JPH0286790A - トコフェロールの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （１）産業上の利用分野 本発明は蘇苔類植物（Ｂｒｙｏｐｈｙｔｉｎａ）の組織
培養によるトコフェロールの製造方法に関する。

トコフェロールは天然には植物の油脂等にへ含まれてお
り、化学合成も可能なりロマン骨格を有する化合物で、
α、β、γ、δ等の同族体からなり、その種類によって
作用、活性には差があるが。

般にビタミンＥの生理活性を有し、また酸化防止作用が
あるため、医薬品、食品の酸化防止剤等に用いられてい
る。特に、近年は老化防止、成人病予防などの生理機能
との関連が注目されるようになり、折りからの健康食品
ブームや、又、食品添加物に対する天然物指向から、天
然物からのトコフェロールについての需要が急増してい
る。

（２）従来の技術 このトコフェロールは上述の如く植物油１例えば、大豆
や小麦の胚芽油、綿実油、パーム油、コーン油等の中に
存在するが、一般にその含量がかなり低いため、通常は
天然のトコフェロールの製造原料としてはトコフェロー
ルが比較的高濃度に濃縮されているいわゆる植物油の脱
臭スカムが用いられている。

しかし、植物油の脱臭スカムを用いる方法は、それが天
然物であること、しかも特定の製品の副成物であること
から、急増する需要とのバランス上、供給量の確保、価
格の安定化には問題がある。

これらの問題を解決する一方法として、例えば特開昭６
０−１４９３９３．６１−２１２２９４．６２−５８９
９４にはベニバナまたはそれらの同属植物の組織培養を
行い、培養物からトコフェロールを分離する方法が開示
されている。しかし、培養物に含まれるトコフェロール
の含量は、工業的生産を考慮する場合、必ずしも満足で
きるものではなかった。

（３）発明が解決しようとする課題 したがってこのような組織培養による天然型トコフェロ
ールの工業的な生産を目指す場合、さらに生産性を高め
る事が重要な課題であった。

（４）課題を解決するための手段 このような現状に鑑み、本発明者は、種々の植物につい
て検討した結果、従来トコフェロール生産原料として用
いられなかった蘇苔類植物の組織培養物にトコフェロー
ル特にα−トコフェロールが高濃度に含有されることを
見いだし、本発明を完成するに至った。

即ち、本発明は、合成栄養培地にて蘇苔類植物の組織培
養を行いトコフェロールを生産する、新規なトコフェロ
ールの製造方法を提供するものである。

以下、本発明の方法について詳細に説明する。

ビタミンＥの生合成にはトコトリエノール経路とトコフ
ェロール経路の二つの経路が考えられている。前者はホ
モゲンチシン酸とゲラニルゲラニルビロリン酸とが結合
してδ−トコトリエノールとなり、メチル化および還元
を受けそれぞれのγ、β、α−トコフェロールとなる。

後者はホモゲンチシン酸とフィチルビロリン酸が結合し
δ−トコフェロールとなったのちメチル化されてそれぞ
れのトコフェロールとなる経路である。トコフェロール
は一般にα、β、γ、δがよく知られているが、生物学
的効果の強さはα〉β〉γ〉δの順で、α−トコフェロ
ールはビタミンＥと言われている。

α−トコフェロールの細胞内での通常の生合成部位は葉
緑体（Ｃｈｌｏｒｏｐｌｄｓｔ）内であるとされている
。したがって植物の組織培養によりα−トコフェロール
を生産する場合、葉緑体を有する緑化カルスを用いるの
が有利と考えられる。しかし高等植物の葉肉細胞はカル
スになる段階でクロロフィルを失うのが普通である。一
方、蘇苔類植物のカルスは緑色を保ったまま分裂増殖す
る特徴を有している（小野莞爾；植物バイオテクノロジ
ー（現代化学増刊５）２５　（１９８６））。

本発明者らはＳ′Ｉ苔類植物が葉緑体という植物特有の
細胞内小器官を保持しながら培養可能であるという特色
に着目し、蘇苔類植物の組織培養によるトコフェロール
の生産について検討し以下のごとくトコフェロールが蘇
苔類植物によって効率よく生産できる事を見いだした。

本発明の方法に於いて組織培養に供される蘇苔類植物は
、緑藻類とシダ植物の中間に位置する緑色植物の一亜門
である。本発明に於いては、培養に供される蘇苔類植物
の組織については原則的には特別な制限はなく、通常の
方法により誘導された培養細胞、又は培養組織等いずれ
を用いてもよいが、実用的な見地からは培地中での成長
が活発な緑色培養細胞を用いることが望ましい。

培地についても何ら格別である必要はなく、般に蘇苔類
植物の組織培養の培地として用いられる合成栄養培地、
即ち、無機塩類、有機成分、炭素源その他必要に応じて
ビタミン類、アミノ酸類、成長促進物質等を含むものが
用いられる。例えば、Ｋｎｏｐの培地＋　　Ｋｕｎｄｓ
ｏｎの培地１Ｍｕｒａｓｈｊｇｅ　＆　Ｓｋｏｏｇの培
地、Ｗｈｉｔｅの培地＋　　Ｌｉｎｓｍａｉｏｒ　＆　
Ｓｋｏｏｇの培地、Ｎ１ｊｓｃｈの培地、ＧａＩＩＩｂ
ｏｒｇの培地等を用いることができる。またこれらの培
地を基本として必要に応じて植物ホルモン（オーキシン
類、サイトカイニン類など）が添加されるが植物ホルモ
ンは必ずしも必須なものではない。オーキシン類には例
えば２．４−ジクロロフェノキシ酢酸、インドール酢酸
、インドール酪酸、ナフタレン酢酸などがあり、またサ
イトカイニン類には例えばカイネチン、ベンジルアデニ
ン、ゼアチン等がある。更に、ココナツツミルク、酵母
エキス、カザミノ酸等の天然抽出物などが適宜加えられ
る。

本発明の培養条件については通常の植物組織培養の条件
と基本的には同じであり、常法に従って適宜実施される
。例えば、温度については１５〜３５℃、好ましくは２
０〜３０℃、Ｐｌ＋は４〜８、好ましくは５〜６の範囲
が適当である。培養は固体培地を用いた静置培養でも或
は液体培地を用いた振盪培養でも良く、又必要に応じて
攪拌下に通気培養をしても良い。

光の照射については特に制限はなく適当な波長、強度の
光の照射下あるいは暗所にて培養されるが、１０００〜
１００００１ｕｘの白色光を培養中に照射することが好
ましい。

培養物（培地も含む）中に蓄積されたトコフェロールの
分離、精製法についても特に制限はなく、常法に従って
、例えば、ｎ−ヘキサン、クロロホルム／メタノール等
の適当な溶媒を用いて培養物より抽出し、更に吸着クロ
マトグラフィー、分子恭留等の方法により精製される。

（５）実施例 以下に本発明の方法についての代表的な例を示し、更に
具体的に説明する。但し、これらは説明のための単なる
例示であり、従って１本発明はこれらのみに限定される
ことなく種々実施し得ることは勿論であり、また、これ
らの例示によって何ら制限されるものではない。

実施例１゜ 炭素源をグルコース２％に修正したＭｕｒａｓｉｇｅ　
＆Ｓｋｏｏｇの培地１００　ｍｌを３００　ｍｌのフラ
スコに入れ、寒天０，９％を含む阿ｕｒａｓｉｇｅ　＆
　Ｓｋｏｏｇの培地にあらかじめ培養しておいたゼニゴ
ケＡ１８系培養細胞（Ｐｌａｎｔ　Ｓｃｉ、　Ｌｅｔｔ
、、　１４．２２５　（１９７９））　３−４ｇを上記
修正Ｍｕｒａｓｉｇｅ　＆　Ｓｋｏｏｇの培地に接種し
、３０００　ｌｕｘの白色光を照射しながら、毎分１０
０回転の旋回振盪機にて２５℃で３週間振盪培養後、培
養物を戒壇した。得られた培養物を凍結乾燥後。

ｎ−ヘキサン５０ｍ１にてＮ２気流下に約８時間温湿し
た。渡過後減圧下にｎ−ヘキサンを留去して褐色の油状
物質を得た。この油状物質の一部を採り、これをｎ−ヘ
キサンに溶解して高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬ
Ｃ）にてトコフェロール含有量を、下記の条件にて分析
した。又、比較対照のために、従来方法で用いられてい
るベニバナ組織培養物中のトコフェロール含有量を分析
した。

（分析条件） カラム：　５ｈｏｄｅｘ　５ｉｌｉｃａｐａｋ　Ｅ−１
１４温　度：室温（約２５℃） 溶離液二　〇−ヘキサン／ジオキサン／エタノール＝　
９７．６　：　２．０　：　０．４流　　量：　　１．
Ｏｍｌ／ｍｉｎ 検出器：蛍光；　　Ｅｘ　２８９　ｎｍ　、　Ｅｍ　３
２５　ｎｍ結果を表１に示す。

表１ いる以外は実施例１と同様の操作により、ツツソロイゴ
ケＪｓ−０系培養細胞（Ｊ、　１ｌａｔｔｏｒｉ　Ｂｏ
ｔ、。

Ｌａｂ、、　５６．２０１　（１９８４））を培養し、
そのトコフェロール含有量を分析した。

結果を表２に示す。

表２ 実施例２゜ 炭素源をグルコース４％に修正し、０．１％の炭酸カル
シウムを加えたＭｕｒａｓｉｇｅ　＆　５ｋｏｏこの培
地を用（６）効果 本発明によるトコフェロールの’ＩＢＭ方法を採用すれ
ば、従来法に比べて天然型トコフェロールを効率よ＜ｇ
ｉ造することができる。植物の組織培養を利用するため
、季節に左右されずかつ栽培のだめの広大な土地を必要
とせずに短期間で大量のトコフェロールを得ることが可
能になる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、蘇苔類植物の組織培養を行い、培養物からトコフェ
   ロールを分離することを特徴とするトコフェロールの製
   造方法。 ２、蘇苔類植物がゼニゴケあるいはツツソロイゴケであ
   る特許請求の範囲第１項記載のトコフェロールの製造法
   。