JPH0314597A - 新規エンドセリン誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野〕 本発明は新規なエンドセリンー１誘導体、その製造方法
、及び該誘導体のイ更用方法に関する。

〔従来の技術〕 エンドセリンー１は、ブタ大動脈内皮細胞の培養上清か
ら単離されそして配列が決定された強力な血管収縮ペプ
チドであり（Ｙａｎａｇｒｓａｗａ　Ｍ．　　ら、Ｎａ
ｔｕｒｅ　　３３１，　４１１−４１５．　１９８８）
、このペプチドはアミノ酸配列：　Ｈ−Ｃｙｓ’−Ｓｅ
ｒ”−Ｃｙｓ：ｌ−Ｓｅｒ’−Ｓｅｒ’−Ｌｅｕ”−Ｍ
ｅｔ’−Ａｓｐ”−Ｌｙｓ　９−Ｇｌｕ　”−Ｃｙｓ　
”−Ｖａ　Ｉ　’　２−Ｔｙｒ　”−Ｐｈｅ　”−Ｃｙ
ｓ　”−Ｈｉｓ　”−Ｌｅｕ　”−Ａｓｐ’　”−　Ｉ
ｃｅ　’　”−　Ｔｉｅ”−Ｔｒｐ”　’−ＯＨを有す
る。このものは１位のＣｙｓと１５位のＣｙｓ、及び３
位のＣｙｓと１１位のＣｙｓがそれぞれジスルフィド結
合を形威して分子中に２個のシスチン残基を生威してい
ると考えられる。

エンドセリンー１は血管平滑筋の受容体に結合して（Ｈ
ｉｒａｔａ　Ｙ．　　ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈ
ｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．Ｌ値，　５６２−５６８
．　１９８８）平滑筋を収縮せしめ、血圧の上昇をもた
らす（Ｙａｎａｇｉｓａｗａ　Ｈ．　　ら、Ｎａｔｕｒ
ｅぶ迂，　４１１−４１５　（１９８８）。すなわち、
エンドセリンー１は血管収縮のための引き金となる化合
物でありそして血管刺激作用を示す（Ｉｓｈｉｋａｗａ
　Ｔ．ら、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，　’１５４．
　８９７０−Ｈ９７３）ものと考えられ、そしてそれ故
に、エンドセリンー１の作用機作についての知識は高血
圧及び心筋梗塞の機作の理解を導くものと期待される。

さらに、エンドセリンー１の受容体に対する拮抗薬は高
血圧及び心筋梗塞の療法剤としての候補であると期待さ
れる。しかしながら、生来のエンドセリンー１は、それ
が不安定でありそしてそれ故に生体内での持続時間が短
いために生化学試薬としてもまた医薬製剤の戒分として
も不利である。

この不安定性は酸化に対する７位のメチオニンの感受性
に基くものと考えられる．メチオニン残基をノルロイシ
ンにより置き換えることにより生物学的に活性なペプチ
ドの安定性を改良する試みが存在する。Ｃ．Ｂ．　Ｒｅ
ｗａｒｄら（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ
．Ｃｏｍｍ．　８８，　２６６．　１９７８）は、β−
メラノサイト刺激ホルモン中のメチオニンをノルロイシ
ンで置き換えることを開示しているが、この修飾された
ホルモンのヨウ素化には戒功していない。

〔発明が解決しようとする課題〕

従って、本発明は、生来のエンドセリンー１中の７位の
メチオニンが他のアミノ酸例えばノルロイシンにより置
き変２えられておりそして場合によっては１３位のチロ
シンがヨウド化されており、他方、目的の生物学的性質
が保持されている新規なエンドセリンー１誘導体を提供
しようとするものである。

〔課題を解決するための手段〕

上記の課題を解決するため、本発明は、次の式（Ｉ）： （式中、Ｒ，はノルロイシン、ロイシン、イソロイシン
又は○−メチルホモセリンであり、そしてＲ２はチロシ
ン又は３−ヨウドチロシンであり、ここでヨウ素は非放
射性又は放射性である）により表わされるエンドセリン
ー１誘導体を提供する。

本発明の化合物は遊離の形であることもできるが、しか
しまたその塩の形であることもできる。

遊離アミノ基を含有するので、本発明の化合物は酸付加
塩の形であることができる。適当な酸付加塩は特に、常
用の医薬として許容される酸との医薬として許容される
塩である。代表的な無機酸はハロゲン化水素酸、例えば
塩酸、そしてさらに硫酸、リン酸及びピロリン酸である
。代表的な有機酸は特に、アレーンスルホン酸、例えば
ベンゼンスルホン酸もしくはＰ−トルエンスルホン酸、
又は低級アルカンスルホン酸、例えばメタンスルホン酸
、並びにカルポン酸、例えば酢酸、乳酸、バルミチン酸
、ステアリン酸、リンゴ酸、酒石酸、アスコルビン酸及
びクエン酸である。しかしながら、本発明の化合物はま
た遊離カルボキシル基を含有するので、これらはまた無
機又は有機塩基との塩、例えばナトリウム塩、カリウム
塩、カルシウム塩もしくはマグネシウム塩、又はさらに
アンモニアもしくは医薬として許容される窒素含有有機
塩基から誘導されるアンモニウム塩の形で存在すること
ができる。しかしながら本発明の化合物は遊離力ルボキ
シル基及び遊離アξノ基を同時に含有するので、これら
はまた内部塩の形であることができる。塩薬として許容
される塩が好ましい。

本発明はまた、Ｒ，がノルロイシン、ロイシン、イソロ
イシン又は０−メチルホモセリンでありモしてＲ２がチ
ロシンである前記のエンドセリンー１誘導体を含んで或
る医薬製剤を提供する。

さらに、本発明は、Ｒ１がノルロイシン、ロイシン、イ
ソロイシン又はＯ−メチルホモセリンでありモしてＲ２
が３−ヨウドチロシンである前記のエンドセリンー１誘
導体を含んで或る生化学試薬を提供する。このヨウ素は
非放射性ヨウ素又は放射性ヨウ素であることができる。

〔具体的な記載〕

本発明のエンドセリンー１誘導体は２種類のペプチド、
すなわち、生来のエンドセリンー１の７位のメチオニン
がノルロイシン、ロイシン、イソロイシン又は○−メチ
ルホモセリンにより置き換えられているベプチド（誘導
体■）、及び生来のエンドセリンー１の７位のメチオニ
ンがノルロイシン、ロイシン、イソロイシン又はＯ−メ
チルホモセリンにより置き換えられておりそしてさらに
１３位のチロシンが３−ヨウドチロシンにより置き換え
られているペプチド（誘導体■）を包含する．誘導体（
１）及び（Ｉ［）の両者は生来のエンドセリンーｌに比
べて生体内及び生体外において非常に安定である。

１３位のチロシンの酸化を誘導体（１）と生来のエンド
セリンー１との間で比較した（実施例２及び参考例を参
照のこと）。生来のエンドセリンー１の場合、３０〜５
０％のメチオニンが酸化されてＭｅｔ（０）’一エンド
セリンー１が生じ、そして低収量の＋３１−Ｔｙｒ一エ
ンドセリンー１をもたらしたが、誘導体（１）は酸化さ
れた副産物をもたらさなかった。

さらに、誘導体（１）及び（Ｉ［）の両者は、生来のエ
ンドセリンー１に匹敵するブタ大動脈膜結合活性及びラ
ット大動脈収縮活性を示す。

ブタ大動脈膜結合活性は、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈ
ｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．　１５１，　１２１３．
　１９８８に従って次の方法により決定された。ブタ大
動脈から脂肪組織を除去し、はさみで細切し、そして工
０容量の緩衝液（１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｊ２　，　ｐ
Ｈ７．　４　，　０．２５Ｍシュークロース）中でホモ
ジナイザー（ＰｏｌｙｔｒｏｎＯ　）によりホモジナイ
ズした。ホモジネートを１，０００ｘｇにて１５分間遠
心した。上清を２層のナイロンメッシュを通して濾過し
、そして次に４８，０００ｘ　ｇにて３０分間遠心した
。ベレットを同じ緩衝液で３回洗浄し、そして２ケ月以
内に使用するまで−２５゛ｃにて凍結保存した。凍結し
た膜ペレットを、もとの組織の湿重量ｇ当り１０ｄの結
合測定緩衝液（０．１％のＢＳＡ（ウシ血清アルブミン
）を含有する｝ｔａｎｋの平衡溶液〕中に再懸濁した。

受容体結合測定のため、５ｏｌの非標識エンドセリンー
１（０．３−の最終濃度、非一特異結合のため）もしく
は試験されるべきエンドセリンー１誘導体又は５０Ｊ！
！の緩衝液（全結合のため）を含有する９００〆の膜懸
濁液に、５０，ｎのｌ！ＳＩ一エンドセリンー１　　（
　［Ｍｅｔ’，　Ｔｙｒ（”Ｊ）　Ｉ３］−ＥＴ−１）
　（最終濃度０．　３　ｎＭ）を加えた。３７゜Ｃにて
６０分間のインキュベーションの後、インキュベーショ
ン混合物をワットマンＧＦ／Ｂフィルター（１％ポリエ
チレンイξン中にあらかじめ浸漬しそしてセルイーベス
ター、Ｂｒａｎｄｅｌ＠に置いたもの）を通して濾過し
、そして３１ｎ１の水冷した結合測定緩衝液で３回洗浄
した。このフィルターを、自動Ｔーカウンター（Ａｌｏ
ｋａ　ＡＲＣ　３６１）を用いて放射能測定した。

ウシ大動脈膜に結合する＋０１−エンドセリンー１の能
力を阻害する各ペプチドの活性は次の通りであった。

生来のエンドセリンー１ １３−モノヨウドチロシンエンドセリンー１誘導体１　
　（　Ｒ　＋　＝　Ｎ　ｌｅ）誘導体Ｉ［　　（　Ｒ　
＋　＝　Ｎ　ｌｅ）０．４５ｎＭ ０．８０ｎＭ Ｏ．１４ｎＭ ０．８３ｎＭ ？記のごとく、誘導体（１）及び（Ｉｉ）は生来のエン
ドセリンー１に匹敵する活性を示す。

ラット大動脈収縮活性をＥｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏ
ｌ．５３＋２７３．　１９７７に従って次の方法により
測定した。

雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｐａｗｌｅｙラット（体重２５０
〜３２０ｇ）を斬首により殺した。大動脈球の近傍で切
断された胸部大動脈のリング（広さ２ｍｍ）を、生理的
溶液を含有する５０ｄの器官浴中で３７゜Ｃにて２ｇの
休止張力（ｒｅｓｔｉｎｇ　ｔｅｎｓｉｏｎ）のもとで
懸垂し、そして９５％０２及び５％ＣＯ■の混合物を通
気した。摘出の２時間後に測定を行った。

ラットの摘出された大動脈を収縮させる各ベプチドの活
性を下の表に示す。

生来のエンドセリンー１ １３−モノヨウドチロシンエンドセリンー１誘導体１　
　（Ｒ＋　＝Ｎｌｅ） 誘導体ＩＩ　　（Ｒ！　＝Ｎｌｅ） 上記のように、誘導体（１）及び（Ｉｔ）は生来のエン
ドセリンー１に匹敵する活性を示す。

従って、本発明の誘導体（Ｉ）は、医薬製剤、例えば血
圧上昇剤、強心剤等の活性威分として有用である。

すなわち、本発明の誘導体（１）は、例えば、療法的有
効量の該誘導体を、非経口的投与、例えば筋肉内投与、
静脈内投与、鼻内投与、皮下投与又は腹腔内投与のため
に適当な無機又は有機の固体又は液体の医薬として許容
されるキャリャーと一緒に又はこれらの混合して含有す
る医薬製剤の製造において使用することができる． 非経口投与のため、注射又は注入溶液、好ましくは等張
水溶液又は懸濁液が利用でき、これらを０．４ｎＭ Ｏ．８ｎＭ １．　Ｉ　ｎＭ Ｏ．９ｎＭ 使用前に、例えば、活性戒分を単独で、又は医薬として
許容されるキャリャー例えばマンニトールと共に含有す
る凍結乾燥した製剤から調製することができる。この様
な製剤は無菌化されることができ、そして／又は助剤、
例えば防腐剤、安定剤、湿潤剤及び／又は乳化剤、可溶
化剤、浸透圧調節塩、及び／又は緩衝液を含有すること
ができる。

本発明の医薬製剤は、所望により、他の薬理学的に価値
ある物質を含有し、そしてそれ自体既知の方法により、
例えば常用の混合、熔解、又は凍結乾燥法により製造さ
れる。これらは、約０．　１％〜１００％、特に約１％
〜約５０％、そして凍結乾燥物の場合は１００％までの
活性戒分を含有する。

疾患の性質及び生物体の状態に依存して、約１Ｋ〜約１
０■の非経口投与量が約７０ｋｇの体重を有する温血動
物（ヒト及び動物）の治療のために投与される。

本発明はまた、啼乳類における低血圧の治療方法を提供
し、この方法に、Ｒ２がチロシンである式（１）の化合
物の療法的有効量及び医薬として許容されるキャリャー
を前記動物に投与することを特徴とする。

本発明の誘導体（ＩＩ）は生化学試薬として、特にエン
ドセリン及びその類似体の作用機作の研究のために有用
である。この目的のため、標識として使用されるヨウ素
は非放射性ヨウ素であることができ、又はｌ！Ｓ■のご
とき放射性ヨウ素であることができる。

誘導体（Ｉ！）中のヨウ素は分光測定法により容易に測
定することができる。従って、誘導体（ｎ）の増加する
量の脈静内投与の後に誘導体（ＩＩ）の血漿レベルと血
圧又は心電図（ＥＣＧ）とを比較することにより、エン
ドセリンー１依存感受性変化を解明することができる。

この方法は、高血圧及び心臓虚血のごとき疾患の診断の
ために適用することができる。

放射性ラベルされた誘導体■はラジオイムノアッセイの
ための放射性リガンドとして、高血圧、心臓虚血、脳虚
血、脳出血、気管支ぜんそく及び腎臓不全に罹患してい
る種々の患者においてエンドセリンーｌの血漿レベルを
測定するために有用である。さらに、放射性標識された
誘導体■は前記疾患に罹ったことのある患者からの死体
組織中のエンドセリンー１受容体の特徴付けのために有
用である。

本発明のペプチドは市販の試薬及び市販のペプチド合或
機（例えばＡＢＩモデル４３１）を用いて常法により調
製することができる。化合合或は、適切に保護された対
応するアミノ酸を用いて既知の方法で行うことができる
。特に、このようなペプチド合或は、ア旦ノ、ヒドロキ
シ及び／又はカルボキシル基の少なくともＩつが保護基
を有する本発明の化合物に対応する化合物中に存在する
すべての保護基を除去．し、そして所望により得られた
べブチドを塩に転換し又は得られた塩を遊離ベプチドに
転換することを含む。例えば、すべてのアミノ酸のα−
アくノ基はｔ−ブトキシカルボキル（ｔ−Ｂｏｃ）によ
り保護され、そして側鎖の官能基に次の様にして保護さ
れる。システィンのチオール基は４−メチルベンジル基
（４ＭｅＢｚｌ）により保護され、リジンのε−アξノ
基に２−クロロベンジルオキシ力ルボニル基（ＣＩＺ）
により保護され、アスパラギン酸のβ一カルボキシル基
及びグルタミン酸のγ一カルボキシル基はシクロヘキシ
ルエステル（ＯｃＨｅｘ）により保護され、セリンのヒ
ドロキシル基にペンジルエーテル（Ｂｚｌ）により保護
され、チロシンのフェノール性ヒドロキシル基は２−プ
ロモベンジルオキシカルボニル基（　Ｂ　ｒＺ）により
保護サれ、ヒスチジンのイミダゾール基は４−トルエン
スルホニル基（　Ｔ　ｏｓ）により保護され、そしてト
リプトファンのインドール基はホル稟ル基（ＣＨＯ）に
より保護される。

保護されたペプチドの合或は、固体キャリャーとして不
溶性ボリスチレン樹脂誘導体を用いて固相合戒により行
われる。Ｂｏｃ基は各段階の縮合反応の前にトリフルオ
ロ酢酸（ＴＦＡ）で処理することにより行われる。キャ
リャーからの遊離及び合成されたべブチドの脱保護は無
水化水素処理により同時に行うことができる。

本発明の化合物は、遊離の形、又は酸付加塩、内部塩も
しくは塩基との塩の形で得られる。例えば、遊離化合物
は酸付加塩又は塩基との塩から既知の方法により得られ
る。一方、酸付加塩は遊離化合物から酸との反応、例え
ば前記塩を形威する酸との反応、及び蒸発又は凍結乾燥
により得ることができる。内部塩はｐＨを適当な中性点
に調整することにより得ることができる。

本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、これ
により本発明の範囲を限定するものではない。

ｆエ　１−Ｎｌｅ−エンドセリンー１の人６６０ｍｇ　
（　０．　１　ｍｍｏｌ）のＢｏｃ−Ｔｒｐ−（ＣＩＯ
）　　ＯＣｔｌｚ−フェニルーアセトアごドメチル（　
Ｐ　ａｍ）樹脂（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ
ｓの製品）をＣＨｚＣｊ２ｚ中２０％トリフルオロ酢酸
４．　５　ｄにより３分間処理し、そして次に１０１ｄ
のＣＬＣｉｔ中５０％ＴＦＡにより１６分間処理した。

ＴＦＡ処理の後、前記ベブチド樹脂を塩化メチレンによ
り洗浄し、そしてＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）中１
０％ジイソプロピルエチルアξン（ＤＩＥΔ）により中
和する。４８１ｍｇ　（２ｍｍｏｌ）のＢｏｃ−Ｉ１ｅ
を３．　４　ｄのＮＭＰに溶解し、この混合物に２ｄの
ＩＭＩ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）及
び２−のＩＭジクロロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ
Ｄ）を加えた。この混合物を３０分間撹拌し、そして次
にアごノ酸（ペプチド）樹脂に加えた。反応の後、ベプ
チド樹脂をＮＭＰにより洗浄して次の段階を準備した。

１段階に約１８８時間で完了した。

上記の段階を、２１０１ずつの次の保護ペブチド：Ｂｏ
ｃ−１１ｅ＋　Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯｃＨｅｘ），　Ｂｏ
ｃ−Ｌｅｕ，　Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｏｓ）Ｂｏｃ−Ｃｙ
ｓ（４ＭｅＢｚｌ），　Ｂｏｃ−Ｐｈｅ＋　Ｂｏｃ−Ｔ
ｙｒ（ＢｒＺ），　ＢｏＣ−Ｖａｌ＋Ｂｏｃ−Ｃｙｓ（
４ＭｅＢｚｌ），　Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｃＨｅｘ）＋　
Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（ＣＩＺ），Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯｃＨｅ
ｘ）＋　Ｂｏｃ−Ｎｌｅ，　Ｂｏｃ−Ｌｅｕ，　Ｂｏｃ
−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）＋Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）．　Ｂ
ｏｃ−Ｃｙｓ（４ＭｅＢｚｌ），　Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂ
ｚｌ）＋及びＢｏｃ−Ｃｙｓ　（４ＭｅＢｚｌ）をこの
順序で用いて反復して、保護されたペプチド樹脂： Ｂｏｃ−Ｃｙｓ　（４ＭｅＢｚ　１　）−　Ｓｅｔ　（
Ｂｚ　１　）−Ｃｙｓ　（４ＭｅＢｚ　１）　−Ｓｅｔ
　（Ｂｚ　１　）　−Ｓｅｒ　（Ｂｚ　ｌ）　−　Ｌｅ
ｕ−　Ｎ　ｌｅ−　Ａｓｐ　（ＯｃＨｅｘ）　−　Ｌｙ
ｓ　（ＣＩＺ）　−Ｇｌ　ｕ　（ＯｃＨｅｘ）　−Ｃｙ
ｓ　（４ＭｅＢｚｌ）一νａｌ−Ｔｙｒ（ＢｒＺ）−Ｐ
ｈｅ−Ｃｙｓ（４ＭｅＢｚｌ）一旧Ｓ（Ｔｏｓ）　−Ｌ
ｅｕ　−　Ａｓｐ　（ＯｃＨｅｘ）　−　Ｉ　Ｉｅ−　
Ｈ　ｅ−Ｔｒｐ　（ＣＨＯ）　−０ＣＨ２−Ｐａｍ樹脂
を得た。

４−のアニソール及び３６ｍの無水弗化水素を前記の保
護されたべブチド樹脂に加え、そしてこの混合物を−２
゜Ｃにて６０分間撹拌した。次に、この混合物を減圧下
で濃縮して残渣を得、次にこれをエチルエーテルの添加
により沈澱させた。エチルエーテルを除去した後、この
沈澱に７．５−の１．２−エタンジチオール及び２．５
一の無水弗化水素を添加し、そしてこの混合物を−２℃
にて３０分間撹拌し、そして減圧下で濃縮して残渣を得
た。次にこの残渣をエチルエーテルの添加により沈澱さ
せた。この沈澱を２ｌの０．　１　Ｍ酢酸アンモニウム
／４Ｍ尿素（ｐＨ８．０）に入れ、そして不溶性樹脂を
濾去した。濾液を空気中で１０“Ｃにて４０時間酸化し
た。反応混合物を、Ｄｉａｉｏｎ　ＨＰ−２０樹脂（三
菱化威）に適用しそして８０％アセトニトリル／ＩＮア
ンモニア水で溶出することにまり脱塩し、そして溶出液
を減圧下で濃縮しそして凍結乾燥し、そして目的生戒物
を高速液体クロマトグラフィー（｝ＩＰＬＣ）で精製す
ることにより次の式： で表わされるベプチド３３■を得た。

こうして得られたベプチドは、Ｔｏｓｏ　ＴＳＫ−Ｇｅ
ｌ　ＯＤＳ１２０Ｔ　（４．６ｍｍ　Ｘ　１５０ｍ）上
で溶離剤として０．１％水性ＴＦＡ−ＣＨ３ＣＮ（１０
％−６０％グラジエント、３０分間、１Ｉ！Ｉｌ／分）
を用いるＨＰＬＣ，及びＡｓａｈｆｐａｋ　ＯＤＰ−５
０（４．６髄Ｘ　１５０ｍｍ）上で熔離剤として５０閘
門リン酸緩衝液−ＣＨ−＋ＣＮ（ｐＨ７．　８　．　１
０％−５０％グラジエント、３０分間、１−／分）を用
いるＨＰＬＣにおいて、それぞれ２１．５分間及び１６
．５分間の保持時間を示した。

酸分解によるアミノ酸分析の結果： Ａｓｐ　１．９Ｈ２），　Ｓｅｔ　２．３８（３），　
Ｇｌｕ　１．００（１）．　Ｃｙｓ　１．７８（４），
Ｖａｌ　Ｏ．９５（１），　Ｉｌｅ　１．２０（２），
　　Ｌｅｕ　１．８４（２），　Ｔｙｒ＋　Ｎｌｅ　１
．７３　（１＋１）．　Ｐｈｅ　１．００（１），　Ｌ
ｙｓ　Ｏ．９０（１），Ｈｉｓ　０．９４（１）．　Ｔ
ｒｐ検出されず。

ＦＡＢ質量分析データ理論値［Ｍ　＋　８１　’＝　２
４７３．０７測定値［Ｍ　＋　ｎ］　゛−　２４７５．
８７上記の方法と同様にして、縮合反応の第１４段階に
おいてＢｏｃ−Ｎｌｅの代りにそれぞれＢｏｃ−Ｌｅｕ
，Ｂｏｃ−ｌｉｅ又はＢｏｃ−０−メチルーホモセリン
を用いて、７−Ｌｅｕ　−　．　７　　ｌｉｅ一又は７
−○−メチルーホモセリンーエンドセリンー１を製造す
る。

まず、２４０ｎのＩｏＤｏ　−　Ｇ　ｅｎ”　（テトラ
クロロー３α，６β−ジフェニルグリコウリル、Ｐｉｅ
ｒｃｅＬｔｄ．の製品）をＩ　ｍｌのクロロホルムに溶
解し、そしてこの溶液をガラスチューブに入れそして窒
素流により乾燥した。次に、このチューブに４１ｄの５
Ｏｎ＋Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中５■の７Ｎ１ｅ
−エンドセリン及び３００ｎヨウ化ナトリウム／２００
Ｒの５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を加え、そし
て全体を撹拌した。３ｒｄの０．９％ＮａＣｊｌ！　（
ｐＨ２．０）を添加することによって反応を停止し、そ
して目的生底物をＨＰＬＣにより精製しそして凍結乾燥
した。

この生戒物は、Ｔｏｓｏ　ＴＳＫ−Ｇｅｌ　ＯＤＳ　１
２０Ｔ（４．　６　ｍｍ×１５０皿）上で溶離剤として
０．　１％水性ＴＦＡ−ＣＩ｛３ＣＮ（１０％−６０％
グラジエント、３０分間、ｌｍ／分）を用いるＨＰＬＣ
において２２．５分の保持時間において単一ピークを与
える。質量分析において、この生底物はヨード化された
７−Ｎｌｅ−エンドセリンー１の結果に十分に一致する
結果を与えた。

ＦＡＢ質量分析データ理論値［Ｍ＋Ｈ］　”−２６０１
．９３測定値［Ｍ　＋　Ｈｌ　’　＝　２６０５．　１
６災施員又往久亙威 実施例１に従って製造された１０■の７−Ｎｌｅ−エン
ドセリンーｌをｌｍの生理食塩水溶液（１０％塩化ナト
リウム溶液、杏林製薬製、商標ＫＹＯＲＩＮ）に溶解し
、そしてこの溶液を等張にし、そしてｐＨをリン酸一水
素カリウム水溶液により６．　０〜７．０の範囲に調製
した。得られた溶液を細菌学的フィルターに通し、そし
て濾過された溶液を無菌条件下でアンプルに満たした。

１アンプルの内容物を前記の生理的食塩水２５０ｍＲで
稀釈して静脈注入に適する溶液を調製する。

皇監班　１３−１−Ｔｒ−エンドセｉンー１の生来のエ
ンドセリンー１を実施例１に記載したのと実質的に同一
の方法により、但し７位のアミノ酸のためにＢｏｃ−Ｎ
ｌｅＯ代りにＢｏｃ−Ｍｅｔを使用して、次の中間体： Ｂｏｃ−Ｃｙｓ　（ｔＭｅＢｚ　１）　−　Ｓｅｔ　（
Ｂｚ　１）　−Ｃｙｓ　（４ＭｅＢｚ　＋）　−　Ｓｅ
ｔ　（Ｂｚ　ＩＬＳｅｒ　（Ｂｚ　Ｉ）−Ｌｅｕ−Ｍｅ
ｔ−Ａｓｐ　（ＯｃＨｅｘ）−Ｌｙｓ　（ＣＩＺ）−Ｇ
ｌｕ　（ＯｃＨｅｘ）　−Ｃｙｓ　（４ＭｅＢｚ　］）
　−Ｖａ　１−　Ｔｙｒ　（ＢｒＺ）　−　Ｐｈｅ−　
Ｃｙｓ　（４ＭｅＢｚ　ｌ）　−　Ｈ　ｉｓ（Ｔｏｓ）
　−　Ｌｅｕ−Ａｓｐ　（ＯｃＨｅｘ）　−　Ｉ１ｅ−
　Ｉ　ｌｅ−Ｔｒｐ　（Ｃｔ｛Ｏ）　−０ＣＨｚ−Ｐａ
ｗを介して、次のペプチド： を得た。

次に、上に製造したペプチドを実施例２に記載したのと
同様にして、１３位のチロシンにおいてヨウ素により標
識されたエンドセリンー１誘導体を得た。

ヨウ素化反応の後、ＨＰＬＣにより４個のピークが観察
された。これらのピークは、［Ｍｅｔ（０）７）ＥＴ−
１（保持時間（ＲＴ）　：　２０．４分）、ＥＴ−１（
ＲＴ　：　２１．４分）、〔モノヨウドＴｙｒ＋３）　
−　Ｅ　Ｔ　−１　（ＲＴ：２２．２分）、及び（ジ′
ヨウドＴｙｒ”）−ＥＴ−１　　（ＲＴ：２３．２分）
であった。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次の式（ I ）： ▲数式、化学式、表等があります▼ （ I ） （式中、Ｒ＿１はノルロイシン、ロイシン、イソロイシ
   ン又はＯ−メチルホモセリンであり、そしてＲ＿２はチ
   ロシン又は３−ヨウドチロシンであり、ここでヨウ素は
   非放射性又は放射性である）で表わされるペプチド、及
   びその塩。 ２、Ｒ＿１がノルロイシンでありそしてＲ＿２がチロシ
   ン又は３−ヨウドチロシンである請求項１に記載の式（
   I ）のペプチド、及びその塩。 ３、７−Ｎｌｅ−エンドセリン−１である請求項１に記
   載のペプチド。 ４、Ｎ−Ｎｌｅ−１３−ヨウドチロシル−エンドセリン
   −１である請求項１に記載のペプチド。 ５、次の式（ I ）： ▲数式、化学式、表等があります▼ （ I ） （式中、Ｒ＿１はノルロイシン、ロイシン、イソロイシ
   ン又はＯ−メチルホモセリンであり、そしてＲ＿２はチ
   ロシンである） で表わされるペプチド又はその医薬として許容される塩
   を含んで成る医薬製剤。 ６、次の式（ I ）： ▲数式、化学式、表等があります▼ （ I ） （式中、Ｒ＿１はノルロイシン、ロイシン、イソロイシ
   ン又はＯ−メチルホモセリンであり、そしてＲ＿２はヨ
   ウドチロシンであり、ここでヨウ素は非放射性又は放射
   性である）で表わされるペプチド、又はその医薬として
   許容される塩を含んで成る生化学試薬。 ７、次の式（ I ）： ▲数式、化学式、表等があります▼ （ I ） （式中、Ｒ＿１はノルロイシン、ロイシン、イソロイシ
   ン又はＯ−メチルホモセリンであり、そしてＲ＿２はチ
   ロシン又は３−ヨウドチロシンであり、ここでヨウ素は
   非放射性又は放射性である）で表わされるペプチド、及
   びその塩の製造方法であって、存在するアミノ、ヒドロ
   キシ及び／又はカルボキシル基の少なくとも１つが保護
   基を担持している本発明の前記化合物に対応する化合物
   中に存在するすべての保護基を除去し、そして所望によ
   り得られたペプチドを塩に転換し、又は得られた塩を遊
   離ペプチドに転換することを特徴とする方法。