JPH0266452A - 体液試料の透明化方法およびそれに用いる透明化剤 - Google Patents
体液試料の透明化方法およびそれに用いる透明化剤Info
- Publication number
- JPH0266452A JPH0266452A JP21632188A JP21632188A JPH0266452A JP H0266452 A JPH0266452 A JP H0266452A JP 21632188 A JP21632188 A JP 21632188A JP 21632188 A JP21632188 A JP 21632188A JP H0266452 A JPH0266452 A JP H0266452A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- body fluid
- fluid sample
- sample
- alcohol
- clearing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 title claims abstract description 23
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 title claims abstract description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 24
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000008395 clarifying agent Substances 0.000 claims description 9
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 claims description 3
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000005352 clarification Methods 0.000 claims 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 12
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 abstract description 8
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 6
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 3
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 abstract description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 abstract 2
- 239000002585 base Substances 0.000 abstract 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 abstract 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N isobutanol Chemical compound CC(C)CO ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002960 lipid emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 2
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 102100033806 Alpha-protein kinase 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710082399 Alpha-protein kinase 3 Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000001268 chyle Anatomy 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野］
本発明は体液試料の透明化方法およびそれに用いる透明
化剤に関する。
化剤に関する。
体液試料、就中、血清または血漿試料中の成分を吸光度
法あるいは発色法を用いて定量する際に試料が蛋白質や
脂肪で濁っている場合は測定に誤差を生じたり、測定不
能であったりする。本発明の方法および試薬はこのよう
な試料に好適に使用される。
法あるいは発色法を用いて定量する際に試料が蛋白質や
脂肪で濁っている場合は測定に誤差を生じたり、測定不
能であったりする。本発明の方法および試薬はこのよう
な試料に好適に使用される。
［従来の技術およびその問題点］
体液試料が蛋白質や脂肪成分で混濁している場合、従来
、食塩等による塩析法やクロロホルム等による抽出法で
透明化していた。しかしながら塩析法によっては脂肪分
を除去することは困難であり、また抽出法によっては蛋
白質を除去することができない。
、食塩等による塩析法やクロロホルム等による抽出法で
透明化していた。しかしながら塩析法によっては脂肪分
を除去することは困難であり、また抽出法によっては蛋
白質を除去することができない。
本発明は体液試料を簡便に透明化する方法およびそれに
使用する試薬を提供することを目的とする。
使用する試薬を提供することを目的とする。
［問題点を解決するための手段］
上記目的は下に示す本発明によって達成される。
１）体液試料にアルコールを加えて試料中に分散してい
る蛋白質を沈澱させ、脂肪を可溶化し、次いで生成した
沈澱を除去することを特徴とする体液試料の透明化方法
。
る蛋白質を沈澱させ、脂肪を可溶化し、次いで生成した
沈澱を除去することを特徴とする体液試料の透明化方法
。
２）アルコールを主成分として含有する１項記載の方法
に用いる体液試料の透明化剤。
に用いる体液試料の透明化剤。
３）さらにｐＨ調整剤を含んでなる２項記載の透明化剤
。
。
本発明の方法は体液試料にアルコールを加えて撹拌し、
生成する沈澱を遠心分離等によって除去することによっ
て容易に実施される。
生成する沈澱を遠心分離等によって除去することによっ
て容易に実施される。
本発明方法で透明化される体液試料は、ヒトまたは動物
から採取された体液、就中、血清または血漿である。特
に脂肪輸液を投与されたヒトまたは動物から採取された
血清または血漿は多量の脂肪で乳びしており、従来の方
法で透明化することは困難であるが、本発明の方法によ
ればこれを容易に透明化することができる。
から採取された体液、就中、血清または血漿である。特
に脂肪輸液を投与されたヒトまたは動物から採取された
血清または血漿は多量の脂肪で乳びしており、従来の方
法で透明化することは困難であるが、本発明の方法によ
ればこれを容易に透明化することができる。
アルコールとしては、メタノール、エタノール、ｐｉ（
調整剤としては、塩酸、リン酸、酢酸などの有機酸およ
び無機酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の塩基
性物質を単独または混合して用いることができ、その他
酢酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、ＳＤＳ緩衝剤などの緩衝剤
が用いられる。
調整剤としては、塩酸、リン酸、酢酸などの有機酸およ
び無機酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の塩基
性物質を単独または混合して用いることができ、その他
酢酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、ＳＤＳ緩衝剤などの緩衝剤
が用いられる。
ｎ−プロパツール、イソプロパツール、ｎ−ブタノール
、イソブタノール、ｔ−ブタノール等低級アルコールを
使用することができる。アルコールの添加量は、濁りの
程度、即ち試料中に含有される蛋白質や脂肪の量あるい
はアルコールの分子量によって適宜選択されるが、エタ
ノールであればタンパクの同時除去を目的とした場合に
は、最終濃度６０〜１００％、タンパクの除去を目的と
しない場合には４０〜６０％の濃度を使用する。
、イソブタノール、ｔ−ブタノール等低級アルコールを
使用することができる。アルコールの添加量は、濁りの
程度、即ち試料中に含有される蛋白質や脂肪の量あるい
はアルコールの分子量によって適宜選択されるが、エタ
ノールであればタンパクの同時除去を目的とした場合に
は、最終濃度６０〜１００％、タンパクの除去を目的と
しない場合には４０〜６０％の濃度を使用する。
本発明の方法を実施するに際しては、アルコールを主成
分とする透明化剤を使用するのが便利である。透明化剤
は本質的に上述した低級アルコールからなり、所望によ
りｐＨ調整剤や発色試薬、安定剤等を加えることもでき
る。
分とする透明化剤を使用するのが便利である。透明化剤
は本質的に上述した低級アルコールからなり、所望によ
りｐＨ調整剤や発色試薬、安定剤等を加えることもでき
る。
次に実施例をあげて本発明をさらに具体的に説明する。
［実 施 例コ
脂肪乳剤を輸液中のラットの腎機能検査に本発明の方法
を適用した。腎機能検査は、フェノールスルホフタレイ
ンのナトリウム塩が腎臓から特異的に排泄されるので、
その血中濃度、排泄速度を測定することにより行なわれ
る。本実施例において脂肪乳剤としてイントラポス＠）
（ミドリ十字社製）を用いた。
を適用した。腎機能検査は、フェノールスルホフタレイ
ンのナトリウム塩が腎臓から特異的に排泄されるので、
その血中濃度、排泄速度を測定することにより行なわれ
る。本実施例において脂肪乳剤としてイントラポス＠）
（ミドリ十字社製）を用いた。
ラットにフェノールスルホフタレイン注射液（第一製薬
社製） ８０＋ｎｇ／ｋｇを静脈内に投与した。
社製） ８０＋ｎｇ／ｋｇを静脈内に投与した。
１５分後、血液を採取し、血液をクエン酸ナトリウムを
含む試験管に移し、８０００ｒｐｍで１０分間遠心分離
した。得られた血漿は脂肪分により白く乳びしていた。
含む試験管に移し、８０００ｒｐｍで１０分間遠心分離
した。得られた血漿は脂肪分により白く乳びしていた。
この血漿１ｍｌを透明化剤（１００％エタノール３．８
ｍｌとＩＮ水酸化ナトリウム０．２ｍｌの混合液）４ｍ
ｌに加え、遠心（３０００ｒｐｍ、 ５分間）した。
ｍｌとＩＮ水酸化ナトリウム０．２ｍｌの混合液）４ｍ
ｌに加え、遠心（３０００ｒｐｍ、 ５分間）した。
上清の吸光度を５６０ｎｍで測定し、検量線より濃度を
求め、この値を正常値と比較し、腎機能の指標とした。
求め、この値を正常値と比較し、腎機能の指標とした。
試料中のフェノールスルホフタレインナトリウム塩の濃
度は３０〜３５ｇ／ｍｌであった。
度は３０〜３５ｇ／ｍｌであった。
上記実施例では血漿を試料として用いたが血清を用いて
も同様の結果が得られた。
も同様の結果が得られた。
検量線の作成法
ラットにイントラボス４０＋ｎｇ／ｋｇ ｉ、ｖ、を投
与したのち採血し、血漿を得た。血漿を試験管８本に分
け、それぞれにフェノールスルホフタレインを最終濃度
が、２．４．６．８．１０．２０．８０＋ｎｇ／ｄ１２
になるように加えた。この血漿１ｍｌをエタノール３．
８ｍｌと水酸化ナトリウム０．２ｍｌの混合液に加え、
遠心分離した。上清の吸光度（５６０ｎｎ＋）を測定し
、検量線を求めた。結果を図にト→線で示す。同様にし
て生理食塩水４０ｍｇ／ｋｇ ｉ、ｖ、を投与して検量
線を求めた。結果を図に）−→線で示す。
与したのち採血し、血漿を得た。血漿を試験管８本に分
け、それぞれにフェノールスルホフタレインを最終濃度
が、２．４．６．８．１０．２０．８０＋ｎｇ／ｄ１２
になるように加えた。この血漿１ｍｌをエタノール３．
８ｍｌと水酸化ナトリウム０．２ｍｌの混合液に加え、
遠心分離した。上清の吸光度（５６０ｎｎ＋）を測定し
、検量線を求めた。結果を図にト→線で示す。同様にし
て生理食塩水４０ｍｇ／ｋｇ ｉ、ｖ、を投与して検量
線を求めた。結果を図に）−→線で示す。
［発明の効果］
体液試料にアルコールを加える本発明の方法により簡便
に体液を透明化することができる。体液試料が蛋白質や
脂肪分で濁っている場合には、試料中の成分を吸光度法
や発色法で定量することは困難であり、誤差を生じる。
に体液を透明化することができる。体液試料が蛋白質や
脂肪分で濁っている場合には、試料中の成分を吸光度法
や発色法で定量することは困難であり、誤差を生じる。
このような試料にアルコールを添加すると、脂肪分はア
ルコールに溶け、蛋白質は変性して沈澱するので、生成
した沈澱を遠心等により除去することにより試料を透明
化することができ、吸光度法や発色法によって試料中の
成分を正確に定量することが可能となる。
ルコールに溶け、蛋白質は変性して沈澱するので、生成
した沈澱を遠心等により除去することにより試料を透明
化することができ、吸光度法や発色法によって試料中の
成分を正確に定量することが可能となる。
さらに、アルコールを主成分として含有し、所望により
ｐＨ安定剤や発色剤を含有する本発明の透明化剤を用い
ると簡便に上記体液試料の透明化方法を実施することが
できる。
ｐＨ安定剤や発色剤を含有する本発明の透明化剤を用い
ると簡便に上記体液試料の透明化方法を実施することが
できる。
図は実施例で作成された検量線を示すグラフである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）体液試料にアルコールを加えて試料中に分散してい
る蛋白質を沈澱させ、脂肪を可溶化し、次いで生成した
沈澱を除去することを特徴とする体液試料の透明化方法
。 ２）アルコールを主成分として含有する請求項１記載の
方法に用いる体液試料の透明化剤。 ３）さらにｐＨ調整剤を含んでなる請求項２記載の透明
化剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21632188A JPH0266452A (ja) | 1988-09-01 | 1988-09-01 | 体液試料の透明化方法およびそれに用いる透明化剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21632188A JPH0266452A (ja) | 1988-09-01 | 1988-09-01 | 体液試料の透明化方法およびそれに用いる透明化剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0266452A true JPH0266452A (ja) | 1990-03-06 |
Family
ID=16686698
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP21632188A Pending JPH0266452A (ja) | 1988-09-01 | 1988-09-01 | 体液試料の透明化方法およびそれに用いる透明化剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0266452A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04177169A (ja) * | 1990-11-09 | 1992-06-24 | Mitsubishi Materials Corp | 生体液中の金属自動分析装置 |
-
1988
- 1988-09-01 JP JP21632188A patent/JPH0266452A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04177169A (ja) * | 1990-11-09 | 1992-06-24 | Mitsubishi Materials Corp | 生体液中の金属自動分析装置 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Frings et al. | Improved determination of total serum lipids by the sulfo-phospho-vanillin reaction | |
| Berg | Spontaneous Nephrosis, with Proteinuria, Hyperglobulinemia, and Hypercholesterolemia in the Rat. | |
| Andersen et al. | Increased parathyroid hormone as a consequence of changed complex binding of plasma calcium in morbid obesity | |
| Odell et al. | Studies in kernicterus. II. The determinationof the saturation of serum albumin with bilirubin | |
| Chou et al. | In vitro perfusion of chinchilla thin limb segments: segmentation and osmotic water permeability | |
| Fulop et al. | Dialyzability, protein binding, and renal excretion of plasma conjugated bilirubin | |
| Flesch et al. | A Colorimetric Method for Determination of Sulfhydryl Groups in Tissue Homogenates by 1-(4-Ghloromercuriphenylazo)-Naphthol-2 | |
| JPS5815738B2 (ja) | ケツエキシリヨウノニゴリ オ ゲンズル ホウホウ | |
| Pirie | The criteria of purity used in the study of large molecules of biological origin | |
| Blix | Studies in diabetic lipemia | |
| Sölling | Polymeric forms of free light chains in serum from normal individuals and from patients with renal diseases | |
| BRODERSEN | Prevention of kernicterus, based on recent progress in bilirubin chemistry | |
| Axelsson et al. | Serum proteins in cadmium poisoned rabbits: with special reference to hemolytic anemia | |
| JPS58155361A (ja) | 改良ビリルビン検定 | |
| Anisimovich et al. | Spectrophotometric determination of proteins in biological fluids | |
| FISCHER et al. | Preparation, properties, and composition of Nereis vitellin, the yolk protein of the annelid, Nereis virens | |
| JPH0266452A (ja) | 体液試料の透明化方法およびそれに用いる透明化剤 | |
| Patterson et al. | Some biochemical aspects of clinical Johne’s disease in cattle | |
| Lauf et al. | Solubilization and structural integrity of the human red cell membrane | |
| Bailey | The proteins of electrical tissue | |
| US20130042671A1 (en) | Prognostic method | |
| Tan et al. | Determination of coumarin and umbelliferone mixtures in whole blood by spectrophotofluorometry | |
| Miquel et al. | Quantification of mucin in human gallbladder bile: a fast, specific, and reproducible method | |
| Chambers et al. | The adenosine triphosphate content of the unfertilized and fertilized eggs of Asterias forbesii and Strongylocentrotus droebachiensis | |
| Weissmann et al. | Turbidity produced by hexamminecobaltic chloride in serum of rabbits injected intravenously with papain. |