JPH0317492B2 - - Google Patents
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- JPH0317492B2 JPH0317492B2 JP61505485A JP50548586A JPH0317492B2 JP H0317492 B2 JPH0317492 B2 JP H0317492B2 JP 61505485 A JP61505485 A JP 61505485A JP 50548586 A JP50548586 A JP 50548586A JP H0317492 B2 JPH0317492 B2 JP H0317492B2
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- JP
- Japan
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- sperm
- medium
- sperm cells
- layer
- physiologically acceptable
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0608—Germ cells
- C12N5/0612—Germ cells sorting of gametes, e.g. according to sex or motility
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/52—Sperm; Prostate; Seminal fluid; Leydig cells of testes
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- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
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- Biotechnology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
請求の範囲
１ 水性精子含有試料を精子細胞用水性人工侵入
媒質層と接触させることにより運動性精子細胞を
前記精子含有試料から前記層中に移動させること
よりなり、そして前記侵入媒質中にヒアルロン酸
の水溶性で生理学的に許容し得る塩を配合するこ
とを特徴とする、水性精子含有試料からの運動性
精子細胞の試験管内分離方法。
媒質層と接触させることにより運動性精子細胞を
前記精子含有試料から前記層中に移動させること
よりなり、そして前記侵入媒質中にヒアルロン酸
の水溶性で生理学的に許容し得る塩を配合するこ
とを特徴とする、水性精子含有試料からの運動性
精子細胞の試験管内分離方法。
２ 前記侵入媒質層に移動した精子細胞を回収す
ることを特徴とする請求の範囲第１項記載の方
法。
ることを特徴とする請求の範囲第１項記載の方
法。
３ 前記侵入媒質層に移動した精子細胞を受精の
ために回収することを特徴とする請求の範囲第２
項記載の方法。
ために回収することを特徴とする請求の範囲第２
項記載の方法。
４ 前記侵入媒質層に移動した精子細胞を試験管
内受精のために回収することを特徴とする請求の
範囲第３項記載の方法。
内受精のために回収することを特徴とする請求の
範囲第３項記載の方法。
５ ヒアルロン酸の水溶性で生理学的に許容し得
る塩を中に配合したことを特徴とする精子細胞用
水性人工侵入媒質。
る塩を中に配合したことを特徴とする精子細胞用
水性人工侵入媒質。
明細書
本発明は、流体試料例えば射精物から運動性精
子を選択するための改善された試験管内方法に関
する。本発明は、前記選択方法をも含む。
子を選択するための改善された試験管内方法に関
する。本発明は、前記選択方法をも含む。
不本意に子供ができないということは関係者に
とつて大きな問題であり、それ故、その状態の原
因をつきとめるべく幾多の研究がなされている。
男性の側に関する限り、射精物中の精子濃度につ
いての精子試料の品質、および精子細胞の形態と
運動性に主な関心が注がれている。受精力状態評
価のために普通に用いられるルーチンにおいてこ
れら基準の中でも射精濃度が他のものよりも信頼
性の高い基準であるように思われる。通常新鮮な
射精物は優れた運動性を有しそして前方向に高速
移動する細胞から迷走的運動または全面的な非運
動性により特徴付けられる精子細胞に至るまでの
全範囲を含む広範囲の運動性を有する様々な精子
細胞を示すであろう。従つて、所定量の流体中に
存在する精子細胞の数にのみ基づく受精力評価は
信頼性のないものであつて、精子運動性を定性分
析した方が男性受精力評価のためのより良い基礎
が与えられる。精子試料中の精子運動速度および
運動性精子の相対割合は多くの方法、例えば
Kremer法により研究されている（Int.J.
Fertil.10／1965／p.209−215。例えばL.Blasco、
Fertility and Sterility41（1984）p.177−192も参
照されたい）。これらのおよびその他の論文は精
子の子宮頚管粘液（cervical nucus）侵入能の研
究の試みを記載している。これらの実験において
は、子宮頚管粘液を一端をシールした毛細管に吸
引し、次いで他端を精液（所望により希釈）また
は精液から単離された精子細胞の懸濁液と接触さ
せる。適当な時間の後、管を顕微鏡で調べ、そし
て粘液媒質に侵入した精子数を測定する。しかし
ながら子宮頚管粘液の質は女性ごとに、また同じ
女性であつても月経周期の時期により異なるので
このタイプのテストを標準化することは難しい。
更に子宮頚管粘液試料は入手が困難であり、また
試験管内方法に対し試料を不適にする成分を含有
する。子宮頚管粘液試料は低い貯蔵特性を有し、
減菌し難く、また伝染性作用体（agent）を伝染
させる点で害を伴う。
とつて大きな問題であり、それ故、その状態の原
因をつきとめるべく幾多の研究がなされている。
男性の側に関する限り、射精物中の精子濃度につ
いての精子試料の品質、および精子細胞の形態と
運動性に主な関心が注がれている。受精力状態評
価のために普通に用いられるルーチンにおいてこ
れら基準の中でも射精濃度が他のものよりも信頼
性の高い基準であるように思われる。通常新鮮な
射精物は優れた運動性を有しそして前方向に高速
移動する細胞から迷走的運動または全面的な非運
動性により特徴付けられる精子細胞に至るまでの
全範囲を含む広範囲の運動性を有する様々な精子
細胞を示すであろう。従つて、所定量の流体中に
存在する精子細胞の数にのみ基づく受精力評価は
信頼性のないものであつて、精子運動性を定性分
析した方が男性受精力評価のためのより良い基礎
が与えられる。精子試料中の精子運動速度および
運動性精子の相対割合は多くの方法、例えば
Kremer法により研究されている（Int.J.
Fertil.10／1965／p.209−215。例えばL.Blasco、
Fertility and Sterility41（1984）p.177−192も参
照されたい）。これらのおよびその他の論文は精
子の子宮頚管粘液（cervical nucus）侵入能の研
究の試みを記載している。これらの実験において
は、子宮頚管粘液を一端をシールした毛細管に吸
引し、次いで他端を精液（所望により希釈）また
は精液から単離された精子細胞の懸濁液と接触さ
せる。適当な時間の後、管を顕微鏡で調べ、そし
て粘液媒質に侵入した精子数を測定する。しかし
ながら子宮頚管粘液の質は女性ごとに、また同じ
女性であつても月経周期の時期により異なるので
このタイプのテストを標準化することは難しい。
更に子宮頚管粘液試料は入手が困難であり、また
試験管内方法に対し試料を不適にする成分を含有
する。子宮頚管粘液試料は低い貯蔵特性を有し、
減菌し難く、また伝染性作用体（agent）を伝染
させる点で害を伴う。
そこで精子に対する天然の侵入媒質（すなわち
子宮頚管粘液）の前記欠点を回避するために、各
種物質の水溶液よりなる代替物が用いられるに至
つている。以下の記載および請求の範囲におい
て、かかる代替物を前述の精子用天然侵入媒質に
対するものとして「精子用水性人工侵入媒質」
（あるいは単に「侵入媒質」または「媒質」とい
うことにする。これまでに様々なタイプのかかる
人工媒質が記載されている。この目的に用いられ
る生理学的塩溶液は低分子物質を含有し、また時
には高分子物質例えばアルブミンなどをも含有す
る。かかる溶液は（例えば生理学的に許容し得る
緩衝剤を添加することにより）精子にとつて適切
でありかつ生理学的に許容し得るPH値が与えら
れ、またそれらは精子にとつて生理学的に許容し
得る物質、例えば塩類、栄養素、活性化物質、キ
ヤパシテーシヨン（受精能獲得）に影響を及ぼす
物質、微量元素などを含有してもよい。これらの
例としては、血漿または血清中に存在する物質が
挙げられる（かかる媒質に対しては血清が適切な
添加剤である）。添加剤により溶液の浸透圧を調
節して精子に適した値を得ることも可能である。
それら溶液は媒質中での微生物増殖を防止する添
加剤、例えば抗生物質を含んでいてもよい。精子
が中で生存できそしてそれらの運動性および受精
能を維持できる適当な溶液を記載した包括的な文
献が存在するが、これらの溶液は侵入媒質として
有用である。
子宮頚管粘液）の前記欠点を回避するために、各
種物質の水溶液よりなる代替物が用いられるに至
つている。以下の記載および請求の範囲におい
て、かかる代替物を前述の精子用天然侵入媒質に
対するものとして「精子用水性人工侵入媒質」
（あるいは単に「侵入媒質」または「媒質」とい
うことにする。これまでに様々なタイプのかかる
人工媒質が記載されている。この目的に用いられ
る生理学的塩溶液は低分子物質を含有し、また時
には高分子物質例えばアルブミンなどをも含有す
る。かかる溶液は（例えば生理学的に許容し得る
緩衝剤を添加することにより）精子にとつて適切
でありかつ生理学的に許容し得るPH値が与えら
れ、またそれらは精子にとつて生理学的に許容し
得る物質、例えば塩類、栄養素、活性化物質、キ
ヤパシテーシヨン（受精能獲得）に影響を及ぼす
物質、微量元素などを含有してもよい。これらの
例としては、血漿または血清中に存在する物質が
挙げられる（かかる媒質に対しては血清が適切な
添加剤である）。添加剤により溶液の浸透圧を調
節して精子に適した値を得ることも可能である。
それら溶液は媒質中での微生物増殖を防止する添
加剤、例えば抗生物質を含んでいてもよい。精子
が中で生存できそしてそれらの運動性および受精
能を維持できる適当な溶液を記載した包括的な文
献が存在するが、これらの溶液は侵入媒質として
有用である。
それらは例えば名前も当業者によく知られた周
知の生理学的媒質よりなる。すなわち例えば所望
により更なる添加剤例えば緩衝物質、アルブミン
または血清などで改変されたRinger、Krebs−
Ringer、Thyrode、BWW、Ham、HAT、
Baker、Eagle、Earlなどである。（いくつかの例
は次の参考刊行物に与えられている。すなわち
Ericsson et al.Nature246（1973）p.421−424、
Lopata et al.、Fertililty and Sterility27
（11976）p.677−684、Koper et al.、Br.J.
Urology51（1979）p.587−590、Wolf et al.、J.
Andrology3（1982）p.445−451、Beernik et al.、
Fertility and Sterility38（1982）p.493−495およ
びPrasad Int J.Andrology7（1984）p.5−22） 所定の精子を受精に用いる場合、それらは欠陥
のないものでなければならない。それらは受精能
があり、良好な運動性を有しそして例えばヒアル
ロニダーゼの完全な酸素産性を示す必要があり、
またかかる精子が中に存在する媒質は卵に対して
好ましいタイプのものであるべきである。
知の生理学的媒質よりなる。すなわち例えば所望
により更なる添加剤例えば緩衝物質、アルブミン
または血清などで改変されたRinger、Krebs−
Ringer、Thyrode、BWW、Ham、HAT、
Baker、Eagle、Earlなどである。（いくつかの例
は次の参考刊行物に与えられている。すなわち
Ericsson et al.Nature246（1973）p.421−424、
Lopata et al.、Fertililty and Sterility27
（11976）p.677−684、Koper et al.、Br.J.
Urology51（1979）p.587−590、Wolf et al.、J.
Andrology3（1982）p.445−451、Beernik et al.、
Fertility and Sterility38（1982）p.493−495およ
びPrasad Int J.Andrology7（1984）p.5−22） 所定の精子を受精に用いる場合、それらは欠陥
のないものでなければならない。それらは受精能
があり、良好な運動性を有しそして例えばヒアル
ロニダーゼの完全な酸素産性を示す必要があり、
またかかる精子が中に存在する媒質は卵に対して
好ましいタイプのものであるべきである。
精子細胞が中に移動していくことのできる侵入
媒質層によつて十分な運動性を有する精子の選択
を行う方法にはいろいろある。最も普通の処理方
法は侵入媒質層を精子含有流体試料の上に重ねた
後、運動性精子を重層中へ泳動させることにより
なる。もう一つの処理方法は例えば侵入媒質層を
精子含有流体試料の下に置くようにすることより
なるが、精子細胞はその場合下方に向かつて下層
中に泳動しなければならない。媒質の密度と流体
試料はその手順に適切にあうように選択される。
一般に侵入媒質層は全くの均質層であるが、わず
かに組成の異なる複数の層を通して精子が移動で
きるようにすることよりなる別の手順を用いるこ
とも可能であり、あるいは精子を媒質中に存在す
る−またはそれ以上の物質について濃度勾配を有
する層を通過させてもよい。
媒質層によつて十分な運動性を有する精子の選択
を行う方法にはいろいろある。最も普通の処理方
法は侵入媒質層を精子含有流体試料の上に重ねた
後、運動性精子を重層中へ泳動させることにより
なる。もう一つの処理方法は例えば侵入媒質層を
精子含有流体試料の下に置くようにすることより
なるが、精子細胞はその場合下方に向かつて下層
中に泳動しなければならない。媒質の密度と流体
試料はその手順に適切にあうように選択される。
一般に侵入媒質層は全くの均質層であるが、わず
かに組成の異なる複数の層を通して精子が移動で
きるようにすることよりなる別の手順を用いるこ
とも可能であり、あるいは精子を媒質中に存在す
る−またはそれ以上の物質について濃度勾配を有
する層を通過させてもよい。
人工侵入媒質中への移動による精子選択方法は
診断に利用できる。例えば層中に移動する精子の
数およびそれらの移動速度を調べることができ
る。この方法は更に受精に用いるべき良好な運動
性を有する精子の選択に利用することもできる。
この場合に侵入媒質層中に移動した精子細胞は分
離され、そして必要に応じ、このようにして抜出
された精子懸濁液は例えば遠心分離などにより濃
縮された後、少量の同じ媒質または他の媒質に再
懸濁される。
診断に利用できる。例えば層中に移動する精子の
数およびそれらの移動速度を調べることができ
る。この方法は更に受精に用いるべき良好な運動
性を有する精子の選択に利用することもできる。
この場合に侵入媒質層中に移動した精子細胞は分
離され、そして必要に応じ、このようにして抜出
された精子懸濁液は例えば遠心分離などにより濃
縮された後、少量の同じ媒質または他の媒質に再
懸濁される。
例えばWolfおよびSokoloski（Journal of
Andrology3（1982）p.445−451）およびPrasad
（Journal of Andrology7（1984）p.5−22）に記
載の方法では試験管底部の特定量の精液をその下
の媒質上に注意深く重層されたアルブミン含有媒
質と接触させる。その試験管を次にやや斜位に傾
けて媒質間の接触表面を高めた後37℃で約１時間
浸入を進行させる。上清を取り、その中の精子を
遠心分離により濃縮した後、再懸濁−遠心分離手
順を繰り返すことにより洗浄する。最終的精子ペ
レツトを適当な媒質に再懸濁しそして精子の量を
測定する。
Andrology3（1982）p.445−451）およびPrasad
（Journal of Andrology7（1984）p.5−22）に記
載の方法では試験管底部の特定量の精液をその下
の媒質上に注意深く重層されたアルブミン含有媒
質と接触させる。その試験管を次にやや斜位に傾
けて媒質間の接触表面を高めた後37℃で約１時間
浸入を進行させる。上清を取り、その中の精子を
遠心分離により濃縮した後、再懸濁−遠心分離手
順を繰り返すことにより洗浄する。最終的精子ペ
レツトを適当な媒質に再懸濁しそして精子の量を
測定する。
しかしながら、試験管内受精に最も普通に用い
られる手順は次のものである。すなわちアルブミ
ン含有媒質で希釈した精液を試験管内に遠心沈降
させ、上清を除去し、そして試験管底部の固体物
質ペレツトを再懸濁する。洗浄を効率的に行うた
めにこの方法を所望により数回繰り返す。この方
法はもとの試料の欠陥のある非運動性の精子やそ
の他の不溶成分から活力のある運動性精子を分離
するものではないことに留意すべきである。
られる手順は次のものである。すなわちアルブミ
ン含有媒質で希釈した精液を試験管内に遠心沈降
させ、上清を除去し、そして試験管底部の固体物
質ペレツトを再懸濁する。洗浄を効率的に行うた
めにこの方法を所望により数回繰り返す。この方
法はもとの試料の欠陥のある非運動性の精子やそ
の他の不溶成分から活力のある運動性精子を分離
するものではないことに留意すべきである。
従来技術が十分満足できるものではないことか
ら、精子用侵入媒質を用いて運動性精子を欠陥精
子および他の成分から選択するための改良され
た、簡素で再現性あるしかも緩和な方法が大いに
望まれている。精子運動性を定量分析するために
も定性分析するためにも、そしてまた例えば試験
管内および生体内受精用の精子材料を調製するな
ど他の目的のためにも改良された方法が望まれて
いる。
ら、精子用侵入媒質を用いて運動性精子を欠陥精
子および他の成分から選択するための改良され
た、簡素で再現性あるしかも緩和な方法が大いに
望まれている。精子運動性を定量分析するために
も定性分析するためにも、そしてまた例えば試験
管内および生体内受精用の精子材料を調製するな
ど他の目的のためにも改良された方法が望まれて
いる。
今般、前述の如き侵入媒質を用いた運動性精子
選択方法はその侵入媒質に精子細胞に対して生理
学的に許容でき、水溶性であつて、またそれ故に
媒質中の溶存状態で存在するヒアルロン酸塩を添
加含有させることにより著しく改善できることを
見出した。驚くべきことに前記精子細胞用水性人
工侵入媒質をヒアルロン酸の水溶性で生理学的に
許容し得る塩を付加的に含めるように補填するこ
とが極めて好ましい便法であることを見出した。
この改良された侵入媒質はまず第一に人間の精子
選択スクリーニングに対して意図されるが、その
他のタイプの精子、好ましくは哺乳動物の精子、
例えば家畜の精子に対する選択操作にも用いるこ
とができる。
選択方法はその侵入媒質に精子細胞に対して生理
学的に許容でき、水溶性であつて、またそれ故に
媒質中の溶存状態で存在するヒアルロン酸塩を添
加含有させることにより著しく改善できることを
見出した。驚くべきことに前記精子細胞用水性人
工侵入媒質をヒアルロン酸の水溶性で生理学的に
許容し得る塩を付加的に含めるように補填するこ
とが極めて好ましい便法であることを見出した。
この改良された侵入媒質はまず第一に人間の精子
選択スクリーニングに対して意図されるが、その
他のタイプの精子、好ましくは哺乳動物の精子、
例えば家畜の精子に対する選択操作にも用いるこ
とができる。
すなわち本発明は、水性精子含有試料を精子細
胞用水性人工侵入媒質層と接触させることにより
運動性精子細胞を前記精子含有試料から前記層中
に移動させることよりなり、そして前記侵入媒質
中にヒアルロン酸の水溶性で生理学的に許容し得
る塩を配合することを特徴とする、水性精子含有
試料からの運動性精子細胞の試験管内分離方法に
関する。
胞用水性人工侵入媒質層と接触させることにより
運動性精子細胞を前記精子含有試料から前記層中
に移動させることよりなり、そして前記侵入媒質
中にヒアルロン酸の水溶性で生理学的に許容し得
る塩を配合することを特徴とする、水性精子含有
試料からの運動性精子細胞の試験管内分離方法に
関する。
本発明はまた、侵入媒質中に移動した精子細胞
を例えば受精、例えば試験管内受精などのために
回収することを特徴とする前述の方法をも包含す
る。
を例えば受精、例えば試験管内受精などのために
回収することを特徴とする前述の方法をも包含す
る。
本発明はまた、前述の如くして得られた精子細
胞を用いることを特徴とする受精、例えば試験管
内受精をも包含する。
胞を用いることを特徴とする受精、例えば試験管
内受精をも包含する。
更に本発明は、前記方法を実施するための手
段、すなわちヒアルロン酸の水溶性で生理学的に
許容し得る塩を中に配合したことを特徴とする精
子細胞用水性人工侵入媒質をも包含する。
段、すなわちヒアルロン酸の水溶性で生理学的に
許容し得る塩を中に配合したことを特徴とする精
子細胞用水性人工侵入媒質をも包含する。
更にまた、本発明方法により、異なる速度で移
動する精子細胞を相互に分離することができる
が、これは所与の時間内にこれらの異なる精子細
胞は侵入媒質層中を異なる距離移動することによ
るものである。所望により前記層の異なるレベル
から精子試料を採取してもよく、あるいは精子細
胞を更に別の液層中に移動させてそこで回収して
もよい。言うまでもなく、本発明はこの態様をも
包含する。
動する精子細胞を相互に分離することができる
が、これは所与の時間内にこれらの異なる精子細
胞は侵入媒質層中を異なる距離移動することによ
るものである。所望により前記層の異なるレベル
から精子試料を採取してもよく、あるいは精子細
胞を更に別の液層中に移動させてそこで回収して
もよい。言うまでもなく、本発明はこの態様をも
包含する。
その塩（ヒアルロネート）をも包含するヒアル
ロン酸は、極めて特殊な性質を有し、また例えば
とさかから、あるいはあるタイプの微生物を培養
することにより得られる多糖類である。この多糖
類の生理学的、化学的および物理化学的性質の故
に、多重酸性ヒアルロン酸の水溶性で生理学的に
許容し得る塩（すなわち水溶性で生理学的に許容
し得るヒアルロネート）を精子用侵入媒質中に配
合すると該媒質は意図された目的に対し、顕著に
有用なものとなる。特定のヒアルロン酸の水溶性
で生理学的に許容し得る塩の選択に関しては、こ
れはまず第一にナトリウム塩（ナトリウムヒアル
ロネート）であろうが、他の水溶性で生理学的に
許容し得る塩を用いてもよい。更にまた塩は２種
以上の陽イオンがヒアルロン酸カルボキシルに対
イオンとして生存する混合塩であつてもよい。か
かる陽イオンは例えば血漿中および晶質の血漿代
替溶液中に存在し、そして精子用侵入媒質に通常
用いられる２以上の陽イオンであつてよい。これ
らのイオンは例えば中でも体液中例えば血漿、子
宮液および精液中のこれらのイオンの生理学的割
合と実質的に同じオーダの大きさの割合で存在す
るように選択してもよい。すなわち、このことは
カリウムイオンよりもナトリウムイオンを多く存
在させることを意味している。更に考えられるこ
ととして、生理学的に許容し得る有機アミンを塩
形成剤として用いてもよいが、ヒアルロン酸はそ
のナトリウム塩としてあるいは実質的にそのナト
リウム塩として、そして侵入媒質それ自体のイオ
ンと平衡状態で媒質中に存在させるのが好まし
い。媒質に生理学的濃度のナトリウムおよびカリ
ウムイオンを含ませるのが適切である。
ロン酸は、極めて特殊な性質を有し、また例えば
とさかから、あるいはあるタイプの微生物を培養
することにより得られる多糖類である。この多糖
類の生理学的、化学的および物理化学的性質の故
に、多重酸性ヒアルロン酸の水溶性で生理学的に
許容し得る塩（すなわち水溶性で生理学的に許容
し得るヒアルロネート）を精子用侵入媒質中に配
合すると該媒質は意図された目的に対し、顕著に
有用なものとなる。特定のヒアルロン酸の水溶性
で生理学的に許容し得る塩の選択に関しては、こ
れはまず第一にナトリウム塩（ナトリウムヒアル
ロネート）であろうが、他の水溶性で生理学的に
許容し得る塩を用いてもよい。更にまた塩は２種
以上の陽イオンがヒアルロン酸カルボキシルに対
イオンとして生存する混合塩であつてもよい。か
かる陽イオンは例えば血漿中および晶質の血漿代
替溶液中に存在し、そして精子用侵入媒質に通常
用いられる２以上の陽イオンであつてよい。これ
らのイオンは例えば中でも体液中例えば血漿、子
宮液および精液中のこれらのイオンの生理学的割
合と実質的に同じオーダの大きさの割合で存在す
るように選択してもよい。すなわち、このことは
カリウムイオンよりもナトリウムイオンを多く存
在させることを意味している。更に考えられるこ
ととして、生理学的に許容し得る有機アミンを塩
形成剤として用いてもよいが、ヒアルロン酸はそ
のナトリウム塩としてあるいは実質的にそのナト
リウム塩として、そして侵入媒質それ自体のイオ
ンと平衡状態で媒質中に存在させるのが好まし
い。媒質に生理学的濃度のナトリウムおよびカリ
ウムイオンを含ませるのが適切である。
起源、調製方法そして場合によつては分画方法
に応じて極めて広い範囲の平均分子量（w）を
有する水溶性で生理学的に許容し得る塩を得るこ
とができる。平均分子量（w）は例えば100000
以上、例えば50000以上、例えば10000以上であつ
てもよいが、例えば20000000以下、例えば
10000000以下、例えば5000000以下とする。状況
によつては50000を超える、例えば100000を超え、
例えば10000000または5000000以下の平均分子量
（w）を有する高分子物質が選択される。約
4000000までの分子量のヒアルロネートのほか、
例えば数十万の分子量あるいはそれよりも低い分
子量の解重合ヒアルロネートも商業的に入手でき
る。
に応じて極めて広い範囲の平均分子量（w）を
有する水溶性で生理学的に許容し得る塩を得るこ
とができる。平均分子量（w）は例えば100000
以上、例えば50000以上、例えば10000以上であつ
てもよいが、例えば20000000以下、例えば
10000000以下、例えば5000000以下とする。状況
によつては50000を超える、例えば100000を超え、
例えば10000000または5000000以下の平均分子量
（w）を有する高分子物質が選択される。約
4000000までの分子量のヒアルロネートのほか、
例えば数十万の分子量あるいはそれよりも低い分
子量の解重合ヒアルロネートも商業的に入手でき
る。
ヒアルロネートを添加することにより、侵入媒
質に適切であつて、また実験条件に応じてそして
精子侵入法によつて達成すべき目的に応じて任意
に変えることのできる粘性を媒質に付与すること
もできる。媒質の粘性が高過ぎると精子細胞の移
動速度が低下し過ぎるのでこれは避けるべきであ
る。それ故侵入媒質には300cP（センチポイズ、
ゼロ剪断粘度、37℃）以下の粘度を与えるのが好
ましい。多くの場合、粘度を100cP以下、例えば
50cP以下あるいは例えば30cP以下とするのが好
ましい。媒質の粘度は1cP以上例えばほとんどの
場合2cP以上、例えば5cP以上、例えば10cP以上
である。もちろん前記物質に対し選択された平均
分子量が大きい程、所望の粘性を得るのに必要な
添加剤の量は少なくてすむことは理解されよう。
質に適切であつて、また実験条件に応じてそして
精子侵入法によつて達成すべき目的に応じて任意
に変えることのできる粘性を媒質に付与すること
もできる。媒質の粘性が高過ぎると精子細胞の移
動速度が低下し過ぎるのでこれは避けるべきであ
る。それ故侵入媒質には300cP（センチポイズ、
ゼロ剪断粘度、37℃）以下の粘度を与えるのが好
ましい。多くの場合、粘度を100cP以下、例えば
50cP以下あるいは例えば30cP以下とするのが好
ましい。媒質の粘度は1cP以上例えばほとんどの
場合2cP以上、例えば5cP以上、例えば10cP以上
である。もちろん前記物質に対し選択された平均
分子量が大きい程、所望の粘性を得るのに必要な
添加剤の量は少なくてすむことは理解されよう。
実験条件に応じて、また精子侵入法により達成
すべき目的に応じて変えながら、ヒアルロネート
の平均分子量および濃度を各個のケースに最適な
ものとなるように選択することができる。侵入媒
質中のヒアルロネート濃度0.05mg／ml以上とする
のが好ましい。多くの場合その濃度は0.1mg／ml
以上、例えば0.2mg／mlとするのが好ましい。そ
の濃度は１mg／ml以下とするのが好ましい。多く
の場合、濃度を５mg／ml以下、例えば２mg／ml以
下とするのが好ましい。ほとんどの場合に濃度は
それ以下とし、粘度は前述の如く300cP以下、例
えば100cP以下とするのが好ましい。達成すべき
目的が例えば診断方法である場合には、例えば約
4000000などという極めて高分子量のヒアルロネ
ートを用いるときには約0.05〜２mg／mlの濃度で
最良の結果が得られること、例えば約2000000な
どという比較的低分子量のヒアルロネートを用い
るときには約0.05〜４mg／mlの濃度で最良の結果
が得られること、そしてこれらの場合における好
ましい範囲は0.1〜２、例えば0.5〜1.5mg／mlであ
ることを見出した。実験による研究によれば、本
発明による侵入媒質を調製する場合に、少なくと
も約100000〜7000000の範囲内では分子量は臨界
的パラメータではないことが示された。
すべき目的に応じて変えながら、ヒアルロネート
の平均分子量および濃度を各個のケースに最適な
ものとなるように選択することができる。侵入媒
質中のヒアルロネート濃度0.05mg／ml以上とする
のが好ましい。多くの場合その濃度は0.1mg／ml
以上、例えば0.2mg／mlとするのが好ましい。そ
の濃度は１mg／ml以下とするのが好ましい。多く
の場合、濃度を５mg／ml以下、例えば２mg／ml以
下とするのが好ましい。ほとんどの場合に濃度は
それ以下とし、粘度は前述の如く300cP以下、例
えば100cP以下とするのが好ましい。達成すべき
目的が例えば診断方法である場合には、例えば約
4000000などという極めて高分子量のヒアルロネ
ートを用いるときには約0.05〜２mg／mlの濃度で
最良の結果が得られること、例えば約2000000な
どという比較的低分子量のヒアルロネートを用い
るときには約0.05〜４mg／mlの濃度で最良の結果
が得られること、そしてこれらの場合における好
ましい範囲は0.1〜２、例えば0.5〜1.5mg／mlであ
ることを見出した。実験による研究によれば、本
発明による侵入媒質を調製する場合に、少なくと
も約100000〜7000000の範囲内では分子量は臨界
的パラメータではないことが示された。
運動性精子細胞の分離方法について、またこの
目的に用いられる水性人工侵入媒質について最初
に述べたことは本発明の方法および媒質について
もあてはまる。すなわち例えば本発明の改良され
た媒質には、精子にとつて適切でありまたそれら
にとつて生理学的に許容し得る範囲のPH値が与え
られ（例えば生理学的に許容し得る緩衝剤、例え
ばホスフエートまたは重炭酸塩緩衝剤、例えば燐
酸ナトリウム緩衝剤などを添加することにより生
理学的に正常なPH値とする）；この改良された媒
質は本明細書の導入部で説明したとおり生理学的
に許容し得る物質〔例えば次の群のうちの１以上
の群より選択される１以上の物質：塩類、例えば
ナトリウム、カリウムおよびカルシウムの塩化
物、酢酸塩、乳酸塩（選択される陽イオン濃度は
生理学的濃度とするのが好ましい）；栄養素例え
ばグルコース、ガラクトース；タンパク質例えば
アルブミン；血清、好ましくは56℃で30分記熱失
活させたもの；所望により（例えば５％の）CO2
を含有する空気と平衡させる；等々〕を含有して
もよく；また媒質の浸透圧は精子にとつて適切な
値となるよう調節してもよい。
目的に用いられる水性人工侵入媒質について最初
に述べたことは本発明の方法および媒質について
もあてはまる。すなわち例えば本発明の改良され
た媒質には、精子にとつて適切でありまたそれら
にとつて生理学的に許容し得る範囲のPH値が与え
られ（例えば生理学的に許容し得る緩衝剤、例え
ばホスフエートまたは重炭酸塩緩衝剤、例えば燐
酸ナトリウム緩衝剤などを添加することにより生
理学的に正常なPH値とする）；この改良された媒
質は本明細書の導入部で説明したとおり生理学的
に許容し得る物質〔例えば次の群のうちの１以上
の群より選択される１以上の物質：塩類、例えば
ナトリウム、カリウムおよびカルシウムの塩化
物、酢酸塩、乳酸塩（選択される陽イオン濃度は
生理学的濃度とするのが好ましい）；栄養素例え
ばグルコース、ガラクトース；タンパク質例えば
アルブミン；血清、好ましくは56℃で30分記熱失
活させたもの；所望により（例えば５％の）CO2
を含有する空気と平衡させる；等々〕を含有して
もよく；また媒質の浸透圧は精子にとつて適切な
値となるよう調節してもよい。
本発明の媒質はヒアルロン酸の水溶性で生理学
的に許容し得る塩を前述の精子用水性人工侵入媒
質に配合することにより製造することができる
（ヒアルロネートの平均分子量とその濃度および
媒質は前述の如く選択することができる）。水性
溶液を調製する際の成分添加順序は言うまでもな
く、本発明思想から逸脱することなく様々に変え
ることができる。望ましい濃度のヒアルロネート
を含む侵入媒質は無菌的に調製してもよく、ある
いは所望により減菌してもよい。媒質は使捨て可
能なユニツトパツケージの形で、あるいは精子選
択操作を複数回行うのに十分な比較的多量の媒質
を含む比較的大きなパツクの形で提供することも
できる。
的に許容し得る塩を前述の精子用水性人工侵入媒
質に配合することにより製造することができる
（ヒアルロネートの平均分子量とその濃度および
媒質は前述の如く選択することができる）。水性
溶液を調製する際の成分添加順序は言うまでもな
く、本発明思想から逸脱することなく様々に変え
ることができる。望ましい濃度のヒアルロネート
を含む侵入媒質は無菌的に調製してもよく、ある
いは所望により減菌してもよい。媒質は使捨て可
能なユニツトパツケージの形で、あるいは精子選
択操作を複数回行うのに十分な比較的多量の媒質
を含む比較的大きなパツクの形で提供することも
できる。
本発明による改良された媒質は本発明方法を極
めて信頼性のあるものとし、信頼性がありそして
再現性のある精子スクリーニング結果を与える。
この媒質は精子にとつて好ましいものであり、媒
質に移動した精子細胞については例えば２時間を
超える、例えば４時間を超えるような長い生存時
間を得ることができる。この媒質に移動した精子
を受精に用いると高い受精度が得られる。更にこ
の媒質は卵に対して実質的に無害である。
めて信頼性のあるものとし、信頼性がありそして
再現性のある精子スクリーニング結果を与える。
この媒質は精子にとつて好ましいものであり、媒
質に移動した精子細胞については例えば２時間を
超える、例えば４時間を超えるような長い生存時
間を得ることができる。この媒質に移動した精子
を受精に用いると高い受精度が得られる。更にこ
の媒質は卵に対して実質的に無害である。
本発明を更に以下の実施例によつて説明するが
それらは本発明の範囲を限定するものではない。
それらは本発明の範囲を限定するものではない。
実施例 １
(a) 0.75容の56℃で30分間熱失活した人血清を
0.5mg／mlのナトリウムヒアルロネート（wは
約4000000）を補填した10容のHamのF10媒質
〔例えばSigma Che−mical Company社（セ
ントルイス、ミズーリ州、米国）より商業的に
入手でき、またR.G.Ham，Exptl.Cell.Res.39
（1963）p.515の論文に記載されている〕に添加
しそしてPHを7.4に調節する。この侵入媒質を
５％CO2を含有する空気下に例えば37℃で半時
間保つてから使用する。
0.5mg／mlのナトリウムヒアルロネート（wは
約4000000）を補填した10容のHamのF10媒質
〔例えばSigma Che−mical Company社（セ
ントルイス、ミズーリ州、米国）より商業的に
入手でき、またR.G.Ham，Exptl.Cell.Res.39
（1963）p.515の論文に記載されている〕に添加
しそしてPHを7.4に調節する。この侵入媒質を
５％CO2を含有する空気下に例えば37℃で半時
間保つてから使用する。
(b) 実施例１(a)と同様の媒質であるが、0.3mg／
mlのナトリウムヒアルロネートを含む。（wは
約4000000） (c) 実施例１(a)と同様の媒質であるが、0.8mg／
mlのナトリウムヒアルロネートを含む。（wは
約4000000） (d) 実施例１(a)と同様の媒質であるが、血清は添
加せず、その代わりに５mg／mlの人血清アルブ
ミンを用いる。
mlのナトリウムヒアルロネートを含む。（wは
約4000000） (c) 実施例１(a)と同様の媒質であるが、0.8mg／
mlのナトリウムヒアルロネートを含む。（wは
約4000000） (d) 実施例１(a)と同様の媒質であるが、血清は添
加せず、その代わりに５mg／mlの人血清アルブ
ミンを用いる。
(e) ２mgのナトリウムヒアルロネート（wは約
3600000）および8.5mgのNaclを含有しそして
燐酸ナトリウム濃度が0.002Mである１mlの溶
液（PH7.4）を１mlのEarleの平衡塩溶液（例え
ば前記同様Sigma Chemical Com−pany社よ
り入手）および0.1mlの人血清（56℃で30分間
熱失活させたもの）と混合する。このようにし
て得られた侵入媒質を５％CO2含有空気の下に
37℃で30分間保ち、そしてPH値を約7.4に調節
する。
3600000）および8.5mgのNaclを含有しそして
燐酸ナトリウム濃度が0.002Mである１mlの溶
液（PH7.4）を１mlのEarleの平衡塩溶液（例え
ば前記同様Sigma Chemical Com−pany社よ
り入手）および0.1mlの人血清（56℃で30分間
熱失活させたもの）と混合する。このようにし
て得られた侵入媒質を５％CO2含有空気の下に
37℃で30分間保ち、そしてPH値を約7.4に調節
する。
0.05〜８mg／mlのヒアルロネート（分子量
130000〜7000000）濃度範囲をカバーする一連の
侵入媒質を前記実施欄例と同様にして調製した。
一部の実験においてEarleの媒質（例えば前記同
様Sigma Chemical company社より入手）また
は他の何らかの細胞培養培地を用いた。
130000〜7000000）濃度範囲をカバーする一連の
侵入媒質を前記実施欄例と同様にして調製した。
一部の実験においてEarleの媒質（例えば前記同
様Sigma Chemical company社より入手）また
は他の何らかの細胞培養培地を用いた。
実施した侵入試験の結果は、高分子量例えば約
1000000以上のヒアルロネートを用いた場合には、
約0.05〜２mg／mlの濃度で最良の結果が得られる
ことを示した。低分子量のヒアルロネート（例え
ばwは160000）を用いる場合には濃度を約４
mg／mlに増加させることができる。診断試験に好
ましい範囲は0.1〜２mg／ml、特に0.5〜1.5mg／ml
である。
1000000以上のヒアルロネートを用いた場合には、
約0.05〜２mg／mlの濃度で最良の結果が得られる
ことを示した。低分子量のヒアルロネート（例え
ばwは160000）を用いる場合には濃度を約４
mg／mlに増加させることができる。診断試験に好
ましい範囲は0.1〜２mg／ml、特に0.5〜1.5mg／ml
である。
実施例 ２
精子侵入実験の実施には例えば毛細管（例えば
長さ４〜７cmであり10μの内容積を有するも
の）を用いることができる。この毛細管に本発明
の改良された侵入媒質（例えば実施例１と同様に
して調製された媒質）を充填する。毛細管の上側
開口部をシールし、そして管の下側部分を射製物
試料を容れた小容器内に導入する。毛細管内の精
子侵入を例えば37℃で１時間進行させる（所望に
よりこれを５％CO2含有空気の下で行つてもよ
い）。精子侵入は顕微鏡で観察することができ、
精子の移動距離を測定し、その測定値から移動速
度を算出する（μｍ／sec単位が適当である）。こ
のようにして例えば他をはるかに引き離した精子
の移動速度を算出でき、従つていわゆるトツプ値
を得ることができるほか、媒質中に入り込んだ他
のすべての精子細胞の大部分の移動速度（これが
いわゆる基礎値である）を算出することもでき
る。更にトツプ値に近い速度で移動した精子細胞
の量を評価することができる。例えばトツプ値は
9.6μｍ／secで、基礎値は例えば４〜6μｍ／secで
あり得る。並行試験は再現性の良好な値を与える
であろう。この侵入試験は例えば診断目的に利用
することができる。
長さ４〜７cmであり10μの内容積を有するも
の）を用いることができる。この毛細管に本発明
の改良された侵入媒質（例えば実施例１と同様に
して調製された媒質）を充填する。毛細管の上側
開口部をシールし、そして管の下側部分を射製物
試料を容れた小容器内に導入する。毛細管内の精
子侵入を例えば37℃で１時間進行させる（所望に
よりこれを５％CO2含有空気の下で行つてもよ
い）。精子侵入は顕微鏡で観察することができ、
精子の移動距離を測定し、その測定値から移動速
度を算出する（μｍ／sec単位が適当である）。こ
のようにして例えば他をはるかに引き離した精子
の移動速度を算出でき、従つていわゆるトツプ値
を得ることができるほか、媒質中に入り込んだ他
のすべての精子細胞の大部分の移動速度（これが
いわゆる基礎値である）を算出することもでき
る。更にトツプ値に近い速度で移動した精子細胞
の量を評価することができる。例えばトツプ値は
9.6μｍ／secで、基礎値は例えば４〜6μｍ／secで
あり得る。並行試験は再現性の良好な値を与える
であろう。この侵入試験は例えば診断目的に利用
することができる。
実施例 ３
短いパスツールピペツトの先端を溶融によりシ
ールする。0.25mlの射精物試料をシールされたピ
ペツト管の底部に管を垂直位に保ちながら挿入す
る。0.25mlの本発明による改良された侵入媒質
（例えば実施例１によるもの）を精子含有底部相
上に重層する。その底部相から侵入媒質上層中へ
の精子細胞の侵入を37℃で進行させる（所望によ
りこれは５％CO2含有空気の下に行つてもよい）。
精子細胞が上方に移動して侵入層の上部に入つた
ところで（例えば60分後）、全侵入層の例えば2/3
に相当するその上部を吸引により注意して取り出
す。このように抜出した試料は運動性精子細胞を
含有する。この試料中に存在する精子は自体公知
の方法で受精目的（例えば試験管内受精）に用い
ることができる。
ールする。0.25mlの射精物試料をシールされたピ
ペツト管の底部に管を垂直位に保ちながら挿入す
る。0.25mlの本発明による改良された侵入媒質
（例えば実施例１によるもの）を精子含有底部相
上に重層する。その底部相から侵入媒質上層中へ
の精子細胞の侵入を37℃で進行させる（所望によ
りこれは５％CO2含有空気の下に行つてもよい）。
精子細胞が上方に移動して侵入層の上部に入つた
ところで（例えば60分後）、全侵入層の例えば2/3
に相当するその上部を吸引により注意して取り出
す。このように抜出した試料は運動性精子細胞を
含有する。この試料中に存在する精子は自体公知
の方法で受精目的（例えば試験管内受精）に用い
ることができる。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE8504872A SE449003B (sv) | 1985-10-18 | 1985-10-18 | Sett att in vitro avskilja spermier med egen rorelseformaga medelst penetrationsmedium i vilket ingar hyaluronsyrasalt |
| SE8504872-6 | 1985-10-18 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63501056A JPS63501056A (ja) | 1988-04-21 |
| JPH0317492B2 true JPH0317492B2 (ja) | 1991-03-08 |
Family
ID=20361798
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61505485A Granted JPS63501056A (ja) | 1985-10-18 | 1986-10-17 | 運動性精子の選択方法および手段 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4804537A (ja) |
| EP (1) | EP0243397B1 (ja) |
| JP (1) | JPS63501056A (ja) |
| AT (1) | ATE73843T1 (ja) |
| AU (1) | AU589702B2 (ja) |
| DE (1) | DE3684462D1 (ja) |
| SE (1) | SE449003B (ja) |
| WO (1) | WO1987002382A1 (ja) |
Families Citing this family (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE8901127D0 (sv) * | 1989-03-31 | 1989-03-31 | Aa H L Pousette | Reagenssats och dess anvaending foer att bilda (spap-anti-spap) -immunkomplex samt diagnostiskt foerfarand vid vilket spap detekteras |
| US5102783A (en) * | 1990-01-12 | 1992-04-07 | Vetrepharm, Inc. | Composition and method for culturing and freezing cells and tissues |
| EP0446509A1 (en) * | 1990-03-15 | 1991-09-18 | Panayiotis M. Zavos | Semen filter column |
| CA2061703C (en) * | 1992-02-20 | 2002-07-02 | Rudolf E. Falk | Formulations containing hyaluronic acid |
| US5910489A (en) * | 1990-09-18 | 1999-06-08 | Hyal Pharmaceutical Corporation | Topical composition containing hyaluronic acid and NSAIDS |
| US5990096A (en) * | 1990-09-18 | 1999-11-23 | Hyal Pharmaceutical Corporation | Formulations containing hyaluronic acid |
| US5824658A (en) * | 1990-09-18 | 1998-10-20 | Hyal Pharmaceutical Corporation | Topical composition containing hyaluronic acid and NSAIDS |
| US5977088A (en) * | 1991-07-03 | 1999-11-02 | Hyal Pharmaceutical Corporation | Formulations containing hyaluronic acid |
| US5792753A (en) * | 1991-07-03 | 1998-08-11 | Hyal Pharmaceutical Corporation | Compositions comprising hyaluronic acid and prostaglandin-synthesis-inhibiting drugs |
| US6103704A (en) * | 1991-07-03 | 2000-08-15 | Hyal Pharmaceutical Corporation | Therapeutic methods using hyaluronic acid |
| US6218373B1 (en) | 1992-02-20 | 2001-04-17 | Hyal Pharmaceutical Corporation | Formulations containing hyaluronic acid |
| US5767106A (en) * | 1992-02-21 | 1998-06-16 | Hyal Pharmaceutical Corporation | Treatment of disease and conditions associated with macrophage infiltration |
| ES2044778B1 (es) * | 1992-04-02 | 1994-09-01 | Esteve Carmen Blanco | Metodo analitico para la determinacion de la capacidad fecundante de una muestra de semen humano. |
| US5744366A (en) * | 1992-05-01 | 1998-04-28 | Trustees Of The University Of Pennsylvania | Mesoscale devices and methods for analysis of motile cells |
| US5801058A (en) * | 1994-06-20 | 1998-09-01 | Blanco-Esteve; Carmen | Analytic method to determine the fertilizing capacity of a human semen sample |
| US5935800A (en) * | 1994-10-31 | 1999-08-10 | Beth Israel Deaconess Medical Center | Assays and kits for determining male fertility |
| US5895749A (en) * | 1994-10-31 | 1999-04-20 | Beth Israel Deaconess Medical Center | Male fertility and contraception home test kits |
| WO1996013225A2 (en) * | 1994-10-31 | 1996-05-09 | Beth Israel Hospital Association | Assays, devices and kits for determining male fertility |
| AU723170B2 (en) * | 1995-10-19 | 2000-08-17 | Bio-Origyn Llc | Methods and compositions to improve germ cell and embryo survival and function |
| US6129214A (en) * | 1997-12-19 | 2000-10-10 | Bar-Ami; Shalom | Sperm strainer system |
| US5897988A (en) * | 1998-01-21 | 1999-04-27 | Yale University | Process and system for selection of mature sperm by surface membrane determinants for assisted reproduction |
| GB9817795D0 (en) * | 1998-08-14 | 1998-10-14 | Genosis Inc | A method and device for separation and detection of spermatozoa in a sample |
| WO2000032140A1 (en) * | 1998-11-30 | 2000-06-08 | Ivf Sciences Colorado, Inc. | System and sequential culture media for in vitro fertilization |
| US6762053B2 (en) * | 2000-06-09 | 2004-07-13 | Vitrolife, Inc. | Mammalian gamete and embryo culture media and culture media supplements |
| ES2259566B1 (es) * | 2005-03-29 | 2007-08-01 | Instituto Nacional De Investigacion Y Tecnologia Agraria Y Alimentaria-Inia | Suplementacion para los medios de manipulacion embrionaria y/o celular. |
| CN101487841B (zh) * | 2009-02-13 | 2014-06-04 | 深圳市人民医院 | 一种包被载体及其在检测精子成熟度和无创分离成熟精子方法中的应用 |
| ES2387903B1 (es) * | 2010-07-16 | 2013-08-13 | María Albiñana Blanco | Procedimiento y kit para verificar, en una muestra de semen humano o animal, la existencia de espermatozoides fecundantes. |
| CN102323398B (zh) * | 2011-05-19 | 2014-03-12 | 国家人口计生委科学技术研究所 | 一种用于精子检测的溶液 |
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