JPH0283335A - 血栓溶解剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ この発明は、患者の血中フィブリンクロットの治療的溶
解に関するものである。

［従来の技術および発明が解決しようとする課題］数種
の天然酵素はフィブリンクロットの溶解に適しているこ
とか知られており、生命を行かすクロットが形成された
患者特に心臓病患者におけるクロットを治療的に溶解す
るのに使用されてきた。

これらの酵素の内の２つはプロウロキナーゼ（ｐｒ。

ＵＫ）およびウロキナーゼ（ＵＫ）である。ウロキナー
ゼはインビボで単鎖であり、蛋白分解開裂によって二重
鎖形態（ＵＫ）に変わる酵素前駆体（ｐｒｏ−ＵＫ）と
して合成されると信じられている。

プロウロキナーゼの別名は単鎖尿プラスミノーケン活性
化因子（ｓｕｃ　−Ｐ　Ａ　）である。

プロウロキナーゼは、決定的な心筋壊死を制限するかま
たは妨げるために初期心筋梗塞症における血栓溶解に使
用し得る。しかしなから、プロウロキナーゼのみを使用
した場合、クロット溶解は、溶解かほとんどかまたは全
（起らない遅滞期の後のみにおこり、よい結果を得るた
めには比較的高い投与量、約６，５００，０００１　Ｕ
が必要となる。

そのままかまたは二重鎖形態（ＵＫ）に変換した後のプ
ロウロキナーゼはプラスミノ−ケン活性化因子である。

すなわち、それは不活性プラスミノ−ケンをプラスミン
に変換するが、プラスミンは血中クロットの主要構成物
であるフィブリンを解体する蛋白分解酵素である。

ひとプラズマ中に存在する天然形のプラスミノ−ケンは
、アミノ末端にグルタミン酸残基を有する９２ｋＤの単
鎖蛋白である（ｇｌｕ−プラスミノ−ケン）。この天然
形は、プラスミンの限定蛋白分解作用によって、８ｋＤ
以下のペプチドおよびアミノ末端にリジン残基を露出さ
せた低分子量形に変換し得る（ｌｙｓ−プラスミノーゲ
ンまたはｌｙｓ−ｐＩｇ）。１ｌｙｓ−プラスミノーゲ
ンは、ｇｕｌ−プラスミノーゲンより高いフィブリンに
対する親和性を有し、二重鎖ウロキナーゼによってより
迅速に活性化する。１ｌｙｓ−プラスミノーゲンかｇｕ
ｔ−プラスミノ−ケンよりもさらに効果的にプロウロキ
ナーゼによって活性化されることが、最近分がった。

［発明の記載１ １ｙｓ−プラスミノーゲンが存在する場＆、インビトロ
モデルにおけるプロウロキナーゼによって、血中クロッ
トがさらに迅速に溶解されるのに対し、ｇｕｌ−プラス
ミノーゲンは効果かないことか分かった。ヘパリンまた
はコンドロイチン硫酸のような硫酸多糖の存在はクロッ
ト溶解において有益な効果を有し得る。

したがって、この発明は、処置を必要とする患者ニオイ
て、有効量の１ｌｙｓ−プラスミノーゲンおよびプロウ
ロキナーゼを併用投与することがら成る血中フィブリン
クロットを溶解する方法を提供する。

別法として、この発明は、自由なまたは固定の組み合わ
せでのプロウロキナーゼと一緒になった１ｙｓ−フラス
ミノーケンの血栓溶解剤としての用途を提供する。さら
に別法しては、この発明は、プロウロキナーゼの血栓溶
解剤効果の薬効を増加する薬剤を製造するためのｌｙｓ
−プラスミノーゲンの用途を提供する。

プロウロキナーゼは、最初ヨーロッパ特許第４０２３８
号に記載されたように尿から、または天然細胞系または
組換え体ＤＮＡ技術によって転換したセルラインの培養
物から人手し得、さらに糖付加の程度または他の点で異
なる形態で入手し得る。

この発明で使用するプロウロキナーゼは、通常には、ヨ
ーロッパ特許出願第９２１８２号の第八図のプロウロキ
ナーゼとして示されたようなアミノ酸配列を有する（但
し−２０から−ｌまでの導入配列を無視する）ひとプロ
ウロキナーゼである。

しかしながら、この発明で使用するプロウロキナーゼは
、基本的に同様の生物学的活性を保持する限り、１つま
たはそれ以上のアミノ酸残基における置換、欠失または
付加によってこの構造から変化し得る。従って、たとえ
ば、非ひとプロウロキナーゼまたはＰＣＴ特許出願ＷＯ
８６１０４３５１号に記述されたような化合物（これは
、ｌｙｓ−１３５および／またはｐｈｅ−１５７で置換
された異なったアミノ酸を持つ）、またはヨーロッパ特
許出願第２００４５１号に記述したような化合物（これ
は、ｐｈｅ−１５７またはｌｙｓ−１５８に置換または
欠失を有している）は、生物学的活性を保持する限り、
「プロウロキナーゼ」の定義の範囲内にある。さらに、
例えばリジケンらによって［スロンボシス・リサーチ（
Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ　　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）４２巻、
７４９〜７６０頁および７６１〜７６８頁コで記述され
たようなプロウロキナーゼの切断形は生物学的活性が保
持されている限り「プロウロキナーゼ」の定義に含まれ
る。上記分子は、直鎖ＬＭＷ−ＵＫに対応する１ｙｓ−
１３６に、または他の適当な部位例えばａｌａ−１３２
，１ｙｓ−１４４およびｇｌｕ−１５０にそれらのアミ
ノ末端を有し得る。

付加アミノ酸、例えば開始位にメチオニンを有するプロ
ウロキナーゼも、活性であれば包含される。

プラスミン阻害剤の不存在下にひと血しょうまたはコー
ン画分■から製造したプラスミノーゲンは、種々の量の
ｇｌｕ−および１ｙｓ−プラスミノーゲン（しかし主に
ｌｙｓ−ｐｌｇ）を含む。全てｌｙｓ−ｐｉｇに変換す
るのは、クレイズら［スロンボシス・リサーチ（Ｔｈｒ
ｏｍｂ、Ｒｅｓ、）３巻、３１５頁（１９７３年）」で
記述されているようなプラスミンと共にまたはエラスタ
ーゼと共にインキュベーションすることによって達成さ
れる。ｌｙｓ−ｐｌｇはまた、例えばカビ・コーポレー
ションから商業的に入手し得る。

この発明から特に恩恵を受ける患者は、ＤＶＴまたは肺
塞栓症を有する患者、クロットの結果生じる心筋梗塞に
最近罹った患者および末梢虚血で起こる動脈血栓を有す
る患者を含む。プロウロキナーゼおよびｌｙｓ−ｐｉｇ
を、別々にまたは一緒に医薬上許容し得る担体物質例え
ば生理食塩水と共に混合し、その後非経口的に、静脈内
かまたは冒された動脈または心臓に注射することによっ
て投与される。好ましい静脈投与は、注入によるが、ボ
ーラス注射によるが、またはこれらの組合せたものであ
り得る。

患者はヘパリン、例えば５０００ＩＵのヘパリンのボー
ラス注射も受け、場合によりＰＵＫまたはｌｙｓ−ｐｌ
ｇを投与後、所望によって１０００ＩＵ／時のヘパリン
を注入によって投与するのが好ましい。またヘパリンは
、プロウロキナーゼまたはｌｙｓ−ｐｌｇを伴った混合
物、またはそれら３種全ての成分の混合物の形態で与え
られ得る。ヘパリンは他の硫酸多糖類、例えばコンドロ
イチン硫酸Ｋに置換え得る。

この発明による方法で使用するｌｙｓ−ｐｉｇの好まし
い量は、３０ｍｇまでであり、好ましくは、１５〜３０
ｍｇである。使用するプロウロキナーゼの好ましい量は
、６５００，０００ＩＵ以下、さらに好ましくは２，０
００，０００ＩＵから４．０００．０００　■Ｕまでで
ある。

ｌｙｓ−ｐｌｇの上記の量は、プロウロキナーゼの投与
の前にボーラス注射として投与した場合、最も効果的で
ある。しかしながら、投与の容易さの点から単一注射ま
たは輸液、好ましくは単一ボ−ラス注射として、プロウ
ロキナーゼおよび１ｙｓ−ｐｉｇの混合物を投与するこ
とが好ましい。

したがって、この発明の別の目的として、医薬上許容し
得る希釈剤または担体と一緒にｌｙｓ−ｐｇおよびプロ
ウロキナーゼの混合物、または純粋凍結乾燥形態でのｌ
ｙｓ−ｐｉｇおよびプロウロキナーゼの混合物から成る
医薬組成物を提供する。

この発明による成分は、併用投与の指示と共にｌｙｓ−
ｐｌｇおよびプロウロキナーゼの分割単位用量を含む単
独パッケージのようなツインパンクの形態で存在し得る
。

プロウロキナーゼの量は、ここでは重ｆｆｉ（ｍｇ）ま
たは標準フィブリンプレートで分析したウロキナーゼの
国際標準品に基づく国際単位（［Ｕ）のいずれかによっ
て表現されている。［ブラックマンのフィブリノリンス
（Ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ）　、ア・スタンタライズ
ド・フィブリン・プレート・メソッド・アンド・ア・フ
ィブリ／リテソク・アッセイ・オブ・プラスミノ−ケン
（Ａ、５ｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄ　Ｆｉｂｒｉｎ　Ｐｌ
ａｔｅ　Ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　Ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔ
ｉｃ　Ａｓ５ａｙ　ｏｆ　Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）、
ンエルテマ・アンド・ホルケマ・ナームローズ・ペンノ
ノトシャップ、アムステルダム（１９６７年）、１〜２
４頁。］プロウロキナーゼはグーレウィノチら、ジャー
ナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（Ｊ
、Ｃｌ１ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、）（１９８４年）、７３巻
、１７３１〜１７３９頁で記述したようなプラスミンに
よる活性化の後分析する。プロウロキナーゼは約１００
，０００　ＴＵ／ｍｇの比活性を有スル。

この発明における組成物中のｌｙｓ−ｐ１ｇ対プロウロ
キナーゼの重量比は、１１３から３：２までか好ましく
、３：８から３：２、特にｌ：２から１．１がさらに好
ましい。組成物は単位用量形態で、例えばそれぞれ１５
〜３０ｍｇのｌｙｓ−ｐｉｇおよび２，０００，０００
〜４，０００，０００ＩＵのプロウロキナーゼを含有す
る注射用のバイアルまたは輸液用のビンで製造するのが
好ましい。

この発明の別の目的によると、ｌｙｓ−ｐｌｇのボーラ
ス注射およびプロウロキナーゼのボーラス注射の後プロ
ウロキナーゼの輸液注入を患者に与える。

ボーラスで与えられるｌｙｓ−ｐｉｇの量は、上記に記
載されたように、すなわち好ましくは１５〜３０ｍｇで
ある。ボーラスで与えられるプロウロキナーゼの量は好
ましくは３００，０００〜１．００００００ＩＵ、さら
に好ましくは４００，０００〜６００．０００ＩＵ、特
に５００，０００ＩＵである。これらの量は、２分割ボ
ーラス注射として段与し、任意の順序でまたは２筒／リ
ンダ−から、またはこの発明の別の組成物を意味するｌ
ｙｓ−ｐｌｇおよびプロウロキナーゼの混合物の単独ボ
ーラス注射として与え得る。

この組成物中でのｌｙｓ−ｐ１ｇ対プロウロキナーゼの
重量比は、好ましくは３：２から１０：ｌ、さらに好ま
しくは２．５：１から７．５：ｌである。

しかしなから、プロウロキナーゼを与える前に＋ｙｓ−
ｐ１ｇを投与するのか好ましい。

ボーラスのｌｙｓ−ｐｉｇおよび／またはプロウロキナ
ーゼと一緒にヘパリンを投与することも望ましい場合が
ある。上記量のｌｙｓ−ｐｌｇ、プロウロキナーゼまた
はｌｙｓ−ｐ１ｇ／プロウロキナーゼ混合物に加えるべ
きヘパリンの量は、１０００から１０゜０００ＩＵまで
が好ましく、さらに好ましくは約５０００ＩＵである。

二次的輸液として与えられるプロウロキナーゼの量は、
約１００．ｏｏｏｌＵ／分であるのか好ましく、約４０
分間で与え得る、すなわち総量４０００．０００ＩＵか
好ましい。多くの場合、閉塞された動脈の開放は３０分
以内またはそれ以下で起こり得、さらに動脈開放か例え
ば冠血管造影法によって確認されれば、この時以降輸液
注入を中止し得る。

この発明はこの目的で用いるものとして、注射用のｌｙ
ｓ−ｐｉｇの単位用量、注射用のプロウロキナーゼの単
位用量および輸液用のプロウロキナーゼの単位用量から
成るキットを提供するものである。

キットは、投与の指示と共に単独パッケージで存在する
のか好ましい。投与の単位用量形態は、純水または生理
食塩水中にｌｙｓ−ｐｉｇまたはプロウロキナーゼを含
有する滅菌溶液であり得るが、または注射の前に滅菌水
または生理食塩水を加えるべき凍結乾燥または冷凍乾燥
固体形態であり得る。

輸液用のプロウロキナーゼの単位用量形態は、輸液用の
生理食塩水または他の滅菌液体溶媒の溶液であるが、ま
たは輸液溶液を製造し得る凍結乾燥または冷凍乾燥固体
または液体濃厚物であり得る。

注射または輸液のための溶液は、池の成分、例えばＮａ
、ＨＰＯ，／ＮａＨ，ＰＯ４のような緩衝塩および防腐
剤、例えばマンニトールおよびひとアルブミンを含み得
、さらにこれらの成分は凍結乾燥または冷凍乾燥固体形
態でも存在し得る。

注射用の単位用量形態中のｌｙｓ−ｐｌｇおよびプロウ
ロキナーゼの量は、上述と同様であるのが好ましく、特
に１５〜３０ｍｇのｌｙｓ−ｐｌｇおよび５００．００
０１０のプロウロキナーゼであるのが好ましい。輸液用
の単位用量形態中のプロウロキナーゼの量は、３，００
０，０００〜５．０００．　Ｏ００１０であるのが好ま
しく、さらに好ましくは４０００．０００ＩＵである。

ｌｙｓ−ｐｉｇおよびプロウロキナーゼの組合せへの少
量のウロキナーゼの添加は、重度の全身性フィブリン溶
解を招かずに、さらにクロット溶解の速度を増加する。

例えば、高または低分子量ウロキナーゼ（ＨＭＷ−ＵＫ
またはＬＭＷ−ＵＫ）のいずれかを、１０〜５０ＩＵ／
ｍｌの血清、すなわち正常な成人に対して約３０，００
０〜１５０．０００１０の用量を得られるように加える
。プロウロキナーゼおよびｌｙｓ−ｐｌｇの前に、固定
した３成分の組合せとして同時にウロキナーゼを投与す
るが、好ましくはその直後に投与し得る。

［実施例］ 実施例１ （方法） ５ｍＭ−ＣａＣ１，の存在下で、ひと血しょうと目５■
−フィブリノーゲンの２００μＣＩをスロンビン（３μ
／　ｍ　Ｉ　）で凝結させた。その後プロウロキナーゼ
（２００および３００ＩＵ／ｍｌ）の存在下で、非分画
ヘパリン（０，１，１０μｇ／ｍ１）および１ｙｓ−プ
ラスミノーゲン（０，３０，１００％の血しょう濃度）
を加えながら、２ｍ１血しょう中でこれらのクロットを
インキュベートした。クロットから上清プラズマへの放
射性活性の放出によってクロット溶解を測定した。

（結果） ｌｙｓ−プラスミノーゲンの不在下におけるプロウロキ
ナーゼ濃度２００ＩＵ／ｍｌでは、１０μｇ／ｍｌまで
の濃度でのヘパリンは血しょうクロット溶解にほとんど
影響せず、約１．５〜２時間の初期誘導後、３．５〜４
．５後に５０％溶解が観察された。プロウロキナーゼ濃
度３００１　Ｕ／ｍ１で得られたデータも、１時間の誘
導期の後２゜２５時間目に５０％溶解があり、ヘパリン
の影響はなんら示さなかった。

血しようクロット溶解系で２００ＩＵ／ｍｌのプロウロ
キナーゼと種々の濃度の１ｙｓ−プラスミノーゲンをイ
ンキュベートした場合、クロット溶解の極めて顕著な促
進が観察された。血しょうプラスミノーゲン濃度の３０
％濃度の１ｙｓ−プラスミノーゲンでは、クロット溶解
の誘導期が３０分に減少し、さらに５０％溶解期も２時
間に減少した。

１００％ｌｙｓ−プラスミ７−ゲンを用いるとケン０％
溶解は、僅かに短くなり、誘導期は実質的になくなる。

３００ＩＵ／ｍｌプロウロキナーゼにおいても、３０お
よび１００％１ｙｓ−プラスミノーゲンのどちらによっ
ても５０％溶解時間か２．２５時間から１．５時間にな
り、さらに１００％ｌｙｓ・プラスミノーゲンはクロッ
ト溶解の誘導期を完全になくしているというように、極
めて類似した結果が得られた。

これらの実験で同様の濃度に加えたｇｌｕ−プラスミノ
ーゲンではクロット溶解に対してなんら影響しなかった
。

実施例２ インビトロでのクロット溶解の研究のための同じ方法を
実施例１と同様に用いた。この実施例においては、　１
ｙｓ−プラスミノーゲン、プロウロキナーゼおよびＬＭ
Ｗウロキナーゼ（アホキナーセ）の組合せを研究した。

（結果） １００ＩＵ／ｍｌのプロウロキナーゼ、さらに１ｙｓ−
ｐ　Ｉ　ｇ　（正當血しょう濃度の２０％）および低レ
ベルのウロキナーセ（１０〜５０　ＩＵ／ｍｌ）を含有
する（２）しよう中で、全身性フィブリノ−ケンレベル
が激しく低下することなく迅速で効果的なりロットの溶
解が起こることが観察された。

実旋例３（投与形態） ａ）注射用混合物 １５　ｍ　ｇ−１ｙｓ−ｐｉｇおよび３，０００，００
０ＩＵプロウロキナーゼを２０ｍ１滅菌生理食塩水中に
溶かし、その後注射用のバイアルに封入した。

ｂ）凍結乾燥混合物 ３０ｍｇのｌｙｓ−ｐｉｇおよび３，０００，０００Ｉ
Ｕのプロウロキナーゼを含む溶液を凍結乾燥し、その後
注射用の生理食塩水が加え得るバイアルに固体残渣を封
じた。

Ｃ）２箇シリンジ 封入シリンジの一方の封入物は、１０ｍ１滅菌生理食塩
水中に２０ｍｇのｌｙｓ−ｐｉｇを含有し、他方は、１
０ｍ１滅菌生理食塩水中に３．０００，０００ＩＵのプ
ロウロキナーゼを含有する。

ｄ）ツインバンク ツインパックは、注射用としてｌｙｓ−ｐｉｇに少量の
滅菌生理食塩水を加えること、および輸液用としてプロ
ウロキナーゼに大量の滅菌生理食塩水を加えることの指
示を添えた、凍結乾燥形態で３０ｍｇのｌｙｓ−ｐｌｇ
を含有する１つのバイアルおよび凍結乾燥形態で３，０
００．０００ＩＵのプロウロキナーゼを含有する１つの
ビンとから成る。

特許出願人　スロンホンス・リサーチ・トラスト代理　
人弁理士青白　葆　はか１名

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）処置を必要とする患者において有効量のｌｙｓ−
   プラスミノーゲンおよびプロウロキナーゼを併用投与す
   ることからなる、血中フィブリンクロットを溶解する方
   法。 （２）投与が静脈注射または輸液によるものである、請
   求項１記載の方法。 （３）ｌｙｓ−プラスミノーゲンがボーラス注射剤とし
   て投与され、ついでプロウロキナーゼの投与によって行
   なわれる、請求項２記載の方法。 （４）ｌｙｓ−プラスミノーゲンの用量が１５〜３０ｍ
   ｇであり、プロウロキナーゼの用量が２，０００，００
   ０ＩＵから４，０００，０００ＩＵである、請求項１記
   載の方法。（５）ｌｙｓ−プラスミノーゲンのボーラス
   注射およびプロウロキナーゼのボーラス注射剤の後にプ
   ロウロキナーゼの輸液注入が行なわれる、請求項１記載
   の方法。 （６）ｌｙｓ−プラスミノーゲンの用量が１５〜３０ｍ
   ｇで、ボーラス剤として与えるプロウロキナーゼの用量
   が３００，０００〜１，０００，０００ＩＵで、プロウ
   ロキナーゼの総用量が６，５００，０００ＩＵまでであ
   る、請求項５記載の方法。 （７）ヘパリンの投与を含む請求項１記載の方法。 （８）併用投与の指示と共に、分割単位用量のｌｙｓ−
   プラスミノーゲンおよびプロウロキナーゼを含有するツ
   インパック。 （９）注射剤として用いるｌｙｓ−プラスミノーゲンの
   単位用量および注射剤として用いるプロウロキナーゼの
   単位用量、および輸液として用いるプロウロキナーゼの
   単位用量からなるキット。 （１０）ｌｙｓ−プラスミノーゲンの単位用量が１５〜
   ３０ｍｇで、注射剤としてのプロウロキナーゼの単位用
   量が４００，０００〜６００，０００ＩＵで、さらに輸
   液としてのプロウロキナーゼの単位用量が３，０００，
   ０００ＩＵ〜５，０００，０００ＩＵである、請求項９
   記載のキット。 （１１）ｌｙｓ−プラスミノーゲンまたはプロウロキナ
   ーゼの少なくとも１つの用量形態が１，０００から１０
   ，０００ＩＵまでのヘパリンを含有する請求項８記載の
   ツインパック。 （１２）ｌｙｓ−プラスミノーゲンまたはプロウロキナ
   ーゼの少なくとも１つの用量形態が１，０００から１０
   ，０００ＩＵまでのヘパリンを含有する請求項９記載の
   キット。 （１３）医薬上許容し得る希釈剤または担体を伴ったｌ
   ｙｓ−プラスミノーゲンまたはプロウロキナーゼの混合
   物または純粋な凍結乾燥形態のｌｙｓ−プラスミノーゲ
   ンおよびプロウロキナーゼの混合物からなる医薬組成物
   。 （１４）ｌｙｓ−プラスミノーゲン対プロウロキナーゼ
   の重量比が、１：１３から３：２までである、請求項１
   ３記載の医薬組成物。 （１５）ｌｙｓ−プラスミノーゲン対プロウロキナーゼ
   の重量比が、３：２から１０：１までである、請求項１
   ３記載の医薬組成物。 （１６）ヘパリンも含有する、請求項１３記載の医薬組
   成物。