体を用いた同
   種あるいは異種の、ワンサイトあるいはツーサイトのイ
   ムノアッセイである特許請求の範囲第８項記載の自然流
   産、早産、あるいは双生児の可能性が高いことを検知す
   る方法。 （１２）妊婦の血清中のＳＯＤ−１濃度及び血清のヘモ
   グロビン濃度を検出する段階と、前記ヘモグロビン濃度
   を血清中のＳＯＤ−１濃度で割って両者の比を求める段
   階と、この比が特定の閾値より小さいかどうか判定する
   段階とを有する早産の可能性が高いことを検知するため
   のスクリーニング方法。 （１３）前記ヘモグロビン濃度がμｇ／ｍｌの単位で測
   定され、前記ＳＯＤ−１濃度がｎｇ／ｍｌの単位で測定
   され、前記閾値が１／１．１３×１０＾３である特許請
   求の範囲第１２項記載のスクリーニング方法。 （１４）妊婦の体液中におけるｈＣＧ濃度、ＳＯＤ−１
   濃度あるいはＳＯＤ−１濃度とヘモグロビン濃度の両方
   を測定する段階と、妊娠期間が同一の胎児に対する最小
   閾値よりも前記ｈＣＧ濃度が高いかどうか、また前記Ｓ
   ＯＤ−１濃度、あるいはＳＯＤ−１濃度及びヘモグロビ
   ン濃度の両方が最小閾値よりも高いかどうかを判定する
   段階とを有する胎児のトリソミ２１を検知する方法。 （１５）前記体液が血清であり、ｈＣＧが２．５ＭｏＭ
   を越えれば高いと判定され、ＳＯＤ−１及びヘモグロビ
   ンに対する最小閾値がそれぞれ１１３ｎｇ／ｍｌ及び８
   ５μｇ／ｍｌである特許請求の範囲第１４項記載の胎児
   のトリソミ２１を検知する方法。 （１６）前記ｈＣＧ、ＳＯＤ−１及びヘモグロビンのレ
   ベルがアッセイによつて測定される特許請求の範囲第１
   ４項記載の胎児のトリソミ２１を検知する方法。 （１７）変量であるｈＣＧ、非共役エストリオル、及び
   アルフアフエトプロテインのうちの１つあるいは複数と
   共に、変量であるＳＯＤ−１あるいはＳＯＤ−１とヘモ
   グロビンの両方を測定するために年齢が既知である妊婦
   から採取した一連の血清サンプルに対してアッセイを行
   なう段階と、アッセイの行なわれる各変量の特定の濃度
   と特定の妊婦年齢とに対して陽性結果を示したダウン症
   候群妊娠の率と陽性結果を示した正常妊娠の率とを関連
   付ける表を作成する段階と、未知の妊婦血清サンプルに
   おいて変量であるｈＣＧ、非共役エストリオル、及びア
   ルフアフエトプロテインのうち１つあるいは複数と共に
   、変量ＳＯＤ−１及びヘモグロビンの濃度を測定する段
   階と、前記表から未知サンプルが胎児のトリソミ２１ダ
   ウン症候群を示している確率を決定する段階とを有し、
   前記アッセイを行なう段階の血清サンプルのあるものは
   胎児のダウン症候群に対して陽性であることがわかつて
   おり、またあるものは陰性であることがわかつている胎
   児のトリソミ２１ダウン症候群の確度を検知する方法。 （１８）前記トリソミ２１ダウン症候群の妊娠率が２０
   ％から８０％まで５％ずつ増大する形で陽性の結果にな
   るように、前記アッセイの行なわれる変量の特定の濃度
   が調節される特許請求の範囲第１７項記載の胎児のトリ
   ソミ２１ダウン症候群の確度を検知する方法。 （１９）前記アッセイの行なわれる変量が、ＳＯＤ−１
   、ヘモグロビン、アルフアフエトプロテイン、ｈＣＧ、
   及び非共役エストリオルである特許請求の範囲第１７項
   記載の胎児のトリソミ２１ダウン症候群の確度を検知す
   る方法。 （２０）前記アッセイの行なわれる変量が、ＳＯＤ−１
   、ヘモグロビン、アルフアフエトプロテイン、である特
   許請求の範囲第１７項記載の胎児のトリソミ２１ダウン
   症候群の確度を検知する方法。 （２１）前記アッセイの行なわれる変量が、ＳＯＤ−１
   、ヘモグロビン、アルフアフエトプロテイン、及びｈＣ
   Ｇである特許請求の範囲第１７項記載の胎児のトリソミ
   ２１ダウン症候群の確度を検知する方法。 （２２）前記アッセイの行なわれる変量が、ＳＯＤ−１
   、ヘモグロビン、アルフアフエトプロテイン、非共役エ
   ストリオルである特許請求の範囲第１７項記載の胎児の
   トリソミ２１ダウン症候群の確度を検知する方法。 （２３）前記アッセイの行なわれる変量が、ＳＯＤ−１
   、ヘモグロビン、及びｈＣＧである特許請求の範囲第１
   ７項記載の胎児のトリソミ２１ダウン症候群の確度を検
   知する方法。 （２４）前記アッセイの行なわれる変量が、ＳＯＤ−１
   、ヘモグロビン、ｈＣＧ、及び非共役エストリオルであ
   る特許請求の範囲第１７項記載の胎児のトリソミ２１ダ
   ウン症候群の確度を検知する方法。 （２５）前記アッセイの行なわれる変量が、ＳＯＤ−１
   、ヘモグロビン、及び非共役エストリオルである特許請
   求の範囲第１７項記載の胎児のトリソミ２１ダウン症候
   群の確度を検知する方法。 （２６）前記アッセイの行なわれる変量が、ＳＯＤ−１
   、アルフアフエトプロテイン、ｈＣＧ、及び非共役エス
   トリオルである特許請求の範囲第１７項記載の胎児のト
   リソミ２１ダウン症候群の確度を検知する方法。 （２７）前記アッセイの行なわれる変量が、ＳＯＤ−１
   、及びアルフアフエトプロテインである特許請求の範囲
   第１７項記載の胎児のトリソミ２１ダウン症候群の確度
   を検知する方法。 （２８）前記アッセイの行なわれる変量が、ＳＯＤ−１
   、アルフアフエトプロテイン、及びｈＣＧである特許請
   求の範囲第１７項記載の胎児のトリソミ２１ダウン症候
   群の確度を検知する方法。 （２９）前記アッセイの行なわれる変量が、ＳＯＤ−１
   、アルフアフエトプロティン、及び非共役エストリオル
   である特許請求の範囲第１７項記載の胎児のトリソミ２
   １ダウン症候群の確度を検知する方法。 （３０）前記アッセイの行なわれる変量が、ＳＯＤ−１
   及びｈＣＧである特許請求の範囲１７項記載の胎児のト
   リソミ２１ダウン症候群の確度を検知する方法。 （３１）前記アッセイの行なわれる変量が、ＳＯＤ−１
   、ｈＣＧ、及び非共役エストリオルである特許請求の範
   囲第１７項記載の胎児のトリソミ２１ダウン症候群の確
   度を検知する方法。 （３２）前記アッセイの行なわれる変量が、ＳＯＤ−１
   及び非共役エストリオルである特許請求の範囲第１７項
   記載の胎児のトリソミ２１ダウン症候群の確度を検知す
   る方法。 （３３）多くの異なる妊婦年齢に対して胎児のトリソミ
   ２１ダウン症候群の危険性を決定する段階と、変量であ
   るｈＣＧ、非共役エストリオル、及びアルファフェトプ
   ロテインのうちの１つあるいは複数と共に、変量である
   ＳＯＤ−１あるいはＳＯＤ−１とヘモグロビンの両方を
   測定するために年齢が既知である妊婦から採取した一連
   の血清サンプルに対してアッセイを行なう段階と、与え
   られた年齢及びアッセイの行なわれる変量のレベルに対
   するダウン症候群の危険性を評価する段階と、各カット
   オフレベルにある個々の妊婦におけるダウン症候群の危
   険性が特定の率になるようにアッセイの行なわれる変量
   に対して妊婦の年齢によって特定された一連のカットオ
   フレベルを決める段階と、アッセイの行なわれる各変量
   の特定の濃度と特定の妊婦年齢とに対して、陽性結果を
   示すダウン症候群妊娠の率と、陽性結果を示す正常な妊
   娠の率とを決定する段階と、アッセイの行なわれる各変
   量の特定の濃度と特定の妊婦年齢とに対して陽性結果を
   示したダウン症候群妊娠の率と陽性結果を示した正常妊
   娠の率とを関連付ける表を作成する段階と、未知の妊婦
   血清サンプルにおいて変量であるｈＣＧ、非共役エスト
   リオル、及びアルフアフエトプロテインのうちの１つあ
   るいは複数と共に変量であるＳＯＤ−１、あるいはＳＯ
   Ｄ−１とヘモグロビンの濃度を測定する段階と、前記表
   から未知のサンプルがトリソミ２１ダウン症候群を示し
   ている確率を決定する段階とを有し、前記アッセイを行
   なう段階の血清サンプルのあるものは胎児のダウン症候
   群に対して陽性であることがわかっており、またあるも
   のは陰性であることがわかつている胎児のトリソミ２１
   の確度を検知する方法。 （３４）前記トリソミ２１ダウン症候群の妊娠率が２０
   ％から８０％まで５％ずつ増大する形で陽性の結果にな
   るように、前記アッセイの行なわれる変量の特定の濃度
   が調節される特許請求の範囲第３３項記載の胎児のトリ
   ソミ２１の確度を検知する方法。 （３５）前記アッセイの行なわれる変量が、ＳＯＤ−１
   、ヘモグロビン、アルフアフエトプロテイン、ｈＣＧ及
   び非共役エストリオルである特許請求の範囲第３３項記
   載の胎児のトリソミ２１の確度を検知する方法。 （３６）前記アッセイの行なわれる変量が、ＳＯＤ−１
   、アルフアフエトプロテイン、ｈＣＧ及び非共役エスト
   リオルである特許請求の範囲第３３項記載の胎児のトリ
   ソミ２１の確度を検知する方法。 （３７）胎児のトリソミ２１ダウン症候群のスクリーニ
   ングにおける別の変量としての胎児の大腿骨長を測定し
   、その大腿骨長が中央値以下であるかどうか判定する段
   階をさらに有する特許請求の範囲第３３項記載の胎児の
   トリソミ２１の確度を検知する方法。