JPH03140868A - 人工担体 - Google Patents

人工担体

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JPH03140868A JP1278478A JP27847889A JPH03140868A JP H03140868 A JPH03140868 A JP H03140868A JP 1278478 A JP1278478 A JP 1278478A JP 27847889 A JP27847889 A JP 27847889A JP H03140868 A JPH03140868 A JP H03140868A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、ゼラチン、メタリン酸塩及びアニオン性高分
子電解質からなる人工担体に関する。
〔従来の技術〕
抗原又は抗体を結合した粒子はそれぞれ対応する抗原又
は抗体と結合することにより凝集することが知られてお
り、ここで用いられる粒子は一般に担体と呼ばれている
。臨床検査の分野において、この凝集する反応は、受身
凝集反応又は逆受身凝集反応と呼ばれ、被検液中の抗体
量又は抗原量の測定に広く用いられている。測定された
抗体量又は抗原量は、各種疾患の血清学的診断に応用さ
れている。
前述の担体の例は、ポリスチレンラテックス、カオリン
、炭末、又は水溶性多ＩＩ類、ゼラチン、メタリン酸ナ
トリウムおよびアルデヒド架橋剤よりなる粒子（以下従
来法人工担体とよぶ。特公昭６３−２９２２３号、特公
昭６３−４８０２１号参照）等の非生物学的担体、さら
には動物赤血球、細菌菌体等の生物学的担体を現わす。
〔発明が解決しようとする問題点〕
非生物学的担体は、化学的に安定であり、それ自身に抗
原活性を有しないなどの特徴を有する。
しかし、この担体の中のカオリンあるいは炭末は、一定
の範囲の粒径を特定し選別することは至難である。これ
らに比ベボリスチレンラテックスは、ある程度一定の粒
径の担体を製造することができるものの通常使用する溶
液条件、特に中性付近のｐＨにおいて自然凝集（非特異
凝集）が起きやすいという欠点を有している。
一方、生物学的担体である赤血球は、血球表面に固有の
抗原を有しており、抗体との間に交差反応（非特異凝集
反応）を起こし、目的とする凝集結果に誤りを生ずる可
能性も少なくない。さらに動物赤血球や細菌菌体におい
ては、動物固体間の相違や、培養条件等により、物理的
及び化学的性質が微妙に異なることから、常に一定の品
質の血球及び菌体を得ることがむずかしいなど欠点を持
合せている。
さらに、水溶性多糖類、ゼラチン、メタリン酸ナトリウ
ムおよびアルデヒド架橋剤よりなる従来法人工担体は、
これまでの非生物学的担体及び生物学的担体のもつ欠点
をかなり解決したものである。しかしながら、ここで用
いられるアラビアゴム等の水溶性多糖類は、天然に由来
する化合物であり、常に一定品質のものを得にくい欠点
がある。
従来法人工担体は、例えば粒径及び電気泳動の一定範囲
のものを得ることがむずかしく、さらに凝集反応に影響
を及ぼすことがある。この現象は水溶性多糖類の品質に
起因すると考えられ、同じロフトの水溶性多糖類を用い
た場合には、はとんど認められない。そのため、異なる
ロフトの水溶性多糖類ｉ類を用い製造する場合には事前
に品質分析等を行なわなくてはならない。
従来法人工担体は、正の電荷を有するゼラチン並びに負
の電荷を有するメタリン酸ナトリウム、及ヒ水溶性多糖
類のコンプレックスコアセルベージコン法を応用し製造
されている。またこの製造された担体はほとんどの場合
負に帯電しており、その表面には溶液中の陽イオンが配
向し、いわゆる電気二重層を形成している。負の荷電を
担体に与える水溶液長Ｐｉ類及びメタリン酸ナトリウム
の中で、一定品質を有さす人工担体性質に大きな影響を
与える水溶性多＊ｉに代えうる同様な化合物を種々検討
した。
〔問題点を解決するための手段〕
種々の化合物の中より負の電荷を有し、人工担体の製造
に使用しうる化合物としてアニオン性高分子電解質を見
出し本発明を完成した。
本発明は、ゼラチン、メタリン酸塩に加え、従来法人工
担体に用いられている水溶性多糖類の代わりにアニオン
性高分子電解質を用いることにより、従来の欠点を解決
した新たな人工担体を提供するものである。
本発明に用いるアニオン性高分子電解質は、市販されて
いるものをそのまま使用することができ、各種の重合度
をもち、アルカリ金属塩として市販されているものの中
から適宜選択することが可能である。
アニオン性高分子電解質としては高分子酸塩、より具体
的には、ポリアクリル酸塩、ポリメタクリル酸塩、ポリ
スチレンスルホン酸塩、ポリエチレンスルホン酸塩、ポ
リビニル硫酸塩等を用いることができ、その中でもポリ
アクリル酸塩を好適に用いるものである。これらアニオ
ン性高分子電解質としては、平均分子量１　、０００〜
１，０００，０００の範囲のものを使用することができ
、好ましくは２．０００〜ｓｏｏ、　ｏｏの範囲のもの
を使用するものである。ここで塩としてはアルカリ金属
塩を表し、アルカリ金属塩の具体的な例としては、ナト
リウム、カリウム等である。
本発明に用いられるゼラチンは、通常市販されているゼ
ラチンでよいが、人工担体の表面電位をコントロールで
きる点で酸性ゼラチンが好ましい。
また使用するメタリン酸としては、一般式（ＭＰＯ３）
ｎ （式中Ｍはナトリウム原子又はカリウム原子、ｎは３か
ら６を表わす）で表わされる化合物であこのメタリン酸
塩の具体的な例としては、三メタリン酸ナトリウム、四
メタリン酸ナトリウム、ヘキサメタリン酸ナトリウム、
三メタリン酸カリウム、四メタリン酸カリウム、ヘキサ
メタリン酸カリウム等を挙げることができるが、好適に
は、ヘキサメタリン酸ナトリウムを使用することができ
る。
また、アルデヒド化合物は、例えばグルタルアルデヒド
、ホルマリン、グリオキザール、クロトンアルデヒド等
を挙げることができ、この中からグルタルアルデヒドを
好適に用いることができる。
本発明の人工担体の製造法は、ゼラチン、メタリン酸塩
及びアニオン性高分子電解質を含む溶液をアルデヒド化
合物で処理する方法である。この製造にあたっては、溶
媒中で行なうことが好ましく、例えば親水性有機溶媒を
用いることができる。
ここで使用する親水性有機溶媒水溶液としては、アルコ
ール類例えばメチルアルコール、エチルアルコール、プ
ロピルアルコール等、ケトン頬例工ばアセトン、メチル
エチルケトン等であり、特にこれらアルコール類の中で
もメチルアルコール、エチルアルコールが好ましい。
人工担体を製造するに当っての各成分及び溶媒の割合は
、ゼラチン０．０５〜２．０％好ましくは０．１〜５％
、アニオン性高分子電解質０．０１〜０．５％好ましく
は０．０５〜０．２５％、メタリン酸塩はゼラチン乾燥
重量の０．５〜２０％及び親水性有機溶媒４〜２５容量
％であり、これらを含む水溶液を用いる。
まず人工担体の製造は、親水性有機溶媒水溶液に攪拌し
ながらゼラチン水溶液及びアニオン性高分子電解質溶液
を加える。これら溶液は２８〜６０°Ｃ好ましくは３８
〜４０°Ｃに加温して用いる。
またゼラチン水溶液は、アルカリ水溶液でｐＨ９付近に
調整して得た均一溶液を用いることが好ましい。
次いで、これら混合溶液に酸を加え粒径を調節する。例
えばｐＨを４．０〜５．５に調整することにより粒径２
μ〜１０μの粒子を生成することができる。ここで用い
る酸としては無機酸又は有機酸を用いることができるが
、酢酸が好ましい。
さらに粒径を調節した溶液は、アルデヒド化合物を加え
処理される。使用するアルデヒド化合物の割合は例えば
ゼラチンの乾燥重量に対して０．１〜２００％である。
またこの時の処理温度は１０°Ｃ以下、好ましくは４°
Ｃ前後で行うことができる。
この処理操作により得られた人工担体は、遠心分離を行
い洗浄し、回収することができる。
また得られた人工担体は、無色半透明であるので、これ
を凝集反応に用いる場合、凝集像の判定を容易にするた
め適当な色で染色し使用することが望ましい。
本発明の人工担体に抗原又は抗体を結合する方法は、動
物赤血球を担体とした場合の常法（例えばＢｏｙｄｅｎ
法ＨＪ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、、　９３　、１０７〜１２０
（１９５１））に従えばよい。例えば本発明の人工担体
をタンニン酸処理した後、超音波処理した梅毒トレポネ
ーマ病原体を吸着させ、感作人工担体を得ることができ
る。二〇感作人工担体を用い、検体中の対応する抗体と
の反応により凝集像を得ることができる。
〔実施例〕
以下実施例及び比較例により本発明をさらに詳しく説明
する。
実施■上 等電点がｐＨ８，８である酸性ゼラチン２ｇを水４８ｇ
に溶解後４０°Ｃに加温し、１０重量％の水酸化ナトリ
ウム溶液を用いてｐＨ９に調製した。１ｇのポリアクリ
ル酸ナトリウム（重合度２，０００〜７．０００、和光
純薬社製）を４０“Ｃの温水４９ｇに溶解した。ゼラチ
ン溶液３０ｇとポリアクリル酸ナトリウム１５ｇを、あ
らかじめ４０°Ｃに加温した３０容量％のエチルアルコ
ール溶液１５４ｍ１に注ぎ入れよく攪拌する。これに１
０重量％のへキサメタリン酸ナトリウム溶液０．９ｇを
加えた後、攪拌を続けなから１容量％酢酸溶液を滴下し
てｐＨを５．２とした。反応液を１０″Ｃ以下に冷却し
た後、２５容量％のグルタルアルデヒド２．６５ｍ１を
加えて、３０分間攪拌後二夜静置して生成０ 粒子を不溶化した。この反応液を２．　ＯＯＯｒｐｍで
１５分間遠心分離し、人工担体をペレットとして回収し
た。得られた人工担体の粒径は約３μｍであった。
得られた人工担体を、４容量％ホルマリン溶液中１週間
静置し、さらに架橋を強めた。
実施１１ 実施例１で得た人工担体は、Ｂｏｙｄｅｎ法に基づいて
タンニン酸処理を行ない、これら梅毒トレポネーマ病原
体破砕物を吸着させ、感作人工担体を作製した。
実ＪＥ例」一 実施例２で作製した感作人工担体を用い、マイクロタイ
マー法により受身凝集反応を陽性患者２例、陰性患者１
例の血清サンプルにて行い、表１に示す結果を得た。
１ 演ｍ 陽性患者血清を用い実施例２の感作人工担体の比較とし
て、感作動物赤血球担体試薬（セロディアーＴＰ、富士
しビオ社製）及び従来法人工担体に梅毒トレボネーマを
感作したものとの受身凝集反応の結果を表−２に示す。
３ 上」ｄ舛 ロフトの異なるアラビアゴムを用い実施例１の方法に従
い、従来法人工担体を製造した。また、本発明人工担体
においてはロットの異なるポリアクリル酸ナトリウムを
用い実施例１に従い製造したこれらの人工担体の特性と
して求めた平均粒径と電気泳動の測定結果を表−３に示
す。
５ 〔発明の効果〕 本発明の人工担体は、従来より凝集反応試薬として使用
されている非生物担体及び生物担体に比べ非特異反応を
起こさず、さらに従来法人工担体に比べ、常に均一な性
質を有する人工担体を提供することができた。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 （１）ゼラチン、メタリン酸塩及びアニオン性高分子電
    解質からなる人工担体。 （２）ゼラチンが酸性ゼラチンである請求項（１）記載
    の人工担体。 （３）メタリン酸塩が一般式 （ＭＰＯ＿３）＿ｎ （式中Ｍはナトリウム原子又はカリウム原子、ｎは３か
    ら６を表わす）である請求項（１）記載の人工担体。 （４）メタリン酸塩がヘキサメタリン酸ナトリウムであ
    る請求項（３）記載の人工担体。（５）アニオン性高分
    子電解質が高分子酸塩である請求項（１）記載の人工担
    体。 （６）高分子酸塩がポリアクリル酸塩、ポリメタクリル
    酸塩、ポリスチレンスルホン酸塩、ポリエチレンスルホ
    ン酸塩、ポリビニル硫酸塩である請求項（５）記載の人
    工担体。
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