JPH0312880B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

［発明の技術分野］ 本発明は試験試料中の白血球その他エステラー
ゼ活性の分析に関する。更に詳しくは、迅速で、
かつ、顕微鏡観察もしくは湿式化学分析を不要と
する半定量分析に関する。 患者の尿中に異常レベルの白血球が存在するこ
とは、腎感染、性尿器系感染、その他機能障害な
どの病理学的状態の徴候であることがある。従つ
て、かかる病状の診断および治療に当り、的確な
尿白血球に関する情報は、医師にとつて極めて貴
重な手段となり得る。従来、（この情報を得るの
に）、医師らは尿沈渣又は遠心分離されない尿中
の白血球数を数えるという眼視定量法に頼つてい
た。然しながら、この方法は、臨床医に多大な時
間を強要したばかりか、遠心分離器、顕徴鏡等の
高価な機器を必要とするものであつた。しかも、
従来の方法は、何らの変化も受けなかつた細胞の
数だけが求まるという不完全なものであつた。 尿系内に存在する白血球は多量の細胞崩壊を受
けやすい条件下にある。例えば、異常に高いPHの
尿中において、白血球数の半数が崩壊する半減期
が、なんと60分にすぎないことがある。また崩壊
してしまつた細胞は眼視試験法による検出にかか
らないので、過小定量の結果と誤つた負の結果を
もたらすことがある。 尿沈渣の白血球顕微鏡分析と非遠心・均質化処
理尿の白血球顕微鏡分析の２つの方法のうち、最
も好ましい方法は、明らかに、前者の方法であ
る。後者の方法が信頼性の高い結果を得るのに好
適である場合があるが、圧倒的多数の分析例は尿
沈渣観察法を採用している。この尿沈渣観察法で
は、尿試料を遠心分離にかけ、沈渣を単離し、検
鏡に付する必要がある。検鏡の際、分析者は視野
に現われた白血球数を数える。然しながら、この
分析操作は、沈渣中に上皮細胞や塩粒子等、他の
尿成分が存在するため、更に、複雑である。沈渣
の組成変化は、試料の不均一性や顕微鏡の光学能
変化等の他の複雑な要因と連繋して、最終的定量
値に大きな誤差をもたらすことがある。 かかる情況にあつて、高価な装置や時間のかか
る技法を必要とせず、しかも、細胞の残存−崩壊
にかかわりなく正確な分析結果を与える、迅速か
つ簡易な分析方法が開発されたならば、これが従
来の技術的水準を本質的、かつ、飛躍的に進歩せ
しめることは明白である。本発明はかかる進歩を
もたらすものである。本発明は白血球の観察に基
づくものではなく、白血球が呈する酵素活性に基
づくものであり、このため、分析精度上、上述の
不正確さをもたらすことがない。 ［発明の技術的背景とその問題点］ 従来技術として、酵素活性によつて開裂して発
色種その他の検知可能な化学種を生成する特定の
エステルの利用を開示した多くの文献がある。例
えば、英国特許第1128371号は体液の加水分解酵
素を検出するのに有用な色原体として、インドキ
シルエステルおよびチオインドキシルエステルの
利用を開示している。このエステルは酵素によつ
て開裂し、遊離インドキシルを生成し、しかる
後、酸化されて、容易に検知可能な青色染料た
る、二量化生成物のイジゴと成る。このような酵
素活性は、種々の酵素のうち、コリンエステラー
ゼに起因すると言われている。また、この特許
は、エステル基質のインドキシル部分の他に、特
定の被検酵素に対応して、特定の酸根が選択され
ることも教えている。例えば、この特許はエステ
ラーゼもしくはリパーゼの検知用酸根として、ア
セテート、ラウレートもしくはステアレートを挙
げている。ホスフアターゼもしくはスルフアター
ゼのような酵素を検知するためには、アシル基が
無機質のものであつてもよい。しかしながら、上
記英国特許は、エステル分解酵素の定量用基質と
して、色原体エステルの利用を教示しているもの
とみることができる。ここで利用されるエステル
はエステルのアルコール部分としてインドキシル
もしくはチオインドキシルを有し、アシル部分が
特定の被検酵素の導入に適合するように造られて
いる。 アシル基の選択の適−不適の効果については、
次の２つの文献ほどその効果を明確に例証してい
るものは見当らない。これらの文献はＮ−位が保
護されているアミノ酸もしくはペプチドからなる
アシル基を有したエステルがエステラーゼ特異性
を有していることを立証している。すなわち、ヤ
ノフ（Janoff）らによるProc.Soc.Exper.Biol.
Med.136：1045−1049（1971）は、アラニンエス
テルがヒトの白血球から得られたエステラーゼに
対する特異的基質となることを教示している。具
体的には、この文献は、ヒトの白血球顆粒からの
抽出物がｎ−アセチル−ｌ−アラニル−ｌ−アラ
ニル−ｌ−アラニンメチルエステルを加水分解し
たことを教えている。また、同様に、ｌ−アラニ
ン−ｐ−ニトロフエノールエステルは加水分解さ
れて、黄色のｐ−ニトロフエノール発色体とな
る。 同様に、スウイートマン（Sweetman）らによ
るJour.Hist.Soc.，22：327−339は、エステラー
ゼの存在の証明に、１−ナフチル Ｎ−アセチル
−ｌ−アラニル−ｌ−アラニル−ｌ−アラニンば
かりでなく、１−ナフチル Ｎ−アセチル−DL
−アラニンおよび１−ナフチル ブチラートが利
用出来ることを教えている。 白血球のエステラーゼ活性に対する従来の色原
体基質の更にもう１つの例として、ベーリンガ
ー・マンハイム有限会社（Boehringer
Mannheim GmBH）の米国特許第4278763号が
ある。この特許では、上記の教示を組み合せて、
アミノ酸もしくはペプチドのインドキシルもしく
はチオインドキシルエステラーゼを利用するに至
つている。ヤノフ（Janoff）およびスウイートマ
ン（Sweetman）の文献と同様に、ベーリンガー
（Boehringer）の特許は、プロテアーゼとエステ
ラーゼとでは、同等のエステル分解能を有してい
ることを教えている。 白血球の定量に関する他の従来技術には、顆粒
状白血球が示す過剰酸化活性の利用を教示するも
のがある（米国特許第3087794号公報）。然しなが
ら、このような方法は、白血球とヘモグロビンと
を区別することが出来ないため、陽性テスト結果
が白血球を示すものか、或いは赤血球を示すもの
か判断することができない。 最後に、サイトウルテスト“Cyturtest”とし
て知られた商品が市販されていることを紹介す
る。サイトウルテストは上述のＮ−トシルアラニ
ンインドキシルエステルを利用するものである。
この商品はこのアミノ酸インドキシルエステルを
含浸した瀘紙パツドから成り、該パツドはプラス
チツク細片上に固定されている。この試験片を、
白血球が存在する尿試料中に浸漬せしめると、瀘
紙パツドが呈色する。これは、該パツド中にイン
ジゴが生成するためである。然しながら、この試
験には、試験結果が得られるまでに、かなり長い
待ち時間（約15分）を要するという欠点があつ
た。 このように、従来から、白血球の分析に色原性
エステラーゼ基質を利用する技術は十分に確立さ
れており、また、エステラーゼはアラニンインド
キシルエステルおよびペプチドインドキシルエス
テルに対して親和力を有しているにもかかわら
ず、今日まで、尿中の白血球を真に迅速に試験す
る技術が存在しなかつた。 ［発明の目的］ 本発明は上記問題を解決することを目的とす
る。 ［発明の概要］ 本発明者らは、先行技術における上記の重大な
る欠点を克服するべく、鋭意研究を重ねた結果、
尿中の白血球に対する特定の、簡易な分析試験に
よると、試験時間がわずか３〜４分以下に短縮さ
れる事実を見い出し、本発明を完成した。 要約するならば、本発明は試験試料中のエステ
ラーゼ活性を求めるための組成物、試験具および
試験方法からなる。 本発明の組成物は、(a)式Ｒ−Ｏ−R′を有する
色原体エステルであつて、Ｒが、エステラーゼも
しくはエステラーゼ様物質によつて該エステルが
エステル分解反応を受けて開裂した際に、検知可
能な応答を生ずる部分であり、R′が窒素保護基
を有するアミノ酸もしくはペプチド部分であるも
のと、(b)３−キヌクリジノールから成る。 本発明の試験具は上記組成物を含む支持体マト
リツクスからなる。 また、本発明の試験方法は、上記試験具を試験
試料液に接触せしめた後、上記支持体マトリツク
スに現われる検知可能な応答を観察することから
成る。 尚、本明細書中で用いる用語、“エステラーゼ
活性”、“色原体エステル”、“検知可能な応答”、
並びに“エステラーゼもしくはエステラーゼ様の
反応”および“エステル分解反応”は下記の意味
に定義される。 “エステラーゼ活性”とは、試験試料の性質の
うち、酵素エステラーゼと同様の挙動を示す性質
を意味する。従つて、試験試料のエステラーゼ活
性の有無は、該試験試料が下記に定義する色原体
エステルを、下記に定義する様に開裂せしめるこ
とが出来るか否かによつて明らかとなる。 “色原体エステル”とは、本明細書中で定義さ
れた構造を有するエステルであつて、そのエステ
ル分解によつて生じる開裂生成物の１つであるア
ルコール性残基が、その自身で、もしくは何らか
の反応によつて、検知可能な応答を与えることが
できるものを意味する。 “検知可能な応答”とは、人間もしくは計器計
測によつて感知することが出来る物理的パラメー
タの変化もしくは現象を意味する。例えば、検知
可能な応答とは、本発明の試験具の支持体マトリ
ツクスの、または、本発明の組成物を溶解もしく
は懸濁した溶液の、色相もしくは色変化であつて
もよい。また、この応答は上記支持体マトリツク
スによつて吸収もしくは反射される光量変化であ
つてもよい。例えば、支持体マトリツクスを反射
計または分光光度計を用いて分析することが出来
る。測定された反射光または吸収光が赤外から紫
外までの広い波長領域の光であつてもよい。ま
た、検知可能な応答は化学ルミネセンス現象の形
をとるものであつてもよい。色原体エステル中の
アルコール部分であるＲの選び方しだいで、種々
様々な検出可能な応答が存在し得るものと考えら
れ、事実、この応答の種類および大きさの範囲は
広いものである。 本明細書中で用いる用語“エステラーゼ反応”、
“エステラーゼ様反応”および“エステル分解反
応”とは、エステラーゼ、または、エステラーゼ
活性を呈する他の試料成分のいずれかの存在に帰
因した触媒作用を受けて、色原体エステルがその
アルコール成分とアシル成分に開裂する反応であ
れば、いかなる反応であつてもよい。 本発明の組成物の色原体エステルは次の２つの
共通する部分を有する点に特徴がある。すなわ
ち、該エステルがケン化もしくはエステル分解的
に開裂した際に検知可能な応答を生ずるアルコー
ル部分Ｒと、アミノ酸残基もしくはペプチド残基
から成り、該アミノ基が窒素保護基によつて置換
されているアシル部分Ｒとを有する。Ｒは、通
常、インドキシル（３−ヒドロキシインドール）
もしくはその誘導体、チオインドキシルもしくは
その誘導体、ｐ−ニトロフエノールまたはｐ（β
−ニトロビニル）フエノールである。置換および
非置換インドキシルおよびチオインドキシル部分
としては英国特許第1128371号および米国特許第
4278763号に記載されているものが挙げられる。 また、エステルのアシル部分、即ち、アミノ酸
もしくはペプチド残基は広く解釈される。従つ
て、アミノ酸残基はＬ−体もしくはＤ−体のα−
アミノ酸の１つを含む。特に、Ｌ−アラニンが好
ましいが、好適な実施の態様には、その他、グリ
シン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フエニ
ルアラニンおよびチロシンを含む。遊離水酸基
は、アシル化されていることが好ましい。 R′がペプチドである場合には、本発明は約１
−５個のアミノ酸単位を有するものを意図してお
り、好ましくは、上記アミノ酸のジペプチドもし
くはトリペプチドとする。 本明細書で用いる“窒素保護基”の術語には、
ペプチド化学その他で慣用されているＮ−保護基
を含む。このような保護基には、アシル、オキシ
カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、スル
フエニル、ビニル、シクロヘキセニル、ホスホリ
ルおよびカルボニル等がある。 よつて、本発明の組成物は色原体エステルと３
−キヌクリジノールから成る。３−キヌクリジノ
ールは、エステラーゼ活性を有する試料によつて
起される色原体エステルの開裂の反応時間を著し
く短縮せしめる成分であることが本発明によつて
見い出された。組成物中に３−キヌクリジノール
を含有せしめることによつて、読み取り待ち時間
は数倍減少する。即ち、３−キヌクリジノールが
存在しない場合には、待ち時間が15分であつたも
のが、この化合物を色原体と併用せしめると、２
〜３分以下となる。 ３−キヌクリジノールは１−アザビシクロ
［２・２・２］オクタン−３−オールという式名
を有する、下記の構造の化合物である。 この化合物は光学異性体の形で存在し、その各
異性体は別個の物理的性質を有している。dl−体
はアセトンもしくはベンゼンから結晶させると、
融点225−227℃の結晶となる。この結晶は120℃、
20mmＨｇで昇華する。ｌ−異性体は融点220−222
℃の三角柱状結晶を与える。この化合物は、降圧
剤として、そのまま単独でもしくはその誘導体と
して使用されてきた。これについては、ラーウエ
イ（Rahway，N.J.）の、“Merck Index”第９
版、1052頁、項目番号7905、Merck＆Co.，Inc.
を参照されたい。また、この化合物はβ−ケトエ
ステルの開裂に有用であると報告されている。こ
れについては、“アルドリツチ・カタログ・ハン
ドブツク（Aldrich Catalog Handbook）”826
頁，Aldrich Chemical Co.，Milwaukee，WI
（1981−1982）を参照されたい。 本発明の組成物中の色原体エステルと３−キヌ
クリジノールの存在量比には、特に制限はないと
考えられるが、該エステルと３−キヌクリジノー
ルは１：５〜１：100の範囲のモル比で存在する
ことが好ましく、特に、該モル比が１：30〜１：
75の組成物を使用するのが有益であることが見い
出されている。 また、上記の成分に加えて、本発明の組成物は
１〜20個の炭素原子を有するアルコールを含むも
のであつてもよく、好ましくは、該アルコールの
炭素原子は８〜12個とする。該組成物に含有せし
めることができ、しかも、特に好ましいことが解
つている該アルコールとしては、例えば、デカノ
ールの各種異性体、特にｎ−デカノールが挙げら
れる。 本発明の試験具は、上記組成物を含有する支持
体マトリツクスから成り、以つて、試験試料中の
白血球その他のエステラーゼ活性源の存否を迅速
かつ正確に判定する手段を提供する。 この支持体マトリツクスは、常にそうとは限ら
ないが、通常、瀘紙のような多孔性物質から成
る。技術上用いることができる支持体マトリツク
ス材料のその他の形態としては、フエルト、多孔
性セラミツク帯片、ガラス繊維の織物もしくはマ
ツトがある（米国特許第3846247号）。また、木
材、織布、海面状物質および粘土状物質の使用も
提案されている（米国特許第3552928号）。このよ
うな支持体マトリツクスは、他の材料と同様に、
総て本発明における使用に適しており、特に、瀘
紙が好適であることが見い出されている。 好適な実施の態様において、先ず、（約PH8.5
の）水性緩衝液中、または研究室における日常的
実験によつて容易に選ぶことができる他の適切な
媒体中の３−キナクリジノール溶液もしくは該溶
液の懸濁液で瀘紙を湿潤せしめた後、これを乾燥
する。次に、この乾燥瀘紙に色原体溶液を加え
る。通常、エステル溶液には、アセトンのような
有機溶媒が用いられる。使用に適する他の溶媒と
しては、メタノール、エタノール、Ｎ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミドおよびジメチルスルホキシド等
が挙げられる。エステル溶液で含浸した後、瀘紙
を乾燥すると、白血球その他のエステラーゼ活性
源の存在に鋭敏な本発明の試験具が得られる。 乾燥された、試験試薬を担持する支持体マトリ
ツクスは、所望により、これを裏打ち材の上に付
着することができる。例えば、本発明の試験具の
好適な実施の態様は、上記の組成物が含浸された
瀘紙製支持体マトリツクスが透明ポリスチレン・
フイルムの細長い片の片面に添貼されて成る。こ
のマトリツクスは両面接着テープ（例えば、3M
社が販売するダブル・ステイツク （Double
Stick ））のような何か適切な手段のよつて上記
フイルムの一端に固定され、ポリスチレンフイル
ムの他端は把持部を形成する。 次に、本発明の試験具の使用を説明することに
よつて、本発明の測定方法の手順を示す。 まず、ポリスチレン・フイルムの自由端（把持
部）をつかんで、上記試験具を持ち、マトリツク
スが添貼された端部を試験試料（例えば、尿）中
に浸漬した後、すばやく、試料から引き上げる。
次に、予め定めた温置時間経過後、何らかの呈色
その他の検知可能な応答を観察し、既知濃度の白
血球その他のエステラーゼ活性を示す被検物に対
する照合用基準応答と比較することによつて、試
験試料中の白血球等の濃度を求める。 本発明によれば、試薬を含有する瀘紙内で顕色
が生ずることに要する温置時間は約１〜３分で十
分であることが判つた。 ［発明の効果］ 本発明は、従来の白血球その他のエステラーゼ
活性の分析試験に比べ試験時間を大巾に短縮する
ことができるという効果を奏する。 ［発明の実施例］ 本発明の上記および上記以外の実施の態様は下
記の実施例によつて、更に容易に理解され得る。
然しながら、これら実施例は例証的目的を別にす
れば、本発明の範囲を何ら限定するものとして企
図されたものではなく、また、そう解釈されては
ならない。 参考例１：対照試験具 液体試験試料中の白血球の有無を分析するのに
有用な試験具を得る実験を行なつた。概括的に言
うと、この試験具は、色原体エステルのインドキ
シル−Ｎ−トシルアラニナートとｎ−デカノール
とが含浸された（一辺が約5.08mm（0.2インチ））
瀘紙正方形片から成る。瀘紙片を、順次、２つの
後述の浸溶液中に浸漬し、各浸漬後、乾燥した。
得られた乾燥試薬含有紙を5.08mm（0.2インチ）
平方に裁断し、そのうちの一片紙を長さ約101.6
mm（４インチ）、幅約5.08mm（0.2インチ）の寸法
の矩形ポリスチレン細片の末端に取付けた。瀘紙
とプラスチツクとの間の接着は3Mカンパニーか
ら得られるダブル・ステイツクとして知られた両
面接着テープを用いて行なつた。 第１浸溶液はアニオン系洗剤（ビオ・ターゲ
（Bio Terge）AS−40）と臭素酸カリウムが添加
されたホウ酸塩緩衝溶液から次のようにして得
た。蒸留水中の0.2Mホウ酸溶液4.5mlを蒸留水中
の0.05Mホウ砂溶液5.5mlに加えることによつて
ホウ酸塩緩衝溶液（PH＝8.6）を調製した。この
溶液に十分量のビオ・ターゲAS−40（ステパン・
ケミカル社（Stepan Chemical Co.）のアニオン
系洗剤）を加え、その0.2ml／dl溶液を得た。次
に、得られた溶液に臭素酸カリウムを加え、その
10mM溶液を得た。 イートン・アンド・ダイクマン（Eaton and
Dikeman）205号瀘紙１片を第１浸溶液に短時間
浸漬した後、乾燥器中100℃、20分間乾燥した。 第２浸溶液はポリビニルピロリドンのアセトン
溶液、ｎ−デカノール、塩酸キニーネおよび３−
（Ｎ−トシル−Ｌ−アラニル−オキシ）インドー
ルから調製した。得られた溶質濃度は下記の通り
である。 メタノール中、ポリビニルピロリドン （AGF社のルビスコール（Luviskol））
１ml／dl ｎ−デカノール ２ml／dl 塩酸キニーネ 10mM ３−（Ｎ−トシル−Ｌ−アラニル−オキシ）イ
ンドール 2mM 第１浸溶液が含浸・乾燥された瀘紙を第２浸溶
液に浸漬した後、乾燥器中、60℃で５分間乾燥し
た。次に、前に説明したように、5.08mm（0.2イ
ンチ）平方の乾燥紙をポリスチレン細片の上に付
着せしめた。 このようにして得られた試験具の白血球測定能
を試験するため、既知濃度の白血球を含有する加
工尿溶液を調製し、試験片評価に使用した後に冷
凍した。 この加工尿の一部を解凍し、白血球3.3個／μl
の白血球濃度に調製した。試験具の１つをこの試
験試料中に、ほんの一時的に浸漬し、引き上げ、
温置した。14分後、試験片は十分顕色し、陽性テ
ストを確認することができた。 実施例１：３−キヌクリジノールの効果 実施例１で得られた試験片と類似の試験片につ
いて、化合物３−キヌクリジノールが該試験片の
性能に及ぼす効果を試験するための実験を行なつ
た。従つて、第１浸溶液が50mMの３−キヌクリ
ジノールと（臭素酸塩の代りに）10mMフエロシ
アン化カリウムを含むこと以外は、ほぼ実施例１
の手順に従つた。但し、第１浸後の瀘紙の乾燥は
80℃、25分間とし、また、第２浸溶液には、ｎ−
デカノール0.2ml／dl、ポリビニルピロリドン1.5
ml／dlおよび３−（Ｎ−トシル−Ｌ−アラニルオ
キシ）インドール1.5mMを含有せしめた。 キヌクリジノールを含有する試験具の性能を評
価するのに、参考例１で用いた加工尿溶液を使用
した。このようにして、試験具を該尿溶液に浸漬
し、引き上げ、温置した。４分後、試験片内に十
分の顕色が現われ、加工尿中の白血球存在につい
て陽性を示した。 実施例２：好適な実施の態様 実施例１の結果より更に改善された結果を得る
ための実験を行なつた。従つて、試験具の調製に
ついての下記の点を除き、参考例１の手順に従つ
た。 第１浸溶液には、PH＝8.6のピロリン酸塩緩衝
溶液を含有せしめた。この緩衝溶液は蒸留水中ピ
ロリン酸ナトリウム（Na₄P₂O₇）0.2Mの溶液を
調製し、該溶液がPH＝8.6になるまで、徐々にメ
タリン酸［（HPO₃）ｎ］の結晶を加えることに
よつて調製した。この溶液に十分な量のビオ・タ
ーゲAS−40を加え、その0.2ml／dl溶液を得た。
次に、この溶液にフエロシアン化カリウム、３−
キヌクリジノールを加え、それぞれの濃度を
10mMおよび50mMに調製し、第１浸溶液を得
た。 イートン・アンド・ダイクマン（Eaton and
Dikeman）瀘紙の１片を第１浸溶液に浸漬し、
取り出し、80℃、35分間乾燥した。 第２浸溶液はアセトンを用いて調製した。第２
浸溶液には、ｎ−デカノール0.2ml／dl、メタノ
ール中ポリビニルピロリドン2.0ml／dl（ルビス
コール（Luviskol））および３−（Ｎ−トシル−
Ｌ−アラニルオキシ）インドール1mMを含有せ
しめた。 第１浸溶液が含浸・乾燥された瀘紙を第２浸溶
液に浸漬し、取り出し、60℃で７分間乾燥した。
得られた5.08mm（0.2インチ）平方の支持体マト
リツクスを参考例１と同様に、ポリスチレン片上
に付着させ、試験具を得た。 この試験具を次の３種類の加工尿試料を用いて
試験した。各加工尿は、いずれも1.010の比重に
し、それぞれ０，8.3および25の多形核白血球
数／μl（PMN／μl）の白血球数に調製し、それぞ
れ“陰性”、“痕跡”および“陽性”と呼ぶことに
した。 本発明の試験具を、浸漬−読み取り型の試験具
の理解に経験がある６人の観察者が試験した。観
察者の判断の客観性を担保するため、加工尿試薬
には識別用ラベルを付さなかつた。各観察者は、
尿試料中に短時間試験具を浸漬し、取り出し、１
分、２分および３分間温置後、試験片の色変化を
観察した。 一方、比較検討用、すなわち、陰性（０
PMN／μl）、痕跡（8.3PMN／μl）および陽性
（25PMN／μl）のそれぞれに対応させて、前もつ
て作成した試験片内の顕色と比較するための、カ
ラー・チヤートを次のように作成した。本実施例
で得られた３つの上記試験具を白血球濃度が陰
性、痕跡および陽性の３つの各加工尿試料の１つ
に浸漬し、取り出し、２分間温置してから、現わ
れる色に注目した。次に、該試験具内の２分後の
顕色に対応せしめて、色標本ブロツクを作成し
た。 各色標本ブロツクには、次のような適当な数を
割り当てた。すなわち、10＝陰性、20＝痕跡、30
＝陽性とした。白血球濃度を知らされていない、
いわゆる盲試験に携わつた６人の観察者に、１つ
の或る特定の加工尿試料に試験具を浸漬し、取り
出した後、１分、２分および３分の間隔で各試験
片の色の読み取りを求めた。そこで、各観察者は
各加工尿試料について、各温置時間後の顕色に対
して、上述の数値を割り当てた。その結果を次表
に示す。

【表】 表から明らかな通り、１分後ですでに、白血球
濃度の相違によつて、色の差異が生じ、２分後に
は、顕著な差異を生じた。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式Ｒ−Ｏ−R′を有する色原体エステルであ
   つて、式中、Ｒが、エステラーゼもしくはエステ
   ラーゼ様のエステル分解反応によつてエステルが
   開裂した際に、検知可能な応答を生ずる部分を表
   わし、R′が窒素保護基を有するアミノ酸もしく
   はペプチド部分を表わすものと； ３−キヌクリジノールとから成ることを特徴とす
   る液体試験試料中のエステラーゼ活性の分析用組
   成物。 ２ Ｒがインドキシル基もしくはチオインドキシ
   ル基である特許請求の範囲第１項記載の組成物。 ３ Ｒがインドキシル基である特許請求の範囲第
   １項記載の組成物。 ４ R′がアミノ酸残基である特許請求の範囲第
   １項記載の組成物。 ５ R′がペプチド残基である特許請求の範囲第
   １項記載の組成物。 ６ R′がＮ−トシルアラニナートである特許請
   求の範囲第１項記載の組成物。 ７ 色原体エステルがインドキシル−Ｎ−トシル
   アラニナートである特許請求の範囲第１項記載の
   組成物。 ８ 組成物が、更に、１〜20個の炭素原子を有す
   るアルコールを含んで成る特許請求の範囲第１項
   ないし第７項のいずれかに記載の組成物。 ９ アルコールがデカノールである特許請求の範
   囲第８項記載の組成物。 １０ 組成物が、支持体マトリツクスに含まれて
   いる特許請求の範囲第１項ないし第９項のいずれ
   かに記載の組成物。