JPH03133989A - 新規なポリエーテル抗生物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ストレプトマイセス・／Ｘイグロスコニ サラに、本発明はＡ８０７８９のアシルエステル、アル
キルエーテルおよびアルキルエステル誘導体、およびそ
れらの塩に関する。抗生物質Ａ８０７８９は塩およびエ
ステル誘導体を形成することのできる酸官能基を有して
おり、またエステル化され得、またはエーテル誘導体を
形成することのできる少なくとも１つのヒドロキシ基を
有している。Ａ８０７８９のアシルエステル、アルキル
エーテルおよびアルキルエステル誘導体ならびに薬学的
に許容され得るそれらの塩は、抗生物質、および飼料−
利用効率を高める活性物質としても有用である。さらに
、Ａ８０７８９は殺虫および抗ウィルス活性をも有して
いる。

「アシルエステル誘導体」なる用語は、複数のヒドロキ
シ基の中の１つのヒドロキシ基における水素原子がＣ，
−Ｃ，アルカノイル基と置き換わっているＡ８０７８９
誘導体を意味する。

「アルキルエーテル誘導体」なる用語は、ヒドロキシ基
の１つまたはそれ以上がＹＲ基［ここに、ＹはＯまたは
Ｓであり、ＲはＣ，−Ｃ，アルキルまたはフェニル−Ｃ
，−Ｃ，アルキルである］と置き換わっているＡ８０７
８９誘導体を意味する。

「アルキルエステル誘導体」なる用語は、カルボキシ基
におけるヒドロキシがＣ１−Ｃ６アルコキシ基と置き換
わっているＡ８０７８９誘導体を意味する。

ｒＡ８０７８９化合物Ｊなる用語は、抗生物質Ａ８０７
８９［式（１）コ、アシルエステル誘導体、アルキルエ
ステル誘導体、アルキルエーテル誘導体またはそれらの
塩を示すために使用している。

本発明はさらに、抗生物質、および飼料−利用効率を高
める活性物質として使用するための、Ａ８０７８９化合
物の組成物および配合製剤に関する。組成物は、生理学
的に許容され得る担体と混合されたＡ８０７８９化合物
である。配合製剤とは、Ａ８０７８９化合物が以下に記
載の群から選択される化合物と組み合わされた組成物を
意味する： ａ）ニカルバジン、 ｂ）４．４−ジニトロ力ルバニリド、 Ｃ）式（■）： ３ ［式中、Ｒ１はＣ，−Ｃ，アルキルであり、Ｒ３１，ｔ
ハロゲン、Ｃ５−０４フルオロアルキル、Ｃ，−Ｃ，フ
ルオロアルコキシ、またはＣ，−Ｃ，フルオロアルキル
チオであり、 Ｒ４はハロゲンであり、 Ｒ５は水素またはハロゲンであり、 ｍは０．１または２であり、 ｎはＯまたはｌである。

ただし、Ｒ４置換分が存在する場合、それは２位以外の
位置にある。コ で示されるナフタレンアミン化合物、 ｄ）２．４−ジニトロ−Ｎ−［４−（トリフルオロメト
キシ）フェニル］−６−（トリフルオロメチル）ベンゼ
ンアミン、２，４−ジニトロ−Ｎ−［４−（１，１，２
，２＝テトラフルオロエトキシ）フェニルコー６−（）
リフルオロメチル）ベンゼンアミン、または２，４−ジ
ニトロ−Ｎ−［４−（ペンタフルオロエトキシ）フェニ
ル］−６−（、ｌ−リフルオロメチル）ベンゼンアミン
の中から選ばれるベンゼンアミン、またはｅ）（ｂ）か
ら（ｄ）における化合物の医薬的に許容され得る塩。

本発明の別の態様は、ストレプトマイセス・ハイグロス
コピクス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃ
ｏｐｉｃｕｓ）［ＮＲＲＬ　　１８５１３］株、または
Ａ８０７８９を産生するその突然変異体を、液中での好
気的条件下で、抗生物質が実質的なレベルにまで産生さ
れるまで培養することを特徴とする、Ａ８０７８９の生
産方法である。Ａ８０７８９は、発酵ブロスおよび菌糸
体から極性有機溶媒で抽出される。

Ａ８０７８９は、カラムクロマトグラフィーなどの手法
によって分離され、さらに精製される。

ストレプトマイセス・ハイグロスコピクスＮＲＲＬ　　
１８５１３は新たに発見された菌株であるので、本発明
はさらに、この微生物の生物学的に精製された培養物を
も提供するものである。

動物の健康製品は大きな需要がある。抗生物質は、疾患
を処置するためばかりでなく、動物の成長促進を促すた
めの、動物の健康製品の中でも（入熱として重要なもの
である。抗生物質は、疾患を減少させ、または飼料−利
用効率を高めることによって、成長を促進させることが
できる。

家禽産業に重大な打撃を与える疾患の１つにコクシジウ
ム症がある。コクシジウ、ム症は１つまたはそれ以上の
アイメリア属（Ｅｉｍｅｒｉａ）またはイソスポラ属（
１ｓｏｓｐｏｒａ）の感染によって引き起こされる。コ
クシジウム症に由来する経済的損失は絶えないので、依
然、改良された抗−コクシジウム症剤は要求されている
。

飼料−利用効率を高めることによって成長を促進させる
ことは、経済的に望ましい、獣医科学におけるもう１つ
の目的である。このタイプの成長促進は、ウシなどの反
別動物、および家禽、ブタなどの単胃動物にとって特に
重要である。

動物の健康領域において特に重要であった一群の抗生物
質はポリエーテル抗生物質である。例えば、ポリエーテ
ル性モネンシンは価値ある商品である：これは家禽にお
けるコクシジウム症の処置、および動物における飼料−
利用効率の増大の両方のために使用される。

新規なポリエーテル抗生物質Ａ８０７８９、そのアシル
エステル、アルキルエステルおよびアルキルエーテル誘
導体、およびそれらの塩は抗菌性および抗コクシジウム
症物質として有用であり、動物における飼料−利用効率
を高める。ストレプトマイセス・ハイグロスコピクスＮ
ＲＲＬ　　１８５１３を培養することに基づ＜Ａ８０７
８９の製造方法、およびＡ８０７８９化合物とニカルバ
ジン、４．４°−ジニトロ力ルバニリド、特定のナフタ
レンアミンおよびベンゼンアミン化合物との配合製剤が
さらに提供される。

抗生物質Ａ８０７８９（ＴＡ８０７８９Ｊ）は、ポリエ
ーテル抗生物質の種類に属すものである。ウェストレイ
［Ｊｏｈｎ　Ｗ、Ｗｅｓｔｌｅｙの「ポリエーテル抗生
物質：天然に存在する酸イオノフオア、１巻、Ｂ１０１
０ｇ＞’＋　Ｊマーセル・デッカー：ニューヨーク、１
９８２］は、存在するポリエーテルをクラスおよびタイ
プに基づいて分離した。ウェストレイの方法によれば、
Ａ８０７８９は、１つのスピロケタール系を有している
ので、クラスｌｂ、タイプ（１）のポリエーテルの種類
に位置付けられる。この種類の他の抗生物質としては、
Ａ３０１９０（米国特許第４．５８２．８２２号）、Ａ
−２８６９５ＡおよびＢ（米国特許第３．８３９．５５
８号）、Ａ２０４１および■（米国特許第３．７０５．
２３８号）、エセロマイシン（ｅｔｈｅｒｏｍｙｃｉｎ
）、ＣＰ−４７，４３４、ＲＰ３７４５４およびＸ−１
４８６８抗生物質がある。

「アルキル」なる用語は、直鎖状または分枝鎖状のＣ，
−Ｃ，炭化水素、例えばメチル、エチル、プロピル、イ
ソプロピル、ｎ−ブチル、Ｓ−ブチル、ｔ−メチル、ペ
ンチル、インペンチル、またはヘキシルを意味する。好
ましくは、「アルキル」とは、直鎖状または分枝鎖状Ｃ
，−Ｃ，炭化水素、例えばメチル、エチル、プロピル、
イソプロピル、ｎ−ブチル、Ｓ−ブチル、またはｔ−ブ
チルを意味する。

ｒｃ、−ｃ、アルコキシ」およびｒｃ、　　Ｃ３アルコ
キシ」なる用語は、酸素原子と結合している、それぞれ
上述のＣ，−Ｃ，アルキル基またはＣｌＯ３アルキル基
を意味する。好ましくは、Ｃ，−Ｃ、アルコキシ基は、
メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ｉ−プロポキシ、ブ
トキシ、Ｓ−ブトキシ、１−ブトキシ、ペントキシ、ｉ
−ペントキシ、およびヘキソキシなどである。Ｃ，−Ｃ
３アルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシ、プ
ロポキシおよびｉ−プロポキシかある。

「フェニル」なる用語は、ベンゼン環における１つまた
はそれ以上の水素原子が、Ｃ，−Ｃ，アルキルによって
置換されていることある芳香環、例えば４−メチルフェ
ニル、２−メチルフェニル、２゜４−ジメチルフェニル
または３，４−ジメチルフェニル、ハロゲンによって置
換されていることある芳香環、例えば４−クロロフェニ
ル、４−ブロモフェニル、２−クロロフェニル、２−ブ
ロモフェニル、２．４−ジクロロフェニルまたは２，４
−ジブロモフェニル、およびＣ，−Ｃ，アルコキシによ
って置換されていることある芳香環、例えば４−メトキ
シフェニルまたは２−メトキシフェニルを意味している
。

４位が置換されているものが好ましく、例えば４−クロ
ロフェニル、４−ブロモフェニル、４−メチルフェニル
、または４−メトキシフェニルが好ましい。

ｒｃ、Ｃ７アルカノイル基」なる用語は、カルボニル基
に結合している、上述の直鎖状または分枝鎖状Ｃ，−Ｃ
，アルキル基を意味する。カルボニルに結合するアルキ
ル基がＣ，−Ｃ，アルキル基の場合が好ましい。好まし
いアルカメイル基としては、アセチル、プロピオニル、
ｎ−ブチリル、およびＳ−ブチリルが挙げられる。

Ａ８０７８９の特性値 抗生物質Ａ８０７８９は、構造が式（１）として帰属さ
れた（これは質量スペクトルおよびＮＭＲ試験に基づい
ている）。Ａ８０７８９（その遊離酸形態）は以下の特
性を有している 状態：白色結晶 融点：１１５−１１７℃または］　１８−１２０６Ｃ１
溶媒和の程度に応じて変動する 分子量：　８８４（電界脱離質量スペクトル）実験式：
　Ｃ４？Ｈ１ｌＧＯＩ５ Ｕｖ；末端の吸収のみ ｒＲ（ＣＨＣｆｆ３）：第１図；以下の波数に吸収を示
す（ｃｘ−リ：３０２０，２９７８．２９５２．２９３
４．２８８０．１７３５．１６９５．１６０３．１４６
０．１３８０．１２９０．１１６７．１１０１．１０６
９．１０４３．１００２．９８３、および９５５ 溶解性：水に不溶、メタノールなどの低級アルコール、
アセトンなどのケトン類、酢酸エチルなどのエステル類
、クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素、およびジエ
チルエーテル、ベンゼン、トルエン、および温ヘキサン
などの炭化水素に可溶 抗生物質Ａ８０７８９を産生する、本発明の新規な微生
物は、便宜上、Ａ８０７８９培養物と呼ぶことにする。

Ａ８０７８９培養物は、ニューギニアのマニオカ（Ｍａ
ｎｉｏｋａ）から採取した土壌から単離された。

Ａ８０７８９−産生生物の培養物は、／−ザン・リージ
ョナル・リサーチ・センター、アグリカルチャル・リサ
ーチ、ノース・セントラル・リージョン、１８１５　　
ノース・ユニバージティー・ストリート、ベオリア、イ
リノイス、６１６０４に寄託され、そのストック・カル
チャー・コレクションを構成しており、受託番号ＮＲＲ
Ｌ　　１８５１３のもと、公に入手可能となっている。

Ａ８０７８９培養物の分類学的研究では、その微生物は
、ストレプトマイセス属の新規な株であることが示され
ており、ストレプトマイセス・ハイグロスコピクスなる
名称が提案されている。この分類研究は、類似した種と
の研究所比較、およびＡ８０７８９培養物の特性と、開
示されている類似種の特性との比較を基礎とするもので
ある。

採用した方法 これらの研究は、ストレプトマイセス種の特性化のため
の国際ストレプトマイセス企画（ＩＳＰ）により推奨さ
れている方法によって行った［シェージングら（Ｅ、　
Ｂ、　Ｓｈｉｒｌｉｎｇ　ａｎｄ　Ｄ、　Ｇｏｔｔｌｉ
ｅｂ）の「ストレプトマイセス種の特性化方法Ｊ　、　
Ｉｎｔ、　Ｊ、　５ｙｓｔ。

Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　、　１６：３１３−３４０（１
９６６）］。

澱粉加水分解は、ｌ５ＰＮｏ、４（無機塩−澱粉寒天）
プレート上において澱粉の存在をヨードによって試験し
て測定した。

ＮａＣｌ２耐用性は、ｒｓＰＮｏ、２寒天にＮａＣ（１
を加えて所望の濃度と等しくすることによって測定した
。

ＩＣ３Ｓ−ＮＢＳセントロイド色チャート、標準状ｆｐ
Ｎｏ、　２１０６［ナショナル・ブレア・オブ・スタン
ダード（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｂｕｒｅａｕ　ｏｆＳｔａ
ｎｄａｒｄｓ）、１９５８、米国商務省、ワシントンＤ
、　Ｃ，］、および色調マニュアル（Ｃｏｌｏｒ　Ｉｌ
ａｒｍｏｎｙ　Ｍａｎｕａｌ）［４版、コンテナー・コ
ーポレーション・オブ・アメリカ（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ
　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｍｅｒｉｃａ）、
シカゴ、イリノイス、　１９５ｇ］を使用し、裏側と気
中菌糸とにそれぞれ色名を割り当てた。

多形性は、光学顕微鏡を使用して試験した。走査電子顕
微鏡（ＳＥＭ）を使用し、胞子表面の色斑を調べた。

全細胞の加水分解産物における炭水化物およびジアミノ
ピメリン酸（ＤＡＰ）の異性体は、ベッカ−（Ｂｅｃｋ
ｅｒ）らのクロマトグラフィー法［Ｂ、　Ｂｅｃｋｅｒ
。

Ｍ、　Ｐ、　ＬｅｃｈｅｖａｌｉｅｒＳＲ，Ｅ、　Ｇｏ
ｒｄｏｎおよびＨ，Ｅ、　Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒの［
全細胞加水分解産物のペーパークロマトグラフィーによ
るノカルジアおよびストレプトマイセスの迅速識別Ｊ、
　Ａｐｐｌ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　、　１２：４２
１−４２３（１９６４）］、およびレチェバリーの［Ｍ
、　Ｐ、　Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ、およびＨ８Ｅ、　
Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒｓ　ｒ好気性アクチノマイセテ
スの識別規範としての化学組成Ｊ、Ｉｎｔ、Ｊ、５ｙｓ
ｔ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　２０＋４３５−４４３（
１９７Ｇ）に基づいて確立した。

抗生物質に対する耐性は、抗生物質感受性ディスクを、
接種したｌ５ＰＮｏ、２寒天平板の表面にパッディング
することによって測定した。耐性は、阻害ゾーンが全く
認められなかった場合に、（＋）と評価し、阻害ゾーン
が認められた場合に、（−）と評価した。

類メラニン（メラノイド）色素の産生能（色素産生性）
は、ｌ５ＰＮｏ、ｌ（）リプトン−酵母エキスブロス）
、Ｉｓｐ　　Ｎｏ、６（ペプトン−酵母エキス鉄寒天）
、およびｌ５ＰＮｏ、７（チロシン寒天）を使用して測
定した。

培養特性 Ａ８０７８９培養物は天然培地および規定培地の両方で
良好に成育する。気中菌糸の塊の色は、茶−灰色から赤
−茶色まで種々様々であり、白色の培地もあった。湿っ
た黒色（吸湿性）のバッチがｌ５ＰＮｏ、３培地上に観
察された。裏側は黄色−茶色であった。可溶性色素は観
察されなかった。Ａ８０７８９培養物の培養特性は、以
下の第１表に記載している。

形態学的特徴 Ａ８０７８９培養物は大量の基底菌糸を産生ずる。気中
菌糸は、３−５個のフィルからなる長いコンパクトな、
断片に分かれていないラセン体を産生ずる。これら断片
に分かれていない、皺のある胞子の表面が、ストレプト
マイセス・ハイグロスコピクスのタイプ１の細胞表面の
特徴である［ディーラら（Ａ、Ｄｉｅｔｚ　ａｎｄ　Ｊ
、Ｍａｔｈｅｗｓ）の［炭素複製■（Ｃａｒｂｏｎ　Ｒ
ｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ＩＩ）に基づく分類学」、スト
レプトマイセス・ハイグロスコピクスのさらに８個の培
養物の研究、Ａｐｐｌ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　、　
１６：９３５−９４１（１９６ｇ）コ。

鼻土嚢 各種寒天平板におけるＡ８０７８９の培養特性ａｌ寒天
培地　　　　　　　　Ａ８０７８９第１表（続き） 各種寒天平板におけるＡ８０７８９の培養特性ａｌ寒天
培地　　　　　　　　　Ａ８０７８９Ｒ：　　７４．ｓ
、ＹＢｒ へｍ：良好：２ｂ淡黄色 Ｒ：　９ｏ、ｃｙ、黄色 ＡＩｌ：良好：ｂ白色 Ｒ：　１１０．ｇｙ、オリーブ ＾ｍ二良好：　３ｉｇ　ｇｙ、　ｙ、　Ｂｒ（Ｅｍｅｒ
ｓｏｎ’　ｓ） Ｒ：　　７０．１．ＯＹ Ａｍ：相当量：ａ白色 Ｒ：　　７２．ｄ、ＯＹ Ａｍ・良好：　５ｆｅ　１．　ｇｙ、　ｒＢｒ（Ｃｚａ
ｐｅｋ’　ｓ） Ｒ：　　７６．１．ｙＢｒ へｍ：相当量：ｂ白色 Ｒ：　　７２．ｄ、ＯＹ へｍ：相当量：ｂ白色 ペースト・ オートミー Ｒ：　　７７、ｍ、ｙＢｒ へｍ：相当量：ａ白色 Ｒ：　５５．ｓ、茶色 ＾ｍ：良好：　２ｄｃ　ｙ灰色 ニンン／ Ｒ：　８７．ｍ、黄色 へｍ：相当量＝ｂ白色 の特性 ｂ）　Ｇ−成育、Ｒ＝裏、Ａｍ ５ｐ−可溶性色素。

気中菌糸体、 の特性 ｂ）Ｇ＝成育、Ｒ−裏、Ａｍ＝気中菌糸体、Ｓｐ＝可溶
性色素。

寒天培地 （Ｊｅｎｓｅｎ’　ｓ） アスパラギ ン ル・ グリシン デキストロ ース カルシウム 第１表（続き） ８０７８９ Ｒ：　１１２．１．オリーブ灰色 Ａｍ：相当量：　５ｆｅ　１．　ｇｙ、　ｒＢｒＲ：　
９０．ｇｙ、黄色 Ａｍ：相当量：ａ白色 Ｒ：　８８．ｄ、黄色 Ａｍ：なし Ｒ：　　７２．ｄ、ＯＹ Ａｍ：微量（縁）；ａ白色 Ｒ：　　７７、Ｍ、ｙＢｒ ＡＩｌ：なし の特性 ｂ）Ｇ＝成育、Ｒ＝裏、Ａｍ＝気中菌糸体、Ｓｐ＝可溶
性色素。

生理学的特徴 Ａ８０７８９培養物は以下の炭水化物を利用して酸を産
生じた：アドニトール、アラビノース、セロビオース、
Ｄ−フルクトース、Ｄ−ガラクトース、グルコース、グ
リセロール、グリコーゲン、ｉ−イノシトール、イヌリ
ン、ラクトース、Ｄ−マルトース、Ｄ−マンニトール、
Ｄ−マンノース、Ｄメレチトース、Ｄ−メリビオース、
ラフィノース、Ｌ−ラムノース、酪酸ナトリウム、サリ
シン、シュクロース、Ｄ−トレハロース、およびＤ−キ
シロース。Ａ８０７８９培ｉ物は、セルロース、デキス
トリン、ドエルシトール（ｄｕｌｃｉｔｏｌ）、エタノ
ール、ｉ−エリスリトール、α−メチル−Ｄ−グルコシ
ド、Ｄ−リボース、ソルビトール、Ｌ−ソルボース、お
よびキシリトールを利用することができなかった。

Ａ８０７８９培養物は１５−３７°Ｃの温度範囲で成育
した。最適な成育温度は２５℃のようであった。本培養
物は、ＮａＣｌ２レベル５％以下まで耐性を示した。

Ａ８０７８９培養物はカタラーゼを産生し、澱粉を加水
分解した。本培養物は硝酸塩を還元せず、またはメラニ
ン様色素を産生じなかった。

Ａ８０７８９培養物は、リンコマイシン（２μｇ）ペニ
シリンＧ（１０単位）、およびリフアンビン（５μｇ）
に耐性であった。本培養物は、バシトラシン（１０単位
）、セファロチン（３０μｇ）、ゲンタマイシン（１０
μｇ）、ネオマイシン（３０μｇ）、オレアンドマイシ
ン（１５μｇ）、ストレプトマイシン（１０μｇ）、テ
トラサイクリン（３０μｇ）、トブラマイシン（１０μ
ｇ）、およびバンコマイシン（３０μｇ）に対して感受
性であった。

細胞壁分析 加水分解された全細胞は、ＬＬ−ジアミノピメリン酸を
含有していた。この全細胞抽出物中には、診断上の糖は
検出されなかった。したがって、へ８０７８９培養物は
タイプ夏の細胞壁およびＮ。

Ｃ１糖のパターンを有している［エム・ピー・レチェバ
リー（Ｍ、　Ｐ、　Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ）およびエ
イチーＬ／チエバリー（Ｉｌ、　Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅ
ｒ）のＩｎｔ、　Ｊ、　５ｙｓｔ、　ＢａｃＬｅｒｉる
、「好気的放線菌の分類における判定基準としての化学
組成」］。

Ａ８０７８９培養物の同定 Ａ８０７８９培養物における化学分類学的性質ならびに
一般的培養および多形的特性は、この菌株がストレプト
マイセス属に帰属されることを支持していた［スカーマ
ンら（Ｖ、Ｂ、Ｄ、Ｓｋｅｒｍａｎ、　Ｖ、ＭｃＧＱＷ
ａｎ＋　およびＰ、　１１．＾、　５ｎｅａｔｈ）のＡ
ｍｑｒｉｃａｎ　５ｏｃｉｅｔｙｆｏｒ　Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌｏｇｙ、ワシントン、　Ｄ、　Ｃ，１９８０にお
ける［細菌名の承認された目録］。類似菌株の分類を文
献で比較すると、Ａ８０７８９培養物はストレプトマイ
セス・ハイグロスコピクスｎｃｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ）［ジエンセン（Ｊｅ
ｎｓｅｎ）　１９３１．　　ワンクスマンおよびへンリ
ッヒ（Ｗａｋｓｍａｎ　ａｎｄ　ｌ１ｅｎｒｉｃｉ）１
９４８］に最も類似しており、したがってこの株として
分類した。Ｓ、ハイグロスコピクスの文献上の特性とＡ
８０７８９培養物のそれとを以下の第２表に示して比較
する。

第２表 第２表（続き） 気中菌糸の色 裏側の色 多形性 菌糸鎖の長さ 菌糸表面 菌糸形状 メラニン様色素 炭素利用性： グルコース アラビノース キシロース イノシトール マンニトール フルクトース ラムノース シュクロース ラフィノース 灰色　　　　灰色 黄茶色　　　黄茶色 Ｓ 長いコイル長いコイル しわ有り　　しわ有り 非断片化　　非断片化 ガラクース　　　　　　　　　＋　　　　十すリシン　
　　　　　　　　＋　　　　十ンルボース ＮａＣＱ耐用性（％）５７ 吸湿性表面　　　　　　　　　十　　　　＋他の微生物
の場合と同様、本発明のＡ８０７８９産生培養物、スト
レプトマイセス・ノ＼イグロスコピクスＮＲＲＬ　　１
８５１３は、その特性が変化することがある。この菌株
の突然変異体は当業界既知の方法、例えば紫外線、Ｘ線
、ガンマ線など、およびＮ−メチル−Ｎｏ−ニトロ−Ｎ
−二トロングアニジンなどの化学物質のような、種々の
物理学的および化学的突然変異誘発原による処理により
、得ることができる。Ａ８０７８９の産生特性を保持し
ている、天然の、および誘導されたストレプトマイセス
・ハイグロスコピクスＮＲＲＬ　　１８５１３の突然変
異は、本発明の一部を構成していＡ８０７８９の生産 ストレプトマイセス・ハイグロスコピクス培養物を増殖
させるために用いる培養培地は多くの培地のうちの任意
の１つであり得る。しかし、生産コスト、最適な収量お
よび生産物の単離の容易さの為に、好ましい特定の培養
培地がある。例えば、大規模発酵における炭素源として
、キシロース、ガラクトース、マンノース、マンニトー
ル等を使用することができるが、グルコースが好ましい
炭素源である。

窒素源としては、バタトーペブトン［デイフコラボラト
リーズ（Ｄｉｆｃｏ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、Ｍ
ｌ、ブトロイｌ−］が好ましいが、酵素で加水分解され
たカゼイン、酵母、肝臓ミール、牛肉ペプトン、魚肉ミ
ール等も使用することができる。培養培地に添加するこ
とのできる栄養性無機塩としては、亜鉛イオン、ナトリ
ウムイオン、マグネシウムイオン、カルシウムイオン、
アンモニウムイオン、塩素イオン、炭酸イオン、硫酸イ
オン、硝酸イオン等のイオンを生成することができる、
慣用されている可溶性塩が挙げられる。

微生物の増殖および生育に必要な必須微量元素も培養培
地に含有させるべきである。このような微量元素は、一
般には、培地の他の成分中に不純物として含まれており
、それは微生物の増殖条件に合うに十分な量である。通
常は起泡が問題となることはないが、要すれば、大規模
の発酵培地にポリプロピレングリコールのような消泡剤
を少量（すなわち、０　、５　ｘ（１／（１＞添加して
もよい。

Ａ８０７８９抗生物質を実質量製造するためには、タン
ク内における液中好気的発酵が好ましい。

少量のＡ８０７８９抗生物質は振盪−フラスコ培養によ
って得ることができる。通常、大型タンクに微生物の胞
子を接種すると、抗生物質生産にタイムラグが生じるの
で、好ましくは栄養性（植物性）接種物を用いる。この
栄養性接種物は、少量の培養培地に、微生物の胞子また
は菌糸体フラグメントを接種することにより製造され、
こうすれば微生物が新鮮で活発に生育している培養物が
得られる。次いで、得られた栄養性接種物を大型タンク
に移す。この栄養性接種培地は大型発酵で用いる培地と
同じであってもよいが、他の培地も好適である。

Ａ８０７８９は、Ａ８０７８９を産生する微生物を約１
５°Ｃ〜約４０℃の温度で増殖させることにより産生さ
れる。Ａ８０７８９産生の最適温度は約３０℃であると
思われる。

液中の好気的培養法では通常行うように、普通のタービ
ン回転翼により培地を撹拌しながら、無菌空気を底部か
ら容器内へ吹き込む。ここまで使用してきた条件下では
、発酵物の最大酸素摂取量が約０．２ｍＭ／Ｌ／分を越
えることはなかった。

ブロス約１１０リツトルを含有する完全にバッフル調節
された１６５リツトル容量の発酵槽中では、０．３４気
圧、約４５％またはそれ以上の空気飽和度において溶存
酸素のレベルを維持するには、撹拌速度３００　ｒｐｎ
＋の通気速度０．　ｌ　２５ｖ／ｖ／ａ＋で十分である
。

Ａ８０７８９抗生物質の生産性は、ブロス試料を、この
抗生物質に対して感受性があることが知られている微生
物に対する抗菌活性について試験することにより、発酵
の間中追跡することができる。１つの有用な検定微生物
は、バチラス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂ
ｔｉｌｌｉｓ）（枯草菌）Ａ　Ｔ　ＣＣ６６３３である
。このバイオアッセイは、寒天−ウェル（ｗｅｌｌ）拡
散試験により簡便に行われる。

液中好気的発酵条件下でこれらＡ８０７８９抗生物質が
産生されたなら、発酵の技術分野において用いられる方
法によって、発酵培地からＡ８０７８９を回収すること
ができる。Ａ８０７８９産生微生物の発酵中に生み出さ
れる抗生物質活性は濾過ブロスおよび菌糸塊の両者の中
に存在している。Ａ８０７８９は、しかし、菌糸塊から
ブロスを分離するためにまず始めに培地を濾過すること
によって、最大に回収される。次いで、濾過ブロスおよ
び菌糸塊を別々に精製すれば、Ａ８０７８９をそれぞれ
の分量で得ることができる。この精製には種々の方法を
採用することができる。濾過ブロスを精製するための好
ましい方法では、それをｐＨ約９に調節し、例えば酢酸
エチルなどの適当な溶媒によって抽出することが必要で
ある。次いで、抽出溶媒を減圧蒸留し、ブロス部分の八
８０７８９を得ればよい。

菌糸塊を精製するための好ましい方法は、分離した菌糸
の濾過ケーキを例えばアセトンなどの適当な溶媒で抽出
することである。次いで、得られた抽出溶媒を減圧蒸留
し、濃縮された水溶液を（’４る。次いで、この水溶液
のｐＨを約９に調節し、酢酸エチルなどの適当な溶媒で
抽出する。次いで、その抽出溶媒を減圧下に濃縮し、菌
糸部分のＡ８０７８９を得る。

さらにブロスおよび菌糸部分のＡ８０７８９を類似の方
法によって精製する。好ましい方法はシルカゲルクロマ
トグラフィー法に関連する。

別法においては、培地成分および菌糸体を包含する培養
固形物を抽出または分離せずに使用することができるが
、この場合、水の除去後にＡ８０７８９供給源として使
用するのが好ましい。例えば、Ａ８０７８９産生後、全
発酵ブロスは凍結乾燥、ドラム乾燥または共沸蒸留と乾
燥により、乾燥させることができる。次いで、得られた
乾燥ブロスをそのまま飼料プレミックスと混合する。

Ａ８０７８９化合物 八８０７８９の塩およびその誘導体の塩は、抗生物質の
分離精製に有用である。製薬的に許容され得る塩類は特
に有用である。しかし、製薬的に許容され得ない塩類で
あっても、Ａ８０７８９化合物の精製、例えば結晶化に
有用であるものがある。

動物を処置する場合は、化合物またはその誘導体の遊離
の本体または塩のいずれを使用しようとも、通常はたい
して重要でない。しかし、経済的、簡便性または毒性の
観点から、塩の形態を選択するのがよい。

Ａ８０７８９のアルカリ金属およびアルカリ土類金属の
陽イオン塩は、陽イオン塩を製造するために通常使用さ
れる方法によって製造される。例えば、Ａ８０７８９の
遊離酸を、アセトンなどの適当な溶媒に溶解し、水１／
３容量を加え、その溶液のｐＨを所望の陽イオン塩（例
えばＮａＯＨ。

ＫＯＨ）の塩基によって約９〜ＩＯに調節する。

このようにして形成された塩は、濾過または溶媒留去な
どの常法によって単離することができる。

塩を作成するための好ましい方法は、Ａ８０７８９（酸
形態）を酢酸エチルなどの水−非混和性溶媒に溶解し、
等量の水を加え、得られた混合物のｐＨを対応する陽イ
オン塩基（例えばＮａＯＨ，ＫＯＨなど）によって１０
に調節する。分離した有機層を水で洗浄し、濃縮乾固す
る。得られた残渣をジオキサンから凍結乾燥する。塩は
適当な溶媒混液、例えばアセトン／水から結晶化させる
ことができる。

有機アミンから作成される塩も同様に製造することがで
きる。例えば、ガス状または液状のアミンを、Ａ８０７
８９のアセトンなどの適当な溶媒中溶液に加えればよく
、次いで留去により溶媒および過剰のアミンを除去すれ
ばよい。

代表的かつ好適なＡ８０７８９のアルカリ金属およびア
ルカリ土類金属塩には、ナトリウム、カリウム、リチウ
ム、セシウム、ルビジウム、バリウム、カルシウム、お
よびマグネシウム塩などがある。

Ａ８０７８９のアミン塩には、アンモニウムおよび１級
、２級および３級Ｃ，−Ｃ，アルキルアンモニウムおよ
びヒドロキシ−Ｃ，−Ｃ，アルキルアンモニウム塩など
がある。好ましいアミン塩は、水酸化アンモニウム、メ
チルアミン、５ｅａ−ブチルアミン、イソプロピルアミ
ン、ジエチルアミン、ジ−イソプロピルアミン、エタノ
ールアミン、トリエチルアミン、３−アミ／−１−プロ
パツールなどとＡ８０７８９を反応させることによって
作成される。

Ａ８０７８９のアシルエステル誘導体は、Ａ８０７８９
を対応する酸無水物または酸クロライドで処理すること
により製造される。エステル化は、Ａ８０７８９のヒド
ロキシ基の中の１つで起こる。

このようなニス・チルは通常、Ａ８０７８９を例えば対
応する酸無水物と室温で反応させることにより製造され
る。

好ましいＡ８０７８９アシル工ステル銹導体は、１つま
たはそれ以上のヒドロキシ基における水素原子が、アセ
チル、プロピオニル、インブチリルまたはブチリルによ
って置換されているものである。

Ａ８０７８９アルキル工ステル誘導体は、常法によって
カルボキシ基をエステル化して製造される。好ましいア
ルキルエステルは、メチル、エチル、プロピル、イソプ
ロピルおよびブチルエステルである。Ａ８０７８９アル
キル工ステル誘導体は通常、インビトロで使用した場合
、活性が低い。

しかし、動物に投与した場合、このようなエステルは、
インビボ（生体内）においてＡ８０７８９に変換するプ
ロドラッグとして機能することができる。

好ましいＡ８０７８９工−テル誘導体は、Ｙが０である
化合物である。このエーテル誘導体は、Ａ８０７８９ま
たはその塩を対応する１級アルコールまたはチオールと
反応させることによって製造される。

ある種の出発アルコールまたはチオールは、酸触媒を反
応物に加えることを必要とする場合がある。好適な触媒
は、塩化水素酸、硫酸、メタンスルホン酸、ベンゼンス
ルホン酸、トルエンスルホン酸、二酸化セレニウム、お
よびトルフルオロ化ホウ素などである。

反応を促進するためには、例えば水、アセトン、ベンゼ
ン、エーテル、テトラヒドロフランまたはジオキサンな
どの溶媒を加えれば良い。一般に、反応は室温で起こる
が、それよりも高い温度で行うこともできる。

本発明の化合物を得るには、通常の反応処理法で十分な
場合があるが、さらに精製する必要がある場合もある。

このような精製法は、例えばカラムクロマトグラフィー
、薄層クロマトグラフィー分別品出などの周知の方法に
よって行うことができる。

Ａ８０７８９化合物は抗菌性および抗コクシジウム活性
を有している。Ａ８０７８９化合物は特に、嫌気性菌に
対して活性を示す。Ａ８０７８９抗生物質が種々の細菌
を抑制する最小発育阻止製筒３表（続き） 度（ＭＩＣ’ｓ）を以下の第３表および第４表に示す。

この第３表および第４表におけるＭＩＣは標準的な寒天
−希釈検定法により測定したものである。

２４時間インキュベートした後に終点を判読した。

第 表 （ＳＬｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ
）第３表（続き） 第 表 試験微生物 ＭＩＧ（μｇ／１１１２） （Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ａ
） エンテロコツカス・ファエシウムＸ　６６　（Ｅｎｔｅ
ｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍＸ６６）として分類し直されている。

ｂ） エンテロコツカス・ファエシウム２０４■ として分類し直されている。

（ＢａｃＬｅｒｏｉｄｅｓ　ｆｒａｇｉｌｉｓ）第４表
（続き） 嫌気性菌 ＭＩＣ（μｙ／ｌｎの 抗コクシジウム活性はＡ８０７８９化合物の重要な性質
である。例えば、アイメリア・テネラ（Ｅｉｍｅｒｉａ
　ｔｅｎｅｌｌａ）に対するインビトロ組織−培養スク
リーニングでは、Ａ８０７８９は０．３１ｇｇ／ｚρで
活性であった。食餌実験（ｆｅｅｄｉｎｇ　ｅｘｐｅｒ
ｉｍｅｎｔｓ）によって証明されるように、若ニワトリ
の餌中に抗生物質Ａ８０７８９を１００　ｐｐｍという
低いレベルで存在させても、アイメリア・アセルブリナ
（Ｅｉｍｅｒｉａ　ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ）に感染され
たニワトリの損傷数が減少した。

本発明は他の態様として、コクシジウム症を処置するた
めの組成物を提供する。これらの組成物は、生理学的に
許容され得る担体と共にＡ８０７８９化合物を含有して
なる。家禽のコクシジウム症を処置するためには、抗コ
クシジウム症量のＡ８０７８９化合物を家禽が摂取する
飼料に供給するのが最も簡便である。Ａ８０７８９化合
物の投与割合は一般には、飼料巾約２２−２００ｐｐの
範囲であり、好ましくは約２２５−１Ｏ０ｐｐのｍとす
る。

Ａ８０７８９化合物の他の重要な性質は、動物の飼料−
利用効率の改善能である。例えば、へ８０７８９化合物
は、瘤胃機能の発達した反別動物の飼料−利用効率を高
める。飼料の利用効率は、米国特許第３．８３９．５５
７号においてアーサー・ピー・ラウン（Ａｒｔｈｕｒ　
Ｐ、Ｒａｕｎ）が記述した方法を用いて、瘤胃（第−胃
）内のプロピオネート化合物の製造および濃度を観察す
ることにより監視することができる。Ａ８０７８９化合
物は、約０．０２ｍｇ／ｋｇ／日から約１．５ｚｇ／ｋ
ｇ／日の割合で反別動物に経口投与した場合、プロピオ
ネート類を増加させ、したがって飼料の利用効率を高め
るのに非常に有効である。好ましい投与割合は、約０．
０５ｍｇ／ｋｇ／日から約０．５ｍｇ／ｋｇ／日である
。

本発明はさらに、飼料Ｍｌトン当たりＡ８０７８９化合
物約２−４０ｇを含有する、飼料利用率を高めるのに適
した飼料用組成物を提供する。

上述のように、Ａ８０７８９化合物は、クロストリジウ
ム・ベルフリンゲンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｐｅ
ｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）などの嫌気性菌に対して活性を示
す。

したがって、Ａ８０７８９化合物はニワトリ、ブタ、ウ
シ、およびヒツジにおける腸炎の処置および予防に有益
であり、または反別動物の腸内毒素中毒の処置に有益で
あるはずである。

Ａ８０７８９はまた、抗ウィルス活性も有している。例
えば、組織培養試験により、Ａ８０７８９は２ｘｇ／ス
Ｑのレベルで、ヘルペス（Ｈ８Ｖ［および■）、ワタシ
ニア（Ｖａｃｃｉｎａ）、グレート・レークス・インフ
ルエンザ、パラインフルエンザおよびライノウィルスに
対して、および＜０．０７８ｔｔｇｈＱで仮性狂犬病ウ
ィルスに対して活性であることが示されている。

Ａ８０７８９化合物は、経口または非経口的に動物に投
与することができる。Ａ８０７８９化合物をコクシジウ
ム症の処置のため、または飼料−利用効率を高めるため
の活性物質として投与する、最も実際的な手段は、飼料
供給物に製剤化することである。通常の乾燥飼料、液体
飼料、およびペレノ）飼料などの種々の飼料を使用する
ことができる。好ましい投与方法は、動物の飼料に混合
することであるが、池の方法、例えば錠剤、飲み薬、ホ
ーラス、またはカプセル剤とするような他の手段によっ
て投与することもできる。個々の投与剤形中位は、処置
する動物にとって適切な１日投与量に直接関連するＡ８
０７８９化合物量を含有すベきである。

動物用飼料に薬物を製剤化する方法は、周知である。好
ましい方法は、濃縮薬物プレミックスを調製し、次いで
それを使用して薬物添加飼料とする。Ａ８０７８９化合
物は飼料原料プレミックスとして製剤化することができ
る。［飼料原料プレミックス（ｆｅｅｄｓＬｕｆＴ　ｐ
ｒｅｍｉｘ）Ｊなる用語は、適切な食用担体、希釈剤、
または賦形剤と組み合わされたＡ８０７８９化合物の組
成物を意味し、それは要すれば、適当な結合化剤、抗ダ
スト剤などが混合されている。このような、担体および
Ａ８０７８９化合物の混合物は、好ましくは、約５−９
０重量％のＡ８０７８９化合物を含有し、より好ましく
は約１０−７０重世％である。通常のプレミックスは、
プレミックス１ポンド当たり約１約２００グラムの薬物
を含汀していればよい。プレミックスは液体または固体
：Ａ４物であり得る。

動物用飼料の最終的製剤法は、投与する薬物の量によっ
て異なり得る。飼料を製剤化、混合およびペレット化す
る通常の方法により、Ａ８０７８９化合物を含有する飼
料を調製すればよい。

Ａ８０７８９化合物は、獣医薬学の技術分野で容認され
ている方法によって、非経口的投与製剤に製剤化するこ
とができる。Ａ８０７８９化合物を含有する有効な注射
用組成物は、懸濁剤または溶液剤であり得る。溶液剤の
場合、Ａ８０７８９化合物を生理学的に許容され得る担
体中に溶解する。このような担体は、適当な溶媒、ベン
ジルアルコールなどの保存剤、要すれば緩衝液を含有す
るものである。有用な溶媒には例えば、アルコール、グ
リフール、または植物油もしくは高精製鉱油などの不活
性油がある。

注射用懸濁製剤は、担体としてアジュバントを用い、本
化合物についての非溶媒を使用し、調製する。非溶媒と
しては例えば、水、またはポリエチレングリコールなど
のグリコールを挙げることができる。

適当な生理学的に許容され得るアジュバントは、本発明
化合物を懸濁組成物中に懸濁させておくのに必要である
。このアジュバントは、カルボキシメチルセルロース、
ポリビニルピロリドン、ゼラチン、およびアルギン酸塩
のような各種濃縮剤から選択することができる。種々の
界面活性剤も本発明化合物を懸濁するのに使用すること
ができる。

レシチン、アルキルフェノール・ポリエチレンオキシド
付加物、ナフタレンスルホネート、アルキルベンゼンス
ルホネート、およびポリオキシエチレンソルビクンエス
テルは液体非溶媒中で懸濁化剤として用いられる。

液体非溶媒の親水性、密度、および表面張力に影響を与
える多くの物質は、個々の場合において、注射用懸濁剤
の製造に役立つことができる。例えば、シリコン消泡剤
、グリフール、ソルビトールおよび、シュガーは有用な
懸濁化剤となり得る。

Ａ８０７８９化合物は殺虫性物質としても有用である。

例えば、Ａ８０７８９はｌ　ＯＯｐｐｍという低いレベ
ルで成虫のイエバエに対して活性を示す。

Ａ８０７８９配合製剤 従来、多くの化合物が、１つまたはそれ以上のポリエー
テル抗生物質の抗コクシジウム症活性に対して好都合な
効果を有していることが見いだされている。例えば、ニ
カルバジンまたは４，４゜ジニトロ力ルバニリドおよび
ポリエーテル抗生物質を含有する相乗的抗コクシジウム
症配合剤が、カレンダーら（Ｍ、　Ｅ、　Ｃａｌ　１ｅ
ｎｄｅｒおよびＴ、　Ｋ、　Ｊｅｆ　ｆｅｒｓ）の米国
特許第４．２１８．４３８号に開示されている。グリフ
トンら（＾、　Ｊ、　Ｃ１１ｎｔｏｎおよびＧ、　０．
　Ｐ、　Ｏ’　Ｄｏｈｅｒｔｙ）は、特定のナフタレン
アミン類およびベンゼンアミン類がある種のポリエーテ
ル抗生物質の抗コクシジウム症活性に対して好都合な効
果を有していることを見いだした［それぞれ米国特許第
４．７６４．５３４号および第４．３６６、１６１１１
号を参照のことコ。

ニカルバジンおよび４．４’−ジニトロカルバニノドは
米国特許第２．７３１．３８２号に記載されている。

ニカルバジンは、４，４°−ジニトロ力ルバニリドと２
−ヒドロキシ−４，６−シメチルピリミジンとの複合体
であるが、４．４’−ジニトロ力ルバニリドしか抗コク
シジウム症活性を示さない［Ｓｃ　１ｅｎｃｅ、　１２
２＋２４４（１９５５）を参照］。

このように、本発明の別の種類に属す組成物は、家禽の
コクシジウム症を制御するための配合製剤であって、以
下のものを含有する： ａ）ニカルバジン、 ｂ）４．４’−ジニトロ力ルバニリド、Ｃ）式（■）； ３ ［式中、Ｒ１はＣ，−Ｃ，アルキルであり、Ｒ３はハロ
ゲン、Ｃ，−Ｃ，フルオロアルキル、Ｃ、−Ｃ，フルオ
ロアルコキシ、またはＣ，−Ｃ４フルオロアルキルチオ
であり、 Ｒ４はハロゲンであり、 Ｒ５は水素またはハロゲンであり、 ｍは０．１または２であり、 ｎはＯまたは１である。

ただし、Ｒ４置換分が存在する場合、それは２位以外の
位置にある。コ で示されるナフタレンアミン化合物、 ｄ）２．４−ジニトロ−Ｎ−［４−（）リフルオロメト
キシ）フェニル］−６−（）リフルオロメチル）ベンゼ
ンアミン、２．４−ジニトロ−Ｎ−［４−（１，ｌ、２
．２テトラフルオロエトキシ）フェニル］−６−（トリ
フルオロメチル）ベンゼンアミン、または２．４−ジニ
トロ−Ｎ−［４−（ペンタフルオロエトキシ）フェニル
］−６−（トリフルオロメチル）ベンゼンアミンの中か
ら選ばれるベンゼンアミン、またはｅ）　（ｂ）から（
ｄ）における化合物の医薬的に許容され得る塩。

上記ナフタレンアミン化合物、およ′びこのグループの
好ましい化合物の合成方法は、グリントンら（Ａ、　Ｊ
、　Ｃ１１ｎｔｏｎおよびＧ、　Ｏ，Ｐ、　ＯｏＤｏｈ
ｅｒｔｙ）の米国特許筒４．７６４．５３４号に開示さ
れている。

Ａ８０７８９化合物と化合物２（ａ）−（ｄ）との配合
製剤における成分は、配合製剤中、少なくとも１つのコ
クシジウム症原因微生物に対して微生物学的に活性であ
る量で使用する。一般には、この配合製剤で使用される
最大量は、個々の成分によって抗コクシジウム症を処置
する場合の最大量と同じである。下限は一般に、個々の
成分による治療に要求される量よりも低い。したがって
、本発明は、１）Ａ８０７８９化合物約２−約１１００
ｐＩ）％および２）ａ）ニカルバジン約５５−１２５ｐ
ｐ、ｂ）４，４°−ジニトロカルバニリド約２５＝約１
５０ｐｐｍ、　ｃ）ナフタレンアミン約ｌ−約１０００
　ｐｐｍ、またはｄ）ベンゼンアミン約ｌ−約１２５　
ｐｐｍヲ含有する飼料組成物を包含している。Ａ８０７
８９化合物は、ベンゼンアミン、ナフタレンアミンまた
はニカルバジンと共に投与した場合、特に有効である。

好ましい配合にかかる飼料組成物は、Ａ８０７８９化合
物約２−約２０　ｐｐｍをベンゼンアミン、ナフタレン
アミンまたはニカルバジン約５約８０ｐｐｍと共に含有
している。

本発明はさらに、飼料原料プレミックスとして製剤化さ
れた、上記の配合製剤をも提供するものである。このプ
レミックスは、第１の成分とじてＡ８０７８９化合物、
および第２の成分として２（ａ）−（ｄ）化合物の組合
わせ物から構成され、適当な食用担体をも含有している
。この組成物は、抗コクシジウム症配合製剤を約５−９
０重１％、好ましくは約１０−７０重量％含有している
。

以下に実施例を挙げて、本発明の実施をさらに十分に説
明する。

実施例１ 凍結乾燥させたペレットまたは液体窒素下で維持されて
いる懸濁液のいずれかの状態のストレプトマイセス・ハ
イグロスコピクス（ＮＲＲＬ　　１３５１３）を、下記
組成を有する種培地（ｓｅｅｄ　ｍｅｄｉｕｆｆｌ）に
接種した： 種培地 グルコース 可溶性澱粉 酵母エキス 酵素−加水分解カゼイン寡 Ｃａ　ＣＯ３ 脱イオン水 １．０ ２．０ ０．５ ０．５ ０．１ 適量加え、全量 を１．ＯＱに調製 未調節ｐＨ＝６．６；滅菌前にＮａＯＨを加えてｐ末Ｎ
ＺアミンＡ　（ＮＺ　Ａｍ１ｎｅ　Ａ）、シーフィール
ド・ケミカル・コーポレイション、ノーリッチ、ニュー
ヨーク〇 上記種培地に２％の寒天を加えることにより、斜面培地
（ｓｌａｎｔ）または平板培地（ｐｌａｔｅ）を調製し
た。接種した斜面培地を３０°Ｃで約ｔｏ−１４日間イ
ンキュベートした。成熟した斜面培養物を無菌器具によ
り掻き出し、胞子をばらばらにし、菌糸体のマットを取
り出した。このようにして得られたばらばらにされた胞
子約１／４量を、上記種培地と同じ組成の栄養培地５０
ｊ１１２に接種した。

接種した栄養培地を、２５０ＲＱ容量エーレンマイヤー
フラスコ中にて、２インチ（５，０８ｃｍ）の軌道内で
回転する回転振盪器を用い、２５０ｒｐｍ、３０°Ｃで
７２時間インキュベートした。

この接種した栄養培地（０，４１ｆ２）を、上記栄養培
地と同じ組成を有する第２段階栄養培地５Ｍに接種した
。

接種した第２段階栄養培地を、２インチの軌道内にて２
５　Ｏｒｐｍで回転する回転振盪器を用い、３０°Ｃで
１０−１２日間、２５０ｍ（！容量の広ロエーレンマイ
ヤーフラスコ中でインキュベートした。

Ｂ、Ａ８０７８９のタンク発酵法 大量の接種物を得るために、上記Ａ項に記載のようにし
て製造した接種栄養培地１０ｚρを、上記栄養培地と同
じ組成を有する第２段階栄養培地４００ｘ（ｌに接種し
た。得られた第２段階栄養培地を、２インチの軌道内に
て２５　Ｏｒｐｍで回転する回転振盪器を用い、３０°
Ｃで約４８時間、２ｇ容量の広ロエーレンマイヤーフラ
スコ中でインキュベートした。

このようにして調製されたインキュベートした第２段階
栄養培地ｌ［！（８０Ｍ）を、以下の組成を有する無菌
生産培地１１５Ｉ２に接種した。

生産培地 成　　分 ブラックストリ グルコール ペプトン１ ＣａＣＯ。

量（／Ｑ） ツブ糖蜜・　２０．０　ｇ １０．０ｇ ５．０ｇ ２、Ｏｇ 末、ｉＩ！節ｐＨ＝６．９；ｐＨの調整は行わない；滅
菌後ｐＨ＝７．０ 消泡剤を添加する；　Ｓ　ａｇ４７１Ｃ１（０，２ｇ／
のおよびＰ−２０００”（０５ｚρ／ρ） ａ）バクト・ペプトン（Ｂａｃｔｏ　Ｐｅｐｔｏｎｅ：
）Ｊデイフコ・ラボラトリーズ（Ｄｉｆｃｏ　Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｉｅｓ）、デトロイト、Ｍｌ］ ｂ）クザベックのミネラルストック（Ｃｚａｐｅｋ’ｓ
　Ｍｉｎｃｒａｌ　５ｔｏｃｋ）は、以下の組成を有す
る：ＫＣｆ２　　　　　　　　　　　１０％ＭｇＳ　Ｏ
４，７Ｈｔｏ　　　　　　１０％脱イオン水　　　　　
　　　適量加え、Ｉσに調整 ｃ）　Ｓａｇ４７１［ユニオン・カーバイド（Ｕｎｉｏ
ｎ　Ｃａｒｂｉｄｅ）、シスターズビル、ＷＶ］ ｄ）Ｐ−２０００［ダウ・ケミカルＣｏ、、ミツドラン
ド、Ｍ！コ この接種された生産培地を、温度３０°Ｃにて４から５
日間、１６５ｇ容量発酵タンク中で発酵せしめた。撹拌
されている容器中、低速の空気ｉ！＝Ｅ　（０、２５ｖ
／　ｖ／　ａ＋）および１５０−３０　Ｏｒｐｍにより
、溶存酸素レベルを空気飽和の４０％以上に維持した。

実施例２ Ａ８０７８９の単離 実施例１の記載に類似した方法により、２つの１００＆
容量タンクから調製した全発酵ブロスをまとめ（２００
Ｑ）、フィルター助剤として珪藻±［３％ハイフロース
−パーセル（Ｈｙｒｌｏ−３ｕｐｅｒｃｅｌ）、マンビ
ル・プロダクツＣｏｒｐ、　（Ｍａｎｖｉｌｌｅ　Ｐｒ
ｏｄｕｃｔｓ　Ｃｏｒｐ、　）、ロンパック　ＣＡ　９
３４３６］を用いてフィルター・プレスにより濾過し、
濾液１６２Ｑを得た。

菌糸体フィルターケーキをアセトンで２回抽出した（各
４０の。得られたアセトン抽出液をまとめ、約２０１２
容量になるまで減圧濃縮した。この濃縮物をブロス濾液
と一緒にした。得られた混合物のｐＨを５ＮＮａＯＨで
９に調節し、その溶液を２／３容量の酢酸エチルで抽出
した。酢酸エチル抽出液を減圧下に濃縮して残留物を得
た。

得られた残留物をトルエン（２５０１Ｉ２）に溶解し、
溶液を、トルエン中に充填した２リツトルのシリカゲル
を含有するカラム（ウォールム（ｌｌｌｏｅｌｍ）、７
０−１５０メツシユ）に適用した。そのカラムをトルエ
ン（１０リツトル）で洗浄し、トルエン；エタノール（
９８：２および９６：４を連続してそれぞれ１０すｙト
ル）で展開し、１リツトル分画を採取した。

Ａ８０７８９の溶出液を、バシラス・ズブチリスを使用
したバイオアッセイおよびＴＬＣ［シリカゲル平板（メ
ルク）、酢酸エチル、バイオアッセイまたはバニリン／
硫酸スプレーで検出、Ｒｒ値０．５５］によってモニタ
ーした。はとんどの八８０７８９を含有する分画（Ｎｏ
、　１５−２０）をまとめ、濃縮して浦とした。この油
をジオキサン（５０酎）に溶解し、凍結乾燥して粗製の
Ａ８０７８９をこれも浦として得た。

粗製のＡ８０７８９をクロロホルム（２５０３＋１２）
ニ溶解し、クロロホルム中に充填したシリカゲル（ウオ
ールレス、７０−１５０メツシニ）２リットルを含有す
るカラムに適用した。そのカラムをクロロホルム（１０
リツトル）およびクロロホルム：アセトン［９７，５：
２．５．９５：５および９：ｌで用い、連続してそれぞ
れ１０リツトル］で洗浄し、次いでアセトンで洗浄して
１リツトルの分画を得た。

溶出液は、バイオアッセイまたはＴＬＣによってモニタ
ーした。はとんどのＡ８０７８９を含有する分画（Ｎｏ
、　１９−２９）をまとめ、濃縮して油とした。この浦
をジオキサン（１００，ｗｃ）に溶解し、凍結乾燥して
油または固形物としてＡ８０７８９（Ｎａ塩）を得た。

その残留物をアセトン（３００ＪＩのに溶解し、水（１
００Ｊ１１２）を加えた。ｌＮ塩酸を用いてその溶液の
ｐＨを３．０に調節し、さらに水（２００ｘＣ）を加え
た。得られた混合物を１５分間撹拌すると、沈殿が生成
した。

この沈殿物を濾過し、アセトン（３００ｍ１２）に溶解
し、水（３００ｚＱ）に加えて結晶化を促した。得られ
た結晶を濾過し、減圧下に乾燥して、白色結晶としてＡ
８０７８９（２，６ｇ）を得た（融点：１１５−１１７
°Ｃ）。第１図に、クロロホルム中、八８０７８９の赤
外吸収スペクトルを示す。また、第２図に、重水素クロ
ロホルム中、Ａ８０７８９のプロトン核磁気共鳴スペク
トルを示す。

実施例３ Ａ８０７８９（Ｎａ塩）の製造 実施例２のようにして、１０リツトル容量タンクから全
発酵ブロスを加工した。２回目のシリカゲルカラムから
得られた、Ａ８０７８９を含有する分画をまとめ、減圧
下に濃縮して残留物を得た。

この残留物をジオキサン（５０ｍのに溶解し、凍結乾燥
して、Ａ８０７８９のナトリウム塩３８７肩ｇを得た（
１８７−１８９°Ｃ）。

実施例４ Ａ８０７８９（遊離酸）の製造 実施例２および３に記載のようにして得たＡ８０７８９
（Ｎａ塩、１５０ｍｇ）をアセトン（１００ｍのに溶解
した。この溶液に水（１００ｍＱ＞を加え、そのｐＨを
Ｏ，ｌＮ塩酸を滴加して３に調節した。

この沈殿物をアセトン（５０，πＱ）に溶解し、水（５
０村）を加え、結晶化させた。生成した結晶を濾過し、
減圧下に乾燥し、Ａ８０７８９（１１３ｍｇ）を得た（
融点：１１８−１２０°Ｃ）。

実施例５ Ａ８０７８９のクロマトグラフィーによる同定！、ＴＬ
Ｃ 吸着剤ニジリカゲル 検出：バシラス・ズブチリス； バニリン−硫酸スプレー 溶媒系　　　　　Ｒｆ値 酢酸エチル　　　　　　　　　　　　０．５５酢酸エチ
ル／ジエチルアミン（９５：５）　　０．５２■、ペー
パークロマトグラフィー 吸着剤：ワットマンＮｏ、ｌペーパー 検出：バシラス・ズブチリス 溶媒系　　　　　Ｒｒ値 ０．０６Ｍ　（Ｎｌ＋、）ＪＰＯ，、ｐＨ７，１０，３
９ｎ−プロパツール：水（１：９）　　　　　　　　０
．８４実施例６ の製造 Ａ８０７８９をメタノールに溶解し、室温で１８時間放
置した。この溶液を、ジアゾメタンのジエチルエーテル
溶液で処理した。得られた溶液を減圧下に濃縮し、標題
の化合物を得た（第３図にはこのＦＤ質量スペクトルを
示している）。

実施例７ コクシジウム症を制御するための、代表的な改良ニワト
リ用飼料を下記処方により製造した。

成　　分　　　　　　　　　　　　　％粉末状イエロー
・コーン　　　　　　５０．０動物脂肪 可溶分を有する魚肉ミール（６０％） コーン留分を乾燥した可溶分 リン酸二カルシウム、飼料級 炭酸カルシウム（粉砕石灰岩） ビタミンプレミックスＴＫ−１（１，０３）　”食塩（
ＮａＣＩ２） 微量元素プレミックスＴＫ−０１（１，０２）”　Ｏ１
ｌメチオニンのヒドロキシ同族体　　　０．１Ａ８０７
８９（Ｎａ塩）　　　　　　　　　０．０１総　　量　
　　　　　　　　　　１００．０１）ビタミンプレミッ
クスは完全飼料１ｋｇ当たりビタミンＡ（３０００１Ｕ
）、ビタミンＤ（９００１Ｕ）、ビタミンＥ（４０Ｍｇ
）、ビタミンＫ＜０．７ｊＩｇ）、コリンｌ　ＯＯｐｇ
、ニアシン７０弗、パントテン酸４ｍｇ、リボフラビン
４酩、ビタミンｓ＋ｚ（０，］　ｍｇ）、ビオチンＯ，
１ｍｇ、ｔｊよびエトキシフィン（ｅｔｈｏｘｙｑｕｉ
ｎ）　ｌ　２５弗を提供する。

２）微量元素プレミックスは、完全飼料１ｋｇ当たり、
マンガン７５ｍｇ、鉛５０ｍｇ、鉄２５酩、およびヨウ
素１ｍｇを提供する。

これらの物質を、標準的な飼料−混合法にしたかって混
合する。７飼料などのニワトリ食餌はコクシジウムの暴
露を妨害する。重量増加は、同様の薬物含有食糧ではな
い、コクシジウム不含のニワトリ食餌のそれに匹敵して
いる。

実施例８ 以下のとおり、バランスのとれた高品質肉牛用飼料を調
製した。

成　　分 微粉末状コーン 粉末状コーン穂軸 ％ ６７．８ ０ 砂糖きびの糖蜜 尿素 Ａ８０７８９（Ｎａ塩） リン酸二カルシウム、飼料級 炭酸カルシウム 塩化ナトリウム 微量元素プレミックス ヒ゛タミンＥプレミックス宜”　　　　　　０．０５プ
ロピオン酸カルシウム　　　　　　　０．１５ｘ１ポン
ド当たりの含有量；ビタミンＡ２，０ｏｏ、ｏｏｏｒ、
ｕ、、ビタミンＤｔ　２２７，２ＱＱｒ、Ｕ、および油
１％が添加された大豆飼料３８５．７ｇ。

ｔｘ１ポンド当たり、酢酸ｄ−α−トコフエリル２０．
０００１．Ｕ、を含有する可溶分を含む穀物を乾燥させ
たコーン蒸留分。

この混合飼料を圧縮してペレットにした。平均１日ｔハ
食率として動物１匹当たり飼料１５ボンドで与えると、
動物１匹当たり１日にＡ８０７８９を約３００１ｇ供給
することになる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、Ａ８０７８９の赤外吸収スペクトルを示すグ
ラフであり、 第２図は、Ａ８０７８９のプロトン核磁気共鳴スペクト
ルを示すグラフであり、 第３図は、２９−０−メｆルーＡ８０７８９メｆルエス
テルのＦＤ質量スペクトルを示すグラフである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式（ I ）： ▲数式、化学式、表等があります▼￥ I ￥ で示される抗生物質Ａ８０７８９、そのアシルエステル
   、アルキルエステルまたはアルキルエーテル誘導体、ま
   たはそれらの塩。 ２、抗生物質Ａ８０７８９またはその塩である請求項１
   に記載の化合物。 ３、生理学的に許容され得る担体、および約５−９０重
   量％の請求項１または２に記載の化合物を含有する動物
   用プレミックス。