JPH0299196A - 水性処理剤の腐敗防止方法 - Google Patents

水性処理剤の腐敗防止方法

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JPH0299196A
JPH0299196A JP25288888A JP25288888A JPH0299196A JP H0299196 A JPH0299196 A JP H0299196A JP 25288888 A JP25288888 A JP 25288888A JP 25288888 A JP25288888 A JP 25288888A JP H0299196 A JPH0299196 A JP H0299196A
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bacteriophage
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liquid
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Tadashi Matsumoto
正 松本
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平山 政生
Naoshi Okawa
直士 大川
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 この発明は、有機物含有水性液、例えば水溶性切削研削
油剤、塗料ミスト処理剤および水溶性洗浄剤等の腐敗防
止方法に関する。
発明の概要 この発明は、水性処理剤等の有機物含有水性液の腐敗を
防止する方法において、 該水性液の腐敗に関与する細菌に対する溶菌活性を有す
るバクテリオ7了−ジを添加することによって、 該水性液の腐敗劣化を効果的に防止できるようにしたも
のである。
従来の技術 従来から、水溶性切削研削油剤、塗料ミスト処理剤およ
び水溶性洗浄剤等の水性処理剤の細菌による腐敗劣化を
防止するために、トリアジン系化合物やイソチアゾリン
系化合物等の防腐殺菌剤を該処理剤中へその使用前およ
び/または使用後に随時添加する方法が一般に採用され
ている。
しかしながら、この種の防腐殺菌剤を多量に添加す°る
と作業者に皮膚荒れ、目や鼻腔の粘膜の炎症等をもたら
すので、腐敗劣化を効果的に防止するのに十分な量を使
用することは作業衛生上の観点から問題がある。このた
め、腐敗が発生した後で、防腐殺菌剤を数百ppm程度
の濃度で随時補充添加しているのが実情である。さらに
、同種の防腐殺菌剤を継続的に使用すると、該薬剤に対
する耐性菌が出現するので、腐敗を有効に防止すること
ができない。
また、水溶性切削研削油剤の場合には、ばつ気処理を行
うこともある。この方法によれば嫌気性細菌の増殖は抑
制できるので硫化水素等の発生は抑えられるが、好気性
細菌が増殖して潤滑剤や界面活性剤等の油剤成分が生分
解を受けやすくなるという問題がある。
発明が解決しようとする課題 この発明は、この種の水性処理剤等の有機物含有水性液
の腐敗劣化を、作業衛生上問題のある防腐殺菌剤等の薬
剤を使用せずに、有効に防止できる方法を提供するため
になされたものである。
課題を解決するための手段 即ち本発明は、有機物含有水性液に、該水性液の腐敗に
関与する細菌に対する溶菌活性を有するバクテリオファ
ージを添加することを特徴とする有機物含有水性液の腐
敗防止法に関する。
以下、本発明を実施するだめの基本的な単位操作を説明
する。
被処理水性液の腐敗液に含まれる腐敗菌を常法により、
適当な培地に塗抹培養し、生じたコロニーから細菌を単
離する。
単離した細菌は常法に従って、形態、ダラム染色、運動
性、嫌気条件下での発育、O−Fテスト等によって同定
すればよい。
通常の有機物含有水性液の腐敗に関与する細菌は当該分
野においては既に数多く単離され同定されているので、
この単位操作は容易に行うことかできる。
この種の細菌としては大腸菌(Escherichia
 coli)、肺炎桿菌(Klebsiella pn
eumoniae)、バラ大腸菌属(Paracolo
bactrum sp、)、尋常変形菌(Proteu
svulgaris)、緑膿菌(Pseudomona
s aeruginosa)、シュードモナス・オレオ
ポランス(Pseudomonasoleovoran
s)、シュードモナス属(Pseudomonassp
、)、腸チフス菌(Salmonella typho
sa)、黄色葡萄球菌(SLaphylococcus
 aureus)、デスルフオビブリオ・デスルフリカ
ンス(Desulfovibri。
desulfuricans)、硫酸還元菌種(Des
ulfovibrio sp、)、枯草菌(Bacil
lus 5ubtillis)およびバチルス属(Ba
cillus sp、)等が例示される。
(2)バクテリオファージの探索 単離された細菌を溶菌するバクテリオファージの探索は
間接法で行うのが簡便である。
適宜の液体培地(例えば肉エキス、ペプトン、塩化ナト
リウム等を含有する水性培地等)に前記の単離した細菌
の培養液を加えて振盪培養し、次いでこの培養液に、バ
クテリオファージを含むと考えられる被処理水性液の腐
敗液を添加し振盪培養する。この培養液を遠心分離し、
上澄液をメンブランフィルタ−等を用いる濾過処理に付
す。
濾液中のバクテリオファージの探索は、単離した細菌を
接種した寒天平板二重層培地上に該濾液を滴下し、静置
培養後、濾液の滴下部分に生じる溶菌床の有無によって
おこなう。
(3)バクテリオファージ単離 バクテリオファージの存在が確認された試料を滅菌生理
食塩水等を用いてlO〜10’倍に希釈し、該希釈液を
寒天培地上に一定量とり、単離した宿主細菌の培養液と
軟寒天との混合物を該寒天培地上に重層させ、静置培養
する。寒天培地上に生じた溶菌床から白金線を用いてバ
クテリオファージを採取し、これを単離した細菌の培養
液に添加した後、培養する。この培養液を遠心分離し、
上澄液をメンブランフィルタ−等を用いて濾過すること
によってバクテリオファージ含有液を得る。
該含有液は滅菌生理食塩水等を用いて適当に希釈して使
用に供される。
(4)バクテリオファージの溶菌作用と腐敗防止効果 上記のようにして調製されるバクテリオファージ含有液
を有機物を、含有する被処理水性液に添加すると、バク
テリオファージは該水性液の腐敗に関与する細菌の細胞
内に遺伝子を注入し、その遺伝子の複製および構成タン
パク質の合成を行わせ、バクテリオファージの複製を行
わせる。複製されたバクテリオファージは、細菌を溶菌
することによって細胞外に放出される。従って、バクテ
リオファージを被処理水性液に一旦添加すれば、その後
は添加せずに該水性液中の腐敗菌の増殖を効果的に抑制
し、該水性液の腐敗を有効に防止することができる。
バクテリオファージは被処理水性液中の腐敗菌の種類に
応して複数種類併用するのが有効である。
また、バクテリオファージは従来から常用されている防
腐殺菌剤に対して安定であるので、これらと併用しても
よい。
バクテリオファージの添加時期は特に限定的でハナいか
、バクテリオファージは腐敗菌が増殖期にあるときに一
般に最も高い溶菌効果を示すので、被処理水性液に予め
添加しておくか、使用開始時もしくは使用液の交換時に
添加するのが好ましい。
以下、本発明を実施例によって説明する。
実施例1 (1)細菌の単離と同定 有機物として界面活性剤、防錆剤、可溶化剤、染料、油
、高分子等を含有する水性液の腐敗液から常法に従って
シュードモナスおよびバチルス属の腐敗菌を単離した。
これらの細菌の同定は常法に従って形態、ダラム染色、
運動性、嫌気条件下での発育、O−Fテスト等によって
行った。
(2)バクテリオファージの探索 濃縮液体培地(肉エキスlOg、ペプトン20g1m化
−)−ト!J ラム10g5IFt[水IQ;pH7,
0)l OQmQおよび腐敗菌の前培養液[該細菌を液
体培地(肉エキス5g、ペプトン10g、塩化ナトリウ
ム5g。
精製水lQ;pH7,0)中で一夜振盪培養(120回
/分、振幅20mm)後の培養液10.67m12を5
00m12の振盪フラスコ内に入れ、30°Cで4時間
振盪培養を行った(120回/分、振幅70mm)。
この培養液に、バクテリオファージを含有すると考えら
れる腐敗液(有機物として界面活性剤、防錆剤、可溶化
剤、染料、油、高分子等を含有する水性液の腐敗液)を
100m12添加し、同一条件下で一夜振盪培養した。
この培養液を5°Cで10分間の遠心分離処理(l O
OO,Orpm)に付し、上澄液をメンブランフィルタ
−(0,45μ’m)を用いる濾過処理に付した後、滅
菌試験管に採取した。
この濾液を寒天平板二重層培地[液体培地に寒天5gを
添加して加温溶解した軟寒天培地3mQと上記の腐敗菌
の前培養液Q、5m12を混合し、これを、液体培地に
寒天15gを添加した普通寒天培地上に流した後、凝固
させた培地]の上に滴下し、30°Cで一夜静置培養後
の溶菌斑の有無によってバクテリオファージを探索した
(3)バクテリオファージの単離 バクテリオファージの存在が確認された試料を滅菌生理
食塩水を用いて106倍まで希釈し、該希釈液1m(+
を腐敗菌の前培養液0.5m(2および軟寒天培地3m
Qと混合し、これを普通寒天培地上で凝固させた後、3
0°Cで一夜静置培養を行った。
生じた斑点(プラーク)に白金線を穿刺して採取した試
料を滅菌生理食塩水5m+2に懸濁させ、これを再び同
様な方法によって105倍まで希釈し、バクテリオファ
ージのプラークを発生させた。
(4)バクテリオファージ含有液の調製液体培地10m
f2に宿主菌の前培養液1m(lを加え、30°Cで4
時間振盪培養(120回/分、振幅20 mm)を行っ
た後、上記のバクテリオファージのプラークを白金線を
用いて採取して懸濁させた。
この懸濁液を同一の振盪条件下で一夜培養させた後、5
°Cで10分間の遠心分離処理(loooorpm)に
付し、上澄液をメンブランフィルタ−(0゜45μm)
を用いる濾過処理に付すことによってバクテリオファー
ジ含有液を調製した。該含有液は滅菌試験管に採取し、
4°Cで保存した。
シュードモナス属の腐敗菌およびバチルス属の腐敗菌に
対応するバクテリオファージ数はそれぞれ8−9 X 
I O’pfu/mαおよび3.5 X I O’pf
u/mQであった(バクテリオファージ数の測定は、バ
クテリオファージ含有液を上記のようにして滅菌生理食
塩水で希釈し、これを寒天平板二重層培地上において、
30℃で一夜培養することによって形成されるプラーク
の計数によって行った)。
(5)バクテリオファージの溶菌活性試験500m(2
の振盪フラスコ内に液体培地150m12、腐敗菌の前
培養液1 mQ8よび腐敗菌を溶菌するバクテリオファ
ージ含有液1m12を入れ、30°Cで振盪培養を行い
(120回/分、振幅70mm)、経時的に試料を採取
し、650nmにおける吸光度を測定した。この場合、
比較のためにバクテリオファージ含有液を添加しない試
料についての吸光度も経時的に測定した。
なお試験開始時におけるシュードモナス属およびバチル
ス属の腐敗菌の生菌数はそれぞれ1.4×I O’cf
u/m+2およびl −8X l O’cfu/ mQ
であっlこ。
11J定結果を第1図Iこ示すa図中、aおよびa゛は
それぞれシュードモナス属の腐敗菌に対応するバクテリ
オファージ含有液を添加した場合および該含有液を添加
しない場合を示し、bおよびb′はそれぞれバチルス属
の腐敗菌に対応するバクテリオファージ含有液を添加し
た場合および該含有液を添加しない場合を示す。
(6)バクテリオファージの添加による腐敗防止試験 有機物として、界面活性剤、防錆剤、可溶化剤、染料、
油、高分子等を約2重量%含有する水性液(1/N O
濃度液体培地添加用00mQを滅菌後、前記の二種の腐
敗菌の前培養液とそれぞれの腐敗菌を溶菌するバクテリ
オファージ含有液を1m+2づつ添加した。この水性液
を30℃でIO日間保存しても腐敗臭はほとんど検出さ
れなかった。
一方これらのバクテリオファージ含有液を添加しない場
合には、該水性液は30°Cで1日間保存すると腐敗臭
が検出されるようになり、3日間保存すると刺激の強い
腐敗臭が検出された。
実施例2 生分解性試験 振盪フラスコ(500mQ)にマシン油5.02449
.1/10の濃度の液体培地100m1.実施例1の(
6)と同様、二種の腐敗菌の前培養液とそれぞれの菌を
溶菌するバクテリオファージ含有液(実施例Iで調製し
たもの)を1mlずつ添加し、30°0,120回/分
で10日間振盪培養することによりマシン油の腐敗試験
を行った。対照試験として、バクテリオファージ含有液
を添加していないものについても同様に行った。
マシン油の抽出には、n−ヘキサン200m1を使用し
、抽出液に活性化した無水硫酸ナトリウム50gを脱水
剤として加えた。この抽出液を室温で減圧蒸留し、溶媒
を除去後精秤することにより腐敗試験後のマシン油の重
量を測定した。
酸価の測定は、溶媒を除去した試料の一定量をエタノー
ルベンゼン(1、1)に溶かし、フェノルフタレインを
指示薬として1/l ON水酸化カリウム溶液で滴定し
た。
ガスクロマトグラフ(Shimadzu model 
C+C−C−4Cの操作条件は次の通りである。
検出器および注入口温度:320℃、カラム温度:30
0°C1カラムの長さ21m1カラムの内径:3mm、
窒素流量: 40m l、’分、充填剤:5ilico
ne GE 5E−3060−860−8Olo%、検
出器:FID。
結果を第1表、第2表および第2図に示す。第1表から
も明らかなように、バクテリオファージ含有液を添加す
ることにより、マシン油の減量の度合には10倍以上の
効果が認められた。これは、バクテリオファージ含有液
の添加により細菌が溶菌され、そのため生分解がほとん
ど起こらなかったためだと判断される。
また、第2表の酸価をみても、バクテリオファージ含有
液を添加したものは、酸価にはまったく変化が認められ
なかった。しかし、バクテリオファージ含有液を添加し
ていないものは、酸価が0.05から0.11に増大し
た。これは、マシン油中のアルカン等が腐敗によりβ酸
化等を受はカルボン酸等になったためだと考えられる。
第2図に、マシン油にバクテリオファージ含有液を添加
しないで10日間腐敗試験をした前後に抽出したマシン
油のガスクロマトグラフによる分析結果を示す。マシン
油にバクテリオファージ含有液を添加してIO日間振盪
培養した後のものは、元のマシン油とまったく同じクロ
マトグラムを示した。
発明の効果 本発明によれば、水性処理剤等の有機物含有水性液の腐
敗劣化を、作業衛生上問題のある防腐殺菌剤等の薬剤の
代りに、自然界に既存のバクテリオファージを使用する
ことによって宜効に防止することができる。
本発明に使用するバクテリオファージは特定の細菌のみ
を選択的特異的に攻撃して死滅させるだけで人畜無害で
あり、二次的公害をもたらすこともない。
従って、本発明は、水性処理剤(例えば、水溶性切削研
削油剤、塗料ミスト処理剤、水溶性洗浄剤等)以外にも
種々の分野で使用される有機物含有水性液、例えば界面
活性剤、塗料、防錆液、冷却水、接着剤、糊料、ラテッ
クス、分散剤、インク、消火剤、高分子等の腐敗防止に
適用できる。
【図面の簡単な説明】
第1図はバクテリオファージの溶菌活性試験の結果を示
すグラフである。 aおよびa′はそれぞれシュードモナス属の腐敗菌に対
応するバクテリオファージ含有液を添加した場合および
該含有液を添加しない場合を示し、bおよびb′はそれ
ぞれバチルス属の腐敗菌に対応するバクテリオファージ
含有液を添加した場合および該含有液を添加しない場合
を示す。 第2図は腐敗試験前後の水溶性切削研削油剤中のマシン
油成分(n−ヘキサン抽出分)のガスクロマトグラムで
ある。 Cはバクテリオファージ含有液を添加した水溶性切削研
削油剤からn−ヘキサン抽出して得たマシン油成分のク
ロマトグラム、dはバクチリオフアジ含有液を添加しな
い水溶性切削研削油剤からn−ヘキサン抽出して得たマ
シン油成分のクロマトグラムおよびeはマシン油成分の
クロマトグラムを示す。 第2図 特許出願人 工業技術院長 飯塚十三 ほか2名代理 
人 弁理士 青 山 葆 はか1名イ叉柔シjW菫F、
5 (今)

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1、有機物含有水性液に、該水性液の腐敗に関与する細
    菌に対する溶菌活性を有するバクテリオファージを添加
    することを特徴とする有機物含有水性液の腐敗防止方法
    。 2、有機物含有水性液が水性処理剤である請求項1記載
    の腐敗防止方法。 3、腐敗に関与する細菌に対する溶菌活性を有するバク
    テリオファージを含有する有機物含有水性液。 4、有機物含有水性液が水性処理剤である請求項3記載
    の有機物含有水性液。
JP25288888A 1988-10-06 1988-10-06 水性処理剤の腐敗防止方法 Granted JPH0299196A (ja)

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