JPH0312705B2 - - Google Patents
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Description
本発明は、液体試料中の被分析体である抗原、
ハプテンもしくは抗体、または細胞その他の粒状
物質上に存在するか、もしくはこれらに付着して
いる被分析体を定量するためのルミネツセント標
識を使用する固相イムノアツセイ法に関する。 生物学的由来の物質を検出するためには多数の
方法がある。方法論的に１つの大きな群をなすも
のはイムノアツセイである。この方法では抗原
（またはハプテン）およびそれらに対応する抗体
を用いて試料を相互に結合させる。イムノアツセ
イのきわめて重要な一方法は固相イムノアツセイ
である（参照：キヤツトら、J.BIOCHEM.，
100：31c（1966）；キヤツトら、SCIENCE.158：
1570（1967）；米国特許第3646346号明細書（キヤ
ツトら）；これらの参考文献および特許明細書、
ならびにのちに引用する参考文献および特許明細
書を関連する箇所で参考のため引用する）。 放射能をもつ原子、たとえば125I，131I，3Hおよ
び14Cが固相イムノアツセイにおいて標識として
慣用されている。これによる固相ラジオイムノア
ツセイはきわめて高感度であるが、一般に認めら
れている欠点をもつ。標識物の放射性のため、こ
のアツセイには厳重な規制条件が与えられ、試薬
の保存寿命が比較的短かく、また廃棄物処理の問
題が生じる。 ラジオイムノアツセイの欠点を克服するため
に、代替となる標識法が幾つか開発された。これ
らのうち主なものは、放射性標識の代わりに酵素
を用いる酵素イムノアツセイ（EIA，ELISA）
である（米国特許第3551555号明細書（シユール
ズ）参照）。標識として慣用されるものは西洋ワ
サビのペルオキシダーゼ、アルカリフオスフアタ
ーゼ、β−ガラクトシダーゼ、およびグルコース
オキシダーゼである。酵素イムノアツセイは、酵
素標識がきわめて安定であり、特殊な設備および
機器を必要としない点で、ラジオイムノアツセイ
よりも有利である。しかし酵素イムノアツセイは
一般にラジオイムノアツセイよりも時間を要し、
実施するのにいつそう手間がかかる。 ルミネツセント標識が放射性標識または酵素標
識の代わりに用いられている（参照：米国特許第
4201763号（モンソニーら）；米国特許第3992631
号（ハルテ）；米国特許第3999948号（デインデル
フアーら）各明細書；A.クーン著「螢光抗体
法」；J.ダニエリ編「一般細胞化学的方法」
Vol.1）。フルオレセインが最も一般的に用いられ
ている標識である。螢光イムノアツセイはラジオ
イムノアツセイがもつ使用し易さという利点、お
よび酵素イムノアツセイがもつ試薬の安定性とい
う利点をもつが、先行技術による螢光イムノアツ
セイにはラジオイムノアツセイまたは酵素イムノ
アツセイがもつ感度の高さがいずれも欠如してい
る。この感度の欠如は研究用および臨床用に問題
であり、従つて螢光イムノアツセイはこれらの用
途におけるアツセイのためにはほとんど選択され
ていない。 本発明によれば、液体試料中の被験物質である
抗原、ハプテンまたは抗体を定量するための固相
イムノアツセイ法が提供される。この固相イムノ
アツセイには螢光標識、燐光標識または原子螢光
標識などのルミネツセント標識が含まれる。 本発明の固相イムノアツセイには免疫反応体が
付着した(i)寸法約10μm以下の多数の水不溶性粒
子、または(ii)細胞が用いられる。被分析体、また
は被分析体を含有する反応生成物、前記粒子もし
くは細胞が実質的に懸濁した状態で免疫反応体と
反応させるか、または免疫反応体と競合的にもし
くは免疫反応体に対して競合的に反応させる。ル
ミネツセント標識が付着したまたは後続の反応に
より付着する粒子または細胞をミクロ過
（microfiltration）により濃縮して、最初に被分
析体を含有していた液体試料の容積よりも実質的
に小さい容積にする。濃縮された粒子または細胞
に付着したルミネツセント標識の実質的にすべて
のルミネツセンスを測定する。 また本発明によれば、液体試料中に含有される
細胞その他の粒状物質上に存在するか、またはこ
れらに付着した被分析体を定量するための固相イ
ムノアツセイ法が提供される。この固相イムノア
ツセイには前記のルミネツセント標識が用いられ
る。 被分析体、たとえば表面抗原、可溶性蛋白質、
ハプテンもしくはウイルス、または被分析体を含
有する反応生成物を、これらの被分析体ぎ存在す
るか、または付着している細胞または粒状物質を
実質的に懸濁した状態にして、免疫反応体と反応
させるか、または免疫反応体と競合的にもしくは
免疫反応体に対して競合的に反応させる。ルミネ
ツセント標識が付着した、または後続の反応によ
り付着する粒子または細胞をミクロ過により濃
縮して、液体試料の容量よりも実質的に小さな容
量にする。濃縮された細胞に付着したルミネツセ
ント標識の実質的にすべてのルミネツセンスを測
定する。 液体試料中の被分析体を定量するためのアツセ
イには、寸法（すなわち直径）約10μm以下の細
胞または多数の水不溶性粒子からなる粒状固相を
用いる。粒子は細菌、哺乳動物細胞の断片、また
はポリマー性支持体たとえばポリスチレンラテツ
クスであつてもよい。粒子は標識を励起するビー
ム、および得られるルミネツセンスに対して実質
的に透明であろう。 アツセイの速度および感度は被分析体（または
被分析体を含有する反応生成物）を固相が懸濁さ
れた状態で該固相上の免疫反応体と反応させる
か、またはこれと競合的に反応させることにより
高められる。粒状固相の表面積が大きいため、多
量の免疫反応体を反応の場に供することができ
る。固相を実質的に懸濁させることにより、これ
らの免疫反応体を被分析体（または被分析体を含
有する反応生成物）を含有する液状媒質全体に分
散させる。これにより被分析体、または被分析体
を含有する反応生成物に関する反応が迅速かつ完
全になる。 細胞その他の粒状物質上に存在するかまたはこ
れらに付着する被分析体の定量のためのアツセイ
では、これらの細胞または粒状物質が固相として
用いられる。細胞はたとえば細菌または哺乳動物
の細胞であつてもよく、一方粒状物質は細胞断片
またはポリマー性の支持体からなつていてもよ
い。このアツセイの速度および感度は、同様に被
分析体、または被分析体を含有する反応生成物
を、細胞または粒状物質を懸濁状態として免疫反
応体と反応させるか、または免疫反応体と競合的
にもしくは免疫反応体に対して競合的に反応させ
ることにより高められる。 いずれのアツセイの固相もミクロ過によつて
液体試料の容積よりも実質的に小さな容積にまで
濃縮することができる。これにより２つの利点が
得られる。第１に、被分析体を定量前に濃縮する
ことができ、これによりアツセイの感度が実質的
に濃縮率に等しい率だけ増大する。第２に、固相
の容積をルミネツセンス測定装置（たとえば前面
螢光計）が実質的にすべてのルミネツセント標識
を観察しうる容積にまで濃縮することができる。 代表的な固相は、たとえば免疫反応体が付着し
た0.8μmの粒子の0.3容量％懸濁液からなつていて
もよい。この懸濁液20μlに含有される固相は表面
積4.4cm2および体積0.06μlをもつ。したがつて、、
液体試料100μlに含有される被分析体は、理論上
免疫反応体との反応およびミクロ過ののち1667
倍に濃縮することが可能である。少量の固相を
過して寸法（すなわち直径）１〜５mmのスポツト
を形成させることが好都合である。次いで被分析
体を、標識された免疫反応体と反応させることが
できる。これにより実質的にすべての固相を前面
螢光計により観察することができるであろう。 本発明のアツセイは、体液たとえば血清、血
漿、尿、唾液、または体液以外の液体たとえば細
胞培養液、飲料水または廃液などの液体試料に含
有される被分析体である抗原、ハプテンもしくは
抗体の定量のため並びに細胞その他の粒状物質上
に存在するか、もしくはこれらに付着するこれら
被分析体を定量するために有用である。さらに関
心を引く多種の生物学的物質が天然に粒状で存在
する。その例は細菌性抗原および哺乳動物細胞の
表面抗原である。細胞その他の粒状物質上に存在
するか、またはこれらに付着する被分析体の定量
のためのアツセイを、これらの系にそのまま適用
することができる。さらに、生細胞についてアツ
セイを行うこともできる。可溶性の蛋白質、ハプ
テンおよびウイルスは既知の方法で（米国特許第
4201763号明細書（モンソニーら）参照）、既知の
方法により製造された顕微鏡的サイズのラテツク
ス粒子（ブラツクレイ編「乳化重合」、アプライ
ド・サイエンス・パブリツシヤーズ出版、英国エ
セツクス、1975）に付着させることができる。 本発明のアツセイ法を実施するに際しては、多
数の代替となるアツセイ構成を採用することがで
きる。以下にこれらの可能なアツセイ構成の幾つ
かにつき説明する。 液体試料中の被分析体である抗原、ハプテンま
たは抗体を定量するためのサンドイツチ型アツセ
イにおいては、被分析体に結合するかまたは被分
析体により結合される免疫反応体を、被分析体と
反応させるために固相に付着させることができ
る。得られた固相（これに後続の反応によりルミ
ネツセント標識が付着するであろう）をミクロ
過により濃縮することができる。このミクロ過
ののち、結合した被分析体をルミネツセント標識
された物質と化学的に、または免疫学的に反応さ
せる。代替法においては、被分析体を含む固相を
濃縮工程の前にルミネツセント標識物質と化学的
にまたは免疫学的に反応させることもできる。後
者の場合、ルミネツセント標識が付着した固相を
ミクロ過により濃縮する。 他の代替法としてたとえば被分析体に、該被分
析体に対し特異的な第１抗体を結合させることが
でき、一方ルミネツセント標識は該第１抗体に特
異的な標識された第２抗体である。この場合被分
析体は第１抗体と免疫学的に反応し、被分析体を
含有する反応生成物を形成する。被分析体を含有
する反応生成物は、ある種の物質と被分析体の化
学反応によつて形成させることもできる。上記の
サンドイツチ型アツセイ工程はいずれの場合も、
被分析体を含有する反応生成物に適用することが
できるであろう。 さらに他の代替法として、被
分析体をルミネツセント標識された物質と反応さ
せて、固相に付着した免疫反応体と反応させる前
に被分析体を含有する反応生成物を形成させるこ
とができる。 液体試料中の被分析体である抗原、ハプテンま
たは抗体を定量するための遂次飽和アツセイ
（Sequential saturation assay）においては、免
疫反応体を固相に付着させ、過剰量の免疫反応体
を被分析体と反応させる。ルミネツセント標識さ
れた物質を、ミクロ過による固相の濃縮の前ま
たは後に、残存する免疫反応体部位と反応させる
ことができる。こうして、ルミネツセント標識さ
れた物質が付着した、または後続の反応により付
着する固相がミクロ過により濃縮される。ある
いは、化学的または免疫化学的に形成された、被
分析体を含有する反応生成物について遂次飽和ア
ツセイを行うこともできる。この被分析体を含有
する生成物を上記のように免疫反応体と反応させ
る。 液体試料中の被分析体である抗原、ハプテンま
たは抗体を定量するための競合結合アツセイにお
いては、免疫反応体を固相に付着させる。被分析
体がルミネツセント標識された物質に関して免疫
反応体と競合して反応するか、あるいは被分析体
が免疫反応体に関してルミネツセント標識された
物質と競合して反応するであろう。 ある構成においては、免疫反応体が化学的なま
たは免疫学的な反応生成物からなつていてもよ
い。二者のうち後者は、第２抗体に特異的な第１
抗体を固相に付着させることにより具体的に示さ
れる。この第２抗体は被分析体に特異的である。
ルミネツセント標識された被分析体、第２抗体、
および固相に結合した第１抗体を、被分析体を含
有する試料に添加すると、第２抗体と被分析体お
よび標識された被分析体との競合反応が起こる。
第１抗体と第２抗体の結合体を免疫反応体と考え
る。 上記の競合反応は固相をミクロ過により濃縮
する前に行うこともできる。この場合、付着した
ルミネツセント標識をもつ固相を濃縮する。 当業者には特定のアツセイ構成が上記構成の一
以上に属し、またはこれらの構成の混成体であつ
てもよいことは明らかであろう。 液体試料に含有される細胞または粒状物質上に
存在するかまたはこれらに付着した被分析体の定
量のための固相イムノアツセイにおいては、前記
と同様な構成によれば被分析体、または被分析体
を含有する反応生成物を免疫反応体と反応させる
か、または免疫反応体と競合的に、もしくは免疫
反応体に対して競合的に反応させることができ
る。特定の非競合反応においては、免疫反応体自
身がルミネツセント標識されていてもよい。 下記の具体例は、本発明を細胞培養液上清中の
単クローン抗体の検出に適用しうることを示すも
のである。示された例はサンドイツチ型アツセイ
としての特色をもつが、これらの例は本発明の用
途が広いことおよび感度が高いことを証明するた
めのものにすぎず、本発明の利用を何らかの形で
制限するものではない。 実施例 １ ラテツクス粒子懸濁液原液（）の調製 0.81μmのポリスチレン、ラテツクス粒子（デ
イフコ社、48232ミシガン州デトロイト、コント
ロール701025）10mlを遠心し（5000rpm、10分）、
上清を除去した。このビーズを脱イオン水20mlに
再懸濁させ、この操作を３回繰り返した（すなわ
ち４回の洗浄）。ビーズを最終的に３mlの脱イオ
ン水に懸濁した。ラテツクス粒子懸濁液（）の
最終ビーズ濃度は約10容量％であつた。 実施例 ２ リゾチーム−ビーズ試薬（）の調製 0.01M炭酸ナトリウム緩衝液（PH9.5）中の0.5
mg／ml鶏卵リゾチーム（シグマ社、63178ミズー
リ州セントルイス、ロツト＃81F−8201）10mlを
ラテツクス粒子懸濁液原液（）１mlに添加し、
十分に混合した。周囲温度で３時間インキユベー
トしたのち、ビーズを5000rpmで10分間遠心し、、
0.01M炭酸ナトリウム緩衝液（PH9.5）10mlで３
回洗浄し、最終的にこの緩衝液30mlに再懸濁し
た。ビーズ試薬（）の最終濃度は約0.3容量％
であつた。 実施例 ３ フルオレセイン標識したヤギ抗マウス１ｇ
（）の調製 アフイニテイー法により精製したヤギ抗マウス
１ｇ〔ハイブリドーマ・サイエンシス社；30084
ジヨージア州アトランタ、カタログ＃701、ロツ
ト＃10D；リン酸緩衝化食塩水（PH7.4）中１
mg／ml〕200μlを0.5M炭酸ナトリウム緩衝液（PH
9.5）100μlに添加し、次いでフルオレセインイソ
チオシアネート異性体〔シグマ社、ロツト
＃61F−5070、リン酸緩衝化食塩液（PH7.4）中１
mg／ml〕40μlを添加した。周囲温度で1.5時間イ
ンキユベートしたのち、反応混合物をセフアデツ
クスＧ−25カラム（18×0.75cm、リン酸緩衝化食
塩液（PH7.4）中）に通すことにより精製した。
標識されたヤギ抗マウスＩｇ（）をカラムから
溶離し、全部で１ml中に回収した。 実施例 ４ リゾチームに対するマウス単クローン抗体の一
工程アツセイ BRL＃1050MMハイブリードツト（Hybri−
Dot）マニホールド（ベテスダ・リサーチ・ラボ
ラトリーズ社、20760メリーランド州ガイザース
ブルグ）にOE66、0.2μmの酢酸セルロースフイ
ルターメンブラン（シユライヘル・アンド・シユ
エル社、03431ニユーハンプシヤー州ケーネ）を
取り付け、各ウエルにビス試薬（）20μlを添加
し、次いで試料（ハイブリドーマ増殖培地、
RPMI1640＋15容量％ウシ胎児血清、これに抗リ
ゾチームＩｇＧ分沁マウスハイブリドーマから得
たマウス腹水を希釈したもの）50μlを添加した。
次いで標識したヤギ抗マウスＩｇ（）調製液
〔たとえば10容量％ウシ胎児血清および10容量％
正常ヒツジ血清を含有するリン酸緩衝化食塩水
（PH7.5）中5μg／mlの標識されたヤギ抗マウスＩ
ｇ（）〕50μlを添加した。混合物を周囲温度で
30分間インキユベートした。次いでマニホールド
底部から吸引し、、各ウエルを空になつた時点で
水0.4mlにより３回洗浄した。マニホールドの外
套をはずし、フイルターメンブランをストリツプ
状に切断し、湿潤紙片上に乗せた。各ドツトを
切り取り、その前面螢光を日立650−10S型分光
螢光光度計で測定した。励起および放出スリツト
を20nmに開き、０に調整した（白色光）。バンド
幅の狭い干渉フイルター（中心波長485nm、バン
ド幅10nm）を励起ビーム内に置き、バンド幅の
広い干渉フイルター（中心波長535nm、バンド幅
20nm）を放出ビーム内に置いた。 表１は、マウス単クローン抗リゾチームを含む
腹水を１：64000よりも十分高く希釈することが
でき、抗体をなおこのアツセイで検出できたこと
を示す。このアツセイのプロゾーンは１：4000よ
りも低い希釈率にある。
ハプテンもしくは抗体、または細胞その他の粒状
物質上に存在するか、もしくはこれらに付着して
いる被分析体を定量するためのルミネツセント標
識を使用する固相イムノアツセイ法に関する。 生物学的由来の物質を検出するためには多数の
方法がある。方法論的に１つの大きな群をなすも
のはイムノアツセイである。この方法では抗原
（またはハプテン）およびそれらに対応する抗体
を用いて試料を相互に結合させる。イムノアツセ
イのきわめて重要な一方法は固相イムノアツセイ
である（参照：キヤツトら、J.BIOCHEM.，
100：31c（1966）；キヤツトら、SCIENCE.158：
1570（1967）；米国特許第3646346号明細書（キヤ
ツトら）；これらの参考文献および特許明細書、
ならびにのちに引用する参考文献および特許明細
書を関連する箇所で参考のため引用する）。 放射能をもつ原子、たとえば125I，131I，3Hおよ
び14Cが固相イムノアツセイにおいて標識として
慣用されている。これによる固相ラジオイムノア
ツセイはきわめて高感度であるが、一般に認めら
れている欠点をもつ。標識物の放射性のため、こ
のアツセイには厳重な規制条件が与えられ、試薬
の保存寿命が比較的短かく、また廃棄物処理の問
題が生じる。 ラジオイムノアツセイの欠点を克服するため
に、代替となる標識法が幾つか開発された。これ
らのうち主なものは、放射性標識の代わりに酵素
を用いる酵素イムノアツセイ（EIA，ELISA）
である（米国特許第3551555号明細書（シユール
ズ）参照）。標識として慣用されるものは西洋ワ
サビのペルオキシダーゼ、アルカリフオスフアタ
ーゼ、β−ガラクトシダーゼ、およびグルコース
オキシダーゼである。酵素イムノアツセイは、酵
素標識がきわめて安定であり、特殊な設備および
機器を必要としない点で、ラジオイムノアツセイ
よりも有利である。しかし酵素イムノアツセイは
一般にラジオイムノアツセイよりも時間を要し、
実施するのにいつそう手間がかかる。 ルミネツセント標識が放射性標識または酵素標
識の代わりに用いられている（参照：米国特許第
4201763号（モンソニーら）；米国特許第3992631
号（ハルテ）；米国特許第3999948号（デインデル
フアーら）各明細書；A.クーン著「螢光抗体
法」；J.ダニエリ編「一般細胞化学的方法」
Vol.1）。フルオレセインが最も一般的に用いられ
ている標識である。螢光イムノアツセイはラジオ
イムノアツセイがもつ使用し易さという利点、お
よび酵素イムノアツセイがもつ試薬の安定性とい
う利点をもつが、先行技術による螢光イムノアツ
セイにはラジオイムノアツセイまたは酵素イムノ
アツセイがもつ感度の高さがいずれも欠如してい
る。この感度の欠如は研究用および臨床用に問題
であり、従つて螢光イムノアツセイはこれらの用
途におけるアツセイのためにはほとんど選択され
ていない。 本発明によれば、液体試料中の被験物質である
抗原、ハプテンまたは抗体を定量するための固相
イムノアツセイ法が提供される。この固相イムノ
アツセイには螢光標識、燐光標識または原子螢光
標識などのルミネツセント標識が含まれる。 本発明の固相イムノアツセイには免疫反応体が
付着した(i)寸法約10μm以下の多数の水不溶性粒
子、または(ii)細胞が用いられる。被分析体、また
は被分析体を含有する反応生成物、前記粒子もし
くは細胞が実質的に懸濁した状態で免疫反応体と
反応させるか、または免疫反応体と競合的にもし
くは免疫反応体に対して競合的に反応させる。ル
ミネツセント標識が付着したまたは後続の反応に
より付着する粒子または細胞をミクロ過
（microfiltration）により濃縮して、最初に被分
析体を含有していた液体試料の容積よりも実質的
に小さい容積にする。濃縮された粒子または細胞
に付着したルミネツセント標識の実質的にすべて
のルミネツセンスを測定する。 また本発明によれば、液体試料中に含有される
細胞その他の粒状物質上に存在するか、またはこ
れらに付着した被分析体を定量するための固相イ
ムノアツセイ法が提供される。この固相イムノア
ツセイには前記のルミネツセント標識が用いられ
る。 被分析体、たとえば表面抗原、可溶性蛋白質、
ハプテンもしくはウイルス、または被分析体を含
有する反応生成物を、これらの被分析体ぎ存在す
るか、または付着している細胞または粒状物質を
実質的に懸濁した状態にして、免疫反応体と反応
させるか、または免疫反応体と競合的にもしくは
免疫反応体に対して競合的に反応させる。ルミネ
ツセント標識が付着した、または後続の反応によ
り付着する粒子または細胞をミクロ過により濃
縮して、液体試料の容量よりも実質的に小さな容
量にする。濃縮された細胞に付着したルミネツセ
ント標識の実質的にすべてのルミネツセンスを測
定する。 液体試料中の被分析体を定量するためのアツセ
イには、寸法（すなわち直径）約10μm以下の細
胞または多数の水不溶性粒子からなる粒状固相を
用いる。粒子は細菌、哺乳動物細胞の断片、また
はポリマー性支持体たとえばポリスチレンラテツ
クスであつてもよい。粒子は標識を励起するビー
ム、および得られるルミネツセンスに対して実質
的に透明であろう。 アツセイの速度および感度は被分析体（または
被分析体を含有する反応生成物）を固相が懸濁さ
れた状態で該固相上の免疫反応体と反応させる
か、またはこれと競合的に反応させることにより
高められる。粒状固相の表面積が大きいため、多
量の免疫反応体を反応の場に供することができ
る。固相を実質的に懸濁させることにより、これ
らの免疫反応体を被分析体（または被分析体を含
有する反応生成物）を含有する液状媒質全体に分
散させる。これにより被分析体、または被分析体
を含有する反応生成物に関する反応が迅速かつ完
全になる。 細胞その他の粒状物質上に存在するかまたはこ
れらに付着する被分析体の定量のためのアツセイ
では、これらの細胞または粒状物質が固相として
用いられる。細胞はたとえば細菌または哺乳動物
の細胞であつてもよく、一方粒状物質は細胞断片
またはポリマー性の支持体からなつていてもよ
い。このアツセイの速度および感度は、同様に被
分析体、または被分析体を含有する反応生成物
を、細胞または粒状物質を懸濁状態として免疫反
応体と反応させるか、または免疫反応体と競合的
にもしくは免疫反応体に対して競合的に反応させ
ることにより高められる。 いずれのアツセイの固相もミクロ過によつて
液体試料の容積よりも実質的に小さな容積にまで
濃縮することができる。これにより２つの利点が
得られる。第１に、被分析体を定量前に濃縮する
ことができ、これによりアツセイの感度が実質的
に濃縮率に等しい率だけ増大する。第２に、固相
の容積をルミネツセンス測定装置（たとえば前面
螢光計）が実質的にすべてのルミネツセント標識
を観察しうる容積にまで濃縮することができる。 代表的な固相は、たとえば免疫反応体が付着し
た0.8μmの粒子の0.3容量％懸濁液からなつていて
もよい。この懸濁液20μlに含有される固相は表面
積4.4cm2および体積0.06μlをもつ。したがつて、、
液体試料100μlに含有される被分析体は、理論上
免疫反応体との反応およびミクロ過ののち1667
倍に濃縮することが可能である。少量の固相を
過して寸法（すなわち直径）１〜５mmのスポツト
を形成させることが好都合である。次いで被分析
体を、標識された免疫反応体と反応させることが
できる。これにより実質的にすべての固相を前面
螢光計により観察することができるであろう。 本発明のアツセイは、体液たとえば血清、血
漿、尿、唾液、または体液以外の液体たとえば細
胞培養液、飲料水または廃液などの液体試料に含
有される被分析体である抗原、ハプテンもしくは
抗体の定量のため並びに細胞その他の粒状物質上
に存在するか、もしくはこれらに付着するこれら
被分析体を定量するために有用である。さらに関
心を引く多種の生物学的物質が天然に粒状で存在
する。その例は細菌性抗原および哺乳動物細胞の
表面抗原である。細胞その他の粒状物質上に存在
するか、またはこれらに付着する被分析体の定量
のためのアツセイを、これらの系にそのまま適用
することができる。さらに、生細胞についてアツ
セイを行うこともできる。可溶性の蛋白質、ハプ
テンおよびウイルスは既知の方法で（米国特許第
4201763号明細書（モンソニーら）参照）、既知の
方法により製造された顕微鏡的サイズのラテツク
ス粒子（ブラツクレイ編「乳化重合」、アプライ
ド・サイエンス・パブリツシヤーズ出版、英国エ
セツクス、1975）に付着させることができる。 本発明のアツセイ法を実施するに際しては、多
数の代替となるアツセイ構成を採用することがで
きる。以下にこれらの可能なアツセイ構成の幾つ
かにつき説明する。 液体試料中の被分析体である抗原、ハプテンま
たは抗体を定量するためのサンドイツチ型アツセ
イにおいては、被分析体に結合するかまたは被分
析体により結合される免疫反応体を、被分析体と
反応させるために固相に付着させることができ
る。得られた固相（これに後続の反応によりルミ
ネツセント標識が付着するであろう）をミクロ
過により濃縮することができる。このミクロ過
ののち、結合した被分析体をルミネツセント標識
された物質と化学的に、または免疫学的に反応さ
せる。代替法においては、被分析体を含む固相を
濃縮工程の前にルミネツセント標識物質と化学的
にまたは免疫学的に反応させることもできる。後
者の場合、ルミネツセント標識が付着した固相を
ミクロ過により濃縮する。 他の代替法としてたとえば被分析体に、該被分
析体に対し特異的な第１抗体を結合させることが
でき、一方ルミネツセント標識は該第１抗体に特
異的な標識された第２抗体である。この場合被分
析体は第１抗体と免疫学的に反応し、被分析体を
含有する反応生成物を形成する。被分析体を含有
する反応生成物は、ある種の物質と被分析体の化
学反応によつて形成させることもできる。上記の
サンドイツチ型アツセイ工程はいずれの場合も、
被分析体を含有する反応生成物に適用することが
できるであろう。 さらに他の代替法として、被
分析体をルミネツセント標識された物質と反応さ
せて、固相に付着した免疫反応体と反応させる前
に被分析体を含有する反応生成物を形成させるこ
とができる。 液体試料中の被分析体である抗原、ハプテンま
たは抗体を定量するための遂次飽和アツセイ
（Sequential saturation assay）においては、免
疫反応体を固相に付着させ、過剰量の免疫反応体
を被分析体と反応させる。ルミネツセント標識さ
れた物質を、ミクロ過による固相の濃縮の前ま
たは後に、残存する免疫反応体部位と反応させる
ことができる。こうして、ルミネツセント標識さ
れた物質が付着した、または後続の反応により付
着する固相がミクロ過により濃縮される。ある
いは、化学的または免疫化学的に形成された、被
分析体を含有する反応生成物について遂次飽和ア
ツセイを行うこともできる。この被分析体を含有
する生成物を上記のように免疫反応体と反応させ
る。 液体試料中の被分析体である抗原、ハプテンま
たは抗体を定量するための競合結合アツセイにお
いては、免疫反応体を固相に付着させる。被分析
体がルミネツセント標識された物質に関して免疫
反応体と競合して反応するか、あるいは被分析体
が免疫反応体に関してルミネツセント標識された
物質と競合して反応するであろう。 ある構成においては、免疫反応体が化学的なま
たは免疫学的な反応生成物からなつていてもよ
い。二者のうち後者は、第２抗体に特異的な第１
抗体を固相に付着させることにより具体的に示さ
れる。この第２抗体は被分析体に特異的である。
ルミネツセント標識された被分析体、第２抗体、
および固相に結合した第１抗体を、被分析体を含
有する試料に添加すると、第２抗体と被分析体お
よび標識された被分析体との競合反応が起こる。
第１抗体と第２抗体の結合体を免疫反応体と考え
る。 上記の競合反応は固相をミクロ過により濃縮
する前に行うこともできる。この場合、付着した
ルミネツセント標識をもつ固相を濃縮する。 当業者には特定のアツセイ構成が上記構成の一
以上に属し、またはこれらの構成の混成体であつ
てもよいことは明らかであろう。 液体試料に含有される細胞または粒状物質上に
存在するかまたはこれらに付着した被分析体の定
量のための固相イムノアツセイにおいては、前記
と同様な構成によれば被分析体、または被分析体
を含有する反応生成物を免疫反応体と反応させる
か、または免疫反応体と競合的に、もしくは免疫
反応体に対して競合的に反応させることができ
る。特定の非競合反応においては、免疫反応体自
身がルミネツセント標識されていてもよい。 下記の具体例は、本発明を細胞培養液上清中の
単クローン抗体の検出に適用しうることを示すも
のである。示された例はサンドイツチ型アツセイ
としての特色をもつが、これらの例は本発明の用
途が広いことおよび感度が高いことを証明するた
めのものにすぎず、本発明の利用を何らかの形で
制限するものではない。 実施例 １ ラテツクス粒子懸濁液原液（）の調製 0.81μmのポリスチレン、ラテツクス粒子（デ
イフコ社、48232ミシガン州デトロイト、コント
ロール701025）10mlを遠心し（5000rpm、10分）、
上清を除去した。このビーズを脱イオン水20mlに
再懸濁させ、この操作を３回繰り返した（すなわ
ち４回の洗浄）。ビーズを最終的に３mlの脱イオ
ン水に懸濁した。ラテツクス粒子懸濁液（）の
最終ビーズ濃度は約10容量％であつた。 実施例 ２ リゾチーム−ビーズ試薬（）の調製 0.01M炭酸ナトリウム緩衝液（PH9.5）中の0.5
mg／ml鶏卵リゾチーム（シグマ社、63178ミズー
リ州セントルイス、ロツト＃81F−8201）10mlを
ラテツクス粒子懸濁液原液（）１mlに添加し、
十分に混合した。周囲温度で３時間インキユベー
トしたのち、ビーズを5000rpmで10分間遠心し、、
0.01M炭酸ナトリウム緩衝液（PH9.5）10mlで３
回洗浄し、最終的にこの緩衝液30mlに再懸濁し
た。ビーズ試薬（）の最終濃度は約0.3容量％
であつた。 実施例 ３ フルオレセイン標識したヤギ抗マウス１ｇ
（）の調製 アフイニテイー法により精製したヤギ抗マウス
１ｇ〔ハイブリドーマ・サイエンシス社；30084
ジヨージア州アトランタ、カタログ＃701、ロツ
ト＃10D；リン酸緩衝化食塩水（PH7.4）中１
mg／ml〕200μlを0.5M炭酸ナトリウム緩衝液（PH
9.5）100μlに添加し、次いでフルオレセインイソ
チオシアネート異性体〔シグマ社、ロツト
＃61F−5070、リン酸緩衝化食塩液（PH7.4）中１
mg／ml〕40μlを添加した。周囲温度で1.5時間イ
ンキユベートしたのち、反応混合物をセフアデツ
クスＧ−25カラム（18×0.75cm、リン酸緩衝化食
塩液（PH7.4）中）に通すことにより精製した。
標識されたヤギ抗マウスＩｇ（）をカラムから
溶離し、全部で１ml中に回収した。 実施例 ４ リゾチームに対するマウス単クローン抗体の一
工程アツセイ BRL＃1050MMハイブリードツト（Hybri−
Dot）マニホールド（ベテスダ・リサーチ・ラボ
ラトリーズ社、20760メリーランド州ガイザース
ブルグ）にOE66、0.2μmの酢酸セルロースフイ
ルターメンブラン（シユライヘル・アンド・シユ
エル社、03431ニユーハンプシヤー州ケーネ）を
取り付け、各ウエルにビス試薬（）20μlを添加
し、次いで試料（ハイブリドーマ増殖培地、
RPMI1640＋15容量％ウシ胎児血清、これに抗リ
ゾチームＩｇＧ分沁マウスハイブリドーマから得
たマウス腹水を希釈したもの）50μlを添加した。
次いで標識したヤギ抗マウスＩｇ（）調製液
〔たとえば10容量％ウシ胎児血清および10容量％
正常ヒツジ血清を含有するリン酸緩衝化食塩水
（PH7.5）中5μg／mlの標識されたヤギ抗マウスＩ
ｇ（）〕50μlを添加した。混合物を周囲温度で
30分間インキユベートした。次いでマニホールド
底部から吸引し、、各ウエルを空になつた時点で
水0.4mlにより３回洗浄した。マニホールドの外
套をはずし、フイルターメンブランをストリツプ
状に切断し、湿潤紙片上に乗せた。各ドツトを
切り取り、その前面螢光を日立650−10S型分光
螢光光度計で測定した。励起および放出スリツト
を20nmに開き、０に調整した（白色光）。バンド
幅の狭い干渉フイルター（中心波長485nm、バン
ド幅10nm）を励起ビーム内に置き、バンド幅の
広い干渉フイルター（中心波長535nm、バンド幅
20nm）を放出ビーム内に置いた。 表１は、マウス単クローン抗リゾチームを含む
腹水を１：64000よりも十分高く希釈することが
でき、抗体をなおこのアツセイで検出できたこと
を示す。このアツセイのプロゾーンは１：4000よ
りも低い希釈率にある。
【表】
実施例 ５
リゾチームに対するマウス単クローン抗体の二
工程アツセイ 以下の点を除いて実施例４と同様にアツセイを
行つた。試料50μlおよびビーズ試薬（）20μlを
周囲温度で５分間インキユベートし、 過し、脱イオン水0.4mlで１回洗浄した。実施
例４の標識されたヤギ抗マウスＩｇ（）調製液
50μlを添加し、次いで周囲温度で15分間インキユ
ベートした。次いで溶液を過し、脱イオン水
0.4mlで３回洗浄し、各スポツトの螢光を測定し
た。 表２は、一工程アツセイと同等の感度が二工程
アツセイで得られたことを示す。プロゾーンは存
在しなかつた。
工程アツセイ 以下の点を除いて実施例４と同様にアツセイを
行つた。試料50μlおよびビーズ試薬（）20μlを
周囲温度で５分間インキユベートし、 過し、脱イオン水0.4mlで１回洗浄した。実施
例４の標識されたヤギ抗マウスＩｇ（）調製液
50μlを添加し、次いで周囲温度で15分間インキユ
ベートした。次いで溶液を過し、脱イオン水
0.4mlで３回洗浄し、各スポツトの螢光を測定し
た。 表２は、一工程アツセイと同等の感度が二工程
アツセイで得られたことを示す。プロゾーンは存
在しなかつた。
【表】
実施例 ６
ラテツクス−ヒトＩｇＧ試薬（）の調製
実施例２の方法によりラテツクス粒子をヒトＩ
ｇＧで被覆した。ただし使用したヒトＩｇＧの濃
度は100μg／mlであつた。試薬（）は約0.3容量
％の最終粒子濃度で調製された。 実施例 ７ ヒトＩｇＧに対するマウス単クローン抗体の一
工程アツセイ 試薬（）20μl、試料50μlおよび標識したヤギ
抗マウスＩｇ（）（ウシ胎児血清10容量％およ
び正常ヤギ血清10容量％を含有するリン酸緩衝化
食塩液（PH7.5）中に2.5μｇ／ml）500μlを用い、
実施例４の方法を採用した。試料は抗ヒトＩｇＧ
特異性をもつＩｇＧ産生ハイブリドーマから得た
細胞の培養液上清の希釈液であつた。インキユベ
ーシヨン時間は周囲温度で30分であつた。 表３にその結果を示す。アツセイは約１：256
の感度をもち、プロゾーンを示さなかつた。
ｇＧで被覆した。ただし使用したヒトＩｇＧの濃
度は100μg／mlであつた。試薬（）は約0.3容量
％の最終粒子濃度で調製された。 実施例 ７ ヒトＩｇＧに対するマウス単クローン抗体の一
工程アツセイ 試薬（）20μl、試料50μlおよび標識したヤギ
抗マウスＩｇ（）（ウシ胎児血清10容量％およ
び正常ヤギ血清10容量％を含有するリン酸緩衝化
食塩液（PH7.5）中に2.5μｇ／ml）500μlを用い、
実施例４の方法を採用した。試料は抗ヒトＩｇＧ
特異性をもつＩｇＧ産生ハイブリドーマから得た
細胞の培養液上清の希釈液であつた。インキユベ
ーシヨン時間は周囲温度で30分であつた。 表３にその結果を示す。アツセイは約１：256
の感度をもち、プロゾーンを示さなかつた。
【表】
【表】
実施例 ８
細胞培養液上清中のリゾチームに対するマウス
ＩｇＭ抗体の一工程アツセイ ビーズ試薬（）20μl、試料50μl、およびフル
オレセイン標識され、アフイニテイー処理により
精製されたヤギ抗マウスＩｇＭ（2.5μｇ／ml）
50μlを用いて実施例４の方法を行なつた。試料は
リゾチームに対するＩｇＭ抗体を分泌するハイブ
リドーマ細胞系列から得た細胞培養液上清の希釈
液であつた。反応混合物を周囲温度で30分間イン
キユベートした。 結果を表４に示す。プロゾーン現象はこの場合
明瞭であつた。
ＩｇＭ抗体の一工程アツセイ ビーズ試薬（）20μl、試料50μl、およびフル
オレセイン標識され、アフイニテイー処理により
精製されたヤギ抗マウスＩｇＭ（2.5μｇ／ml）
50μlを用いて実施例４の方法を行なつた。試料は
リゾチームに対するＩｇＭ抗体を分泌するハイブ
リドーマ細胞系列から得た細胞培養液上清の希釈
液であつた。反応混合物を周囲温度で30分間イン
キユベートした。 結果を表４に示す。プロゾーン現象はこの場合
明瞭であつた。
【表】
【表】
実施例 ９
ラテツクス−抗マウスＩｇＧ試薬（）の調製
実施例６の方法を採用した。アフイニテイー処
理により精製したヤギ抗マウスＩｇＧ（ハイブリ
ドーマ・サイエンシス社、前記、ロツト＃18C）
を0.01M炭酸ナトリウム緩衝液（PH9.5）中100μ
ｇ／mlにおいて使用した。周囲温度で一夜のイン
キユベーシヨンを採用した。試薬（）の最終濃
度は約0.3容量％であつた。 実施例 10 ヒトＩｇＧに対するマウスＩｇＧ単クローンの
抗体捕穫アツセイ 実施例４の方法を採用した。試薬（）20μlを
試料（ヒトＩｇＧに対するＩｇＧ抗体を産生する
マウスハイブリドーマ細胞系列から得た細胞培養
液上清を増殖培地で希釈したもの）50μl、および
フルオレセイン標識したヒトＩｇＧ（ウシ胎児血
清10容量％および正常ヤギ血清10容量％を含有す
るリン酸緩衝化食塩液（PH7.5）中に3μｇ／ml）
50μlと混合した。インキユベーシヨンは周囲温度
で30分であつた。結果を表５に示す。
理により精製したヤギ抗マウスＩｇＧ（ハイブリ
ドーマ・サイエンシス社、前記、ロツト＃18C）
を0.01M炭酸ナトリウム緩衝液（PH9.5）中100μ
ｇ／mlにおいて使用した。周囲温度で一夜のイン
キユベーシヨンを採用した。試薬（）の最終濃
度は約0.3容量％であつた。 実施例 10 ヒトＩｇＧに対するマウスＩｇＧ単クローンの
抗体捕穫アツセイ 実施例４の方法を採用した。試薬（）20μlを
試料（ヒトＩｇＧに対するＩｇＧ抗体を産生する
マウスハイブリドーマ細胞系列から得た細胞培養
液上清を増殖培地で希釈したもの）50μl、および
フルオレセイン標識したヒトＩｇＧ（ウシ胎児血
清10容量％および正常ヤギ血清10容量％を含有す
るリン酸緩衝化食塩液（PH7.5）中に3μｇ／ml）
50μlと混合した。インキユベーシヨンは周囲温度
で30分であつた。結果を表５に示す。
【表】
【表】
実施例 11
マウスＩｇＧのためのアツセイ
実施例４の場合と同様にアツセイを行つた。試
薬（）20μlを試料（ＩｇＧ産生マウスハイブリ
ドーマ細胞系列から得た細胞培養液上清の希釈
液）50μlおよび標識されたヤギ抗マウスＩｇ
（）（ウシ胎児血清10容量％および正常ヤギ血清
10容量％を含有するリン酸緩衝食塩液（PH7.5）
中に2.5μｇ／ml）50μlと混合した。反応混合物を
周囲温度で30分間インキユベートした。表６に結
果を示す。
薬（）20μlを試料（ＩｇＧ産生マウスハイブリ
ドーマ細胞系列から得た細胞培養液上清の希釈
液）50μlおよび標識されたヤギ抗マウスＩｇ
（）（ウシ胎児血清10容量％および正常ヤギ血清
10容量％を含有するリン酸緩衝食塩液（PH7.5）
中に2.5μｇ／ml）50μlと混合した。反応混合物を
周囲温度で30分間インキユベートした。表６に結
果を示す。
【表】
本発明はその精神または本質的特色から逸脱す
ることなく、本明細書に示されたもの以外の特定
の形態で実施することができる。従つて上述の実
施態様はあらゆる点で説明のためのものであつて
限定するものではないと考えるべきである。本発
明の範囲は上記の記述よりもむしろ特許請求の範
囲に記載により指示され、従つて特許請求の範囲
に相当する意味および範囲内にある変更はすべて
本発明に含まれるものとする。
ることなく、本明細書に示されたもの以外の特定
の形態で実施することができる。従つて上述の実
施態様はあらゆる点で説明のためのものであつて
限定するものではないと考えるべきである。本発
明の範囲は上記の記述よりもむしろ特許請求の範
囲に記載により指示され、従つて特許請求の範囲
に相当する意味および範囲内にある変更はすべて
本発明に含まれるものとする。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 一定容積中の液体試料中の抗原、ハプテンま
たは抗体を定量するためのルミネツセント標識を
使用する固相イムノアツセイ法であつて、 被分析体、または被分析体を含有する反応性成
物を、実質的に懸濁状態にある(i)寸法約10μm以
下の多数の水不溶性粒子または(ii)細胞、に付着し
た免疫反応体と反応させるか、または免疫反応体
と競合的にもしくは免疫反応体への結合に関して
競合的に反応させ； ルミネツセント標識が付着した、または後続の
反応による付着されるべき上記水不溶性粒子また
は細胞をミクロ過により濃縮して液体試料の容
積よりも実質的に小さな容積となし；そして 濃縮された水不溶性粒子または細胞に付着した
ルミネツセント標識の実質的にすべてのルミネツ
センスを測定する； ことよりなる方法。 ２ 被分析体、または被分析体を含有する反応生
成物をサンドイツチ型、遂次飽和型、または競合
的なアツセイ構成で免疫反応体と反応させるか、
または免疫反応体と競合的にもしくは免疫反応体
への結合に関して競合的に反応させる、特許請求
の範囲第１項記載の方法。 ３ 被分析体、または被分析体を含有する反応生
成物をサンドイツチアツセイ構成で免疫反応体と
反応させるか、または免疫反応体と競合的にもし
くは免疫反応体への結合に関して競合的にもしく
は免疫反応体への結合に関して競合的に反応させ
る、特許請求の範囲第２項記載の方法。 ４ 被分析体、または被分析体を含有する反応生
成物を遂次飽和型アツセイ構成で免疫反応体と反
応させるか、または免疫反応体と競合的にもしく
は免疫反応体への結合に関して競合的に反応させ
る、特許請求の範囲第２項記載の方法。 ５ 被分析体、または被分析体を含有する反応生
成物を競合法アツセイ構成で免疫反応体と反応さ
せるか、または免疫反応体と競合的にもしくは免
疫反応体への結合に関して競合的に反応させる、
特許請求の範囲第２項記載の方法。 ６ ルミネツセント標識が螢光標識、燐光標識、
または原子螢光標識である、特許請求の範囲第１
項記載の方法。 ７ 螢光標識がフルオレセインイソチオシアネー
ト標識である、特許請求の範囲第６項記載の方
法。 ８ 標識の光学的ルミネツセンスを、約１〜５mm
の範囲の横断面寸法をもつ励起ビームを有する装
置によつて測定する、特許請求の範囲第７項記載
の方法。 ９ 水不溶性粒子が標識を励起するビームおよび
生じるルミネツセンス放出ビームに対して実質的
に透明である、特許請求の範囲第１項記載の方
法。 １０ 不溶性粒子が細菌、哺乳動物細胞断片、ま
たはポリマー性支持体である、特許請求の範囲第
１項記載の方法。 １１ ポリマー性支持体がポリスチレンラテツク
スである、特許請求の範囲第１０項記載の方法。 １２ 一定容積中の液体試料中に含有される細胞
その他の粒状物質上に存在するか、またはこれら
に付着している被分析体を定量するためのルミネ
ツセント標識を使用する固相イムノアツセイ法で
あつて、 被分析体がその上に存在するかまたは被分析体
がそれに付着している細胞または粒状物質を実質
的に懸濁した状態にして、被分析体、または被分
析体を含有する反応生成物を免疫反応体と反応さ
せるか、または免疫反応体と競合的にもしくは免
疫反応体への結合に関して競合的に反応させ； ルミネツセント標識が付着した、または後続の
反応によりルミネツセント標識が付着されるべき
細胞または粒状物質をミクロ過により濃縮して
液体試料の容積よりも実質的に小さな容積とな
し；そして 濃縮された細胞または粒状物質に付着したルミ
ネツセント標識の実質的にすべてのルミネツセン
スを測定する； ことよりなる方法。 １３ 被分析体、または被分析体を含有する反応
生成物をサンドイツチ型、遂次飽和型、または競
合アツセイ構成で免疫反応体と反応させるか、ま
たは免疫反応体と競合的にもしくは免疫反応体へ
の結合に関して競合的に反応させる、特許請求の
範囲第１２項記載の方法。 １４ 被分析体、または被分析体を含有する反応
生成物をサンドイツチアツセイ構成で免疫反応体
と反応させるか、または免疫反応体と競合的にも
しくは免疫反応体への結合に関して競合的に反応
させる、特許請求の範囲第１３項記載の方法。 １５ 被分析体、または被分析体を含有する反応
生成物を遂次飽和型アツセイ構成で免疫反応体と
反応させるか、または免疫反応体と競合的にもし
くは免疫反応体への結合に関して競合的に反応さ
せる、特許請求の範囲第１３項記載の方法。 １６ 被分析体、または被分析体を含有する反応
生成物を競合的アツセイ構成で免疫反応体と反応
させるか、または免疫反応体と競合的にもしくは
免疫反応体への結合に関して競合的に反応させ
る、特許請求の範囲第１３項記載の方法。 １７ ルミネツセント標識が螢光標識、燐光標
識、または原子螢光標識である、特許請求の範囲
第１２項記載の方法。 １８ 螢光標識がフルオレセイン・イソチオシア
ネート標識である、特許請求の範囲第１７項記載
の方法。 １９ 標識のルミネツセンスを、約１〜５mmの範
囲の横断面寸法をもつ励起ビームを有する装置に
よつて測定する、特許請求の範囲第１８項記載の
方法。 ２０ 水不溶性粒子が標識を励起するビームおよ
び生じるルミネツセンス放出ビームに対して実質
的に透明である、特許請求の範囲第１２項記載の
方法。 ２１ 細胞が細菌または哺乳動物細胞である、特
許請求の範囲第１２項記載の方法。 ２２ 粒状物質が細胞断片またはポリマー性支持
体からなる、特許請求の範囲第１２項記載の方
法。 ２３ 被分析体が表面抗原である、特許請求の範
囲第１２項記載の方法。 ２４ 被分析体が可溶性蛋白質、ハプテンまたは
ウイルスである、特許請求の範囲第１２項記載の
方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/489,519 US4652533A (en) | 1983-04-28 | 1983-04-28 | Method of solid phase immunoassay incorporating a luminescent label |
| US489519 | 1990-03-07 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59208463A JPS59208463A (ja) | 1984-11-26 |
| JPH0312705B2 true JPH0312705B2 (ja) | 1991-02-20 |
Family
ID=23944219
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59083622A Granted JPS59208463A (ja) | 1983-04-28 | 1984-04-25 | ルミネツセント標識を含む固相イムノアツセイ法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4652533A (ja) |
| EP (1) | EP0124050B1 (ja) |
| JP (1) | JPS59208463A (ja) |
| AT (1) | ATE37238T1 (ja) |
| DE (1) | DE3474070D1 (ja) |
Families Citing this family (74)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| USRE34405E (en) * | 1983-08-01 | 1993-10-12 | Abbott Laboratories | Determination of analytes in particle-containing medium |
| US4582789A (en) * | 1984-03-21 | 1986-04-15 | Cetus Corporation | Process for labeling nucleic acids using psoralen derivatives |
| US4780409A (en) * | 1985-05-02 | 1988-10-25 | Genetic Systems Corporation | Thermally induced phase separation immunoassay |
| US6365368B1 (en) * | 1985-05-10 | 2002-04-02 | Igen International, Inc. | Rapid method for the detection and quantification of microbes in water |
| US5770459A (en) * | 1986-04-30 | 1998-06-23 | Igen International, Inc. | Methods and apparatus for improved luminescence assays using particle concentration, electrochemical generation of chemiluminescence detection |
| US6881536B1 (en) * | 1986-04-30 | 2005-04-19 | Bioveris Corporation | Particle based electrochemiluminescent assays |
| GB8620893D0 (en) * | 1986-08-29 | 1986-10-08 | Unilever Plc | Assays |
| DE3872888D1 (de) * | 1987-01-21 | 1992-08-27 | Abbott Lab | Immunassay unter benutzung der mikropartikelneutralisierung. |
| FR2611912B1 (fr) * | 1987-03-03 | 1989-07-13 | Biosys Sa | Procede de detection et de denombrement d'antigenes particulaires dans un echantillon liquide, notamment des spores de clostridium tyrobutyricum dans le lait |
| US6881589B1 (en) | 1987-04-30 | 2005-04-19 | Bioveris Corporation | Electrochemiluminescent localizable complexes for assay compositions |
| US5935779A (en) * | 1988-11-03 | 1999-08-10 | Igen International Inc. | Methods for improved particle electrochemiluminescence assay |
| US5006309A (en) * | 1988-04-22 | 1991-04-09 | Abbott Laboratories | Immunoassay device with liquid transfer between wells by washing |
| US5198368A (en) * | 1988-04-22 | 1993-03-30 | Abbott Laboratories | Methods for performing a solid-phase immunoassay |
| US5137804A (en) * | 1988-05-10 | 1992-08-11 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Assay device and immunoassay |
| US5374524A (en) * | 1988-05-10 | 1994-12-20 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Solution sandwich hybridization, capture and detection of amplified nucleic acids |
| US5089424A (en) * | 1988-06-14 | 1992-02-18 | Abbott Laboratories | Method and apparatus for heterogeneous chemiluminescence assay |
| US5962218A (en) * | 1988-11-03 | 1999-10-05 | Igen International Inc. | Methods and apparatus for improved luminescence assays |
| US5746974A (en) * | 1988-11-03 | 1998-05-05 | Igen International, Inc. | Apparatus for improved luminescence assays using particle concentration, electrochemical generation of chemiluminescence and chemiluminescence detection |
| US5779976A (en) * | 1988-11-03 | 1998-07-14 | Igen International, Inc. | Apparatus for improved luminescence assays |
| ZA898290B (en) * | 1988-11-03 | 1991-06-26 | Igen Inc | Electrochemiluminescent assays |
| US6448091B1 (en) * | 1988-11-03 | 2002-09-10 | Igen International, Inc. | Method and apparatus for improved luminescence assays using particle concentration chemiluminescence detection |
| US5705402A (en) * | 1988-11-03 | 1998-01-06 | Igen International, Inc. | Method and apparatus for magnetic microparticulate based luminescence assay including plurality of magnets |
| US5192663A (en) * | 1988-11-04 | 1993-03-09 | Immucor, Inc. | Article having an organic dye and a monolayer of dried mammalian cells and a method for utilizing the article |
| GB9026538D0 (en) * | 1990-12-06 | 1991-01-23 | Knight Scient Ltd | Filtration arrangement |
| DE69132905T2 (de) * | 1990-12-06 | 2002-08-01 | Affymetrix, Inc. (N.D.Ges.D.Staates Delaware) | Detektion von Nukleinsäuresequenzen |
| IL100866A (en) * | 1991-02-06 | 1995-10-31 | Igen Inc | Method and apparatus for magnetic microparticulate based luminescence assay including plurality of magnets |
| ZA92803B (en) | 1991-02-06 | 1992-11-25 | Igen Inc | Method and apparatus for magnetic microparticulate based luminescene asay including plurality of magnets |
| IL100867A (en) * | 1991-02-06 | 1995-12-08 | Igen Inc | Method and apparatus for improved luminescence assays |
| US6436349B1 (en) | 1991-03-04 | 2002-08-20 | Bayer Corporation | Fluid handling apparatus for an automated analyzer |
| US20060013729A1 (en) * | 1991-02-14 | 2006-01-19 | Glen Carey | Fluid handling apparatus for an automated analyzer |
| US6498037B1 (en) * | 1991-03-04 | 2002-12-24 | Bayer Corporation | Method of handling reagents in a random access protocol |
| CA2384535C (en) * | 1991-03-04 | 2006-08-15 | Bayer Corporation | Automated analyzer |
| US5578498A (en) | 1991-05-22 | 1996-11-26 | Behringwerke Ag | Metal chelate containing compositions for use in chemiluminescent assays |
| US6251581B1 (en) | 1991-05-22 | 2001-06-26 | Dade Behring Marburg Gmbh | Assay method utilizing induced luminescence |
| US5340716A (en) * | 1991-06-20 | 1994-08-23 | Snytex (U.S.A.) Inc. | Assay method utilizing photoactivated chemiluminescent label |
| KR100212178B1 (ko) * | 1991-07-10 | 1999-08-02 | 리차드 제이 마세이 | 입자농도 및 화학발광 검출을 이용한 개선된 발광 검정 장치 및 방법 |
| ATE162892T1 (de) * | 1992-07-31 | 1998-02-15 | Behringwerke Ag | Photoaktivierbare chemiluminizierende matrices |
| US6664114B1 (en) * | 1992-08-03 | 2003-12-16 | Sapidyne Instruments, Inc. | Solid phase assay for detection of ligands |
| US5372783A (en) * | 1992-08-03 | 1994-12-13 | Sapidyne, Inc. | Assay system |
| AU5407994A (en) * | 1992-10-30 | 1994-05-24 | Cetac Technologies Incorporated | Method for particulate reagent sample treatment |
| WO1994020855A1 (en) * | 1993-03-04 | 1994-09-15 | Sapidyne, Inc. | Assay flow apparatus and method |
| US5441894A (en) * | 1993-04-30 | 1995-08-15 | Abbott Laboratories | Device containing a light absorbing element for automated chemiluminescent immunoassays |
| JPH08136546A (ja) * | 1994-11-15 | 1996-05-31 | Bio Sensor Kenkyusho:Kk | 物質分析法 |
| US6673533B1 (en) * | 1995-03-10 | 2004-01-06 | Meso Scale Technologies, Llc. | Multi-array multi-specific electrochemiluminescence testing |
| AUPN214095A0 (en) * | 1995-04-03 | 1995-04-27 | Australian Water Technologies Pty Ltd | Method for detecting microorganisms using flow cytometry |
| US5679310A (en) * | 1995-07-11 | 1997-10-21 | Polyfiltronics, Inc. | High surface area multiwell test plate |
| US5915282A (en) * | 1995-12-14 | 1999-06-22 | Abbott Laboratories | Fluid handler and method of handling a fluid |
| US5965828A (en) * | 1995-12-14 | 1999-10-12 | Abbott Laboratories | Fluid handler and method of handling a fluid |
| US5723795A (en) * | 1995-12-14 | 1998-03-03 | Abbott Laboratories | Fluid handler and method of handling a fluid |
| US5856194A (en) | 1996-09-19 | 1999-01-05 | Abbott Laboratories | Method for determination of item of interest in a sample |
| US5795784A (en) | 1996-09-19 | 1998-08-18 | Abbott Laboratories | Method of performing a process for determining an item of interest in a sample |
| US6517781B1 (en) * | 1997-06-02 | 2003-02-11 | Aurora Biosciences Corporation | Low fluorescence assay platforms and related methods for drug discovery |
| EP1029244A4 (en) * | 1997-10-02 | 2003-07-23 | Aclara Biosciences Inc | CAPILLAR ASSAY WITH SEPARATION OF FREE AND TIED SPECIES |
| US7220596B2 (en) * | 1998-04-15 | 2007-05-22 | Utah State University | Real time detection of antigens |
| US6703248B1 (en) * | 1999-12-15 | 2004-03-09 | Dade Behring Marburg Gmbh | Particles for diagnostic and therapeutic use |
| GB0103765D0 (en) * | 2001-02-15 | 2001-04-04 | Affitech As | Assay |
| EP1377830A2 (en) * | 2001-02-16 | 2004-01-07 | Pepscan Systems B.V. | Arrays for determining binding of biomolecules |
| US20020168667A1 (en) * | 2001-03-23 | 2002-11-14 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Antigen detecting agent and antigen detecting kit, antigen detecting apparatus and antigen detecting method using the same |
| US6924154B2 (en) | 2002-08-20 | 2005-08-02 | Quest Diagnostics Investments Incorporated | Hydrophilic chemilumescent acridinium labeling reagents |
| US7000870B2 (en) * | 2002-11-07 | 2006-02-21 | Aerion Corporation | Laminar flow wing for transonic cruise |
| ZA200609266B (en) * | 2004-05-30 | 2008-12-31 | Sloan Kettering Inst Cancer | Treatment of t-cell lymphoma using 10-propargyl-10-deaza-aminopterin |
| US20080188479A1 (en) * | 2004-05-30 | 2008-08-07 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Methods to Treat Cancer with 10-propargyl-10-deazaaminopterin and Methods for Assessing Cancer for Increased Sensitivity to 10-propargyl-10-deazaaminopterin |
| US8263354B2 (en) * | 2004-05-30 | 2012-09-11 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Methods for assessing cancer for increased sensitivity to 10-propargyl-10-deazaaminopterin |
| US20070095203A1 (en) * | 2005-10-07 | 2007-05-03 | Paris Henry G | Method to Remove an Agent Using a Magnetic Carrier from the Gaseous Phase of a Process |
| WO2008008897A2 (en) | 2006-07-12 | 2008-01-17 | Steward Environmental Solutions, Llc | Method and system to remove agent from liquid phase |
| WO2008045948A2 (en) * | 2006-10-10 | 2008-04-17 | Steward Environmental Solutions, Llc | Adsorbent composition and method of making same |
| US7858924B2 (en) | 2006-12-12 | 2010-12-28 | Abbott Laboratories, Inc. | Device for use in normalizing readings on a testing machine |
| US20100248249A1 (en) * | 2007-08-17 | 2010-09-30 | Allos Therapeutics, Inc. | Methods for Assessing Cancer for Increased Sensitivity to 10-Propargyl-10-Deazaaminopterin by Assessing Egfr Levels |
| US9901578B2 (en) | 2007-08-17 | 2018-02-27 | Allos Therapeutics, Inc. | Combination of 10-propargyl-10-deazaaminopterin and erlotinib for the treatment of non-small cell lung cancer |
| WO2009026234A1 (en) * | 2007-08-17 | 2009-02-26 | Allos Therapeutics, Inc. | Combination of 10-propargyl-10-deazaaminopterin and erlotinib for the treatment of non-small cell lung cancer |
| KR101743426B1 (ko) | 2010-02-02 | 2017-06-15 | 알로스 쎄러퓨틱스, 아이엔씨. | 10-프로파길-10-데아자아미노프테린의 광학적으로 순수한 부분입체이성질체 및 이의 용도 |
| US9913903B2 (en) * | 2015-08-06 | 2018-03-13 | Grifols Worldwide Operations Limited | Method for the treatment or prevention of infection-related immune conditions using a composition comprising IgM |
| JP7036979B1 (ja) * | 2021-04-02 | 2022-03-15 | ライオン株式会社 | 検査方法 |
| JP2022158963A (ja) * | 2021-04-02 | 2022-10-17 | ライオン株式会社 | 検査方法 |
Family Cites Families (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US29474A (en) * | 1860-08-07 | Improvement in manufacture of oxide of manganese | ||
| US30562A (en) * | 1860-11-06 | Washing-machine | ||
| USRE29474E (en) | 1966-06-02 | 1977-11-15 | Pharmacia Ab | Method for the determination of proteins and polypeptides |
| US4039652A (en) * | 1973-10-11 | 1977-08-02 | Miles Laboratories, Inc. | Column method of immunoassay employing an immobilized binding partner |
| US3992631A (en) * | 1975-02-27 | 1976-11-16 | International Diagnostic Technology, Inc. | Fluorometric system, method and test article |
| US4056724A (en) * | 1975-02-27 | 1977-11-01 | International Diagnostic Technology | Fluorometric system, method and test article |
| US4201763A (en) * | 1975-10-09 | 1980-05-06 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Solid phase immunofluorescent assay method |
| US3999948A (en) * | 1975-11-03 | 1976-12-28 | International Diagnostic Technology | Diagnostic reagent holder and method |
| US4013418A (en) * | 1975-11-12 | 1977-03-22 | Vitatelt Corporation | Luminescent reaction testing |
| US4020151A (en) * | 1976-02-17 | 1977-04-26 | International Diagnostic Technology, Inc. | Method for quantitation of antigens or antibodies on a solid surface |
| US4025310A (en) * | 1976-05-28 | 1977-05-24 | International Diagnostic Technology, Inc. | Method for reading a wet fluorescent surface |
| US4144452A (en) * | 1976-07-08 | 1979-03-13 | International Diagnostic Technology, Inc. | Fluorometric system, method and test article |
| US4090850A (en) * | 1976-11-01 | 1978-05-23 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Apparatus for use in radioimmunoassays |
| US4163779A (en) * | 1978-01-09 | 1979-08-07 | International Diagnostic Technology, Inc. | Test for quantitation of immunoglobulin and identification of abnormal immunoglobulin |
| JPS54109494A (en) * | 1978-02-16 | 1979-08-28 | Teikoku Hormone Mfg Co Ltd | Method of measuring antigennantibody reaction |
| US4380580A (en) * | 1978-04-10 | 1983-04-19 | Miles Laboratories, Inc. | Heterogenous chemiluminescent specific binding assay |
| US4244940A (en) * | 1978-09-05 | 1981-01-13 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Single-incubation two-site immunoassay |
| US4427415A (en) * | 1979-01-05 | 1984-01-24 | Cleveland Patrick H | Manifold vacuum biochemical test method and device |
| USRE30562E (en) | 1979-02-22 | 1981-03-31 | Immunological testing devices | |
| US4238449A (en) * | 1979-05-21 | 1980-12-09 | International Diagnostic Technology, Inc. | Reagent holder |
| US4254096A (en) * | 1979-10-04 | 1981-03-03 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Reagent combination for solid phase immunofluorescent assay |
| US4271123A (en) * | 1979-10-22 | 1981-06-02 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Automated system for performing fluorescent immunoassays |
| US4459361A (en) * | 1982-06-04 | 1984-07-10 | Angenics, Inc. | Ligand assay with one or two particulate reagents and filter |
-
1983
- 1983-04-28 US US06/489,519 patent/US4652533A/en not_active Expired - Lifetime
-
1984
- 1984-04-19 AT AT84104500T patent/ATE37238T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-04-19 EP EP84104500A patent/EP0124050B1/en not_active Expired
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