JPH0269665A - ポリペプチドを用いたｇｔｐ結合蛋白質の試薬 - Google Patents
ポリペプチドを用いたｇｔｐ結合蛋白質の試薬Info
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- JPH0269665A JPH0269665A JP22144688A JP22144688A JPH0269665A JP H0269665 A JPH0269665 A JP H0269665A JP 22144688 A JP22144688 A JP 22144688A JP 22144688 A JP22144688 A JP 22144688A JP H0269665 A JPH0269665 A JP H0269665A
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Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
（イ）産業の利用分野
本発明は生体におけるシグナル変換蛋白として注目を浴
びているＧＴＰ結合蛋白質の精製、操作、判定、機能検
査等に用いる試薬に関するものである。
びているＧＴＰ結合蛋白質の精製、操作、判定、機能検
査等に用いる試薬に関するものである。
（ロ）従来の技術
現在ＧＴＰ結合蛋白質として知られ、成程度構造及び機
能の解明が与えられているとされているものは、Ｇ４５
、Ｇ４１、Ｇ４０．０３９等の各蛍白質とトランスデユ
ーシン及び分子量２万から３万の小さなＧＴＰ結合蛋白
質である。
能の解明が与えられているとされているものは、Ｇ４５
、Ｇ４１、Ｇ４０．０３９等の各蛍白質とトランスデユ
ーシン及び分子量２万から３万の小さなＧＴＰ結合蛋白
質である。
これらのＧＴＰ結合蛋白質はいずれも天然に存在するも
のを分離精製する方法が極めて複雑で面倒なため、その
種類を特定すること自体が困難である。また、その性格
、機能を確認、特定する手段がなく、偶々、偶然の機会
に分離特定された上記のＧＴＰ結合蛋白質が知られると
ころとなってるに過ぎない （ハ）発明が解決しようとする課題 ＧＴＰ結合蛋白質の特定とその機能の解明は、その分離
精製が簡略に行なわれる手段の開発が前提条件であり、
更に、その個々の性格、機能を明らかにする適確な手段
、方法が開発されれば、ＧＴＰ結合蛋白質の分類、種類
の特定が急速に進展することは確実である。ＧＴＰ結合
蛋白質の精製と機能の解明が細胞の増殖図、発癌原因、
老人性その他の痴呆症発生図など、生命医学にとって極
めて有益な生理、病理の解明を可能にするものであるこ
とは説明するまでもないところである。
のを分離精製する方法が極めて複雑で面倒なため、その
種類を特定すること自体が困難である。また、その性格
、機能を確認、特定する手段がなく、偶々、偶然の機会
に分離特定された上記のＧＴＰ結合蛋白質が知られると
ころとなってるに過ぎない （ハ）発明が解決しようとする課題 ＧＴＰ結合蛋白質の特定とその機能の解明は、その分離
精製が簡略に行なわれる手段の開発が前提条件であり、
更に、その個々の性格、機能を明らかにする適確な手段
、方法が開発されれば、ＧＴＰ結合蛋白質の分類、種類
の特定が急速に進展することは確実である。ＧＴＰ結合
蛋白質の精製と機能の解明が細胞の増殖図、発癌原因、
老人性その他の痴呆症発生図など、生命医学にとって極
めて有益な生理、病理の解明を可能にするものであるこ
とは説明するまでもないところである。
（ニ）課題を解決するための手段
本発明は上記の課題を適確に解決する手段として、ＧＴ
Ｐ結合蛋白質を確実且つ適確に操作する試薬の開発によ
ったものである。また、これを試薬として活用する一方
、発癌素子、痴呆症発生因子の生成に対する臨床医薬と
しての活用を企図するものである。
Ｐ結合蛋白質を確実且つ適確に操作する試薬の開発によ
ったものである。また、これを試薬として活用する一方
、発癌素子、痴呆症発生因子の生成に対する臨床医薬と
しての活用を企図するものである。
本出願人は永年にわたる研究と繰り返し行なった実験の
結果、細胞膜受容体の一部を構成するポリペプチドがＧ
ＴＰ結合蛋白質と接触、或いは結合してＧＴＰ結合蛋白
質活性囚を構成することを発見しそのペプチドの蛋白構
成の解明と法則性の把握に成功したものである。
結果、細胞膜受容体の一部を構成するポリペプチドがＧ
ＴＰ結合蛋白質と接触、或いは結合してＧＴＰ結合蛋白
質活性囚を構成することを発見しそのペプチドの蛋白構
成の解明と法則性の把握に成功したものである。
（ホ）作用
本発明による試薬構成はＮ端からｒＲＧＥＫＡＲＫＪ
（但し、ＫもＲは相互に置換可能）の順で連結する一
次配列のアミノ酸ペプチドを基本とし、このポリペプチ
ドは非特異的にＧＴＰ結合蛋白質を選択して結合し活性
化するが、これのＣ端にポリペプチドｒＧＫＪを連結さ
せると更に活性化作用が強力となる。
（但し、ＫもＲは相互に置換可能）の順で連結する一
次配列のアミノ酸ペプチドを基本とし、このポリペプチ
ドは非特異的にＧＴＰ結合蛋白質を選択して結合し活性
化するが、これのＣ端にポリペプチドｒＧＫＪを連結さ
せると更に活性化作用が強力となる。
更にＮ端にポリペプチドｒＲＶＧＬＶＪを連繋させると
主としてＧ４０蛋白質を選択するので、この性質が選択
されるＧＴＰ結合蛋白質の精製作用を担うものである。
主としてＧ４０蛋白質を選択するので、この性質が選択
されるＧＴＰ結合蛋白質の精製作用を担うものである。
また、ポリペプチドｒＲＥＤＤＪのＮ端連繋により、ビ
ーズ等の精製支持体との結合が容易となる。シグナル因
子が細胞に接触すると細胞膜に存在する受容体によって
シグナル情報が細胞内に伝達され、シグナル情報に応じ
た出力を細胞に与えるのであるが、そのシグナル情報伝
達を本発明による試薬が担うものである。
ーズ等の精製支持体との結合が容易となる。シグナル因
子が細胞に接触すると細胞膜に存在する受容体によって
シグナル情報が細胞内に伝達され、シグナル情報に応じ
た出力を細胞に与えるのであるが、そのシグナル情報伝
達を本発明による試薬が担うものである。
本発明の試薬はその際受容体の細胞内に存在する蛋白部
分と基本的な配列構成が同一であり、細胞内に存在する
ＧＴＰ結合蛋白質を活性化する作用がある。。ＧＴＰ結
合蛋白質の活性化による出力は、その種類によって千差
万別であり、その種類構成によって生体活動の複雑な対
応が行なわれて行くものであるが、本発明は直接ペプチ
ドを特定種類のＧＴＰ結合蛋白質に接触させて活性態様
や抑制状況を検査確認することができる。また逆に細胞
や細胞膜にペプチドを接触させ、その出力結果から特定
ＧＴＰ結合蛋白質の存在を推認したり、出力メカニズム
を解明する試薬として、更には細胞増殖を促進したり、
抑制したりすることにより、発癌作用を阻止する制癌剤
や痴呆症治療薬としても活用の余地のあるものである。
分と基本的な配列構成が同一であり、細胞内に存在する
ＧＴＰ結合蛋白質を活性化する作用がある。。ＧＴＰ結
合蛋白質の活性化による出力は、その種類によって千差
万別であり、その種類構成によって生体活動の複雑な対
応が行なわれて行くものであるが、本発明は直接ペプチ
ドを特定種類のＧＴＰ結合蛋白質に接触させて活性態様
や抑制状況を検査確認することができる。また逆に細胞
や細胞膜にペプチドを接触させ、その出力結果から特定
ＧＴＰ結合蛋白質の存在を推認したり、出力メカニズム
を解明する試薬として、更には細胞増殖を促進したり、
抑制したりすることにより、発癌作用を阻止する制癌剤
や痴呆症治療薬としても活用の余地のあるものである。
（へ）実施例
以下図表に従って本発明の詳細な説明する。
第１図配列表に記載されている符号はそれぞれ第２凹路
号表記載のアミノ酸を表示するもので左側をＮ端、右側
をＣ端として一次配列されたペプチドを示すものである
。基本形態はｒＲＧＥＫＡＲＫＪの一次配列によるポリ
ペプチドで特異的にＧＴＰ結合蛋白質と結合し活性化す
る。Ｃ端に連鎖アミノ酸ｒＧＫＪを連結すると活性化作
用が強化され、更にＮ端にｒＲＶＧＬＶ」を連鎖させる
と主としてＧ４０を結合することを確認した。配列の基
本的変化は第１図の配列表のとおりであり、精製蛋白の
種類、被験目的等に応じてこれの試薬構成を適宜組合せ
て行なう。
号表記載のアミノ酸を表示するもので左側をＮ端、右側
をＣ端として一次配列されたペプチドを示すものである
。基本形態はｒＲＧＥＫＡＲＫＪの一次配列によるポリ
ペプチドで特異的にＧＴＰ結合蛋白質と結合し活性化す
る。Ｃ端に連鎖アミノ酸ｒＧＫＪを連結すると活性化作
用が強化され、更にＮ端にｒＲＶＧＬＶ」を連鎖させる
と主としてＧ４０を結合することを確認した。配列の基
本的変化は第１図の配列表のとおりであり、精製蛋白の
種類、被験目的等に応じてこれの試薬構成を適宜組合せ
て行なう。
本発明による試薬構成の特徴は、連鎖アミノ酸残基の個
数が３３個以下であり、その中に４個以上の塩基性アミ
ノ酸残基が含まれ、疎水性アミノ酸が全体として２０％
以上を占めていることが条件となっている。従って、実
施例として示した第１図配列表以外の構成でもこの条件
を満たすものであればＧＴＰ結合蛋白質に対して何らか
の反応囚を持ち試薬として用いることが可能である。例
えば基本配列をＲＤＩＹＥＴＤ、ＹＹＲＫＧＧＫにとる
と出力抑制作用が生じ、ＲＦＶ ＨＲＤ Ｌ Ａ Ａ
ＲＮ ＣＭ Ｖ Ａ Ｅ Ｄ Ｆ Ｔ Ｖ Ｋの配列は
ＯＨ白無修飾結合となる。蛋白結合はペプチドシンセサ
イザーなどを用いて行われるが、本発明のポリペプチド
として最も長い結合はＨＥＡＣＰＶＲＡＬＬＡＳＷＧＡ
ＱＤＳＡＴＬＤＡＬＬＡＡＬＲＲＩ ＱＲである。
数が３３個以下であり、その中に４個以上の塩基性アミ
ノ酸残基が含まれ、疎水性アミノ酸が全体として２０％
以上を占めていることが条件となっている。従って、実
施例として示した第１図配列表以外の構成でもこの条件
を満たすものであればＧＴＰ結合蛋白質に対して何らか
の反応囚を持ち試薬として用いることが可能である。例
えば基本配列をＲＤＩＹＥＴＤ、ＹＹＲＫＧＧＫにとる
と出力抑制作用が生じ、ＲＦＶ ＨＲＤ Ｌ Ａ Ａ
ＲＮ ＣＭ Ｖ Ａ Ｅ Ｄ Ｆ Ｔ Ｖ Ｋの配列は
ＯＨ白無修飾結合となる。蛋白結合はペプチドシンセサ
イザーなどを用いて行われるが、本発明のポリペプチド
として最も長い結合はＨＥＡＣＰＶＲＡＬＬＡＳＷＧＡ
ＱＤＳＡＴＬＤＡＬＬＡＡＬＲＲＩ ＱＲである。
更にアルツハイマーなど痴呆症の発生因をＨＨＧＶＶＥ
ＶＤＡＡＶＴＰＥＥＲＨＬＳＫの配列構成を具備する受
容体蛋白が担うことが発見されたので、本発明による試
薬の活用が期待されるところである 本発明による試薬は粉体としても、溶液としても存在し
得るもので、目的に応じて取扱い易い形態に製剤するこ
とが可能である。実験態様としても、アフェニティ精製
をセファローズなどのイオン交換樹脂ビーズを用いて節
単に行なうことができる。例えばビーズに本発明による
試薬を付着させ、臓器を擦りつぶしたホモジェネートを
カラムに通過させるだけで特定のＧＴＰ結合蛋白質を収
集することができる。
ＶＤＡＡＶＴＰＥＥＲＨＬＳＫの配列構成を具備する受
容体蛋白が担うことが発見されたので、本発明による試
薬の活用が期待されるところである 本発明による試薬は粉体としても、溶液としても存在し
得るもので、目的に応じて取扱い易い形態に製剤するこ
とが可能である。実験態様としても、アフェニティ精製
をセファローズなどのイオン交換樹脂ビーズを用いて節
単に行なうことができる。例えばビーズに本発明による
試薬を付着させ、臓器を擦りつぶしたホモジェネートを
カラムに通過させるだけで特定のＧＴＰ結合蛋白質を収
集することができる。
（ト）発明の効果
本発明は以上のように構成したので、これまで困難であ
ったＧＴＰ結合蛋白質の収集、精製が容易となりその複
雑な性格分岐の解明を可能にすると共に、ＧＴＰ結合蛋
白質活性化現象と抑制現象の解明と活用により、細胞増
殖、制癌、痴呆症の発生防止など医療面への応用にも一
歩を進める極めて有為な発明である。
ったＧＴＰ結合蛋白質の収集、精製が容易となりその複
雑な性格分岐の解明を可能にすると共に、ＧＴＰ結合蛋
白質活性化現象と抑制現象の解明と活用により、細胞増
殖、制癌、痴呆症の発生防止など医療面への応用にも一
歩を進める極めて有為な発明である。
図は本発明の詳細な説明するもので、第１図は本発明に
よる試薬の一次配列を示す配列表、第２図は略号の名称
を示す略号表である。
よる試薬の一次配列を示す配列表、第２図は略号の名称
を示す略号表である。
Claims (1)
- 全体として３３個以下のアミノ酸残基から成り、４個以
上の塩基性アミノ酸残基が含まれ、疎水性アミノ酸残基
が２０％以上を占めるポリペプチドを用いたＧＴＰ結合
蛋白質の試薬
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22144688A JPH0269665A (ja) | 1988-09-06 | 1988-09-06 | ポリペプチドを用いたｇｔｐ結合蛋白質の試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22144688A JPH0269665A (ja) | 1988-09-06 | 1988-09-06 | ポリペプチドを用いたｇｔｐ結合蛋白質の試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0269665A true JPH0269665A (ja) | 1990-03-08 |
Family
ID=16766865
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22144688A Pending JPH0269665A (ja) | 1988-09-06 | 1988-09-06 | ポリペプチドを用いたｇｔｐ結合蛋白質の試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0269665A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5544875A (en) * | 1994-01-17 | 1996-08-13 | Fuji Xerox Co., Ltd. | Paper stacking apparatus |
| WO1999045944A1 (en) * | 1998-03-12 | 1999-09-16 | The Burnham Institute | Proapoptotic peptides, dependence polypeptides and methods of use |
| US9562072B2 (en) | 2011-12-27 | 2017-02-07 | The J. David Gladstone Institutes | Compositions and methods for regulating glucose metabolism |
-
1988
- 1988-09-06 JP JP22144688A patent/JPH0269665A/ja active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5544875A (en) * | 1994-01-17 | 1996-08-13 | Fuji Xerox Co., Ltd. | Paper stacking apparatus |
| WO1999045944A1 (en) * | 1998-03-12 | 1999-09-16 | The Burnham Institute | Proapoptotic peptides, dependence polypeptides and methods of use |
| US6235872B1 (en) * | 1998-03-12 | 2001-05-22 | The Burnham Institute | Proapoptotic peptides dependence polypeptides and methods of use |
| US9562072B2 (en) | 2011-12-27 | 2017-02-07 | The J. David Gladstone Institutes | Compositions and methods for regulating glucose metabolism |
| US10247735B2 (en) | 2011-12-27 | 2019-04-02 | The J. David Gladstone Institutes | Compositions and methods for regulating glucose metabolism |
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